Способ оценки функциональной зрелости иммунной системы молодняка сельскохозяйственной птицы Российский патент 2017 года по МПК G01N33/483 

Настоящее изобретение относится к области ветеринарии, в частности к оценке готовности иммунной системы к вакцинации.

Известна вакцинация цыплят путем орального применения пробиотиков, начиная с первого по десятые сутки. Однако отсутствие определения конкретного времени применения пробиотиков может сопровождаться гибелью определенного количества микробных клеток, составляющих основу препарата в желудочно-кишечном тракте, что создает условия для несвоевременного накопления достаточного уровня полезной микрофлоры в организме цыплят.

Также известна технология вакцинации цыплят, включающая определение оптимального срока вакцинации (http://ru.wikihow.com).

Недостатками известных технических решений является отсутствие конкретных и обоснованных сроков вакцинации цыплят.

Техническим результатом является повышение сохранности цыплят за счет определения оптимального срока вакцинации.

Технический результат достигается тем, что в способе оценки функциональной зрелости иммунной системы молодняка сельскохозяйственной птицы, включающем определение оптимального срока вакцинации, согласно изобретению в брюшную полость цыплят в возрасте 3, 7, 12, 17 и 28 суток инъецируют маркер "Трипановый синий" в дозе не более 0,5 мл, затем через час осуществляют бескровный убой цыплят и вскрывают их брюшную полость, вырезают брыжейку или брюшину и помещают на камеру Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенной на него размерной сеткой в виде мелких и больших квадратов, закрывают покровным стеклом и помещают под микроскоп с окуляром увеличивающий объект исследования не менее в 15 раз, и объективом 9×0,20, затем полученный результат фотографируют с помощью цифрового фотоаппарата и полученное изображение вводят в компьютер и используют программное обеспечение Microsoft Office Power Point, на слайд которого располагают оцифрованное изображение объекта исследования и на него накладывают электронный макет сетки камеры Горяева, который предварительно вводят в компьютер, далее определяют количество окрашенных макрофагов, расположенных на 4 больших квадратах камеры Горяева, общая площадь которых 0,16 мм², проводят анализ, обработку данных, строят график динамики развития макрофагов по их количеству в зависимости от возраста цыплят и определяют период стабилизации развития макрофагов, в течение которого осуществляют вакцинацию цыплят.

Новизна заявляемого предложения заключается в том, что в качестве объекта для визуальной оценки его заселенности макрофагами используют брюшину или брыжейку кишечника, обладающие достаточной светопроницаемостью, и не нуждаются в трудоемкой предварительной подготовке.

Сущность изобретения поясняется чертежом, где на на фиг. 1 изображено фото брыжейки кишечника, с окрашенными макрофагами в виде синих точек; на фиг. 2 изображено наложение электронного макета камеры Горяева на фото брыжейки кишечника; на фиг. 3 изображен график динамики развития макрофагов по их количеству в зависимости от возраста цыплят.

Способ оценки функциональной зрелости иммунной системы молодняка сельскохозяйственной птицы осуществляется следующим образом.

Предварительно в брюшную полость цыплят в возрасте 3, 7, 12, 17 и 28 суток для визуализации макрофагов авторами был выбран традиционный маркер - краситель «Трипановый синий», который является взвесью минеральных частиц в разбавителе. Краску (по 0,5 мл) инъецировали в брюшную полость 5 цыплятам в возрасте 3, 7, 12, 17 и 28 суток, не допуская попадания ее во внутренние органы. Через 60 минут производят разрыв спинного мозга цыплят в области верхней части шеи (бескровный убой), вскрытие брюшной полости цыплят, отделение брюшины и брыжейки кишечника. Окрашенные объекты помещают на камеру Горяева. Камера Горяева - оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой, и тонкого покровного стекла. Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм, а размеры большого квадрата камеры Горяева - 0,2×0,2 мм.

Далее исследуемый объект закрывают покровным стеклом и помещают под микроскоп. На объекте для исследования оценивали количество окрашенных макрофагов при малом увеличении микроскопа (окуляр 15х, объектив 9×0,20).

Затем полученное изображение под микроскопом фотографируют с помощью цифрового фотоаппарата и полученное изображение вводят в компьютер и используют программное обеспечение Microsoft Office Power Point, на слайде которого располагают оцифрованное изображение объекта исследования, и на него накладывают электронный макет камеры Горяева. Для получения макета сетку камеры Горяева оцифровывают и вводят в компьютер. Для оценки брали 4 больших квадрата камеры, в которых определяли точное количество клеток ММС (моноцитарно-макрофагальной системы), захвативших краску. Площадь 4 больших квадратов камеры Горяева составляет 0,16 мм².

По полученным данным строят график динамики развития макрофагов по их количеству в зависимости от возраста цыплят. В возрасте 3 суток установлено наименьшее число клеток, захвативших краску, - от 1 до 4; в дальнейшем установлен прогрессирующий рост их количества, который стабилизировался в возрасте цыплят 17 суток (10-18 клеток). В дальнейшем количество окрашенных макрофагов на единице площади не изменилось.

Следовательно, формирование первичного звена иммунологической реактивности цыплят в целом завершается к возрасту 17 суток. Это является четким маркером готовности иммунной системы птицы адекватно оценивать любой объект, попавший в организм, в том числе вакцинный антиген.

Первая вакцинация птицы является обоснованной при достижении возраста 17 суток при концентрации макрофагов не менее 10 клеток на 0,16 мм².

Элементы моноцитарно-макрофагальной системы функционально и морфологически приспособлены осуществлять контроль по принципу «свой - чужой». Это проявляется в отслеживании любых объектов, не отвечающих определению «свой», и фагоцитировании этих объектов. Если объект имеет неорганическую природу, то макрофаги захватывают его и удерживают внутри клетки длительное время.

В результате научных исследований выяснилось, что при вакцинации цыплят в возрасте 17 суток сохранность цыплят составила 94%, а сохранность при вакцинациях более раннем возрасте - в среднем 83%.

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии, и предназначено для оценки готовности иммунной системы к вакцинации. Для оценки функциональной зрелости иммунной системы молодняка сельскохозяйственной птицы в брюшную полость цыплят в возрасте 3, 7, 12, 17 и 28 суток инъецируют маркер "Трипановый синий" в дозе не более 0,5 мл. Через час осуществляют бескровный убой цыплят и вскрывают их брюшную полость, вырезают брыжейку или брюшину. Помещают на камеру Горяева, закрывают покровным стеклом и помещают под микроскоп с окуляром, увеличивающим объект исследования не менее в 15 раз, и объективом 9×0,20. Полученный результат фотографируют с помощью цифрового фотоаппарата и изображение вводят в компьютер, используя программное обеспечение Microsoft Office Power Point. Определяют количество окрашенных макрофагов расположенных на 4 больших квадратах камеры Горяева, общая площадь которых 0,16 мм², проводят анализ, обработку данных, строят график динамики развития макрофагов по их количеству в зависимости от возраста цыплят. Определяют период стабилизации развития макрофагов, в течение которого осуществляют вакцинацию цыплят. Использование изобретения позволяет повысить сохранность цыплят. 3 ил.

Способ оценки функциональной зрелости иммунной системы молодняка сельскохозяйственной птицы, включающий определение оптимального срока вакцинации, отличающийся тем, что в брюшную полость цыплят в возрасте 3, 7, 12, 17 и 28 суток инъецируют маркер "Трипановый синий" в дозе не более 0,5 мл, затем через час осуществляют бескровный убой цыплят и вскрывают их брюшную полость, вырезают брыжейку или брюшину и помещают на камеру Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенной на него размерной сеткой в виде малых и больших квадратов, закрывают покровным стеклом и помещают под микроскоп с окуляром, обеспечивающим 15-кратное увеличение, и объективом 9×0,20, затем полученный результат фотографируют с помощью цифрового фотоаппарата и полученное изображение вводят в компьютер, затем используют программное обеспечение Microsoft Office Power Point, на слайд которого предварительно располагают оцифрованное изображение объекта исследования и на него накладывают электронный макет сетки камеры Горяева, который предварительно вводят в компьютер и определяют количество окрашенных макрофагов, расположенных на 4 больших квадратах камеры Горяева, общая площадь которых 0,16 мм², проводят анализ, обработку данных, строят график динамики развития макрофагов по их количеству на единице площади и определяют возрастные параметры периода стабилизации заселения объекта макрофагами, который является оптимальным для первой вакцинации цыплят.