СПОСОБЫ РЕГУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ СИРТУИНОВ Российский патент 2016 года по МПК A01N65/00 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США серийный номер 61/517228, поданной 15 апреля 2011 года, раскрытие которой включено сюда посредством данной отсылки.

Уровень техники

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится в целом к способам регулирования экспрессии генов и, в особенности, к способам регулирования экспрессии генов сиртуинов в животных.

Уровень техники

Изофлавоны представляют собой встречающиеся в природе химические соединения, которые содержатся в растениях, таких как фасоль и бобовые, особенно в сое. Изофлавоны имитируют эффекты эстрогена и модулируют метаболизм эстрогена. В результате изофлавоны, как известно, уменьшают пролиферацию опухолевых клеток, вызывают апоптоз опухолевых клеток, регулируют гормональный баланс и снижают риски рака груди и простаты, болезней сердца, остеопороза и некоторых других заболеваний и состояний.

Экспрессия белков представляет собой субкомпонент экспрессии генов. ′′Экспрессия белков′′ обозначает стадии, следующие за трансляцией ДНК в полипептидные цепи, которые, в конечном счете, сворачиваются в белки. Выражение экспрессия белка обычно используется для обозначения измеренного количества или концентрации одного или более белков в конкретной клетке или ткани.

Сиртуины представляют собой семейство NAD+-зависимых ферментов, регулирующих продолжительность жизни у низших организмов, включая дрожжи, червей и мух. Как сиртуины влияют на продолжительность жизни, до конца не изучено. На сегодняшний день у млекопитающих было выявлено семь членов семьи. SIRT6 и SIRT7 представляют собой белки ядра. SIRT3, SIRT4 и SIRT5 представляют собой митохондриальные белки. SIRT1 и SIRT2 представляют собой белки, обнаруженные как в ядре, так и в цитоплазме. Сиртуины млекопитающих связывают с сопротивлением клеток стрессу, геномной стабильностью, онкогенезом и энергетическим метаболизмом (Finkel et al. Nature 460, 587-591 (2009)).

Было показано, что SIRT1 является посредником при увеличении продолжительности жизни, связанном с ограничением калорийности. Активация SIRT1 способствует долголетию, регулируя расход энергии в периоды ограничения калорийности. Также было показано, что SIRT1 снижает продукцию бета-амилоидных бляшек. Накопление бета-амилоидных бляшек связано с болезнью Альцгеймера (Donmez et al., Cell 142, 320-332 (2010)). Изофлавоновые производные продемонстрировали дифференциальные эффекты на активацию и экспрессию SIRT1. Сообщается, что ресвератрол, активатор SIRT1, содействует митохондриальному биогенезу и защищает от метаболических заболеваний (Rasbach et al., J Pharmacol Exp Ther 325, 536-543 (2008)). Будучи применимым, ресвератрол весьма чувствителен к кислороду, и его стабильность трудно поддерживать.

Ограничение калорийности, вызванное активацией сиртуинов, увеличивает продолжительность жизни, способствует здоровью, замедляет старение и связанные со старением заболевания. Ограничение калорийности трудно реализуемо на практике у людей и домашних животных.

Следовательно, существует потребность в композициях и способах, применимых для регулирования экспрессии генов сиртуинов в животных. Существует также потребность в композициях и способах регулирования экспрессии генов сиртуинов и через регулирование экспрессии сиртуинов имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления процесса старения. Такие терапии были бы особенно полезны для стареющих человека и других животных для улучшения общего качества жизни для всех участников. В случае домашних животных данные способы лечения приведут к повышению удовлетворенности владельца и позволят улучшить связь между владельцем и домашним животным.

Сущность изобретения

Следовательно, задача изобретения относится к способам регулирования экспрессии генов сиртуинов в животном.

Еще одна задача изобретения относится к способам имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления старения в животном.

Еще одна задача изобретения относится к композициям, применимым для регулирования экспрессии генов сиртуинов, имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления старения в животном.

Одна или более из данных или других задач достигаются введением животному одного или более изофлавонов в терапевтически эффективном количестве. В общих вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количестве от около 0,001 до около 10 г/кг/день.

Данные и другие задачи, признаки и преимущества изобретения очевидны специалистам в данной области.

Подробное описание изобретения

Определения

Понятие ′′изофлавоны′′ означает изофлавоны и их природные или синтетические аналоги, производные, предшественники и метаболиты, применяемые в изобретении. Изофлавоны относится к 3-фенилхромонам, изомерным формам флавонов, в которых бензольная группа присоединена к положению 3 бензопиранового цикла вместо положения 2. Изофлавоны могут быть найдены в различных источниках, включая, но не ограничиваясь этим, сою. Не ограничивающие примеры изофлавонов включают в себя даидзеин; даидзин; 6-O-малонилдаидзеин; 6-O-ацетилдаидзеин; генистеин; 6-O-малонилгенистеин; 6-О-ацетилгенистеин; глицитеин; 6-О-малонилглицитеин; 6-O-ацетилглицитеин; биоханин А; формононетин; ирилон; прунетин; пратензеин; глицитинн; дигидродаидзеин; эквол; О-десметиланголензин; 7,4′-ди-O-сульфат даидзеина; 7-О-бета-D-глюкуронид даидзеина; 4′-O-сульфат даидзеина; 6,7,5′-тригидроксиизофлавон; 6,7,3′,4′-тетрагидроксиизофлавон, 7,8,4′-тригидроксиизофлавон, 5,6,7,4′-тетрагидроксиизофлавон; дигидрогенистеин; р-этилфенол; 3′,4′,5,7-тетрагидроксиизофлавон; 4′-O-сульфат генистеина; 7-O-бета-O-глюкуронид генистеина; 4′-O-сульфат генистеина и 4′,5,7-тригидроксиизофлавонон.

Понятие ′′животное′′ означает любое животное, для которого регулирование экспрессии генов сиртуинов может быть выгодным, например человека, птицу, корову, собаку, лошадь, кошку, козла, волка, мышь, овцу и свинью.

Понятие ′′домашнее животное′′ означает одомашненных животных, таких как кошки, собаки, кролики, морские свинки, хорьки, хомяки, мыши, песчанки, лошади, коровы, козы, овцы, ослы, свиньи и тому подобное.

Понятие ′′терапевтически эффективное количество′′ означает количество соединения по изобретению, которое (i) лечит или предотвращает конкретное заболевание, состояние или расстройство, (ii) ослабляет, улучшает состояние или устраняет один или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства или (iii) предотвращает или задерживает начало одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, описанного здесь.

Понятия ′′лечение′′, ′′лечить′′ и ′′терапия′′ охватывают как предупреждающее, т.е. профилактическое, так и паллиативное лечение.

Понятия ′′фармацевтически приемлемый′′ и ′′нутрицевтически приемлемый′′ означает, что вещество или композиция должны быть совместимы химически и/или токсикологически с другими ингредиентами, содержащими композицию, и/или с млекопитающим, подвергаемым проводимому с ним лечению.

Понятие ′′здоровье и/или хорошее самочувствие животного′′ означает полное физическое, умственное и социальное благополучие животных, а не только отсутствие болезней и физических дефектов.

Понятие ′′удлинение периода расцвета сил′′ означает удлинение количества лет, на протяжении которых животное живет здоровой жизнью, а не только удлинение количества лет жизни животного, например животное будет являться здоровым в лучшую пору своей жизни в течение относительно более длительного времени.

Понятие ′′совместно′′ означает, что композиции по изобретению вводятся животному (1) вместе в виде пищевой композиции или (2) отдельно с одинаковой или различной частотой с использованием тех же или различных путей введения приблизительно в одно и то же время или периодически. ′′Периодически′′ означает, что композиции вводят по расписанию, подходящему для специфических соединений или композиций. ′′Приблизительно в то же время′′ в целом означает, что композиции вводят одновременно или в интервале времени, не превышающем около 72 ч.

Понятие ′′пищевая добавка′′ означает продукт, который предназначен для потребления в дополнение к обычной пище животного. Биологически активные добавки могут находиться в любой форме, например твердой, жидкой, геля, таблетки, капсулы, порошка и тому подобное. Предпочтительно они поставляются в соответствующих лекарственных формах, например в пакетиках. Биологически активные добавки могут быть предоставлены в крупногабаритной потребительской упаковке, например, когда они представляют собой порошки, жидкости, гели или масла. Точно также добавки могут быть предоставлены в массовых количествах, когда они предназначены для включения в другие продукты питания, такие как закуски, лакомства, содержащие пищевые добавки плитки, напитки и тому подобное.

Понятие ′′стареющий′′ означает достижение пожилого возраста, так что животное достигает или превышает 50% от средней продолжительности жизни вида животных и/или породы, относящейся к данному виду. Например, если средняя продолжительность жизни для данной породы собак составляет 12 лет, то возраст ′′стареющего животного′′ для данной породы составляет 6 лет или старше.

Понятие ′′пища′′ или ′′пищевой продукт′′ или ′′пищевая композиция′′ означает продукт или композицию, которая предназначена для приема внутрь животным, включая человека, и обеспечивает питание для данного животного.

Понятие ′′регулярно′′ означает, по меньшей мере, месячную дозировку с композициями по изобретению и более предпочтительно недельную дозировку. Более частое дозирование или потребление, такое как два или три раза в неделю, предпочтительно в некоторых вариантах осуществления. Еще более предпочтительными являются схемы, которые содержат потребление по меньшей мере один раз в день, например, когда композиции по изобретению являются составной частью пищевой композиции, которая потребляется по меньшей мере один раз в день.

Понятие ′′единая упаковка′′ означает, что компоненты набора физически объединены в один или более контейнер или связаны с одним или более контейнерами и рассматриваются как единица для производства, распространения, продажи или применения. Контейнеры включают в себя, но не ограничиваются ими, пакеты, мешки, коробки, флаконы, упаковки, такие как упаковки из термоусадочной пленки, сшитые или иным образом соединенные компоненты или их комбинации. Единая упаковка может представлять собой контейнеры, содержащие отдельные композиции по изобретению, и пищевые композиции, физически соединенные таким образом, что они рассматриваются как единица для производства, распространения, продажи или применения.

Понятие ′′виртуальная упаковка′′ означает, что компоненты набора связаны инструкциями по одному или более физическим или виртуальным компонентам набора, инструктирующим пользователя, как получить другие компоненты, например, в сумке или в ином контейнере, содержащем один компонент, и инструкциями, указывающими, что пользователь должен посетить веб-сайт, связаться с записанным сообщением или факсом по обратной коммуникации, просмотреть визуальное сообщение или связаться с сотрудником, осуществляющим уход, или инструктором, чтобы получить инструкции о том, как использовать данный набор, или информацию по технике безопасности или техническую информацию об одном или более компонентах набора.

Дозировки приводятся в данном документе в миллиграммах на килограмм массы тела в день (мг/кг/день), если не указано иначе.

Все проценты, выраженные в данном документе, даны по массе композиции в пересчете на сухое вещество, если специально не указано иное. Специалисту в данной области очевидно, что понятие ′′в пересчете на сухое вещество′′ означает, что концентрация ингредиента или процент в композиции измеряется или определяется после удаления любой свободной влаги из композиции.

Для целей изобретения диапазоны используются в данном документе в сокращении, чтобы избежать перечисления и описания каждого значения в пределах диапазона. Любое подходящее значение в пределах диапазона может быть выбрано, когда это необходимо, как верхнее значение, нижнее значение или конец диапазона.

Для целей изобретения форма единственного числа слова включает в себя множественное число, и наоборот, если из контекста явно не следует иное. Так, например, понятие ′′добавка′′, ′′способ′′ или ′′продукт′′ включает в себя соответствующие ′′добавки′′, ′′способы′′ или ′′продукты′′ во множественном числе. Аналогично, слова ′′содержат′′, ′′содержит′′ и ′′содержащий′′, а также ′′включают′′ ′′включает′′ и ′′включающий′′ следует интерпретировать включительно, а не исключительно. Сходным образом, понятия ′′включает′′, ′′включающий′′ и ′′или′′ должны все толковаться как инклюзивные, если запрет такой конструкции не будет четко следовать из контекста. Аналогично, понятие ′′примеры′′, особенно с последующим списком понятий, является просто примером и иллюстрацией и не должно считаться исключительным или исчерпывающим.

Способы и композиции и другие достижения, раскрытые в данном документе, не ограничиваются конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными в данном документе, поскольку специалисту будет понятно, что они могут варьировать. Более того, терминология, используемая в данном документе, служит для целей описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения и не ограничивает рамки того, что раскрыто, или формулу изобретения.

Если не указано иное, все технические и научные понятия, понятия уровня техники и сокращения, используемые в данном документе, имеют значения, обычно понятные специалистам в данной области техники, а также в области(ях) изобретения или в области(ях), в которой используется данное понятие. Хотя любые композиции, способы, изделия или другие средства или материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть использованы в практике изобретения, предпочтительные композиции, способы, изделия или другие средства или материалы описаны в данном документе.

Все патенты, заявки на патенты, публикации, технические и/или научные статьи и другие ссылки, цитируемые или упомянутые в настоящем документе, в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки в пределах, разрешенных законом. Обсуждение данных ссылок имело целью только суммирования сделанных в них утверждений. Не сделано допущения, что любые такие патенты, заявки на патенты, публикации или ссылки, или любая их часть, содержат материалы или отражают предшествующий уровень техники, имеющие отношение к изобретению. Право оспаривать точность и актуальность любого утверждения таких патентов, заявок на патенты, публикаций и других ссылок как соответствующих уровню материалов или техники специально сохраняется за авторами изобретения.

Изобретение

Один объект изобретения относится к способам регулирования экспрессии генов сиртуинов в животном. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов.

Другой объект изобретения относится к способам имитации ограничения калорийности в животном. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и, тем самым, имитации ограничения калорийности в животном.

Другой объект изобретения относится к способам профилактики и лечения болезни Альцгеймера в животном. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и, тем самым, предотвращения и лечения болезни Альцгеймера в животном.

Другой объект изобретения относится к способам увеличения продолжительности жизни у животных. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и, тем самым, повышения продолжительности жизни у животных.

Другой объект изобретения относится к способам замедления старения в животном. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и, тем самым, замедления старения в животном.

Изобретения основаны на открытии, заключающемся в том, что введение изофлавонов животным регулирует экспрессию генов сиртуинов в животном, и на открытии, состоящем в том, что сиртуины влияют на различные функции, относящиеся к животному, например имитацию ограничения калорийности, профилактику и лечение болезни Альцгеймера, увеличение продолжительности жизни, замедление старения и т.п. для животных.

Регулирование экспрессии генов сиртуинов регулирует количество серотонинов у животного. В предпочтительных вариантах осуществления гены сиртуинов активируются и, следовательно, увеличивают количество сиртуинов в животном.

Регулируемые гены сиртуинов, регулирующих серотонины, представляют собой SIRT2 и SIRT3. Данные, полученные для поддержки изобретения, показывают, что ген SIRT6 не регулируется введением изофлавонов животным.

В одном варианте осуществления экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT1, SIRT2, SIRT3, SIRT4, SIRT5 или SIRT7. В другом варианте осуществления экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT2 или SIRT3. В другом варианте осуществления экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT4, SIRT5 или SIRT7.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT1 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT2 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT3 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT4 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT5 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

Другой объект изобретения относится к способу регулирования экспрессии SIRT7 у животного, содержащему введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве.

В различных вариантах осуществления животное представляет собой любое животное, которое имеет потребность в регулировании экспрессии генов сиртуинов, включая, но не ограничиваясь этим, имитацию ограничения калорийности, профилактику и лечение болезни Альцгеймера, увеличение продолжительности жизни и замедления старения. В одном варианте осуществления животное представляет собой человека или домашнее животное, предпочтительно собаку или кошку. В другом варианте осуществления животное представляет собой стареющее животное.

Изофлавоны представляют собой любые изофлавоны, известные специалистам в данной области. В различных вариантах осуществления изофлавоны выбраны из группы, состоящей из изофлавонов в форме агликонов, глюкозидов, ацетилглюкозидов и малонилглюкозидов. Предпочтительно изофлавоны выбраны из группы, состоящей из биоханина А, даидзеина, даидзина, глицитеина, формононетина, эквола, генистеина, ирилона, лютеона, прунетина, пратензеина и глицитина. В одном варианте осуществления изофлавоны представляют собой изофлавоны сои, полученные из сои, или введенные животному кормлением животного соей или соевыми экстрактами. В другом варианте осуществления изофлавоны представляют собой изофлавоны, замещенные одним или более лигнанами или куместанами, такими как пиноресинол, ларисиресинол, секоизоларицирезинол, матаиресинол, гидроксиматаиресинол, сирингаресинол, сезамин, энтеродиол, энтеролактон и куместрол.

Любое количество изофлавона, который регулирует экспрессию генов сиртуинов, вводят животным.

В предпочтительных вариантах осуществления один или более изофлавонов вводят животным в количестве от около 0,1 до около 10 г изофлавонов, предпочтительно от около 0,5 до около 7,5 г, более предпочтительно от около 1 до около 5 г.

В различных вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количестве от около 0,1 до около 10 г изофлавонов в день (г/день), предпочтительно от около 0,5 до около 7,5 г/день, более предпочтительно от около 1 до около 5 г/день.

В других вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количестве от около 0,001 до около 10 г изофлавонов на килограмм массы тела (г/кг/ массы тела), предпочтительно от около 0,05 до около 5 г/кг/массы тела, более предпочтительно от около 0,01 до около 1 г/кг/массы тела.

В других вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количестве от около 0,001 до около 10 г изофлавонов на килограмм массы тела в день (г/кг/массы тела/день), предпочтительно от около 0,05 до около 5 г/кг/массы тела/день, более предпочтительно от около 0,01 до около 1 г/кг/массы тела/день.

Другой объект изобретения относится к композициям, содержащим изофлавоны в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов. В другом варианте осуществления изобретение относится к композициям, содержащим изофлавоны в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и, тем самым, способным к одному или более из имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления старения в животном.

Композиции по изобретению могут быть введены животному в любой приемлемой форме с использованием любого подходящего пути введения. Например, композиции могут быть введены в пищевой композиции, в пищевой добавке, в фармацевтической композиции, в нутрицевтической композиции или в качестве лекарственного средства. Аналогично композиции могут быть введены с использованием различных путей введения, включая пероральный, интраназальный, внутривенный, внутримышечный, внутрижелудочный, транспилорический, подкожный, ректальный и тому подобное. Предпочтительно композиции вводят животному перорально. Наиболее предпочтительно композиции вводят перорально в организм животного в качестве пищевой добавки или в качестве ингредиента в пищевой композиции.

В предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению вводят животному в качестве ингредиента в пищевой композиции, подходящей для потребления животным, включая людей и домашних животных, таких как собаки и кошки. Такие пищевые композиции включают в себя полный набор продуктов, предназначенный для обеспечения необходимых требований, предъявляемых к пище, для животного или пищевых добавок, таких как лакомства.

В различных вариантах осуществления пищевые композиции, такие как пищевые композиции, предназначенные для домашних животных, или композиции лакомств, предназначенные для домашних животных, содержат от около 5% до около 50% сырого белка. Неочищенный белковый материал может содержать растительные белки, такие как соевая мука, соевый белковый концентрат, мука из кукурузной клейковины, пшеничная клейковина, хлопковое семя, арахисовая мука, или животные белки, такие как казеин, альбумин и мясной белок. Примеры мясного белка, применимые в данном документе, включают в себя говяжий, свиной, бараний, лошадиный, птицы, рыбы и их смеси.

Пищевые композиции могут дополнительно содержать от около 5% до около 40% жира. Примеры подходящих жиров включают в себя животные жиры и растительные жиры. Предпочтительно источник жира представляет собой источник животного жира, такого как сало или жир. Растительные масла, такие как кукурузное масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло, рапсовое масло, масло соевых бобов, оливковое масло и другие масла, богатые мононенасыщенными и полиненасыщенными жирными кислотами, также могут быть использованы.

Пищевые композиции могут дополнительно содержать от около 10% до около 60% углеводов. Примеры подходящих углеводов включают в себя зерна или зерновые, такие как рис, кукуруза, просо, сорго, люцерна, ячмень, соевые бобы, рапс, овес, пшеница, рожь, тритикале и их смеси. Композиции могут также необязательно содержать другие материалы, такие как сухая сыворотка и другие побочные продукты переработки молока.

Содержание влаги в таких пищевых композициях варьирует в зависимости от природы пищевой композиции. Пищевые композиции могут представлять собой сухие композиции (например, гранулы), полувлажные композиции, влажные композиции или любую их смесь. В предпочтительном варианте осуществления композиция представляет собой полный и сбалансированный корм для домашних животных. В данном варианте осуществления корм для домашних животных может представлять собой ′′влажный корм′′, ′′сухой корм′′ или ′′корм промежуточной влажности′′. Понятие ′′влажный корм′′ описывает корм, который обычно продается в банках или пакетах из фольги, и содержание влаги в нем обычно находится в диапазоне от около 70% до около 90%. Понятие ′′сухой корм′′ описывает корм, который имеет состав, аналогичный составу влажного корма, но содержит ограниченное количество влаги, которое обычно находится в диапазоне от около 5% до около 15% или 20% (как правило, в форме гранул или в похожих на небольшое печенье гранулах). В одном предпочтительном варианте осуществления содержание влаги в композициях составляет от около 5% до около 20%. Сухие пищевые продукты включают в себя разнообразные продукты различной влажности, так что они относительно стабильны при хранении и устойчивы к микробной или грибковой порче или загрязнению. Также предпочтительными являются сухие пищевые композиции, которые представляют собой экструдированные продукты питания, такие как корма для животных или закуски для человека или домашних животных.

Пищевые композиции могут также содержать один или более источников волокна. Понятие ′′волокно′′ включает в себя все источники ′′объема′′ в пище: усваиваемые или неусваиваемые, растворимые или нерастворимые, ферментируемые или неферментируемые. Предпочтительные волокна происходят из растительных источников, таких как морские растения, но также могут быть использованы микробные источники волокна. Могут быть использованы различные растворимые или нерастворимые волокна, как должно быть известно специалистам в данной области. Источником волокна может являться мякоть свеклы (из сахарной свеклы), гуммиарабик, камедь Talha, подорожник, рисовые отруби, камедь из бобов рожкового дерева, мякоть цитрусовых, пектин, фруктоолигосахарид, короткоцепочечная олигофруктоза, маннанолигофруктоза, соевое волокно, арабиногалактан, галактоолигосахарид, арабиноксилан или их смеси.

Альтернативно источник волокна может представлять собой ферментируемое волокно. Ранее было описано, что ферментируемое волокно приносит пользу для иммунной системы домашнего животного. Ферментируемое волокно или другие композиции, известные специалистам в данной области, которые обеспечивают пребиотик для усиления роста пробиотиков в кишечнике, также могут быть включены в композицию, чтобы увеличить преимущества, обеспечиваемые изобретением для иммунной системы животного.

В некоторых вариантах осуществления содержание золы в пищевой композиции находится в диапазоне от менее чем 1% до около 15%, предпочтительно от около 5% до около 10%.

В предпочтительном варианте осуществления композиция представляет собой пищевую композицию, содержащую от около 15% до около 50% белка, от около 5% до около 40% жира, от около 5% до около 10% золы, и имеющую содержание влаги от около 5% до около 20%. В других вариантах осуществления пищевая композиция дополнительно содержит пребиотики или пробиотики, как описано в данном документе.

При введении в пищевой композиции количество изофлавонов в виде процента от композиции составляет от около 0,1 до около 40% пищевой композиции, предпочтительно от около 3 до около 30%, более предпочтительно от около 5 до около 20%. В различных вариантах осуществления пищевые композиции содержат около 1%, 2%, 4%, 6%, 8%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38% или 40%.

В другом варианте осуществления композиции вводят животному с пищевой добавкой. Пищевая добавка может иметь любую подходящую форму, такую как соус, питьевая вода, напиток, йогурт, порошок, гранула, паста, суспензия, жвачка, лакомство, закуска, шарик, пилюля, капсула, таблетка, пакетик или любую другую подходящую форму поставки. Пищевая добавка может содержать композиции и необязательные соединения, такие как витамины, консерванты, пробиотики, пребиотики и антиоксиданты. Это позволяет вводить добавку животным в небольших количествах или, в качестве альтернативы, добавка может быть разбавлена перед введением животному. Может потребоваться смешивание пищевой добавки с пищевой композицией или с водой или другим разбавителем перед введением животному. При введении в качестве пищевой добавки композиции содержат от около 0,1 до около 90% добавки, предпочтительно от около 3 до около 70%, более предпочтительно от около 5 до около 60%.

В другом варианте осуществления композиции вводят животному в виде фармацевтической или нутрицевтической композиции. Фармацевтическая композиция содержит композиции по изобретению и один или более фармацевтически или нутрицевтически приемлемые носитель, разбавитель или наполнитель. Как правило, фармацевтические композиции получают смешиванием соединения или композиции с наполнителями, буферами, связующими веществами, пластификаторами, красителями, разбавителями, сжимающими агентами, смазывающими веществами, ароматизаторами, увлажняющими агентами и тому подобное, включая другие ингредиенты, о которых специалистам в данной области известно, что они применяются для производства фармацевтических препаратов и разработки композиций, подходящих для введения животному в качестве фармацевтических препаратов. При введении в фармацевтической или нутрицевтической композиции композиции содержат от около 0,1 до около 90% от композиции по изобретению, предпочтительно от около 3 до около 70%, более предпочтительно от около 5 до около 60%.

Композиции по изобретению можно вводить животному по мере необходимости, по мере возникновения потребности или на регулярной основе. Целью введения на регулярной основе является обеспечение животного регулярной и совместимой дозой композиции или прямыми или побочными метаболитами, которые появляются в результате такого потребления. Такое регулярное и совместимое дозирование будет обеспечивать поддерживание постоянных концентраций композиций и их прямых или побочных метаболитов в крови. Таким образом, введение на регулярной основе может иметь место один раз в месяц, один раз в неделю, один раз в день или более чем один раз в день. Кроме того, введение может иметь место через день, через неделю или через месяц, каждый третий день, каждую третью неделю или каждый третий месяц, каждый четвертый день, каждую четвертую неделю или каждый четвертый месяц и тому подобное. Введение может иметь место несколько раз в день. При использовании в качестве добавки к обычной необходимой пище композиции можно вводить непосредственно животному, например, перорально или иным образом. Композиции можно альтернативно вводить в контакте с или в смеси с ежедневным кормом или пищей, включая жидкость, такую как питьевая вода, или основа для внутривенного вливания для животного, получающего такое лечение. Введение может быть также выполнено как часть режима питания для животного. Например, режим питания может содержать регулярное потребление животным композиций в количестве, эффективном для осуществления способов по изобретению.

В соответствии со способами по изобретению введение композиций, включая введение как часть режима питания, может осуществляться в период времени, начинающийся от рождения животного и охватывающий всю его взрослую жизнь. В различных вариантах осуществления животное представляет собой человека или домашнее животное, такое как собака или кошка. В некоторых вариантах осуществления животное представляет собой молодое или растущее животное. В более предпочтительных вариантах осуществления животное представляет собой стареющее животное. В других вариантах осуществления введение начинается, например, на регулярной или расширенной регулярной основе, когда животное достигает более чем около 30%, 40%, или 50% от прогнозируемой или ожидаемой продолжительности жизни. В некоторых вариантах осуществления животное достигло 40, 45 или 50% от его ожидаемой продолжительности жизни. В других вариантах осуществления животное старше, достигнув 60, 66, 70, 75 или 80% от его вероятной продолжительности жизни. Определение продолжительности жизни может быть основано на актуарных таблицах, расчетах, оценках и т.п. и может рассматривать прошлые, настоящие и будущие влияния или факторы, о которых известно, что они положительно или отрицательно влияют на продолжительность жизни. Рассмотрение вида, пола, размера, генетических факторов, факторов окружающей среды и факторов стресса, состояния здоровья в настоящем и прошлом, состояния питания в настоящем и прошлом, факторов стресса и т.п. может также повлиять или быть принято во внимание при определении продолжительности жизни.

Композиции по изобретению вводят в организм животного в течение времени, необходимого для выполнения одной или более целей изобретения, например регулирования экспрессии генов сиртуинов; имитации ограничения калорийности; профилактики и лечения болезни Альцгеймера; увеличения продолжительности жизни; замедления старения в животном; улучшения качества жизни, а также содействия здоровью и хорошему самочувствию у животного. Предпочтительно, композиции вводят животному на регулярной основе.

Другой объект изобретения относится к терапевтическим композициям, содержащим композиции по изобретению в терапевтически эффективном количестве для - одного или более - из регулирования экспрессии генов сиртуинов; имитации ограничения калорийности; профилактики и лечения болезни Альцгеймера; увеличения продолжительности жизни; замедления старения в животном; улучшения качества жизни, а также содействия здоровью и хорошему самочувствию у животного. Терапевтические композиции содержат композиции по изобретению в количествах, достаточных для введения композиций по изобретению животному в количествах от около 0,005 до около 1000 мг/кг/день, предпочтительно от около 0,01 до около 500 мг/кг/день, наиболее предпочтительно от около 0,05 до около 250 мг/кг/день, когда композиции вводят, как ожидалось или рекомендовано для конкретной композиции. Как правило, композиции по изобретению содержат от около 1 до около 90% от терапевтической композиции, предпочтительно от около 3 до около 70%, более предпочтительно от около 5 до около 60%. В некоторых вариантах осуществления композиции по изобретению содержат более 90% от терапевтической композиции.

В различных вариантах осуществления композиции дополнительно содержат одно или более веществ, таких как витамины, минералы, пробиотики, пребиотики, соли, и функциональные добавки, такие как вкусовые вещества, красители, эмульгаторы и антимикробные или другие консерванты. Микроэлементы, которые могут быть применимы в таких композициях, включают в себя, например, кальций, фосфор, калий, натрий, железо, хлор, бор, медь, цинк, магний, марганец, йод, селен и тому подобное. Примеры дополнительных витаминов, применимых в данном документе, включают в себя такие жирорастворимые витамины как A, D, Е и К. Инулин, аминокислоты, ферменты, коферменты и тому подобное могут быть применимы для включения в различные варианты осуществления.

В различных вариантах осуществления композиции содержат по меньшей мере один из (1) одного или более пробиотиков; (2) одного или более инактивированных пробиотиков; (3) одного или более компонентов инактивированных пробиотиков, которые приносят пользу для здоровья аналогичным или таким же образом, как пробиотики, например белков, липидов, гликопротеинов и тому подобное; (4) одного или более пребиотиков; и (5) их комбинаций. Пробиотики или их компоненты могут быть включены в композиции, содержащие такие композиции (например, равномерно или неравномерно распределены в таких композициях), или нанесены на композиции, содержащие такие композиции (например, нанесены на поверхность с использованием носителя или без него). Такие способы известны специалистам в данной области, например US 5968569 и родственные патенты.

Типичные пробиотики включают, но не ограничиваются ими, пробиотические штаммы, выбранные из лактобацилл, бифидобактерий или энтерококков, например Lactobacillus reuteii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus animalis, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus fermentum, и Bifidobacterium sp., Enterococcus faecium and Enterococcus sp. В некоторых вариантах осуществления пробиотический штамм выбраны из группы, состоящей из Lactobacillus reuteri (NCC2581; CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri (NCC2592; CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus (NCC2583; CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri (NCC2603; CNCM I-2451), Lactobacillus reuteri (NCC2613; CNCM I-2452), Lactobacillus acidophilus (NCC2628; CNCM I-2453), Bifidobacterium adolescentis (e.g., NCC2627), Bifidobacterium sp. NCC2657 или Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Композиции, содержащие композиции по изобретению, содержат пробиотики в количестве, достаточном для обеспечения от около 10⁴ до около 10¹² КОЕ (колониеобразующих единиц)/животное/день, предпочтительно от 10⁵ до около 10¹¹ КОЕ/животное/день, наиболее предпочтительно от 10⁷ до 10¹⁰ КОЕ/животное/день. Когда пробиотики погибают или инактивированы, количество убитых или инактивированных пробиотиков или их компонентов должны производить аналогичный положительный эффект, что и живые микроорганизмы. Многие такие пробиотики и их преимущества известны специалистам в данной области, например ЕР 1213970 В1, ЕР 1143806 В1, US 7189390, ЕР 1482811 В1, ЕР 1296565 В1 и US 6929793. В предпочтительном варианте осуществления пробиотик представляет собой Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). В одном варианте осуществления пробиотики инкапсулируют в носителе с использованием способов и материалов, известных специалистам в данной области.

Как указано выше, композиции могут содержать один или более пребиотиков, например фруктоолигосахариды, глюкоолигосахариды, галактоолигосахариды, изомальтоолигосахариды, ксилоолигосахариды, олигосахариды сои, лактосахарозу, лактулозу и изомальтулозу. В одном варианте осуществления пребиотик представляет собой корень цикория, экстракт корня цикория, инулин или их комбинации. Как правило, пребиотики вводят в количествах, достаточных для того, чтобы положительно стимулировать здоровую микрофлору в кишечнике и вызвать размножение таких ′′хороших′′ бактерий. Типичные количества составляют от около одного до около 10 г на порцию или от около 5% до около 40% рекомендуемой суточной дозы волокон для животного. Пробиотики и пребиотики могут быть сделаны частью композиции любым подходящим способом. Как правило, агенты смешивают с композицией или наносят на поверхность композиции, например, разбрызгиванием или распылением. Когда агенты являются частью набора, такие агенты могут быть смешаны с другими материалами или находиться в собственной упаковке. Как правило, пищевая композиция содержит от около 0,1 до около 10% пребиотика, предпочтительно от около 0,3 до около 7%, наиболее предпочтительно от около 0,5 до 5% в пересчете на сухое вещество. Пребиотики могут быть включены в композиции с использованием способов, известных специалистам в данной области, например US 5952033.

Специалист в данной области может определить соответствующее количество композиций, пищевых ингредиентов, витаминов, минералов, пробиотиков, пребиотиков, антиоксидантов или других компонентов, которые должны быть использованы для производства конкретной композиции для введения конкретному животному. Такой специалист может учитывать вид животного, возраст, размер, вес, здоровье и т.п. при определении того, как лучше всего составить конкретную композицию и другие ингредиенты. Другие факторы, которые могут быть рассмотрены, включают в себя тип композиции (например, пищевая композиция корма по сравнению с пищевой добавкой), желаемую дозу каждого компонента, средний расход конкретных типов композиций различными животными (например, на основе вида, массы тела, активности/потребностей в энергии и т.п.), а также требования по изготовлению, предъявляемые к композиции.

Еще один объект изобретения относится к наборам, подходящим для введения изофлавонов животным. Наборы содержат в отдельных контейнерах в едином комплекте или в отдельных контейнерах, образующих виртуальный комплект, надлежащим для компонента набора образом, изофлавоны и один или более из (1) одного или более ингредиентов, пригодных для потребления животным; (2) инструкций о том, как объединить изофлавоны и другие компоненты набора для получения композиции, применимой для регулирования экспрессии генов сиртуинов, имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления старения; (3) инструкций о том, как применять изофлавоны для регулирования экспрессии генов сиртуинов; (4) инструкций о том, как применять изофлавоны для имитации ограничения калорийности; (5) инструкций о том, как применять изофлавоны для предупреждения и лечения болезни Альцгеймера; (6) инструкций о том, как применять изофлавоны для увеличения продолжительности жизни; (7) инструкций о том, как применять изофлавоны для замедления старения; (8) одного или более пробиотиков; 9) одного или более инактивированных пробиотиков; (10) одного или более компонентов из инактивированных пробиотиков, которые приносят пользу для здоровья аналогичным или таким же образом, как пробиотики; (11) одного или более пребиотиков; (12) устройства для приготовления или объединения компонентов набора для получения композиции, подходящей для введения в организм животного, и (13) устройства для введения объединенных или подготовленных компонентов набора животному. В одном варианте осуществления набор содержит композицию в пакетике.

Когда набор содержит виртуальный комплект, данный набор сводится к инструкциям в виртуальной среде в комбинации с одним или более физическими компонентами набора. Набор содержит изофлавоны и другие компоненты в количестве, достаточном для регулирования экспрессии генов сиртуина, имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни и замедления процесса старения. Как правило, изофлавоны и другие подходящие компоненты набора смешивают непосредственно перед потреблением животным. Наборы могут содержать компоненты набора в любой из различных комбинаций и/или смесей. В одном варианте осуществления набор содержит пакет, содержащий изофлавоны и контейнер пищи для потребления животным. Набор может содержать дополнительные элементы, такие как устройство для смешивания изофлавонов и ингредиентов или устройство, в котором можно содержать смесь, например кормушку. В другом варианте осуществления изофлавоны смешивают с дополнительными питательными добавками, такими как витамины и минералы, которые способствуют хорошему здоровью у животного. Каждый из компонентов предоставляется в отдельном контейнере в единой упаковке или в смеси различных компонентов в разных пакетах. В предпочтительных вариантах осуществления данные наборы содержат изофлавоны и один или более других ингредиентов, подходящих для потребления животным. Предпочтительно такие наборы содержат инструкции, описывающие, как объединить изофлавоны с другими ингредиентами с образованием пищевой композиции для потребления животным, обычно смешиванием изофлавонов с другими ингредиентами или с применением изофлавонов к другим ингредиентам, например опрыскиванием изофлавонам пищевой композиции.

Еще один объект изобретения относится к средству сообщения информации о или инструкций для одного или более из (1) использования изофлавонов для регулирования экспрессии генов сиртуинов, (2) использования изофлавонов для имитации ограничения калорийности, (3) использования изофлавонов для профилактики и лечения болезни Альцгеймера, (4) использования изофлавонов для увеличения продолжительности жизни, (5) использования изофлавонов для замедления старения, (6) использования изофлавонов для содействия здоровому старению; (7) контактной информации для потребителей для использования в случае, если у них имеется вопрос, касающийся способов и композиций по изобретению; (8) пищевой информации о изофлавонах; причем данное средство содержит одно или более из физического или электронного документа, цифрового запоминающего устройства, оптического запоминающего устройства, аудиопрезентации, аудиовизуального дисплея или визуального дисплея, содержащего информацию или инструкции. Средство коммуникации применимо для инструктирования относительно преимуществ использования изобретения и передачи одобренных способов введения изофлавонов и пищевых композиций, содержащих изофлавоны, в организм животного. Данное средство содержит один или более из физического или электронного документа, цифрового запоминающего устройства, оптического запоминающего устройства, аудиопрезентации, аудиовизуального дисплея или визуального дисплея, содержащего информацию или инструкции. Предпочтительно данное средство выбрано из группы, состоящей из отображаемого интернет-сайта, визуального дисплейного киоска, брошюры, этикетки, листка-вкладыша, рекламы, раздаточного материала, публичного заявления, аудиозаписи, видеозаписи, DVD, CD-ROM, считываемого компьютером чипа, считываемой компьютером карты, считываемого компьютером диска, устройства USB, устройства Fire Wire, памяти компьютера и любой их комбинации.

Другой объект изобретения относится к способам изготовления пищевой композиции, содержащей изофлавоны и один или более других ингредиентов, подходящих для потребления животным, например один или более из белков, жиров, углеводов, волокна, витаминов, минералов, пробиотиков, пребиотиков и тому подобного. Данные способы содержат смешивание одного или более ингредиентов, подходящих для потребления животным с изофлавонами. Альтернативно данные способы содержат применение изофлавонов отдельно или в сочетании или в комбинации с другими ингредиентами на пищевой композиции, например, в виде покрытия или топпинга. Изофлавоны могут быть добавлены в любое время в процессе изготовления и/или обработки пищевой композиции. Композиция может быть изготовлена любым способом, подходящим в данной области.

Другой объект изобретения относится к упаковке, применяемой для содержания изофлавонов или любой композиции по изобретению. Данная упаковка содержит по меньшей мере один материал, подходящий для содержания изофлавонов или любой композиции по изобретению, и этикетку, прикрепленную к материалу, содержащую слово или слова, рисунок, дизайн, сокращение, лозунг, фразу или другое устройство или их комбинацию, которая указывает, что данная упаковка содержит изофлавоны или любые композиции по изобретению с полезными свойствами, касающимися регулирования экспрессии генов сиртуинов, имитации ограничения калорийности, профилактики и лечения болезни Альцгеймера, увеличения продолжительности жизни, замедления старения, а также содействия здоровому старению. Как правило, такое устройство содержит слова ′′содействие здоровому старению′′, ′′поддержка старения′′, ′′поддержка старшего поколения′′ или эквивалентное выражение, напечатанное на материале. Любая форма упаковки и упаковочный материал, подходящие для содержания изофлавонов или любой композиции по изобретению, применяются в изобретении, например мешок, коробка, бутылка, банка, чехол и тому подобное, изготовленные из бумаги, пластика, фольги, металла и тому подобное. В предпочтительных вариантах осуществления данная упаковка дополнительно содержит изофлавоны или любые композиции по изобретению. В различных вариантах осуществления упаковка содержит по меньшей мере одно окошко, которое позволяет рассматривать содержимое упаковки без вскрытия упаковки. В некоторых вариантах осуществления окошко представляет собой прозрачный участок упаковочного материала. В других вариантах осуществления окошко представляет собой отсутствующий участок упаковочного материала. В предпочтительном варианте осуществления упаковка содержит пищевую композицию, приспособленную для конкретного животного, такого как человек, собака, кошка, или, как указано в соответствующих случаях на этикетке, предпочтительно пищевую композицию для кормления домашнего животного, предназначенную для собак или кошек. В предпочтительном варианте осуществления упаковка может представлять собой банку или мешочек, содержащий кормовую композицию по изобретению.

Другой объект изобретения относится к применению изофлавонов для приготовления лекарственного средства для одного или более из регулирования экспрессии генов сиртуинов; имитации ограничения калорийности; профилактики и лечения болезни Альцгеймера; увеличения продолжительности жизни; замедления старения у животного; улучшения качества жизни, а также содействия здоровью и хорошему самочувствию у животного. Как правило, лекарственные средства приготовляют смешиванием соединения или композиции, т.е. изофлавонов или композиции, содержащей изофлавоны, с наполнителями, буферами, связующими веществами, пластификаторами, красителями, разбавителями, сжимающими агентами, смазывающими веществами, ароматизаторами, увлажняющими агентами и другими ингредиентами, о которых специалистам в данной области известно, что они применяются для получения лекарственных средств и составления лекарственных средств, которые являются подходящими для введения животному.

Другой объект изобретения относится к способам регулирования экспрессии сиртуинов животными. Данные способы содержат введение одного или более изофлавонов животным в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии сиртуинов.

Во всех способах по изобретению изофлавоны вводят в терапевтически эффективном количестве. В предпочтительных вариантах осуществления один или более изофлавонов вводят животным в количествах от около 0,1 до около 10 г изофлавонов, предпочтительно от около 0,5 до около 7,5 г, более предпочтительно от около 1 до около 5 г. В различных вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количествах от около 0,1 до около 10 г изофлавонов в день (г/день), предпочтительно от около 0,5 до около 7,5 г/день, более предпочтительно от около 1 до около 5 г/день. В других вариантах осуществления изофлавоны вводят животным в количествах от около 0,001 до около 10 г изофлавонов на килограмм массы тела (мкг/кг/массы тела), предпочтительно от около 0,05 до около 5 г/кг/массы тела, более предпочтительно от около 0,01 до около 1 г/кг/массы тела. Изофлавоны вводят с использованием любого подходящего способа, предпочтительно перорально. В одном варианте осуществления изофлавоны вводят как часть пищевой композиции, например интегрированными в или нанесенными на пищевую композицию. Будучи интегрированными в пищевых композициях, изофлавоны, как правило, присущи ингредиентам, используемым для получения пищевой композиции, например изофлавоны в сое. В других вариантах осуществления изофлавоны вводят как часть пищевой добавки, например, в виде таблеток или капсул.

ПРИМЕРЫ

Изобретение может быть далее проиллюстрировано следующими примерами, однако следует понимать, что данные примеры включены только в целях иллюстрации и не предназначены для ограничения объема изобретения, если специально не указано иное.

Пример 1

Материалы и методы

Обработка: Терминально дифференцированные собачьи адипоциты подвергали воздействию 200, 25 и 0 мкМ эквола (Equol) в течение 24 ч. Клетки собирали для выделения РНК.

Выделение РНК: Образцы обработанных клеток встряхивали и гомогенизировали с использованием колонки Quiashredder (Qiagen, Valencia, СА) в соответствии с инструкциями производителя. Гомогенизированный лизат собирали и добавляли к нему один равный объем 64% этанола. Данную смесь затем наносили на фильтрационный картридж RNAqueous™ filter cartridge (Ambion Inc., Austin, TX), 700 мкл за один раз, и центрифугировали в течение одной минуты при 10000 оборотов в минуту. Картридж промывали 700 мкл промывочного раствора # 1 и 500 мкл промывочного раствора # 2/3 с центрифугированием при 10000 оборотов в минуту в течение одной минуты для каждой промывки. Фильтрационный картридж сушили центрифугированием (10000 оборотов в минуту) в течение одной минуты. РНК элюировали три раза центрифугированием (как указано выше) с использованием 30 мкл аликвот 70-80°C элюционного раствора.

Полученную РНК обрабатывали ДНКазой и количественно определяли в спектрофотометре Beckman DU 640 В (Beckman Coulter, Inc, Brea, CA) при длине волны 260 нм. Кроме того, количество и качество были оценены с использованием биоанализатора (Agilent, Santa Clara, СА) в соответствии с инструкциями производителя.

Количественная ПЦР: Эксперименты были проведены с каждым образцом в индивидуальном порядке против каждого набора праймер/зонд для определения, какая(ие) стандартная(ые) кривая(ые) должна(ы) быть использована(ы). Стандартные кривые получали с использованием серийных разведений РНК из экспериментальных образцов с наименьшим значением СТ (порогового цикла) для данной мишени. 1-2 образцы подвергали повторно обратной транскрипции и использовали серийное разведение 1:5 в качестве стандартной кривой для данной цели. Эксперименты с мишенями включали в себя сиртуин-1, -2, -3 и -6. Значения нормировали до уровней циклофилина А (пептидил-пролил изомераза A (PPIA)), как это определено количественной ПЦР. Индукции рассчитывали из каждого из самого низкого нормированного значения образца. С каждым набором проводили эксперимент с n=3. Результаты показаны в таблице 1.

Таблица 1 Экспрессия генов сиртуина в собачьих адипоцитах, обработанных 0, 25 или 200 мкм эквола   0 25 200 SIRT1 1.20 1.17 1.80 SIRT2 1.29 1.22 2.37 SIRT3 11.16 10.86 17.21 SIRT6 1.21 1.10 1.23

Значения представляют относительную экспрессию

Как представлено в таблице 1, результаты показывают, что экспрессия генов увеличивается для SIRT1, SIRT2 и SIRT3.

В описании были раскрыты типичные предпочтительные варианты осуществления изобретения. Хотя используются конкретные понятия, они применяются только в общем и описательном смысле, а не в целях ограничения. Объем изобретения изложен в формуле изобретения. Очевидно, что многие модификации и варианты изобретения возможны в свете вышеизложенных принципов. Поэтому следует понимать, что в объеме прилагаемой формулы изобретения настоящее изобретение может быть осуществлено иначе, чем, в особенности, описано.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, в частности к способам, применимым для регулирования экспрессии генов сиртуинов и имитации ограничения калорийности. Данные способы предусматривают введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и тем самым имитируя ограничения калорийности. Экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT1, SIRT2 или SIRT3, и где один или более изофлавонов представляют собой эквол или изофлавон, который метаболизируется в эквол. Использование эквола позволяет повысить экспрессию сирутинов. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

1. Способ регулирования экспрессии генов сиртуинов у животного, включающий введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве, где экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT1, SIRT2 или SIRT3 и где один или более изофлавонов представляют собой эквол или изофлавон, который метаболизируется в эквол.

2. Способ по п. 1, в котором экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT2 или SIRT3.

3. Способ по п. 1, в котором изофлавоны выбраны из группы, состоящей из изофлавонов в форме агликонов, глюкозидов, ацетилглюкозидов и малонилглюкозидов.

4. Способ по п. 1, в котором изофлавоны выбраны из группы, состоящей из даидзеина, даидзина, и эквола.

5. Способ по п. 1, в котором изофлавоны вводят в количестве от около 0,001 до около 10 г/кг/день.

6. Способ по п. 1, в котором изофлавоны вводят животному в качестве пищевой добавки или пищевой композиции.

7. Способ по п. 6, в котором изофлавоны вводят в пищевую композицию и содержание изофлавонов составляет от около 0,001 до около 40% пищевой композиции.

8. Способ по п. 1, в котором животное представляет собой человека или домашнее животное.

9. Способ имитации ограничения калорийности у животного, включающий введение одного или более изофлавонов животному в терапевтически эффективном количестве для регулирования экспрессии генов сиртуинов и тем самым имитируя ограничения калорийности, где экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT1, SIRT2 или SIRT3 и где один или более изофлавонов представляют собой эквол или изофлавон, который метаболизируется в эквол.

10. Способ по п. 9, в котором экспрессируемый ген сиртуина представляет собой по меньшей мере один из SIRT2 или SIRT3.

11. Способ по п. 9, в котором изофлавоны выбраны из группы, состоящей из изофлавонов в форме агликонов, глюкозидов, ацетилглюкозидов и малонилглюкозидов.

12. Способ по п. 9, в котором изофлавоны выбраны из группы, состоящей из даидзеина, даидзина и эквола.

13. Способ по п. 9, в котором изофлавоны вводят в количестве от около 0,001 до около 10 г/кг/день.

14. Способ по п. 9, в котором изофлавоны вводят в виде пищевой добавки или пищевой композиции.

15. Способ по п. 14, в котором изофлавоны вводят в пищевой композиции и содержание изофлавонов составляет от около 0,001 до около 40% пищевой композиции.

16. Способ по п. 9, в котором животное представляет собой человека или домашнее животное.