СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ЖЕЛТУХЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2631596C1

Изобретение относится к экспериментальным исследованиям и может быть использовано в клинической практике.

Известен способ прогнозирования прогрессирования печеночной недостаточности (ПН) при внутрипеченочном холестазе (Патент РФ №2154276, G01N 33/68, Бюл. №22, 10.08.2000 г.), включающий биохимическое исследование сыворотки крови. Определяют отношение желчных кислот (ЖК) к холестерину (ХС), ЖК к триглециридам (ТГ), ЖК к липопротеидам низкой плотности (ЛПНП), ЖК к липопротеидам высокой плотности (ЛПВП). При значении ЖК/ХС у больных с печеночной недостаточностью класса А менее 3, класса В от 3 до 8, класса С более 8; и при значении ЖК/ТГ у больных с печеночной недостаточностью класса А менее 20, класса В 20-30 и класса С более 30; при значениях ЖК/ЛПНП у больных с печеночной недостаточностью класса А менее 5, класса В 5-10, класса С более 10; при значениях ЖК/ЛПВП у больных с печеночной недостаточностью класса А менее 20, класса В 20-50, класса С более 50 прогнозируют прогрессирование печеночной недостаточности. Недостатком этого способа является определение значений только ЖК. К рутинным методам диагностики печеночной недостаточности при внутрипеченочном холестазе относится определение значений билирубина, аспартатаминотрансферазы (АСТ), аланинаминотрансферазы (АЛТ), гаммаглутамилтрансфе разы (ГГТ), щелочной фосфотазы (ЩФ).

Известен при диагностике различной патологии с применением АСМ способ определения степени злокачественности рака молочной железы (заявка РФ №2012120249, G01N 33/48, Бюл. №3, 27.01.2014 г.), включающий проведение тонкоигольной пункционной аспирационной биопсии узлов молочной железы под контролем ультразвукового исследования. Из полученных пунктатов готовят мазки и проводят атомно-силовую микроскопию (АСМ), при этом определяют высоту цитоплазмы клетки и высоту ядра клетки с последующим вычислением соотношения высоты ядра к высоте цитоплазмы клетки, также определяют форму и размер ядрышек, проводят оценку полученных данных: для высокодифференцированного рака молочной железы характерно преобладание ядрышек цилиндрической формы с диаметром 0,6 мкм, соотношение высоты ядра к высоте цитоплазмы составляет 2,9 мкм; для умеренно-дифференцированного рака молочной железы характерно преобладание ядрышек цилиндрической формы с диаметром 3 мкм, соотношение высоты ядра к высоте цитоплазмы составляет 3,7 мкм; при низкой степени дифференцировки рака молочной железы ядрышки различной формы, диаметр их составляет 2 мкм, соотношение высоты ядра к высоте цитоплазмы - 3,2 мкм. Определять печеночную недостаточность лишь по одному показателю нельзя, для диагностики этой патологии необходима совокупность показателей: биохимические исследования, гистологическое исследование, АСМ.

Задача предлагаемого способа: раннее прогнозирование развития печеночной недостаточности при механической желтухе.

Поставленную задачу осуществляют за счет того, что дополнительно проводят приготовление мазков крови с последующим сканированием эритроцитов методом полуконтактной атомно-силовой микроскопии и измерения их параметров, затем определяют индекс печеночной недостаточности по формуле:

где Бил - показатель значения билирубина,

ГГТ - показатель значения гаммаглютамилтрасферазы,

АЛТ - показатель значения аланинаминотрансферазы,

АСТ - показатель значения аспартатаминотрасферазы.

ΔV - относительный объем эритроцита, который определяют как:

ΔV=V/V0,

где V - объем эритроцита в эксперименте, a V0 - объем эритроцита в норме, оба объема вычисляют по данным атомно-силовой микроскопии,

и при ИПН=0,5 и выше прогнозируют риск развития печеночной недостаточности.

Для подтверждения наличия печеночной недостаточности было выполнено гистологическое исследование ткани печени при разной степени тяжести МЖ.

Способ осуществляют следующим образом: у экспериментального животного при разной степени тяжести МЖ берут периферическую кровь, определяют биохимические показатели: билирубин, гаммаглутаминтрансфераза (ГГТ), аспартатаминотрансферазу (ACT), аланинаминотрасферазу (АЛТ, делают нативный мазок крови для проведения АСМ. Рассчитывают ИПН по вышеприведенной формуле.

В соответствии с полученными данными, экспериментальные животные в соответствии с упрощенной классификацией Э.И. Гальперина от 2012 г., разделены на 4 группы. В 1-ю группу вошли животные без оперативного вмешательства, служившие контрольной группой, где значения билирубина составляет до 5 мкмоль/л, ГГТ до 32 ед/л, значения относительного объема эритроцита (V) не превышает 1, АЛТ до 1,3 мкмоль/л, ACT до 1,1 мкмоль/л. Во 2-ю группу вошли животные со степенью тяжести МЖ класса А, где значения билирубина составляет от 5 до 15 мкмол/л, ГГТ от 32 до 99 ед/л, АЛТ от 1,3 до 2,3 мкмоль/л, ACT от 1,1 до 2,3 мкмоль/л, V От 1 до 1,2; в 3-ю - класса В: значение билирубина от 15-50 мкмол/л, ГГТ от 99 до 330 ЕД, АЛТ от 2,3 до 2,8 мкмоль/л, ACT от 2,3 до 2,9 мкмоль/л, V от 1,2 до 1,43, и в 4-ю класса С, со значениями билирубина от 50 мкмол/л и выше, ГГТ от 330 ЕД и выше, АЛТ от 2,8 мкмоль/л и выше, ACT от 2, 9 мкмоль/л и выше, V от 1,43 и выше (табл. 1).

Как видно из табл. 1, при ИПН=0,5 и выше прогнозируют развитие печеночной недостаточности при механической желтухе.

Для подтверждения этого у экспериментальных животных с разными классами механической желтухи была выполнена биопсия печени и сопоставлены данные биохимического и гистологического исследований, а также данные АСМ.

На рис. 1.1, 1.2 отображены препараты срезов ткани печени экспериментальных животных контрольной группы. На рис. 1.1 видны печеночная долька, портальные тракты без склероза и воспаления. Окраска Г-Э. x100. Портальные тракты тонкие, правильные, обрамляют печеночные дольки. Желчные протоки сохранены, не пролиферируют. Лимфоидная инфильтрация портальных трактов минимальная, представленная рассеянными лимфоцитами и плазматическими клетками.

Гистоархитектоника расположения гепатоцитов сохранена. Гепатоциты обычного строения, с очаговой невыраженной вакуолизацией цитоплазмы. Центральные вены не расширены. В просвете синусоидов определяется стояние единичных лимфоцитов и нейтрофилов. На рис. 1.2 - портальный тракт без склероза и воспаления. Желчные протоки сохранены. Окраска PAS. Х200. При окраске срезов PAS-реакцией определяются едитничные гепатоциты в состоянии апоптоза, что свидельствует о нормальном строении ткани печени.

На рис. 2.1, 2.2 препараты срезов ткани печени экспериментальных животных с МЖ класса А. Рис. 2.1 - портальный тракт с воспалительной инфильтрацией лимфоцитами и плазмоцитами. Единичные лимфоциты в эпителии желчного протока, пролиферация эпителия желчного протока. Г-Э. x100. Определяется склероз и утолщение портальных трактов, а так же перипортальных полей. Имеется воспалительная инфильтрация портальных трактов, в большинстве полей зрения слабая, в единичных полях зрения достигает умеренных значений. Инфильтрация представлена лимфоцитами и плазматическими клетками, с примесью единичных нейтрофилов и макрофагов. Инфильтрация внутрипортальная, не проникает за границы триады, ступенчатых и мостовидных некрозов в препаратах - нет. Желчные протоки в портальных трактах сохранены, очагово имеется проникновение лимфоцитов через базальную пластинку на эпителий желчных протоков, пролиферация эпителия с образованием сосочков.

Гистоархитектоника расположения гепатоцитов сохранена. Гепатоциты обычного строения, с очаговой невыраженной вакуолизацией цитоплазмы. Центральные вены немного расширены, стенки центральных вен с признаками невыраженного склероза и отека. В просвете синусоидов определяется стояние единичных лимфоцитов и нейтрофилов. На рис. 2.2 - воспалительная инфильтрация портальных трактов, представлена лимфоцитами и плазматическими клетками, с примесью единичных нейтрофилов и макрофагов. PAS. x200. При окраске срезов PAS-реакцией определяются единичные гепатоциты в состоянии апоптоза. При исследовании паренхимы печеночных долек определяются внутридольковые некрозы отдельных гепатоцитов, очаговая пролиферация клеток Купфера. Полученные данные свидетельствуют о незначительном нарушении в ткани печени.

На рис. 3.1, 3.2 препараты срезов ткани печени экспериментальных животных с МЖ класса В. На рис. 3.1 - портальный тракт с явлениями фиброза, очаговым полиморфно-клеточным воспалительным инфильтратом. Внутридольковые воспалительные инфильтраты. Очаговая пролиферация холангиол. Г-Э x100. Определяются признаки ПН: склероз и утолщение портальных трактов, а так же перипортальных полей с образованием портальных септ. В портальных трактах имеется очаговая пролиферация холангиол. Воспалительная инфильтрация портальных трактов не выражена, представлена лимфоцитами и плазматическими клетками.

В центролобулярных отделах так же определяется повышенное количество аргентофильных волокон, особенно по периферии центральных венул. Определяются явления внеклеточного холестаза - небольшие скопления желчи, без выраженной клеточной реакции по периферии. Рис. 3.2 - внутридольковое скопление желчи с клеточной реакцией по периферии. Гепатоциты с пенистой и вакуолизированной цитоплазмой, очаговой жировой инфильтрацией цитоплазмы. PAS х200. При исследовании паренхимы печеночных долек определяются внутридольковые некрозы отдельных гепатоцитов. Имеются рассеянные гепатоциты с жировой инфильтрацией цитоплазмы. В просвете синусоидов, очагово определяются скопления лимфоцитов и нейтрофилов, единичных эозинофилов, имеется небольшое количество апоптотических телец Каунсильмена. Полученные гистологические данные при МЖ класса В, свидетельствуют о наличии признаков ПН.

На рис. 4.1, 4.2 препараты срезов ткани печени экспериментальных животных с МЖ класса С. Рис. 4.1 - внутридольковое скопление желчи вблизи портального тракта, некрозы гепатоцитов в этой области, инфильтрация лимфоцитами и нейтрофилами. Г-Э x100. Определяется наличие печеночной недостаточности: склероз и утолщение портальных трактов, а также перипортальных полей с образованием портальных септ. В портальных трактах и фиброзных септах имеется очаговая пролиферация холангеол. Воспалительная инфильтрация портальных трактов от слабой до умеренной представлена лимфоцитами и плазматическими клетками, с примесью небольшого количества эозинофилов, нейтрофилов. По периферии фиброзированных портальных трактов гепатоциты формируют псевдоацинусы.

В центролобулярных отделах определяются выраженные явления внеклеточного холестаза - массивные скопления желчи в виде «озер», со сдавлением гепатоцитов к периферии, очаговыми некрозами гепатоцитов, расположенных среди желчи. По периферии скоплений желчи определяется макрофагальная реакция ткани - пролиферация клеток Купфера и инфильтрация нейтрофилами.

Рис. 4.2 - внутридольковые скопления желчи, с некрозом гепатоцитов в этих зонах, воспалительной инфильтрацией. PAS х200. При исследовании паренхимы печеночных долек определяются внутридольковые некрозы как отдельных гепатоцитов, так и групп гепатоцитов. Имеются рассеянные гепатоциты с жировой инфильтрацией цитоплазмы. В просвете синусоидов, очагово, определяются скопления лимфоцитов и нейтрофилов, единичных эозинофилов, имеется множество апоптотических телец Каунсильмена, что является гистологическим признаком ПН.

Предлагаемый способ позволяет по данным АСМ и биохимических исследований осуществить раннее прогнозирование развития печеночной недостаточности при механической желтухе, что требует в последующем своевременного патогенетического лечения, еще до начала появления клинических признаков печеночной недостаточности.

Похожие патенты RU2631596C1

название год авторы номер документа
Способ оценки эффективности применения лекарственного препарата "Лаеннек" на фармакологической модели неалкогольной жировой болезни печени с перегрузкой железом у экспериментальных животных 2024
  • Богачева Татьяна Евгеньевна
  • Громова Ольга Алексеевна
  • Гришина Татьяна Романовна
  • Калачева Алла Геннадьевна
  • Демидов Вадим Игоревич
  • Томилова Ирина Константиновна
  • Торшин Иван Юрьевич
RU2837019C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОСТРЕЗЕКЦИОННОЙ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У БОЛЬНЫХ С ОЧАГОВЫМИ ОБРАЗОВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ 2012
  • Плеханов Александр Николаевич
  • Товаршинов Александр Искрович
RU2488113C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ, ОБУСЛОВЛЕННЫХ ПОЛИВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ 2011
  • Якимчук Галина Николаевна
  • Потапова Валентина Борисовна
  • Лазебник Леонид Борисович
  • Лычкова Алла Эдуардовна
RU2496426C2
Способ лечения стеатогепатоза у экспериментальных животных 2023
  • Богачева Татьяна Евгеньевна
  • Диброва Екатерина Александровна
  • Громова Ольга Алексеевна
  • Гришина Татьяна Романовна
  • Калачева Алла Геннадьевна
  • Демидов Вадим Игоревич
  • Торшин Иван Юрьевич
  • Томилова Ирина Константиновна
RU2811886C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У НОВОРОЖДЕННЫХ 2006
  • Кирилочев Олег Константинович
RU2308218C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ СТРИКТУРЫ ОБЩЕГО ЖЕЛЧНОГО ПРОТОКА И СТЕНОЗА БОЛЬШОГО ДУОДЕНАЛЬНОГО СОСКА У ПАЦИЕНТОВ ПОСЛЕ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ ПО ПОВОДУ ХОЛЕЛИТИАЗА 2016
  • Серова Екатерина Валерьевна
  • Винник Юрий Семёнович
  • Стратович Денис Викторович
  • Котловский Юрий Васильевич
  • Якименко Анна Владимировна
RU2635962C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОГО ХОЛЕСТАЗА ПРИ ПОЛИВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ 2008
  • Лазебник Леонид Борисович
  • Якимчук Галина Николаевна
  • Потапова Валентина Борисовна
RU2397711C2
СПОСОБ ПРЕДИКЦИИ ТЯЖЁЛОГО ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ У ПАЦИЕНТОВ С НЕАЛКОГОЛЬНОЙ ЖИРОВОЙ БОЛЕЗНЬЮ ПЕЧЕНИ 2021
  • Ягода Александр Валентинович
  • Корой Павел Владимирович
  • Сляднев Сергей Александрович
  • Кравченко Юлия Александровна
  • Дудов Темирлан Русланович
  • Липов Андрей Васильевич
RU2765847C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ С 2014
  • Горелова Ирина Сергеевна
  • Скляр Лидия Федоровна
  • Маркелова Елена Владимировна
  • Гулевич Антон Павлович
RU2557927C1
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРА И ПРЕБИОТИКА, ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ 2006
  • Диковский Александр Владимирович
  • Рудой Борис Анатольевич
  • Дорожко Олег Валентинович
RU2318538C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 631 596 C1

Реферат патента 2017 года СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ЖЕЛТУХЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования развития печеночной недостаточности при механической желтухе. Дополнительно проводят приготовление мазков крови с последующим сканированием эритроцитов методом полуконтактной атомно-силовой микроскопии и измерения их параметров, затем определяют индекс печеночной недостаточности, учитывая показатель значения билирубина, гаммаглютамилтрасферазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрасферазы, относительный объем эритроцита, который определяют как ΔV=V/V0, где V - объем эритроцита в эксперименте, a V0 - объем эритроцита в норме, оба объема вычисляют по данным атомно-силовой микроскопии. При ИПН=0,5 и выше прогнозируют риск развития печеночной недостаточности. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития печеночной недостаточности при механической желтухе до начала появления клинических признаков. 4 ил., 1 табл.

Формула изобретения RU 2 631 596 C1

Способ прогнозирования развития печеночной недостаточности при механической желтухе в эксперименте, включающий биохимическое исследование, отличающийся тем, что дополнительно проводят приготовление мазков крови с последующим сканированием эритроцитов методом полуконтактной атомно-силовой микроскопии и измерения их параметров, затем определяют индекс печеночной недостаточности по формуле:

где Бил - показатель значения билирубина,

ГГТ - показатель значения гаммаглютамилтрасферазы,

АЛТ - показатель значения аланинаминотрансферазы,

АСТ - показатель значения аспартатаминотрасферазы,

ΔV - относительный объем эритроцита, который определяют как:

ΔV=V/V0,

где V - объем эритроцита в эксперименте, a V0 - объем эритроцита в норме, оба объема вычисляют по данным атомно-силовой микроскопии,

и при ИПН=0,5 и выше прогнозируют риск развития печеночной недостаточности.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2017 года RU2631596C1

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОСТРЕЗЕКЦИОННОЙ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У БОЛЬНЫХ С ОЧАГОВЫМИ ОБРАЗОВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ 2012
  • Плеханов Александр Николаевич
  • Товаршинов Александр Искрович
RU2488113C1
Самобалансирующийся реостатный многооборотный мост для управления следящим приводом 1949
  • Жданов Г.М.
SU86349A1
ОКОРОКОВ А.Н
и др., Диагностика болезней внутренних органов, Москва, Мед
Лит., 2000, с
Приспособление для регистрации колебаний почвы 1922
  • Гуров В.А.
SU475A1
DESIATERYK V, Prophylaxis of hepatic insufficiency in patients with mechanical jaundice
Klin Khir
Способ защиты переносных электрических установок от опасностей, связанных с заземлением одной из фаз 1924
  • Подольский Л.П.
SU2014A1
Способ получения молочной кислоты 1922
  • Шапошников В.Н.
SU60A1

RU 2 631 596 C1

Авторы

Воронова Елена Александровна

Пахомова Регина Александровна

Нагорнов Юрий Сергеевич

Кочетова Людмила Викторовна

Винник Юрий Семёнович

Даты

2017-09-25Публикация

2016-10-11Подача