ХЕЛАТНЫЙ ЦИС-S,S-КОМПЛЕКС ДИХЛОРДИ-1,6-(3,5-ДИМЕТИЛИЗОКСАЗОЛ-4-ИЛ)-2,5-ДИТИАГЕКСАН ПАЛЛАДИЯ(II), ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2017 года по МПК C07F15/00 A61K31/555 A61K31/422 

Предлагаемое изобретение относится к органической химии и медицине, в частности к новому химическому соединению, проявляющему гепатопротекторную активность.

Известны серосодежащие фармакологические композиции на основе окисленного глутатиона GSSG с производными пуриновых оснований, проявляющие гепатопротекторную активность [Патент РФ №2178710, 2002 г.]. Для получения гепатопротекторного агента необходимо использование труднодоступных и дорогостоящих исходных реагентов.

Известен синтетический гепатопротектоный препарат диизопропил 1,3-дитиол-2-илиденмалонат (Малотилат, синонимы: Максималон, Кантек, Трактал), синтез и клинические испытания которого впервые были проведены в Японии [Borole, K.D. Preventive effect of malotilate on ethanol induced hepatic disfunction in rats / K.D. Borole, S.L. Bodhankar // Int. J. Pharm. Bio. Sci. - 2014. - V. 5. - №1. - P. 151-157]. В экспериментах на животных данный препарат нормализует морфологические и биохимические процессы в гепатоцитах при их повреждении четыреххлористым углеродом (тетрахлорметаном). Малотилат способствует коррекции процессов биосинтеза и транспорта м-РНК и т-РНК, включению 14 С-лейцина в белки микросом и цитозоля печени в условиях токсического поражения. Получение известного гепатопротекторного препарата базируется на многостадийном синтезе.

В качестве прототипа и препарата сравнения взят эталонный серосодержащий гепатопротекторный препарат S-аденозилметионин - «гептрал», содержащий в молекуле фуранозный цикл, аза-гетероцикл, координированный фрагмент со связью CH₃-S и аминокислотную группу, фармакологическая активность которого описана в многочисленных источниках [Справочник Машковского. Лекарственные средства [Электронный ресурс] - Режим доступа http://mashkovsky.ru/tiki-index.php?page=Адеметионин: Ю.А. Кучерявый, С.В. Морозов. Гепатопротекторы: рациональные аспекты применения: учеб. пособие для врачей. М.: Форте Принт, 2012. - 36 с.; N.A Osna. Hepatoprotective effects of S-adenosyl-L-methionine against alcohol- and cytochrome P450 2E1-induced liver injury. World J. Gastroenterol. 2010, 16(11), P. 1366-1376].

Синтез указанного препарата многостадиен и базируется на биотехнологическом способе получения.

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих гепатопротекторной активностью.

Технический результат - получение практически нетоксичного биологически активного нового химического вещества, обладающего гепатопротекторной активностью.

Сущность изобретения: хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1):

,

проявляющий гепатопротекторную активность.

Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.

Заявляемое соединение синтезируют взаимодействием 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана с хлоридом палладия в среде ацетонитрила при мольном соотношении 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этан: хлорид палладия, равном 1:1, при температуре 15-25°C, предпочтительно 20°C, и атмосферном давлении в течение 2-4 ч, предпочтительно 3 ч. Повышение температуры реакции выше 25°C (например, 60°C) или понижение температуры ниже 15°C (например, 0°C) увеличивают энергозатраты и не приводят к существенному увеличению выхода хелатного цис-S,S-комплекса дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II). Бидентантный реагент 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этан синтезирован по методике [В.Р. Ахметова, Н.С. Ахмадиев, Е.С. Мещерякова, Л.М. Халилов, А.Г. Ибрагимов. Многокомпонентный синтез и биологическая активность (сульфанилалкил)-замещенных азагетероциклов. ХГС, 2014. №5. С. 806-815].

Пример 1

Синтез заявляемого соединения

В стеклянном сосуде при перемешивании и температуре 60°C растворяют 0.2492 г (1.405 ммоль) хлорида палладия(II) в 15 мл ацетонитрила, прибавляют 0.4392 г (1.405 ммоль) 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана и перемешивают при комнатной температуре (~20°C) в течение 3 ч. Образовавшийся ярко-желтый осадок фильтруют через бумажный фильтр (синяя лента), промывают ацетонитрилом, водой, высушивают без нагревания на воздухе и получают 0.3705 г (54%) цис-S,S-комплекса дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) (1). Реакция протекает по схеме:

Хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1) образуется только с участием бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана и хлорида палладия, взятых в мольном соотношении 1:1.

Другие примеры синтеза заявляемого соединения приведены в таблице 1.

Спектральные характеристики соединения формулы (1).

Хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II)

Порошок желтого цвета.

ИК-спектр (v, см^-1): 334 с.(v Pd-Cl), 307 ср. (v Pd-S).

Спектр ЯМР ¹Н (δ, м.д., J, Гц): 2.26 (с, 6Н, 2 СН₃ (13,23); 2.43 (с, 6Н, 2 СН₃ (6,22)); 2.93 и 3.51 (д, 4Н^{а и е}, J=14.0, 2 СН₂ (9,10)); 4.18 и 4.47 (д, 4Н^{а и е}, J=8.6, 2 СН₂ (7,14));

Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 10.34 (С-13,23); 11.49 (С-6,22); 29.74 (С-9,10); 37.50 (С-7,14); 107.77 (С-4,15); 159.61 (С-3,16); 168.92 (С-5,19).

Масс-спектр, m/z: 512.2637 [M+Na]⁺. Найдено (%):С, 34.07; Н, 3.84; Cl, 15.10; N, 5.82; Pd, 22.47, S, 13.10. PdCl₂C₁₄H₂₀N₂O₂S₂. М_теор=489.7783. Вычислено (%): С, 34.33; Н, 4.12; Cl, 14.48; N, 5.72; Pd, 21.73, S, 13.09.

Пример 2

Оценка токсичности заявляемого соединения

Острую токсичность определяли при внутрибрюшинном (в/б) введении интактным мышам по методу Litchfield J. и Wilcoxon F. в модификации Прозоровского В.Б. [Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности // Фармакология, токсикология. 1962. №1. С. 115-119] в Башкирском государственном медицинском университете.

Выживаемость животных наблюдали в течение 14 суток. Результаты приведены в таблице 2.

По результатам сравнительной оценки определения острой токсичности у белых мышей при внутрибрюшинном и пероральном введении установлено, что соединение общей формулы (1) относятся к группе практически нетоксичных соединений по классификации К.К. Сидорова (1001-3000 мг/кг) [Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения // Токсичность новых промышленных химических веществ. 1973. №13. С. 47-51]. При пероральном введении значение ЛД₅₀ не имеет существенных отличий от таковых при внутрибрюшинном введении.

Пример 3

Оценка гепатопротекторной активности заявляемого соединения на модели острого гепатита

Скрининговые исследования гепатопротекторной активности проводили in vivo на модели острой интоксикации CCl₄ по 0.2 мл/кг введенной однократно в/б в виде 50% раствора в оливковом масле. За час до CCl₄ в/б вводили испытуемые соединения в дозе 25 мг/кг. Препаратом сравнения служил фармакологически известный гепатопротекторный препарат - гептрал (S-аденозилметионин) 25 мг/кг, интактная группа получала 0.2 мл физраствора (таблица 3).

Соединение формулы (1) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно оказывает выраженное антитоксическое действие на модели острой интоксикации CCl₄, что проявляется в достоверном снижении летальности с 50% до 0% в отношении контрольных (нелеченых) животных.

Для контроля развития цитолитического синдрома и степени поражения печени проводились биохимические пробы сыворотки крови на фоне острого гепатита CCl₄ на десятый день наблюдения.

Свидетельством токсического поражения печени и развития цитолитического синдрома (маркеры заболевания печени) является не только повышение активности ферментов цитолиза в сыворотке крови, но и преобладание уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) к аспартатаминотрансферазе (ACT). Введение соединения формулы (1) в дозе 25 мг/кг на 70% достоверно снижало (р<0.05) уровень АЛТ (в сравнении с нелеченой группой животных). Группа, получавшая препарат сравнения гептрал в той же дозе, лишь на 53% (р<0.05) (таблица 4).

Достоверного снижения ACT в группах контрольных и леченых животных не было. Во всех группах с острым гепатитом к десятому дню наблюдений было повышение уровня прямого билирубина, по сравнению с данными показателей интактной группы животных.

Пример 4

Оценка гистологических исследований

Окраска гематоксилином, эозином, по общепринятым методикам на гистологическом комплексе MICROM («Карл Цейс», Германия). Определен индекс гистологической активности (ИГА). Система оценки показателей белковой дистрофии, воспалительной инфильтрации, гиалиново-капельной дистрофии - 4-балльная.

Введение CCl₄ белым мышам без лечения привело к грубым структурным изменениям в виде крупнокапельной дистрофии гепатоцитов, лимфогистиоцитарной инфильтрации, нарушениям структур печени.

Предварительное введение испытуемых соединений и гептрала в дозе 25 мг/кг привело к меньшей выраженности изменений морфологических структур печени: уменьшению воспалительной инфильтрации, некрозов гепатоцитов, снижению степени дистрофии гепатоцитов.

Полуколичественный метод оценки степени активности патологических процессов в печени показывает:

1) достоверное снижение ИГА по сравнению с данными контрольных животных наблюдается на фоне терапии соединением общей формулы (1);

2) степень жировой дистрофии печени у белых мышей, леченных соединением формулы (1), минимальна: гепатоциты с жировыми включениями находятся только на периферии печеночной дольки.

Таким образом, получено новое практически нетоксичное (IV класс) соединение хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1), обладающее гепатопротекторной активностью у лабораторных животных (белых мышей) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно на модели острого гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом. Соединение, содержащее палладий, не уступает препарату сравнения гептралу (S-аденозилметионин) по показателям:

а) выживаемости животных (100%, гептрал - 80%);

б) биохимическим (АЛТ, ACT, прямой билирубин);

в) гистологическим (поражения паренхимы печени минимальны).

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к хелатному цис-S,S-комплексу дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1):

Данное соединение проявляет гепатопротекторную активность и может использоваться в качестве биологически активных веществ, обладающих гепатопротекторной активностью. 1 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.

1. Хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1):

2. Соединение по п.1, проявляющее гепатопротекторную активность.