ВНУТРЕННИЕ СОЛИ ТИАЗОЛА, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2019 года по МПК C07D277/30 A61K31/426 A61P17/00 A61P3/10 A61P13/12 A61P9/12 A61P9/10 A61P27/12 A61P19/02 A61P25/02 A61P9/04 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических химических веществ и относится к внутренним солям тиазола, способам их получения и их применению.

Уровень техники

Конечные продукты глубокого гликирования (AGE) представляют собой продукты ковалентного присоединения, которые образуются путем спонтанного взаимодействия при неферментативном катализе между макромолекулой, такой как белок, липопротеин или нуклеиновая кислота, и глюкозой или другим восстанавливающим сахаром in vivo в физиологических условиях при старении человека и развитии диабета. Образование AGE сшитой структуры является медленной процедурой, при которой концевая восстанавливающая аминогруппа макромолекулы и альдегидная группа молекулы глюкозы образуют через присоединение образуют обратимые продукты раннего гликирования (основания Шиффа); через несколько дней неустойчивые основания Шиффа образуют более устойчивые ранние продукты гликирования типа Амадори через перегруппировку, и продукты Амадори образуют AGE через ряд реакций дегидрирования, окисления и перегруппировки, механизмы которых до конца не ясны. Из-за способности AGE к образованию трехмерной структуры между AGE и макромолекулами, такими как белки, жиры и нуклеиновые кислоты, через дикарбонильные связи в виде мостиков, которые образуются при гликозилировании, может образоваться сшитая структура с большей молекулярной массой.

AGE образуют сшитые структуры, которые старят коллаген, ускоряют артериосклероз, изменяют компоненты матрикса, вызывают агрегацию тромбоцитов, приводят к снижению эластичности сосудов, уменьшению податливости сосудов и генерации анормального липопротеинового метаболизма, причем посредством этого ухудшается функция сердечно-сосудистой системы. Следовательно, AGE тесно связаны со многими осложнениями диабета и процессами старения, такими как почечная гипофункция, заболевания нервной системы, болезнь Альцгеймера, старение кожи, ретинопатия, катаракта, сердечно-сосудистые заболевания и артериосклероз.

В настоящее время разработаны некоторые терапевтические методы ингибирования накопления AGE. В патенте на изобретение Китая CN101684106B раскрывается ониевая соль тиазола, например бромид 3-карбоксиметил-4-метилтиазолия следующей формулы А

в которой

М представляет собой Na или К;

X представляет собой Br, Cl или I;

соединение формулы А может существенно уменьшить in vivo содержание флуоресцирующих AGE в аорте, миокарде левого желудочка и почках у крыс с застарелым диабетом, и между тем, может быть улучшена растворимость миокардиального коллагена и коллагена из хвоста, может быть улучшена пластичность аорты у диабетических крыс, может быть снижено общее периферическое сопротивление, может быть повышен минутный сердечный выброс, и может быть существенно улучшена функция левого желудочка. Таким образом, такое соединение может лизировать образовавшуюся сшитую структуру AGE, восстанавливать структуру сосудов, реверсировать склероз и дисфункцию, вызванные в сердечно-сосудистой системе диабетом, и представляет собой новый тип разрушителя AGE.

Однако, по последующим исследованиям, соединение формулы А неустойчиво по своим физическим и химическим свойствам, его качество трудно контролировать в процессе крупномасштабного производства, и его образцы неустойчивы при хранении при комнатной температуре и легко поглощают влагу и изменяют цвет, так что оно не подходит для дальнейшей разработки в качестве лекарственного средства.

Например:

(1) Результаты элементного анализа соединения формулы А во многих испытаниях показывают существенные расхождения и далеки от теоретического значения (превышая 0,3% предела точности).

(2) Качество нестабильно, соединение легко поглощает влагу, образует агломераты и изменяет цвет после хранения в течение 3 месяцев (температура 40°С, влажность 75%, давление атмосферное), см. также фиг. 1А и фиг. 1B.

Не желая ограничивать себя какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения после тщательных изучений результатов рентгенографии и элементного анализа обнаружили, что для соединения, имеющего как структуру аммониевой соли, так и структуру карбоксилата, затруднительно независимое и устойчивое существование в молекулярной форме, возможными причинами чего может быть то, что Na и Br в молекуле могут очень легко объединяться в форму NaBr, так что соединение формулы А имеет существенный недостаток с точки зрения возможности его использования в качестве лекарственного средства.

Соединение формулы А показывает высокую фармакологическую активность и хорошие фармакокинетические свойства in vitro и in vivo, но его форма ониевого бромида является нестабильной по своим физическим и химическим свойствам и поэтому не подходит для использования в качестве лекарственного средства.

Следовательно, существует необходимость в разработке новой устойчивой и эффективной внутренней соли тиазола.

Суть изобретения

Авторы настоящего изобретения после тщательных исследований и творческой работы получили внутреннюю соль тиазола формулы I. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что соединение формулы I структурно устойчиво и имеет превосходные физические и химические свойства, а также хорошую фармакологическую активность, и может быть получено в крупном масштабе с получением образцов устойчивого, контролируемого и надежного качества, в силу чего это соединение подходит для фармацевтической разработки. Поэтому настоящее изобретение включает перечисленные далее аспекты.

Один аспект настоящего изобретения относится к соединению формулы I

или его фармацевтически приемлемой соли,

где в указанной формуле

n равен 0, 1, 2 или 3.

Соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль по любому объекту настоящего изобретения, при этом указанное соединение формулы I выбирают из

внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0), и

моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1).

Внутренняя соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола может представлять собой продукт, полученный прямым синтезом.

Моногидрат внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола может представлять собой продукт выращивания монокристаллов внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола.

Способ получения монокристаллов (n=1, 2 или 3) соединения формулы I включает следующие стадии:

внутреннюю соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0) растворяют в метаноле, затем добавляют по каплям этилацетат и оставляют стоять для получения монокристаллов;

предпочтительно на 1 мг внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола используют 0,05 мл метанола и 0,3 мл этилацетата.

В одном воплощении настоящего изобретения способ получения монокристалла включает подготовку 2 мг белого кристаллического вещества внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола, добавление 0,1 мл метанола, затем добавление 0,6 мл этилацетата после растворения кристаллического вещества, и выстаивание до тех пор, пока кристаллические частицы постепенно не вырастут в монокристалл.

В одном воплощении настоящего изобретения раскрывается кристаллическая форма внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0), рентгеновский дифракционный спектр порошка которой показывает характеристические дифракционные пики при 12,6, 13,3, 14,9, 18,5, 19,1, 27,0, 27,7, 28,8, 29,8, 32,1, 40,8, 42,8, 45,2, 47,9, 52,6, 54,8, 55,6, 59,0 (2θ/°С) (подробности см. на фиг. 4).

В одном воплощении настоящего изобретения раскрывается кристаллическая форма моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1), рентгеновский дифракционный спектр порошка которой показывает характеристические дифракционные пики при 11,8, 15,2, 16,7, 18,9, 19,3, 19,8, 21,0, 23,8, 24,5, 25,2, 26,4, 26,9, 28,6, 29,3, 31,3, 31,9, 32,1, 34,1, 34,7, 35,0, 35,6, 38,9, 40,1, 40,6, 43,1, 45,9, 46,7, 48,1, 49,0 (2θ/°С) (подробности см. на фиг. 5).

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы I согласно любому аспекту настоящего изобретения, включающему следующие стадии:

соединение А вводят в реакцию с 1,2-эпоксипропаном, и получают соединение В

при этом в структуре соединения А X представляет собой хлор, бром или иод.

Способ по любому разделу настоящего изобретения, в котором соединение А получают через следующие стадии:

4-метилтиазол вводят в реакцию с хлоруксусной кислотой, бромуксусной кислотой или иодуксусной кислотой, и получают соединение А

Соединение В представляет собой внутреннюю соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0).

Способ по любому аспекту настоящего изобретения, в котором соединение А и/или соединение В отделяют и очищают перекристаллизацией; предпочтительно растворитель, используемый для перекристаллизации, представляет собой любой растворитель, независимо выбранный из группы, включающей ацетон, метанол, этанол, этиловый эфир, петролейный эфир и н-гексан или их любую смесь.

В одном воплощении настоящего изобретения способ получения включает растворение 15,6 г 4-метилтиазола в 50 мл безводного ацетона, добавление 21 г бромуксусной кислоты, перемешивание в течение 3 час, фильтрацию и получение твердого вещества, перекристаллизацию твердого вещества из этанола с образованием белого твердого вещества, его сушку и получение 26 г продукта с выходом 72%. Растворяют 10 г белого твердого бромида 3-карбоксиметил-4-метилтиазолия в 50 мл дистиллированной воды, затем добавляют 7,31 г 1,2-эпоксипропана, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 час; по окончании реакции реакционный раствор экстрагируют 30 мл дихлорметана и экстрагируют 3 раза, при этом дихлорметановый слой отбрасывают; водный слой упаривают при пониженном давлении, и получают бледно-желтое маслянистое вещество. К маслянистому веществу добавляют ацетон в количестве, подходящем для осаждения частиц бледно-желтого вещества; частицы перекристаллизовывают в системе этанол-этиловый эфир (при этом оптимальное для перекристаллизации соотношение следующее: 1 г частиц желтого вещества растворяют при нагревании в 4,5 мл этанола, затем добавляют 2 мл этилового эфира), и получают 5,15 г белого кристаллического вещества с выходом 78%.

В одном воплощении настоящего изобретения способ получения включает

Авторы изобретения получили соединение 3 и соединение 4 (фиг. 2) в результате создания различных схем синтеза и практических исследований, исследовали химические свойства и фармакокинетические свойства указанных двух соединений in vivo, и в итоге определили, что цвиттерионное соединение 4 (внутренняя соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола) является наиболее устойчивой формой такой структуры.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к композиции, включающей одно или больше соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей по любому разделу настоящего изобретения и, необязательно, один или несколько фармацевтически или косметически приемлемых эксципиентов; необязательно композиция также включает одно или несколько антирипертензивных средств; предпочтительно указанное антигипертензивное средство представляет собой нифедипин; предпочтительно указанная композиция представляет собой препарат для очищения ротовой полости.

В одном воплощении настоящего изобретения композиция представляет собой фармацевтическую композицию. Фармацевтическая композиция может находиться в различных формах для различных путей введения.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению включает эффективное количество соединения формулы I, его гидрата или фармацевтически приемлемой соли, а также один или несколько подходящих фармацевтически приемлемых носителей. Фармацевтически приемлемые носители включают, но не ограничиваются перечисленным, ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточный белок, такой как человеческий сывороточный альбумин, буферное вещество, такое как фосфат, глицерин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смесь неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамина сульфат, динатрийгидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия, цинковая соль, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, полиакрилаты, пчелиный воск, ланолин.

Соединения по настоящему изобретению составляют группу действенных разрушителей сшитых белков, имеют превосходную способность разрушать гликозилированные зрелые белки и поэтому могут использоваться, без ограничения, для (i) повышения эластичности кожи или уменьшения морщин; (ii) лечения диабета; (iii) лечения или ослабления осложнений при диабете; (iv) лечения или ослабления повреждения почек; (v) лечения или ослабления повреждения сосудов; (vi) лечения или ослабления гипертензии; (vii) лечения или ослабления ретинопатии; (viii) лечения или ослабления повреждения белков хрусталика; (ix) лечения или ослабления катаракты; (х) лечения или ослабления периферической невропатии; (xi) лечения или ослабления остеоартрита; (xii) использования в комбинации с антигипертензивным средством для лечения ассоциированной с диабетом гипертензии.

Соединения по настоящему изобретению могут существенно улучшить состояние при склерозе сердечно-сосудистой системы.

Соединения по настоящему изобретению могут весьма усилить терапевтическую чувствительность к лекарственным средствам при диабете или сердечно-сосудистом заболевании.

Соединения по настоящему изобретению могут оказать лечебное действие при хронической сердечной недостаточности.

Неферментативные реакции в ротовой полости могут привести к окрашиванию зубов. Используемые в настоящее время противокариозные средства могут ускорить карбонилирование и дополнительно привести к окрашиванию зубов. В последнее время для удобного очищения ротовой полости обычно используют вид катионных бактерицидных средств с противокариозной функцией. Такие катионные бактерициды включают алексидин, хлорат цетилпиридиния и т.д.. Такие средства могут ускорять критическую реакцию Майяра при гликозилировании, причем посредством этого ускоряется и окрашивание зубов (Nordbo, J. Dent. Res., 58: 1429 (1979)). Кроме того, имеются сообщения, что in vitro гибитан и цефарин могут катализировать гликозилирование (реакция потемнения). Из-за реакции Майяра добавление гибитана в смесь сахара и аминокислоты ускоряет образование пигментов.

На основании описанного выше механизма соединения и содержащие их фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно использовать в ротовой полости, в особенности использовать в качестве очищающего раствора для ротовой полости и добавки в зубную пасту.

Для описанных выше областей применения соединений по настоящему изобретению в очищающих растворах для ротовой полости и зубных пастах можно использовать подходящие формы нетоксичных и фармацевтически приемлемых носителей.

Фармацевтические композиции соединений по настоящему изобретению можно вводить любым из следующих путей: пероральное введение, ингаляция спреем, ректальное применение, назальное введение, трансбуккальное введение, местное введение, парентеральное введение, такое как подкожная, внутривенная, внутримышечная, интраперитонеальная, интратекальная, интравентрикулярная, интрастернальная и интракраниальная инъекция или инфузия, или введение через внешний резервуар, из которых предпочтительны пероральное введение, интраперитонеальное или внутривенное введение.

Что касается перорального введения, соединения по настоящему изобретению могут находиться в любых перорально приемлемых препаративных формах, включая, но не ограничиваясь перечисленным, таблетки, капсулы, водные растворы или водные суспензии, в которых носители, используемые для таблеток, обычно включают лактозу и кукурузный крахмал, и также может быть добавлено смазывающее вещество, такое как стеарат магния. Разбавители, используемые для капсул, обычно включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. В водных суспензиях активный ингредиент обычно используют в смеси с эмульгатором и суспендирующим веществом. При необходимости описанный выше пероральный препарат также включает подслащивающее вещество, корригент или краситель.

Для местного введения, в особенности для местного наружного применения на страдающие поверхности или органы, такие как глаза, кожа или нижний отдел кишечника, соединения по настоящему изобретению могут находиться в различных формах для местного введения, в зависимости от различных страдающих поверхностей или органов. Подробности описаны далее.

Для местного введения в глаза соединения по настоящему изобретению могут находиться в препаративных формах полученных микронизацией суспензий или растворов, в которых используемые носители могут представлять собой изотоничный стерильный физиологический раствор с определенным значением pH, также может добавляться или не добавляться консервант, такой как хлорбензилалкоксид. Для использования для глаз соединения также могут находиться в форме пасты, такой как вазелиновая паста.

Для местного введения в кожу соединения по настоящему изобретению могут находиться в форме подходящей мази, лосьона или крема, в которых активные ингредиенты суспендированы или растворены в одном или нескольких носителях. Носители, используемые в мази, включают, но не ограничиваются перечисленным, минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгирующий воск и воду; носители, используемые в лосьоне или креме, включают, но не ограничиваются перечисленным, минеральное масло, моностеарат сорбитана, твин-60, воскообразный гексадекановый эфир, гексадекановый ароматический спирт, 2-октилдодециловый спирт, бензиновый спирт и воду.

Соединения по настоящему изобретению также можно вводить в форме стерильных инъекций, включающих стерильную воду для инъекций или маслянистую суспендирующую жидкость, или стерильного раствора для инъекций, в котором применимые носители и растворители включают воду, раствор Рингера или изотоничный раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды можно использовать также нелетучее масло, такое как моноглицериды или диглицериды.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли по любому аспекту настоящего изобретения при получении продукта, такого как лекарственное средство для лечения и/или ослабления и/или профилактики и/или вспомогательной терапии заболевания или расстройства, ассоциированного со старением белков, предпочтительно указанное заболевание или расстройство, ассоциированное со старением белков, является одним или несколькими, выбранными из:

i) снижения эластичности кожи или увеличения морщин; ii) диабета; iii) осложнения диабета; iv) повреждения почек; v) повреждения сосудов; vi) гипертензии; vii) ретинопатии; viii) повреждения белков хрусталика; ix) катаракты; х) периферической невропатии; xi) остеоартрита; xii) гипертензии, ассоциированной с диабетом.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли по любому разделу настоящего изобретения при получении реверсирующего агента в случае окрашивания зубов у животного; перорального препарата для предупреждения или реверсирования окрашивания зубов; консерванта белка или консерванта животного белка; разрушителя сшитого белка, лекарственного средства для разрушения конечного продукта глубокого гликирования; лекарственного средства для уменьшения содержания в плазме BNP и/или содержания в плазме МСР-1; лекарственного средства для улучшения при склерозе сердечно-сосудистой системы; лекарственного средства для повышения терапевтической чувствительности в случае диабета и сердечно-сосудистого заболевания или лекарственного средства для лечения и/или профилактики и/или вспомогательной терапии хронической сердечной недостаточности.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу, выбранному из любого одного или нескольких следующих альтернативных вариантов (1)-(7), отличающемуся тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли согласно любому аспекту настоящего изобретения или композиции по настоящему изобретению:

(1) способ разрушения конечных продуктов глубокого гликирования (AGE) in vivo или in vitro;

(2) способ улучшения состояния при склерозе сердечно-сосудистой системы;

(3) способ повышения чувствительности в случае лекарственной терапии диабета или сердечно-сосудистого заболевания;

(4) способ лечения и/или профилактики и/или вспомогательной терапии хронической сердечной недостаточности;

(5) способ предупреждения или реверсирования окрашивания зубов;

(6) способ сохранения растительного белка или животного белка;

(7) способ лечения и/или ослабления и/или профилактики и/или вспомогательной терапии заболевания или расстройства, ассоциированного со старением белков; предпочтительно указанное заболевание или расстройство, ассоциированное со старением белков, выбирают из:

i) снижения эластичности кожи или увеличения морщин; ii) диабета; iii) осложнения диабета; iv) повреждения почек; v) повреждения сосудов; vi) гипертензии; vii) ретинопатии; viii) повреждения белков хрусталика; ix) катаракты; х) периферической невропатии; xi) остеоартрита; xii) гипертензии, ассоциированной с диабетом.

В одном воплощении настоящего изобретения способы не являются терапевтическими.

Следует отметить, что доза и способ применения соединения по настоящему изобретению зависят от многих факторов, включая возраст, массу тела, пол, общее физическое состояние и состояние питания пациентов, интенсивность активности соединений, время введения, скорость метаболизма, тяжесть расстройств и субъективное мнение лечащих врачей. Предпочтительная доза составляет от 0,01 до 100 мг/кг (массы тела)/сутки, и наиболее предпочтительная доза составляет от 20 мг/кг до 30 мг/кг (массы тела)/сутки.

В настоящем изобретении термин «эффективное количество» относится к дозе, которая может соответствовать лечению, профилактике, облегчению и/или ослаблению заболевания или расстройства, описанного в данном описании, у субъекта.

Термин «субъект» относится к пациенту или животному, такому как человек, собака, обезьяна, корова, лошадь, которому вводят композицию по настоящему изобретению для лечения, профилактики, облегчения и/или ослабления заболевания или расстройства по настоящему изобретению.

Термин «заболевание и/или расстройство» относится к физическому состоянию субъекта, которое родственно заболеванию и/или расстройству по настоящему изобретению.

Благоприятные эффекты настоящего изобретения

Соединение формулы I, его гидрат или фармацевтически приемлемая соль имеют эквивалентную активность в отношении разрушения AGE и более стабильную фармакокинетику по сравнению с предпочтительной натриевой солью 3-карбоксиметил-4-метилбромтиазолия (см. формулу А), раскрытой в CN101684106B; кроме того, этот продукт легче контролировать и он является более подходящим для фармацевтической промышленности и/или косметической промышленности.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1: сравнение внешнего вида соединения формулы A (M=Na, K=Br) до и после трех месяцев хранения, где фиг. 1А представляет собой вновь полученное соединение формулы А; фиг. 1В представляет собой соединение формулы А после трех месяцев хранения (температура 40°С, влажность 75%, атмосферное давление).

Фиг. 2: структурная схема моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1) по дифракции рентгеновских лучей на монокристалле.

Фиг. 3: схема молекулярной кристаллической упаковки моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1).

Фиг. 4: порошковая дифрактограмма внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0).

Фиг. 5: порошковая дифрактограмма моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1).

Фиг. 6: динамические кривые систолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12).

Фиг. 7: переменные коэффициенты систолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; *Р<0,05, Р<0,01 против нормальной группы; **Р<0,01 против модели).

Фиг. 8: динамические кривые диастолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00.

Фиг. 9: динамические кривые пульсового артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00.

Фиг. 10: динамические кривые частоты сердечных сокращений в различных группах за период времени 10:00-20:00.

Фиг. 11: динамические кривые систолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (М среднее ± стандартное отклонение, n=12; ^##Р<0,01 против модельной группы; **Р<0,01 против группы с нифедипином).

Фиг.12: динамические кривые предела снижения систолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; ^##Р<0,01 против модельной группы; *Р<0,05, **Р<0,01 против группы с нифедипином).

Фиг. 13: динамические кривые переменных коэффициентов систолического артериального давления в различных группах за период времени 11:00-15:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; **Р<0,01 против модельной группы).

Фиг. 14: динамические кривые диастолического артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; ^##Р<0,01 против модельной группы; *Р<0,05, **Р<0,01 против группы с нифедипином).

Фиг. 15: динамические кривые пульсового артериального давления в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; **Р<0,01 против группы с нифедипином).

Фиг. 16: динамические кривые частоты сердечных сокращений в различных группах за период времени 10:00-20:00.

Фиг. 17: динамические кривые времени выброса в различных группах за период времени 10:00-20:00 (М среднее ± стандартное отклонение, n=12; *Р<0,05 против группы с нифедипином).

Фиг. 18: динамические кривые индекса мышечного потребления кислорода в различных группах за период времени 10:00-20:00 (среднее ± стандартное отклонение, n=12; *Р<0,05 против группы с нифедипином).

Фиг. 19: содержание 6-кетонпростагландина в плазме в различных группах (среднее ± стандартное отклонение, n=9-11; *Р<0,05 против нормальной группы; **Р<0,01 против модельной группы; ^##Р<0,05 против группы с нифедипином).

Фиг. 20: содержание ТХВ₂ в плазме в различных группах (среднее ± стандартное отклонение, n=9-11; *Р<0,01 против нормальной группы; **Р<0,01 против модельной группы).

Фиг. 21: величины ТХВ₂/6-кето-PGI1a в различных терапевтических группах (среднее ± стандартное отклонение, n=9-11; *Р<0,01 против нормальной группы; **Р<0,01 против модельной группы; ^$$Р<0,05 против группы с нифедипином).

Фиг. 22: содержание МСР-1 в плазме в различных терапевтических группах (среднее ± стандартное отклонение, n=9-11; *Р<0,05 против нормальной группы; ^##Р<0,01 против модельной группы).

Фиг. 23: содержание BNP в плазме в различных терапевтических группах (среднее ± стандартное отклонение, n=9-11; *Р<0,05 против нормальной группы; ^ΔΔр<0,05, **р<0,01 против модельной группы; ^##Р<0,01 против группы с нифедипином).

Частные варианты осуществления настоящего изобретения

Воплощения настоящего изобретения описываются подробно в комбинации со следующими далее примерами, но специалистам в данной области техники следует иметь в виду, что примеры используются только для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения его объема. Любые специфические условия, которые не приводятся в примерах, являются обычными условиями или условиями, предлагаемыми производителями. Реагенты или приборы, не поставляемые производителями, являются обычными продуктами, коммерчески доступными на рынке.

Температуры плавления соединений измеряют прибором для измерения температуры плавления типа SRY-1, который не подвергают температурной калибровке. Спектры 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР регистрируют спектрометром ядерного магнитного резонанса типа Bruker ARX400; масс-спектры регистрируют масс-спектрометром ЖХ-МС высокого разрешения API-150EX; дифракцию рентгеновских лучей на монокристалле измеряют на дифрактометре Rigaku Saturn944 CCD; порошковую дифракцию рентгеновских лучей измеряют на дифрактометре Bruker D8 Advance.

Пример 1. Получение бромида 3-карбоксиметил-4-метилтиазолия (соединение А)

Растворяют 15,6 г 4-метилтиазола в 50 мл безводного ацетона, добавляют 21 г бромуксусной кислоты, перемешивают в течение 3 час, смесь фильтруют, получают твердое вещество, перекристаллизовывают его из этанола, получают белое твердое вещество, которое сушат, и получают 26 г продукта реакции, выход 72%, т.пл.=240,6-241,6°С.

МС [М]⁺=158,2 т/е; ¹Н-ЯМP (400 МГц, ДМСО-d₆), 2,48 (д, 3Н); 5,55 (с, 2Н); 8,09 (д, 1Н); 10,25 (д, 1Н); 14,05 (ушс, 1Н).

Пример 2. Получение внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0)

Растворяют 10 г белого твердого бромида 3-карбоксиметил-4-метилтиазолия в 50 мл дистиллированной воды, затем добавляют 7,31 г 1,2-эпоксипропана, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 час, по завершении реакции реакционный раствор 3 раза экстрагируют 30 мл дихлорметана, и дихлорметановый слой отбрасывают; водный слой упаривают при пониженном давлении, и получают светло-желтое маслянистое вещество. К маслянистому веществу добавляют определенное количество ацетона, получают выпавшие в осадок светло-желтые частицы, выполняют перекристаллизацию в системе этанол-этиловый эфир (при этом наиболее предпочтительное соотношение при перекристаллизации следующее: 1 г желтых частиц растворяют при нагревании в 4,5 мл этанола, затем добавляют 2 мл этилового эфира), и получают 5,15 г белого кристаллического вещества, выход 78%, т.пл. 169°С.

МС: 158 [М+Н]⁺, 315 [2М+Н]⁺, 472 [3М+Н]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆), 2,41 (д, 3Н), 4,76 (с, 2Н), 7,90 (д, 1Н), 9,97 (д, 1Н); ¹³С-ЯМР (метанол-d₄), δ 12,98, 56,71, 121,47, 148,36, 169,71;

Элементный анализ: вычислено для C₆H₇NO₂S (157,2): С - 45,85; Н - 4,49; N - 8,91%; найдено С - 45,74; Н - 4,51; N - 8,87%.

Кристаллическую структуру определяют дифракцией рентгеновских лучей на монокристалле.

Это была кристаллическая форма соединения внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0), и ее рентгеновский спектр порошковой дифракции имел характеристические дифракционные пики при 12,6, 13,3, 14,9, 18,5, 19,1, 27,0, 27,7, 28,8, 29,8, 32,1, 40,8, 42,8, 45,2, 47,9, 52,6, 54,8, 55,6, 59,0 (2θ/°С) (подробности см. на фиг. 4).

Пример 3. Получение моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1)

При 20°С 2 г внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=0), полученной в примере 2, растворяют в смешанном растворителе из 100 мл метанола и 1 мл воды, по завершении растворения добавляют постепенно 300 мл этилацетата; перемешивают до однородного состояния; и оставляют стоять при 5°С в течение 12 час, и выпавшее в осадок кристаллическое вещество представляет собой моногидрат внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1).

Кристаллическую структуру определяют дифракцией рентгеновских лучей на монокристалле.

К 2 мг белого кристаллического вещества внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола добавляют 0,1 мл безводного метанола, после растворения частиц добавляют по каплям 0,6 мл этилацетата, и оставляют стоять до тех пор, пока кристаллические частицы постепенно не вырастут в форму монокристаллов (моногидрат внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола, n=1). Кристаллическую структуру определяют дифракцией рентгеновских лучей на монокристалле.

Это была кристаллическая форма соединения моногидрата внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (n=1), и ее рентгеновский спектр порошковой дифракции имел характеристические дифракционные пики при 11,8, 15,2, 16,7, 18,9, 19,3, 19,8, 21,0, 23,8, 24,5, 25,2, 26,4, 26,9, 28,6, 29,3, 31,3, 31,9, 32,1, 34,1, 34,7, 35,0, 35,6, 38,9, 40,1, 40,6, 43,1, 45,9, 46,7, 48,1, 49,0 (2θ/°С) (подробности см. на фиг. 5).

Кристаллографические данные: C₆H₇NO₂SH₂O, Mr=175,20, орторомбическая система, пространственная группа Р-1, кристаллографические параметры: а=5,6082(11), альфа = 90 град., b=8,4615(17) , бета = 90 град., с=16,064(3) , гамма = 90 град.

Схема структуры монокристалла показана на фиг. 2. Схема молекулярной кристаллической упаковки показана на фиг. 3.

Пример 4. Испытание на устойчивость

Берут три партии образца (полученного согласно примеру 2) согласно фармакопее Китая, издание 2010, упаковывают, как для продажи (для упаковки лекарственных средств используют мешки из полиэтилена высокой плотности), помещают в условия RT40°C, RH75% (насыщенный раствор NaCl) для выполнения ускоренного испытания, через 1, 2, 3, 6 месяцев отбирают образцы для проверки соединения формулы I и соединения формулы А, сравнивают с данными на день 0, и приводят результаты в таблице 1 и таблице 2.

Берут партии образца, полученного согласно примеру 3, упаковывают, как для продажи (для упаковки лекарственных средств используют мешки из полиэтилена высокой плотности), помещают в условия RT40°C, RH75% (насыщенный раствор NaCl), через 1, 2, 3 месяцев отбирают образцы и сравнивают с данными на день 0, и приводят результаты в таблице 3.

Берут три партии образца соединения формулы А согласно фармакопее Китая, издание 2010, упаковывают, как для продажи (для упаковки лекарственных средств используют мешки из полиэтилена высокой плотности), помещают в условия RT40°C, RH75% (насыщенный раствор NaCl), через 1, 2, 3 месяца отбирают образцы и сравнивают с данными на день 0, и приводят результаты в таблице 1 и таблице 4.

Из приведенных выше данных можно видеть, что соединения примера 2 и примера 3 показывают устойчивость, значительно превосходящую устойчивость известного соединения формулы А, и таким образом имеет более хорошую возможность стать лекарственным средством.

Пример 5. Испытание in vitro на разрушение сшитого IgG (иммуноглобулина G) на поверхности эритроцитов

Поскольку сшитый IgG на поверхности эритроцитов является типичной сшитой структурой AGE, определение степени, до которой соединение разбивает сшитый IgG на поверхности эритроцитов, хорошо известно как более хороший способ оценки способности соединения к разрушению сшитой структуры AGE (Bruceh R. Wolffenbuttel, Breakers of advanced glycation end products restore large artery properties in experimental diabetes, Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1998, 95, 4630).

Способ обработки клеток крови: 16-недельным диабетическим крысам дают наркоз, берут образцы крови из их сонных артерий, добавляют гепарин для предотвращения свертывания крови, центрифугируют при 4°С и 1000 g в течение 3 мин, и берут нижний слой RBC (эритроциты); промывают 0,1 моль/л PBS (pH 7,4) 3 раза, и каждый раз центрифугируют при 4°С и 1000 g в течение 3 мин; и нижний слой RBC используют для испытания.

Способ введения in vitro. В качестве отрицательного контроля используют 0,1 моль/л изотоничный PBS (фосфатный буфер) (pH 7,4), и готовят растворы различных концентраций каждого из испытываемых соединений с использованием буфера. К 900 мкл раствора или растворителя добавляют 100 мкл RBC, слегка встряхивают при 37°С в течение 16-18 час; растворы центрифугируют при 1000 g, 4°С, в течение 3 мин, супернатант отбрасывают, планшет промывают 0,1 моль/л PBS (pH 7,4) 4 раза для удаления оставшегося соединения; центрифугируют при 1000 g, 4°С, в течение 3 мин, и нижний слой RBC разбавляют 1:100 для анализа ELISA.

Процедура определения содержания сшитого IgG на поверхности эритроцитов методом иммуносорбции: 96-луночный планшет Multiscreen-HA, 0,45 мкм (Millipore), заполняют Superblock (300 мкл/лунка), 37°С, 1 час; затем сливают при разрежении ~0,7 кПа (5 мм. рт.ст.), весь планшет промывают PBST 3 раза, дважды промывают 0,1 М PBS (pH 7,4), каждый раз встряхивая планшет в течение 1 мин; добавляют RBC (50 мкл/лунка) к испытываемым веществам, оставляют другую лунку с контролем фона с PBS (OD_o); сливают при разрежении; промывают 4 раза 150 мкл 0,1 моль/л PBS (pH 7,4), каждый раз встряхивая планшет в течение 1 мин. После сливания при разрежении добавляют разведенный 1:500 козий антимышиный IgG-HPR (50 мкл/лунка), оставляют при комнатной температуре на 2 часа и сливают; промывают 3 раза 0,1 моль/л PBS (pH 7,4), 150 мкл/лунка, каждый раз встряхивая планшет в течение 1 мин; сливают; добавляют проявляющий раствор субстрата о-фенилендиамина (OPD) (100 мкл/лунка), оставляют в темноте при комнатной температуре на 30 мин, реакцию прерывают 2 моль/л H₂SO₄ (100 мкл/лунка); реакционный раствор (150 мкл/лунка) быстро отсасывают и переносят в обычный 96-луночный планшет для ELISA, и определяют величины OD при 490 нм.

Вычисление литических скоростей испытываемых соединений

Исправленная OD = средняя OD испытываемого образца RBC - средняя OD в лунке без RBC с фоном PBS, литическую скорость выражают в проценте снижения величины OD_490нм: (OD_490нм в лунке с PBS - OD_490нм с испытываемым соединением)/OD_490нм нм в лунке с PBS × 100%. Результаты испытания приводятся в таблице 5.

Результаты в таблице 5 показывают, что соединение примера 2 имеет высокую литическую скорость для сшитого IgG на поверхности RBC.

Пример 6. Действие соединения примера 2 на объем мочи/потребление воды за 24 часа у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

1. Метод испытания

(1) Распределение по группам и способ введения

Крыс распределяют по группам в соответствии с массой тела и кровяным давлением: группу крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией, которой не вводят лекарственное средство (модельная группа), группу с нифедипином, группу с соединением 2 + нифедипин. Между тем также выделяли группу с чистым диабетом и контрольную нормальную группу животных того же возраста. Соединение примера 2 (36 мг/кг) перед применением растворяют в дистиллированной воде, вводят внутрижелудочно один раз в сутки в течение 5 недель. После 3-недельного введения вставляют имплантатат в брюшную аорту, восстанавливают в течение недели, проверяют кровяное давление в течение 3 дней до тех пор, пока кровяное давление не установится, и затем вводят внутрижелудочно нифедипин (0,75 мг/кг) в 10:00 утра один раз в день в течение последующих 7 дней.

(2) Получение раствора нифедипина

Порошок нифедипина помещают в 5-мл пробирку ЕР, добавляют определенное количество CMC-Na, добавляют 4 стальных шарика, перекатывают в течение 5-10 мин, после того, как нифедипин полностью суспендирован, измеряют объем, и снова выполняют суспендирование.

(3) Определение потребления воды и объема мочи

На третью неделю введения крыс каждой группы размещают по одной и кормят в метаболических клетках, и регистрируют потребление воды и объем мочи за 24 часа в 19^ый, 20^ый и 21^ыйдень.

(4) Контроль за кровяным давлением в случае соединения 2 в комбинации с нифедипином

Процедуры такие же, как (1), (2), (3) после 1 недели послеоперационного восстановления, клетки с крысами помещают в приемник DSI, устанавливают параметры для контроля и каналы, имплантаты включают, используя магнитные включатели: после наладки начинают регистрировать биологические сигналы; после 3 дней подряд вводят нифедипин и соединение примера 2 в 10:00 утра, в течение 7 дней подряд динамически регистрируют сердечно-сосудистые параметры крыс в период 10:00 - 20:00 (в этот период строго регулируют концентрацию физиологического раствора на уровне 1%).

(5) Способ определения содержания вазоактивных веществ у крыс

Способ определения ТХВ₂ и 6-кето-PGF1a: берут образцы цельной крови, добавляют 40 мкл индометацин-ЭДТК-Na для предотвращения свертывания крови, центрифугируют при 4°С, 3500 об/мин, 15 мин, и полученную плазму хранят при -70°С. Определение осуществляют радиоиммуноанализом с помощью Beijing Huaying Biotechnology Co., Ltd.

Способ определения BNP и MCP-1: берут образцы цельной крови, добавляют 40 мкл ЭДТК-Na для предотвращения свертывания крови, центрифугируют при 1000 об/мин, 10 мин, отделяют плазму и хранят при -70°С. Определение осуществляют радиоиммуноанализом с помощью Beijing Huaying Biotechnology Co., Ltd.

(6) Статистический метод

Результаты испытаний выражают в форме среднее ± SD (среднее ± стандартное отклонение), для обработки данных используют программу SPSS2.0, статистическую обработку выполняют с использованием одностороннего дисперсионного анализа, и значимое различие определяют, как Р<0,01.

В 3^ью неделю введения соединения 2 вычисляют величины V_мочи/V_{потребление воды} у крыс за 24 часа.

2. Результаты испытаний

Результаты приводятся в таблице 6.

Результаты испытаний в примере 6 показывают, что соединение 2 способно существенно повысить потребление воды и объем мочи у крыс.

Пример 7. Действие соединения примера 2 на крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

После 4 недель введения соединения примера 2 крысы модельной группы показывают среднее систолическое артериальное давление за период времени 10:00-20:00, значительно более высокое, чем в нормальной контрольной группе (NC группа). Соединение примера 2 показывает среднее систолическое артериальное давление за период времени 10:00-20:00, более низкое, чем в модельной группе (~22,6±2,1 кПа против 24,5±1,98 кПа (169,8±15,8 мм рт.ст. против 181±14,9 мм рт.ст.), Р<0,05) (подробности см. на фиг. 6).

После 4 недель введения соединения примера 2 крысы диабетической группы показывают переменный коэффициент систолического артериального давления (CV) за период времени 10:00-20:00, значительно более высокий, чем в NC группе (Р<0,05), в то время как крысы модельной группы также показывают значительное повышение CV систолического артериального давления (Р<0,01). По сравнению с модельной группой крысы группы соединения примера 2 показывают значительное снижение CV систолического артериального давления (Р<0,01) (подробности см. на фиг. 7).

После 4 недель введения соединения примера 2 крысы модельной группы показывают значительное повышение среднего систолического артериального давления за период времени 10:00-20:00 по сравнению с NC группой. По сравнению с модельной группой группа соединения примера 2 показывает значительное снижение среднего систолического артериального давления за период времени 10:00-20:00 (~16,4±1,79 кПа против 17,7±1,69 кПа (123,1±13,4 мм рт.ст. против 132,3±12,7 мм рт.ст.)) (подробности см. на фиг. 8).

После 4 недель введения соединения примера 2 крысы модельной группы показывают значительное повышение среднего различия пульсового артериального давления за период времени 10:00-20:00 по сравнению с NC группой (Р<0,01). По сравнению с модельной группой группа соединения примера 2 не показывает значимого изменения (~6,2±0,76 кПа против 6,7±0,47 кПа (46,5±5,7 мм рт.ст. против 49,7±3,5 мм рт.ст.)) (подробности см. на фиг. 9).

После 4 недель введения соединения примера 2 крысы модельной группы показывают значительное снижение средней частоты сердечных сокращений за период времени 10:00-20:00 по сравнению с NC группой (Р<0,01). По сравнению с модельной группой группа соединения примера 2 не показывает значимого изменения (255±17 против 257±13 удары/мин) (подробности см. на фиг. 10).

Результаты примера 7 показывают, что соединение примера 2 оказывает действие на стабилизацию кровяного давления в соответствии с терапевтическим принципом диабета, сопровождающегося гипертензией, и может действовать как вспомогательное лекарственное средство для повышения устойчивости кровяного давления в комбинации с гипотензивным лекарственным средством.

Пример 8. Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

После введения нифедипина в 10:00 систолическое артериальное давление в группах введения быстро снижается и достигает максимального снижения через 1,5 час; группа с нифедипином показывает, что через 2 часа после введения систолическое артериальное давление начинает повышаться, и через 10 часов систолическое артериальное давление, по существу, достигает давления в модельной группе; группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает, что систолическое артериальное давление может оставаться устойчивым в течение 5 час после достижения самого низкого значения и затем постепенно восстанавливается. По сравнению с группой с нифедипином группа с соединением примера 2+нифедипин показывает значительное снижение среднего систолического артериального давления после введения в течение 1 часа (~18,1±1,67 кПа против 23,2±1,98 кПа (135,8±12,5 мм рт.ст. против 155,2±14,9 мм рт.ст.), Р<0,01); 5 час (~18,0±1,32 кПа против 22,7±2,0 кПа (135,0±11,4 мм рт.ст. против 166,0±15,0 мм рт.ст.), Р<0,01); 10 час (~20,2±1,4 кПа против 23,8±1,88 кПа (152,2±10,4 мм рт.ст. против 179,0±14,1 мм рт.ст.), Р<0,01) (подробности см. на фиг. 11).

После введения в течение 1,5 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значимо большее снижение давления ASBP, чем группа с нифедипином (~4,95±1,8 кПа против 3,4±1,24 кПа (37,1±13,5 мм рт.ст.против 25,3±9,3 мм рт.ст.), Р<0,05). После введения в течение 5 час группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значимо большее снижение давления ASBP, чем группа с нифедипином (~4,1±1,67 кПа против 2,1±1,24 кПа (30,9±12,5 мм рт.ст. против 15,9±9,3 мм рт.ст.), Р<0,01), и после введения в течение 10 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значимо большее снижение давления ASBP, чем группа с нифедипином (~2,6±0,85 кПа против 0,16±0,47 кПа (19,4±6,4 мм рт.ст. против 1,19±3,5 мм рт.ст.), Р<0,01) (подробности см. на фиг. 12).

После введения в течение 1-5 ч при сравнении с модельной группой группа с нифедипином не показывает значимого переменного коэффициента (CV) систолического артериального давления (0,047±0,017 против 0,051±0,012), группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение CV (0,019±0,006 против 0,051±0,012, Р<0,01) (подробности см. на фиг. 13).

После введения в 10:00 артериальное давление в группах введения показывает быстрое снижение и почти достигает диапазона максимального снижения давления через 1,5 ч и затем постепенно восстанавливается. После введения в течение 1,5 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение среднего систолического артериального давления по сравнению с группой с нифедипином (~12,8±1,94 кПа против 14,87±0,2 (95,8±14,5 мм рт.ст. против 111,2±15,3), Р<0,05). После введения в течение 5 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение среднего систолического артериального давления по сравнению с группой с нифедипином (~12,9±1,64 кПа против 15,5±0,21 кПа (96,6±12,3 мм рт.ст. против 115,9±15,7 мм рт.ст.), Р<0,01). После введения в течение 10 ч группа с нифедипином показывает диастолическое артериальное давление, близкое к давлению в модельной группе, группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение среднего систолического артериального давления по сравнению с группой с нифедипином (~14,1±2,18 кПа против 17,4±1,97 кПа (106,1±16,4 мм рт.ст. против 130,1±14,8 мм рт.ст.), Р<0,01) (подробности см. на фиг. 14).

После введения в 10:00 группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает быстрое снижение разницы пульсового давления (РН), которая достигает максимума снижения давления в 11:00; группа с нифедипином показывает незначительное снижение РН, которая начинает расти через 1 ч и почти достигает значения для модельной группы через 10 ч; группа с соединением примера 2 + нифедипин через 1 ч достигает наименьшего значения РН, которая затем начинает постепенно повышаться. После введения в течение 1 часа группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение средней разницы пульсового давления по сравнению с группой с нифедипином (~5,35±0,6 против 6,24±0,39 кПа (40,2±4,5 против 46,9±2,9 мм рт.ст.), Р<0,01). После введения в течение 5 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение средней разницы пульсового давления по сравнению с группой с нифедипином (~5,4±0,66 против 6,4±0,68 кПа (40,6±4,9 против 48,1±5,1 мм рт.ст.), Р<0,01). После введения в течение 10 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин не показывает изменения средней разницы пульсового давления по сравнению с группой с нифедипином (~6,08±0,77 против 6,48±0,69 кПа (45,6±5,8 против 48,7±5,2 мм рт.ст.)) (подробности см. на фиг. 15).

После введения в 10:00 группы введения показывают быстрое повышение частоты сердечных сокращений (HR), которая достигает максимума через 20 мин и затем начинает постепенно снижаться, после введения в течение 8 ч частота сердечных сокращений в группах введения по существу восстанавливается до уровня до введения. После введения группа с соединением примера 2 + нифедипин не показывает изменения частоты сердечных сокращений по сравнению с группой с нифедипином (подробности см. на фиг. 16).

После введения в 10:00 группы введения показывают быстрое снижение времени выброса (ЕТ), которое достигает наименьшего значения через 20 мин и затем начинает постепенно расти; после введения в течение 5 ч ЕТ в группе с нифедипином, по существу, восстанавливается до уровня до введения; после введения в течение 10 ч группа с нифедипином показывает значение ЕТ, по существу, эквивалентное значению в МС группе. После введения в течение 20 мин группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение ЕТ по сравнению с группой с нифедипином (67,3±5,3 мс против 71,8±4,2 мс), затем ЕТ начинает постепенно расти, показывает стадию быстрого повышения через 8-10 ч и через 10 ч достигает уровня ЕТ, по существу, эквивалентного уровню в МС группе; после введения в течение 5 ч группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение ЕТ по сравнению с группой с нифедипином (74,2±5,2 мс против 81,1±5,0 мс, Р<0,05), и такой эффект сохраняется в течение 4 ч (подробности см. на фиг. 17).

Индекс миокардиального потребления кислорода (MOCI) отражает общее миокардиальное потребление кислорода. После введения в течение 1 часа, при сравнении с модельной группой, группа с нифедипином показывает снижение MOCI без значимого различия (3772,7±444,7 против 4255,0±416,1, Р=0,36), в то время как группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение MOCI (3128,4±238,7 против 4255,0±416,1, Р<0,05). После введения в течение 5 ч, при сравнении с модельной группой, группа с нифедипином показывает снижение MOCI без значимого различия, группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение MOCI (Р<0,05). После введения в течение 10 ч группа с нифедипином показывает MOCI, восстановленный до уровня до введения, группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает MOCI меньше, чем в модельной группе и в группе с нифедипином, без значимого различия (подробности см. на фиг. 18).

Результаты примера 8 показывают, что соединение примера 2 может существенно усилить действие нифедипина на сердце; и соединение примера 2 в комбинации с нифедипином может существенно снизить кровяное давление у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией.

Пример 9. Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на содержание васкулярных активных факторов у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

(1) Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на содержание 6-кетонпростагландина в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

6-Кетонпростагландин в плазме является метаболитом простациклина (PGb), отражающим содержание PGb в плазме. При сравнении с диабетической группой крысы модельной группы показывают значительное снижение содержания 6-кетонпростагландина в плазме по сравнению с нормальной группой (78,15±5,6, 77,62±8,67 против 85,41±4,36 пг/мл, Р<0,05). Крысы из группы с соединением примера 2 + нифедипин показывают значительное повышение при сравнении с модельной группой (87,21±6,90 против 77,62±8,67 пг/мл, Р<0,01) и также значительное повышение при сравнении с группой с нифедипином (Р<0,05) (подробности см. на фиг. 19).

(2) Действие разрушителя AGE в комбинации с нифедипином на содержание ТХВ₂ в плазме крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

ТХВ₂ является метаболитом ТХА₂ и отражает содержание ТХА₂ в плазме. При сравнении с нормальной группой крысы диабетической группы и модельной группы показывают значительное возрастание содержания ТХВ₂ (93,14±10,99, 104,19±11,68 против 64,88±7,24, Р<0,01). Группа с соединением примера 2+нифедипин показывают значительное снижение содержания ТХВ₂ при сравнении с модельной группой (73,64±12,27, 80,88±15,31 против 104,19±11,68 пг/мл, Р<0,01). Группа с соединением примера 2 + нифедипин не показывают значимого различия в содержании ТХВ₂ при сравнении с группой с нифедипином (подробности см. на фиг. 20).

(3) Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на отношение ТХВ₂/6-кето-PGI1 в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

Отношение ТХВ₂/6-кето-PGH отражает уровень в плазме TXA₂/PGl₂. При сравнении с нормальной группой крысы диабетической группы и модельной группы показывают значительное возрастание ТХВ₂/6-кето-PGH (1,15±0,15, 1,18±0,16 против 0,80±0,10, Р<0,01); группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение ТХВ₂/6-кето-PGI1 по сравнению с модельной группой (0,93±0,13 против 1,18±0,16, Р<0,01); группа с нифедипином показывает незначительное снижение по сравнению с модельной группой (1,06±0,14 против 1,18±0,16, Р<0,01) без значимого различия; группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение ТХВ₂/6-кето-PGI1 по сравнению с группой с нифедипином (0,93±0,13 против 1,06±0,14, Р<0,05) (подробности см. на фиг. 21).

(4) Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на содержание МСР-1 в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

По сравнению с нормальной группой крысы диабетических групп и модельной группы показывают значительное возрастание содержания МСР-1 в плазме (75,9±9,7, 77,4±9,5 против 66,9±7,3 пг/мл, Р<0,05), группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение содержания МСР-1 в плазме по сравнению с модельной группой (64,0±14,2 против 77,4±9,5 пг/мл, Р<0,01), группа с нифедипином показывает незначительное снижение содержания МСР-1 в плазме по сравнению с модельной группой (70,7±8,8 против 77,4±9,5 пг/мл) без значимого различия; группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение содержания МСР-1 в плазме по сравнению с группой с нифедипином (Р<0,05) (подробности см. на фиг. 22).

(5) Действие соединения примера 2 в комбинации с нифедипином на содержание BNP в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией

По сравнению с нормальной группой крысы модельной группы показывают значительное возрастание содержания BNP в плазме (16,7±2,0 против 14,3±2,1 пг/мл, Р<0,05), группа с соединением примера 2 + нифедипин показывает значительное снижение содержания BNP в плазме по сравнению с модельной группой (12,2±3,5 против 16,7±2,0 пг/мл, Р<0,01); группа с нифедипином показывает значительное снижение содержания BNP в плазме по сравнению с модельной группой (14,6±2,4 против 16,7±2,0 пг/мл, Р<0,05); группа с соединением примера 2+нифедипин показывает значительное снижение содержания BNP в плазме по сравнению с группой с нифедипином (Р<0,05, Р<0,01) (подробности см. на фиг. 23).

Результаты примера 9 показывают, что соединение примера 2 приводит к уменьшению отношения TXB₂/PGI₂, дилатации сосудов, уменьшению тромбоза, задержке процесса атеросклероза и защите сосудов. Разрушитель AGE также может снизить содержание BNP в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией, и значимо снизить содержание МСР-1 в плазме у крыс с диабетом, сопровождающимся гипертензией.

Хотя специфические формы настоящего изобретения подробно описаны на конкретных примерах осуществления настоящего изобретения, специалистам в данной области техники следует понимать, что такие детали могут быть модифицированы и заменены в соответствии с приведенным выше раскрытием, и все такие изменения попадают в объем охраны настоящего изобретения. Объем охраны настоящего изобретения определяется прилагаемой формулой изобретения и ее любыми эквивалентами.

Изобретение относится к соединению формулы I , где n равен 1. Соединение формулы I получают путем растворения внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола в метаноле, затем по каплям добавляя этилацетат и оставляя смесь стоять для получения монокристаллов. Внутреннюю соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола (соединение В) получают путем реакции соединения А с 1,2-эпоксипропаном, где в структуре соединения А Х представляет собой хлор, бром или иод. Соединение формулы I предназначено для получения продукта, такого как лекарственное средство для лечения, и/или ослабления, и/или профилактики, и/или вспомогательной терапии заболевания или расстройства, ассоциированного со старением белков; причем указанное заболевание или расстройство, ассоциированное со старением белков, выбирают из следующих i) диабет; ii) гипертензия; и iii) гипертензия, ассоциированная с диабетом. Соединение формулы I также предназначено для получения разрушителя сшитых белков, лекарственного средства для разрушения конечного продукта глубокого гликирования, лекарственного средства для уменьшения содержания в плазме BNP и/или содержания в плазме МСР-1, лекарственного средства для улучшения состояния при склерозе сердечно-сосудистой системы или лекарственного средства для повышения терапевтической чувствительности в случае диабета или сердечно-сосудистого заболевания. Соединение по изобретению предназначено для применения в способе разрушения конечных продуктов глубокого гликирования (AGE) in vivo или in vitro, характеризующегося тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I по п. 1. 8 н. и 5 з.п. ф-лы, 23 ил., 6 табл., 9 пр.

Формула I

соединение А соединение В

1. Соединение формулы I

Формула I,

где n равен 1.

2. Способ получения монокристаллов соединения формулы I по п. 1, включающий следующие стадии:

внутреннюю соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола растворяют в метаноле, затем по каплям добавляют этилацетат и смесь оставляют стоять для получения монокристаллов.

3. Способ по п. 2, дополнительно включающий следующую стадию:

соединение А вводят в реакцию с 1,2-эпоксипропаном и получают соединение В (внутреннюю соль 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола)

соединение А соединение В

где в структуре соединения А Х представляет собой хлор, бром или иод.

4. Способ по п. 3, в котором соединение А получают через следующие стадии:

4-метилтиазол вводят в реакцию с хлоруксусной кислотой, бромуксусной кислотой или иодуксусной кислотой и получают соединение А

.

5. Способ по п. 4, в котором соединение А отделяют и очищают перекристаллизацией.

6. Способ по п. 5, в котором растворитель, используемый для перекристаллизации, представляет собой любой растворитель, независимо выбранный из группы, включающей ацетон, метанол, этанол, этиловый эфир, петролейный эфир и н-гексан или их любую смесь.

7. Способ по п. 2, в котором на 1 мг внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола используют 0,05 мл метанола и 0,3 мл этилацетата.

8. Применение соединения формулы I по п. 1 в получении продукта, такого как лекарственное средство для лечения, и/или ослабления, и/или профилактики, и/или вспомогательной терапии заболевания или расстройства, ассоциированного со старением белков; причем указанное заболевание или расстройство, ассоциированное со старением белков, выбирают из следующих:

i) диабет; ii) гипертензия; и iii) гипертензия, ассоциированная с диабетом.

9. Применение соединения формулы I по п. 1 в получении разрушителя сшитых белков, лекарственного средства для разрушения конечного продукта глубокого гликирования, лекарственного средства для уменьшения содержания в плазме BNP и/или содержания в плазме МСР-1, лекарственного средства для улучшения состояния при склерозе сердечно-сосудистой системы или лекарственного средства для повышения терапевтической чувствительности в случае диабета или сердечно-сосудистого заболевания.

10. Способ разрушения конечных продуктов глубокого гликирования (AGE) in vivo или in vitro, характеризующийся тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I по п. 1.

11. Способ улучшения состояния при склерозе сердечно-сосудистой системы, характеризующийся тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I по п. 1.

12. Способ повышения чувствительности в случае лекарственной терапии диабета или сердечно-сосудистого заболевания, характеризующийся тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I по п. 1.

13. Способ лечения, и/или ослабления, и/или профилактики, и/или вспомогательной терапии заболевания или расстройства, ассоциированного со старением белков, отличающийся тем, что он включает стадию использования или введения эффективного количества соединения формулы I по п. 1, где указанное заболевание или расстройство, ассоциированное со старением белков, выбрано из i) диабета; ii) гипертензии; и iii) гипертензии, ассоциированной с диабетом.