Композиция, содержащая пищеварительные ферменты и питательные вещества, подходящая для энтерального введения Российский патент 2018 года по МПК A61K38/48 A61K38/46 A61K38/47 A61K47/06 C12N9/26 

Ссылка на предшествующую заявку

В данной заявке испрашивается приоритет согласно предварительной заявки на патент США №61/798027, поданной 15 марта 2013 г., описание которой полностью включено сюда посредством ссылки.

Область изобретения

Настоящее изобретение направлено на способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, содержащей продукт пищеварительных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, подходящей для энтерального введения. Способ включает получение пресуспензии продукта пищеварительных ферментов и ее добавление к питательной смеси. Согласно изобретению также предложен способ рационального и эффективного введения терапевтически эффективной дозы стабильной и гомогенной жидкой композиции, содержащей продукт пищеварительных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, посредством энтерального зонда.

Предшествующий уровень техники

Правильное дозирование лекарственных средств пациентам является важной медицинской задачей. У младенцев, детей младшего возраста и пожилых пациентов в частности, а также иногда во взрослой популяции, введение лекарственных средств и способы дозирования часто представляют собой серьезные трудности. Как хорошо известно в данной области, лекарственные средства представлены во многих формах (например жидких, твердых и комбинациях твердых форм в жидкостях), и их вводят пациентам множеством способов (например перорально, инъекцией, трансдермально). Тем не менее все еще существует потребность в оптимизации композиций, вводимых для заместительной терапии ферментами поджелудочной железы, для улучшения их эффективности и приверженности пациентов к их применению. Таким образом, для пациентов, страдающих от состояний, при которых обычно используют ферменты поджелудочной железы (такие как недостаточность внешнесекреторной функции поджелудочной железы (EPI), актуальной проблемой является получение добавки с ферментами поджелудочной железы, максимально эффективной в минимальной дозе и имеющей хорошо охарактеризованный профиль безопасности.

В случае недостаточности внешнесекреторной функции поджелудочной железы (EPI), от которой согласно оценкам FDA (Управление по контролю за качеством пищевых продуктов и лекартсвенных средств) страдают более 200000 американцев, пациенты не способны правильно переваривать пищу вследствие недостатка пищеварительных ферментов, вырабатываемых их поджелудочной железой. Этот недостаток пищеварительных ферментов приводит к таким расстройствам, как нарушение переваривания и нарушение всасывания питательных веществ, что приводит к недостаточности питания и другим связанным с ними нежелательным физиологическим состояниям. Эти расстройства распространены у лиц, страдающих муковисцидозом (CF) и другими состояниями, приводящими к нарушению внешнесекреторной функции поджелудочной железы, такими как рак поджелудочной железы, резекция поджелудочной железы и панкреатит. Без лечения эта недостаточность питания может быть жизнеугрожающей, особенно у младенцев и пациентов с CF, и эти расстройства приводят к нарушению роста у детей, ослаблению иммунного ответа и сокращению продолжительности жизни.

Другие состояния, при которых обычно используют ферменты поджелудочной железы, обычно представляют собой состояния, меняющие анатомию желудочно-кишечного тракта (обходной желудочный анастомоз, панкреатодуоденэктомия, резекция тонкой кишки и так далее) или нарушающие функционирование кишечника, что приводит к нарушению всасывания (целиакия, болезнь Крона, диабет, избыточный бактериальный рост и так далее), или другие вторичные физиологические состояния, нарушающие всасывание (опухоли желудочно-кишечного тракта, фармакологические агенты (то есть октреотид) и так далее).

Для по меньшей мере частичной коррекции EPI можно вводить пищеварительные ферменты, такие как панкрелипазные ферменты и другие продукты ферментов поджелудочной железы (PEP). Введение добавок с пищеварительными ферментами позволяет пациентам эффективнее переваривать пищу.

Панкрелипазные ферменты, используемые для лечения EPI, представляют собой главным образом комбинацию трех классов ферментов: липазы, протеазы и амилазы вместе с их различными ко-факторами и ко-ферментами. В норме эти ферменты образуются в поджелудочной железе и важны для переваривания жиров, белков и углеводов. Панкрелипазные ферменты обычно получают из поджелудочных желез свиней, хотя могут также быть использованы другие источники, например, описанные в U.S. 6051220, U.S. 2004/0057944, 2001/0046493 и WO 2006/044529. Эти ферменты катализируют гидролиз жиров с образованием глицерина и жирных кислот, крахмала с образованием декстрина и сахаров и белков с образованием аминокислот и их производных.

Ферменты поджелудочной железы демонстрируют оптимальную активность в близких к нейтральным и слабо щелочных условиях. В условиях желудка ферменты поджелудочной железы подвержены инактивации, что приводит к утрате биологической активности; липазы поджелудочной железы, играющие ключевую роль в лечении нарушения всасывания, особенно чувствительны к инактивации в желудке. Поэтому для определения стабильности ферментной композиции, содержащей липазу, обычно проводят мониторинг липазной активности.

Были разработаны композиции, содержащие пищеварительные ферменты, такие как панкрелипазные ферменты, для перорального введения в форме капсул (Zenpep®, Creon®, Cotazym® и Pancreaze®), таблеток (Viokace™, Viokase®), гранул (Eurobiol®). Тем не менее, если пациент не может проглатывать капсулы, каждую капсулу можно открыть и высыпать ее содержимое на небольшое количество пищи, обычно мягкой кислой пищи (такой как имеющееся в продаже яблочное пюре) и ввести пациенту перорально ложкой. Альтернативно, младенцам и детям такие препараты могут быть введены перорально с использованием шприцевого устройства, содержимое которого суспендировано в среде, которая может быть введена таким образом.

Также известно, что некоторым пациентам, включая детей и взрослых пациентов с EPI, необходимо питание через энтеральные зонды, включая энтеральные зонды для питания с меньшим просветом, такие как желудочные и эюнальные зонды для питания. Таким образом, существует очевидная потребность в энтеральном введении пищеварительных ферментов, таких как панкрелипазные ферменты, таким пациентам, которые неспособны принимать пищеварительные ферменты перорально. В тех случаях, когда пищеварительные ферменты представлены в форме частиц, они могут быть добавлены в питательную смесь для введения, тем не менее, возможные проблемы включают обеспечение эффективной ферментативной активности пищеварительных ферментов в отношении чувствительных к ним компонентов питательной смеси и предотвращение возможных препятствий энтеральному питанию, обусловленных частицами ферментов. Эти проблемы также возникают при использовании продуктов пищеварительных ферментов в форме таблеток.

В WO 2012/042372 раскрыты способы получения предварительно переваренной питательной смеси для введения пациенту, включая энтеральное введение. В этом источнике раскрыта механическая или химическая обработка покрытых энтеросолюбильной оболочкой продуктов ферментов поджелудочной железы для растворения оболочки и высвобождения ферментов для эффективного переваривания питательной смеси. Эта смесь очень сложна по своим ингредиентам и ферментативным реакциям, происходящим во время введения пациентам, может быть нестабильной и приводить к разделению липидной и водной фаз с высокой вероятностью осаждения нерастворимых компонентов. В этом источнике не раскрыто получения предварительно переваренной питательной смеси, стабильность и гомогенность которой была бы достаточной для энтерального введения.

Энтеральное питание можно проводить через: рот (орогастральный зонд или OG); нос (назогастральный зонд или NG); желудок (гастростома или GT); кишечник (еюностомия или JT); они могут быть использованы для доставки калорий и питательных веществ во время сна ночью или в дневное время. Назогастральный зонд для питания или "NG-зонд" проводят через нос и пищевод в желудок. С другой стороны, желудочные зонды для питания или "G-зонды" вводят через небольшой разрез на животе непосредственно в желудок, и они все чаще становятся стандартной процедурой для многих пациентов, таких как пациенты с муковисцидозом, демонстрирующие хроническое уменьшение массы тела, которым необходимо длительное энтеральное питание.

Независимо от пути проведения также используют более длинные зонды для питательной смеси (OG или NG) для доставки питательных веществ непосредственно в двенадцатиперстную или тощую кишку, минуя желудок.

Постановка зонда для питания зависит от множества условий, включая общее состояние здоровья и возраст пациента, тяжесть состояния, продолжительность постановки, тип зонда, способ постановки, комфортность для пациента, меры по борьбе с осложнениями, риск развития инфекции, финансовые соображения, доступность, доступ и применение. Так, для подобных применений доступно множество зондов нескольких размеров.

Краткосрочные полезные эффекты энтерального питания включают немедленное увеличение массы тела и прилив сил. Долгосрочные полезные результаты включают увеличение количества жировой ткани, тощей мышечной массы, улучшение физической формы, меньшее снижение массы тела при легочных инфекциях, большее ощущение контроля над массой тела и многие другие полезные эффекты.

Тем не менее, несмотря на очевидные полезные эффекты энтерального питания, введение через гастростому твердых лекарственных форм для перорального приема связано с рядом сложностей, возникающих при подготовке и введении, которые могут приводить к неэффективности активных фармацевтических ингредиентов. Также необходимо иметь доступную стабильную и гомогенную сложную композицию для обеспечения стабильной и полной доставки панкрелипазных ферментов через выходное отверстие шприца и через просвет G-зонда без засорения или застревания.

С учетом изложенного выше, существует потребность в быстром, практичном, дешевом, простом и эффективном способе получения питательной композиции с пищеварительными ферментами, которая может быть использована различными людьми и с различным оборудованием, конкретнее, композиций, стабильных и гомогенных в течение подходящего периода времени, которые можно было бы вводить энтерально без какого-либо разделения фаз и склонности к закупорке энтерального зонда для питания.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение направлено на способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, содержащей продукт пищеварительных ферментов и питательные вещества из определенной питательной смеси, подходящей для энтерального введения. Способ включает получение пресуспензии продукта пищеварительных ферментов и ее добавление в питательную смесь. Согласно изобретению также предложен способ рационального и эффективного введения терапевтически эффективной дозы стабильной и гомогенной жидкой композиции, содержащей продукт пищеварительных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, посредством энтерального зонда.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, содержащей продукт пищеварительных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, включающий получение суспензии продукта пищеварительных ферментов в водном растворе с последующим смешиванием указанной суспензии с жидкой питательной смесью, содержащей питательные вещества в определенном количестве. Эта жидкая композиция сохраняет ферментативную активность (липазную, амилазную, протеазную) по меньшей мере 8 часов после ее приготовления.

В одном воплощении изобретения получение суспензии пищеварительных ферментов включает стадии: а.1) уменьшения размера пищеварительных ферментов такими способами, как измельчение, растирание или разминание; а.2) добавления небольшого объема водного раствора; и а.3) смешивания водного раствора и пищеварительных ферментов с образованием суспензии. Полученную суспензию пищеварительных ферментов выдерживают в течение короткого периода времени перед ее добавлением к жидкой питательной смеси, имеющей определенное количество питательных веществ.

Продукт пищеварительных ферментов, используемый по изобретению, может быть представлен в любых подходящих лекарственных формах, включая таблетки, капсулы, гранулы или саше. Подходящий продукт пищеварительных ферментов, применимый по изобретению, предпочтительно представляет собой панкрелипазный фермент, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока. Продукт, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, представляет собой продукт, не предназначенный для сохранения в желудочном соке. Продукт, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, может быть не покрыт оболочкой или покрыт оболочкой. Если этот продукт покрыт оболочкой, оболочка растворяется в желудочном соке. Предпочтительно, оболочка представляет собой рН-независимый водорастворимый полимер. Оболочка может также представлять собой рН-зависимый водорастворимый полимер, но в этом случае он присутствует в очень небольшом количестве и/или распределен по продукту неравномерно, оставляя, таким образом, продукт легко и непосредственно доступным для желудочной среды, что приводит к отсутствию устойчивости к действию желудочного сока.

Термины "не покрытый оболочкой" или "покрытый оболочкой" указывают на отсутствие или присутствие, соответственно, полимерного слоя вокруг продукта. Примерами рН-независимых водорастворимых полимеров являются гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или поливиниловый спирт.Примерами рН-зависимых водорастворимых полимеров являются ацетатфталат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, шеллак, метилметакрилатные сополимеры и сополимеры метакриловой кислоты/метилметакрилата, сополимер метакриловой кислоты и этилакрилата (1:1) (такие как Eudragit® L30D55). Продукт панкрелипазных ферментов для применения по изобретению предпочтительно не покрыт оболочкой.

Продукт пищеварительных ферментов, применимый для настоящего изобретения, может представлять собой продукт панкрелипазных ферментов или лекарственную форму с немедленным высвобождением Примеры таких продуктов панкрелипазных ферментов включают Viokace™ (представленный на рынке США), Viokase® (представленный на рынке Канады), Eurobiol®, 12500 PhEur единиц липазы (представленный на рынке Франции) и Cotazym® (представленный на рынке Канады).

Термин "пищеварительный фермент", используемый здесь, означает фермент пищеварительного тракта, расщепляющий компоненты пищи, таким образом, чтобы обеспечить возможность их усвоения или всасывания в организме. Неограничивающие примеры пищеварительных ферментов включают панкрелипазные ферменты (также называемые панкрелипазными ферментами или панкреатином), липазу, колипазу, трипсин, химотрипсин, химотрипсин В, панкреатопептидазу, карбоксипептидазу А, карбоксипептидазу В, гидролазу эфира глицерина, фосфолипазу, гидролазу эфира стерина, эластазу, кининогеназу, рибонуклеазу, дезоксирибонуклеазу, α-амилазу, папаин, химопапаин, глютеназу, бромелаин, фицин, β-амилазу, целлюлазу, β-галактозидазу, лактазу, сахаразу, изомальтазу и их смеси.

Пищеварительные ферменты включают порошок, гранулы, таблетки, сферы, минитаблетки, микротаблетки, микрочастицы, микросферы, микрокапсулы, микропеллеты, а также любые частицы, имеющие диаметр вплоть до примерно 5 мм; частица может иметь любой размер или форму.

При использовании здесь термин "фермент поджелудочной железы" относится к любому из типов ферментов, присутствующих в секрете поджелудочной железы, такому как амилаза, липаза, протеаза, или к их смеси, или к любому экстракту, имеющему происхождение от поджелудочной железы и обладающему ферментативной активностью, такому как панкреатин.

Термины "панкрелипазные ферменты", или "ферменты панкрелипазы", или "панкреатин" означают смесь нескольких типов ферментов, включая амилазы, липазы и протеазы. Панкрелипазный фермент имеется в продаже, например, от Nordmark Arzneimittel GmbH или Scientific Protein Laboratories LLC.

Термин "липаза" означает фермент, катализирующий гидролиз липидов до глицерина и простых жирных кислот. Примеры липаз, подходящих для настоящего изобретения, включают, без ограничения, животную липазу (например свиную липазу), бактериальную липазу (например липазу Pseudomonas и/или липазу Burkholderia), грибковую липазу, растительную липазу, рекомбинантную липазу (например, полученную технологией рекомбинантных ДНК в подходящей клетке-хозяине, выбранной из клеток-хозяев, представляющих собой клетки любого из бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих, в культуре, или рекомбинантные липазы, содержащие аминокислотную последовательность, гомологичную или по существу идентичную встречающейся в природе последовательности, липазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, гомологичной или по существу идентичной встречающейся в природе нуклеиновой кислоте, кодирующей липазу, и так далее), синтетическую липазу, химически модифицированную липазу и их смеси. В широком смысле, термин "липиды" включает встречающиеся в природе молекулы, включая жиры, воски, стерины, жирорастворимые витамины (такие как витамины A, D, Е и K), моноглицериды, диглицериды, триглицериды, фосфолипиды и так далее.

Термин "амилаза" относится к гликозидгидролазным ферментам, расщепляющим крахмал, например α-амилазам, β-амилазам, γ-амилазам кислым α-глюкозидазам, амилазам слюны, таким как птиалин, и так далее. Амилазы, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, без ограничения, животные амилазы, бактериальные амилазы, грибковые амилазы, (например амилазу Aspergillus, такую как амилаза Aspergillus oryzae), растительные амилазы, рекомбинантные амилазы (например, полученные технологией рекомбинантных ДНК в подходящей клетке-хозяине, выбранной из клеток-хозяев, представляющих собой клетки любого из бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих, в культуре, или рекомбинантные амилазы, содержащие аминокислотную последовательность, гомологичную или по существу идентичную встречающейся в природе последовательности, амилазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, гомологичной или по существу идентичной встречающейся в природе нуклеиновой кислоте, кодирующей амилазу, и так далее), химически модифицированные амилазы и их смеси.

Термин протеаза обычно относится к ферментам (например протеиназам, пептидазам или протеолитическим ферментам) расщепляющим пептидные связи между аминокислотами белков; протеазы обычно идентифицируют по их каталитическому типу, например, пептидазы аспарагиновой кислоты, цистеиновые (тиоловые) пептидазы, металлопептидазы, сериновые пептидазы, треониновые пептидазы, щелочные или полущелочные протеазы, нейтральные и пептидазы с неизвестным каталитическим механизмом. Неограничивающие примеры протеаз, подходящих для применения в настоящем изобретении, включают сериновые протеазы, треониновые протеазы, цистеиновые протеазы, протеазы аспарагиновой кислоты (например плазмепсин), металлопротеазы и протеазы глутаминовой кислоты. Кроме того, протеазы, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, без ограничения, животные протеазы, бактериальные протеазы, грибковые протеазы (например протеазу Aspergillus melleus), растительные протеазы, рекомбинантные протеазы (например, полученные технологией рекомбинантных ДНК в подходящей клетке-хозяине, выбранной из клеток-хозяев, представляющих собой клетки любого из бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих, в культуре, или рекомбинантные протеазы, содержащие аминокислотную последовательность, гомологичную или по существу идентичную встречающейся в природе последовательности, протеазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, гомологичной или по существу идентичной встречающейся в природе нуклеиновой кислоте, кодирующей протеазу, и так далее), химически модифицированные протеазы и их смеси.

Панкрелипазные ферменты композиции по настоящему изобретению могут включать одну или более чем одну липазу (то есть одну липазу или две или более чем две липазы), одну или более чем одну амилазу (то есть одну амилазу или две или более чем две амилазы), одну или более чем одну протеазу (то есть одну протеазу или две или более чем две протеазы), а также смеси этих ферментов в различных комбинациях и соотношениях.

Липазные активности в композициях, применимых для настоящего изобретения, могут составлять от примерно 650 до примерно 45000 ME (USP-метод) (или 45000 USP единиц), от примерно 675 до примерно 825 ME, от примерно 2500 до примерно 28000 ME, от примерно 2700 до примерно 3300 ME, от примерно 4500 до примерно 5500 ME, от примерно 8000 до примерно 11000 ME, от примерно 13500 до примерно 16500 ME и от примерно 18000 до примерно 22000 ME, от примерно 22500 до примерно 27500 ME, от примерно 36000 до примерно 44000 ME, включая все диапазоны и поддиапазоны в пределах указанных значений. Кроме того, липазная активность может входить в диапазон от примерно 5000 PhEur единиц липазы до примерно 30000 PhEur единиц липазы; она может составлять примерно 5000, или примерно 10000, или примерно 12500, или примерно 15000, или примерно 20000, или примерно 30000, или примерно 40000 PhEur единиц липазы.

Амилазные активности в композициях могут составлять от примерно 1600 до примерно 6575 ME (USP) (или 6575 USP единиц), от примерно 6000 до примерно 225000 ME, например от примерно 6400 до примерно 26300 ME, от примерно 10700 до примерно 43800 ME, от примерно 21500 до примерно 87500 ME, от примерно 32100 до примерно 131300 ME, от примерно 42900 до примерно 175000 ME, от примерно 53600 до примерно 218700 ME, включая все диапазоны и поддиапазоны в пределах указанных значений.

Протеазные активности в композициях могут составлять от примерно 1250 до примерно 3850 ME (USP) (или 3850 USP единиц), от примерно 5000 до примерно 130000 ME, например от примерно 5000 до примерно 15400 ME, от примерно 8400 до примерно 25700 ME, от примерно 16800 до примерно 51300 ME, от примерно 25000 до примерно 77000 ME, от примерно 33500 до примерно 102800 ME, от примерно 41800 до примерно 128300 ME, включая все диапазоны и поддиапазоны в пределах указанных значений.

Липазная активность может находится в диапазоне от примерно 675 до примерно 825 ME (или 825 USP единиц), амилазная активность - от примерно 1600 до примерно 6575 ME, и протеазная активность - от примерно 1250 до примерно 3850 ME (USP). Или липазная активность может находится в диапазоне от примерно 2700 до примерно 3300 ME, амилазная активность - от примерно 6400 до примерно 26300 ME, и протеазная активность - от примерно 5000 до примерно 15400 ME (USP) (или 15400 USP единиц). Или липазная активность может находится в диапазоне от примерно 4500 до примерно 5500 ME, амилазная активность - от примерно 10700 до примерно 43800 ME, и протеазная активность - от примерно 8400 до примерно 25700 ME (USP) (или 25700 USP единиц). Или липазная активность может находится в диапазоне от примерно 9000 до примерно 11000 ME, амилазная активность - от примерно 21500 до примерно 87500 ME, и протеазная активность - от примерно 16800 до примерно 51300 ME (USP) (или 51300 USP единиц). Или липазная активность от примерно 13500 до примерно 16500 ME, амилазная активность от примерно 32100 до примерно 131300 ME, и протеазная активность от примерно 25000 до примерно 77000 ME (USP) (или 77000 USP единиц). Липазная активность может находится в диапазоне от примерно 18000 до примерно 22000 ME, амилазная активность - от примерно 42900 до примерно 175000 ME, и протеазная активность - от примерно 33500 до примерно 102600 ME (USP) (или 102500 USP единиц). Липазная активность может находится в диапазоне от примерно 22000 до примерно 27500 ME, амилазная активность - от примерно 53600 до примерно 218700 ME, и протеазная активность - от примерно 41800 ME до примерно 128300 ME (USP) (или 128300 USP единиц).

В одном воплощении настоящего изобретения в настоящем способе могут также быть использованы отдельные единицы, содержащие часть указанной выше амилазной активности. В способе по изобретению для получения суспензии используют эффективное количество панкрелипазных ферментов, которое может составлять в общей сложности 3000, примерно 4200, примерно 5000, примерно 6000, примерно 8000, примерно 10000, примерно 10440, примерно 10500, примерно 15000, примерно 16000, примерно 16800, 16800, примерно 20000, примерно 20880, примерно 21000, примерно 24000 или 25000 USP единиц липазы или кратное им количество, или примерно 5000, примерно 12500 или примерно 30000 PhEur единиц липазы или кратное им количество.

В одном воплощении изобретения получение суспензии пищеварительного фермента включает стадии: а.1) уменьшения размера пищеварительных ферментов (предпочтительно не являющихся устойчивым к действию желудочного сока) такими способами, как измельчение, растирание или разминание; а.2) добавления небольшого объема водного раствора; и а.3) смешивания с образованием суспензии. Полученную суспензию выдерживают в течение короткого периода времени перед ее добавлением к жидкой питательной смеси, имеющей определенное количество питательных веществ; этот период времени должен составлять более чем пять минут, более предпочтительно более чем 10 минут; предпочтительно, он составляет от примерно 15 до примерно 30 минут; предпочтительно, ее выдерживают в течение примерно 15 минут.

На первой стадии а.1) частицы панкрелипазных ферментов измельчают с получением мелкого порошка, на этой стадии не должно произойти снижения дозы, и эта стадия может быть проведена вручную (с использованием керамической ступки и пестика, кофейной чашки и металлической ложки) или с использованием устройства для измельчения пилюль. Устройства для измельчения могут представлять собой устройства винтового (S) типа, такие как GIMA® (S), Genius® (S), Apex Ultra Pills Crusher® (S). Предпочтительно использовать измельчитель пилюль ввиду воспроизводимости результатов как по размерам частиц, так и по сохранности дозы.

Растертые панкрелипазные ферменты затем добавляют в небольшой объем подходящего носителя для введения, перемешивание с которым позволяет получить гомогенную суспензию. Наполнитель для введения является водным раствором. Он может представляет собой: (1) очищенную или деионизированную воду, сравнимую со стерильной водой для непарентерального введения, за исключением несоответствия требованию стерильности; (2) стерильную воду; (3) физиологический раствор (0,9% NaCl); или (4) водопроводную воду. Предпочтительны очищенная или стерильная вода или физиологический раствор, поскольку они являются предпочтительными разбавителями для большинства лекарственных средств.

Для получения гомогенной суспензии пищеварительных ферментов важно использовать небольшой объем раствора (стадия а.2)) для получения концентрированной суспензии с высокой плотностью; этот объем должен быть менее 10 мл. Предпочтительно, пищеварительные ферменты должны быть суспендированы в небольшом объеме водного раствора с учетом соответствующей концентрации. В действительности, для дозы примерно 9190 или примерно 10400 USP единиц липазы предпочтительно используют объем 2,5 мл; для лекарственной формы с кратным количеством USP единиц используют соответствующий кратный объем. В качестве примера, одну таблетку панкрелипазных ферментов с 10440 USP единиц липазы (такую как Viokace™) суспендируют в 2,5 мл ( чайной ложки) очищенной воды; одну дозу панкрелипазных ферментов с 12500 PhEur единиц липазы (такую как Eurobiol®, 12500 PhEur единиц липазы соответствуют 9191 USP единице липазы; использован следующий коэффициент пересчета PhEur единиц липазы в USP-единицы липазы: 1 PhEur единица равна 1,36 USP единиц) суспендируют в 2,5 мл (¹/₂ чайной ложки) очищенной воды; одну дозу панкрелипазных ферментов с 20880 USP единиц липазы (такую как Viokace™) суспендируют в 5 мл (1 чайной ложке) очищенной воды. Следует сохранять стабильность ферментов, и для этого следует получать суспензию с высокой концентрацией; коэффициент разведения является ключевым фактором для стабильности, поскольку он непосредственно связан со снижением ферментативной активности.

Для получения гомогенной суспензии важно перемешать смесь и затем выдержать ее в течении короткого периода времени при комнатной температуре перед ее добавлением к жидкой питательной смеси; этот период времени должен составлять более чем пять минут, более предпочтительно более чем 10 минут; предпочтительно, он составляет от примерно 15 до примерно 30 минут. Примерно 15 минут являются особенно подходящими для получения суспензии, свободной от интактных частиц или фрагментов существенного размера, независимо от выбранного типа измельчения или типа измельчителя пилюль. Такой промежуток времени обеспечивает не только получение гомогенной суспензии, но также сохранение липазной активности. Действительно, всегда важно полностью сохранять дозу, независимо от используемой дозы панкрелипазных ферментов. Суспензию можно осторожно перемешивать ложкой или шпателем в течение нескольких секунд перед ее добавлением к питательной смеси.

Растертые панкрелипазные ферменты, суспендированные в водном растворителе, затем добавляют к жидкой питательной смеси, содержащей определенное количество питательных веществ, представляющих собой смесь углеводов, липидов, белков и воды, и затем встряхивают в течение подходящего периода времени, такого как примерно 15 секунд, перед введением композиции пациенту из мешка для питания через энтеральный зонд. Добавление суспензии к питательной смеси предпочтительно проводят непосредственно в мешке для питания (или мешке-дозаторе), уже содержащем питательную смесь.

Способ по изобретению позволяет сохранять заданную дозу, позволяя таким образом обеспечивать полную доставку продукта пищеварительных ферментов; действительно, ферментативная активность не снижается: при получении жидкой композиции не происходит ни разрушения, ни какого-либо механического удаления активных ферментов.

Настоящее изобретение также направлено на жидкую композицию панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+NF), представляющую собой стабильную и гомогенную дисперсию панкрелипазных ферментов в питательной смеси, имеющей определенное количество питательных веществ. Эта жидкая композиция остается стабильной в отношении ее ферментативной активности (липазной, протеазной и амилазной активности). Действительно, эта смесь сохраняет липазную активность, рассчитанную как процентное отношение липазной активности в композиции в заданное время (t) к липазной активности в питательной смеси в нулевой момент времени, то есть активности, измеренной сразу после добавления ферментов к питательной смеси. Через примерно 8 часов липазная активность составляет более чем примерно 90% или примерно 100%, протеазная активность составляет более чем примерно 90% или примерно 100%, и амилазная активность составляет более чем примерно 85% или примерно 100% при комнатной температуре. Степень сохранения активности ферментов в композиции пищеварительных ферментов и питательных веществ представляет собой отношение ферментативной активности в заданное время (т) к соответствующей активности, рассчитанной для смеси сразу после добавления, то есть в нулевой момент времени. Более того, в течение по меньшей мере такого же периода времени, продолжительностью по меньшей мере примерно 8-10 часов, в композиции не наблюдают разделения фаз (такого как разделение липидных и водных компонентов, осаждение белков). Таким образом, композиция по изобретению обеспечивает постоянство дозы и доставку гомогенных питательных веществ.

Эту композицию панкрелипазных ферментов и питательных веществ используют для диетологической коррекции дисфункции желудочно-кишечного тракта у детей и взрослых пациентов, и она подходит для введения непрерывной инфузией с использованием насоса для питания и G-зонда без существенного разделения фаз во время периода введения.

Питательная смесь, используемая в настоящем изобретении, может представлять собой смесь для взрослых/детей или смесь для младенцев, содержащую определенное количество питательных веществ, представляющих собой смесь углеводов, липидов, белков; полимерные компоненты, которые могут присутствовать в гидролизованной форме. Питательная смесь может дополнительно содержать другие ингредиенты, такие как микроэлементы и волокна.

Смесь, применимая по изобретению, представляет собой питательную смесь, имеющую определенное количество питательных веществ. Общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ составляет от примерно 10 до примерно 35 г/100 мл, конкретнее от примерно 12 до примерно 32. Когда питательная смесь представляет собой питательную смесь для взрослых/детей, общее содержание жиров, белков и углеводов составляет от примерно 20 до примерно 32 г/100 мл; и когда питательная смесь представляет собой детскую питательную смесь, общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ составляет от примерно 12 до примерно 14 г/100 мл.

Другое воплощение, применимое по изобретению, представляет собой питательную смесь, имеющую общее содержание жировых и белковых питательных веществ от примерно 4,5 до примерно 11,5 г/100 мл, конкретнее от примерно 4,9 до примерно 11,3. Когда питательная смесь представляет собой питательную смесь для взрослых/детей, общее содержание жиров и белков составляет от примерно 6,8 до примерно 11,3 г/100 мл; и когда питательная смесь представляет собой детскую питательную смесь, общее содержание жиров и белков составляет от примерно 4,9 до примерно 5,3 г/100 мл.

Другое воплощение, применимое по изобретению, представляет собой питательную смесь, имеющую общее содержание жировых питательных веществ от примерно 3,0 до примерно 7,0 г/100 мл, конкретнее от примерно 3,3 до примерно 6,8. Когда питательная смесь представляет собой питательную смесь для взрослых/детей, общее содержание жиров составляет от примерно 3,8 до примерно 6,8 г/100 мл; и когда питательная смесь представляет собой детскую питательную смесь, общее содержание жиров составляет от примерно 3,3 до примерно 3,7 г/100 мл.

Другое воплощение, применимое по изобретению, представляет собой питательную смесь, имеющую общее содержание белковых питательных веществ от примерно 1,3 до примерно 6,3 г/100 мл, конкретнее от примерно 1,4 до примерно 6,2. Когда питательная смесь представляет собой питательную смесь для взрослых/детей, общее содержание белков составляет от примерно 3 до примерно 6,2 г/100 мл; и когда питательная смесь представляет собой детскую питательную смесь, общее содержание белков составляет от примерно 1,4 до примерно 1,6 г/100 мл.

Часто используемые жидкие смеси для энтерального питания включают полимерные или другие специализированные смеси. Полимерные смеси, включая коммерческие молочные или безлактозные смеси, имеются в продаже и обычно обеспечивают полноценное сбалансированное питание. Специализированные смеси включают гидролизованный белок или иногда аминокислотные смеси, используемые у пациентов, у которых затруднено переваривание сложных белков.

Используют коммерческие жидкие смеси для энтерального питания для взрослых/детей, подходящие для настоящего изобретения, такие как, без ограничения, Peptamen® Junior 1, Peptamen® Junior 1.5, Ensure® Plus, Fortimel®, также могут быть использованы другие похожие продукты. Примерами коммерческих смесей для младенцев являются Humana® 1, Neolatte® 1 и Neolatte® 2.

Продукт пищеварительных ферментов, используемый в настоящем изобретении, представлен в терапевтически эффективном количестве. Панкрелипазные ферменты должны быть введены в жидкую питательную смесь; дозу можно адаптировать для отдельных пациентов на основании возраста, клинических симптомов. В способе по изобретению при смешивании с жидкой питательной смесью в качестве начальной дозы рекомендована доза приблизительно от примерно 1000 до примерно 5000, предпочтительно от примерно 1000 до примерно 4500 USP единиц липазы на г жира в питательной смеси.

Во время инфузии происходит модификация питательных веществ, обусловленная ферментативной активностью панкрелипазных ферментов в отношении липидов, белков и углеводов, при этом происходит образование переваренных питательных веществ, что обеспечивает пищеварение. Несмотря на такое изменение типов и соотношений питательных веществ и переваренных продуктов, композиция по изобретению остается гомогенной и стабильной на протяжении 8-10 часов.

Частным воплощением изобретения является способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии: а) получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии: а.1) уменьшения размера продукта пищеварительных ферментов; а.2) добавления водного раствора в количестве примерно 2,5 мл для продукта пищеварительных ферментов, имеющего примерно 10400 USP единиц липазы, или добавления соответствующего кратного количества раствора, для продукта, имеющего кратное количество USP единиц липазы, а.3) смешивания с образованием суспензии; и а.4) выдерживания ее в течение периода времени более чем примерно 5 минут (предпочтительно от примерно 5 минут до примерно 30 минут, предпочтительно примерно 15 минут); и б) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции; где питательная смесь имеет общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ от примерно 10 до примерно 35 г/100 мл, еще более предпочтительно от примерно 20 до примерно 32 г/100 мл; и где указанная композиция остается стабильной (не происходит разделения фаз) в течение по меньшей мере восьми часов после ее получения и ферменты имеют липазную активность более чем примерно 90% после примерно 8 часов хранения при примерно комнатной температуре, рассчитанную как процент единиц липазной активности, добавленных к жидкой питательной смеси.

Другим частным воплощением изобретения является способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии: а) получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии: а.1) уменьшения размера продукта пищеварительных ферментов; а.2) добавления водного раствора в количестве примерно 2,5 мл для продукта пищеварительных ферментов, имеющего примерно 10400 USP единиц липазы, или добавления соответствующего кратного количества раствора, для продукта, имеющего кратное количество USP единиц липазы; а.3) смешивания с образованием суспензии; и а.4) выдерживания ее в течение периода времени более чем примерно 5 минут (предпочтительно от примерно 5 минут до примерно 30 минут, предпочтительно примерно 15 минут); и б) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции; где питательная смесь имеет общее содержание жировых и белковых питательных веществ от примерно 4,5 до примерно 11,5 г/100 мл, еще более предпочтительно от примерно 6,8 до примерно 11,3 г/100 мл; и где указанная жидкая композиция остается стабильной (не происходит разделения фаз) в течение по меньшей мере восьми часов после ее получения и ферменты имеют липазную активность более чем примерно 90% после примерно 8 часов хранения при примерно комнатной температуре, рассчитанную как процент единиц липазной активности, добавленных к жидкой питательной смеси.

Другим частным воплощением изобретения является способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии: а) получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии: а.1) уменьшения размера продукта пищеварительных ферментов; а.2) добавления водного раствора в количестве примерно 2,5 мл для продукта пищеварительных ферментов, имеющего примерно 10400 USP единиц липазы, или добавления соответствующего кратного количества раствора, для продукта, имеющего кратное количество USP единиц липазы; а.3) смешивания с образованием суспензии; и а.4) выдерживания ее в течение периода времени более чем 5 минут (предпочтительно от примерно 5 минут до примерно 30 минут, предпочтительно примерно 15 минут); и б) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции; где питательная смесь имеет общее содержание жировых питательных веществ от примерно 3,0 до примерно 7,0 г/100 мл, еще более предпочтительно от примерно 3,8 до примерно 6,8 г/100 мл; и где указанная жидкая композиция остается стабильной (не происходит разделения фаз) в течение по меньшей мере восьми часов после ее получения и ферменты имеют липазную активность более чем примерно 90% после примерно 8 часов хранения при примерно комнатной температуре, рассчитанную как процент единиц липазной активности, добавленных к жидкой питательной смеси.

Другим частным воплощением изобретения является способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока, и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии: а) получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии: а.1) уменьшения размера продукта пищеварительных ферментов; а.2) добавления водного раствора в количестве примерно 2,5 мл для продукта пищеварительных ферментов, имеющего примерно 10400 USP единиц липазы, или добавления соответствующего кратного количества раствора, для продукта, имеющего кратное количество USP единиц липазы; а.3) смешивания с образованием суспензии; и а.4) выдерживания ее в течение периода времени более чем 5 минут (предпочтительно от примерно 5 минут до примерно 30 минут, предпочтительно примерно 15 минут); и б) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции; где питательная смесь имеет общее содержание белковых питательных веществ от примерно 1,3 до примерно 6,3 г/100 мл, еще более предпочтительно от примерно 3 до примерно 6,2 г/100 мл; и где указанная жидкая композиция остается стабильной (не происходит разделения фаз) в течение по меньшей мере восьми часов после ее получения и ферменты имеют липазную активность более чем примерно 90% после примерно 8 часов хранения при примерно комнатной температуре, рассчитанную как процент единиц липазной активности, добавленных к жидкой питательной смеси.

Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ подходит для введения младенцам, детям, взрослым, пожилым пациентам или другим пациентам, страдающим от EPI, позволяя проводить дозирование точно и с контролируемой дозой.

Настоящее изобретение также включает способ введения композиции пищеварительных ферментов (панкрелипазных ферментов) и питательных веществ по настоящему изобретению детям или взрослым пациентам. Он включает следующие стадии: а) уменьшение размера пищеварительных ферментов такими способами, как измельчение, растирание или разминание; б) добавление небольшого объема водного раствора; в) смешивание с образованием суспензии и выдерживание ее в течение периода времени более чем 5 минут; г) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью, имеющей определенное количество питательных веществ, с образованием композиции пищеварительного фермента и питательных веществ в мешке-дозаторе или в другом контейнере; д) дозирование композиции из мешка для питания пациенту через энтеральный зонд; перед дозированием композицию ферментов и питательных веществ можно осторожно перемешать.

В настоящем изобретении описан надежный способ, подходящий для введения жидкой композиции панкрелипазных ферментов и питательных веществ через гастростомические зонды или назогастральные зонды и обеспечения стабильной доставки дозы через просвет зонда без засорения или застревания и с сохранением проходимости зонда. Введение проводят через различные энтеральные зонды, выбираемые в зависимости от пациентов, от новорожденных и детей до взрослых пациентов. Успешный анализ величины диаметра, показанный здесь, демонстрирует, что при применении описанного способа введения приемлемо использование любого зонда большего диаметра того же типа и производителя.

Из предшествующего описания и экспериментальной части видно, что настоящее изобретение обеспечивает ряд важных преимуществ. Согласно изобретению предложен простой и быстрый способ получения смеси панкрелипазных ферментов и питательных веществ из определенной питательной смеси; она остается гомогенной в течение по меньшей мере восьми часов; липазная активность сохраняется после добавления суспендированных панкрелипазных ферментов к жидкой питательной смеси; липаза остается стабильной в композиции в течение периода времени более чем примерно восемь часов, и происходит эффективный липолиз.

Экспериментальные материалы

Панкрелипазные ферменты: USP-стандарт панкрелипазных ферментов, партия 8 (анализ амилазной активности: 344 USP единиц/мг, анализ протеазной активности: 358 USP единиц/мг), USP-стандарт панкрелипазных ферментов, партия 3 (анализ липазной активности: 93,3 USP единиц/мг).

Продукт панкрелипазных ферментов: Viokace™ (10440 или 20880 USP единиц липазы), продукт, представленный на рынке США; эксципиенты: кроскармеллоза натрия, коллоидный диоксид кремния, целлюлоза микрокристаллическая, стеариновая кислота, тальк; Viokase® (8000 или 16000 USP единиц липазы), продукт, представленный на рынке Канады; эксципиенты: кроскармеллоза натрия, коллоидный диоксид кремния, целлюлоза микрокристаллическая, стеариновая кислота, тальк; Eurobiol®, 12500-единиц липазы на дозу (20 г), представленный на рынке от Mayolyl Spindler; эксципиенты: целлюлоза микрокристаллическая, кросповидон, коллоидный безводный диоксид кремния, стеарат магния; оболочка: сополимер метакриловой кислоты и этилакрилата (1:1), триэтилцитрат, тальк, эмульсия симетикона.

Смесь для энтерального питания: Peptamen® Junior 1 Cal (Nestle, упаковка 250 мл, искусственный ванильный ароматизатор), Peptamen® Junior 1.5 Cal (Nestle, упаковка 250 мл, без ароматизаторов), Ensure® Plus (Abbott Italia, упаковка 250 мл, искусственный клубничный ароматизатор), Nutren® 2.0 (Nestle, упаковка 250 мл), TwoCal® HN (Abbott Nutrition, упаковка 237 мл) и Fortimel® (Nutricia, упаковка 200 мл).

Смесь для младенцев: Neolatte® 1 (Unifarm, смесь восстанавливают, как описано изготовителем), Neolatte® 2 (Unifarm, смесь восстанавливают, как описано изготовителем), Humana® 1 (Unifarm, упаковка 470 мл) и Nutramigen™ DHA & ARA (Enfamil, упаковка 946 мл).

Содержание питательных веществ (жиры + белки + углеводы) в смесях для энтерального питания и смесях для младенцев показано в Таблице 1.

Методы

Липазная активность

Измерение проводят методом, основанным на краткой методике анализа активности липазы, описанной в USP-статье панкрелипазных ферментов, которая основана на методе титрования жирных кислот, образуемых при гидролизе эстерифицированных жирных кислот в используемом субстрате (оливковом масле), при постоянном рН. Он основан на следующем принципе: липаза катализирует гидролиз триглицеридов, что приводит к образованию свободных жирных кислот (FFA). Ферментативную активность липазы определяют титрованием образуемых FFA с течением времени, и она может быть выражена в единицах: 1 ЕД=1 мкмоль образованных FFA в минуту. Реакцию проводят, поддерживая в экспериментальной системе стабильный показатель рН добавлением NaOH (титранта) при изменении показателя рН по сравнению с фиксированным значением (метод постоянного рН). Количествотитранта, добавляемого с течением времени, соответствует количеству FFA, образуемых из триглицеридов под действием липазы. Угол наклона кривой {добавленный титрант=f (объем (мл)/время (минуты))} указывает на ферментативную активность липазы.

Измерение протеолитической и амилолитической активности проводят согласно краткой методике анализа, описанной в USP-статье панкрелипазных ферментов.

Триглицериды экстрагируют гексаномгизопропанолом (3:2) с использованием холестерилпальмитата в качестве внутреннего стандарта и анализируют посредством HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография); пики идентифицируют, сравнивая все времена удержания со стандартным раствором триолеина.

Жирные кислоты экстрагируют гексаном:изопропанолом (3:2) с использованием стеарилового спирта в качестве внутреннего стандарта и анализируют посредством HPLC; пики идентифицируют, сравнивая времена удержания со стандартами жирных кислот, то есть линолевой кислотой, пальмитиновой кислотой, олиеновой кислотой и стеариновой кислотой.

Анализ белков. 1) Общее содержание белков определяют анализом Бредфорда. 2) Триптофан анализируют посредством HPLC с использованием 5-метилтриптофана в качестве внутреннего стандарта.

Анализ углеводов. 1) Короткоцепочечные сахара анализируют посредством HPLC с использованием ксилита в качестве внутреннего стандарта; пики идентифицируют, сравнивая все времена удержания со стандартами сахаров, то есть сахарозы, мальтозы и глюкозы. 2) Мальтодекстрины экстрагируют в присутствии Carrez I и Carrez II и анализируют посредством HPLC; пики идентифицируют, сравнивая все времена удержания со стандартами мальтодекстринов, то есть моногидрата мальтозы, мальтотриозы, мальтотетрозы, мальтопентозы, мальтогексозы и мальтогептозы.

Оборудование

Стандартное оборудование для проведения инфузионного введения (такое же, как используемое в клинических условиях или на дому, имитирующее обычный прием пищи) включает: мешок для питания (Kangaroo Joey™ Enteral Feeding Pump Sets), насос (Kangaroo™ ePump Enteral Feeding Pump) и G-зонд (Kimberly Clark MIC-KEY, длина стомы: 4,0 см, наружный диаметр: 12 Fr (12 Fr=0,33 мм). Для скорости инфузии при введении 10 мл/ч задают следующие параметры: скорость потока: 10 мл/ч, промывание 30 мл воды каждые 4 четыре часа. Для скорости инфузии при введении 125 мл/ч задают следующие параметры: скорость потока: 125 мл/ч, промывание 30 мл воды каждые 4 четыре часа.

Измельчение пилюль: (а) вручную, с использованием керамической ступки и пестика, кофейной чашки и металлической ложки; (б) измельчитель пилюль винтового (S) типа: GIMA (S), Genius (S), Apex Ultra Pills Crusher® (S).

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1. Суспендирование таблетки панкрелипазных ферментов в наполнителях для введения

Анализ прямой солюбилизации панкрелипазных ферментов (таблетки Viokase® с 8000 и 16000 USP единиц липазы) в физиологическом растворе и смеси для энтерального питания EF3 (Ensure® Plus) и EF6 (Fortimel®) проводят следующим образом: (1) перемешивание в лабораторном стакане (имитирующем кружку) с использованием шпателя (имитирующего домашнюю ложку) или (2) ручное встряхивание во флаконе (для имитации оригинальной упаковки смеси для энтерального питания). В фиксированном небольшом объеме наполнителя для введения таблетки (см. соответствующую дозу в Таблице 2) перемешивают вручную или встряхивают в течение 2 минут и выдерживают при комнатной температуре. Внешний вид таблеток оценивают визуально (см. Таблицу 2). При использовании физиологического раствора через 30 минут таблетка панкрелипазных ферментов образует мутную суспензию, в то же время в смесях для энтерального питания EF3 и EF6 таблетка остается интактной; для получения суспензии в EF3 необходимо 6 часов. Как водный раствор, так и смеси для энтерального питания не являются подходящими, поскольку они не обеспечивают прямой быстрой дезинтеграции и солюбилизации панкрелипазных ферментов; наблюдается осаждение и разделение фаз; стабильная и гомогенная композиция не может быть получена.

ПРИМЕР 2. Измельчение таблеток

Таблетку панкрелипазных ферментов (Viokace™) растирают с использованием различных устройств для измельчения для оценки воспроизводимости растирания таблеток, сохранения дозы (без снижения), внешнего вида и размеров наиболее крупных обнаруженных частиц. Различные измельчители пилюль обеспечивают получение гомогенного порошка с частицами различных размеров. Проводят следующие тесты: измельчитель пилюль Genius: примерно 2000 мкм; измельчитель пилюль Apex: примерно 4000 мкм; измельчитель пилюль Gima: примерно 5000 мкм; керамическая ступка и пестик: 200-500 мкм; кофейная чашка и металлическая ложка обеспечивали получение неравномерного порошка с крупными частицами размером примерно 3000 мкм. Измельчители пилюль Genius, Apex и Gima обеспечивают воспроизводимые результаты и легкое полное сохранение дозы, поскольку являются закрытыми системами. Кофейная чашка и металлическая ложка не обеспечивают получения воспроизводимого порошка и простой методики, и в процессе измельчения может происходить снижение дозы из-за выскальзывания фрагментов таблеток из чашки. Керамическая ступка и пестик обеспечивают хорошие результаты относительно размера частиц растертой таблетки панкрелипазных ферментов, однако наблюдается сильное влияние человеческого фактора.

Пример 3. Получение суспензии панкрелипазных ферментов: наполнитель для введения

Получают три суспензии, по 3 растертые таблетки панкрелипазных ферментов с 20880 USP единиц липазы (Viokace™) в каждой, в 10 мл следующих водных сред: 1) очищенной (деионизированной) воды; 2) физиологического раствора (0,9% NaCl); 3) водопроводной воды. Все проанализированные среды обеспечивают надлежащее суспендирование растертых таблеток панкрелипазных ферментов с получением гомогенной суспензии частиц.

Пример 4. Получение суспензии панкрелипазных ферментов: оптимизация доставки

3 таблетки панкрелипазных ферментов с 16000 USP единиц липазы (Viokace®) измельчают в подходящем устройстве для измельчения (см. Пример 2) и суспендируют в объеме подходящей водной среды, указанном в Таблице 3 (описано в Примере 3, перед введением через NG-зонд и G-зонд; в качестве крайнего случая используют G-зонд с наименьшим внутренним диаметром и длиной, имеющий наружный диаметр 12 Fr (то есть Mic Kimberly Clark Bolus). Полученные результаты (представленные в Таблице 3) демонстрируют, что при времени суспендирования по меньшей мере 15 минут различные типы измельчителей пилюль не влияют на пропускная способность суспендированных растертых таблеток панкрелипазных ферментов: засорения не происходит.

Этот способ позволяет сохранять липазную активность: активность до прохождения через G-зонд составляет 19,7 USP единиц/мл, и активность после прохождения через G-зонд составляет 19,8 USP единиц/мл; то есть обеспечивается полное сохранение дозы.

Способ также подходит для доставки широкого диапазона доз (от 1 таблетки панкрелипазных ферментов с 8000 USP единиц липазы до 3 таблеток панкрелипазных ферментов с 16000 USP единиц липазы). Каждую таблетку с 8000 USP единиц липазы суспендируют в 2,5 мл (половине чайной ложки) очищенной воды и выдерживают в течение по меньшей мере 15 минут, затем количество воды доводят до объема, указанного в Таблице 4. Результаты демонстрируют, что полученная суспензия позволяет проводить NG-введение(Mic-Key) с использованием G-зондов и NG-зондов очень небольших размеров, 5 Fr (таких как CORP ARK) или 8 Fr (таких как от производителя Tyco-Healthcare). См. Таблицу 4.

Пример 5. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) для инфузии (непрерывного введения) – способ прямого добавления

Таблетку с 20880 USP единиц липазы (Viokace™) растирают с использованием подходящего измельчителя пилюль (как показано в Примере 2) и добавляют непосредственно в мешок для питания, содержащий смесь для энтерального питания Ensure® Plus. Сходную композицию Pan-EF получают с использованием другой смеси для энтерального питания: Peptamen Junior® 1.5. Способ очень прост в применении, независимо от оператора, и растертые таблетки легко помещаются в мешок для питания. При этом способе не происходит быстрого диспергирования фрагментов пилюль, и они оставались на дне мешка для питания; эта гетерогенная система может привести к серьезным проблемам относительно безопасности (неравномерное введение дозы), неполной доставки дозы и доставки негомогенных переваренных питательных веществ.

ПРИМЕР 6. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) для инфузии - способ добавления пресуспензии В этом способе таблетки панкрелипазных ферментов (2 для EF1, 4 для EF2 и для EF3) с 10440 USP единиц липазы (Viokace™) измельчают измельчителем пилюль, затем пресуспендируют в деионизированной воде, выдерживают в течение 15 минут и затем добавляют к упаковке смеси для энтерального питания в мешке для питания, встряхивают 15 секунд. Тестируют разные смеси для энтерального питания: EF3 (Ensure® Plus), EF1 (Peptamen Junior®) и EF2 (Peptamen Junior® 1.5). Этот способ обеспечивает получение гомогенной дисперсии панкрелипазных ферментов в смеси для энтерального питания, и, таким образом, полученная композиция обеспечивает постоянство дозы и доставку гомогенных питательных веществ. Эту водную суспензию панкрелипазных ферментов помещают в инфузионный мешок, и осуществляют доставку. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии. Таким образом, видно, что композиция подходит для введения непрерывной инфузией с использованием насоса для питания и G-зонда на протяжении периода времени продолжительностью до по меньшей мере 8 часов без явного разделения фаз.

Пример 7. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) для инфузии - способ добавления пресуспензии

Панкрелипазные ферменты растирают с использованием измельчителя пилюль, начиная с двух доз по 12500 PhEu-единиц липазы (Eurobiol®), и затем пресуспендируют в деионизированной воде (5,0 мл), выдерживают в течение 15 минут и затем добавляют к упаковке смеси для энтерального питания, предварительно помещенной в мешок для питания, встряхивают 15 секунд. Тестируют разные смеси для энтерального питания: EF3, EF1 (Peptamen Junior®) и EF2 (Peptamen Junior® 1.5). Этот способ обеспечивает получение гомогенной дисперсии панкрелипазных ферментов в смеси для энтерального питания, и, таким образом, обеспечивает постоянство дозы и доставку гомогенных питательных веществ. Эта pan-EF-композиция подходит для введения непрерывной инфузией с использованием насоса для питания и G-зонда на протяжении периода времени продолжительностью до 8-10 часов без явного разделения фаз. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии.

Пример 8. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) для инфузии - способ добавления пресуспензии

Тот же способ и те же условия, что и в предшествующем Примере 6, применяют для получения суспензии, начиная с 4 растертых таблеток по 10440 USP единиц липазы, выдерживают ее в течение 15 минут и затем добавляя ее к упаковке смеси для энтерального питания в оригинальной упаковке, встряхивая 15 секунд и затем перенося в мешок для питания. Тестируют следующие смеси для младенцев: EF4 (Nutren® 2.0) и EF5 (TwoCal® HN): наблюдают явное разделение фаз. Этого разделения не наблюдают в контрольном образце (без добавления таблеток панкрелипазных ферментов), также протестированном для непрерывного введения: наблюдают физическую стабильность до 16 часов. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии.

Пример 9. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) для инфузии - способ добавления пресуспензии Тот же способ и те же условия, что и в предшествующем Примере 8, применяют для получения пресуспензии растертых панкрелипазных ферментов в количестве двух доз по 12500 PhEu-единиц липазы (Eurobiol®) в очищенной воде (10 мл), выдерживая ее в течение 15 минут, затем добавляя ее к упаковке следующих смесей для энтерального питания, предварительно помещенных в мешок для питания, и встряхивая 15 секунд: EF4 (Nutren® 2.0) и EF5 (TwoCal® HN). Наблюдают явное разделение фаз. Этого разделения не наблюдают в контрольном образце (без добавления таблеток панкрелипазных ферментов), также протестированном для непрерывного введения: наблюдают физическую стабильность до 16 часов. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии.

Пример 10. Композиция панкрелипазных ферментов и смеси для младенцев (Pan+IF) для инфузии - способ добавления пресуспензии

Применяют тот же способ и те же условия, что и в предшествующем Примере 6, добавляя 2 растертые таблетки панкрелипазных ферментов с 10440 USP единиц липазы (Viokace™) к 5 мл очищенной воды, выдерживая их в течение 15 минут и затем добавляя суспензию к 250 мл смеси для младенцев, предварительно помещенной в мешок для питания, осторожно встряхивая 15 секунд и затем перенося в мешок для питания. Тестируют следующие смеси для младенцев: IFI (Neolatte® 1), IF2 (Neolatte® 2), IF3 (Humana® 1), IF4 (Nutramigen®). При использовании IF4 наблюдают явное разделение фаз. В то же время, разделения не наблюдают при использовании IF1, IF2, IF3; гомогенная стабильная дисперсия панкрелипазных ферментов в этих смесях для младенцев сохраняется до 8 часов; IF1, IF2, IF3 позволяют достичь постоянной дозы и доставки гомогенных питательных веществ и проводить непрерывную инфузию с использованием насоса для питания и G-зонда. Разделения фаз не наблюдают в контрольном образце (без добавления таблеток панкрелипазных ферментов), также протестированном для непрерывного введения: наблюдают физическую стабильность до 16 часов. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии. Этот результат демонстрирует, что таблетка панкрелипазных ферментов может быть использована для получения стабильной композиции Pan+IF.

Пример 11. Композиция панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+IF) для инфузии - способ добавления пресуспензии

Применяют тот же способ и те же условия, что и в предшествующем Примере 10, добавляя две растертые дозы панкрелипазных ферментов, по 12500 PhEur единиц липазы (Eurobiol) каждая, к 5,0 мл очищенной воды, получая суспензию, выдерживая ее в течение 15 минут, и затем добавляют ее к 250 мл смеси для младенцев, уже помещенной в мешок для питания, и осторожно встряхивают 15 секунд. Тестируют следующие смеси для энтерального питания: IF1 (Neolatte® 1), IF2 (Neolatte® 2), IF3 (Humana® 1), IF4 (Nutramigen®). В данном случае отмечены те же результаты, что и в Примере 10: при использовании IF4 наблюдают разделение фаз, в то время как при использовании IF1, IF2, IF3 разделения фаз не наблюдают; гомогенная стабильная дисперсия панкрелипазных ферментов в IF1, IF2, IF3 сохраняется до 8 часов. Регулярно (каждый час) проводят визуальный осмотр смеси в мешке, и разделение фаз не наблюдается, при этом делают фотографии.

Пример 12. Получение суспензии панкрелипазных ферментов (стадия 1) Таблетки панкрелипазных ферментов с 10440 USP единиц липазы (Viokace™, 10440 USP единиц) измельчают по одной, получая мелкий порошок с использованием измельчителя пилюль (Apex Ultra Pills Crusher®). Растертые таблетки панкрелипазных ферментов переносят в небольшой стеклянный контейнер. Добавляют по чайной ложки (2,5 мл) воды на каждую таблетку с 10440 USP единиц липазы. В параллельном эксперименте используют таблетки панкрелипазных ферментов с 20880 USP единиц липазы (Viokace™): добавляют 1 чайную ложку (5 мл) воды на таблетку. Смесь воды и таблеток панкрелипазных ферментов перемешивают ложкой или шпателем в течение 30 секунд с получением однородной суспензии. Суспензию выдерживают в течение 15 минут при комнатной температуре для содействия растворению. Перед введением суспензию перемешивают ложкой или шпателем в течение нескольких секунд. Эта полученная суспензия стабильна (липазная активность) в течение по меньшей мере 30 минут.

Пример 13. Введение композиции панкрелипазных ферментов и питательных веществ непрерывной инфузией (стадия 2)

Суспензию по Примеру 12 добавляют в мешок для питания, содержащий заданное количество смеси для энтерального питания/таблеток панкрелипазных ферментов, мешок встряхивают в течение 15 секунд для гомогенизации суспензии таблеток панкрелипазных ферментов и смеси для энтерального питания. Контейнер промывают дополнительными 10 мл воды для извлечения всех остатков и проводят введение, как описано выше. К системе подключают насос для энтерального питания, следуя инструкциям изготовителя, и соединяют его с G-зондом. Насос включают и устанавливают нужную скорость потока. Зонд открывают и запускают насос. Систему проверяют, чтобы убедиться в ее работоспособности, отсутствии протечек во всех соединениях трубок или петель на зонде. По окончании питания на подающую группу накладывают зажим и отсоединяют ее (насос подает сигнал при возникновении каких-либо препятствий и по окончании введения). Вводят заданный объем воды. На удлинитель накладывают зажим и отсоединяют его.

Пример 14. Введение композиции панкрелипазных ферментов и питательных веществ (Pan+EF) непрерывной инфузией – эффективность доставки жидкостей

Кумулятивный объем доставленной EF как функцию времени на всем протяжении периода питания с содержащим панкрелипазные ферменты веществом и без него рассчитывают с использованием подходящего мерного циллиндра после доставки через G-зонд. Pan-EF вводят, применяя способ получения, описанный в Примерах 12, 13, с использованием соответствующего инфузионного оборудования (насос для питания: Kangaroo™ ePump Enteral Feeding Pump; мешок: Kangaroo Joey™ Enteral Feeding Pump Sets; G-зонд: Kimberly Clark MIC-KEY 12 Fr 4,0 см). Используют скорость потока от 10 мл/ч до 125 мл/ч (как у пациентов детского возраста, от 0 до 14 лет) для имитации введения энтерального питания, обычно применяемого в клинических условиях. Также проводят отрицательное контрольное введение (EF без добавления суспензии панкрелипазных ферментов) с использованием того же оборудования. Отмечают доставленный объем в заданных временных точках: 2, 4, 6 и 8 часов (время (ч)=теоретический доставленный объем (мл)/скорость насоса (мл/ч)). В каждой временной точке объемы композиции со смесью Pan+EF получают, рассматривая три разных имитированных введения, и сравнивают с отрицательным контрольным введением. Эффективность доставки жидкости для композиции Pan+EF в каждой временной точке рассчитывают следующим образом:

эффективность доставки жидкости (%)=[(доставленный объем композиции Pan+EF в момент времени t)/(доставленный объем отрицательной контрольной композиции (только смесь для энтерального питания) в момент времени t)]×100.

Данные в Таблице 5 демонстрируют, что эффективность доставки композиции Pan+EF аналогична эффективности доставки смеси для энтерального питания самой по себе. % доставленного объема в момент времени (t) по сравнению с отрицательным контролем составляет от 95% до 105%.

Пример 15. Стабильность панкрелипазных ферментов в смеси для энтерального питания

Стабильность панкрелипазных ферментов в смесях для энтерального питания оценивают на протяжении всего периода введения (8 ч), измеряя активность трех ферментов (липазы, протеазы и амилазы) в заданных временных точках: 0, 2, 4, 8 часов. Суспензию панкрелипазных ферментов смешивают со смесями для энтерального питания, приведенными в Таблице 1, согласно приведенным выше Примерам, и вводят с использованием оборудования для питания, как описано в Примерах 12, 13. Введение непрерывной инфузией проводят с использованием композиции Pan+EF при малом соотношении панкрелипазные ферменты/EF (1 таблетка с 10440 USP единиц липазы/250 мл EF), что является наихудшим случаем относительно стабильности панкрелипазных ферментов. Стабильность ферментов оценивают как активность, полученную в каждый момент времени, в сравнении с активностью в нулевой момент времени (композицией Pan+EF сразу после получения), результаты выражают как процент относительно нулевого момента времени.

15.1 Определение липазной активности. Образцы для определения липазной активности во временных точках 2 и 4 часа получают как из композиции Pan+EF, находящейся в мешке для питания, так и из собранных объемов, доставленных через G-зонд, и они демонстрируют равномерность введения. Липазная активность не зависит от места забора образца, поскольку обеспечивает аналогичные результаты по ферментативной активности. В последней точке образцы получают из объема, доставленного через G-зонд.

В анализируемой смеси липазная активность остается стабильной в течение 8 часов. Постепенное повышение ферментативной активности, наблюдаемое на протяжении эксперимента, обусловлено изменением конформации ферментов (ассоциированным с повышенной липазной активностью), индуцированным средой EF.

15.2 Определение протеазной и амилазной активности проводят с использованием образцов смеси Pan+EF, взятых из мешка (композиция является гомогенной на всем протяжении периода введения, см. пример выше). Результаты анализов протеазной и амилазной активности представлены в Таблицах 7, 8.

Согласно полученным результатам, липаза, протеаза и амилаза являются стабильными в условиях инфузии до 8 часов; % сохранения активности находится в диапазоне 90-110% для липазы и протеазы и 85-115% для амилазы.

Пример 16. Оценка переваривания питательных веществ

Профиль переваривания питательных веществ в композициях Pan+EF определяют, исследуя кинетику переваривания питательных веществ, индуцированного панкрелипазными ферментами, с учетом двух аспектов: 1) снижения содержания основных питательных веществ, присутствующих в смесях для энтерального питания (триглицеридов, общего белка и мальтодекстринов), и 2) усиленного образования продуктов переваривания питательных веществ (свободных жирных кислот (FFA), триптофана (АА) и короткоцепочечных сахаров (SCS)). Проводят мониторинг изменений питательных веществ смеси для энтерального питания в присутствии панкрелипазных ферментов, и определяют репрезентативный маркер для каждого класса перевариваемых питательных веществ, для анализа степени переваривания при введении смесей для энтерального питания.

Анализ переваривания. Композиции Pan+EF получали согласно приведенным выше Примерам и вводили с использованием оборудования для питания, типичного для клинической практики (Примеры 12, 13). Таким же образом также получали отрицательный контроль (EF сама по себе = без переваривания). В заданных временных точках (0, 2 ч, 4 ч, 8 ч) получали образцы композиции Pan+EF и отрицательного контроля из мешка для питания. Нулевой момент времени получают, отбирая образцы суспензии сразу после получения. Процесс пищеварения имитируют для следующих двух разных препаратов: введение композиции Pan+EF непрерывной инфузией, проводимое с использованием большего соотношения панкрелипазные ферменты/EF, что создает наибольший риск модификации смеси для энтерального питания (высокая ферментативная активность приводит к усиленному перевариванию). Степень переваривания описана далее в последующих разделах.

16.1. Анализ жиров

16.1.1) Проводят мониторинг количества триглицеридов (как маркера жировых питательных веществ), используя триолеин в качестве маркера. В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 2 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль' композиция Pan+EF) для количественного извлечения липидной фракции. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивают в течение 15 секунд. Полученные результаты представлены в Таблице 9.

Таблица 9

Липолитическая активность липазы, присутствующей в композиции, очевидна на всем протяжении периода введения по существенному снижению уровня триглицеридов, в то время как отрицательный контроль демонстрирует неизменное количество триглицеридов за тот же период времени. Концентрация триолеина уменьшалась до 69-75% начального значения через 2 часа и достигала примерно 21-32% начальной концентрации TG (TG=триглицериды) через 8 часов. В конечной точке эксперимента, через 8 часов, примерно 30% триолеина все еще присутствует в композиции смеси Pan+EF, демонстрируя таким образом неполный гидролиз жирной кислоты; это происходит из-за ингибирования липолиза продуктами реакции (FFA) в отсутствие акцептора, который удалял бы эти продукты с границы раздела фаз "масло-вода" (мицелл, солей желчных кислот, кишечного всасывания), как в анализируемых условиях.

16.1.2) Проводят мониторинг количества жирных кислот (как маркерных продуктов переваривания жиров), используя олеиновую, линолевую и пальмитиновую кислоты в качестве маркеров. В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 2 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль; композиция Pan+EF) для количественного извлечения липидной фракции. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивают в течение 15 секунд. Полученные результаты представлены в Таблице 10.

Смеси для энтерального питания, согласно их составу, не содержат FFA, что подтверждается отсутствием этих соединений на HPL-хроматограмме отрицательного контроля; с другой стороны, свободные жирные кислоты выявлены на хроматограмме смеси Pan+EF, подтверждая быстрый липолиз, происходящий уже в момент времени "0", то есть сразу после получения композиции Pan+EF.

16.2. Анализ белков

16.2.1) Проводят мониторинг общего количества белка (как маркера белковых питательных веществ) с применением метода Бредфорда. В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 2 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль; композиция Pan+EF) для количественного извлечения белковой фракции. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивают в течение 15 секунд. Полученные результаты представлены в Таблице 13.

В отрицательном контроле общее количество белка остается неизменным на всем протяжении введения, в то время как в композиции Pan+EF наблюдают существенное снижение уровня белков (как результат протеолитической активности протеазы, присутствующей в содержащем панкрелипазные ферменты веществе): через 8 часов концентрация белка снижается до примерно 63-69% начального значения. Через 8 часов протеолиз является неполным.

16.2.2) Триптофан (как маркерный продукт переваривания белков). В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 1 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль; композиция Pan+EF) для количественного извлечения аминокислотной фракции. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивают в течение 15 секунд. Полученные результаты представлены в Таблице 14 ниже.

Смеси для энтерального питания, согласно их составу, не содержат триптофан, что подтверждается отсутствием этой аминокислоты в отрицательном контроле (установлено посредством HPLC); с другой стороны, триптофан был выявлен в композиции Pan+EF (установлено посредством HPLC), подтверждая быстрый протеолиз, происходящий уже в момент времени "0" (сразу после получения композиции Pan+EF).

16.3. Анализ углеводов

16.3.1) Проводят мониторинг мальтодекстринов (как маркер углеводных питательных веществ) методом HPLC, используя мальтогептозу (М7), мальтогексозу (Мб) и мальтотетрозу (М4) в качестве маркеров. В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 2 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль; смесь Pan+EF) для количественного извлечения углеводной фракции. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивали в течение 15 секунд. Результаты представлены в Таблице 15.

В отрицательном контроле количество мальтодекстринов оставалось неизменным на всем протяжении периода введения (определено методом HPLC), в то время как в смеси Pan+EF наблюдают существенное снижение уровня мальтодекстринов (как результат амилолитической активности амилазы, присутствующей в содержащем панкрелипазные ферменты веществе): через 2 часа концентрация мальтогептозы быстро снижалась относительно исходного значения, кроме того, мальтогексоза и мальтотетроза были полностью переварены уже через 2 часа. Одновременно со снижением высокомолекулярных мальтодекстринов наблюдают повышение соответствующих короткоцепочечных сахаров, то есть мальтозы и мальтотриозы.

16.3.2) Проводят мониторинг количества короткоцепочечных сахаров (как маркерных продуктов переваривания углеводов), используя мальтозу в качестве маркера. В каждый момент времени в эксперименте (0, 2, 4 и 8 часов) проводят экстракцию из 2 мл каждого образца (EF сама по себе = отрицательный контроль; композиция Pan+EF) для количественного извлечения фракции сахаров. Перед каждым забором образцов суспензию осторожно встряхивают в течение 15 секунд. Полученные результаты представлены в таблице ниже.

Смеси для энтерального питания демонстрируют меньшее количество мальтозы, чем выявлено в композиции Pan+EF (определено методом HPLC), подтверждая быстрый амилолиз, происходящий уже в момент времени "0" (сразу после получения композиции Pan+EF). Мальтоза была конечным продуктом воздействия α-амилазы на полимеры глюкозы. В EF1 также выявлена сахароза, поскольку она является ингредиентом данной смеси, количество этого сахара остается практически неизменным (см. Таблицу 19) на всем протяжении периода введения, указывая на то, что сахароза не является продуктом переваривания амилазой.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии: получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии: уменьшение размера продукта панкрелипазных ферментов, добавление водного раствора, имеющего нейтральный рН, в количестве менее 10 мл, смешивание с образованием суспензии и выдерживание ее в течение периода времени более чем 5 минут и смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции, где питательная смесь имеет общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ от 10 до 35 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых и белковых питательных веществ от 4,5 до 11,5 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых питательных веществ от 3,0 до 7,0 г/100 мл, или имеет общее содержание белковых питательных веществ от 1,3 до 6,3 г/100 мл, и водный раствор представляет собой очищенную воду, деионизированную воду, стерильную воду, физиологический раствор, 0,9% NaCl или водопроводную воду. Изобретение обеспечивает получение стабильных и гомогенных композиций, имеющих липазную активность выше 90% через 8 часов хранения при комнатной температуре, рассчитанную как процентное отношение липазной активности в композиции через 8 часов к липазной активности в питательной смеси в нулевой момент времени и которые можно было бы вводить энтерально без какого-либо разделения фаз и склонности к закупорке энтерального зонда для питания или потери стабильности. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 16 пр., 19 табл.

1. Способ получения стабильной и гомогенной жидкой композиции, подходящей для энтерального введения, содержащей продукт панкрелипазных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, включающий следующие стадии:

а) получение суспензии панкрелипазных ферментов в водном растворе, включающее стадии:

а.1) уменьшение размера продукта панкрелипазных ферментов;

а.2) добавление водного раствора, имеющего нейтральный рН, в количестве менее 10 мл;

а.3) смешивание с образованием суспензии; и

а.4) выдерживание ее в течение периода времени более чем 5 минут;

и

б) смешивание суспензии с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции;

где питательная смесь имеет общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ от 10 до 35 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых и белковых питательных веществ от 4,5 до 11,5 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых питательных веществ от 3,0 до 7,0 г/100 мл, или имеет общее содержание белковых питательных веществ от 1,3 до 6,3 г/100 мл, и водный раствор представляет собой очищенную воду, деионизированную воду, стерильную воду, физиологический раствор, 0,9% NaCl или водопроводную воду.

2. Способ по п. 1, где период времени на стадии а.4) составляет от 15 до 30 минут.

3. Способ по п. 1, где водный раствор со стадии а.2) добавляют в количестве 2,5 мл для продукта панкрелипазных ферментов, имеющего 10400 USP единиц липазы, или добавляют соответствующее кратное количество раствора для продукта, имеющего кратное количество USP единиц липазы.

4. Способ по п. 1, где продукт панкрелипазных ферментов представляет собой продукт, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока.

5. Способ по п. 1, где продукт панкрелипазных ферментов либо не покрыт

оболочкой, либо покрыт оболочкой.

6. Способ по п. 5, где продукт панкрелипазных ферментов представляет собой не покрытый оболочкой продукт панкрелипазных ферментов.

7. Способ по п. 1, где продукт панкрелипазных ферментов представлен в форме порошка, гранул, таблеток, сфер, минитаблеток, микротаблеток, микрочастиц, микросфер, микрокапсул или микропеллет.

8. Способ по п. 1, где продукт панкрелипазных ферментов представляет собой продукт или лекарственную форму панкрелипазных ферментов с немедленным высвобождением.

9. Способ по п. 1, где продукт панкрелипазных ферментов представлен в терапевтически эффективном количестве.

10. Способ по п. 1, где питательная смесь представляет собой смесь для взрослых/детей или смесь для младенцев.

11. Способ по п. 1, где ферменты имеют липазную активность более чем 90% через 8 часов хранения при комнатной температуре, рассчитанную как процентное отношение липазной активности в композиции через 8 часов к липазной активности в питательной смеси в нулевой момент времени.

12. Способ по пп. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11, где ферменты имеют липазную активность 100% через 8 часов хранения при комнатной температуре, рассчитанную как процентное отношение липазной активности в композиции через 8 часов к липазной активности в питательной смеси в нулевой момент времени.

13. Стабильная и гомогенная жидкая композиция, подходящая для энтерального введения, полученная способом по п. 1, содержащая продукт панкрелипазных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, где продукт панкрелипазных ферментов суспендирован в менее чем 10 мл водного раствора, имеющего нейтральный рН, и питательная смесь имеет общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ от 10 до 35 г/100 мл, или имеющей общее содержание жировых и белковых питательных веществ от 4,5 до 11,5 г/100 мл, или имеющей общее содержание жировых питательных веществ от 3,0 до 7,0 г/100 мл, или имеющей общее содержание белковых питательных веществ от 1,3 до 6,3 г/100 мл, и где композиция является стабильной и гомогенной и пригодна для энтерального введения, и водный раствор представляет собой очищенную воду, деионизированную воду, стерильную воду, физиологический раствор, 0,9% NaCl или водопроводную воду.

14. Композиция по п. 13, где продукт панкрелипазных ферментов представляет собой продукт панкрелипазных ферментов, не являющийся устойчивым к действию желудочного сока.

15. Композиция по п. 13, где продукт панкрелипазных ферментов представлен в форме порошка, гранул, таблеток, сфер, минитаблеток, микротаблеток, микрочастиц, микросфер, микрокапсул или микропеллет.

16. Композиция по п. 13, где продукт панкрелипазных ферментов представляет собой продукт или лекарственную форму панкрелипазных ферментов с немедленным высвобождением.

17. Композиция по п. 13, где продукт панкрелипазных ферментов представлен в терапевтически эффективном количестве.

18. Композиция по п. 13, где питательная смесь представляет собой смесь для взрослых/детей или смесь для младенцев.

19. Композиция по пп. 13, 14, 15, 16, 17 или 18, где ферменты имеют липазную активность более чем 90% через 8 часов хранения при комнатной температуре, рассчитанную как процентное отношение липазной активности в композиции через 8 часов к липазной активности в питательной смеси в нулевой момент времени.

20. Способ введения композиции, полученной способом по п. 1, содержащей продукт панкрелипазных ферментов и питательные вещества из питательной смеси, нуждающемуся в этом пациенту, включающий следующие стадии:

а) уменьшение размера продукта панкрелипазных ферментов;

б) добавление водного раствора;

в) смешивание с образованием суспензии;

г) выдерживание ее в течение периода времени более чем 5 минут;

д) смешивание суспензии со стадии (г) с жидкой питательной смесью с образованием стабильной и гомогенной жидкой композиции; и

е) дозирование композиции из мешка-дозатора пациенту через энтеральный зонд;

где питательная смесь имеет общее содержание жировых, белковых и углеводных питательных веществ от 10 до 35 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых и белковых питательных веществ от 4,5 до 11,5 г/100 мл, или имеет общее содержание жировых питательных веществ от 3,0 до 7,0 г/100 мл, или имеет общее содержание белковых питательных веществ от 1,3 до 6,3 г/100 мл, и водный раствор представляет собой очищенную воду, деионизированную воду, стерильную воду, физиологический раствор, 0,9% NaCl или водопроводную воду.