ШТАММ ГРИБА Laetiporus sulphureus - ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ Российский патент 2016 года по МПК C12N1/14 C12P7/40 A61K36/06 C12R1/645 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штаммам грибам-продуцентам биологически активных веществ, и может быть использовано при производстве и применении биологически активных добавок (БАД).

Перспективным источником для создания биологически активной добавки является высший базидиальный гриб серно-желтый трутовик - Laetiporus sulphureus.

В мицелии серно-желтого трутовика обнаружен полный комплекс биологически активных веществ: белок с высоким содержанием незаменимых аминокислот, липиды, каротиноиды и витамины. Носителем биологической активности мицелия гриба является липокаротиноидный комплекс. В составе каротиноидного комплекса выявлено 3 фракции, отнесенных к классу ксантофиллов [Гвоздкова Т.С., Мишин Л.Т., Черноок Т.В., Пленина Л.В., Капич А.Н. Глубинный мицелий ксантофилсодержащего гриба Laetiporus sulphureus - основа биологически активной добавки // Успехи медицинской микологии. - 2003. Т. 3. - С. 218-220; Гвоздкова Т.С., Черноок Т.В., Филимонова Т.В., Рожкова З.А., Осадчая О.В., Смирнов Д.А., Щерба В.В., Бабицкая В.Г. Оценка возможности использования базидиальных грибов в качестве источников биоактивных липидных компонентов. // Успехи медицинской микологии. Т. 9, 2007. С. 151-154; Феофилова Е.П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование // Прикладная биохимия и микробиология. - 1994. - Т. 30, вып. 2. - С. 181-195; Феофилова Е.П., Терешина В.М., Меморская А.С. Достижения и проблемы новой области биотехнологии: получение медицинских препаратов на основе биологически активных веществ мицелиальных грибов // Успехи медицинской микологии. - 2001. Т. 1. - С. 254-256].

Наличие в мицелии гриба L.sulphureus целого комплекса биологически активных липофильных соединений: каротиноидов, ненасыщенных жирных кислот, стероидных соединений (эргостерин, тритерпеновые кислоты), фосфолипидов и др., обладающих антиоксидантными свойствами, может послужить основой для разработки технологии получения биологически активной добавки [Капич А.Н., Гвоздкова Т.С., Квачева З.Б. и др. Антиоксидантные, радиозащитные и противовирусные свойства экстрактов мицелия гриба Laetiporus sulphureus в условиях глубинного культивирования // Успехи медицинской микологии. - 2004. - 3. - С. 146-148].

Известен дикий штамм Laetiporus sulphureus MZ-22 (патент RU 2473679), способный синтезировать биологически активные вещества на капустной среде, содержащей глюкозу в количестве 2%, молочную сыворотку в количестве 1% с добавлением селенита натрия в концентрации 15-25 мг/л.

Недостатком этого штамма являются особые требования к условиям культивирования: сложная питательная среда, наличие освещенности и т.д.

Известен штамма L. Sulphureus, на основе которого путем глубинного культивирования, разработана биологически активная добавка «Летипорин» [Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Гвоздкова Т.С. Новые биологические активные добавки на основе глубинного мицелия базидиальных грибов // Успехи медицинской микологии. - 2006. Т. 7. - С. - 178-180]. Содержание в мицелии гриба Laetiporus sulphureus истинного белка по сумме аминокислот невелико и составляет 7-8%, общее содержание каротиноидов 10-12 мг/г АСВ.

Задачей изобретения является изыскание нового штамма гриба, содержащего в биомассе более широкий спектр различных биологически активных веществ: незаменимые аминокислоты, клетчатка, жирные кислоты, витамины.

Технический результат изобретения заключается в обнаружении штамма гриба Laetiporus sulphureus с содержанием в биомассе более широкого спектра биологически активных веществ с более высоким выходом.

Штамм гриба Laetiporus sulphureus 3Х выделен из плодового тела гриба, собранного с в Москве.

Штамм гриба Laetiporus sulphureus 3Х депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов с регистрационным номером ВКПМ F-1188.

Культуральные признаки штамма: на агаризованной среде штамм формирует колонии с ватообразным воздушным мицелием ярко-оранжевого окраса, экссудат не образуется. При глубинном культивировании образуются фрагментированные структуры с плотным центром оранжево-красного цвета, с приятным медовым запахом, наблюдается снижение pH культуральной жидкости до значений 2,5-3,0.

Морфологические признаки штамма: формирует длинные септированные гифы с простым ветвлением, без пряжек. На гифах обнаруживаются овальные и шарообразные бесполые структуры, расположенные интеркалярно или терминально.

Технологические характеристики: аэроб, растет в интервале температур 15-30°C (оптимальная температура роста 25°C). Способен развиваться в интервале pH 2,5-7,5 (оптимум pH 3,0-3,5).

Штамм непатогенен и нетоксичен.

Хранение штамма: штамм хорошо сохраняется на среде «Сабуро» путем периодических пересевов (3-4 раза в год). После пересева рост штамма осуществляется в термостате при температуре 25°C в течение 7 суток. Хранится культура при температуре +4+6°C в условиях холодильника.

Химический состав биомассы штамма гриба представлен в таблицах 1-3. Биомасса штамма Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1188 содержит 30% истинного белка, а каротиноидов в 4 раза больше, чем вышеуказанный известный штамм.

Пример. Культивирование гриба Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1188. Инокулят штамма, выращенный в 25 пробирках на скошенной агаризованной среде, содержащей (мас. %): глюкоза - 2, пептон - 4, агар - 2, вода - остальное; в течение 7 суток при 25-28°C, смывают стерильной водой из расчета 10 см³ воды на одну пробирку и вносят в колбы Эрленмейера объемом 250 см³, содержащие по 50 см³ стерильной среды, содержащей (мас. %): соевая мука - 4,5, NH₄NO₃ - 1,52, вода - остальное, pH среды - 3,0; для получения посевного материала.

Соотношение инокулята и питательной среды 1:5. Культивирование осуществляется на качалках со скоростью встряхивания 220 об/мин в течение 4 суток, температура выращивания 25-28°C. Полученный таким образом посевной материал используют для засева лабораторного ферментера общим объемом 10 дм³ (рабочий объем 7 дм³) на питательной среде следующего состава (мас. %): соевая мука - 4,5, NH₄NO₃ - 1,52, вода - остальное, pH среды - 3,0.

Ферментацию проводят при следующих условиях: температура культивирования 25-28°C, количество посевного материала - 20%, степень аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в минуту, перемешивание 250 об/мин, длительность культивирования 4 суток.

По окончании культивирования содержание биомассы достигает 34,7 г/л АСВ.

Биомасса пригодна в качестве биологически активной добавки.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штаммам грибам-продуцентам биологически активных веществ. Штамм Laetiporus sulphureus 3Х, обладающий широким спектром различных биологически активных веществ, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-1188 и может быть использован при производстве биологически активных добавок. Изобретение позволяет увеличить выход истинного белка и содержание каротиноидов. 3 табл., 1 пр.

Штамм гриба Laetiporus sulphureus ВКПМ F-1188 - продуцент биологически активных веществ.