Способ диагностики целиакии Российский патент 2017 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, педиатрии, терапии и генетике, и может применяться для прогнозирования степени тяжести поражения кишечника у больных с целиакией.

Известен способ диагностики целиакии, основанный на оценке серологической активности заболевания, степени атрофии кишечника и определении DQ2 и DQ8 генов [High-titre circulating tissue transglutaminase-2 antibodies predict small bowel villous atrophy, but decision cut-off limits must be locally validated. British Society for Immunology, Clinical and Experimental Immunology, 2013, 176: 190-198].

Недостатками серологического способа являются отсутствие единого метода определения уровня антител, выраженная зависимость показателя от возраста пациента, его иммунологического статуса и иммунной нагрузки.

Ближайшим к заявляемому является способ диагностики целиакии, основанный на определении уровня специфических антител (антител к тканевой трансглютаминазе 2, эндомизийных антител, антител к деамидированным пептидам глиадина) с использованием иммуноферментного анализа или реакции иммунофлюоресценции, гистологического исследования биоптатов кишечника по классификации Marsh и определением генов DQ2 и DQ8 методом полимеразной цепной реакции [Практическое руководство Всемирной организации гастроэнтерологов (ВОГ-OMGE), 2005 г.].

Недостатком способа, выбранного в качестве прототипа, является недостоверность проведения серологического исследования с определением уровня антител к тканевой трансглутаминазе 2 при недостаточной глютеновой нагрузке у лиц, находящихся на безглютеновой диете, у детей до 3 лет и у лиц со сниженным иммунным ответом.

Другим недостатком прототипа является невозможность долгосрочного объективного прогноза, потенциальная гистологическая картина оценивается на данный момент времени.

Задачей настоящего изобретения является обеспечение возможности объективного прогнозирования степени тяжести целиакии.

Технический результат настоящего изобретения достигается тем, что в способе прогнозирования целиакии, основанном на выявлении DQ2 и DQ8 генов, оценке уровня специфических антител и степени атрофии кишечника, определяют частоту встречаемости в локусе DQ аллели 0201 и при частоте ее встречаемости от 2 до 3 прогнозируют развитие тяжелой степени целиакии с атрофией кишечника Marsh III.

Определение частоты встречаемости аллели 0201 необходимо потому, что среди всего генотипа целиакии именно с этой аллелью связывают наиболее неблагоприятное течение данного заболевания, включая раннее начало и рефрактерные формы, вследствие тяжелого поражения кишечника. Для наличия гена DQ2, ассоциированного с целиакией, необходимо наличие по крайней мерее одной аллели 0201, а максимально возможным количеством аллелей в локусе является четыре. При частоте встречаемости аллели 0201 2 и 3 можно прогнозировать поражение кишечника степени Marsh III, характеризующееся тяжелой атрофией.

Способ осуществляется следующим образом. Методом ПЦР real-time определяется генотип HLA в локусе DQ. Подсчитывается количество аллелей 0201 в А1 и В1 цепях локуса. При наличии двух и трех аллелей 0201 прогнозируют развитие тяжелой степени целиакии с атрофией кишечника Marsh III. При частоте аллели 0201 одна развитие тяжелой формы целиакии с атрофией кишечника Marsh III, т.е. рефрактерной к терапии формы целиакии, маловероятно.

Пример 1. Больной В. поступил 29.08.2014 г. в СПбГПМУ для планового контрольного обследования по поводу целиакии с жалобами на периодические боли в гипогастрии. С раннего возраста у ребенка наблюдался жидкий стул, с 3 лет боли в животе. Ввиду раннего возраста в 2006 г. выполнение серологического исследования было не показано. В Медико-генетическом центре с целью определения DQ2 и DQ8 генов, ассоциированных с целиакией, было выполнено исследование заявляемым способом. Генотип больного DQ2, а именно HLA DQ А1 0501, 0501 В1 0201, 0301. Количество аллелей 0201 - одна. Это свидетельствовало о низком риске развития тяжелой целиакии с выраженной атрофией кишечника. В 2007 г. по результатам гистологического исследования выявлена атрофия кишечника Marsh II (высота ворсинок снижена незначительно - в среднем до 0,301 мм, крипты углублены 0,171 мм, соотношение ворсинка : крипта 1,8).

На фоне соблюдения безглютеновой диеты наблюдались купирование клинических симптомов и положительная гистологическая динамика (увеличение высоты ворсинок 0,336 мм, восстановление глубины крипт 0,162 мм соотношение в/к 2,08 МЭЛ 38,6). Целиакия протекала в легкой форме.

Пример 2. Больная К. поступила 29.08.2014 г. в СПбГПМУ для планового контрольного обследования по поводу целиакии с жалобами на ежедневные боли в животе, высыпания на коже, кашицеобразный стул. При обследовании выявлено значительное повышение уровней специфических антител. К тканевой трансглутаминазе 2 IgG (ед/мл) - 21,66 (норма до 20), IgA (ед/мл) - 200 (норма до 20) методом непрямой иммунофлюоресценции. Методом иммуноферментного анализа IgG - 27,8 (норма до 20), а IgA - антитела были отрицательны. В соответствии с заявляемым способом определен генотип - HLA А1 0201,0501 В1 0201,0301 - таким образом, количество аллелей 0201 - две. Сделан прогноз развития тяжелой формы целиакии с атрофией кишечника Marsh III. На гистологии: укорочение ворсинок 0,27 мм, углубление крипт 0,23, соотношение ворсинка : крипта 1,2, среднее количество МЭЛ 46. Целиакия протекала в тяжелой форме.

Пример 3. Больная С. поступила 11.03.2014 г. в 4-е педиатрическое отделение СПбГПМУ для планового обследования с жалобами на периодические вздутия живота, бледность, слабость, стойкую анемию. При обследовании выявлено повышение антител к тканевой трансглютаминазе 2 IgG (ед/мл) - 52,1 (норма до 25) IgA (ед/мл) - 128,0 (норма до 20) методом иммуноферментного анализа, а методом непрямой флюоресценции IgA - более 200.

В соответствии с заявляемым способом генотип девочки следующий: HLA А1 0201, 0501 В1 0201, 0201. Таким образом, количество аллелей 0201 - три. Сделан прогноз развития тяжелой формы целиакии с атрофией кишечника степени Marsh III. На гистологии: укорочение ворсин 0,28 мм, углубление крипт 0,29, соотношение ворсинка : крипта 1, среднее количество МЭЛ 47.

Целиакия протекала в тяжелой форме.

Заявляемый способ является простым, объективным и высоко воспроизводимым в определении генетической предрасположенности к более тяжелой целиакии. Он позволяет эффективно прогнозировать степень поражения кишечника, что дает представление о возможных сроках восстановления слизистой. Способ доступен врачам любой специальности, не требует специального оборудования и дополнительных лабораторных или инструментальных исследований.

Заявляемый способ позволяет врачу рассмотреть возможность перенесения контрольного обследования со взятием биоптатов на более поздние сроки (т.к. учитывается генетически обусловленное длительное восстановление кишечника при глубоком поражении). Это, в свою очередь, позволяет избежать «промежуточных» госпитализаций больного с такой инвазивной манипуляцией, как забор биоптата.

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, педиатрии, терапии и генетике, и может применяться для прогнозирования степени тяжести поражения кишечника у больных с целиакией.

Способ основан на выявлении DQ2 и DQ8 генов, оценке уровня специфических антител и степени атрофии кишечника. Определяют частоту встречаемости в локусе DQ аллели 0201 и при частоте ее встречаемости от 2 до 3 прогнозируют развитие тяжелой степени целиакии с атрофией кишечника Marsh III.

Заявляемый способ является простым, информативным и высоко воспроизводимым в определении генетической предрасположенности к более тяжелой целиакии. Он позволяет эффективно прогнозировать степень целиакии, что дает представление о возможных сроках восстановления слизистой. 3 пр.

Способ прогнозирования целиакии, основанный на выявлении DQ2 и DQ8 генов, оценке уровня специфических антител и степени атрофии кишечника, отличающийся тем, что определяют частоту встречаемости в локусе DQ аллели 0201 и при частоте ее встречаемости от 2 до 3 прогнозируют развитие тяжелой степени целиакии с атрофией кишечника Marsh III.