Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые направлены на и/или которые могут специфически связывать (как определено в данном описании) белок F hRSV, а также к соединениям иди конструкциям, и в частности, белкам и полипептидам, которые включают или, по существу, состоят из одной или нескольких таких аминокислотных последовательностей (также называемым в данном описании «аминокислотная(ые) последовательностей) по изобретению», «соединение(я) по изобретению», «конструкция(и) по изобретению» и «полипептид(ы) по изобретению», соответственно).

Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим такие аминокислотные последовательности (также называемым в данном описании «нуклеиновая(ые) кислота(ы) по изобретению» или «нуклеотидная(ые) последовательностей) по изобретению»; к способам получения таких аминокислотных последовательностей и полипептидов; к клеткам-хозяевам, экспрессирующим или способным экспрессировать такие аминокислотные последовательности или полипептиды; к композициям, и в частности, фармацевтическим композициям, которые включают такие аминокислотные последовательности, полипептиды, соединения или конструкции, нуклеиновые кислоты и/или клетки-хозяева; и к применениям таких аминокислотных последовательностей, полипептидов, соединений или конструкций, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев и/или композиций, в частности, для профилактических и/или лечебных целей, таких как профилактические и/или лечебные цели, упоминаемые в данном описании.

Другие аспекты, преимущества и применения изобретения станут ясными из дальнейшего описания.

Уровень техники

Респираторно-синцитиальный вирус человека (hRSV) является членом семейства Paramyxoviridae и является оболочечным вирусом с двумя основными гликопротеинами поверхности, которые образуют шипы на вирусной частице. Один из таких гликопротеинов (белок G) является прикрепляющим белком, который опосредует связывание вируса с поверхностью клетки. Другой гликопротеин (белок F или слияния) опосредует слияние вирусной и клеточной мембран, допуская проникновение вирусного нуклеокапсида в цитоплазму клетки. Ингибирование стадий, опосредуемых или G- или F-гликопротеинами, блокирует начальные стадии инфекционного цикла и нейтрализует инфекционность вируса. Поэтому антитела, направленные против или G или F и ингибирующие их соответствующую активность, могут нейтрализовать инфекционность вируса и могут защитить от заражения hRSV. Белок F является высококонсервативным и образует тримерные выступы, которые претерпевают конформационные изменения после активации.

В зимние месяцы hRSV является основной причиной тяжелых инфекций нижних дыхательных путей (бронхиолита и пневмонии) у новорожденных и детей младшего возраста и вызывает ежегодные эпидемии. Вирус также является причиной тяжелых заболеваний среди людей пожилого возраста, и взрослых предрасположенных к сердечно-легочным расстройствам и/или иммуносупрессивным состояниям, которые также находятся в группе риска тяжелого течения заболевания hRSV. Иммунная реакция не предотвращает повторных заражений.

Не существует вакцины, способной предотвратить заражение hRSV. Единственным доступным на рынке лекарственным средством являются гуманизированные моноклональные антитела (Синагис® (Synagis®)), направленные против одного из гликопротеинов вируса (белка F), который используют для профилактики у детей, которые находятся в группе повышенного риска развития тяжелого инфекционного заболевания hRSV. Ограниченное применение Синагиса® имеет место, по меньшей мере, частично, из-за высокой стоимости указанного продукта. Существует отчетливая потребность в улучшенных и/или более дешевых профилактических и/или терапевтических средствах для предупреждения и или лечения заражений hRSV.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям (также называемым «аминокислотная(ые) последовательность(и) по изобретению», полипептидам (также называемым «полипептид(ы) по изобретению») и терапевтическим соединениям и композициям, которые направлены против белка F hRSV и имеют улучшенные профилактические, терапевтические и/или фармакологические свойства в дополнение к другим выгодным свойствам (таким как, например, более легкое получение и/или уменьшенная стоимость товара) по сравнению с аминокислотными последовательностями и антителами предшествующего уровня техники. Такие улучшенные и выгодные свойства станут более ясными из дальнейшего описания. Без ограничений, аминокислотные последовательности, полипептиды и терапевтические соединения и композиции по изобретению могут показывать улучшенную стабильность, меньшую иммуногенность, улучшенное связывание с белком F hRSV, улучшенную аффинность и/или авидность в отношении белка F hRSV, улучшенную эффективность и/или активность нейтрализации hRSV (как определено в данном описании), улучшенную селективность в отношении белка F hRSV, и/или они могут быть способны частично или, предпочтительно, полностью блокировать взаимодействие белка F hRSV с хозяйской клеткой-мишенью или ее мембраной. Они могут быть способны к нейтрализации hRSV путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения инфективности hRSV, путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения слияния hRSV с (клеточной мембраной) хозяйской клетки-мишени и/или путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения проникновения hRSV в хозяйскую клетку-мишень (как определено в данном описании). Они могут быть перекрестно реагирующими с и/или способными к нейтрализации различных вирусных штаммов hRSV и/или различных «ускользнувших» мутантов hRSV.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к ряду тяжей из аминокислотных остатков (как определено в данном описании), которые особенно подходят для связывания со специфическим эпитопом белка F hRSV. Такие тяжи аминокислотных остатков могут присутствовать в и/или могут быть введены в аминокислотные последовательности по изобретению, в частности, таким образом, что они образуют антигенсвязывающий сайт (или его часть) аминокислотной последовательности по изобретению. Полученные аминокислотные последовательности будут способны связывать специфический эпитоп на белке F hRSV, который находится, образует часть или перекрывает (т.е. в первичной или третичной структуре) или находится в непосредственной близости к (т.е. в первичной или третичной структуре) антигенному сайту II на белке F hRSV (т.е. аминокислотным остаткам 250-275 белка F hRSV).

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают, по меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, один тяж из которых выбран из следующего:

a) SEQ ID NO:102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, которая включает указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121; и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности по изобретению, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), e) и f).

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, первый тяж из которых выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c)SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Аминокислотные последовательности, включающие один или несколько таких специфических тяжей из аминокислотных остатков, проявляют улучшенные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины K_D (действительной или кажущейся), величины K_A (действительной или кажущейся), константы скорости k_on и/или константы скорости k_off или, с другой стороны, величины IC₅₀, описанные далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV.

Аминокислотная последовательность по изобретению может, в частности, представлять собой доменное антитело (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве доменного антитела), однодоменное антитело (или аминокислотная последовательность которая подходит для использования в качестве однодоменного антитела) «dAb» (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве dAb) или нанотело® (определенное в данном описании и включающее, но не ограниченное указанным, V_HH-последовательность); другие отдельные вариабельные домены или любой подходящий фрагмент любого из них.

В этом отношении аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Такие предпочтительные гипервариабельные участки (последовательности CDR2) также называются «CDR2 по изобретению».

Предпочтительно, аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102 или

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

и/или

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121 или

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102 или

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включает, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102. Предпочтительно, аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включает SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

Настоящее изобретение также относится к ряду гуманизированных аминокислотных последовательностей, которые, в частности, подходят для связывания белка F hRSV. Аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют уменьшенную иммуногенность при введении человеку. Кроме того, аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют другие улучшенные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины K_D (действительной или кажущейся), величины K_A (действительной или кажущейся), константы скорости k_on и/или константы скорости k_off или, с другой стороны, величины IC₅₀, описанных далее в данном описании), в отношении белка F hRSV, улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV, по сравнению с соответствующими им аминокислотными последовательностями дикого типа (описанными в заявке РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочки вируса и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», поданной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

Соответственно, в другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 60-76.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 146-153.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

Настоящее изобретение относится к ряду аминокислотных последовательностей и/или нанотел®, оптимизированных по последовательности, которые проявляют повышенную стабильность при хранении во время исследований стабильности, и которые особенно подходят для связывания белка F hRSV. Аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют уменьшенную пироглутаматную посттрансляционную модификацию N-конца и, следовательно, имеют повышенную стабильность продукта. Кроме того, аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют другие улучшенные свойства, такие как меньшая иммуногенность, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины K_D (действительной или кажущейся), величины K_A (действительной или кажущейся), константы скорости k_on и/или константы скорости k_off или, с другой стороны, в виде величины IC₅₀, описанных далее в данном описании) в отношении белка F hRSV, улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV, по сравнению с их соответствующими исходными аминокислотными последовательностями (описанными в заявке РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочки вируса и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», зарегистрированной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

Аминокислотные последовательности и нанотела® по изобретению предпочтительно находятся в, по существу, изолированной форме (как определено в данном описании) или образуют часть белка или полипептида по изобретению (также называемых в данном описании «полипетид по изобретению» или «белок по изобретению»), которые могут включать или, по существу, состоять из одной или нескольких аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению, и которые могут, необязательно, также содержать одну или несколько других аминокислотных последовательностей или нанотел® (все необязательно соединенные через один или несколько подходящих линкеров).

Соответственно, в другом аспекте изобретение также относится к белку или полипептиду (также называемых в данном описании «белок по изобретению» или «полипетид по изобретению», соответственно), который включает или, по существу, состоит из одной или нескольких аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (или их подходящих фрагментов).

Например, и без ограничения, одну или несколько аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению можно использовать в качестве связывающей единицы в таком белке или полипептиде, так что получается моновалентный, поливалентный или полипаратопный полипептид по изобретению, соответственно, все описанные в данном описании. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который представляет собой моновалентную конструкцию, включающую или, по существу, состоящую из аминокислотной последовательности и/или нанотела® по изобретению. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который является поливалентным полипептидом, таким как, например, двухвалентный или трехвалентный полипептид. Настоящее изобретение также относится к полипептиду, который является полипаратопным полипептидом, таким как, например, бипаратопный или трипаратопный полипептид.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (описанных выше).

В одном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают, по меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

1) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых один тяж выбран из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121; и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности, которая образует часть поливалентного полипептида, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), е) и f).

Предпочтительные поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых первый тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 102 или

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

и/или

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121 или

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительно, поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102 или

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102, предпочтительно, которые включают SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60-76.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 62, 65,67,68,75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65 и 76.

Предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 62. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 65. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 76.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 146-153.