СТАБИЛЬНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ СЛИТОГО БЕЛКА TNFR:FC Российский патент 2018 года по МПК A61K38/17 A61K39/395 A61P43/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение предусматривает стабильные фармацевтические композиции, содержащие слитый белок на основе рецептора фактора некроза опухоли и Fc (TNFR:Fc). Настоящее изобретение также предусматривает способы получения композиции, способ введения и содержащие ее наборы.

Предпосылки изобретения

Фактор некроза опухоли (TNF) альфа представляет собой цитокин, который вызывает воспаление и связанные с ним симптомы посредством связывания с его рецептором. Он продуцируется макрофагами и многими другими иммунными клетками. Он принимает участие в патогенезе многих воспалительных нарушений, таких как ревматоидный артрит, псориатический артрит, SLE, болезнь Крона и т. д. В Hohmann et al. (Hohmann et al. 1989 J Biol Chem. 25, 14927-34) идентифицированы 2 различных рецептора TNF-альфа, которые присутствуют на разных типах клеток, а именно на миелоидных клетках и эпителиальных клетках. С использованием моноклональных антител в Brockhaus et al. (Brockhaus et al. 1990 ProcNatlAcadSci USA, 87(8), 3127-31) продемонстрировано, что и TNF-альфа, и TNF-бета связываются с обоими рецепторами с высоким сродством.

Фактор некроза опухоли альфа (TNF-альфа) представляет собой центральный регулятор воспаления, а антагонисты TNF-альфа могут быть эффективными при лечении воспалительных нарушений, при которых TNF-альфа играет важную патогенетическую роль. Ингибирование TNF оказалось эффективной терапией для пациентов с ревматоидным артритом и другими формами воспалительного заболевания, включая псориаз, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит и воспалительное заболевание кишечника. Одним из таких антагонистов TNF-альфа является этанерцепт.

Этанерцепт представляет собой димерный слитый белок, полученный посредством технологии рекомбинантных ДНК, при которой ген растворимой лиганд-связывающей части рецептора 2 TNF сливают с геном Fc-компонента человеческого IgG1 для обеспечения необходимого слитого белка (патентный документ US 7648702). Этанерцепт экспрессируется в клетках CHO. Fc-компонент этанерцепта не имеет домена CH1, но имеет домены CH2, CH3 и шарнирную область. Слитый белок имеет приблизительный молекулярный вес 150 кДа и состоит из 934 аминокислот. Этанерцепт препятствует TNF и действует в качестве ингибитора TNF, в связи с чем его можно применять в качестве биофармацевтического препарата для лечения аутоиммунных заболеваний. Он предотвращает прогрессирующее разрушение суставов у пациентов с ревматоидным артритом и артритом при псориазе.

В связи с его уникальной структурой, этанерцепт связывается с TNF-альфа в 50-100 раз более эффективно, чем его эндогенный рецептор (Gofee et al. 2003 J Am AcadDermatol. 49, S105-111, Strober 2005 SeminCutan Med Surg. 24; 28-36). Кроме того, в связи с его димерной природой он может связываться с 2 молекулами TNF-альфа по сравнению с одной, с которой связывается эндогенный рецептор. Слияние этой молекулы с Fc-областью IgG увеличивает время полужизни по сравнению с эндогенной растворимой формой. Этанерцепт коммерчески доступен и в лиофилизированной, и в жидкой формах.

Наиболее важное свойство композиции заключается в том, чтобы способствовать сохранению структурной конформации или активности белка. Стабильность белка в композиции может быть связана с длительным хранением. Следует понимать, что активный полипептид в фармацевтической композиции существенно не утрачивает свою активность по сравнению с композицией в начале хранения.

Все полипептиды имеют изоэлектрическую точку (pI), которая, как правило, определяется как значение pH, при котором полипептид не несет суммарный заряд. Из уровня техники известно, что растворимость белка, как правило, является наиболее низкой, если pH раствора равен изоэлектрической точке (pI) белка.

Значение Tm Fab-домена белка является хорошим показателем термической стабильности белка и может дополнительно обеспечивать условие срока хранения. Значения Tm белков, определенные посредством дифференциальной сканирующей калориметрии, дают представление о вызванных нагреванием изменениях конформации белка, механизмах развертывания белка и стабилизации в растворе. Низкое значение Tm указывает на меньшую стабильность белка в данном растворе, тогда как высокое значение Tm указывает на большую стабильность белка. Значение Tm белка будет варьировать в зависимости от композиции состава, что, в свою очередь, отражает его стабильность в соответствующем составе.

Во время длительного хранения и водные, и лиофилизированные композиции белков могут утрачивать активный белок в связи с агрегацией или распадом. Агрегация белка может приводить к иммуногенности и является нежелательной. Так как концентрация этанерцепта, используемая в композиции, является высокой, существует вероятная возможность агрегации белка во время длительного хранения. Для улучшения стабильности белка можно либо варьировать концентрацию существующих вспомогательных веществ, либо добавлять новые вспомогательные вещества для модификации композиции.

В патентах США №№ US 5215743; US 7648702; заявке на патент США US 20070053906 и международной заявке WO 2011141926 раскрыты фармацевтические композиции, содержащие водную композицию TNF-связывающего белка, которые содержат TNF-связывающий белок, буфер и средство для обеспечения изотоничности.

Краткое описание изобретения

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к стабильной фармацевтической композиции, содержащей слитый белок TNFR:Fc и фосфатно-цитратный буфер.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к стабильной фармацевтической композиции, содержащей слитый белок TNFR:Fc, фосфатно-цитратный буфер и средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины и 2-гидроксипропил-бета-циклодекстрина (HPBCD).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к стабильной фармацевтической композиции, содержащей слитый белок TNFR:Fc, фосфатно-цитратный буфер, средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины и HPBCD, модификатор тоничности и стабилизирующее средство.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания с использованием стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Заболевание может представлять собой ревматоидный артрит, полиартикулярный ювенильный идиопатический артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит или пятнистый псориаз.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору или емкости, содержащей фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

Подробности одного или нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения, изложенные ниже, являются исключительно иллюстративными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут понятны из описания и формулы изобретения.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение предусматривает стабильную фармацевтическую композицию, содержащую молекулы TNFR, слитые с Fc-частью человеческого иммуноглобулина (слитый белок TNFR:Fc). Более конкретно, настоящее изобретение относится к стабильной фармацевтической композиции на основе этанерцепта в фосфатно-цитратном буфере, что демонстрирует более низкий потенциал распада.

В варианте осуществления настоящего изобретения слитый белок TNFR:Fc представляет собой этанерцепт.

В патенте US 7648702 и заявке на патент WO 2011141926 сообщалось, что фармацевтические композиции на основе этанерцепта, в которых L-глицин применялся в качестве средства, препятствующего агрегации, в фосфатном буфере, не являются стабильными по сравнению с композициями на основе этанерцепта с другой аминокислотой, такой как аргинин, пролин, лизин, аспарагиновая кислота, в качестве средства, препятствующего агрегации, в фосфатном буфере. В заявке на патент WO 2011141926 раскрывается, что композиция, содержащая этанерцепт в фосфатном буфере и L-глицин в качестве средства, препятствующего агрегации, демонстрировала агрегацию, а также продукты фрагментации.

При исследовании композиций на основе этанерцепта в разных буферах и с применением разных средств, препятствующих агрегации, наблюдалось, что композиции на основе этанерцепта, содержащие фосфатно-цитратный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, продемонстрировали улучшенную стабильность по сравнению с композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, при 5°C и 40°C.

Как проиллюстрировано в разделе примеров, стабильность композиции на основе этанерцепта, практически содержащей фосфатно-цитратный буфер в комбинации с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, оценивали в течение 6 месяцев исследования стабильности при 5°C, а также 2-недельного исследования при 40°C (исследование стабильности при стрессовых условиях). Композиции, содержащие фосфатно-цитратную буферную систему, были признаны лучшими по сравнению с композицией, содержащей фосфатную буферную систему, относительно % продуктов агрегации и % продуктов распада, как определено при помощи SEC.

Стабильная фармацевтическая композиция, применяемая в данном документе, подразумевает, что слитый белок TNFR:Fc демонстрирует следующие свойства.

i. Стабильная фармацевтическая композиция на основе слитого белка TNFR:Fc в фосфатно-цитратном буфере демонстрирует улучшенную стабильность по сравнению с композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер, аргинин и хлорид натрия. % агрегатов является более низким в композиции на основе этанерцепта, содержащей L-глицин в качестве средства, препятствующего агрегации, в фосфатно-цитратном буфере, что было определено после 2 недель хранения при 40°C при помощи SEC.

ii. Стабильная фармацевтическая композиция на основе слитого белка TNFR:Fc в фосфатно-цитратном буфере характеризуется менее 5% высокомолекулярных и низкомолекулярных примесей, аналогично новой композиции на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер, аргинин и хлорид натрия, после 2 недель хранения при 40°C, как определено при помощи SEC.

iii. Стабильная фармацевтическая композиция на основе слитого белка TNFR:Fc в фосфатно-цитратном буфере с глицином характеризуется приблизительно 8% высокомолекулярных и низкомолекулярных примесей. При этом композиция на основе этанерцепта, содержащая фосфатный буфер и глицин в качестве средства, препятствующего агрегации, продемонстрировала ~ 15% примесей после 2 недель хранения при 40°C, как определено при помощи SEC.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции на основе этанерцепта в фосфатно-цитратном буфере с другими средствами, препятствующими агрегации, такими как мочевина, HPBCD.

После достижения улучшенной стабильности композиции на основе этанерцепта в фосфатно-цитратном буфере, испытывали другие средства, препятствующие агрегации, из других классов соединений, отличных от аминокислот.

Наблюдали, что мочевина и HPBCD также обеспечивали стабильные фармацевтические композиции на основе этанерцепта в фосфатно-цитратном буфере. Следует понимать, что этанерцепт в фармацевтической композиции существенно не утрачивает свою активность по сравнению с композицией в начале хранения. Выражение "существенно" относится к не более 20%, или более предпочтительно 15%, или даже более предпочтительно 10% и наиболее предпочтительно 5% его активности относительно активности композиции в начале хранения. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению является подходящей для длительного хранения. Применяемое в данном документе выражение "длительное хранение" означает, что при хранении фармацевтическая композиция является стабильной в течение более месяца, предпочтительно более 6 месяцев или 12 месяцев, более предпочтительно более 24 месяцев.

Фактор некроза опухоли альфа (TNF-альфа) является представителем группы цитокинов, которые стимулируют острофазовую реакцию и, таким образом, представляет собой цитокин, участвующий в системном воспалении. TNF-альфа способен вызывать воспаление, вызывать апоптическую гибель клеток и ингибировать образование опухолей и репликацию вирусов. Нарушение регуляции продукции TNF-альфа связано с различными заболеваниями человека, например, аутоиммунное заболевание, анкилозирующий спондилит, ювенильный ревматоидный артрит, псориаз, псориатический артрит, ревматоидный артрит, болезнь Вегенера (гранулематоз), болезнь Крона или воспалительное заболевание кишечника, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), гепатит C, эндометриоз, астма, кахексия, атопический дерматит, болезнь Альцгеймера, а также рак.

Дозировка TNFR:Fc будет зависеть от заболевания, тяжести состояния, истории болезни пациента и реакции на (предшествующую) терапию и будет регулироваться и контролироваться врачом. Фармацевтическую композицию можно вводить парентерально, например, подкожно, внутримышечно, внутривенно, интраперитонеально, посредством введения в спинномозговой канал, интраартикулярно, интрасиновиально и/или интратекально, либо путем болюсной инъекции, либо непрерывной инфузии.

В варианте осуществления TNFR:Fc можно вводить взрослому субъекту или субъекту подросткового возраста, где количество может варьировать от приблизительно 1 до 80 мг. Дозу можно вводить один раз в неделю, два раза в неделю. Кроме того, дозы можно вводить каждую неделю, каждые две недели или с интервалом в несколько недель, например, три недели. Терапевтическая доза и продолжительность терапии могут варьировать в соответствии с реакцией пациента и необходимостью пациента.

В другом варианте осуществления подходящая схема для пациентов подросткового и детского возраста может включать дозу от 0,4 мг/кг до 5 мг/кг TNFR:Fc, которую вводят один или несколько раз в неделю.

В случае ревматоидного артрита у взрослых можно вводить 25 мг TNFR:Fc два раза в неделю или 50 мг один раз в неделю.

В случае псориатического артрита можно вводить 25 мг TNFR:Fc два раза в неделю или 50 мг один раз в неделю.

В случае анкилозирующего спондилита можно вводить 25 мг TNFR:Fc два раза в неделю или 50 мг один раз в неделю.

В случае пятнистого псориаза у взрослых рекомендованная доза TNFR:Fc составляет 25 мг при введении два раза в неделю или 50 мг при введении один раз в неделю. В случае педиатрического пятнистого псориаза рекомендованная доза TNFR:Fc составляет 0,8 мг/кг еженедельно, при этом с максимальной дозой 50 мг в неделю.

В случае полиартикулярного ювенильного идиопатического артрита рекомендованная доза TNFR:Fc составляет 0,8 мг/кг еженедельно, при этом с максимальной дозой 50 мг в неделю.

В случае патологии почек и печени корректировки дозы не требуется.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему композицию в соответствии с первым аспектом и инструкции по применению данной композиции.

В предпочтительном варианте осуществления композиция содержится в предварительно заполненном шприце. В другом предпочтительном варианте осуществления композиция содержится в предварительно заполненном флаконе. Набор может содержать одну или несколько стандартных лекарственных форм, содержащих фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

Можно применять любой подходящий шприц, или флакон, или ампулу. Набор также может содержать фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим изобретением в другой вторичной емкости, например, в автоинъекторе. Предварительно заполненный шприц может содержать композицию в водной форме. Описанный шприц может дополнительно быть оснащен автоинъектором, который часто представляет собой предмет одноразового использования, предназначенный только для однократного применения, и может, например, иметь объем от 0,1 до 1 мл. Однако шприц или автоинъектор также может предназначаться для многократного применения или многократного дозирования. Описанный флакон может содержать композицию в лиофилизированном или водном состоянии и может служить в качестве устройства для однократного или многократного применения. Флакон, например, может иметь объем от 1 до 10 мл.

Фармацевтическая композиция является стерильной и стабильной в течение длительного периода времени при 2-8°C. Также она является стабильной вплоть до 6 месяцев при хранении при 25°C. Настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, практически содержащую этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер, средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины и HPBCD, регулятор тоничности, стабилизатор и необязательно другие вспомогательные вещества в их подходящей комбинации.

Настоящее изобретение дополнительно относится к стабильной фармацевтической композиции, где композиция является жидкой или лиофилизированной. Настоящее изобретение дополнительно относится к стабильной фармацевтической композиции в предварительно заполненном шприце, флаконе, ампуле или шприц-ручке.

В варианте осуществления настоящего изобретения применяется этанерцепт, являющийся активным фармацевтическим ингредиентом, который получают при помощи технологии рекомбинантных ДНК с использованием клеток CHO. Концентрация этанерцепта в композиции составляет от 10 мг/мл до 100 мг/мл. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация этанерцепта в композиции составляет от 10 мг/мл до 60 мг/мл. В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация этанерцепта в композиции составляет от 20 мг/мл до 60 мг/мл.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения буфер представляет собой фосфатно-цитратный буфер. В варианте осуществления настоящего изобретения концентрация буфера в композиции составляет от 10 мМ до 100 мМ. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация буфера в композиции составляет от 10 мМ до 50 мМ. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация буфера в композиции составляет от 20 мМ до 40 мМ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения pH композиции составляет от 5 до 8.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция на основе этанерцепта содержит средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины и HPBCD.

В варианте осуществления настоящего изобретения, если средство, препятствующее агрегации, представляет собой L-глицин, то концентрация L-глицина в композиции составляет от 10 мМ до 300 мМ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, если средство, препятствующее агрегации, представляет собой мочевину, то концентрация мочевины в композиции составляет от 20 мМ до 50 мМ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, если средство, препятствующее агрегации, представляет собой HPBCD, то концентрация HPBCD составляет от 10 мМ до 100 мМ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция дополнительно содержит приемлемое для парентерального введения средство, регулирующее тоничность. Средство, регулирующее тоничность, выбрано из группы солей, например, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, или сахаридов, например, маннит, сахароза, глюкоза, или аминокислот, например, аргинин, цистеин, гистидин и т. п. Предпочтительное средство, регулирующее тоничность, представляет собой хлорид натрия. Диапазон концентраций варьирует от 0 мМ до 150 мМ.

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция дополнительно содержит стабилизатор. Стабилизатор выбран из группы, включающей сахарозу, трегалозу, лактозу, маннит. Предпочтительное стабилизирующее средство представляет собой сахарозу. Концентрация стабилизирующего средства в композиции варьирует от 0,5 вес. % до 10 вес. %. В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация стабилизатора в композиции составляет от 0,5 вес. % до 1,5 вес. %.

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция необязательно может содержать хелатирующее средство. Хелатирующее средство выбрано из группы, включающей EDTA, DTPA, HEDTA, NTA и TSP. Предпочтительное хелатирующее средство представляет собой EDTA. В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация EDTA составляет от 0 мМ до 10 мМ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит стабильный этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер; средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины или HPBCD; сахарозу в качестве стабилизирующего средства и при этом обеспечивающую длительный срок хранения при температуре 5°C.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит стабильный этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер; средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины или HPBCD; сахарозу в качестве стабилизирующего средства и при этом обеспечивающую длительный срок хранения при 5°C.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит стабильный этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер; средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины или HPBCD; сахарозу в качестве стабилизирующего средства и обеспечивающую срок хранения, составляющий 2 недели, при 40°C.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабильная фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит стабильный этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер; средство, препятствующее агрегации, выбранное из L-глицина, мочевины или HPBCD; сахарозу в качестве стабилизирующего средства, которое обеспечивает лучшую стабильность фармацевтической композиции для сохранения ее активности в течение более длительного периода времени, что обеспечивает более длительный срок хранения.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции в соответствии с первым аспектом, содержащей TNFR:Fc, фосфатно-цитратный буфер, стабилизирующее средство, выбранное из группы, включающей L-глицин, мочевину и HPBCD.

В предпочтительном варианте осуществления способ может дополнительно включать этап добавления по меньшей мере одного регулятора тоничности, такого как хлорид натрия; стабилизатора, такого как сахароза, и необязательно хелатирующего средства, как указано выше.

В другом варианте осуществления способ может дополнительно включать этап лиофилизации, который можно проводить перед или после добавления по меньшей мере одного регулятора тоничности и/или вспомогательного вещества, как указано выше.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит от 10 мг/мл до 100 мг/мл этанерцепта, от приблизительно 10 мМ до 100 мМ фосфатно-цитратного буфера, от приблизительно 10 мМ до 300 мМ L-глицина, от приблизительно 0 мМ до 150 мМ хлорида натрия и от приблизительно 0,5 вес. % до 10 вес. % сахарозы, причем значение pH находится в диапазоне от 5 до 7.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит от 10 мг/мл до 100 мг/мл этанерцепта, от приблизительно 10 мМ до 100 мМ фосфатно-цитратного буфера, от приблизительно 1 мг/мл до 18 мг/мл мочевины, от приблизительно 1 мМ до 150 мМ хлорида натрия, от приблизительно 0,5 вес. % до 2 вес. % сахарозы и от приблизительно 0 мМ до 10 мМ EDTA, причем значение pH находится в диапазоне от 5 до 7.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит от 10 мг/мл до 100 мг/мл этанерцепта, от приблизительно 10 мМ до 100 мМ фосфатно-цитратного буфера, от приблизительно 20 мг/мл до 30 мг/мл HPBCD, от приблизительно 1 мМ до 150 мМ хлорида натрия, от приблизительно 0,5 вес. % до 2 вес. % сахарозы и от приблизительно 0 мМ до 10 мМ EDTA, причем значение pH находится в диапазоне от 5 до 7.

Настоящее изобретение будет более понятным со ссылкой на следующие примеры. Однако примеры не должны истолковываться как ограничивающие объем настоящего изобретения.

Раздел экспериментов

Этанерцепт, являющийся активным ингредиентом, который применяли в описанных примерах, получали посредством технологии рекомбинантных ДНК в клетках CHO. Клетки CHO культивировали при помощи периодического способа с подпиткой. Этанерцепт очищали из бесклеточного собранного продукта посредством стандартного способа очистки и фильтрации, включая аффинную хроматографию и дополнительные этапы с применением хроматографии и фильтрации. Этанерцепт получали из разных производственных партий, которые применяли в примерах, т.е. в примере 2 и примере 5.

Общий способ получения стабильной фармацевтической композиции на основе этанерцепта

Способ получения композиций лекарственного вещества на основе этанерцепта включает 2 этапа, а именно получение нерасфасованной лекарственной формы и фасовку и упаковку. Нерасфасованную лекарственную форму получают путем разбавления лекарственного вещества буфером для составления с получением необходимой концентрации фармацевтического продукта. Буфер для составления получают путем добавления требуемого количества дигидрата трехзамещенного цитрата натрия и дигидрата дигидрофосфата натрия к WFI с последующим перемешиванием. Кроме того, требуемые количества других вспомогательных веществ добавляют к указанному выше раствору и до необходимого объема доводят при помощи WFI после регулировки pH. Буфер для составления затем фильтруют в асептических условиях с использованием стерилизующего фильтра PVDF с диаметром пор 0,22 мкм. Согласно расчету для партии, требуемое количество этанерцепта (в таком же составе) разбавляют в асептических условиях.

Композиции анализируют при помощи высокоэффективной эксклюзионной жидкостной хроматографии (SE-HPCL) при разных сроках хранения при 5°C, 25°C и 40°C. При помощи SE-HPLC разделяют белки и связанные с ними примеси на основе их размера. Таким образом, целесообразно выявлять агрегацию и фрагментацию этанерцепта.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение и не предназначены для ограничения.

Пример 1

Способ получения композиций лекарственного вещества на основе этанерцепта включал 2 этапа, а именно получение нерасфасованной лекарственной формы и фасовку и упаковку. Нерасфасованную лекарственную форму получали путем разбавления лекарственного вещества буфером для составления с получением необходимой концентрации фармацевтического продукта. Буфер для составления получали путем добавления требуемого количества (как указано в таблице 1) дигидрата трехзамещенного цитрата натрия и дигидрата дигидрофосфата натрия к WFI с последующим перемешиванием. Кроме того, требуемые количества глицина в качестве средства, препятствующего агрегации, и других вспомогательных веществ добавляли к указанному выше раствору и до необходимого объема доводили при помощи WFI после регулировки pH. Буфер для составления затем фильтровали в асептических условиях с использованием стерилизующего фильтра PVDF с диаметром пор 0,22 мкм. Согласно расчету для партии, требуемое количество этанерцепта DS (в таком же составе) разбавляли в асептических условиях отфильтрованным буфером для составления с достижением необходимой концентрации 50 ± 5 мг/мл нерасфасованного этанерцепта. Нерасфасованную лекарственную форму фильтровали через стерилизующий фильтр PVDF с диаметром пор 0,22 мкм и распределяли в асептических условиях в предварительно заполненные шприцы. PFS затем исследовали в отношении стабильности при различных значениях температуры. В таблице 1 описана композиция, полученная с использованием L-глицина в качестве средства, препятствующего агрегации, при концентрации 75 мМ.

Таблица 1. Композиция из примера 1

Пример 2

Исследовали композиции на основе этанерцепта в разных буферах и с использованием разных средств, препятствующих агрегации. Стабильность в течение короткого периода времени композиции на основе этанерцепта, содержащей фосфатно-цитратный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, анализировали при 5°C в течение 6 месяцев и при 40°C в течение 2 недель по сравнению с композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, причем другие вспомогательные вещества оставались неизменными, при помощи SE-HPLC, и результаты представлены в таблице 2. В таблице 2 проиллюстрированы исследования стабильности разных композиций на основе этанерцепта.

Таблица 2. Исследования стабильности при 5°C и 40°C

Как проиллюстрировано в таблице 2, композиция на основе этанерцепта, содержащая фосфатно-цитратный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, характеризовалась улучшенной стабильностью по сравнению с композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер с L-глицином в качестве средства, препятствующего агрегации, при 5°C и 40°C.

Пример 3

Способ получения композиции лекарственного вещества на основе этанерцепта являлся аналогичным объясненному в примере 1, причем применяемое средство, препятствующее агрегации, представляло собой мочевину. Композицию, приведенную в таблице 3, получали с использованием мочевины в качестве средства, препятствующего агрегации.

Таблица 3. Композиция из примера 3

Пример 4

Способ получения композиции лекарственного вещества на основе этанерцепта являлся аналогичным объясненному в примере 1, причем применяемое средство, препятствующее агрегации, представляло собой HPBCD. Композицию, приведенную в таблице 4, получали с использованием HPBCD в качестве средства, препятствующего агрегации.

Таблица 4. Композиция из примера 4

Пример 5

Новой композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатный буфер и аргинин в качестве средства, препятствующего агрегации (композиция 1), и композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатно-цитратный буфер и L-глицин в качестве средства, препятствующего агрегации (композиция 2), заполняли PFS и исследовали в отношении стабильности в течение длительного периода времени, являющегося непрерывным. Данные о чистоте белка после 9 месяцев хранения при 5°C, 6 месяцев хранения при 25°C, 2 недель хранения при 40°C анализировали при помощи SE-HPCL, и результаты представлены в таблице 5.

Таблица 5. Сравнительные данные стабильности

Аналогично, композициями из примера 3 и примера 4, т.е. композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатно-цитратный буфер с мочевиной в качестве средства, препятствующего агрегации, и композицией на основе этанерцепта, содержащей фосфатно-цитратный буфер с HPBCD в качестве средства, препятствующего агрегации, заполняли PFS и исследовали в отношении стабильности при 5°C, 25°C и 40°C. Оценивали стабильность этих композиций и, как было обнаружено, она была аналогичной таковой композиции 1 вплоть до периода 2 недели.

Пример 6

Этанерцепт, применяемый для исследования лиофилизации, составляли и тщательно диализировали с использованием фармацевтических композиций, приведенных в таблице 6. Соответствующими нерасфасованными лекарственными формами заполняли флаконы, прикрывали пробкой и подвергали лиофилизации.

Таблица 6. Композиции из примера 6

Все патентные документы, заявки на патенты и публикации, цитируемые в настоящей заявке, таким образом, включены посредством ссылки во всей полноте для всех целей в той же степени, как если бы каждый отдельный патентный документ, заявка на патент или публикация были, таким образом, указаны в отдельности.

Хотя некоторые варианты осуществления и примеры были подробно описаны выше, специалист в данной области техники сможет отчетливо понять, что много модификаций возможны в вариантах осуществления и примерах без отступления от их идей.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к стабильной фармацевтической композиции на основе этанерцепта. Стабильная фармацевтическая композиция содержит этанерцепт, фосфатно-цитратный буфер и глицин в качестве средства, препятствующего агрегации, взятые в определенном соотношении. Вышеописанная фармацевтическая композиция обладает повышенной стабильностью и устойчивостью к агрегации. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 6 табл., 6 пр.

1. Стабильная фармацевтическая композиция, содержащая 10-100 мг/мл этанерцепта, 10-100 мМ фосфатно-цитратного буфера и 10-300 мМ глицина в качестве средства, препятствующего агрегации.

2. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 1, где значение рН композиции находится в диапазоне от 5 до 7.

3. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 1, где композиция является стерильной и готовой для парентерального введения.

4. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 1, где композиция является жидкой или лиофилизированной.

5. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая средство, регулирующее тоничность, и стабилизирующее средство.

6. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 5, где средство, регулирующее тоничность, выбрано из группы солей, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, хлорида кальция; группы сахаридов, состоящей из маннита, сахарозы, глюкозы, и аминокислот.

7. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 5, где стабилизирующее средство выбрано из группы, состоящей из сахарозы и трегалозы.

8. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая EDTA в качестве хелатирующего средства.

9. Стабильная фармацевтическая композиция, содержащая от 10 мг/мл до 100 мг/мл этанерцепта, от 10 мМ до 100 мМ фосфатно-цитратного буфера, от 10 мМ до 300 мМ глицина, от 1 мМ до 150 мМ хлорида натрия и от 0,5 вес. % до 10 вес. % сахарозы.

10. Стабильная фармацевтическая композиция по п. 9, дополнительно содержащая EDTA в качестве хелатирующего средства.