СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СОЕДИНИТЕЛЬНО-ТКАННЫХ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА ПРИ СТАЦИОНАРНОЙ МИОПИИ СРЕДНЕЙ СТЕПЕНИ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2575575C1

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени.

Как показали углубленные клинические исследования последних лет, соединительнотканные структуры глазного яблока играют ведущую роль в патогенезе практически всех патологических процессов органа зрения - аномалии развития, дистрофии, новообразования, повреждения и воспаления.

Для прижизненного исследования фиброзной оболочки глазного яблока А. Arciniegas с соавт. (1986), G.R. Bell (1993) и Е.Н. Иомдина (1992) предлагают использовать механико-математическую модель на основе анализа кривых зависимости напряжение-деформация, полученных для образцов изолированной и миопической склеры.

Известен способ оценки биомеханических свойств склеры определения отношения скорости распространения в склере акустических поверхностных волн в середине верхнего века в горизонтальном и вертикальном направлениях. При его отрицательном значении прогнозируют прогрессирование течения близорукости (патент RU 2068654 опубл. 10.11.1996).

Недостатком известного способа является низкая информативность, не позволяющая прижизненно оценить морфо-функциональные характеристики соединительнотканных оболочек глазного яблока.

Известен инструментальный метод, в котором в качестве прогностического критерия используется величина акустической плотности экваториальных отделов склеры, определяемая с помощью ультразвукового В-сканирования плотности экваториальных отделов склеры в стандартизированных условиях (патент RU 2055522, опубл. 10.03.1996).

Данная методика также не обладает достаточными возможностями для доклинической диагностики дистрофических изменений соединительнотканных оболочек глазного яблока.

Наиболее близким к заявляемому является способ использования в качестве объекта для прижизненного изучения патогенеза прогрессирующей миопии тенонову капсулу глаза - соединительнотканную оболочку, прилежащую к склере, образцы которой получают во время различных хирургических вмешательств (Иомдина Е.Н., Тарутта Е.П., Игнатьева Н.Ю., Костанян И.А., Минкевич Н.И., Какуев Д.Л., Радченко В.В., Шехтер А.Б., Данилов Н.А., Кварацхелия Н.Г., Чернышева С.Г. Фундаментальные исследования биохимических и ультраструктурных механизмов патогенеза прогрессирующей миопии // Российский офтальмологический журнал. - 2008. - Том 1, №3. - С. 7-12). Изучались образцы теноновой оболочки, взятые во время склероукрепляющих вмешательств с последующим применением комплекса фундаментальных методов - дифференциальной сканирующей калометрии (ДСК), трансмиссонной электронной микроскопии, электрофореза в агарозном геле, вестерн-блот-анализа, иммуногистохимии, биохимии.

Недостатком этого метода является трудоемкость, длительность его проведения, односторонность и вследствие этого низкая информативность и точность оценки клеточного состава теноновой капсулы (анализ только фибробластов), что не обеспечивает учета полноты анализа популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и их активационно-пролиферативного потенциала.

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в разработке способа диагностики стационарной миопии средней степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока, повышающего точность и объективность результатов исследования, универсальность применения и стандартность проводимой оценки.

Указанный результат достигается тем, что в качестве способа прижизненной оценки морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока предлагается метод проточной цитометрии теноновой капсулы. А предлагаемый способ включает в себя использование проточного цитофлюориметра и многоцветного цитометрического анализа, которые дают возможность индентификации популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и определения их активационно-пролиферативных характеристик.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Забор теноновой капсулы производится во время оперативного вмешательства при проведении склероукрепляющих операций. Затем теноновую капсулу помещают в криопробирки 2 мл (Costar) с раствором для замораживания (эмбриональная телячья сыворотка 90% + диметалсульфоксид 10% + криопротектор (90% Fetal Bovine Serum + 10% DMSO)). Замораживание производят в парах жидкого азота до -180°С со скоростью заморозки 1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания). Охлажденные криопробирки с материалом помещают в жидкий азот (t -180°С) в сосуды Дюара (СДС-35М ОАО «НПО ГЕЛИЙМАШ» г. Москва). Для проведения проточной цитометрии замороженный материал подвергают медленной разморозке в парах жидкого азота со скоростью +1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания) для сохранения высокой жизнеспособности клеток.

Размороженный материал переносят в стерильную стеклянную центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%. Затем измельчают клеточные элементы в Medimashine (Becton Dichinson, Cod 79300, maximal volume 1 ml, нож BD medicors) до получения гомогенной клеточной суспензии. Осаждают строму в центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут.

Надосадок, содержащий клетки теноновой капсулы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки. Супернатант удаляют, а к осадку, содержащему клетки теноновой капсулы, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и рессуспендируют. В полученной суспензии определяют фенотип клеток с использованием моноклональных антител (CD) согласно международному протоколу.

Предлагаемый способ апробирован при заборе теноновой капсулы у 5 пациентов с эмметропической рефракцией и у 5 пациентов со стационарной миопией средней степени. В таблице приведены усредненные результаты содержания популяций и субпопуляций клеток, полученных при исследовании фрагментов теноновой капсулы.

Выбор панели анализируемых CD-маркеров основывался на результатах проведенного аналитического обзора и анализа современной научно-технической, нормативной, методической литературы, затрагивающей раздел структурной организации клеток соединительной ткани организма человека, в частности теноновой капсулы глазного яблока.

Установлено, что тенонова капсула при стационарной миопии средней степени достоверно отличается от эмметропии следующим содержанием популяции и субпопуляции клеток: повышенным содержанием кератиноцитов с фенотипом CD49f+, тучных клеток с фенотипом CD249+, моноцитов (макрофагов) с фенотипом CD45+CD14+HLADR+, более низким содержанием фибробластов (фиброцитов) с фенотипами CD45-CD14-CD44+CD80+, клеток Лангенгарса с фенотипом CD207+, эндотелиальных клеток с фенотипами CD146+ и CD146+CD34+.

Таким образом, современный метод проточной цитометрии и многоцветный цитометрический анализ позволили одновременно проанализировать коллосальное количество различных клеток теноновой капсулы, локализовать отдельные их группы, классы, популяции, субклассы, субпопуляции и оценить их функциональное состояние с использованием моноклональных антител (CD-маркеров).

В конечном итоге объективность интерпретации полученных результатов анализа содержания популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы позволяет использовать заявленный способ для выявления значимых патогенетических механизмов формирования стационарной миопии средней степени, в которых активно участвуют соединительнотканные структуры глаза, а значит разработать более эффективные методы профилактики миопии и добиться более высоких результатов в их лечении.

Заявителю неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, обеспечивающие в совокупности достижение заданного результата, поэтому авторы считают, что заявляемый способ соответствует критериям: новизны, изобретательского уровня и промышленной применимости. Заявляемое способ может найти широкое применение в медицине, офтальмологии, аллергологии и иммунологии, общей и клинической фармакологии.

Похожие патенты RU2575575C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СОЕДИНИТЕЛЬНО-ТКАННЫХ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА ПРИ СТАЦИОНАРНОЙ МИОПИИ ВЫСОКОЙ СТЕПЕНИ 2014
  • Петров Сергей Анатольевич
  • Костоломова Елена Геннадиевна
  • Тезелашвили Теа Нодаровна
  • Ворокутова Ольга Владимировна
  • Груздева Галина Алексеевна
RU2575574C1
СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СОЕДИНИТЕЛЬНО-ТКАННЫХ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА ПРИ СТАЦИОНАРНОЙ МИОПИИ 2014
  • Петров Сергей Анатольевич
  • Костоломова Елена Геннадиевна
  • Тезелашвили Теа Нодаровна
  • Ворокутова Ольга Владимировна
  • Груздева Галина Алексеевна
RU2595802C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА КЛЕТОК КОЖИ И ПОЛУЧЕНИЯ ЦИТОИММУНОГРАММЫ КОЖИ 2016
  • Гольцов Сергей Викторович
  • Костоломова Елена Геннадьевна
  • Суховей Юрий Геннадьевич
  • Паульс Вячеслав Юрьевич
RU2630607C1
СПОСОБ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ТРОМБОЦИТАРНО-МОНОЦИТАРНЫХ КОМПЛЕКСОВ В ОБРАЗЦАХ ЦЕЛЬНОЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ 2020
  • Чепанов Сергей Владимирович
  • Павлов Олег Владимирович
  • Селютин Александр Васильевич
  • Орлова Екатерина Сергеевна
  • Корнюшина Екатерина Амировна
  • Сельков Сергей Алексеевич
RU2762820C1
СПОСОБЫ И СРЕДСТВА ДЛЯ МОНИТОРИНГА НАРУШЕНИЯ ТКАНЕВОГО ГОМЕОСТАЗА В ОРГАНИЗМЕ 2012
  • Ван Донген Якобус Йоханнес Мария
  • Орфао Де Матос Коррейя Э Вале Хосе Альберто
RU2635767C2
ИМПЛАНТАТ ДЛЯ ОПЕРАЦИЙ ПО УКРЕПЛЕНИЮ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗА 2014
  • Паштаев Николай Петрович
  • Старостин Максим Александрович
  • Старостина Ольга Валерьевна
  • Поздеева Надежда Александровна
  • Григорьева Ирина Николаевна
RU2579281C1
Способ лечения прогрессирующей близорукости 1990
  • Мельник Иван Дмитриевич
  • Топор Борис Михайлович
SU1827230A1
Способ прогноза эффективности терапии меланомы 2021
  • Киселевский Михаил Валентинович
  • Анисимова Наталья Юрьевна
  • Петкевич Алиса Антоновна
  • Решетникова Вера Владимировна
  • Артамонова Елена Владимировна
  • Заботина Татьяна Николаевна
  • Кадагидзе Заира Григорьевна
  • Самойленко Игорь Вячеславович
RU2766739C1
Способ определения прогноза эффективности терапии рака молочной железы 2021
  • Киселевский Михаил Валентинович
  • Анисимова Наталья Юрьевна
  • Петкевич Алиса Антоновна
  • Решетникова Вера Владимировна
  • Артамонова Елена Владимировна
  • Заботина Татьяна Николаевна
  • Кадагидзе Заира Григорьевна
  • Самойленко Игорь Вячеславович
RU2757590C1
Способ прогнозирования неблагоприятного течения хронического посттравматического увеита после однократного проникающего хирургического вмешательства на глазном яблоке 2020
  • Филатова Ирина Анатольевна
  • Балацкая Наталья Владимировна
  • Куликова Ирина Геннадьевна
  • Денисюк Виктория Олеговна
  • Мохаммад Ихаб Мохаммад Джамиль
RU2733745C1

Реферат патента 2016 года СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СОЕДИНИТЕЛЬНО-ТКАННЫХ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА ПРИ СТАЦИОНАРНОЙ МИОПИИ СРЕДНЕЙ СТЕПЕНИ

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов органа зрения для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени. Сущность способа: хирургически выделяют фрагмент теноновой капсулы, в которой на проточном цитофлюориметре определяют распределение CD-маркеров на поверхности клеток. Данное изобретение отличается высокой точностью, чувствительностью и специфичностью определения популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы. Объективность интерпретирования результатов позволяет использовать заявленный способ для разработки более эффективных методов профилактики и лечения стационарной миопии средней степени, в которых активно участвуют соединительнотканные структуры глаза. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 575 575 C1

Способ диагностики стационарной миопии средней степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока, отличающийся тем, что при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD-маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы, в полученной суспензии определяют CD-маркеры и при превышении содержания CD49f+, CD249+, CD45+CD14+HLADR+ клеток и снижения содержания CD45-CD14-CD44+CD80+, CD207+, CD146+ и CD146+CD34+ клеток диагностируют стационарную миопию средней степени

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2016 года RU2575575C1

ИОМДИНА Е.Н
и др
Фундаментальные исследования биохимических и ультраструктурных механизмов патогенеза прогрессирующей миопии // Российский офтальмологический журнал
Станок для изготовления деревянных ниточных катушек из цилиндрических, снабженных осевым отверстием, заготовок 1923
  • Григорьев П.Н.
SU2008A1
Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
- С
Способ восстановления хромовой кислоты, в частности для получения хромовых квасцов 1921
  • Ланговой С.П.
  • Рейзнек А.Р.
SU7A1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ 2003
  • Россошанский А.Ю.
  • Россошанский К.Ю.
  • Савиных В.И.
RU2252699C2
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПРИОБРЕТЕННОЙ БЛИЗОРУКОСТИ 1997
  • Лапочкин Владимир Иванович
RU2124307C1
SHAO J
et al
Correlation of misfolded transthyretin in abnormal vitreous and high myopia

RU 2 575 575 C1

Авторы

Петров Сергей Анатольевич

Костоломова Елена Геннадиевна

Тезелашвили Теа Нодаровна

Ворокутова Ольга Владимировна

Груздева Галина Алексеевна

Даты

2016-02-20Публикация

2014-11-05Подача