СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО МОНОНУКЛЕОЗА Российский патент 2018 года по МПК G01N33/48 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике инфекционного мононуклеоза у человека.

Впервые заболевание было описано Н,Ф. Филатовым в 1885 г.под названием «Идиопатическое воспаление желез». В 1889 г. немецкий ученый Pfeiffer описал это заболевание под названием - железистая лихорадка. В 1907 г. Turk, а в 1909 г. Burns выявили характерные изменения крови при этом заболевании.

Инфекционный мононуклеоз (синонимы: болезнь Филатова, железистая лихорадка, моноцитарная ангина, болезнь Пфейфера) - общее системное лимфопролиферативное заболевание, которое чаще всего вызывается вирусом Эпштейна-Барр. В 1920 г. Спринт и Эванс описали «новое» заболевание под названием «инфекционный мононуклеоз», характерными для которого являются изменения в виде лейкоцитоза с выраженным моноцитозом и лимфоцитозом.

Аналоги изобретения

Известны способы диагностики инфекционного мононуклеоза (далее - ИМ) описательного характера. Клиническая гематология. И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. «Медицина» Москва 1970, с. 616-626.

Известен способ определения степени тяжести хронического ИМ у детей (RU patents 2406433).

Прототипом заявляемого способа авторы предлагают способ определения количества атипичных мононуклеаров в периферической крови. Мазок фиксируется по методу Май-Грюнвальда, докрашивается по методу Романовского и рассчитывают процентное содержание атипичных мононуклеаров среди всех лейкоцитов (О.В. Родионова, О.А. Аксенов, А.А. Букин. Инфекционный мононуклеоз: клиника, новые подходы к диагностике и терапии у детей: Пособие для врачей. Спб. 2000, с. 20). Атипичные мононуклеары - это клетки большой величины (15-30 мкм), округлой формы с ядром неправильной формы и резко выраженной базофилией протоплазмы. Количество атипичных мононуклеаров составляет 15-30% и более, они появляются в крови на первой неделе заболевания и позже.

Однако в известных способах диагностики ИМ не применялись морфометрические измерения площадей и объемов атипичных мононуклеаров, и лимфоцитов без атипии.

В настоящее время степень квантификации т.е. выражение в числах любых изучаемых явлений служит критерием научного развития теоретических аспектов любой науки, в том числе медицины. Это направление резко повышает доказательность выводов исследователей, создает объективные условия для проверки и сопоставления данных, а также дает больший позитивный эффект, выявляя слабо аргументированные заключения, к которым иногда, к сожалению, приходит морфолог, недостаточно владеющий методами количественной морфологии (Г.Г. Автандилов. Медицинская морфометрия. Москва, Медицина 1990, с. 19).

Задачей изобретения является повышение точности и достоверности диагностики инфекционного мононуклеоза у человека.

Сущность изобретения

Готовят гематологические мазки из лейкоконцентрата. Получение лейкоконцентрата проводят по методике Р.А. Поспеловой (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией Е.А. Кост, М-Медицина 1975, с. 36-37): Забор крови производят в 2 гематологические пробирки с антикоагулянтом методом вакуума. Кровь тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на один час до разделения слоев. Затем плазму отсасывают пипеткой, переносят в центрифужную пробирку и центрифигируют в течение 5 мин. при 1000 об/мин. Из лейкоцитарной пленки, находящейся между эритроцитами и сывороткой, делают мазки. Высушенные мазки фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Окрашенные мазки исследуют под микроскопом, окуляр 10, объектив 100. В окуляр микроскопа вставляют измерительную сетку Автандилова (Г.Г. Автандилов. Медицинская морфометрия. Москва, Медицина 1990, с. 73). На рис. 1 представлена окулярная измерительная сетка Автандилова со 100 и 25 точками.

Принцип работы сетки - чем больше тестовых точек совпадает с изучаемыми клетками, тем больше площадь изучаемых клеток, в данном случае атипичных мононуклеаров и лимфоцитов больного без инфекционного мононуклеоза (далее - ИМ).

Измерение площади атипичного мононуклеара проводят так: микроскопически находят атипичный мононуклеар, накладывают на него сетку Автандилова и определяют количество точек, совпадающих с атипичным мононуклеаром. На рис. 2 атипичный мононуклеар имеет 23 совпадающих тестовых точек. Также определяют количество совпадающих точек с лимфоцитом больного без ИМ. На рис. 3 лимфоцит больного без ИМ имеет 8 совпадающих тестовых точек.

Учитывая принцип работы сетки, допускают, что количество этих совпадающих точек равно площади атипичного мононуклеара и лимфоцита больного без ИМ соответственно. Поэтому площадь атипичного мононуклеара на рис. 2 равна 23, а на рис. 3 лимфоцита больного без ИМ-8.

Критерием диагностики инфекционного мононуклеоза является увеличение площади атипичного мононуклеара по отношению к площади лимфоцита больного без ИМ. Следовательно, площадь атипичного мононуклеара на рис. 2, равная 23, превышает площадь лимфоцита больного без ИМ на рис. 3 равной 8 в 2,9 раза, т.е. 23/8.

Таким же образом, определяют количество совпадающих тестовых точек на 50 атипичных мононуклеарах и 50 лимфоцитах больного без ИМ, выбранных случайным образом. Определяют общее количество совпадающих точек Σxo и М - среднее арифметическое - количество тестовых точек в 1 атипичном мононуклеаре и лимфоците больного без ИМ, соответствующее площади атипичного мононуклеара и лимфоцита больного без ИМ. Далее сравнивают средние площади атипичных мононуклеаров больных ИМ и среднюю площадь лимфоцита больного без ИМ.

Пример 1.

Больной Н., 23 года. Поступил в инфекционное отделение Якутской городской клинической больницы №1 с жалобами на недомогание, высокую температуру, увеличение периферических лимфоузлов, боль в горле. В анализе крови лейкоцитоз 15,6×10⁹/л., относительное число лимфоцитов 71%, моноцитов 10%. Из числа лимфоцитов и моноцитов - 21 атипичный мононуклеар.

Пример 2.

Больной А., 20 лет. Поступил с аналогичными жалобами, как в примере 1. В анализе крови лейкоцитоз 17,1×10⁹/л., относительное число лимфоцитов 67%, моноцитов 9%. Из числа лимфоцитов и моноцитов - 16 атипичных мононуклеаров.

Пример 3.

Больной В., 17 лет, поступил с диагнозом инфекционный мононуклеоз. В анализе крови лейкоцитоз 16,4×10⁹/л., относительное число лимфоцитов 76%, моноцитов 10%. Из числа лимфоцитов и моноцитов - 28 атипичных мононуклеаров.

В таблице приведен анализ результатов исследований.

М больного Н=20,5, М больного А=19,8 и М больного В=19,3 существенных различий (р<0,05) не имеют.

Вывод:

Средняя площадь атипичного мононуклеара, определенная предлагаемым способом, достоверно (р<0,05) превышает среднюю площадь лимфоцита больного без ИМ в 1,5 или более раз.

где: n - количество атипичных мононуклеаров и лимфоцитов больного без ИМ;

Σхо - суммирование результатов отдельных измерений;

М - среднее арифметическое - количество тестовых точек в 1 атипичном мононуклеаре и лимфоците больного без ИМ, соответствующее площади атипичного мононуклеара и лимфоцита больного без ИМ;

D=Σd²/n - дисперсия среднего арифметического;

σ(S)=√D - среднее квадратическое отклонение;

m=σ/√n - ошибка среднего арифметического;

р=m/М - уровень достоверности.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики инфекционного мононуклеоза у человека. Для этого определяют относительное содержание атипичных мононуклеаров в гематологических мазках. В мазках, приготовленных из лейкоконцентрата, определяют площади атипических мононуклеаров, лимфоцитов больного без инфекционного мононуклеоза путем наложения на них стереометрической сетки, вложенной в окуляр микроскопа. При превышении площади среднего атипичного мононуклеара площади среднего лимфоцита больного без инфекционного мононуклеоза в 1,5 или более раз диагностируют инфекционный мононуклеоз. Использование данного способа позволяет проводить диагностику инфекционного мононуклеоза с помощью морфометрических измерений площади атипичных мононуклеаров. 3 пр., 1 табл., 3 ил.

Способ диагностики инфекционного мононуклеоза, включающий триаду клинических признаков (высокая температура, увеличение периферических лимфоузлов, воспаление миндалин зева), определение относительного содержания атипичных мононуклеаров в гематологических мазках, отличающийся тем, что в мазках, приготовленных из лейкоконцентрата, определяют площади атипических мононуклеаров, лимфоцитов больного без инфекционного мононуклеоза путем наложения на них стереометрической сетки, вложенной в окуляр микроскопа, и при превышении площади среднего атипичного мононуклеара площади среднего лимфоцита больного без инфекционного мононуклеоза в 1,5 или более раз диагностируют инфекционный мононуклеоз.