ШТАММ LACTOBACILLUS HELVETICUS ВКПМ В-11176, ПОЛУЧЕННЫЙ НА ДОСТУПНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ Российский патент 2016 года по МПК C12N1/20 A23C9/127 A61K35/74 A23L1/29 C12R1/225 

Изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности и представляет собой новый штамм мезофильной палочки, предназначенный для производства кисломолочных продуктов и бактериальных препаратов.

Известен штамм Lactobacillus helveticus L-KS, депонирован в ВКПМ под номером В-10895, а также штаммы Lactobacillus helveticus CNCM I-3504, Lactobacillus helveticus CNCM I-3505 и Lactobacillus helveticus CNCM I-3508 не обладают способностью превращать лактозу в молочную кислоту, обладают хорошей сочетаемостью с другими штаммами лактобактерий и выраженными физиолого-биохимическими свойствами.

Недостатком данных штаммов являются более низкая антибиотическая активность.

Задача заявляемого изобретения - создание кисломолочного продукта с использованием лактобактерий на доступных питательных средах, обладающих высокой биологической и антагонистической активностью.

Задача решается путем использования питательных сред плотной и жидкой консистенции: стерильное обезжиренное молоко, гидролизованное молоко (pH 6,8-7,0), несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Местный штамм Lactobacillus helveticus выделен из сырого самоквасного молока.

Идентификацию штамма проводили по методике, приведенной в книге Л.А. Банниковой (1975).

Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов и имеет номер ВКПМ В-11176.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ B-11176 имеет следующие характеристики:

1. Культурально-морфологические свойства:

- факультативный анаэроб;

- грамположительные палочки;

- длиной 4±0,02, шириной 0,8±0,03;

- неподвижные;

- расположенные в виде крупных клеток палочковидной формы;

- эндоспор не образуют.

На поверхности агаризованной среды (гидролизованное молоко и MRS агар) через 24 часа при температуре 37°C образуют:

- колонии округлой формы,

- размер средний;

- характер контура края - ровный;

-рельеф - выпуклый;

-поверхность - гладкая, блестящая;

-цвет - белый;

-структура - однородная;

-консистенция - вязкая.

Изучение культуральных или морфологических свойств отобранного штамма молочнокислых микроорганизмов проводили на плотной питательной среде - агаризованном молоке и MRS агаре.

2. Физиолого-биохимические свойства:

- скорость сквашивания молока - 5-6 часов;

- предел кислотообразования - 325°Т;

- штамм сбраживает глюкозу, лактозу, мальтозу;

- растет при температуре 45°C - 48°C;

- растет в гидролизованном молоке содержащем 2% и 4% NaCl;

- растет в гидролизованном молоке содержащем 20% желчи;

- растет в мясопептонном бульоне при pH 8,3;

- растет в молоке с 0,4% фенола;

- штамм выдерживает нагревание при температуре 60°C в течение 90 минут;

- штамм выдерживает нагревание при температуре 65°C в течение 30 минут.

Продукты, синтезируемые штаммом, - молочная кислота, антибиотические вещества.

3. Антибиотическая активность:

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю патогенной микрофлоры Staphylococcus aureus составил - 18 мм;

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю условно-патогенной микрофлоры - Escherichia coli составил - 29 мм.

Определение антибиотической активности штамма Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11176 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4°C; среды MPS: Rogosa et al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и CaCO₃; агаризованная молочная подсырная сыворотка.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°C; среды: MPS; обезжиренное молоко.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°C; среды: несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара; молоко сельскохозяйственных животных.

Предлагаемый новый штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11176, выделенный из сырого самоквасного молока, хорошо приспособлен к местным условиям, прост в культивировании и хранении, обладает высокой предельной кислотностью и скоростью свертывания молока, что позволяет повысить экономическую эффективность при производстве кисломолочной продукции.

Штамм проявляет высокую антагонистическую способность по отношению к условно патогенной и патогенной микрофлоре.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11176 обладает высокой биологической активностью.

Благодаря своим выраженным биологическим и антибиотическим свойствам (способности образовывать вязкий молочный сгусток, диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus-18 мм, Escherichia coli-29 мм) штамм представляет производственную ценность для молочной промышленности.

Пример.

Использование штамма Lactobacillus helveticus В-11176 в составе биологически активных добавок:

1. Пассаж: лиофилизированный штамм Lactobacillus helveticus В-11176 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10^-9. Инкубируют при температуре 38-40°C до образования видимого роста в последних разведениях.

2. Пассаж: выросшую культуру из 10^-7 и 10^-9 разведений в объеме до 10% вносят в питательную среду и культивируют при температуре 38-40°C в течение 12-14 ч до образования роста с видимой зоной аэробиоза.

3. Пассаж: полученную биомассу в количестве до 10% объема вносят в среду накопления и культивируют 12-14 ч при 38-40°C до получения биомассы с содержанием живых лактобактерий не менее 10 мл.

В результате получают биологически активную добавку, которая представляет собой жидкий концентрат с высоким, не менее 10⁸/мл, содержанием лактобактерий.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus М-16, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11176 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов. Изобретение позволяет получить более вязкий молочный сгусток. 1 пр.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ B-11176, используемый при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.