СПОСОБ ОЦЕНКИ РИСКА РАЗВИТИЯ HELICOBACTER PYLORI-АССОЦИИРОВАННОГО ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА, ОСНОВАННЫЙ НА ОПРЕДЕЛЕНИИ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ЕВРОПЕОИДОВ ХАКАСИИ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и гастроэнтерологии, касается способа оценки риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита у европеоидов Хакасии. Изобретение может быть использовано для выявления заболевания на ранней стадии развития.

Атрофический гастрит представляет собой хронический воспалительный процесс в слизистой оболочке желудка, который ведет к потере железистых клеток желудка и их замещению интерстициальной и фиброзной тканью. Обширная атрофия слизистой оболочки тела желудка, как правило, ассоциируется с гипосекрецией соляной кислоты и нарушением выработки пепсиногена. Наиболее частым этиологическим фактором, вызывающим атрофический гастрит, является инфекция Helicobacter pylori [5]. Helicobacter pylori - ассоциированный хронический атрофический гастрит - относят к основным предраковым состояниям желудка, увеличивая развитие рака желудка в 15 раз [1, 2, 4, 11-16]. В связи с этим активно ведется поиск методов скрининга атрофического гастрита, которые одновременно могут выполнять роль скрининга рака желудка [6, 10].

Кроме того, также в развитии атрофического гастрита были показаны генетические особенности этнических групп, повышающих риск развития заболевания [7-9]. Показано, что у европеоидов - жителей Республики Хакасия распространенность атрофических изменений и морфологические показатели отличаются по сравнению с хакасами, что свидетельствует о более агрессивном течении гастрита у европеоидов [3]. В связи с чем становится актуальным разработка новых методов ранней диагностики развития атрофического гастрита с учетом популяционных особенностей.

Известен способ диагностики атрофического гастрита (патент РФ №2262706), включающий определение уровня пепсиногена I (PGI), гастрина и маркера для инфекции Helicobacter pylori, которые в последующем поддаются компьютерной обработке и сравниваются с заданными пороговыми величинами.

Недостатком данного способа является то, что в нем учитываются только показатели, характеризующие функциональное состояние слизистой оболочки желудка, но при этом не рассматриваются иммунологические показатели. Данный способ может быть использован для скринингового исследования степени тяжести атрофического гастрита.

Известен способ неинвазивной диагностики активного гастрита (патент РФ №2216022), включающий проведение количественной оценки сенсибилизации лимфоцитов к тканевому антигену желудка в реакции торможения миграции лейкоцитов и при проценте миграции более 80% диагностируют неактивный гастрит, в пределах 70-80% - гастрит с минимальной активностью, менее 70% - гастрит с умеренной и выраженной активностью.

Недостатком данного способа является оценка активности гастрита, что не позволяет использовать его для оценки риска развития гастрита.

Известен способ оценки риска развития атрофического гастрита у европеоидов Хакасии (патент РФ №2561054), включающий определение концентрации IL-2, ФГА-индуцированной продукции IL-8 и фагоцитарного числа нейтрофилов, значение которых представлено в формуле для расчета прогностических коэффициентов Р1 и Р2.

Задача предлагаемого способа - оценка риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита у европеоидов Хакасии по показателям периферической крови.

Технический результат заявляемого способа состоит в повышении точности оценки риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита у европеоидов Хакасии, а достигается тем, что устанавливают факторы риска на основе клинико-лабораторного исследования больного.

Отличительной особенностью предлагаемого нового способа оценки является доступность исследовательского материала, не связанная с культивированием, использование иммунологических показателей, характеризующих ответную реакцию организма на Helicobacter pylori - инфекцию. Новый способ позволяет проводить прогностическую оценку риска развития Helicobacter pylori -ассоциированного атрофического гастрита при отсутствии таких параметров, как IL-2, ФГА-индуцированной продукции IL-8 и фагоцитарного числа нейтрофилов.

Отличие способа заключается в том, что определяют содержание относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, относительного количества лимфоцитов и абсолютного количества сегментоядерных нейтрофилов, а установленным факторам риска присваивают градации (Z1-Z3) и числовые значения, где

Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов,

Z2 - относительное содержание лимфоцитов,

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов.

После чего определяют прогностические коэффициенты P1, Р2 по формулам:

P1=-226,062+4,573*Z1+5,128*Z2-2,001*Z3,

где Р1 - вероятность отнесения к группе здоровых доноров

Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов здоровых доноров

Z2 - относительное содержание лимфоцитов здоровых доноров

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов здоровых доноров

4,573; 5,128; 2,001 - численные значения, являются коэффициентами в прогностической модели

- 226,062 - константа для здоровых доноров.

Р2=-202,361+4,201*Z1+4,908*Z2-0,858*Z3,

где Р2 - вероятность отнесения к группе пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z2 - относительное содержание лимфоцитов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

4,201; 4,908; 0,858 численные значения, являются коэффициентами в прогностической модели

- 202,361 - константа для пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ.

Р1>Р2 прогнозируют низкий риск развития Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития Helicobacter pylori -ассоциированным АХГ.

Данные формулы были получены на основании исследования 74 пациентов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированным хроническим гастритом, из них 44 - поверхностным гастритом и 28 - атрофическим гастритом. В качестве контроля использовали данные здоровых доноров-добровольцев. Отбор пациентов хроническим гастритом делали на основании клинических, эндоскопических и морфологических данных.

Обязательным критерием включения в группу исследования было наличие у пациентов Helicobacter pylori. Присутствие бактерий подтверждалось одним из четырех методов: быстрый уреазный тест, серологический, гистобактериоскопическое исследование биоптатов слизистой оболочки желудка или метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) - определение vacA и/или cagA генов Helicobacter pylori. Дополнительно определяли с помощью камеры Горяева количество лейкоцитов в мазке крови, окрашенном по методу Романовского-Гимзе.

Новым является то, что для осуществления способа рассчитывают прогностические индексы, учитывающие содержание относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, относительного количества лимфоцитов и абсолютного количества сегментоядерных нейтрофилов. Данные отличительные признаки не известны в научно-медицинской и патентной литературе. Таким образом, предложенный способ соответствует критерию «новизна».

Совокупность отличительных признаков не вытекает явным образом для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемый способ соответствует критерию «изобретательский уровень».

Способ прошел клинические испытания на клинической базе Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова - Республиканской клинической больнице им. Г.Я. Ремишевской. Таким образом, данное техническое решение соответствует критерию изобретения «промышленно применимо».

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения содержания относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, относительного количества лимфоцитов и абсолютного количества сегментоядерных нейтрофилов у пациента забирают венозную кровь. С помощью камеры Горяева определяют абсолютное количество лейкоцитов крови, затем в мазке крови, окрашенном по методу Романовского-Гимзе, определяют относительное количество лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов. Используя общее количество лейкоцитов, рассчитывают абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов.

Установленным факторам риска присваивают градации (Z1-Z3) и числовые значения: Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов; Z2 - относительное содержание лимфоцитов; Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов. После чего определяют прогностические коэффициенты P1, Р2 по формулам:

P1=-226,062+4,573*Z1+5,128*Z2-2,001*Z3,

где Р1 - вероятность отнесения к группе здоровых доноров

Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов здоровых доноров

Z2 - относительное содержание лимфоцитов здоровых доноров

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов здоровых доноров

4,573; 5,128; 2,001 - численные значения, являются коэффициентами в прогностической модели

- 226,062 - константа для здоровых доноров.

Р2=-202,361+4,201*Z1+4,908*Z2-0,858*Z3,

где Р2 - вероятность отнесения к группе пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z2 - относительное содержание лимфоцитов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов пациентов с Helicobacter pylori - ассоциированным АХГ

4,201; 4,908; 0,858 - численные значения, являются коэффициентами в прогностической модели

- 202,361 - константа для пациентов с Helicobacter pylori ассоциированным АХГ.

сравнивают их числовые характеристики между собой и оценивают риск развития атрофического гастрита. При Р1>Р2 прогнозируют низкий риск, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития атрофического гастрита.

Предложенный способ оценки риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример 1.

Пациент К., 45 лет жалобы на неспецифическую диспепсию. Иммунологические показатели: относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов - 65%, относительное содержание лимфоцитов - 30%, абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов - 4,71×10⁹/л. Проведена оценка риска развития атрофического гастрита согласно новому способу. Рассчитаны вероятности Р1 и Р2 отнесения к группе пациентов с низким и высоким риском развития атрофического гастрита, соответственно. Значение Р1=185,59; Р2=213,9. В соответствии с новым способом риск развития атрофического гастрита у пациента расценен как высокий Р1<Р2 (185,59<213,9). По данным ЭФГДС диагностирован атрофический гастрит - прогноз подтвердился.

Таким образом, применение предлагаемого способа оценки риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного хронического гастрита, основанного на определении иммунологических показателей у европеоидов Хакасии, позволит повысить эффективность диагностики Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита. Положительный эффект предлагаемого способа подтвержден результатами его применения у 28 пациентов, исследованных по поводу риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита.

Источники информации

1. Бабак О.Я., Протас Ю.В. Хронический атрофический гастрит - точка отсчета начала канцерогенеза // Сучасна гастроентерологiя. - 2005. - №5 (25). - С. 9-14.

2. Бордин Д.С., Машарова А.А., Хомерики С.Г. Хронический гастрит: современный взгляд на старую проблему // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2012. - №5. - С.99-106.

3. Буторин Н.Н., Амельчугова О.С., Цуканов В.В., Штыгашева О. В. Морфометрическая характеристика слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом коренных и пришлых жителей Хакасии // Сибирский медицинский журнал. - 2013. - №1. - С. 35-38.

4. Маев И.В., Мельникова Е.В., Крюкова Т.В. и др. Новые методы серологической и эндоскопической диагностики хронического атрофического гастрита и раннего рака желудка // Клинические перспективы гастроэнтерологии и гепатологии. 2009. №6. С. 30-34.

5. Новицкая М.С., Кайбуллаева Д.А. Атрофический гастрит (обзор литературы) // Medicine. - 2014. - №7. - С. 15-17.

6. Цуканов В.В., Третьякова О.В., Амельчугова О.С. и др. Распространенность атрофического гастрита тела желудка у населения г. Красноярска старше 45 лет // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2012. - №4. - С. 27-31.

7. Adamu М.А., Week M.N., Gao L. et al. Incidence of chronic atrophic gastritis: systematic review and metaanalysis of follow-up studies // Eur. J. Epidemiol. - 2010. - Vol. 25, №7. - P. 439-448.

8. Aoki K., Kihaile P.E., Wenyuan Z. et al. Comparison of prevalence of chronic atrophic gastritis in Japan, China, Tanzania, and the Dominican Republic // Ann. Epidemiol. - 2005. - Vol.15, №8. - P. 598-606.

9. De Vries А.С, Meijer G.A., Looman C.W. et al. Epidemiological trends of pre-malignant gastric lesions: a long-term nationwide study in the Netherlands // Gut. - 2007. - Vol. 56, №12. - P. 1665-1670.

10. Graham D.Y., Asaka M. Eradication of gastric cancer and more efficient gastric cancer surveillance in Japan: two peas in a pod // J. Gastroenterol. - 2010. - Vol. 45, N 1.- P. 1-8.

11. Kashiwagi H. Ulcers and gastritis // J. Tradit Chin Med. - 2004. - 24 (4). - P. 252-255.

12. Lee I., Lee H., Kim M. et al. Ethnic difference of Helicobacter pylori gastritis: Korean and Japanese gastritis is characterized by male- and antrum-predominant acute foveolitis in comparison with American gastritis // World J. Gastroenterol. - 2005. - Vol. 11, №1. - P. 94-98.

13. Rugge M., Correa P., Dixon M.F. et al. Gastric mucosal atrophy: interobserver consistency using new criteria for classification and grading // Aliment. Pharmacol. Ther. 2002. - 16. - P. 1249-1259.

14. Ruiz В., Garay J., Correa P. et al. Morphometric evaluation of gastric antral atrophy: improvement after cure H. pylori infection // Scand. J. Gastroenterol. - 2002. - 16(80). -P. 1449-1456.

15. Wong B.C., Lam S.K., Wong W.M. et al. Helicobacter pylori eradication to prevent gastric cancer in a high-risk region of China: a randomized controlled trial // JAMA. - 2004. - Vol. 291, N 2. - P. 187-194.

16. Wong B.C.Y., Lam S.K., Wong W.M. et al. Eradication of H. pylori infection significantly slows down the progression of precancrouos lesions in high risk population: a 5 year prospective randomized study // Gastroenterology. - 2001.- 122 (Suppl. 1). - P. A588.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки риска развития Helicobacter pylori - ассоциированного гастрита у европеоидов Хакасии. Определяют относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов, относительное содержание лимфоцитов и абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов, установленным факторам риска присваивают градации (Z1-Z3) и числовые значения, после чего определяют прогностические коэффициенты P1, Р2 по формулам: P1=-226,062+4,573*Z1+5,128*Z2-2,001*Z3 и Р2=-202,361+4,201*Z1+4,908*Z2-0,858*Z3, где Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов, Z2 - относительное содержание лимфоцитов, Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов. При Р1>Р2 прогнозируют низкий риск, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития Helicobacter pylori - ассоциированного атрофического гастрита у европеоидов Хакасии. Способ позволяет повысить эффективность диагностики. 1 пр.

Способ оценки риска развития Helicobacter pylori-ассоциированного хронического гастрита, основанный на определении иммунологических показателей у европеоидов Хакасии, включает определение относительного содержания сегментоядерных нейтрофилов, относительного содержания лимфоцитов и абсолютного содержания сегментоядерных нейтрофилов, установленным факторам риска присваивают градации (Z1-Z3) и числовые значения, после чего определяют прогностические коэффициенты P1, Р2 по формулам:

P1=-226,062+4,573*Z1+5,128*Z2-2,001*Z3

Р2=-202,361+4,201*Z1+4,908*Z2-0,858*Z3,

где Z1 - относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов

Z2 - относительное содержание лимфоцитов

Z3 - абсолютное содержание сегментоядерных нейтрофилов

и при Р1>Р2 прогнозируют низкий риск, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития атрофического гастрита у европеоидов Хакасии.