ШТАММ СОМАТИЧЕСКИХ СТРУКТУР МАКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА AGARICUS BISPORUS - ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ Российский патент 1994 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в качестве продуцента биологически активных веществ.

Известны промышленные штаммы грибов шампиньонов, используемые в основном как продуценты плодовых тел. Близким к заявляемому объекту по габитусу плодового тела является применяемый в промышленности штамм ГДР-2 (совхоз "Заречье", Московской обл. ).

Основной недостаток этого штамма состоит в том, что он медленно растет на жидких и твердых питательных средах, что делает неэффективным его культивирование в промышленности с целью получения биомассы и биологически активных веществ.

Цель изобретения - расширение ассортимента непатогенных штаммов, продуцирующих биологически активные вещества, а также ускорение процесса выращивания продуцента.

Новый штамм мицелия Agaricus bisporus выделен из пластинок плодового тела шампиньона, произрастающего в Балхашском районе Алма-Атинской области. Депонирован в коллекции непатогенных микроорганизмов ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии ВАСХНИЛ, г. Ленинград, номер Д 49.

Штамм имеет следующие признаки.

Культурально-морфологические. На сусло-агаре культура образует бархатистые колонии из плотного слоя прямых коротких гиф воздушного мицелия. Край колонии волнообразный, погруженный, с пушистой внешней линией, обратная сторона колонии не окрашена. Воздушный мицелий состоит из хорошо развитых генеративных и скелетных гифов.

Генеративные гифы (толщина 2-3 мкм), тонкостенные, прозрачные, слабоветвящиеся, септированы. Гомогенная протоплазма расположена у перегородок и точках роста гиф. Пряжки резкие. Скелетные гифы толстые (4-6 мкм), почти без перегородок, встречаются вздутия, ответвление генеративных гифов. Протоплазма скелетных гифов инкрустирована кристаллами неправильной формы.

Физиолого-биохимические признаки - аэроб, битимольный, рН среды 6-7, оптимальная температура роста 18-20^оС. При более высокой и более низкой температуре рост угнетен. Нижний предел температуры роста 13^оС.

Из источников углерода культура ассимилирует крахмал, мальтозу, аробинозу, глюкозу.

Из источников азота предпочтительно усваивает пептон, дрожжевой автолизат, хуже минеральные - мочевину, аммоний сернокислый, аммоний азотно-кислый, аммоний хлористый.

При поверхностном способе культивирования на зерновом субстрате продуцент синтезирует ферменты: целлюлозу, амилозу, протеозу, линазу; карбоновые кислоты преимущественно янтарную, яблочную; витамины группы В, РР, С, а также липиды.

П р и м е р 1. Характеристика энергии роста (ростовой коэффициент).

Культуры штаммов ГДР-2 и заявляемого посеяны поверхностно на твердую среду сусло-агар с мелом, через 7 сут культивирования при 22-28^оС получены следующие результаты (см. табл. 1):
П р и м е р 2. Продуктивность штамма на жидких питательных средах. Культуру выращивали глубинно при 28-30^оС, в течение 5 сут, на качалке с 160 об/мин, в колбах с 100 мл питательной среды следующего состава, г/л:
1. Среда Лэмберга Кислый фосфорно- кислый калий 1,0 Аммиачная селитра 1,0 Магний сернокислый 0,5 Сахароза 3,0 Глюкоза 1,0 Мельтоза 1,0 Автолизат 1,0 Вода 1 л
2. Каpтофельная
200 г очищенного измельченного картофеля кипятят 30-40 мин в 1 л воды, отвар фильтруют, добавляют к нему испарившуюcя часть воды и соли: Калий фосфорно- кислый 1,0 Аммиачная селитра 1,0 Магний сернокислый 0,5 Сахароза 4,0 Глюкоза 1,0 3. Овсяный отвар Овсяная мука 30 г Вода 970 мл 4. Морковный отвар Экстракт моркови 400 мл Вода 600 мл
П р и м е ч а н и е. Экстракт готовят из раздробленной моркови, которую смешивают с водой в соотношении 2: 5, отваривают 30 мин, фильтруют (результаты в табл. 2).

Полезность или другая эффективность штамма обусловлена его способностью продуцировать биологически активные вещества, что найдет применение в практике сельского хозяйства, например, в качестве кормовой добавки, в виде следующего продукта:
Продукт, полученный методом твердофазной ферментации зерна пшеницы, грибом Agaricus bisporus Д49, имеет следующие показатели: Влага 7-8% Сырой клетчатки 5,5% Липидов 1-5% Витамина С 32,8-34,2 мг/100 г Тиамина (В₁) 0,61-0,63 -"- Рибовлавина (В₂) 0,32-0,37 -"- Ниацина (РР) 8,0-8,5 -"-
Ферменты (ед/г): Целлюлоза 82,5 Амилаза 55,6-119,3 Протеаза 41,2-57,0 Липаза 6,0-27,0
Карбоновые кислоты 500-600 мг/100 г (в т. ч. сорбиновая, щавелевая, фумаровая, янтарная, яблочная, кетоглутаровая, винная, лимонная).

Продукт назван кормовой добавкой БШ (Балхашский шампиньон) и предложен для сельскохозяйственных животных. (56) Производство высших съедобных грибов в СССР. 1978, 76-80.

Использование: биотехнология, производство биологически активных веществ. Сущность изобретения: штамм Agaricus bispousD 49 получен из природного материала, а именно, выделен в чистую культуру из пластинок плодового тела шампиньона. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВНИИСХМ-ВИЗР под N 1. При культивировании штамма на твердых и жидких питательных средах продуцент накапливают биомассу до 27,3 г/л, витамины C, PP и группы B, ферменты-целлюлазу 83 ед/г, амилазу 55 ед/г, протеазу 40 - 50 ед/г, липазу 6 - 27 ед/г, карбоновые кислоты (в т. ч. сорбиновую, щавелевую, фумаровую, яблочную, винную лимонную). На основе штамма готовят кормовую добавку для сельскохозяйственных животных и птиц. 2 табл.

Штамм соматических структур макроскопического гриба Agaricus bisporus - ВНИИСХМ - ВИЗР Д-49 -- продуцент биологически активных веществ.