СПОСОБ УСИЛЕНИЯ АНТИТЕЛОЗАВИСИМОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ Российский патент 2017 года по МПК A61K31/55 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННУЮ ЗАЯВКУ

[0001] По данной заявке испрашивается приоритет по U.S.S.N. 61/326406, поданной 21 апреля 2010 года, содержание которой включено в данный документ путем ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ РАСКРЫТИЯ

[0002] Варианты осуществления по настоящему раскрытию относятся к способам усиления цитотоксичности терапевтических моноклональных антител для лечения рака и других клеточных заболеваний.

ПРЕДПОСЫЛКИ РАСКРЫТИЯ

[0003] Клиническая эффективность моноклональных антител (MAb) продемонстрирована при различных злокачественных новообразованиях. Сейчас моноклональные антитела общеупотребительны в качестве терапевтических средств для лечения и/или предотвращения рака, аутоиммунных заболеваний, тромбоза, воспаления и инфекции. Однако имеют место некоторые случаи низкой активности антител, способствующей недостаточным терапевтическим эффектам, оказываемым на рак, аутоиммунные заболевания, воспаление и инфекцию. Такое недостаточное действие лекарственных средств может вести к увеличенным дозировкам и расходам, необходимым для лечения. В этих условиях усиление терапевтической активности моноклональных антител является важной целью.

[0004] Терапевтические моноклональные антитела предпочтительно способны к антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), в частности, когда их используют в лечении рака или других клеточных заболеваний. То есть, терапевтические MAb предпочтительно проявляют цитотоксические эффекты против своих клеток-мишеней, таких как клетки-мишени рака или лимфоциты. Такие антитела связываются с антигенами на поверхности клеток-мишеней, через их Fc домен, с Fc рецепторами на поверхности эффекторных клеток, таких как естественные киллерные клетки и макрофаги, тем самым вызывая повреждение клеток-мишеней. Этот механизм представляет собой антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC). Альтернативно, антитела повреждают клетки посредством активации комплемента через Fc домен. Это называют комплемент-зависимой цитотоксичностью (CDC). Такие активности антител, проявляемые через Fc домены, называют эффекторными активностями.

[0005] Имели место различные попытки усилить эффекторную функцию антител с целью усиления их терапевтической активности. Некоторые типы эффекторных клеток, такие как моноциты, нейтрофилы и естественные киллерные (NK) клетки, имеют поверхностные рецепторы, которые связывают Fc часть иммуноглобулинов. Эффекторные клетки для индукции ADCC против клетки-мишени включают лейкоциты, макрофаги, моноциты, активированные нейтрофилы и, возможно, активированные естественные киллерные (NK) клетки и эозинофилы человека. Предпочтительные эффекторные клетки экспрессируют FcγRI и включают, например, моноциты и активированные нейтрофилы. Обнаружено, что экспрессия FcγRI подлежит повышающей регуляции посредством интерферона гамма (IFN-γ). Эта усиленная экспрессия увеличивает цитотоксическую активность моноцитов и нейтрофилов против клеток-мишеней.

[0006] Fc рецептор представляет собой белок, найденный на поверхности определенных клеток, включая естественные киллерные клетки, макрофаги, нейтрофилы и тучные клетки, которые участвуют в защитных функциях иммунной системы. Fc рецепторы связываются с антителами, которые прикреплены к инфицированным клеткам, инвазивным патогенам или клеткам рака. Их активность стимулирует фагоцитарные или цитотоксические клетки для уничтожения микробов, инфицированных клеток или клеток рака посредством опосредованного антителами фагоцитоза или ADCC. Некоторые вирусы, такие как флавивирусы, используют Fc рецепторы, которые помогают им инфицировать клетки посредством механизма, известного как антителозависимое усиление инфекции. Fc рецепторы участвуют в процессе ADCC. Например, во время ADCC FcγRIII рецепторы на поверхности естественных киллерных (NK) клеток стимулируют естественные киллерные клетки для высвобождения цитотоксических молекул из их гранул для того, чтобы убивать клетки-мишени, покрытые антителами.

[0007] Существует несколько различных типов Fc рецепторов, которые классифицируют, основываясь на типе антитела, которое они распознают. Одна группа Fc рецепторов IgG, FcγR, принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов и представляют собой наиболее важные Fc рецепторы для индукции фагоцитоза опсонизированных (покрытых) микробов. Они экспрессированы на лейкоцитах и состоят из 3 отдельных классов: FcγRI, FcγRII (FcγRIIa и FcγRIIb), FcγRIII (FcγRIIIa и FcγRIIIb). Рецепторы также различают по их аффинности к IgG. FcγRI проявляет высокую аффинность к IgG, тогда как FcγRII и FcγRIII проявляют более слабую аффинность. FcγRIIa и FcγRIIIa представляют собой активирующие FcγR, которые экспрессированы на моноцитах/макрофагах и моноцитах/макрофагах/естественных киллерных клетках, соответственно, и могут запускать цитотоксичность мишеней человека.

[0008] Идентифицированы два функциональных полиморфизма генов FcγR, FcγR3a-V158F и FcγR2a-H131R, которые оказывают влияние на связывание с IgG, изменение функции ADCC и воздействие на клинический ответ опухолей. Полиморфизм FcγR2a-H131R расположен во внеклеточном лиганд-связывающем домене. Он содержит или гистидиновый (H) или аргининовый (R) аллель в аминокислотном положении 131. Генотип FcγR2a-131H/H обладает более высокой аффинностью к IgG2 человека в анализе in vitro. Полиморфизм FcγR3a-V158F кодирует или валин (V) или фенилаланин (F) в аминокислотном положении 158. Исследования in vitro показали, что аллель V в FcγR3a обладает более высокой аффинностью связывания с IgG1 человека, чем аллель F, что указывает на то, что иммунные эффекторные клетки, несущие аллель V в FcγR3a, опосредуют ADCC более эффективно (Zhang et al. J. of Clinical Oncology, 25: 3712-3718, 2007).

[0009] Существует дополнительная необходимость в улучшении терапевтической эффективности моноклональных антител. Существует необходимость усилить эффекторную функцию антител, например, усиливающую функцию ADCC и/или CDC антител.

[0010] На всем протяжении этого описания, включая указанное выше описание связанной области, любые и все общедоступные документы, описанные в настоящем документе, включая любые и все патенты США, конкретно включены посредством ссылки в настоящий документ в полном объеме. Указанное выше описание связанной области не предназначено в качестве какого-либо признания того, что любые документы, описанные в ней, включая рассматриваемые патентные заявки США, составляют известный уровень техники для вариантов осуществления согласно раскрытию изобретения. Кроме того, в настоящем документе описание любых преимуществ, связанных с описанными продуктами, способами и/или аппаратом, не предназначено для того, чтобы ограничивать раскрытые варианты осуществления. В действительности, варианты осуществления раскрытия изобретения могут включать определенные признаки описанных продуктов, способов и/или устройства и при этом не обладать их описанными недостатками.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ РАСКРЫТИЯ

[0011] Настоящее изобретение относится к способам усиления ADCC активности терапевтических антител при лечении клеточных заболеваний, таких как рак и опосредованные иммунными клетками заболевания или нарушения. В целом, ADCC активность терапевтических антител можно усиливать посредством совместного введения терапевтического антитела с усиливающей ADCC молекулой, с формулой I:

[0012], где

[0013] Y представляет собой кольцо арила, замещенное C(=O)R8, и где указанное кольцо арила необязательно дополнительно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из F, Cl, CF3, CF3O-, HCF2O-, C1-C6 алкила, C1-C6 гетероалкила и ArO-;

[0014] R1, R3 и R4 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0015] или R3 и R4 вместе с атомом, к которому они прикреплены, образуют насыщенное или частично ненасыщенное C3-C6 карбоциклическое кольцо, где указанное карбоциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0016] R2 и R8 независимо выбраны из H, OR6, NR6R7, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0017] R5a, R5b и R5c независимо выбраны из H, F, Cl, Br, I, OMe, CH3, CH2F, CHF2 и CF3 и

[0018] R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, O-алкила, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O-, и алкил-OC(=O)CH=CH-,

[0019] или R6 и R7 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное гетероциклическое кольцо с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, где указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NH2, -C(=O)алкил, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкил, OC(=O)H, OC(=O)алкил, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O-, и алкил-OC(=O)CH=CH-.

[0020] Изобретение также относится к метаболиту, сольвату, таутомеру или фармацевтически приемлемой соли соединения согласно формуле I.

[0021] Например, R2 представляет собой OR6.

[0022] Например, R6 представляет собой C1-C6 алкил, такой как этил.

[0023] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7.

[0024] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7 и R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила и C1-C6 гетероалкила, такого как, например, R6 и R7 представляют собой H, этил, пропил или CH2CH2OCH3.

[0025] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой фенил.

[0026] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 выбран из OR6, NR6R7 и гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы.

[0027] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 представляет собой гетероциклоалкил с 5 или 6 кольцевыми атомами, где один атом выбран из азота, кислорода и серы. Например, R8 представляет собой пирролидин.

[0028] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R6 и R7 независимо выбраны из H и C1-C6 алкила.

[0029] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой

[0030] В некоторых соединениях по изобретению каждый из R1, R3, R4, R5a, R5b и R5c представляет собой водород.

[0031] Например, изобретение относится к соединению, выбранному из

[0032] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0033] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метоксикарбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0034] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метилкарбамоил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0035] (1E,4E)-2-амино-N,N-дипропил-8-(4-(пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксамида

[0036] и их фармацевтически приемлемых солей.

[0037] В предпочтительном варианте осуществления усиливающая ADCC молекула по настоящему изобретению представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид, со следующей химической структурой:

[0038] Усиливающая ADCC молекула усиливает или улучшает эффекторную активность антитела. Таким образом, независимо от антигенсвязывающей активности, способы по настоящему изобретению могут увеличивать терапевтический эффект антитела посредством усиления эффекторной активности, проявляемой антителом. Усиливающая ADCC молекула может улучать ADCC посредством активации естественных киллерных клеток или клеток CD56+ или непосредственно или опосредованно. Дополнительно, наличие более высокой доли активированных естественных киллерных клеток может помочь преодолеть слабую ADCC, наблюдаемую в подгруппе пациентов, которые имеют Fc рецепторы с низкой аффинностью.

[0039] Терапевтические MAb, способные к ADCC, являются предпочтительными. Они включают ритуксимаб против CD20 (Ритуксан®), трастузумаб против Her2 (Герцептин®), цетуксимаб против EGFR (Эрбитукс®) и панитумумаб против EGFR (Вектибикс®).

[0040] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения ADCC у субъекта, получающего лечение терапевтическими моноклональными антителами. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0041] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления уничтожения NK-чувствительных клеток-мишеней. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения уничтожения NK-чувствительных клеток-мишеней.

[0042] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления эффекторной активности естественных киллерных клеток или клеток CD56+. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения эффекторной активности естественных киллерных клеток или клеток CD56+.

[0043] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления ADCC в клетках пациентов. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Субъекты, которые в ином случае могут не быть хорошими терапевтическими кандидатами для терапии MAb, поскольку они экспрессируют только низкие уровни опухолевых антигенов, против которых направлено моноклональное антитело, или поскольку они имеют однонуклеотидные полиморфизмы в их Fc рецепторах, которые снижают их аффинность к моноклональному антителу.

[0044] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления терапевтической эффективности моноклональных антител. Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения эффективности терапевтического моноклонального антитела. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0045] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против ErbB2, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против ErbB2 является трастузумаб.

[0046] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения рака молочной железы, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против ErbB2 является трастузумаб.

[0047] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против CD20, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против CD20 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против CD20 является ритуксимаб.

[0048] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения B-клеточного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против CD20 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против CD20 является ритуксимаб. В некоторых вариантах осуществления B-клеточным нарушением является лимфома, лейкоз или ревматоидный артрит.

[0049] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против EGFR, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Способы по настоящему изобретению также включают введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против EGFR является панитумумаб, цетуксимаб, нецитумумаб или залутумумаб.

[0050] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующего рака головы и шеи, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к способам лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. Согласно некоторым вариантам осуществления, также предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующего рака головы и шеи, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против EGFR является панитумумаб, цетуксимаб, нецитумумаб или залутумумаб.

[0051] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения мутантного колоректального рака KRAS, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления терапевтическим моноклональным антителом является панитумумаб или цетуксимаб.

[0052] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения рака, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Настоящее изобретение также относится к способам лечения рака, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0053] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения B-клеточного злокачественного новообразования или B-клеточного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC.

[0054] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения аутоиммунного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит.

[0055] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы избегания рецидива опухоли у субъекта, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC.

[0056] В некоторых вариантах осуществления терапевтические антитела имеют часть Fc IgG1 или IgG3 мыши, человека или нечеловеческого примата. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное человеческое или гуманизированное антитело или его фрагмент.

[0057] В настоящем изобретении предоставлены способы выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в FcgR3a в аминокислотном положении 158, где гомозиготный валин в аминокислотном положении 158 FcgR3a указывает, что субъекту предсказан более выраженный ответ на терапевтический режим, чем субъекту без гомозиготного валина в аминокислотном положении 158 в FcgR3a.

[0058] В этом изобретении также предоставлены способы выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в FcgR2a в аминокислотном положении 131, где гомозиготный гистидин в аминокислотном положении 131 в FcgR2a указывает, что субъекту предсказан более выраженный ответ на терапевтический режим, чем субъекту без гомозиготного гистидина в аминокислотном положении 131 в FcgR2a.

[0059] Настоящее изобретение относится к фармацевтической упаковке или набору, содержащему один или более контейнеров, заполненных жидкой или лиофилизированной усиливающей ADCC молекулой, необязательно терапевтическим антителом и/или одним или более химиотерапевтическими средствами.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0060] На фиг. 1 представлен линейный график, показывающий лизис клеток-мишеней K562. Меченые Calcein AM клетки-мишени K562 инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали с использованием усилителя ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень.

[0061] На фиг. 2 показано, что усилитель ADCC усиливает ADCC при использовании ритуксана. Меченые Calcein AM клетки HS-Sultan, покрытые ритуксаном, инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали усилителем ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень.

[0062] На фиг. 3 показано, что усилитель ADCC усиливает ADCC при использовании герцептина как в клеточной линии SKBR3, которая экспрессирует высокие уровни опухолевого антигена Her2neu, так и в клеточной линии MDA-MB-231, которая экспрессирует более низкие уровни опухолевого антигена. Меченные Calcein AM клетки SKBR3 (часть A) или клетки MDA-MB-231 (часть C), покрытые герцептином, инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали усилителем ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень. Экспрессию Her2neu количественно определяли посредством проточной цитометрии с использованием PE-конъюгированного герцептина (зеленая линия) или контролей (№1 и №2) в клеточных линиях рака молочной железы SKBR3 (часть B) и MDA-MB-231 (часть D).

[0063] На фиг. 4 показано, что усилитель ADCC усиливает опосредованную ритуксаном ADCC в клетках от пациентов с Fc рецепторами с высокой аффинностью и Fc рецепторами с низкой аффинностью. Процент специфического лизиса показан для покрытых ритуксаном клеток HS-Sultan, инкубированных с эффекторными клетками PBMC с отношением E:T 50:1. PBMC от пациента с высокоаффинным генотипом FcgR2a131 H/H и FcgR3a V/V (закрашенные прямоугольники) или пациента с более низкоаффинным генотипом FcgR2a131 A/A и FcgR3a V/F (незакрашенные прямоугольники) оценивали по ADCC после стимуляции буферным контролем (базовая линия) или стимуляции усилителем ADCC 500 нМ.

[0064] На фиг. 5 показано, что пациенты с FcgR3a FF или FcgR3a FV обладают значительно более низкой опосредованной ритуксимабом ADCC активностью, чем индивидуумы с фенотипом FcgR3a VV.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0065] Изобретение основано на открытии того, что усиливающая ADCC молекула увеличивает антителозависимую клеточную цитотоксическую (ADCC) активность антител. Соответственно, изобретение относится к способам лечения клеточных заболеваний, таких как рак и опосредованные иммунными клетками заболевания или нарушения посредством введения терапевтического моноклонального антитела и усиливающей ADCC молекулы, соединения со следующей формулой I:

[0066] где

[0067] Y представляет собой кольцо арила, замещенное C(=O)R8, и где указанное кольцо арила необязательно дополнительно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из F, Cl, CF3, CF3O-, HCF2O-, C1-C6 алкила, C1-C6 гетероалкила и ArO-;

[0068] R1, R3 и R4 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0069] или R3 и R4 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное C3-C6 карбоциклическое кольцо, где указанное карбоциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0070] R2 и R8 независимо выбраны из H, OR6, NR6R7, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0071] R5a, R5b и R5c независимо выбраны из H, F, Cl, Br, I, OMe, CH3, CH2F, CHF2 и CF3 и

[0072] R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, O-алкила, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O- и алкил-OC(=O)CH=CH-,

[0073] или R6 и R7 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное гетероциклическое кольцо с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, где указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O- и алкил-OC(=O)CH=CH-.

[0074] Изобретение также относится к метаболиту, сольвату, таутомеру или фармацевтически приемлемой соли соединения согласно формуле I.

[0075] Например, R2 представляет собой OR6.

[0076] Например, R6 представляет собой C1-C6 алкил, такой как этил.

[0077] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7.

[0078] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7 и R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила и C1-C6 гетероалкила, такого как, например, R6 и R7 представляют собой H, этил, пропил или CH2CH2OCH3.

[0079] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой фенил.

[0080] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 выбран из OR6, NR6R7 и гетероциклоалкил с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы

[0081] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 представляет собой гетероциклоалкил с 5 или 6 кольцевыми атомами, где один атом выбран из азота, кислорода и серы. Например, R8 представляет собой пирролидин.

[0082] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R6 и R7 независимо выбраны из H и C1-C6 алкила.

[0083] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой

[0084] В некоторых соединениях по изобретению, каждый из R1, R3, R4, R5a, R5b и R5c представляет собой водород.

[0085] Например, изобретение относится к соединению, выбранному из

[0086] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0087] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метоксикарбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0088] (1E,4E)-этил2-амино-8-(4-(метилкарбамоил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0089] (1E,4E)-2-амино-N,N-дипропил-8-(4-(пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксамида

[0090] и их фармацевтически приемлемых солей. Другие подходящие усилители ADCC описаны в WO2007/024612, содержание которой включено, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме.

[0091] В предпочтительном варианте осуществления усиливающая ADCC молекула по настоящему изобретению представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид со следующей химической структурой:

[0092] Усиливающая ADCC молекула усиливает или улучшает эффекторную активность антитела. Таким образом, независимо от антигенсвязывающей активности, способы по настоящему изобретению могут увеличивать терапевтический эффект антитела посредством усиления эффекторной активности, проявляемой антителом. Таким образом, способы по изобретению, как правило, можно использовать для лечения или облегчения симптома какого-либо нарушения, в котором желательна усиленная эффекторная активность антитела, у нуждающегося в этом субъекта. Усиливающая ADCC молекула может улучать ADCC посредством активации естественных киллерных клеток или клеток CD56+ или непосредственно или опосредованно. Дополнительно, наличие более высокой доли активированных естественных киллерных клеток может помочь преодолеть слабую ADCC, наблюдаемую в подгруппе пациентов, которые имеют Fc рецепторы с низкой аффинностью.

[0093] Субъект, нуждающийся в этом, включает субъекты с раком, которые идентифицированы в качестве имеющих мутацию KRAS или полиморфизм FcγR или предварительно идентифицированы в качестве не отвечающих на лечение терапевтическими антителами или обладают нарушенной функцией ADCC.

[0094] В другом варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу по изобретению вводят в комбинации с одним или более терапевтическими антителами. В некоторых вариантах осуществления антитела имеют терапевтическое и/или профилактическое использование in vivo против рака и других клеточных заболеваний.

[0095] В определенных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу вводят перед, одновременно с, или после введения одного или более терапевтических антител. В одном из вариантов осуществления усиливающую ADCC молекулу формулируют с одним или более терапевтическими антителами. В другом варианте осуществления одно или более терапевтических антител вводят в раздельной фармацевтической композиции. В соответствии с этим вариантом осуществления, одно или более терапевтических антител можно вводить субъекту посредством того же или отличающихся путей введения, как те, что используют для введения усиливающей ADCC молекулы.

[0096] В другом аспекте изобретение относится к способу уничтожения клетки рака, который включает введение определенного количества усиливающей ADCC молекулы по настоящему изобретению в комбинации с терапевтическим моноклональным антителом для того, чтобы уничтожить клетку рака. Типы терапевтических моноклональных антител включают, но без ограничения, ритуксимаб, цетуксимаб, панитумумаб и трастузумаб.

Терапевтические антитела

[0097] В рамках контекста данного изобретения термин «терапевтическое антитело или антитела» обозначает более конкретно любое антитело, которое выполняет функцию истощения клеток-мишеней у пациента. Конкретные примеры таких клеток-мишеней включают опухолевые клетки, инфицированные вирусами клетки, аллогенные клетки, патологические иммунокомпетентные клетки (например, B лимфоциты, T-лимфоциты, антигенпредставляющие клетки, и т.д.), присущие раку, аллергиям, аутоиммунным заболеваниям, аллогенным реакциям. Наиболее предпочтительными клетками-мишенями в рамках контекста данного изобретения являются опухолевые клетки и инфицированные вирусами клетки. Терапевтические антитела могут, например, опресредовать цитотоксический эффект или лизис клеток, в частности, посредством антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).

[0098] Для ADCC необходимы рецепторы лейкоцитов для Fc части IgG (FcγR), функция которых состоит в том, чтобы соединять IgG-сенсибилизированные антигены с FcγR-несущими цитотоксическими клетками и запускать машину клеточной активации. Несмотря на то, что этот механизм действия не доказан у человека in vivo, он может учесть эффективность таких истощающих клетки-мишени терапевтических антител. Следовательно, терапевтическое антитело способно формировать иммунный комплекс. Например, иммунный комплекс может представлять собой опухолевую мишень, покрытую терапевтическими антителами. Терапевтические антитела могут представлять собой поликлональные или, предпочтительно, моноклональные антитела. Их можно получать посредством гибридом или посредством рекомбинантных клеток, конструируемых для того, чтобы экспрессировать желаемые вариабельные и константные домены. Антитела могут представлять собой одноцепочечные антитела или другие производные антител, сохраняющие антигенную специфичность, и нижнюю шарнирную область или их вариант. Они могут представлять собой полифункциональные антитела, рекомбинантные антитела, гуманизированные антитела, их фрагменты или варианты. Указанный фрагмент или его производное предпочтительно выбран из фрагмента Fab, фрагмента Fab'2, CDR и ScFv. Терапевтические антитела специфичны к поверхностным антигенам, например, мембранным антигенам. Наиболее предпочтительные терапевтические антитела специфичны к опухолевым антигенам (например, молекулам, специфически экспрессируемым опухолевыми клетками), таким как CD20, CD52, ErbB2 (или HER2/Neu), CD33, CD22, CD25, MUC-1, CEA, KDR, αVβ33, в частности, антигены лимфомы (например, CD20). Терапевтические антитела содержат Fc часть IgG1 или IgG3 предпочтительно человека или нечеловеческого примата, более предпочтительно IgG1 человека.

[0099] Типичными примерами терапевтических антител по данному изобретению являются ритуксимаб, цетуксимаб, панитумумаб и трастузумаб. Такие антитела можно использовать согласно клиническим протоколам, которые утверждены для использования у человеческих субъектов. Дополнительные конкретные примеры терапевтических антител включают, например, алемтузумаб, эпратузумаб, базиликсимаб, даклизумаб, лабетузумаб, севиумаб, тувуримаб, паливизумаб, инфликсимаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб и кленоликсимаб. Специалист в данной области признает, что другие терапевтические антитела можно использовать в способах по изобретению.

[00100] В некоторых вариантах осуществления доза терапевтического антитела предпочтительно составляет 200-600 мг/м². Это включает 200 мг/м², 250 мг/м², 300 мг/м², 350 мг/м², 400 мг/м², 450 мг/м², 500 мг/м², 600 мг/м² и точки между. Предпочтительно, терапевтическое антитело вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин, или 120 мин вливания). Например, доза терапевтического антитела может составлять 400 мг/м², которые вводят в виде 120-минутного внутривенного вливания (например, максимальная скорость вливания 10 мг/мин).

[00101] В некоторых вариантах осуществления доза терапевтического антитела предпочтительно составляет 1-10 мг/кг. Это включает 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг, 6 мг/кг, 7 мг/кг, 8 мг/кг и точки между. Предпочтительно, терапевтическое антитело вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин или 120 мин вливаний). Например, доза терапевтического антитела может составлять 6 мг/кг, которые вводят в виде 30-, 60- или 90-минутного внутривенного вливания.

ЭРБИТУКС® (цетуксимаб)

[00102] В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой моноклональное антитело против EGFR (рецептор эпидермального фактора роста). В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой человеческое или гуманизированное моноклональное антитело против EGFR. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное моноклональное антитело против EGFR. Предпочтительно, моноклональное антитело представляет собой ЭРБИТУКС® (цетуксимаб), химерное (мышь/человек) моноклональное антитело и ингибитор рецептора эпидермального фактора роста (EGFR).

[00103] Цетуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для лечения метастатического колоректального рака и рака головы и шеи. Колорекральный рак включает общепринятое медицинское определение, которое определяет колорекральный рак как медицинское состояние, отличающееся раком из клеток кишечника ниже тонкой кишки (т.е. толстая кишка (colon), включая слепую кишку, восходящую ободочную кишку, поперечную ободочную кишку, нисходящую ободочную кишку и сигмовидную кишку, и прямая кишка). В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют в комбинации с цетуксимабом для лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют в комбинации с цетуксимабом для лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы у пациентов, которые рефрактерны к химиотерапии на основе иринотекана.

[00104] Отдел головы и шеи представляет собой собрание множества органов, и основные очаги рака головы и шеи включают околоносовую пазуху, носоглотку, ротоглотку, ротовую полость, гортаноглотку, гортань и слюнные железы. Рак головы и шеи включает рак области головы или шеи в организме. Большинство раков головы и шеи представляют собой плоскоклеточные карциномы, но некоторые могут быть экзофильными или эндофильными. Примеры рака головы и шеи включают, но без ограничения, губы, ротовую полость (рот), язык, горло, трахею, носовую полость, околоносовые пазухи, глотку, гортань, щитовидную железу, слюнные железы и шейные лимфатические узлы шеи, и т.п.

[00105] В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют в комбинации с цетуксимабом для лечения локально или регионально распространенной плоскоклеточной карциномы головы и шеи. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют в комбинации с цетуксимабом для лечения рецидивирующей или метастатической плоскоклеточной карциномы головы и шеи, прогрессирующей после терапии на основе платины.

[00106] Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности цетуксимаба при лечении метастатического колоректального рака или рака головы и шеи. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности цетуксимаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, цетуксимаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

[00107] Доза цетуксимаба предпочтительно составляет 200-600 мг/м². Это включает 200 мг/м², 250 мг/м², 300 мг/м², 350 мг/м², 400 мг/м², 450 мг/м², 500 мг/м², 600 мг/м² и точки между. Предпочтительно, цетуксимаб вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин или 120 мин вливания). Например, доза цетуксимаба может составлять 400 мг/м², которые вводят в виде 120-минутого внутривенного вливания (например, максимальная скорость вливания 10 мг/мин).

[00108] Цетуксимаб можно вводить при более высокой начальной дозе, за чем следуют более низкие последующие дозы. Частота введения предпочтительно составляет один раз в неделю. Например, после начальной дозы цетуксимаба 400 мг/м², которую вводят в виде 120-минутого внутривенного вливания (например, максимальная скорость вливания 10 мг/мин), последующие недельные дозы могут составлять 250 мг/м², которые вливают в течение 60 минут (например, максимальная скорость вливания 10 мг/мин) до возникновения прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности.

ГЕРЦЕПТИН® (трастузумаб)

[00109] В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой моноклональное антитело против ErbB2 (HER2/neu). В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой человеческое или гуманизированное моноклональное антитело против ErbB2. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное моноклональное антитело против ErbB2.

[00110] В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело представляет собой ГЕРЦЕПТИН® (трастузумаб), гуманизированное моноклональное антитело, которое взаимодействует с рецептором эпидермального фактора роста 2 человека (рецептор HER2/neu). Рецептор HER2/neu является членом семейства белков ErbB, в более общем случае известного как семейство рецептора эпидермального фактора роста. Трастузумаб обращает эффекты сверхактивного рецептора HER2.

[00111] В некоторых вариантах осуществления трастузумаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения рака молочной железы. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют в комбинации с цетуксимабом для лечения пациентов с метастатическим раком молочной железы, опухоли которой сверхэкспрессируют белок HER2.

[00112] Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности трастузумаба при лечении рака молочной железы. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности трастузумаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, трастузумаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

[00113] Доза для трастузумаба предпочтительно составляет 1-10 мг/кг. Это включает 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг, 6 мг/кг, 7 мг/кг, 8 мг/кг и точки между. Предпочтительно, трастузумаб вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин или 120 мин вливания). Например, доза трастузумаба может составлять 6 мг/кг, которые вводят в виде 30-, 60- или 90-минутного внутривенного вливания.

[00114] Трастузумаб можно вводить при более высокой начальной дозе, за чем следуют более низкие последующие дозы или поддерживающая доза. Частота введения предпочтительно составляет один раз в неделю. Например, после начальной дозы трастузумаба 4 мг/кг, вводимой в виде 90-минутного внутривенного вливания, последующие еженедельные дозы могут составлять 2 мг/кг, которые вливают в течение 30 минут до возникновения прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности.

РИТУКСАН® (Ритуксимаб)

[00115] В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой моноклональное антитело против CD20. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой человеческое или гуманизированное моноклональное антитело против CD20. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное моноклональное антитело против CD20.

[00116] Предпочтительно, моноклональное антитело против белка CD20 представляет собой РИТУКСАН® (ритуксимаб). Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности трастузумаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, трастузумаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

[00117] Ритуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для лечения B-клеточных нарушений, таких как лимфомы, лейкозы и некоторые аутоиммунные нарушения (например, ревматоидный артрит).

[00118] Ритуксимаб уничтожает как нормальные, так и злокачественные B-клетки, которые имеют CD20 на своей поверхности. Ритуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для того, чтобы лечить заболевания, которые отличаются наличием слишком большого числа B-клеток, сверхактивных B-клеток или дисфункциональных B-клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности ритуксимаба при лечении B-клеточных нарушений, таких как лимфомы, лейкозы и некоторые аутоиммунные нарушения (например, ревматоидный артрит). Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности ритуксимаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, ритуксимаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

[00119] В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для того, чтобы лечить гематологические новообразования, такие как лейкозы и лимфомы.

[00120] Ритуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для того, чтобы лечить аутоиммунные заболевания, включая в качестве неограничивающих примеров идиопатическую аутоиммунную гемолитическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ITP), синдром Эванса, васкулит (например гранулематоз Вегенера), буллезные нарушения кожи (например, пузырчатку, пемфигоид), сахарный диабет 1 типа, синдром Шегрена и болезнь Девика.

[00121] Согласно некоторым вариантам осуществления, ритуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению для того, чтобы лечить гематологические злокачественные новообразования. Такие гематологические злокачественные новообразования включают, например, B-клеточную лимфому, острый миелогенный лейкоз и хронический лимфоцитарный лейкоз. Такое лечение ведет, например, к регрессу опухоли в животной модели или у человека. Регресс опухоли может включать, например, уничтожение клеток рака.

[00122] Соответственно, в одном из аспектов изобретение относится к способу уничтожения клеток рака, который включает введение определенного количества ритуксимаба и усилителя ADCC по настоящему изобретению в количествах, эффективных для того, чтобы уничтожить клетки рака в гематопоэтическом раке. Типы гематопоэтического рака включают, но без ограничения, B-клетки лимфомы, хронический лимфоцитарный лейкоз и острый миелогенный лейкоз.

[00123] В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения пациентов с рецидивирующей или рефрактерной, низкой степени или фолликулярной, CD20-позитивной, B-клеточной, неходжкинской лимфомы.

[00124] В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения первой линии фолликулярной, CD20-позитивной, B-клеточной неходжкинской лимфомы в комбинации с CVP химиотерапией.

[00125] В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения ревматоидного артрита. Кроме того, в комбинацию можно добавлять метотрексат. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и с метотрексатом для снижения признаков и симптомов у взрослых пациентов с ревматоидным артритом с активностью от умеренной до тяжелой. В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и с метотрексатом для снижения признаков и симптомов у взрослых пациентов с ревматоидным артритом с активностью от умеренной до тяжелой, которые имели недостаточный ответ на терапию одним или более антагонистами TNF.

[00126] Доза ритуксимаба предпочтительно составляет 200-1200 мг/м². Это включает 200 мг/м², 250 мг/м², 300 мг/м², 350 мг/м², 375 мг/м², 400 мг/м², 450 мг/м², 500 мг/м², 600 мг/м² 700 мг/м², 800 мг/м², 900 мг/м², 1000 мг/м², 1100 мг/м², 1200 мг/м² и точки между. Предпочтительно, ритуксимаб вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин или 120 мин вливания). Например, доза ритуксимаба может составлять 375 мг/м², которую вводят в виде 120-минутного внутривенного вливания, предпочтительно в течение 4 часов.

[00127] Частота введения ритуксимаба предпочтительно составляет один раз в неделю или в месяц и может продолжаться до возникновения прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности. В некоторых вариантах осуществления вводят 2-16 доз ритуксимаба (например, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 доз). В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб дают в 375 мг/м² IV вливаний раз в неделю в течение 4 или 8 доз. В некоторых вариантах осуществления введение ритуксимаба представляет собой 4 дозы каждые 6 месяцев вплоть до 16 доз. В некоторых вариантах осуществления ритуксимаб дают в виде двух 1000 мг IV вливаний, разделенных 2 неделями.

ВЕКТИБИКС® (панитумумаб)

[00128] В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело представляет собой Вектибикс® (панитумумаб). Вектибикс® (панитумумаб) представляет собой рекомбинантное IgG2 κ моноклональное антитело человека, которое специфически связывается с рецептором эпидермального фактора роста человека (EGFR). Вектибикс® показан в качестве отдельного средства для лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы с прогрессированием заболевания при или после режимов химиотерапии, содержащей фторпиримидин, оксалиплатин и иринотекан.

[00129] Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности панитумумаба при лечении EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности панитумумаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, панитумумаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Другие варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности панитумумаба при лечении EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, панитумумаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

[00130] В некоторых вариантах осуществления панитумумаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения метастатической колоректальной карциномы. В некоторых вариантах осуществления панитумумаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению для лечения метастатической колоректальной карциномы с прогрессированием заболевания при или после режимов химиотерапии фторпиримидинов, оксалиплатином и иринотеканом.

[00131] Доза панитумумаба предпочтительно составляет 1-10 мг/кг. Это включает 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг, 6 мг/кг, 7 мг/кг, 8 мг/кг, 10 мг/кг и точки между. Предпочтительно, панитумумаб вводят посредством внутривенного вливания (например, в виде 30 мин, 45 мин, 60 мин, 90 мин или 120 мин вливания). Например, доза панитумумаба может составлять 4 мг/кг, которые вводят в виде 30-, 60- или 90-минутного внутривенного вливания. Дозы, более высокие, чем 1000 мг, следует вводить более 90 минут. Частота введения может составлять один раз каждые от 7 до 21 суток (например, один раз каждые 10, 14, 18 суток и т.п.). Частота введения предпочтительно составляет один раз каждые 14 суток.

[00132] Панитумумаб можно вводить при более высокой начальной дозе, за чем следуют более низкие последующие дозы или поддерживающая доза. Например, после начальной дозы панитумумаба 6 мг/кг, вводимой в виде 90-минутного внутривенного вливания, последующие еженедельные дозы могут составлять 2-4 мг/кг, которые вливают в течение 30 минут, до наступления прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности.

Комбинации с использованием терапевтических антител и химиотерапевтических средств

[00133] В определенных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу по изобретению вводят в комбинации с одним или более терапевтическими антителами и одним или более химиотерапевтическими средствами. «Химиотерапевтическое средство» представляет собой химическое соединение, которое можно использовать при лечении рака, независимо от механизма действия. Химиотерапевтические средства включают, но без ограничения, следующие группы соединений: цитотоксические антибиотики, антиметаболиты, антимитотические средства, алкилирующие средства, содержащие платину соединения, соединения мышьяка, ингибиторы ДНК топоизомеразы, таксаны, аналоги нуклеозидов, алкалоиды растений и токсины и их синтетические производные. Следующее представляет собой неограничивающие примеры конкретных соединений в этих группах. Алкилирующие средства включают азотистые иприты, такие как циклофосфамид, ифосфамид, трофосфамид и хлорамбуцил; нитрозомочевины, такие как кармустин (BCNU) и ломустин (CCNU); алкилсульфонаты, такие как бусульфан и треосульфан; и триазены, такие как дакарбазин. Содержащие платину соединения включают цисплатин, карбоплатин, ароплатин и оксалиплатин. Алкалоиды растений включают алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин; и таксоиды, такие как паклитаксел и доцетаксол. Ингибиторы ДНК топоизомеразы включают эпиподофиллины, такие как этопозид, тенипозид, топотекан, 9-аминокамптотецин, камптотецин и криснатол; и митомицины, такие как митомицин C. Антифолаты включают ингибиторы DHFR, такие как метотрексат и триметрексат; ингибиторы IMP дегидрогеназы, такие как микофеноловая кислота, тиазофурин, рибавирин, гидроксимочевина и EICAR; и ингибиторы рибонуклеотидредуктазы, такие как дефероксамин. Пиримидиновые аналоги включают аналоги урацила, такие как 5-фторурацил, флоксуридин, доксифлуридин и ратитрексед; и аналоги цитозина, такие как цитарабин (ara C), цитозин арабинозид и флударабин. Пуриновые аналоги включают меркаптопурин и тиогуанин. ДНК антиметаболиты включают 3-HP, 2'-дезокси-5-фторуридин, 5-HP, α-TGDR, афидиколин глицинат, ara-C, 5-аза-2'-дезоксицитидин, β-TGDR, циклоцитидин, гуаназол, инозин гликодиальдегид, мацебецин II и пиразолоимидазол. Антимитотические средства включают аллоколхицин, галихондрин B, колхицин, производное колхицина, доластатин 10, майтанзин, ризоксин, тиоколхицин и тритилцистеин.

[00134] Другие примеры химиотерапевтических средств для использования с усиливающей ADCC молекулой по изобретению включают ингибиторы изопренилирования; дофаминергические нейротоксины, такие как ион 1-метил-4-фенилпиридиния; ингибиторы клеточного цикла, такие как ставроспорин; актиномицины, такие как актиномицин D и дактиномицин; блеомицины, такие как блеомицин A2, блеомицин B2 и пепломицин; антрациклины, такие как даунорубицин, доксорубицин (адриамицин), идарубицин, эпирубицин, пирарубицин, зорубицин и митоксантрон; ингибиторы MDR, такие как верапамил; и ингибиторы Ca²⁺ АТФазы, такие как тапсигаргин.

[00135] В одном из вариантов осуществления усиливающую ADCC молекулу вводят в комбинации с одним или более из следующего: IFNoc, IL-2, дакарбазин (Bayer), темозоломид (Schering), тамоксифен (AZ), кармустин (BMS), мелфалан (GSK), прокарбазин (Sigma-Tau), винбластин, карбоплатин, цисплатин, таксол, циклофосфамид, доксорубин, ритуксан (Genentech/Roche), герцептин (Genentech/Roche), гливек, иресса (AZ), авастин (Genentech/Roche), эрбитукс (ImClone/Merck KGaA) или тарцева (Genentech/Roche).

[00136] В другом варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу по изобретению вводят в комбинации с одним или более из следующего: энедиин, такой как калихимицин и эсперамицин; дуокармицин, метотрексат, доксорубицин, мелфалан, хлорамбуцил, Ara-C, виндезин, митомицин C, цис-платина, этопозид, блеомицин и 5-фторурацил.

[00137] Подходящие токсины и химиотерапевтические средства, которые можно использовать в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по данному изобретению, описаны in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed. (Mack Publishing Co. 1995), и в Goodman and Oilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985). Другие подходящие токсины и/или химиотерапевтические средства известны специалистам в данной области.

[00138] В определенных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу вводят перед, одновременно с или после введения одного или более химиотерапевтических средств. В одном из вариантов осуществления усиливающую ADCC молекулу формулируют с одним или более химиотерапевтическими средствами. В другом варианте осуществления одно или более химиотерапевтических средств вводят в раздельной фармацевтической композиции. В соответствии с этим вариантом осуществления, одно или более химиотерапевтических средств можно вводить субъекту посредством тех же или отличающихся путей введения, как те, что используют для введения усиливающей ADCC молекулы.

ЭРБИТУКС® (цетуксимаб)

Рак головы и шеи

[00139] В определенном варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу по настоящему изобретению используют перед, одновременно с или после введения одного или более химиотерапевтических средств и терапевтического антитела. Терапевтическое антитело представляет собой моноклональное антитело против EGFR (рецептор эпидермального фактора роста). В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой человеческое или гуманизированное моноклональное антитело против EGFR. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное моноклональное антитело против EGFR. Предпочтительно, моноклональное антитело представляет собой ЭРБИТУКС® (цетуксимаб), химерное (мышь/человек) моноклональное антитело и ингибитор рецептора эпидермального фактора роста (EGFR).

[00140] Цетуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами для лечения рака головы и шеи. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют перед, одновременно с или после введения одного или более химиотерапевтических средств и цетуксимаба для лечения локально или регионально распространенной плоскоклеточной карциномы головы и шеи. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют перед, одновременно с или после введения одного или более химиотерапевтических средств и цетуксимаба для лечения рецидивирующей или метастатической плоскоклеточной карциномы головы и шеи, прогрессирующей после терапии на основе платины.

[00141] Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности цетуксимаба при лечении рака головы и шеи. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности цетуксимаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, цетуксимаба в комбинации с одним или более химиотерапевтическими средствами и усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

Колоректальный рак

[00142] Цетуксимаб можно использовать в комбинации с усилителем ADCC по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами для лечения метастатического колоректального рака. Колоректальный рак включает общепринятое медицинское определение, которое определяет колоректальный рак как медицинское состояние, характеризующееся раком клеток кишечника ниже тонкой кишки (т.е. толстая кишка (colon), включая слепую кишку, восходящую ободочную кишку, поперечную ободочную кишку, нисходящую ободочную кишку, и сигмовидную кишку, и прямую кишку). В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют перед, одновременно с или после введения цетуксимаба и одного или более химиотерапевтических средств для лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют перед, одновременно с или после введения цетуксимаба и одного или более химиотерапевтических средств для лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы у пациентов, которые рефрактерны к химиотерапии на основе иринотекана.

[00143] Изобретение также относится к способам увеличения эффективности цетуксимаба при лечении метастатического колоректального рака. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности цетуксимаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, цетуксимаба в комбинации с одним или более химиотерапевтическими средствами и усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению.

ГЕРЦЕПТИН® (трастузумаб)

[00144] Трастузумаб можно использовать с усилителем ADCC по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В определенном варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу по настоящему изобретению используют перед, одновременно с или после введения одного или более химиотерапевтических средства и терапевтического антитела. Терапевтическое антитело представляет собой моноклональное антитело против ErbB2 (HER2/neu). В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой человеческое или гуманизированное моноклональное антитело против ErbB2. В определенном варианте осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное моноклональное антитело против ErbB2.

[00145] В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело представляет собой ГЕРЦЕПТИН® (трастузумаб), гуманизированное моноклональное антитело, которое взаимодействует с рецептором эпидермального фактора роста 2 человека (рецептор HER2/neu). Рецептор HER2/neu является членом семейства белков ErbB, в более общем случае известного как семейство рецептора эпидермального фактора роста. Трастузумаб обращает эффекты сверхактивного рецептора HER2.

[00146] В некоторых вариантах осуществления трастузумаб вводят в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами для лечения рака молочной железы. В некоторых вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу используют перед, одновременно с или после введения цетуксимаба и одного или более химиотерапевтических средств для лечения пациентов с метастатическим раком молочной железы, опухоли которой сверхэкспрессируют белок HER2.

[00147] Согласно некоторым вариантам осуществления, изобретение относится к способам увеличения эффективности трастузумаба при лечении рака молочной железы. Таким образом, некоторые варианты осуществления предусматривают способ увеличения клинической эффективности трастузумаба, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, трастузумаба в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами.

Солидные опухоли

[00148] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы для управления ростом солидной опухоли (например, молочной железы, предстательной железы, меланомы, опухолевого роста в почке, ободочной кишке, шейке матки) и/или метастазов, которые включают введение эффективного количества соединения по изобретению нуждающемуся в этом субъекту. В некоторых вариантах осуществления субъектом является млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления млекопитающим является человек.

[00149] Термин «опухоль» используют для обозначения неопластического роста, который может быть доброкачественным (например, опухоль, которая не образует метастазов и не разрушает прилежащую нормальную ткань) или озлокачествленным/злокачественным (например, опухоль, которая проникает в окружающие ткани и обычно способна образовывать метастазы, может рецидивировать после попытки устранения и вероятно вызовет смерть организма-хозяина, если ее не лечить в достаточной мере). Как используют в настоящем документе, термины «опухоль», «опухолевый рост» или «опухолевая ткань» можно использовать взаимозаменяемо, и они относятся к ненормальному росту ткани, которая возникает из неконтролируемого прогрессирующего размножения клеток и не выполняет физиологической функции.

Гематологический рак

[00150] Гематологический рак представляет собой тип рака, который поражает кровь, костный мозг или лимфатические узлы. Поскольку они тесно связаны через иммунную систему, заболевание, поражающее одно из трех, также часто будет поражать другие. Гематологический рак может происходить из любой из двух основных клеточных линий дифференцировки крови: миелоидной и лимфоидной клеточных линий. Миелоидная клеточная линия обычно продуцирует гранулоциты, эритроциты, тромбоциты, макрофаги и тучные клетки; лимфоидная клеточная линия продуцирует B, T, NK и плазматические клетки. Лимфомы, лимфоцитарные лейкозы и миелома происходят из лимфоидной линии, тогда как острый и хронический миелогенный лейкоз, миелодиспластические синдромы и миелопролиферативные заболевания имеют миелоидное происхождение.

[00151] Гематологический рак, который можно лечить или улучшать с использованием композиций по настоящему изобретению, включает, но без ограничения, неходжкинскую лимфому (например, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лимфому из клеток центра фолликула, лимфоплазмацитоидную лимфому, лимфому краевой зоны, лимфому клеток мантии, иммунобластную лимфому, лимфому Беркитта, лимфобластную лимфому, периферическую T-клеточную лимфому, анапластическую крупноклеточную лимфому и T-клеточную лимфому кишечника), лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз и новообразования плазматических клеток, включая множественною миелому.

[00152] Настоящее изобретение относится к способам лечения или улучшения гематологического рака, который включают введение эффективного количества соединения по изобретению нуждающемуся в этом субъекту.

Рак с мутантным KRAS

[00153] Протоонкоген KRAS кодирует G-белок K-ras. Этот протоонкоген представляет собой гомолог онкогена Kirsten ras из семейства генов ras млекопитающих. Замена одной аминокислоты и, в частности, замена одного нуклеотида отвечает за активирующую мутацию. Мутантный белок KRAS вовлечен в различные злокачественные новообразования, включая аденокарциному легких, мукоидную аденому, карциному протоков поджелудочной железы и колоректальную карциному. Обнаружено, что несколько генеративных мутаций KRAS ассоциированы с синдромом Нунан и кардиофациокожным синдромом. Соматические мутации KRAS находят в большом количестве при лейкозах, раке ободочной кишки, раке поджелудочной железы и раке легких. Пациентам с мутацией KRAS предсказывают очень слабый ответ на некоторые терапевтические антитела при лечении рака, такого как колоректальный рак и рак легких.

[00154] Изобретение также относится к способам увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела при лечении рака с мутантным KRAS, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела, в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Терапевтическое антитело, например, представляет собой панитумумаб или цетуксимаб. Субъект, нуждающийся в этом, включает субъекты с раком, который идентифицирован как имеющие мутацию KRAS или предварительно идентифицирован как являющийся не отвечающим на лечение терапевтическими антителами. Субъектов, имеющих мутации KRAS, идентифицируют способами, известными в данной области, такими как пиросеквенирование, т. е. секвенирование удлинением нуклеотидов, генотипирование, рибонуклеаза, электрофорез в градиенте денатурирующего геля, карбодиимид, химическое расщепление, конформационный полиморфизм одиночной цепи, гетеродуплекс и способы севенирования (Ogino et al. Journal of Molecular Diagnostics, 7: 413-421, 2005).

Колоректальный рак с мутантным KRAS

[00155] Протоонкоген KRAS кодирует G-белок K-ras, который играет критическую ключевую роль в пути передачи сигнала Ras/митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK), расположенной ниже многих рецепторов факторов роста, включая EGFR, и который вовлечен в канцерогенез колоректального рака (CRC). Рекрутирование K-ras посредством активированного EGFR отвечает за активацию каскада серин-треонин киназ от клеточной поверхности к ядру. Мутации KRAS (в экзоне 2, кодоны 12 и 13) присутствуют более чем у одной трети пациентов с CRC и ведут к активации одного из наиболее важных путей клеточной пролиферации, пути Ras/MAPK, посредством индукции синтеза циклина D1. Следовательно, в присутствие мутации KRAS этот путь активации не может быть ингибирован в значительной степени посредством moAb против EGFR (цетуксимаб или панитумумаб), которые действуют выше белка K-ras. Мутация KRAS также вовлечена в другие злокачественные новообразования, включая аденокарциному легких, мукоидную аденому и карциному протоков поджелудочной железы.

Рак легких с мутантным KRAS

[00156] Рак легких остается ведущей причиной смерти от рака в США и предположительно вызвал 162000 смертей в США в 2006 году. Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), рецепторную тирозинкиназу, экспрессирует большинство немелкоклеточного рака легких (NSCLC). Сообщалось, что мутация KRAS, которая возникает в от 20% до 30% NSCLC, преимущественно в аденокарциномах (30%) и у курильщиков, ассоциирована со слабым ответом на EGFR-специфичные ингибиторы тирозинкиназ. Пациенты с KRAS-мутантными NSCLC показывали самые плохие клинические исходы, когда лечение проводили с использованием эрлотиниба (Тарцева, OSI-774; OSI Pharmaceuticals), низкомолекулярных ингибиторов, которые нацелены на тирозинкиназный домен EGFR, и химиотерапии.

Полиморфизм генов FcγR

[00157] Изобретение также относится к способам увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела у субъектов с нарушенной функцией ADCC, таких как субъекты с полиморфизмом FcγR, посредством введения нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела, в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Субъект, нуждающийся в этом, включает субъекты, которые идентифицированы как имеющие полиморфизм FcγR, такой как FcγR3a-V158F и FcγR2a-H131R, или предварительно идентифицированы как являющиеся не отвечающими на лечение терапевтическими антителами. Субъекты, имеющие полиморфизм FcγR, идентифицируют способами, известными в данной области, такими как динамическая аллель-специфическая гибридизация (DASH), микропланшетный диагональный электрофорез в геле (MADGE), пиросеквенирование, олигонуклеотид-специфичное лигирование, система TaqMan, а также различные технологии ДНК «чипов», такие как чипы Affymetrix SNP. Эти способы требуют амплификации целевой генетической области, типично посредством ПЦР. Другие новые разработанные способы, основанные на образовании малых сигнальных молекул посредством инвазивного расщепления, за чем следует масс-спектрометрия или иммобилизованные зонды, замыкающиеся в кольцо при лигировании, и амплификация по типу катящегося кольца, могут в итоге устранить необходимость ПЦР.

FcγR3a-V158F

[00158] rs396991 представляет собой SNP в гене FcγR3a рецептора IIIa с низкой аффинностью для Fc фрагмента IgG (CD16a). rs396991(T) кодирует фенилаланиновый (F) аллель, при этом (G) аллель кодирует вариант валин (V). В этом изобретении предусмотрены способы для выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в аминокислотном положении 158 в FcγR3a, где гомозиготный валин в аминокислотном положении 158 в FcγR3a указывает, что субъект теоретически более чувствителен к терапевтическому режиму, чем субъект без гомозиготного валина в аминокислотном положении 158 в FcγR3a.

FcγR2a-H131R

[00159] rs1801274 представляет собой SNP в гене FcγR2a рецептора IIa для Fc фрагмента IgG (CD32). SNP (rs1801274) 131G>A (или H131R) в положении 131 экзона 4 гена FcγRIIa, который ведет к замене гистидина аргинином. В этом изобретении предусмотрены способы для выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в FcγR2a в аминокислотном положении 131, где гомозиготный гистидин в аминокислотном положении 131 в FcγR2a указывает, что субъект теоретически более чувствителен к терапевтическому режиму, чем субъект без гомозиготного гистидина в аминокислотном положении 131 в FcγR2a.

Введение усиливающей ADCC молекулы

[00160] Усиливающую ADCC молекулу по изобретению предпочтительно формулируют для инъекции, наиболее предпочтительно подкожной инъекции. В определенных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу по изобретению формулируют для введения посредством внутрикожного, трансдермального, подкожного или внутримышечнго пути. В одном из вариантов осуществления усиливающую ADCC молекулу формулируют для внутривенного введения. Однако, усиливающую ADCC молекулу можно формулировать для любого подходящего пути введения, включая, в качестве примера, назальное (например, через аэрозоль), буккальное (например, сублингвальное), местное (т.е., введение посредством или кожи и/или поверхностей слизистых, включая поверхности дыхательных путей), интратекальное, внутрисуставное, внутриплевральное, интрацеребральное, внутриартериальное, интраперитонеальное, пероральное, интралимфатическое, интраназальное, ректальное или вагинальное введение, посредством перфузии через региональный катетер или посредством прямой инъекции в поражение.

[00161] Составы по настоящему изобретению содержат количество усиливающей ADCC молекулы, которое эффективно для предполагаемого использования. Конкретные дозы также выбирают, основываясь на множестве других факторов, включая возраст, пол, вид и/или состояние пациента. Эффективные количества также можно экстраполировать из кривых доза-эффект, получаемых из тестовых систем in vitro или из моделей на животных.

[00162] В определенных вариантах осуществления дозу усиливающей ADCC молекулы измеряют в единицах мг/кг массы тела. В других вариантах осуществления дозу измеряют в единицах мг/кг массы нежировых тканей тела (т.е. масса тела за вычетом содержания жира в организме). В других вариантах осуществления дозу измеряют в единицах мг/м² площади поверхности тела. В других вариантах осуществления дозу измеряют в единицах мг на дозу, вводимую пациенту. Любое измерение дозы можно использовать в сочетании с композициями и способами по изобретению и единицы дозирования можно преобразовывать с помощью средств, стандартных в данной области.

[00163] В некоторых вариантах осуществления доза усиливающей ADCC молекулы составляет 0,1-10 мг/м² (например, 0,1-3,9 мг/м², 0,1-1 мг/м², 0,1-2 мг/м², 0,1-4 мг/м², 2-4 мг/м², 2-6 мг/м², 2-8 мг/м²). Это включает 0,003 мг/м², 0,1 мг/м², 1 мг/м², 2 мг/м², 3 мг/м², 4 мг/м², 5 мг/м², 6 мг/м², 7 мг/м², 8 мг/м² и точки между. Частота введения предпочтительно составляет один раз каждые от 7 до 21 суток (например, один раз каждые 7, 10, 14, 18, 21 суток). В некоторых вариантах осуществления частота введения предпочтительно составляет 1, 2, или 3 раза каждые от 7 до 21 суток (например, один раз каждые 7, 10, 14, 18, 21 суток). Усиливающую ADCC молекулу можно давать до наступления прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности. В некоторых вариантах осуществления дают 2-20 доз (например, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 доз). Предпочтительным путем введения является подкожный.

[00164] Примеры режимов дозирования, которые можно использовать в способах по изобретению, включают, но без ограничения, раз в сутки, три раза в неделю (прерывающийся), один раз в неделю или каждые 14 суток. В определенных вариантах осуществления режимы дозирования включают, но без ограничения, дозирование раз в месяц или дозирование каждые 6-8 недель. В предпочтительном варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу состав по настоящему изобретению вводят посредством подкожной инъекции один раз в неделю или два раза в неделю в комбинации с подходящим способом лечения для лечения рака или инфекционного заболевания у субъекта, предпочтительно у человеческого субъекта.

[00165] Образцовые дозы усиливающей ADCC молекулы включают миллиграммовые количества на килограмм субъекта. В одном из вариантов осуществления доза составляет приблизительно от 0,02 до 10 мг/кг массы тела или приблизительно от 0,04 до 5 мг/кг массы тела. В конкретном варианте осуществления доза составляет приблизительно 0,05 мг/кг, приблизительно 0,1 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг массы тела субъекта.

[00166] В определенных вариантах осуществления способов лечения рака или инфекционного заболевания, усиливающую ADCC молекулу вводят субъекту в дозе приблизительно от 0,02 до 10 мг/кг массы тела или приблизительно 0,04 до 5 мг/кг массы тела субъекта. В конкретных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу вводят в дозе приблизительно 0,05 мг/кг, приблизительно 0,1 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг массы тела субъекта. В определенных дополнительных вариантах осуществления состав усиливающей ADCC молекулы вводят субъекту один раз в неделю или два раза в неделю. В конкретных вариантах осуществления суточная доза составляет по меньшей мере 0,05 мг, 0,50 мг, 1,0 мг, 5,0 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг, 30 мг или по меньшей мере 50 мг.

[00167] Рекомендованные дозы для внутрикожного, внутримышечного, интраперитонеального, подкожного, эпидурального или внутривенного введения находятся в диапазоне приблизительно от 0,02 до 10 мг/кг массы тела в сутки. Подходящие дозы для местного введения находятся в диапазоне приблизительно от 0,001 мг приблизительно до 50 мг на кг массы тела в сутки, в зависимости от области введения. Специалисты в данной области примут во внимание, что дозы для начального лечения, как правило, выше и/или частота введения выше по сравнению с поддерживающими режимами.

Наборы

[00168] Настоящее изобретение относится к фармацевтической упаковке или набору, содержащему один или более контейнеров, заполненных жидкой или лиофилизированной усиливающей ADCC молекулой. В предпочтительных вариантах осуществления жидкий или лиофилизированный состав является стерильным. В одном из вариантов осуществления набор содержит жидкий или лиофилизированный состав усиливающей ADCC молекулы, в одном или более контейнерах, и одно или более других профилактических или терапевтических средств, которые можно использовать для лечения рака или B-клеточных нарушений. Одно или более других профилактических или терапевтических средств могут находиться в том же контейнере, что и усиливающая ADCC молекула, или в одном или более других контейнерах. Предпочтительно, усиливающую ADCC молекулу формулируют в концентрации приблизительно от 0,5 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, приблизительно от 1 мг/мл до приблизительно 40 мг/мл или приблизительно от 2 мг/мл до приблизительно 15 мг/мл и состав является подходящим для введения посредством внутрикожного, трансдермального, подкожного или внутримышечного пути. Альтернативно, усиливающую ADCC молекулу формулируют для внутривенного введения. Усиливающую ADCC молекулу также можно формулировать для любого подходящего пути введения, включая, в качестве примера, назальное (например, через аэрозоль), буккальное (например, сублингвальное), местное (т.е., введение посредством или кожи и/или поверхностей слизистых, включая поверхности дыхательных путей), интратекальное, внутрисуставное, внутриплевральное, интрацеребральное, внутриартериальное, интраперитонеальное, пероральное, интралимфатическое, интраназальное, ректальное или вагинальное введение, посредством перфузии через региональный катетер, или посредством прямой инъекции в поражение. Предпочтительно, набор содержит усиливающую ADCC молекулу в стандартной дозированной форме. Наиболее предпочтительно стандартная дозированная форма находится в форме подходящей для того, чтобы предоставить стандартную дозу приблизительно от 0,02 до 10 мг/кг или приблизительно от 0,04 до 5 мг/кг массы тела субъекта, подлежащего лечению.

[00169] В определенных вариантах осуществления набор дополнительно содержит одно или более терапевтических моноклональных антител, например, но без ограничения, ритуксимаб, цетуксимаб, панитумумаб, трастузумаб, алемтузумаб, эпратузумаб, базиликсимаб, даклизумаб, лабетузумаб, севиумаб, тувуримаб, паливизумаб, инфликсимаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб и кленоликсимаб. Набор также может содержать одно или более химиотерапевтических средств. Набор по настоящему изобретению дополнительно содержит инструкции для использования при лечении рака (например, для использования жидких составов по изобретению отдельно или в комбинации с другим профилактическим или терапевтическим средством), а также информацию о побочных эффектах и дозах для одного или более путей введения. Необязательно с таким контейнером(ами) связано уведомление в форме, предусмотренной государственным органом, регулирующим производство, использование или продажу фармацевтическиих или биологических продуктов, это уведомление отражает одобрение производства, использование или продажи для введения человеку, выданное этим органом.

Композиции

[00170] Изобретение также включает композиции, содержащие усиливающую ADCC молекулу и терапевтическое антитело. Терапевтическим антителом, например, но без ограничения, является ритуксимаб, цетуксимаб, панитумумаб, трастузумаб, алемтузумаб, эпратузумаб, базиликсимаб, даклизумаб, лабетузумаб, севиумаб, тувуримаб, паливизумаб, инфликсимаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб или кленоликсимаб.

Определения

[00171] Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, в каком их обыкновенно понимает специалист в той области, к которой принадлежит это изобретение. Несмотря на то, что способы и материалы, схожие или эквивалентные тем, что описаны в настоящем документе, можно использовать при практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, указанные в настоящем документе, включены в данный документ в качестве ссылки в полном объеме. В случае противоречия, настоящее описание, включая определение, имеет приоритет. Вдобавок, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены в качестве ограничения. Другие признаки и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и формулы изобретения.

[00172] Термин «введение» или «совместное введение» относится как к одновременному, так и к последовательному введению активных средств.

[00173] «Субъект» или «пациент» в контексте настоящего изобретения предпочтительно представляет собой млекопитающее. Млекопитающее может являться человеком, приматом, не являющимся человеком, мышью, крысой, собакой, кошкой, лошадью или коровой, но без ограничения этими примерами. Субъект может быть самцом или самкой.

[00174] «Активность ADCC», как используют в настоящем документе, относится к активности для повреждения клетки-мишени (например, опухолевой клетки) посредством активации эффекторной клетки через связывание Fc-области антитела с рецептором Fc, существующим на поверхности эффекторной клетки, такой как клетка-киллер, естественная киллерная клетка, активированный макрофаг или тому подобное. Активность антител по настоящему изобретению относится к активности ADCC. Измерения активности ADCC и противоопухолевые эксперименты можно осуществлять в соответствии, используя любой анализ, известный в данной области.

[00175] Термин «усиливает антителозависимую клеточную цитотоксичность», «усиливает ADCC» (например, относящийся к клеткам), или «увеличивает ADCC» предназначен для того, чтобы включать любое измеримое увеличение лизиса клеток при контакте с терапевтическим антителом и усиливающей ADCC молекулой по сравнению с уничтожением клеток для той же клетки в контакте только с терапевтическим антителом. Например, увеличение лизиса клеток может составлять по меньшей мере приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%, 250%, 300%, 325%, 400% или 500%.

[00176] Термин «моноклональное антитело» или «композиция моноклонального антитела», как используют в настоящем документе, относится к получению молекул антител одномолекулярной композиции. Композиция моноклонального антитела проявляет одну специфичность связывания и аффинность для конкретного эпитопа.

[00177] Термин «антитело человека», как используют в настоящем документе, предназначен для обозначения антитела, имеющего вариабельные области, в которой области как каркаса, так и CDR получают из последовательностей иммуноглобулинов человека эмбрионального типа. Кроме того, если антитело содержит константную область, константную область также извлекают из последовательностей иммуноглобулинов человека эмбрионального типа. Антитела человека по изобретению могут содержать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов человека эмбрионального типа (например, мутации, вводимые посредством случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro или посредством соматической мутации in vivo).

[00178] Термин «моноклональное антитело человека» относится к антителам, проявляющим одну специфичность связывания, которые имеют вариабельные области, в которых области как каркаса, так и CDR получены из последовательностей иммуноглобулинов человека эмбрионального типа. В одном из вариантов осуществления моноклональные антитела человека получают посредством гибридомы, которая содержит B-клетку, полученную от трансгенного животного, не принадлежащего к человеку, например, трансгенной мыши, которое имеет геном, содержащий человека трансген тяжелой цепи и трансген легкой цепи, которую слили с иммортализованной клеткой. Термин «моноклональное антитело человека», как используют в настоящем документе, также включает все антитела человека, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют с помощью рекомбинантных средств, такие как (a) антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным по генам иммуноглобулинов человека, или гибридомы, полученной из них (дополнительно описано ниже), (b) антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для того, чтобы экспрессировать антитело человека, например, из трансфектомы, (c) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител человека, и (d) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные с помощью любых других средств, в которых участвует сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов человека в другие последовательности ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные области, в которых области каркаса и CDR получены из последовательностей иммуноглобулинов человека эмбрионального типа. Однако в определенных вариантах осуществления такие рекомбинантные антитела человека можно подвергать мутагенезу in vitro (или, когда используют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo) и, таким образом, аминокислотные последовательности областей V_H и V_L рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, несмотря на то, что получены из зародышевых последовательностей V_H и V_L человека и родственны им, могут не существовать в естественном зародышевом репертуаре антител человека in vivo.

[00179] Термин «гуманизированное антитело» предназначен для обозначения антитела, в котором последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающего, такого как мышь, встроены в каркасные последовательности человека. Дополнительные модификации каркасной области можно создавать в пределах каркасных последовательностей человека.

[00180] Термин «химерное антитело» предназначен для обозначения антитела, в котором последовательности вариабельных областей получены от одного вида, а последовательности константных областей получены от другого вида, таких как антитело, в котором последовательности вариабельной области получены из антитела мыши, а последовательности константной области получены из антитела человека.

[00181] «Мутировавший ген» или «мутация» или «функциональная мутация» или «мутант» относится к аллельной форме гена, которая способна изменять фенотип субъекта, имеющего мутировавший ген, по отношению к субъекту, который не имеет мутировавшего гена. Измененный фенотип, обусловленный мутацией, можно корректировать или компенсировать с помощью определенных средств. Если субъект должен быть гомозиготным по этой мутации, чтобы иметь измененный фенотип, мутация представляет собой так называемую рецессивную мутацию. Если одной копии мутировавшего гена достаточно для изменения фенотипа субъекта, мутация представляет собой так называемую доминантную мутацию. Если субъект имеет одну копию мутировавшего гена и имеет фенотип, который является промежуточным между фенотипом гомозиготного и фенотипом гетерозиготного субъекта (по этому гену), мутация представляет собой так называемую кодоминантную мутацию.

[00182] Термин «полиморфизм» относится к совместному существованию более чем одной формы гена или его части (например, аллельного варианта). Часть гена, для которой существует по меньшей мере две различных формы, т.е. две различные нуклеотидные последовательности, обозначают как «полиморфная область гена». Конкретная генетическая последовательность в полиморфной области гена представляет собой аллель. Полиморфная область может представлять собой один нуклеотид, идентичность которого различается в различных аллелях. Полиморфная область также может иметь длину в несколько нуклеотидов.

[00183] Термин «аллель дикого типа» относится к аллелю гена, который, когда присутствует в двух копиях у субъекта, ведет к фенотипу дикого типа. Для конкретного гена может существовать несколько различных аллелей дикого типа, поскольку определенные нуклеотидные замены в гене могут не влиять на фенотип субъекта, который имеет две копии гена с нуклеотидными заменами.

[00184] Как используют в этом раскрытии, формы единственного числа включают формы множественного числа до тех пор, пока контекст ясно не диктует иное. Таким образом, например, ссылка на «композицию» включает множество таких композиций, а также одну композицию, и ссылка на «терапевтическое средство» является ссылкой на одно или более терапевтических и/или фармацевтических средств и их эквивалентов, известных специалистам в данной области, и так далее. Таким образом, например, ссылка на «клетку-хозяина» включает множество таких клеток-хозяев, и ссылка на «антитело» представляет собой ссылку на одно или более антител и их эквивалентов, известных специалистам в данной области, и так далее. Кроме того, использование термина «содержит» в формуле изобретения и/или описании может обозначать «один», но также он предусматривает значение «один или более», «по меньшей мере один» и «один или более чем один».

[00185] На всем протяжении этой заявки термин «приблизительно» используют для того, чтобы указывать, что значение включает стандартное отклонение ошибки для устройства или способа, используемого для определения значения.

[00186] Использование термина «или» в формуле изобретения используют для обозначения «и/или», только если не будет в явной форме указано на отсылку к альтернативам или альтернативы не являются взаимоисключающими, несмотря на то, что раскрытие предусматривает определение, которое относится только к альтернативам и «и/или».

[00187] Как используют в этом описании и пункте(ах) формулы изобретения, слова «содержащий» (и любая форма содержащего, такая как «содержать» и «содержит»), «имеющий» (и любая форма имеющего, такая как «иметь» и «имеет») или «включающий» (и любая форма включающего, такая как «включает» и «включать») являются охватывающими или открытыми и не исключают дополнительных, не перечисленных элементов или стадий способов.

[00188] Термин «эффективное количество» относится к количеству, достаточному для того, чтобы обеспечить желаемый эффект против рака, противоопухолевый эффект или эффект против заболевания у животного, предпочтительно, у человека, страдающего от рака или клеточного заболевания. Желаемый противоопухолевый эффект включает, без ограничения, модуляцию опухолевого роста (например, задержку опухолевого роста), размер опухоли или метастаза, снижение токсичности и побочных эффектов, ассоциированных с конкретным средством против рака, улучшение или минимизацию клинического ухудшения или симптомов рака, продление выживаемости субъекта за пределами этого, который в ином случае ожидали бы в отсутствие такого лечения, и предотвращение опухолевого роста у животного, не имеющего формирования какой-либо опухоли перед введением, т.е. профилактическое введение.

Примеры

[00189] Понятно, что модификации, которые по существу не влияют на активность различных вариантов осуществления по данному изобретению также предусмотрены в определении изобретения, предоставленном в настоящем документе. Соответственно, следующие примеры предназначены для того, чтобы иллюстрировать, но не ограничивать настоящее изобретение. Несмотря на то, что описываемое в заявке изобретение описано подробно и со ссылкой на конкретные варианты его осуществления, специалисту в данной области будет ясно, что различные изменения и модификации можно выполнять в описываемом в заявке изобретении, не отступая от его сущности и объема. Таким образом, например, специалисты в данной области узнают или будут способны выяснить, используя не более, чем стандартные эксперименты, множество эквивалентов конкретных веществ и процедур, описанных в настоящем документе. Такие эквиваленты считают входящими в объем данного изобретения, и их охватывают следующая формула изобретения.

[00190] Пример 1. Усиление терапевтической эффективности терапии моноклональным антителом посредством усиления активности NK и ADCC, включая ADCC в генетически устойчивых популяциях.

[00191] Подкожный состав, содержащий усилитель ADCC {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-Ν,Ν-дипропилкарбоксамид использовали для экспериментов. Структура {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамида представляет собой следующее:

[00192] Стимуляция PBMC: мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMC) выделяли посредством центрифугирования в градиенте плотности Фиколла™ и ресуспендировали в RPMI, содержащей 2% термоинактивированной FBS. PBMC в концентрации от 1 до 3 миллионов клеток на мл инкубировали с 10-500 нМ усилителя ADCC в увлажненном CO₂ инкубаторе в течение 18-72 часов. Затем активированные PBMC использовали в качестве эффекторных клеток в анализах NK и ADCC.

[00193] Анализы NK и ADCC: PBMC, активированные с использованием усилителя ADCC, тестировали на способность усиливать уничтожение NK-чувствительной линии клеток-мишеней K562 или различных опухолевых клеток, покрытых моноклональными антителами. Клетки-мишени метили флуоресцентным красителем Calcein AM в течение 1 часа при 37°C в темном увлажненном CO₂ инкубаторе. Затем помеченные мишени (2×10⁵ клеток/мл) инкубировали с моноклональными антителами, такими как герцептин, ритуксан и эрбитукс в концентрации 5 мкг/мл в течение 30 минут при 4°C, после чего смывали любые несвязанные антитела. Активированные эффекторные клетки и меченые клетки-мишени инкубировали в 96-луночных планшетах для тканевой культуры в течение 4 часов при 37°C в темном увлажненном CO₂ инкубаторе в буфере для анализа, содержащем HBSS+Ca/Mg+5% FBS. Отношение эффектора к клеткам-мишеням (отношение E:T) варьировало, например, от 1:3 до 1:100. В конце инкубации клетки осаждали посредством центрифугирования и 100 мкл супернатанта переносили в 96-луночные плоскодонные черные планшеты (Microfluor 1 Black Flat Bottom Microtiter Plates - Thermo/Fisher #7605). Флуоресценцию количественно определяли с использованием флуоресцентного считывателя микротитровальных планшетов. Процент специфического лизиса вычисляли как (флуоресценция образца - спонтанная флуоресценция)×100/(100% флуоресценция - спонтанная). 100% флуоресценцию определяли в лунках, которые содержали меченые клетки-мишени и детергент, такой как 0,1% Tween-20 или Triton X-100. Спонтанную флуоресценцию определяли в лунках, которые содержали буфер для анализа и клетки-мишени, но не эффекторные клетки.

[00194] РЕЗУЛЬТАТЫ

[00195] Чтобы определить, произошло ли увеличение литической функции естественных киллерных клеток посредством усилителя ADCC, проводили серию исследований цитотоксичности. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMC) стимулировали с использованием усилителя ADCC, затем тестировали на способность лизировать NK-чувствительные клетки-мишени K562. Как показано на фиг. 1, усилитель ADCC усиливал лизис клеток-мишеней K562 дозозависимым образом. Эффекторные клетки PBMC, которые инкубировали с буферным контролем, лизировали менее 20% клеток-мишеней, тогда как PBMC, которые стимулировали с использованием 167 нМ усилителя ADCC, уничтожали вплоть до 45% клеток-мишеней, а PBMC, которые стимулировали с использованием 500 нМ усилителя ADCC, лизировали более 90% клеток-мишеней.

[00196] В дополнение к прямому лизису NK-чувствительных мишеней, PBMC, стимулированные с использованием усилителя ADCC, усиливали антителозависимую клеточную цитотоксичность. Как показано фиг. 2, усилитель ADCC усиливал опосредованную ритуксаном ADCC клеточной линии B-клеточной лимфомы HS-Sultan. Когда покрытые ритуксаном клетки HS-Sultan инкубировали с нестимулированными PBMC, уничтожение клеток варьировало от 9% приблизительно до 40% в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень (отношение E:T). В отличие от этого, уничтожение клеток достигало 80 и 90%, когда покрытые ритуксаном клетки-мишени инкубировали с PBMC, которые активировали посредством усилителя ADCC. Усиление ADCC зависело от дозы и увеличивалось с увеличением отношения E:T.

[00197] Для некоторых пациентов, которые экспрессируют только низкие уровни опухолевых антигенов, ADCC менее эффективна. Как показано на фиг. 3, усилитель ADCC усиливал лизис покрытых герцептином клеток-мишеней как из клеточной линии рака молочной железы SKBR3, которая экспрессирует высокие уровни опухолевого антигена Her2neu, так и из клеточной линии рака молочной железы MDA-MB-231, которая экспрессирует более низкие уровни опухолевого антигена. Когда покрытые герцептином клетки инкубировали с нестимулированными PBMC, уничтожение клеток составляло целых 40% в клеточной линии SKBR3, но лишь менее 15% в клеточной линии MDA-MB-231. Активация PBMC с использованием усилителя ADCC усиливала опосредованную герцептином ADCC в обеих клеточных линиях, уничтожая более чем 80% мишеней SKBR3 и приблизительно 40-60% мишеней MDA-MB-231. Ответы зависели от концентрации усилителя ADCC, используемого для стимуляции эффекторных клеток, и от отношения эффекторных клеток к клеткам-мишеням.

[00198] Пример 2. Полиморфизм FcγR и лечение рака

[00199] ADCC опосредована через иммунные эффекторные клетки, включая естественные киллерные клетки, которые захватывают Fc часть моноклонального антитела через специфичные рецепторы. Пациенты с однонуклеотидными полиморфизмами в этих рецепторах, такими как положение 158 в FcRγ3a и положение 131 в FcRγ2a, облают более плохим клиническим прогнозом, предположительно, из-за слабой ADCC в связи с более низкой аффинностью рецептора к моноклональному антителу. Предыдущие исследования обнаружили, что полиморфизм в молекуле FcγR3A (158F/V), который изменяет аффинность молекулы к IgG1, является важным фактором, определяющим клиническую эффективность, которую наблюдали при использовании некоторых моноклональных антител (mAbs), используемых при лечении рака. Чтобы определить, влияет ли этот обыкновенный полиморфизм на базовый ответ антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или ответ на усиливающую ADCC молекулу по настоящему изобретению (соединение VTX-2337), PBMC от доноров генотипировали по двум аллелям, кодирующим изоформы F и V, соответственно, и тестировали in vitro. Анализировали опосредованную ритуксимабом ADCC с использованием нестимулированных PBMC или стимулированных VTX-2337 PBMC от 15 доноров, включая 10 доноров с фенотипом FF или FV и 5 доноров с фенотипом VV.

[00200] Кровь брали у здоровых доноров и выделяли PBMC с использованием градиента Фиколла. PBMC активировали посредством их культивирования в присутствие 500 нМ VTX-2337 при 37°C в увлажненном 5% CO₂ инкубаторе в течение 48 часов. Затем активированные PBMC инкубировали с покрытыми ритуксимабом клетками HS-Sultan, загруженными при отношении 100:1 в течение 4 часов. Лизис определяли посредством измерения высвобождения флуоресцентного красителя Calcein AM из клеток HS-Sultan.

[00201] Как показано на фиг. 4, базовая ADCC в клетках от пациента с высокоаффинным генотипом составляла приблизительно 30%, тогда как базовая ADCC в клетках от пациента с более низкоаффинным генотипом составляла 10%. Стимуляция PBMC с использованием усилителя ADCC усиливала ADCC у обоих пациентов. У пациента с низкоаффинным генотипом ADCC увеличивалась с 10% до 30%. Таким образом, усилитель ADCC «спасал» от плохого генотипа и увеличивал ADCC до базовых уровней генотипа дикого типа.

[00202] На фиг. 5 показано, что FF или FV доноры имеют значительно сниженную опосредованную ритуксимабом ADCC активность, чем индивидуумы с фенотипом VV (специфичный лизис 20,5±2,5% для FF/FV против специфичного лизиса 31,7±2,9% для VV, p=0,017). Когда PBMC стимулировали с VTX-2337 перед смешиванием с опухолевыми клетками-мишенями, получаемые уровни ADCC были значительно повышены, как в группе FF/FV, так и в группе VV. ADCC повышали с 20,5±2,5% до 40,0±4,1% в низкоаффинной группе FF/FV (p=0,0007) и с 31,7±2,9% до 55,5±2,6% в высокоаффинной группе VV (p=0,0003). Значимые различия между стимулированными PBMC от доноров FF/FV и нестимулированными PBMC от доноров VV отсутствуют, что указывает на то, что присутствие VTX-2337 может увеличивать ADCC от доноров с низкоаффинным SNP до уровня, обычно достигаемого только с помощью PBMC от высокоаффинных доноров.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для применения терапевтического моноклонального антитела в комбинации с усиливающей антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) молекулой для увеличения ADCC. При этом усиливающая ADCC молекула представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид. Также предложены комбинация и набор для увеличения антителозависимой клеточной цитотоксичности. Группа изобретений обеспечивает усиление терапевтической активности моноклональных антител. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 пр.

1. Применение терапевтического моноклонального антитела в комбинации с усиливающей антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) молекулой для увеличения ADCC, где усиливающая ADCC молекула находится в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и где усиливающая ADCC молекула представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид.

2. Применение по п. 1, где терапевтическое моноклональное антитело представляет собой терапевтическое моноклональное антитело против CD20, терапевтическое моноклональное антитело против Her2 или терапевтическое моноклональное антитело против EGFR.

3. Применение по п. 1, где терапевтическое моноклональное антитело представляет собой ритуксимаб, трастузумаб, цетуксимаб или панитумумаб.

4. Применение по п. 1, где усиливающую ADCC молекулу вводят перед, одновременно с, после введения терапевтического антитела.

5. Применение по п. 1, где

(i) указанное моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело против ErbB2;

(ii) указанное моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело против CD20 или

(iii) указанное моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело против EGFR.

6. Применение по п. 5, где моноклональное антитело против ErbB2 представляет собой трастузумаб.

7. Применение по п. 5, где моноклональное антитело против CD20 представляет собой ритуксимаб.

8. Применение по п. 5, где моноклональное антитело против EGFR представляет собой цетуксимаб или панитумумаб.

9. Применение по любому из пп. 1-8, дополнительно включающее использование терапевтически эффективного количества одного или более химиотерапевтических средств.

10. Комбинация для увеличения антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), содержащая 2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3Н-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и терапевтическое антитело, выбранное из цетуксимаба и панитумумаба.

11. Комбинация по п. 10, дополнительно содержащая одно или более химиотерапевтических средств.

12. Набор для увеличения антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), содержащий {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одно или более терапевтических моноклональных антител, выбранных из группы, состоящей из цетуксимаба и панитумумаба.

13. Набор по п. 12, дополнительно содержащий одно или более химиотерапевтических средств.

14. Набор по пп. 12 и 13, дополнительно содержащий инструкции по применению при лечении рака.