МАТЕРИАЛ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ Российский патент 2018 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к выделению дезоксирибонуклеиновой кислоты (далее - ДНК) из архивных препаратов для обнаружения возбудителей туберкулеза человека методом полимеразной цепной реакции (далее - ПЦР).

Уровень техники

В литературе описаны устройства, предназначенные для обнаружения возбудителей туберкулеза человека, гонореи, трихомониаза и кандидоза. К таким устройствам относятся препараты, приготовленные нанесением исследуемого материала на 2 предметных стекла с последующей окраской одного для светового исследования, второй препарат запасной. Лабораторные диагностические исследования. С.М. Плотичер, Киев, 1962, с. 13-18. Справочник Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы) под редакцией А.И. Карпищенко, Санкт-Петербург «Интермедика», 2001, с. 114-124.

Сущность изобретения

Задачей изобретения является увеличение времени хранения исследуемого материала для обнаружения возбудителей туберкулеза человека методом ПЦР. Эта задача достигается применением архивных препаратов в качестве исследуемого материала для обнаружения возбудителей туберкулеза человека методом ПЦР. При обнаружении в мазках возбудителей туберкулеза методом световой микроскопии согласно приказу Министерства здравоохранения РФ от 21.03.2003 года №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации» с. 231 эти препараты оставляют на 1 год и более. Исследуемый материал готовят так: берут 2 препарата, приготовленные из мокроты больного, один окрашенный по Циль-Нильсену, другой неокрашенный, оставленные в архиве лаборатории лечебно-профилактического учреждения (далее - ЛПУ). Наносят на мазки по 0,5 мл физиологического раствора и оставляют на 15 минут для получения суспензии. Затем осторожно перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения мазков. Полученную суспензию отсасывают пипеткой и помещают ее в микрообъемы с крышкой (пробирки типа Эппендорф). Исследуемый материал готов. Таким образом готовят 4 материала на ПЦР исследование от четырех больных (2 неокрашенных, 2 окрашенных).

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Приготовленный на ПЦР исследование материал разводят буфером из набора. Подготовку и обработку проб выполняют в одноразовых картриджах GeneXpert. Пробы вводят в картридж, который затем загружают в один из имеющихся модулей прибора. Прибор GeneXpert (компания Cepheid, USA) лизирует пробы в картриджах, освобождает нуклеиновые кислоты и амплифицирует целевые последовательности проб с использованием ПЦР в реальном времени. Исследованы 4 образца. Фамилии больных изменены:

Образец 1: Сидоров неокрашенный.

Образец 2: Иванов неокрашенный.

Образец 3: Семенов окрашенный.

Образец 4: ВОК окрашенный.

Далее прибор GeneXpert автоматически пишет отчет о наличии или отсутствии возбудителей туберкулеза в образцах конкретного больного в виде: МТБ обнаружен или МТБ не обнаружен.

МТВ расшифровывается Микобактерии туберкулеза.

Иллюстрируем ПЦР исследования 4-мя отчетами образцов 1, 2, 3 и 4, проведенные 12 и 13 января 2017 г.

Отчет об образцах

Найдено ID образца #4 = СИДОРОВ НЕ ОКРАШЕННЫЙ

- 1 анализов найдено

Отчет об образцах

Найдено ID образца #2 = 02 ИВАНОВ НЕОКРАШЕННЫЙ

-1 анализов найдено

Отчет об образцах

Найдено ID образца #3 = 03 СЕМЕНОВ ОКРАШЕННЫЙ

-1 анализов найдено

Отчет об образцах

Найдено ID образца #4 = 04 ВОК ОКРАШЕННЫЙ

-1 анализов найдено

Вывод

Применение архивных препаратов в качестве исследуемого материала для обнаружения возбудителей туберкулеза методом ПЦР дает достоверные и воспроизводимые результаты.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике туберкулеза. Материал для обнаружения возбудителей туберкулеза человека методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) представляет собой суспензию, полученную растворением в 0,5 мл физиологического раствора мазков мокроты, неокрашенных и окрашенных по Циль-Нильсену, содержащих возбудителей туберкулеза человека.

Материал для обнаружения возбудителей туберкулеза человека методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), представляющий собой суспензию, полученную растворением в 0,5 мл физиологического раствора мазков мокроты, неокрашенных и окрашенных по Циль-Нильсену, содержащих возбудителей туберкулеза человека.