КОМПОЗИЦИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ БОРЬБЫ С МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, И ПРИМЕНЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ Российский патент 2024 года по МПК A61K45/06 A61P3/04 

Область техники

Данное изобретение относится к области низкомолекулярных лекарственных средств, в частности к композиции для снижения риска возникновения метаболического синдрома и ее применению.

Уровень техники

Метаболический синдром относится к болезненному состоянию, при котором нарушается обмен белков, жиров, углеводов и других веществ в организме человека. Это не отдельное заболевание, а сложная группа нарушений обмена веществ, включающая: накопление абдоминального жира, высокий уровень липидов в крови, высокий уровень триглицеридов, высокий уровень холестерина, высокое кровяное давление, высокий уровень сахара в крови и т.д. Центральной частью метаболического синдрома является ожирение и резистентность к инсулину, которая в основном включает компоненты ожирения, особенно центрального типа ожирения. Субъекты с метаболическим синдромом имеют факторы риска развития сахарного диабета, сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний, ожирения печени, синдрома поликистозных яичников, а распространенность сердечно-сосудистых явлений и риск смерти у них примерно в 2-3 раза выше, чем у субъектов, у кото

рых не наблюдается метаболического синдрома.

Во всем мире широко распространены ожирение и сахарный диабет 2 типа (см. National Diabetes Data Set, American Diabetes, USA: National Institute of Diabetes and Digestive Diseases, National Institutes of Health, 1994; Mokdad et al, Diabetes Care 23(9): 1278-12 S3 (2000); Mokdad et al, JAMA 284(13): 1650-1651 (2000); Mokdad et al, JAMA 286(10): 1195-1200 (2001); Mokdad et al, JAMA 289(1): 76-79 (2003)). В 2000 г. приблизительно 2,9 миллиона человек умерли от причин, связанных с диабетом (Roglic et al., Diabetes Care 28:2130-2135, 2005). По оценкам, глобальное бремя диабета удвоится в ближайшие 25 лет (King et al, Diabetes Care 21: 1414-1431, 1998; Amos et al, Diabet Med 14 Suppl 5: S1-85, 1997; Wild et al, Diabetes Care 27: 1047-1053, 2004). Это происходит в сочетании с усилением ожирения. Сахарный диабет 2 типа (СД2, T2DM) становится все более распространенным заболеванием. Из-за высокой частоты осложнений значительно сокращается продолжительность жизни больных. Сахарный диабет 2 типа в настоящее время является наиболее распространенной причиной потери зрения, почечной недостаточности и ампутаций у взрослых в промышленно развитых странах из-за микрососудистых осложнений, связанных с диабетом. Кроме того, наличие диабета 2 типа связано с повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний.

После того, как заболевание сохраняется в течение длительного периода времени, большинство субъектов с сахарным диабетом 2 типа в конечном итоге становятся инсулинозависимыми после неудачной пероральной терапии, с потребностью в ежедневных инъекциях и многократных ежедневных измерениях уровня глюкозы. UKPDS (проспективное исследование диабета в Великобритании) продемонстрировало, что интенсивное лечение метформином, производными сульфонилмочевины или инсулином может привести лишь к ограниченному улучшению гликемического контроля (разница в уровне HbA1c составляет ~0,9%). Кроме того, даже у субъектов в группе интенсивного лечения гликемический контроль со временем значительно ухудшился. Это связано с ухудшением функции бета-клеток. Важно отметить, что интенсивное лечение не связано со значительным снижением макрососудистых осложнений (то есть сердечно-сосудистых явлений).

Соответственно, существует неудовлетворенная медицинская потребность в способах, лекарственных препаратах и фармацевтических композициях, обладающих хорошей эффективностью в контроле гликемии, свойствами, улучшающими течение болезни, и снижающими заболеваемость и смертность от сердечно-сосудистых заболеваний при улучшенном профиле безопасности.

В текущих исследованиях воспаление, вызванное ожирением, играет решающую роль, тем более что связь между повышенным уровнем глюкозы в крови и активацией ЦОГ-2 в бета-клетках поджелудочной железы была хорошо установлена. Индуцированный высоким содержанием глюкозы простагландин E2 (PGE2) может приводить к снижению массы β-клеток путем ингибирования пролиферации β-клеток и индукции апоптоза β-клеток (Oshima, H. et al., 2006). Индометацин, неселективный ингибитор циклооксигеназы, может предотвращать вызванное HFD (диета с высоким содержанием жиров) ожирение и резистентность к инсулину у мышей C57BL/6J (Fjaere E. et al., 2014). Было показано, что лечение некоторыми нестероидными противовоспалительными средствами (НПВС), такими как целекоксиб, частично восстанавливает чувствительность к инсулину как в трансляционных доклинических моделях, так и у пациентов с СД2 и ожирением (Gonzalez-Ortiz et al, 2005). Гипергликемия активирует ЦОГ-2 в бета-клетках поджелудочной железы и приводит к нарушению функции бета-клеток. Лечение NS-398, селективным ингибитором ЦОГ-2, может вызвать реверсию нарушения функции β-клеток за счет снижения PGE2-опосредованного апоптоза β-клеток (Tian, V.F. et al., 2014). Воспаление из-за ожирения может привести к неалкогольному стеатозу, патологическому признаку резистентности к инсулину. Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) является сосуществующим заболеванием при СД2. Целекоксиб может вызвать реверсию стеатогепатита и воспаления в модели НАСГ на крысах линии Вистар, индуцированной HFD (Chen, J. et al., 2011). Было показано, что сверхэкспрессия NAG-1/GDF-15 (ген-1, активируемый НПВС) улучшает гликемические параметры и предотвращает развитие ожирения за счет усиления термогенеза, липолиза и окислительного метаболизма у мышей C57BL/6J с ожирением (Chrysovergis, K. et al., 2014). Активация индуцируемой формы ЦОГ-2 может играть ключевую роль в инициировании нарушения функции клеток, включая: нарушение функции адипоцитов, нарушение функции бета-клеток поджелудочной железы и нарушение функции макрофагов. Нарушение функции клеток способствует развитию резистентности к инсулину и системной непереносимости глюкозы. Делеция ЦОГ-2 у мышей с ожирением C57BL/6J снижает уровень глюкозы в крови (Fujta et al., 2007). Что еще более важно, селективный ингибитор ЦОГ-2 целекоксиб может незначительно снижать уровень HbA1c, улучшать толерантность к глюкозе и повышать уровень инсулина в той же трансляционной доклинической модели (Fujita, H. et al., 2007). На основании доклинических и клинических данных лечение лежащих в основе воспалительных компонентов сложной патофизиологии сахарного диабета 2 типа с помощью противовоспалительной терапии может быть одной из стратегий частичной ремиссии и лечения диабета 2 типа.

Кроме того, в ряде публикаций подтверждается важность адипоцитов и воспаления в развитии резистентности к инсулину. Например, дефицит JNK-1 в адипоцитах подавляет индуцированную рационом с высоким содержанием жиров резистентность к инсулину в печени из-за зависимости от JNK (Sabio, C. et al., 2008); специфическая для адипоцитов делеция Glut4 или сверхэкспрессия MCP-1 приводит к системной резистентности к инсулину (Qi, L. et al., 2009); дефицит ФНО-α улучшает чувствительность к инсулину при ожирении, вызванном рационом, и в модели ожирения Lep^ob/ob (Hotamisiligil, GS et al., 1995); повышенные уровни ИЛ-1β, ИЛ-6 и CRP предсказывают развитие СД2 (Visser, M. et al., 1999); мышей с нокаутом TLR4 можно защитить от воспаления и резистентности к инсулину (Shi, H. et al., 2006). Существующие гипогликемические лекарственные средства вообще не содержат ингибиторов воспаления и, таким образом, не обладают достаточной эффективностью и не обладают достаточной общей клинической пользой. Это связано с их неспособностью ингибировать провоспалительные компоненты сложной патофизиологии, которые инициируют и поддерживают системную резистентность к инсулину.

Воспаление является не только важной частью патофизиологии сахарного диабета 2 типа, но также важной частью клинически значимых сопутствующих заболеваний. Более того, провоспалительные сигналы помогают инициировать и поддерживать осложнения, связанные с сахарным диабетом 2 типа, такие как диабетическая ретинопатия, кожные язвы, ишемическая болезнь сердца (ИБС), инсульт, ожирение печени, синдром поликистозных яичников, хроническая болезнь почек (ХБП), диабетическая периферическая невропатия, диабетические заболевания сосудов и т.д. Провоспалительные сигналы могут определять тяжесть и продолжительность осложнений, связанных с диабетом. Существует прямая связь между повышенным уровнем провоспалительных биомаркеров и нарушением метаболизма глюкозы. Таким образом, для достижения эффективного клинического применения важно совместно регулировать воспаление и метаболизм, а также одновременно лечить метаболические заболевания, включая сахарный диабет 2 типа, которые могут включать все метаболические синдромы со сложной патофизиологией с сильным провоспалительным компонентом, а не лечить каждое нарушение обмена веществ как отдельное индивидуальное заболевание. В настоящее время одни НПВС не могут комплексно ингибировать многие воспалительные факторы и воспалительные пути, а одни гипогликемические средства не могут полностью восстановить метаболизм глюкозы и липидов. Например, для получения адекватного терапевтического эффекта у субъектов с сахарным диабетом 2 типа, ожирением печени, синдромом поликистозных яичников или ожирением необходимо проводить лечение комбинацией лекарственных средств, которые совместно модулируют воспаление и метаболизм. Это не только корректирует нарушение гомеостаза глюкозы и липидов в крови, но также облегчает клинически значимые сопутствующие метаболические нарушения. Что еще более важно, это может уменьшить тяжесть осложнений, связанных с диабетом. Следовательно, субъектов с метаболическим синдромом не следует лечить только одним лекарственным средством, а следует лечить комбинацией противовоспалительных лекарственных средств и лекарственных средств против метаболических заболеваний.

Сущность изобретения

Целью данного изобретения является преодоление недостатков существующих технологий, то есть существующие на рынке лекарства не могут эффективно лечить или предотвращать метаболический синдром, вызванный ожирением, сахарным диабетом 2 типа и резистентностью к инсулину. Таким образом, в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, которая не только корректирует нарушенный гомеостаз глюкозы, но также облегчает клинически значимые сопутствующие заболевания и, что более важно, снижает тяжесть связанных с диабетом осложнений.

Для достижения цели, упомянутой выше, в одном аспекте в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, которая содержит терапевтическое средство А или его фармацевтически приемлемую соль; терапевтическое средство В или его фармацевтически приемлемая соль; и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот.

В одном варианте осуществления изобретения в фармацевтической композиции терапевтическое средство А и терапевтическое средство В содержатся в одной лекарственной форме.

В другом варианте осуществления изобретения в фармацевтической композиции терапевтическое средство А и терапевтическое средство В присутствуют в отдельных лекарственных формах.

В одном варианте осуществления изобретения терапевтическое средство А представляет собой по меньшей мере одно из салицилата, ибупрофена, индометацина, флурбипрофена, феноксиибупрофена, напроксена, набуметона, пироксикама, фенилбутазона, диклофенака, фенпрофена, кетопрофена, кеторолака, тетраклофенамовой кислоты, сулиндака и толметина.

В другом варианте осуществления изобретения терапевтическое средство В выбрано из триметазидина, этомоксира, аминокарнитина или фосфонооксипроизводного карнитина.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, которая содержит терапевтическое средство А или его фармацевтически приемлемую соль; терапевтическое средство В или его фармацевтически приемлемая соль; и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, при этом терапевтическое средство А представляет собой салицилат, а терапевтическое средство В представляет собой триметазидин.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, которая содержит терапевтическое средство А или его фармацевтически приемлемую соль; терапевтическое средство В или его фармацевтически приемлемую соль; и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, при этом терапевтическое средство А представляет собой аспирин, а терапевтическое средство В представляет собой триметазидин.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения их фармацевтическая лекарственная форма представляет собой лекарственную форму для перорального применения. В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая лекарственная форма представляет собой лекарственную форму для инъекций.

В другом аспекте в данном изобретении дополнительно предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в получении лекарственного препарата для лечения сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа, нарушения толерантности к глюкозе, нарушения гликемии натощак, гипергликемии, постпрандиальной гипергликемии, избыточной массы тела, ожирения и метаболического синдрома; или улучшения гликемического контроля и/или снижения уровня глюкозы в плазме натощак, уровня глюкозы в плазме после приема пищи и/или HbA1c; или замедления, задержки или реверсии прогрессирования от нарушенной толерантности к глюкозе, нарушенной гликемии натощак, резистентности к инсулину и/или метаболического синдрома до диабета 2 типа; или лечения диабетических осложнений, таких как катаракта, а также микрососудистых и макрососудистых заболеваний, таких как нефропатия, ретинопатия, невропатия, ишемия тканей, артериосклероз, инфаркт миокарда, инсульт и окклюзионное заболевание периферических артерий; или снижения массы или стимуляции снижения массы; или лечения дегенерации β-клеток поджелудочной железы и/или снижения функции β-клеток поджелудочной железы, и/или восстановления функции β-клеток поджелудочной железы, и/или восстановления секреции инсулина поджелудочной железой; или лечения заболевания или патологического состояния, вызывающего аномальное накопление жира в печени; или поддержания и/или улучшения чувствительности к инсулину и/или лечения гиперинсулинемии и/или резистентности к инсулину; или лечения атеросклероза и осложнений атеросклероза; или лечения глаукомы и осложнений глаукомы; или лечения дислипидемии/гиперлипидемии и осложнений дислипидемии/гиперлипидемии, или лечения метаболических заболеваний, связанных с репродуктивной функцией, у субъекта, нуждающегося в этом, или способ их лечения, в котором терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, и терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот.

В одном варианте осуществления изобретения субъект представляет собой индивида, у которого диагностировано одно или более патологических состояний, выбранных из избыточной массы тела, ожирения, висцерального ожирения и абдоминального ожирения.

В другом варианте осуществления изобретения субъект представляет собой индивида, у которого диагностировано одно или более из следующих состояний:

(a) концентрация глюкозы в крови или концентрация глюкозы в сыворотке натощак выше 110 мг/дл, особенно выше 125 мг/дл;

(b) концентрация глюкозы в плазме после приема пищи равна или превышает 140 мг/дл; и

(c) значение HbA1c равно или превышает 6,5%, особенно равно или превышает 8,0%.

В другом варианте осуществления изобретения субъект представляет собой человека с одним или более из следующих состояний:

(а) ожирение, висцеральное ожирение и/или абдоминальное ожирение;

(b) концентрация триглицеридов в крови ≥ 150 мг/дл;

(c) уровень холестерина ЛПВП в крови <40 мг/дл у субъекта женского пола или уровень холестерина ЛПВП в крови <50 мг/дл у субъекта мужского пола;

(d) систолическое артериальное давление ≥ 130 мм рт. ст., диастолическое артериальное давление ≥ 85 мм рт. ст.;

(e) уровень глюкозы в крови натощак ≥ 110 мг/дл; и

(f) уровень холестерина ЛПНП в крови ≥ 130 мг/дл.

В другом варианте осуществления изобретения субъект представляет собой индивида, которому противопоказана монотерапия метформином и/или имеется непереносимость терапевтических доз метформина.

В другом варианте осуществления изобретения субъект представляет собой человека с недостаточным гликемическим контролем после лечения одним или более противодиабетическими средствами, выбранными из группы, состоящей из:

(а) бигуанида;

(b) производного сульфонилмочевины;

(c) меглитинида;

(d) тиазолидинедиона;

(e) ингибитора α-глюкозидазы;

(f) инсулина и аналога инсулина;

(g) ингибитора дипептидилпептидазы IV;

(h) ингибитора SGLT2;

(i) модулятора PPARα;

(j) агониста глюкозозависимого инсулинотропного полипептида;

(k) β-3-агонистов;

(l) GLP1 и аналога GLP1;

(m) модулятора PPARγ; и

(n) ингибитора ГМГ-КоА-редуктазы.

Фармацевтическая композиция по данному изобретению показывает очень хорошую эффективность в гликемическом контроле, особенно в снижении уровня глюкозы в плазме натощак, уровня глюкозы в плазме после приема пищи и/или гликозилированного гемоглобина (HbA1c); в то же время она может эффективно лечить или предотвращать метаболический синдром, вызванный ожирением, неалкогольной жировой болезнью печени, синдромом поликистозных яичников, сахарным диабетом 2 типа и резистентностью к инсулину.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилата, а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из аспирина, а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят одновременно. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В содержатся в одной лекарственной форме. В некоторых вариантах осуществления изобретения одна фармацевтическая лекарственная форма представляет собой лекарственную форму для перорального применения.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят отдельно. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А вводят до терапевтического средства В. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А вводят после терапевтического средства В. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят перорально, соответственно. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят отдельно путем инъекции.

Другие признаки и преимущества данного изобретения будут подробно описаны в последующем описании конкретных вариантов осуществления.

Краткое описание графических материалов

Прилагаемые графические материалы предназначены для облегчения дальнейшего понимания данного изобретения и составляют часть данного описания; графические материалы используются для пояснения данного изобретения вместе со следующими конкретными вариантами осуществления, но не являются ограничением данного изобретения. На графических материалах:

На Фиг. 1 показаны результаты изменения массы у мышей с ожирением, вызванным рационом, (DIO) через 10 дней лечения фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе с использованием фармацевтической композиции согласно варианту осуществления данного изобретения по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 2 показаны результаты снижения содержания жира у мышей DIO, вызванного лечением фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе с использованием фармацевтической композиции согласно варианту осуществления данного изобретения по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 3 показаны результаты морфологии адипоцитов в жировом теле половых желез в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами) DIO.

На Фиг. 4 показаны результаты жировой дистрофии печени и морфологии клеток печени в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами) DIO.

На Фиг. 5 показаны результаты морфологии клеток сердечной мышцы в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами) DIO.

На Фиг. 6 показаны результаты морфологии клеток скелетных мышц в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами) DIO.

На Фиг. 7 показаны результаты показателей почечной токсичности: креатинина сыворотки (CREA) и азота мочевины крови (BUN) в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию согласно варианту осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами) DIO.

На Фиг. 8 показаны результаты изменения массы у мышей DIO с диабетом после 4 недель лечения фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 9 показано сравнение общего количества холестерина в сыворотке крови, показателя, связанного с гиперлипидемией, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 10 показано сравнение холестерина ЛПНП в сыворотке, маркера, связанного с гиперлипидемией, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 11 показано сравнение аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке, показателя, связанного с ожирением печени, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 12 показано сравнение отношения альбумина/глобулина в сыворотке, показателя, связанного с функцией метаболизма азота, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 13 показано сравнение общего белка сыворотки, показателя, связанного с функцией метаболизма азота, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 14 показаны результаты толерантности к глюкозе у мышей DIO с диабетом.

На Фиг. 15 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у мышей DIO с диабетом.

На Фиг. 16 показано сравнение массы тела мышей DIO после введения различных комбинаций терапевтических средств.

На Фиг. 17 показано сравнение уровней глюкозы в крови натощак у мышей DIO после введения различных комбинаций терапевтических средств.

На Фиг. 18 показаны результаты изменения массы тела обыкновенных мышей дикого типа, индуцированные фармацевтическими терапевтическими средствами A+B, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 19 показаны результаты снижения жира обыкновенных мышей дикого типа, индуцированные фармацевтическими терапевтическими средствами A+B, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 20 показаны результаты изменения массы тела у крыс с синдромом поликистозных яичников, индуцированного фармацевтическими терапевтическими средствами А+В, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой (группами).

На Фиг. 21 показано сравнение уровней глюкозы в крови натощак в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 22 показано сравнение аспартатаминотрансферазы (АСТ) и общего холестерина в сыворотке, показателей, связанных с ожирением печени, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 23 показано сравнение общего белка сыворотки, показателя, связанного с функцией метаболизма азота в печени, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 24 показано сравнение креатинина в сыворотке, показателя, связанного с функцией почек, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 25 показано сравнение лактатдегидрогеназы (ЛДГ), креатинкиназы (КК), сердечного изофермента креатинкиназы MB (КК-MB), дегидрогеназы α-гидроксимасляной кислоты (ГБДГ) в сыворотке крови, показателей, связанных с заболеваниями сердца, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 26 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 27 показаны результаты эстрального цикла у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 28 показаны результаты ELISA сывороточного гормона у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 29 показаны результаты вестерн-блоттинга белков скелетных мышц у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 30 показаны результаты анализа толщины стенки левого желудочка у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 31 показаны результаты анализа фиброза миокарда у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 32 показаны результаты обычного анализа крови у крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 33 показаны результаты воздействия фармацевтических терапевтических средств А+В на изменение массы тела у мышей с НАСГ.

На Фиг. 34 показаны результаты теста на потребление пищи у мышей с НАСГ.

На Фиг. 35 показаны результаты теста массы печени у мышей с НАСГ.

На Фиг. 36 показаны результаты анализа срезов печени у мышей с НАСГ.

На Фиг. 37 показаны результаты анализа срезов сердца у мышей с НАСГ.

На Фиг. 38 показано сравнение двух показателей, связанных с повреждением печени, в каждой группе мышей.

На Фиг. 39 показано сравнение показателей, связанных с гиперлипидемией, в каждой группе мышей.

На Фиг. 40 показано сравнение показателей, связанных с поражением органов, в каждой группе мышей.

На Фиг. 41 показаны результаты измерения уровня глюкозы в крови натощак в каждой группе мышей.

На Фиг. 42 показаны результаты толерантности к глюкозе у мышей с НАСГ.

На Фиг. 43 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у мышей с НАСГ.

На Фиг. 44 показаны результаты вестерн-блоттинга белков скелетных мышц у мышей с НАСГ.

На Фиг. 45 показаны результаты анализа транскриптомного секвенирования у мышей с НАСГ.

На Фиг. 46 показаны результаты вестерн-блоттинга белков первичных клеток скелетных мышц человека in vitro через 24 часа после введения.

На Фиг. 47 показаны результаты вестерн-блоттинга белков первичных клеток скелетных мышц человека с индуцированной резистентностью к инсулину in vitro через 7 дней после введения.

На Фиг. 48 показаны результаты анализа транскриптомного секвенирования скелетных мышц после индукции рационом с высоким содержанием жиров и сахаров у крыс с синдромом поликистозных яичников СПКЯ.

На Фиг. 49 показаны результаты ELISA инсулина и результаты показателя инсулинорезистентности HOMA-IR в образцах сыворотки у мышей с НАСГ.

На Фиг. 50 показаны результаты ELISA адипонектина в образцах сыворотки мышей с НАСГ.

На Фиг. 51 показаны сравнительные результаты жидкостного масс-спектрометрического анализа образцов сыворотки мышей в контрольной группе 1 и контрольной группе 3.

Описание вариантов осуществления изобретения

Конкретные варианты осуществления данного изобретения будут подробно описаны ниже. Следует понимать, что конкретные варианты осуществления, описанные в данном документе, используются только для иллюстрации и объяснения данного изобретения, но не для ограничения данного изобретения.

Конечные точки диапазонов и любых значений, раскрытых в данном документе, не ограничиваются точными диапазонами или значениями. Следует понимать, что эти диапазоны или значения охватывают значения, близкие к этим диапазонам или значениям. Для числовых диапазонов конечные точки каждого диапазона, конечные точки каждого диапазона и отдельные значения точек, а также отдельные значения точек могут быть объединены друг с другом для получения одного или более новых числовых диапазонов, и эти числовые диапазоны следует рассматривать как конкретно раскрытые в данном документе.

Данное изобретение в значительной степени основано на неожиданных результатах, полученных авторами изобретения при комбинированном применении нестероидного противовоспалительного средства (терапевтического средства А) и ингибитора окисления жирных кислот (терапевтического средства В). Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что, когда субъекту с диабетом, сердечно-сосудистыми и цереброваскулярными заболеваниями, ожирением печени или синдромом поликистозных яичников вводят как терапевтическое средство А, так и терапевтическое средство В, множество показателей субъекта улучшаются. Кроме того, комбинацией лекарственных средств можно также добиться эффекта устранения различных симптомов. Авторы изобретения также неожиданно обнаружили, что механизм действия комбинации лекарственных средств не ограничивается регулированием воспалительных реакций и метаболизма. Ежедневное введение комбинации лекарственных средств может также специфически запускать сигнальные пути p38 и AMPK и связанный с ними цикл метаболических изменений снова и снова, чтобы сформировать цикл возбуждающих эффектов, который функционирует так же, как имитация физических упражнений. После кратковременного введения (в течение 60 минут) фармацевтические терапевтические средства A+B по данному изобретению могут совместно регулировать модель механизма сигнального пути p38 и AMPK посредством окисления жирных кислот (FAO), метаболитов жирных кислот (ацилметаболитов) и аденозинтрифосфата (АТФ), чтобы одновременно усилить сигнальные пути p38 и AMPK, тем самым способствуя катаболизму, такому как гидролиз жира и окисление жирных кислот. Кроме того, после длительного введения (от 3 до 24 часов) фармацевтическое терапевтическое средство A+B, представленное в данном изобретении, может совместно регулировать модель механизма сигнального пути p38 и AMPK посредством воспалительных цитокинов (восп. цитокины), окисления жирных кислот (FAO), митохондриальных активных форм кислорода (mtROS), гликолиза (гликолиз), что приводит к одновременному резкому ингибированию сигнальных путей p38 и AMPK, тем самым способствуя анаболизму и восстановлению мышц. Таким образом, с одной стороны, данная патентная заявка предлагает новую и эффективную фармацевтическую композицию, а с другой стороны, способ лечения с использованием указанной фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция

В одном аспекте в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтическое средство А или его фармацевтически приемлемую соль; терапевтическое средство В или его фармацевтически приемлемую соль; и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, в котором терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот.

Термин «фармацевтически приемлемый» относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые в пределах здравого медицинского суждения подходят для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергии или других проблем или осложнений и с разумным соотношением польза/риск. Терапевтическое средство А и терапевтическое средство В в данном документе могут образовывать стабильные фармацевтически приемлемые соли кислот или оснований, и в таких случаях может быть уместно вводить соединение в виде соли. Примеры солей кислот включают: ацетат, адипат, аскорбат, бензоат, безилат, гидрокарбонат, гидросульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, холин, цитрат, циклогексилсульфамат, диэтилендиамин, этансульфонат, фумарат, глутамат, гликолят, гемисульфат, 2-изетионат, гептаноат, капроат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, гидроксималеат, лактат, малат, малеат, мезилат, меглюмин, 2-нафталинсульфоновая кислота, нитрат, оксалат, памоат, персульфат, фенилацетат, фосфат, дифосфат, пикрат, пивалат, пропионат, хинат, салицилат, стеарат, сукцинат, сульфамат, сульфамат, сульфат, тартрат, тозилат (п-толуолсульфонат), трифторацетат и сложный эфир ундециловой кислоты. Примеры основных солей включают: соли аммония; соли щелочных металлов, такие как соли натрия, лития и калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли алюминия, кальция и магния; соли с органическими основаниями, такими как дициклогексиламин и N-метил-D-глюкозамин, а также соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин, орнитин и т.д.

В одном варианте осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В в фармацевтической композиции могут присутствовать в терапевтически эффективных количествах. При использовании в данном документе, термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству соединения или композиции, достаточному для значительного и положительного изменения симптома и/или патологического состояния, подвергаемого лечению (например, для обеспечения положительного клинического ответа). Эффективное количество активного ингредиента, используемого в фармацевтической композиции, может варьироваться в зависимости от конкретного патологического состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, продолжительности лечения, характера сопутствующей терапии, конкретного используемого активного ингредиента, конкретного фармацевтически приемлемого используемого вспомогательного вещества и аналогичных факторов в пределах знаний и опыта лечащего врача.

При использовании в данном документе, термин «лечение» относится к способу получения полезных или желаемых клинических результатов. Термин «лечение» означает ингибирование, предотвращение или остановку развития или прогрессирования патологии (заболевания, расстройства или состояния) и/или индуцирование уменьшения, ремиссии или регрессии патологии. Специалисту в данной области техники будет понятно, что для оценки развития патологии можно использовать различные способы и анализы, и аналогичным образом можно использовать различные способы и анализы для оценки уменьшения, ремиссии или регрессии патологии.

При использовании в данном документе, термин «профилактика» относится к предотвращению развития заболевания, расстройства или состояния у субъекта, который может иметь риск развития заболевания, но у которого заболевание не диагностировано. Профилактику (и дозы, эффективные для профилактики) можно продемонстрировать в групповых исследованиях. Например, количество, эффективное для профилактики данного заболевания или медицинского патологического состояния, представляет собой количество, эффективное для снижения заболеваемости в группе, получающей лечение, по сравнению с контрольной группой, не подвергавшейся лечению.

При использовании в данном документе, термин «субъект» может включать млекопитающих, предпочтительно людей любого возраста с признаками патологий. Предпочтительно, этот термин может также включать лиц с риском развития признаков патологий.

Терапевтическое средство А и терапевтическое средство B

В соответствии с данным изобретением терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство. При использовании в данном документе, термин «нестероидные противовоспалительные средства (НПВС)» представляет собой класс противовоспалительных лекарственных средств, не содержащих стероидных структур. В основном их можно разделить на три категории: ацетилсалицилаты, в том числе аспирин (ацетилсалициловая кислота); неацетилсалицилаты, включая салицилат магния, салицилат натрия, холинсалицилат магния, дифлунисал и салсалат; и несалицилаты, включая ибупрофен, индометацин, флурбипрофен, феноксиибупрофен, напроксен, набуметон, пироксикам, фенилбутазон, диклофенак, фенпрофен, кетопрофен, кеторолак, тетраклофенамовую кислоту, сулиндак, толметин и т.д. Дополнительно, терапевтическое средство А по данному изобретению может быть выбрано из любого из этих нестероидных противовоспалительных средств. Предпочтительно, терапевтическое средство А может быть выбрано из по меньшей мере одного из салицилата, ибупрофена, индометацина, флурбипрофена, феноксиибупрофена, напроксена, набуметона, пироксикама, фенилбутазона, диклофенака, фенпрофена, кетопрофена, кеторолака, тетраклофенамовой кислоты, сулиндака и толметина. Более предпочтительно, терапевтическое средство А может представлять собой салицилат, такой как аспирин или салицилат магния, и т.д.

Согласно данному изобретению терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот, включая, но не ограничиваясь этим, этомоксир, мельдоний, оксфеницин, пергексилин, ранолазин, замещенные пиперазины, триметазидин и производные карнитина. Предпочтительно, терапевтическое средство В может представлять собой триметазидин, аминокарнитины (например, как описано в WO85/04396), фосфинилоксипроизводные карнитина (например, как описано в ЕР0574355В1) или комплексные продукты карнитина с другими соединениями (например, как описано в JP5127093B2/US6369073B1). Более предпочтительно, терапевтическое средство В может представлять собой триметазидин.

В соответствии с данным изобретением в фармацевтической композиции по данному изобретению комбинация терапевтического средства А и терапевтического средства В конкретно не ограничена. То есть в фармацевтической композиции по данному изобретению терапевтическое средство А и терапевтическое средство В могут содержаться в одной лекарственной форме или также могут присутствовать в отдельных лекарственных формах. Таким образом, при последующем применении фармацевтической композиции по данному изобретению терапевтическое средство А и терапевтическое средство В можно вводить субъекту одновременно, раздельно или последовательно. Например, терапевтическое средство А и терапевтическое средство В можно вводить субъекту одновременно (например, в одной и той же лекарственной форме). Терапевтическое средство А можно вводить субъекту с последующим введением терапевтического средства В субъекту немедленно, или терапевтическое средство В можно вводить субъекту в течение 1 часа, 2 часов, 3 часов, 4 часов, 5 часов, 6 часов, 7 часов или 8 часов после введения субъекту терапевтического средства А. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство В можно вводить субъекту сразу после введения субъекту терапевтического средства А. Альтернативно, терапевтическое средство А можно вводить субъекту в течение 1 часа, 2 часов, 3 часов, 4 часов, 5 часов, 6 часов, 7 часов или 8 часов после введения субъекту терапевтического средства В.

Способы введения

Фармацевтические композиции по данному изобретению подходят для перорального введения (например, такие как таблетки, пастилки, твердые или мягкие капсулы, водные или масляные суспензии, эмульсии, диспергируемые порошки или гранулы, сиропы или настои), местного введения (например, такие как крем, мазь, гель или водный или масляный раствор или суспензия), ингаляционного введения (например, в виде мелкодисперсного порошка или жидкого аэрозоля), введения путем инсуффляции (например, в виде мелкодисперсного порошка) или парентерального введения (например, такие как стерильные водные или масляные растворы для внутривенного, подкожного, внутримышечного или внутримышечного введения или суппозитории для ректального введения). В предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтическую композицию по данному изобретению вводят перорально.

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть получены обычными способами с использованием обычных фармацевтических вспомогательных веществ, хорошо известных в данной области техники. Подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества для таблеточного состава включают, например, инертные разбавители, такие как лактоза, карбонат натрия, фосфат кальция или карбонат кальция; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие вещества, такие как крахмал; смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк; консерванты, такие как этил- или пропилпарабен; и антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Таблеточные составы могут быть без покрытия или с покрытием. Покрытия предназначены либо для изменения распадаемости в желудочно-кишечном тракте и последующего всасывания активного ингредиента, либо для улучшения стабильности и/или внешнего вида. В обоих случаях можно использовать обычные агенты для покрытий и способы, хорошо известные в данной области техники.

Фармацевтическая композиция по данному изобретению строго не ограничена в отношении дозировки и частоты введения. Они могут варьироваться в зависимости от многих факторов, таких как возраст, вес, общее состояние здоровья, рацион питания, пол, вводимое лекарство, путь (или способ) введения и тяжесть состояния, подлежащего лечению, а также мнение лечащего врача. Как правило, фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить один или более раз в сутки, например, один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки или чаще, а также можно вводить каждые два дня, каждые три дня, раз в неделю или с другой частотой. В пересчете на суточную дозу может быть введено количество терапевтического средства А, составляющее от 0,1 мг до 5000 мг в сутки, или предпочтительно от 10 мг до 3000 мг, более предпочтительно от 80 мг до 2000 мг или еще более предпочтительно от 500 мг до 1500 мг. Можно вводить количество терапевтического средства В, составляющее от 0,1 мг до 1000 мг в сутки, или предпочтительно от 10 мг до 1000 мг, более предпочтительно от 100 мг до 500 мг или еще более предпочтительно от 35 мг до 300 мг. Следовательно, применение вышеупомянутой дозы может быть разумно осуществлено в соответствии с вышеупомянутыми различными частотами применения и способами. Например, от 5 до 500 мг терапевтического средства А вводят один раз в сутки или от 10 до 250 мг терапевтического средства А вводят два раза в сутки и т.д.

В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит салицилат (например, 100, 200, 300, 400, 500 или 600 мг салицилата) и триметазидин (например, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг триметазидина). В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит аспирин (например, 100, 200, 300, 400, 500 или 600 мг аспирина) и триметазидин (например, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг триметазидина). В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение салицилата (такого как аспирин) к триметазидину составляет от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.

Применение (или способ)

В другом аспекте в данном изобретении дополнительно предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в получении лекарственного препарата для лечения сахарного диабета 2 типа, нарушения толерантности к глюкозе, нарушения гликемии натощак, гипергликемии, постпрандиальной гипергликемии, сахарного диабета 1 типа, избыточной массы тела, ожирения и метаболического синдрома; или улучшения гликемического контроля и/или снижения уровня глюкозы в плазме натощак, уровня глюкозы в плазме после приема пищи и/или HbA1c A1c; или замедления, задержки или реверсии прогрессирования от нарушенной толерантности к глюкозе, нарушенной гликемии натощак, резистентности к инсулину и/или метаболического синдрома до диабета 2 типа; или лечения диабетических осложнений, таких как катаракта, а также микрососудистых и макрососудистых заболеваний, таких как нефропатия, ретинопатия, невропатия, ишемия тканей, артериосклероз, инфаркт миокарда, инсульт и окклюзионное заболевание периферических артерий; или снижения массы или стимуляции снижения массы; или лечения дегенерации бета-клеток поджелудочной железы и/или снижения функции бета-клеток поджелудочной железы, и/или восстановления функции бета-клеток поджелудочной железы, и/или восстановления секреции инсулина поджелудочной железой; или лечения заболевания или патологического состояния, вызывающего аномальное накопление жира в печени; или поддержания и/или улучшения чувствительности к инсулину и/или лечения гиперинсулинемии и/или резистентности к инсулину; или лечения атеросклероза и осложнений атеросклероза; или лечения глаукомы и осложнений глаукомы; или лечения дислипидемии/гиперлипидемии и осложнений дислипидемии/гиперлипидемии, у субъекта, нуждающегося в этом, в котором терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, и терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения сахарного диабета 2 типа, нарушения толерантности к глюкозе, нарушения гликемии натощак, сахарного диабета 1 типа, ожирения, стеатогепатита, атеросклероза, глаукомы, дислипидемии/гиперлипидемии и гипергликемии у субъекта, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для лечения одного или более заболеваний, включая сахарный диабет 2 типа, нарушение толерантности к глюкозе, нарушение гликемии натощак, сахарный диабет 1 типа, ожирение, стеатогепатит, атеросклероз, глаукому, дислипидемию/гиперлипидемию и гипергликемию, у субъекта, нуждающегося в этом, которое включает введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему заболеванием индивидуу, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения диабета 1 типа или диабета 2 типа у субъекта, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для лечения сахарного диабета 1 типа или сахарного диабета 2 типа у нуждающегося в этом субъекта, включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство A представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство B представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения заболевания или расстройства, приводящего к аномальному накоплению жира в печени, у субъекта, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для лечения заболевания или состояния, приводящего к аномальному накоплению жира в печени, у субъекта, нуждающегося в этом, включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему заболеванием индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения расстройства метаболизма, связанного с репродуктивной функцией, у субъекта, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) в лечении расстройства метаболизма, связанного с репродуктивной функцией, у нуждающегося в этом субъекта, включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство A представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство B представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. Связанное с репродуктивной функцией расстройство метаболизма включает, но не ограничиваясь ими, синдром поликистозных яичников (СПКЯ), гестационный диабет, преэклампсию, рецидивирующий спонтанный аборт, задержку роста плода, недостаточность яичников, преждевременное нарушение овуляции и мужское бесплодие. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), включающий введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для восстановления чувствительности скелетных мышц к инсулину и анаболизма белков (или облегчения мышечного воспаления, резистентности к инсулину, саркопении и/или метаболического синдрома) у страдающего заболеванием индивида, нуждающегося в этом (например, у пациента с синдромом поликистозных яичников), при этом терапевтическое средство A представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство B представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для восстановления чувствительности скелетных мышц к инсулину и анаболизма белков (или облегчения воспаления мышц, резистентности к инсулину, саркопении и/или метаболического синдрома) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (например, пациент с синдромом поликистозных яичников), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного средства для облегчения (включая реверсию) сердечно-сосудистых заболеваний, таких как фиброз миокарда, гипертрофия желудочков, сердечная недостаточность и т.д., у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с синдромом поликистозных яичников или НАСГ), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для облегчения (включая реверсию) сердечно-сосудистых заболеваний, таких как фиброз миокарда, гипертрофия желудочков, сердечная недостаточность и т.д., у страдающего заболеванием индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с синдромом поликостозных яичников или НАСГ), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для реверсии резистентности к инсулину, саркопении и метаболического синдрома у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с синдромом поликистозных яичников или НАСГ), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для реверсии резистентности к инсулину, саркопении и метаболического синдрома у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с синдромом поликистозных яичников или НАСГ), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для лечения неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП) или неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) лечения неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП) или неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для сдерживания набора массы (или реверсии гиперлипидемии) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (например, пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для сдерживания набора массы (или реверсии гиперлипидемии) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (например, у пациента с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для устранения увеличения печени (или повреждения печени) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для устранения увеличения печени (или повреждения печени) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для повышения толерантности к глюкозе (или реверсии резистентности к инсулину, восстановления чувствительности скелетных мышц и печени к инсулину и облегчения воспаления мышц) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для повышения толерантности к глюкозе (или реверсии резистентности к инсулину, восстановления чувствительности скелетных мышц и печени к инсулину и ослабления воспаления мышц) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для стимуляции ангиогенеза (или стимуляции чувствительности нервно-мышечной ткани) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) для стимуляции ангиогенеза (или стимуляции чувствительности нервно-мышечной ткани) у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), включающее введение терапевтического средства А и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) терапевтического средства А и терапевтического средства В в приготовлении лекарственного препарата для модулирования сигнальных путей p38 и AMPK у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложено применение (или способ) модулирования сигнальных путей p38 и AMPK у страдающего болезнью индивида, нуждающегося в этом (такого как пациент с неалкогольной жировой болезнью печени (НАСГ)), включающее введение терапевтического средства A и терапевтического средства В страдающему болезнью индивиду, при этом терапевтическое средство А представляет собой нестероидное противовоспалительное средство, а терапевтическое средство В представляет собой ингибитор окисления жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов (например, аспирин), а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А (например, салицилат, такой как аспирин) и терапевтическое средство В (например, триметазидин) находятся в массовом соотношении от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1.

Определение терапевтического средства А и терапевтического средства В, а также частота введения, режим и дозировка и т.д. могут быть такими же, как описано ранее.

В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано из салицилатов, а терапевтическое средство В выбрано из триметазидина. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А выбрано как аспирин, а терапевтическое средство В выбрано как триметазидин. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет от 1:1 до 10:1, в том числе 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения массовое соотношение терапевтического средства А (например, салицилата, такого как аспирин) и терапевтического средства В (например, триметазидина) составляет 6:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят одновременно (например, перорально). В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В содержатся в одной лекарственной форме. В некоторых вариантах осуществления изобретения одна фармацевтическая лекарственная форма представляет собой лекарственную форму для перорального применения. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят раздельно (например, перорально).

Курс лечения может составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев и более. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство А можно вводить один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки и т.д. или можно вводить один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз в неделю или с другой частотой. В некоторых вариантах осуществления изобретения терапевтическое средство В можно вводить один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки и т.д. или можно вводить один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз в неделю или с другой частотой. Когда терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят раздельно, частота их введения может быть или не быть одинаковой.

Согласно данному изобретению субъекты, нуждающиеся в этом, могут быть разделены на множество типов, например субъекты, у которых были диагностированы или которые подвержены риску развития различных метаболических синдромов, или субъекты, у которых показатели различных метаболических синдромов выходят за пределы нормы, или субъекты с непереносимостью, непригодностью или неэффективностью после применения определенных противодиабетических средств и т.д. Таким образом, в варианте осуществления изобретения субъект может представлять собой индивида, у которого диагностировано одно или более патологических состояний, выбранных из группы, состоящей из избыточной массы, ожирения, висцерального ожирения и абдоминального ожирения. В другом варианте осуществления изобретения субъект может представлять собой индивида, у которого диагностировано одно или более из следующих патологических состояний: (а) концентрация глюкозы в крови или концентрация глюкозы в сыворотке натощак выше 110 мг/дл, особенно выше 125 мг/дл; (b) концентрация глюкозы в плазме после приема пищи равна или превышает 140 мг/дл; и (c) значение HbA1c равно или превышает 6,5%, в частности равно или превышает 8,0%. В другом варианте осуществления изобретения субъект может представлять собой индивида с одним или более из следующих патологических состояний: (а) ожирения, висцерального ожирения и/или абдоминального ожирения; (b) концентрация триглицеридов в крови ≥ 150 мг/дл; (c) уровень холестерина ЛПВП в крови < 40 мг/дл у субъектов женского пола; уровень холестерина ЛПВП в крови < 50 мг/дл у субъектов мужского пола; (d) систолическое артериальное давление ≥ 130 мм рт. ст., диастолическое артериальное давление ≥ 85 мм рт. ст.; (e) уровень глюкозы в крови натощак ≥ 110 мг/дл; и (f) уровни холестерина ЛПНП в крови ≥ 130 мг/дл. В другом варианте осуществления изобретения субъект может представлять собой индивида, которому противопоказана монотерапия метформином и/или имеется непереносимость терапевтических доз метформина. В другом варианте осуществления изобретения субъект может представлять собой индивида с недостаточным контролем гликемии после лечения одним или более противодиабетическими лекарственными средствами, выбранными из группы, состоящей из: (а) бигуанида; (b) сульфонилмочевины; (c) меглитинида; (d) тиазолидинедиона; (e) ингибитора α-глюкозидазы; (f) инсулина и аналога инсулина; (g) ингибитора дипептидилпептидазы IV; (h) ингибитора SGLT2; (i) модулятора PPARα; (j) агониста глюкозозависимого инсулинотропного полипептида; (k) β-3-агонистов; (l) GLP1 и аналога GLP1; (m) модулятора PPARγ; и (n) ингибитора ГМГ-КоА-редуктазы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения субъект представляет собой человека, например человека в возрасте старше 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80 лет.

Данное изобретение будет подробно описано ниже со ссылкой на примеры.

Примеры

В следующих примерах все исследования на животных (например, на мышах) выполняли на основании рекомендаций по уходу за животными, одобренных Институциональным комитетом по уходу и использованию животных. Для гистологии образцы ткани фиксировали в 10%-ом нейтральном формалине или растворе Боуэна, а затем заливали в парафин.

Кроме того, для контрольной группы и экспериментальной группы по данному изобретению в процессе используют внутрибрюшинные инъекции. Объем инъекции начинается с 4 мкл/г массы тела и может быть скорректирован в зависимости от дозы, в которой терапевтическое средство А в экспериментальной группе (в следующих примерах используется аспирин (торговое название аспирин)) разводят в ФСБ до дозы от 0,3 мг/кг до 120 мг/кг массы тела, терапевтическое средство В (в следующих примерах используется триметазидин (торговое название триметазидин)) разбавляют в ФСБ до дозы от 0,05 мг/кг до 500 мг/кг массы тела. В контрольной группе обычно используют такое же количество только терапевтического средства А или такое же количество только терапевтического средства В, или в качестве холостого контроля используют только такое же количество растворителя ФСБ.

Для результатов на каждом графике данные выражены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM), а для расчета значений p использовали t-критерий Стьюдента (двусторонний, неравная дисперсия для двух выборок). Статистическая значимость показана как p>0,05 (нет значимости, ns), p<0,05 (одна звездочка, т.е. *), или p<0,01 (две звездочки, т.е. **), или p<0,001 (три звездочки, т.е. ***). Тесты выполняются с использованием Microsoft Excel, причем тип теста всегда установлен на дисперсию с двумя равными выборками.

Пример 1

Двадцать 6-недельных мышей-самцов с ожирением, вызванным рационом питания (Jackson Lab's Diet-Induced Obese, DIO) с аналогичным физическим статусом были отобраны и затем разделены на четыре группы, и количество мышей в каждой группе составляло 5. В экспериментальной группе каждой мыши эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А и 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; для контрольной группы 1 каждой мыши эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А в сутки; для контрольной группы 2 каждой мыши эффективно вводили 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; в контрольной группе 3 каждой мыши каждый день вводили только то же количество растворителя ФСБ в качестве холостой пробы. Всего эксперимент проводился в течение 10 дней. Массу тела каждой мыши регистрировали ежедневно. На основе массы тела каждой мыши строили график зависимости массы тела от времени, как показано на Фиг. 1.

На Фиг. 1 показаны результаты изменения массы мышей DIO с ожирением в результате воздействия фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению может эффективно снижать массу тела мышей DIO более чем на около 10% в течение 10 дней; в то время как контрольные группы с 1 по 3 практически не оказали существенного влияния на массу тела мышей. Таким образом, можно считать, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В по данному изобретению обладают синергетическим действием на терапевтический эффект снижения массы при применении в комбинации.

Пример 2

Отбирали мышей из экспериментальной группы и контрольной группы 3, которые завершили Пример 1, а затем вскрывали для наблюдения за накоплением жира у мышей в экспериментальной группе и контрольной группе 3, и проводили сравнение. Зарегистрированные изображения жировых отложений в различных местах после вскрытия показаны на Фиг. 2.

На Фиг. 2 показаны результаты снижения содержания жира у мышей DIO, вызванного лечением фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе с использованием фармацевтической композиции согласно варианту осуществления данного изобретения по сравнению с контрольной группой (группами). Видно, что у мышей в контрольной группе 3 имеется много очевидных накоплений жира, таких как ожирение печени, висцеральный жир и подкожный жир, в то время как накопление жира у мышей в экспериментальной группе значительно снижено. Таким образом, можно считать, что фармацевтическая композиция по данному изобретению оказывают эффект значительного снижения содержания жира в организме.

Пример 3

Аналогично, были отобраны мыши из экспериментальной группы и контрольных групп 1, 2 и 3, которые завершили Пример 1, и мышей после вскрытия осматривали под микроскопом для сравнения формы и размера жировых гранул в жировом теле половых желез. Иллюстрация морфологии жировых гранул под микроскопом представлена на Фиг. 3.

На Фиг. 3 показаны результаты морфологии адипоцитов в жировом теле половых желез в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Видно, что по сравнению с гранулами жира в контрольных группах 1, 2 и 3 размер гранул жира в экспериментальной группе был значительно уменьшен, то есть терапевтическое средство А+В имело терапевтический эффект, заключающийся в индукции уменьшения жира.

Пример 4

Аналогично, были отобраны мыши из экспериментальной группы и контрольных групп 1, 2 и 3, которые завершили Пример 1, и мышей после вскрытия осматривали под микроскопом для сравнения морфологии и размера жировых гранул клеток печени. Иллюстрация морфологии клеток печени под микроскопом показана на Фиг. 4.

На Фиг. 4 показаны результаты ожирения печени и морфологии клеток печени в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Видно, что по сравнению с клетками печени в контрольных группах 1, 2 и 3 количество жировых гранул в клетках печени в экспериментальной группе было снижено, их размер значительно уменьшился, а также уменьшилось количество воспалительных клеток. Следовательно, терапевтическое средство А+В оказывало терапевтическое действие, вызывая уменьшение жира и воспаления при ожирении печени.

Пример 5

Аналогично, были отобраны мыши из экспериментальной группы и контрольных групп 1, 2 и 3, которые завершили Пример 1, и мышей после вскрытия осматривали под микроскопом для сравнения морфологии клеток сердечной мышцы. Иллюстрация морфологии клетки сердечной мышцы под микроскопом показана на Фиг. 5.

На Фиг. 5 показаны результаты морфологии клеток сердечной мышцы в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Видно, что цвет и форма изображений мышц в экспериментальной группе и в контрольной группе 1, 2 и 3 были в основном одинаковыми. Следовательно, терапевтические средства А+В не вызывали кардиотоксичности.

Пример 6

Аналогично, были отобраны мыши из экспериментальной группы и контрольных групп 1, 2 и 3, которые завершили Пример 1, и мышей после вскрытия осматривали под микроскопом для сравнения морфологии клеток скелетных мышц. Иллюстрация морфологии клеток скелетных мышц под микроскопом показана на Фиг. 6.

На Фиг. 6 показаны результаты морфологии клеток скелетных мышц в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Видно, что цвет и форма изображений мышц в экспериментальной группе и в контрольной группе 1, 2 и 3 были в основном одинаковыми. Следовательно, терапевтические средства А+В не вызывали потери мышечной массы и мышечной токсичности.

Пример 7

Аналогично, отбирали мышей из экспериментальной группы и контрольных групп 1, 2 и 3, которые завершили Пример 1, и сыворотки вскрытых мышей использовали для биохимических анализов крови для сравнения показателей почечной токсичности: креатинина сыворотки (CREA) и азота мочевины крови (BUN). Сравнение двух показателей показано на Фиг. 7.

На Фиг. 7 показаны результаты показателей почечной токсичности: креатинина сыворотки (CREA) и азота мочевины крови (BUN) в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию согласно варианту осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Можно видеть, что уровни креатинина сыворотки (CREA) и азота мочевины крови (BUN) в экспериментальной группе и контрольной группе 1, 2 и 3 были в основном одинаковыми, и между ними не было существенной разницы. Следовательно, терапевтические свойства А+В не вызывали почечной токсичности.

Пример 8

Мышей DIO с диабетом тестировали на изменение массы тела по той же методике, что и в Примере 1, за исключением того, что в каждую группу включали по 12 мышей, а продолжительность лечения увеличивали до 4 недель. Массу тела каждой мыши регистрировали ежедневно, и массу тела каждой мыши наносили на график от времени, как показано на Фиг. 8.

На Фиг. 8 показаны результаты изменения массы у мышей DIO с диабетом после 4 недель лечения фармацевтическими терапевтическими средствами А+В в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению может эффективно и стабильно снижать массу тела мышей DIO с диабетом на более чем около 20% в течение 3 недель, в то время как контрольные группы с 1 по 3 практически не оказывают заметного влияния на массу тела мышей. Следовательно, можно считать, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В, предусмотренные данным изобретением, при использовании в комбинации оказывают синергетическое действие на терапевтический результат снижения массы тела у пациентов с диабетом.

На Фиг. 9 показано сравнение общего количества холестерина в сыворотке крови, показателя, связанного с гиперлипидемией, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 10 показано сравнение холестерина ЛПНП в сыворотке, маркера, связанного с гиперлипидемией, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 11 показано сравнение аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке, показателя, связанного с ожирением печени, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 12 показано сравнение отношения альбумина/глобулина в сыворотке, показателя, связанного с функцией метаболизма азота, в каждой группе мышей DIO.

На Фиг. 13 показано сравнение общего белка сыворотки, показателя, связанного с функцией метаболизма азота, в каждой группе мышей DIO.

Примеры 9-13

Последующие тесты проводили на каждой группе мышей, которые завершили лечение по Примеру 8. Примеры 9 и 10 выявили два показателя, связанных с ожирением и гиперлипидемией: общий холестерин и холестерин ЛПНП; в Примере 11 обнаружена аланинаминотрансфераза (АЛТ), индикатор, связанный с жировой дистрофией печени; и в Примерах 12 и 13 обнаружены два показателя, относящиеся к метаболизму азота: соотношение альбумин/глобулин и общий белок. Сравнение каждого показателя для каждой группы показано на Фиг. 9-13.

На Фиг. 9-13 показано сравнение различных показателей, связанных с метаболическим синдромом, таким как ожирение, гиперлипидемия, ожирение печени и функция метаболизма азота в каждой группе мышей, соответственно. Видно, что после введения терапевтического средства А+В в течение 4 недель по сравнению с контрольной группой 3 все показатели у мышей экспериментальной группы показали значимое снижение, в то время как ни терапевтическое средство А в контрольной группе 1, ни терапевтическое средство B в контрольной группе 2, используемые отдельно, не были способны достичь значительных терапевтических или восстановительных эффектов. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению имеет очевидное медицинское применение в лечении или улучшении состояния при заболеваниях, связанных с ожирением и гиперлипидемией, ожирении печени и заболеваниях, связанных с функцией метаболизма азота.

Пример 14

Аналогично, на группах мышей, которые завершили лечение по Примеру 8, также проводили тесты на толерантность к глюкозе. В экспериментальной группе и контрольных группах 1-3 эксперимент проводили путем внутрибрюшинного введения глюкозы (2 мг/г массы тела) мышам, которые не употребляли пищу в течение ночи. Через каждые 15-30 минут содержание глюкозы (мМ) у мышей измеряли в каждый момент времени с помощью измерителя уровня глюкозы в крови Lifescan One Touch и строили линейный график в соответствии с содержанием глюкозы от времени. Результаты показаны на Фиг. 14.

На Фиг. 14 показаны результаты толерантности к глюкозе у мышей DIO с диабетом. Видно, что по сравнению с контрольными группами 1-3 содержание глюкозы у мышей в экспериментальной группе существенно не увеличилось до очень высокого уровня содержания глюкозы, а быстро снизилось до более низкого уровня содержания глюкозы. Таким образом, можно видеть, что мыши продемонстрировали превосходную толерантность к глюкозе после 4 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению.

Пример 15

Аналогично, на группах мышей, которые завершили лечение по Примеру 8, также проводили тесты на чувствительность к инсулину. В экспериментальной и контрольной группах 1-3 крысам, не получавшим еду в течение 5 часов, внутрибрюшинно вводили 0,75 Ед инсулина/кг массы тела инсулина (Хумулин) с помощью шприцевой иглы 27G. После этого каждые 15-30 минут мышей проверяли на уровень глюкозы (мМ) в каждый момент времени с помощью глюкометра Lifescan One Touch, и строили линейный график на основе содержания глюкозы от времени. Результаты показаны на Фиг. 15.

На Фиг. 15 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у мышей DIO с диабетом. Видно, что по сравнению с контрольными группами 1-3 содержание глюкозы у мышей экспериментальной группы всегда держалось на более низком уровне содержания глюкозы и изменялось относительно более значимо. Следовательно, можно видеть, что мыши после 4 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению продемонстрировали отличные показатели в отношении чувствительности к инсулину.

Пример 16

Для лечения мышей DIO в течение 10 дней использовали различные комбинации терапевтических средств следующим образом: (1) холостой контроль; (2) 30 мг/кг А; (3) 5 мг/кг В; (4) 30 мг/кг А+5 мг/кг В; (5) 3 мг/кг А+5 мг/кг В; (6) 0,3 мг/кг А+5 мг/кг В; (7) 30 мг/кг А+0,5 мг/кг В; (8) 30 мг/кг А+0,05 мг/кг В. В конце лечения измеряли массу тела (%) в группе каждой комбинации терапевтических средств, соответственно. Результаты показаны на Фиг. 16.

На Фиг. 16 показано сравнение массы тела мышей DIO после введения различных комбинаций терапевтических средств. Видно, что ожидаемый терапевтический эффект не может быть достигнут в случае введения обычных доз. Напротив, в случае комбинации терапевтических средств 30 мг/кг А+5 мг/кг В в группе (4) была показана превосходная эффективность в снижении массы.

Пример 17

Для лечения мышей DIO в течение 10 дней использовали различные комбинации терапевтических средств следующим образом: (1) холостой контроль; (2) 30 мг/кг А; (3) 5 мг/кг В; (4) 30 мг/кг А+5 мг/кг В; (5) 3 мг/кг А+5 мг/кг В; (6) 0,3 мг/кг А+5 мг/кг В; (7) 30 мг/кг А+0,5 мг/кг В; (8) 30 мг/кг А+0,05 мг/кг В. В конце лечения уровни глюкозы в крови натощак (мМ) измеряли в каждой группе комбинации терапевтических средств, и результаты показаны на Фиг. 17.

На Фиг. 17 показано сравнение уровней глюкозы в крови натощак у мышей DIO после введения различных комбинаций терапевтических средств. Видно, что ожидаемый терапевтический эффект не может быть достигнут в случае введения обычных доз. Напротив, в случае комбинации терапевтических средств 30 мг/кг А+5 мг/кг В в группе (4) была продемонстрирована превосходная эффективность в снижении уровней глюкозы в крови натощак.

Пример 18

В тесте отбирали обычных мышей C57BL/6 дикого типа с аналогичным физическим статусом во всех аспектах. В экспериментальной группе каждой мыши эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А и 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; для холостой контрольной группы каждой мыши вводили только одинаковое количество растворителя ФСБ в сутки. Всего эксперимент длился 13 дней. Массу тела каждой мыши регистрировали ежедневно, и массу тела каждой мыши наносили на график от времени, как показано на Фиг. 18.

На Фиг. 18 показаны результаты изменения массы тела обыкновенных мышей C57BL/6 дикого типа, индуцированные фармацевтическими терапевтическими средствами A+B, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению может эффективно снижать массу тела обыкновенных мышей C57BL/6 дикого типа более чем на 10% в течение 13 дней, в то время как контрольная группа практически не оказывает заметного влияния на массу тела мышей. Таким образом, можно считать, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В по данному изобретению также обладают синергетическим эффектом на терапевтический результат потери масса у обыкновенных мышей C57BL/6 дикого типа при использовании в комбинации.

Пример 19

Мышей в экспериментальной группе и контрольных группах, которые завершили Пример 18, отбирали и вскрывали для наблюдения за накоплением жира у мышей в экспериментальной группе и в контрольных группах. Затем между ними было проведено сравнение, и полученные изображения жировых отложений в различных местах после вскрытия показаны на Фиг. 19.

На Фиг. 19 показаны результаты снижения жира у обыкновенных мышей C57BL/6 дикого типа, индуцированные фармацевтическими терапевтическими средствами A+B, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами. Видно, что у мышей в контрольных группах имеется много очевидных накоплений жира, таких как висцеральный жир и жир в половых железах, в то время как накопление жира у мышей в экспериментальной группе значительно снижено. Следовательно, можно считать, что фармацевтическая композиция по данному изобретению оказывает эффект, заключающийся в значительном снижении содержания жира в организме.

Пример 20

Двадцать четыре самки крыс линии Спрег-Доули в возрасте 8 недель со сходным физическим статусом были отобраны и разделены на две группы. Количество крыс в каждой группе составляло двенадцать. Каждой крысе ежедневно давали пищу с высоким содержанием жиров и сахаров (HFHSD, D11092103; Research Diet Inc) и вводили ежедневную подкожную инъекцию 60 мг/кг дегидроэпиандростерона (DHEA; Sigma Aldrich) для имитации синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) (Zhang et al., Reproduction 2016). В экспериментальной группе каждой крысе эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А и 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; в контрольной группе каждой крысе каждый день эффективно вводили такое же количество растворителя ФСБ в качестве холостого контроля. Эксперимент проводили в течение трех недель. Массу тела каждой крысы регистрировали ежедневно, и массу тела каждой крысы наносили на график в зависимости от времени, как показано на Фиг. 20.

На Фиг. 20 показаны результаты изменения массы тела у крыс с синдромом поликистозных яичников, индуцированные фармацевтическими терапевтическими средствами А+В, в экспериментальной группе, получавшей фармацевтическую композицию в соответствии с вариантом осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольной группой. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению может эффективно и стабильно предотвращать увеличение массы тела крыс с синдромом поликистозных яичников более чем на 10% в течение 3 недель. Следовательно, можно считать, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В по данному изобретению при использовании в комбинации оказывают синергетическое действие на предотвращение ожирения у пациентов с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 21 показано сравнение уровней глюкозы в крови натощак в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 22 показано сравнение аспартатаминотрансферазы (АСТ) и общего холестерина в сыворотке, показателей, связанных с ожирением печени, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 23 показано сравнение общего белка сыворотки, показателя, связанного с функцией метаболизма азота в печени, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 24 показано сравнение креатинина в сыворотке, показателя, связанного с функцией почек, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

На Фиг. 25 показано сравнение лактатдегидрогеназы (ЛДГ), креатинкиназы (КК), сердечного изофермента креатинкиназы MB (КК-MB), дегидрогеназы α-гидроксимасляной кислоты (ГБДГ) в сыворотке крови, показателей, связанных с заболеваниями сердца, в каждой группе крыс с синдромом поликистозных яичников.

Примеры 21-25

Последующие тесты проводили на каждой группе крыс, которые завершили лечение Примером 20. В Примере 21 определяли уровень глюкозы в крови натощак, показатель, относящийся к сахарному диабету; в Примере 22 выявили показатели, связанные с ожирением печени, аспартатаминотрансферазу (АСТ) и общий холестерин в сыворотке; в Примере 23 выявили показатель общего белка сыворотки, связанный с функцией метаболизма азота в печени; в Примере 24 обнаружен креатинин в сыворотке (креатинин), показатель, относящийся к почечной функции; и в примере 25 обнаружили показатели, относящиеся к заболеванию сердца, лактатдегидрогеназу (ЛДГ), креатинкиназу (КК), сердечный изофермент креатинкиназы MB (КК-MB), дегидрогеназу α-гидроксибутирата (ГБДГ). Сравнение каждого показателя каждой группы показано на Фиг. 21-25, соответственно.

Фиг. 21-25, соответственно, показывают сравнение различных показателей, связанных с синдромом поликистозных яичников, таких как диабет, ожирение, гиперлипидемия, ожирение печени и заболевание сердца, в каждой группе крыс. Видно, что после введения терапевтического средства А+В в течение 3 недель по сравнению с контрольной группой все показатели у крыс экспериментальной группы показали значимое снижение. Можно видеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению имеет очевидное медицинское применение для профилактики или улучшения состояния при синдроме поликистозных яичников и связанном сахарном диабете, ожирении, гиперлипидемии, ожирении печени и заболеваниях, связанных с сердечно-сосудистыми нарушениями.

Пример 26

Аналогично, на группах крыс, которые завершили лечение по Примеру 20, также проводили тесты на чувствительность к инсулину. В экспериментальной и контрольной группе крысам, не получавшим еду в течение 5 часов, внутрибрюшинно вводили 0,75 Ед инсулина/кг массы тела (Хумулин) с помощью шприцевой иглы 27G. После этого каждые 15-30 минут крыс проверяли на уровень глюкозы (мМ) в каждый момент времени с помощью глюкометра Lifescan One Touch, и строили линейный график на основе содержания глюкозы от времени. Результаты показаны на Фиг. 26.

На Фиг. 26 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у крыс с синдромом поликистозных яичников. Видно, что по сравнению с контрольной группой содержание глюкозы у крыс экспериментальной группы всегда держалось на более низком уровне содержания глюкозы и изменялось относительно более значимо. Следовательно, можно видеть, что крысы после 3 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению продемонстрировали отличные показатели в отношении чувствительности к инсулину.

Пример 27

Аналогично, для каждой группы крыс из Примера 20 также выполняли анализ цитологии влагалища. Оценку проводили для всех стадий эстрального цикла в течение 11 дней подряд, включая интереэструс D, предэструс P, эструс E и поздний эструс M. Был построен линейный график в соответствии со стадией и временем эстрального цикла, и результаты показаны на Фиг. 27.

На Фиг. 27 показаны результаты эстрального цикла у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что по сравнению с нормальной контрольной группой (контроль) эстральный цикл крыс с синдромом поликистозных яичников (DHEA+HFHSD) является аномальным, и 12/12 крыс имеют проблемы, заключающиеся в отсутствие цикла. Эстральный цикл крыс экспериментальной группы (DHEA+HFHSD+А+В) был относительно нормальным, а эстральный цикл у 4/12 крыс полностью нормализовался. Следовательно, можно видеть, что после 3 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у некоторых крыс с синдромом поликистозных яичников может полностью восстановиться нормальный эстральный цикл.

Пример 28

Аналогично, анализ ELISA сывороточных гормонов, включая андрогены (Т), эстрогены (Е2) и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), также выполняли для каждой группы крыс из Примера 20. Результаты показаны на Фиг. 28.

На Фиг. 28 показаны результаты ELISA сывороточного гормона у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой (контроль) крыс с синдромом поликистозных яичников в экспериментальной группе (А+В) значимых изменений андрогенов (Т) и эстрогенов (E2) не наблюдалось; уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) был значительно повышен у 4/12 крыс. Следовательно, можно видеть, что после 3 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у некоторых крыс с синдромом поликистозных яичников может восстановиться нормальный эстральный цикл. Это связано с повышением уровня фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), а не с регуляцией андрогенов (Т) и эстрогенов (Е2).

Пример 29

Аналогично, также проводили вестерн-блоттинг белка скелетных мышц для каждой группы крыс из Примера 20, включая фосфо-Akt (S473), Akt, фосфо-p38, тяжелую цепь мышечного белка (тяжелая цепь миозина, MHC) и ГАФДГ. Результаты показаны на Фиг. 29.

На Фиг. 29 показаны результаты вестерн-блоттинга белков скелетных мышц у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой крыс с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ) уровни фосфо-Akt (S473), Akt, тяжелой цепи миозина (МНС) были значительно повышены, а уровень фосфо-р38 значительно снижен. Следовательно, можно видеть, что после 3 недель лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у крыс с синдромом поликистозных яичников может восстановиться нормальная чувствительность скелетных мышц к инсулину, синтез и метаболизм белка, а также снизиться воспаление мышц, резистентность к инсулину, синдром саркопении и метаболический синдром.

Пример 30

Аналогично, также выполняли анализ срезов сердца, включая толщину стенки желудочка и трихромное окрашивание по Массону для выявления фиброза, для каждой группы крыс из Примера 20. Результаты показаны на Фиг. 30 и 31.

На Фиг. 30 показаны результаты анализа толщины стенки левого желудочка у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой (контроль) крыс с синдромом поликистозных яичников толщина стенки левого желудочка экспериментальной группы (А+В) была значимо уменьшена (Р<0,001). Следовательно, можно видеть, что крысы с синдромом поликистозных яичников, получавшие фармацевтическую композицию по данному изобретению в течение 3 недель, могут значимо улучшить состояние сердечно-сосудистых патологий, таких как гипертрофия желудочков и сердечная недостаточность.

На Фиг. 31 показаны результаты анализа фиброза миокарда у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что площадь фиброза миокарда у крыс экспериментальной группы (А+В) значимо уменьшилась по сравнению с контрольной группой (контроль) у крыс с синдромом поликистозных яичников (Р<0,05). Следовательно, можно видеть, что крысы с синдромом поликистозных яичников, получавшие фармацевтическую композицию по данному изобретению в течение 3 недель, могут значимо улучшить состояние сердечно-сосудистых патологий, таких как фиброз миокарда, гипертрофия желудочков и сердечная недостаточность, вызванная инфарктом миокарда.

Пример 32

Аналогично, для каждой группы крыс из Примера 20 был также проведен стандартный анализ крови, и результаты показаны на Фиг. 32.

На Фиг. 32 показаны результаты обычного анализа крови у крыс с синдромом поликистозных яичников. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой (контроль) крыс с синдромом поликистозных яичников показатели общего анализа крови у крыс экспериментальной группы (А+В) не имеют значимых изменений (Р>0,05). Следовательно, можно видеть, что через 3 недели лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у крыс с синдромом поликистозных яичников не было значимых токсических реакций.

Пример 33

Двадцать шесть самцов мышей с ожирением (ob/ob) в возрасте 6 недель (Jackson Lab B6.Cg-Lepob/J, номенклатурный номер: 000632) были отобраны из лаборатории Джексона с аналогичным физическим состоянием. Каждая мышь получала диету с высоким содержанием жиров и сахаров (HFSD, D11092103; Research Diet Inc) ежедневно в течение 45 дней, чтобы имитировать ожирение печени (НАСГ) (Kristiansen et al., 2016; doi:10.4254/wjh.v8.i16.673). Через 45 дней мышей продолжили кормить пищей с высоким содержанием жиров и сахара, и их разделили на две группы. Количество мышей в каждой группе составляло 13. В экспериментальной группе каждой мыши эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А и 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; в контрольной группе каждой мыши каждый день вводили только такое же количество растворителя ФСБ в качестве холостого контроля в течение в общем 37 дней. Массу тела каждой мыши регистрировали ежедневно, и массу тела каждой мыши наносили на график от времени, как показано на Фиг. 33.

На Фиг. 33 показаны результаты воздействия фармацевтических терапевтических средств А+В на изменение массы тела у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ фармацевтическая композиция по данному изобретению может эффективно снижать массу тела мышей с НАСГ более чем на около 3% в течение 5 дней (P<0,001), и она способна эффективно снижать массу тела мышей с НАСГ на около 20% за 37 дней (P=3,8e-10), в то время как 1-3 практически не оказали значимого влияния на массу тела мышей. Следовательно, можно считать, что фармацевтическое терапевтическое средство А+В, предусмотренное в данном изобретении, может эффективно подавлять увеличение массы тела.

Пример 34

Аналогично, группы мышей, которые завершили лечение в соответствии с Примером 33, также тестировали касательно трехдневного потребления пищи, и результаты показаны на Фиг. 34.

На Фиг. 34 показаны результаты теста на потребление пищи у мышей с НАСГ. Можно увидеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ потребление пищи мышами экспериментальной группы не только не уменьшилось, но несколько увеличилось (Р=0,109). Таким образом, можно видеть, что не происходит значительного изменения аппетита у мышей с НАСГ после 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению.

Пример 35

Аналогично, также проводили вскрытие каждой группы мышей, которые завершили лечение в соответствии с Примером 33, и измеряли массу печени. Результаты показаны на Фиг. 35.

На Фиг. 35 показаны результаты теста массы печени у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ масса печени мышей в экспериментальной группе была значимо снижена (P<0,001), а также значимо уменьшился объем печени. Следовательно, можно видеть, что у мышей с НАСГ может наблюдаться реверсия увеличения печени после 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению.

Пример 36

Аналогично, каждую группу мышей, которые завершили лечение в соответствии с Примером 33, также подвергали вскрытию, гистологически фиксировали срезы, окрашивали гематоксилин-эозином и пикросириусом красным (Sigma-Aldrich) и подвергали микроскопическому наблюдению и экспертной оценке. Результаты анализа срезов печени показаны на Фиг. 36. Результаты анализа срезов сердца показаны на Фиг. 37.

На Фиг. 36 показаны результаты анализа срезов печени у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ степень ожирения печени и показатель активности при ожирении печени у мышей в экспериментальной группе были значимо снижены (P<0,01). Следовательно, терапевтическое средство А+В оказывает терапевтическое действие, вызывая уменьшение жира и воспаления при жировой дистрофии печени. В то же время видно, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ площадь фиброза печени (%) и стадия фиброза у мышей в экспериментальной группе также были значимо снижены (P<0,01). Следовательно, терапевтическое средство A+B оказывает терапевтическое действие, вызывая уменьшение фиброза при ожирении печени. После 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у мышей может наблюдаться реверсия НАСГ, ожирения печени и фиброза печени, даже если они продолжают потреблять большое количество корма с высоким содержанием жира и сахара.

На Фиг. 37 показаны результаты анализа срезов сердца у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ площадь фиброза сердечной ткани мышей в экспериментальной группе была значимо уменьшена (P<0,01). Следовательно, терапевтическое средство А+В обладает терапевтическим эффектом, заключающимся в снижении фиброза сердца. Сердечно-сосудистые заболевания, такие как фиброз сердца и сердечная недостаточность, могут быть обратимы у мышей, получающих лечение фармацевтической композицией по данному изобретению в течение 40 дней, даже если они продолжают потреблять большое количество корма с высоким содержанием жира и сахара.

Пример 38

Аналогично, каждой группе мышей, которые завершили лечение в соответствии с Примером 33, проводили биохимические анализы крови. В Примере 38 обнаружены индикаторы, связанные с повреждением печени: аланинаминотрансфераза (АЛТ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ); в примере 39 исследовали показатели, связанные с гиперлипидемией: триглицериды (ТГ), общий холестерин (хол), холестерин ЛПВП (хол-ЛПВП) и холестерин ЛПНП (хол-ЛПНП); в примере 40 обнаружены показатели, относящиеся к различным повреждениям органов: соотношение альбумин/глобулин (Альбумин/Глобулин), мочевина (Мочевина), креатинин (Креатинин), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), креатинкиназа (КK), сердечный изофермент креатинкиназы MB (КК-MB) и α-гидроксибутиратдегидрогеназа (ГБДГ). Сравнение каждого показателя каждой группы показано на Фиг. 38-40, соответственно.

На Фиг. 38 показано сравнение двух показателей, связанных с повреждением печени, в каждой группе мышей. По сравнению с контрольной группой с НАСГ, аланинаминотрансфераза (АЛТ, р<0,001) и аспартатаминотрансфераза (АСТ, р=0,02) у мышей в экспериментальной группе были значимо снижены. После 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению, несмотря на то, что мыши продолжали потреблять большое количество пищи с высоким содержанием жиров и сахаров, повреждение печени могло уменьшаться.

На Фиг. 39 показано сравнение показателей, связанных с гиперлипидемией, в каждой группе мышей. По сравнению с контрольной группой с НАСГ, триглицериды (ТГ), общий холестерин (хол, P<0,01), холестерин ЛПВП (хол-ЛПВП) и холестерин ЛПНП (хол-ЛПНП, Р=0,016) у мышей в экспериментальной группе были снижены. После 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у мышей удалось вызвать реверсию гиперлипидемии, даже несмотря на то, что они продолжали потреблять большое количество корма с высоким содержанием жира и сахара.

На Фиг. 40 показано сравнение показателей, связанных с поражением органов, в каждой группе мышей. По сравнению с контрольной группой с НАСГ соотношение альбумин/глобулин, мочевина, креатинин, лактатдегидрогеназа (ЛДГ), креатинкиназа (КК), мочевина (Мочевина), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), креатинкиназа (КК), сердечный изофермент креатинкиназы МВ (КК-MB) и α-гидроксибутиратдегидрогеназа (ГБДГ) не претерпели значимых изменений (P>0,05). После 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению в различных органах мышей не наблюдалось какой-либо токсической реакции.

Пример 41

Аналогично, каждую группу мышей из Примера 33 тестировали на содержание глюкозы в крови натощак, содержание глюкозы (мМ) у мышей, не потреблявших еду в течение ночи, определяли в крови с помощью глюкометра Lifescan One Touch каждые 3-7 дней. Был построен линейный график на основе содержания глюкозы от времени, и результаты показаны на Фиг. 41.

На Фиг. 41 показаны результаты измерения уровня глюкозы в крови натощак в каждой группе мышей. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ содержание глюкозы у мышей в экспериментальной группе А+В не только значимо не увеличилось, но фактически значимо снизилось до более низкого уровня содержания глюкозы в течение 14 дней (P<0,001). Следовательно, можно видеть, что у мышей, получавших фармацевтическую композицию по данному изобретению в течение 40 дней, наблюдалось значительное улучшение контроля уровня сахара в крови, и можно было предотвратить возникновение сахарного диабета 2 типа.

Пример 42

Аналогично, каждую группу мышей из Примера 33 также тестировали на толерантность к глюкозе. В экспериментальной и контрольной группах тест проводили путем внутрибрюшинного введения одинакового количества глюкозы (2 мг/г массы тела) мышам, которые не принимали пищу в течение ночи. Через каждые 15-30 минут содержание глюкозы (мМ) у мышей измеряли в каждый момент времени с помощью прибора для измерения уровня глюкозы в крови Lifescan One Touch и строили линейный график в соответствии с содержанием глюкозы от времени. Результаты показаны на Фиг. 42.

На Фиг. 42 показаны результаты толерантности к глюкозе у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ содержание глюкозы у мышей в экспериментальной группе А+В увеличилось до уровня содержания глюкозы, который не является значительно высоким, а затем быстро снизилось до более низкого уровня содержания глюкозы (Р<0,001). Таким образом, можно видеть, что у мышей с НАСГ после 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению нормализовалась толерантность к глюкозе.

Пример 43

Аналогично, каждую группу мышей из Примера 33 тестировали на чувствительность к инсулину. В опытной и контрольной группах крысам, не получавшим еду в течение 6 ч, с помощью шприцевой иглы 27G внутрибрюшинно вводили одинаковое количество инсулина (Хумулин, 0,75 Ед/кг массы тела). Через каждые 15-30 минут содержание глюкозы (мМ) у мышей измеряли в каждый момент времени с помощью прибора для измерения уровня глюкозы в крови Lifescan One Touch и строили линейный график в соответствии с содержанием глюкозы от времени. Результаты показаны на Фиг. 43.

На Фиг. 43 показаны результаты определения чувствительности к инсулину у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой содержание глюкозы у мышей экспериментальной группы всегда держалось на относительно низком уровне и значимо изменялось через 60 минут (Р<0,01). Следовательно, можно видеть, что после 40 дней лечения фармацевтической композицией по данному изобретению у мышей с НАСГ нормализовалась чувствительность к инсулину, и наблюдалась реверсия резистентности к инсулину.

Пример 44

Аналогично, мыши в каждой группе из примера 33 не получали пищу в течение 6 часов и им вводили инсулин (хумулин, 0,75 Ед/кг массы тела). Через 15 минут собирали образцы скелетных мышц и печени и проводили вестерн-блот-анализ белков для обнаружения фосфо-Irs1 (S307), фосфо-Akt (S473), Akt, фосфо-p38 и ГАФДГ. Результаты показаны на Фиг. 44.

На Фиг. 44 показаны результаты вестерн-блоттинга белков скелетных мышц у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой мышей с НАСГ (контроль) уровень фосфо-Irs1 (S307), фосфо-Akt (S473) и Akt в скелетных мышцах мышей в экспериментальной группе (А+В) был значимо повышен, в то время как уровень p38 был значимо снижен. Также можно видеть, что по сравнению с контрольной группой мышей с НАСГ (контроль) уровни фосфо-Akt (S473) и фосфо-Irs1 (S307) в печени мышей в экспериментальной группе (A+B) были значимо повышены. Таким образом, можно видеть, что у мышей с НАСГ, получавших лечение фармацевтической композицией по данному изобретению в течение 40 дней, может восстанавливаться нормальная чувствительность скелетных мышц и печени к инсулину и уменьшаться воспаление мышц, системная резистентность к инсулину и метаболический синдром.

Пример 45

Шесть самцов мышей с ожирением (ob/ob) в возрасте 6 недель (Jackson Lab B6.Cg-Lepob/J, номенклатурный номер: 000632) были отобраны из лаборатории Джексона с аналогичным физическим состоянием. Каждая мышь получала диету с высоким содержанием жиров и сахаров (HFSD, D11092103; Research Diet Inc) ежедневно в течение 45 дней, чтобы имитировать ожирение печени (НАСГ) (Kristiansen et al., 2016; doi: 10.4254/wjh.v8.i16.673). Через 45 дней мышей продолжили кормить пищей с высоким содержанием жиров и сахара, и их разделили на две группы. Количество мышей в каждой группе составляло 3. В экспериментальной группе каждой мыши эффективно вводили 30 мг/кг терапевтического средства А и 5 мг/кг терапевтического средства В в сутки; для контрольной группы каждой мыши вводили только одинаковое количество растворителя ФСБ в сутки в качестве холостого контроля. Всего эксперимент длился 7 дней. После эксперимента были собраны образцы скелетных мышц и печени, проведен анализ транскриптомного секвенирования RNAseq и анализ GSEA (анализ обогащения набора генов), и были выявлены наиболее значимые генные метки и маркеры, как показано на Фиг. 45.

На Фиг. 45 показаны результаты анализа транскриптомного секвенирования у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой (C) с НАСГ фармацевтическая композиция (F) по данному изобретению может эффективно усиливать сигнальный путь ФРЭС в скелетных мышцах и печени (P<0,001, FDR<0,001), наведение аксонов костной мышцы (нейрональное наведение, P<0,001, FDR<0,001), сигнальный путь эфрина (P<0,001, FDR=0,0068) и сигнальный путь IGF печени (инсулиноподобный) (P=0,0039, FDR=0,07) у мышей с НАСГ в течение 7 дней. Следовательно, можно считать, что фармацевтическое терапевтическое средство А+В по данному изобретению может эффективно стимулировать ангиогенез, нервно-мышечную ткань и чувствительность к инсулину, точно так же, как имитация физических упражнений. (Hoier & Hellsten 2014 doi: 10.1111/micc.12117; Stark et al. 2015 doi: 10.1083/jcb.201502036; Lavin et al. 2020 doi: 10.3389/fphys.2020.00653; Sarvas et al. 2015 doi: 10.14814/phy2.12277).

Пример 46

В тесте использовали первичные клетки скелетных мышц человека in vitro, клетки были разделены на четыре группы, и каждая группа имела шесть временных точек. Экспериментальной группе вводили 100 мг/л терапевтического средства А и 2 мг/л терапевтического средства В; контрольной группе 1 вводили 100 мг/л терапевтического средства А; контрольной группе 2 вводили 2 мг/л терапевтического средства В; а для контрольной группы 3 использовали такое же количество растворителя ДМСО в качестве холостого контроля. Всего эксперимент длился 24 часа. Затем образцы в каждый момент времени подвергали вестерн-блот-анализу белков, как показано на Фиг. 46.

На Фиг. 46 показаны результаты вестерн-блоттинга белков первичных клеток скелетных мышц человека in vitro.

На Фиг. 46А показано, что после кратковременного введения (в течение 60 минут) по сравнению с контрольными группами 1-3 в экспериментальной группе, использующей фармацевтическую композицию согласно некоторым вариантам осуществления данного изобретения, фармацевтические терапевтические средства А+В могут быстро и значимо усиливать фосфо-p38, фосфо-AMPK, фосфо-ACC и PGC1a. По сравнению с контрольной группой 3, в контрольной группе 1 и контрольной группе 2 также могли повышаться уровни фосфо-p38, фосфо-AMPK, фосфо-ACC и PGC1a только при лечении A или при лечении B, но их эффекты были слабее или медленнее, и время было не равномерным. Можно видеть, что после кратковременного введения фармацевтические терапевтические средства A+B по данному изобретению могут более эффективно стимулировать сигнальные пути p38 и AMPK и их нижеследующие мишени, чем однократное применение терапевтического средства A или однократное применение терапевтического средства В, тем самым способствуя катаболизму, такому как гидролиз жира и окисление жирных кислот. После длительного введения (от 3 до 24 часов) фармацевтические терапевтические средства A+B могут значительно снижать уровень фосфо-p38, фосфо-AMPK, фосфо-ACC и PGC1a в экспериментальной группе, использующей фармацевтическую композицию в соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения, по сравнению с контрольными группами 1-3. По сравнению с контрольной группой 3, в контрольной группе 1 и контрольной группе 2 также могло наблюдаться подавление фосфо-р38, фосфо-АСС и PGC1a в течение 24 часов либо только при лечении А, либо только при лечении В, но эффект был слабее или медленнее, и время было не равномерным. Можно видеть, что после длительного введения фармацевтические терапевтические средства A+B, предусмотренные в данном изобретении, могут более эффективно ингибировать сигнальные пути p38 и AMPK и нижеследующие мишени, чем только терапевтическое средство A или только терапевтическое средство B, тем самым способствуя анаболизму.

На Фиг. 46В показано, что после кратковременного введения (в течение 60 минут) фармацевтические терапевтические средства А+В по данному изобретению могут совместно регулировать модель механизма сигнальных путей p38 и AMPK посредством окисления жирных кислот (FAO), метаболитов жирных кислот (ацилметаболиты) и аденозинтрифосфата (АТФ). Можно видеть, что фармацевтические терапевтические средства A+B могут одновременно усиливать сигнальные пути p38 и AMPK после кратковременного введения, тем самым способствуя катаболизму, такому как гидролиз жира и окисление жирных кислот.

На Фиг. 46C показано, что после длительного введения (от 3 до 24 часов) фармацевтические терапевтические средства A+B по данному изобретению могут совместно регулировать модель механизма сигнальных путей p38 и AMPK посредством воспалительных цитокинов (восп. цитокинов), окисления жирных кислот (FAO), митохондриальных активных форм кислорода (mtROS) и гликолиза. Следовательно, фармацевтические терапевтические средства A+B могут вызывать одновременное резкое ингибирование сигнальных путей p38 и AMPK после длительного приема, тем самым способствуя анаболизму и восстановлению мышц.

Следовательно, ежедневное введение фармацевтических терапевтических средств A+B может специфически циклически повторять сигнальные пути p38 и AMPK и связанные с ними метаболические изменения, формируя цикл возбуждающих эффектов, как при имитации физических упражнений.

Пример 47

В эксперименте использовали первичные клетки скелетных мышц человека in vitro, клетки были разделены на шесть групп: контрольной группе 1 вводили такое же количество растворителя ДМСО в течение 7 дней в качестве холостого контроля; контрольной группе 2 вводили такое же количество бычьего сывороточного альбумина (БСА) в течение 7 дней в качестве контрольного растворителя жира; контрольной группе 3 вводили пальмитиновую кислоту (Pal) и ФНОα в течение 7 дней в качестве контроля резистентности к инсулину, вызванной высоким содержанием жиров и воспалением; контрольной группе 4 пальмитиновую кислоту (Pal) и ФНОα вводили в течение 7 дней, а 100 мг/л терапевтического средства А вводили на 4-й день; контрольной группе 5 пальмитиновую кислоту (Pal) и ФНОα вводили в течение 7 дней, а 2 мг/л терапевтического средства B вводили на 4-й день; экспериментальной группе пальмитиновую кислоту (Pal) и ФНОα вводили в течение 7 дней, а 100 мг/л терапевтического средства А и 2 мг/л терапевтического средства В вводили на 4-й день; после этого для каждой группы образцов был проведен вестерн-блот-анализ белка, как показано на Фиг. 47.

На Фиг. 47 показаны результаты вестерн-блоттинга белков первичных клеток скелетных мышц человека с индуцированной резистентностью к инсулину in vitro через 7 дней после введения. После 7-дневного теста в экспериментальной группе, обработанной фармацевтической композицией в соответствии с некоторыми вариантами осуществления данного изобретения, фармацевтические терапевтические средства А+В могут более значительно повышать показатели чувствительности к инсулину: фосфо-Akt, фосфо-S6 и тяжелая цепь миозина (MHC), и подавлять показатель старения клеток H3K9me3 и восстанавливать до уровня контрольных групп 1 и 2. По сравнению с контрольной группой 3, контрольная группа 4 и контрольная группа 5 также могут повышать показатели чувствительности к инсулину фосфо-Akt, фосфо-S6 и тяжелой цепи миозина при лечении только терапевтическим средством А или только терапевтическим средством В, но эффекты сравнительно слабые. По сравнению с контрольной группой 3, только терапевтическое средство А в контрольной группе 4 может подавлять показатель старения клеток H3K9me3 и восстанавливать его до уровня контрольной группы 1, но только терапевтическое средство В в контрольной группе 5 не может оказать такой же эффект. Можно видеть, что фармацевтические терапевтические средства А+В, предусмотренные в данном изобретении, могут более эффективно стимулировать чувствительность к инсулину и вызывать реверсию клеточного старения в условиях резистентности к инсулину, чем только терапевтическое средство А или только терапевтическое средство В.

Пример 48

Аналогично, для каждой группы крыс в примере 20 также выполняли анализ транскриптомного секвенирования RNAseq скелетных мышц и анализ GSEA (анализ обогащения набора генов), и выявляли наиболее значимые генные метки и маркеры, как показано на Фиг. 48.

На Фиг. 48 показаны результаты анализа транскриптомного секвенирования скелетных мышц после индукции рационом с высоким содержанием жиров и сахаров у крыс с синдромом поликистозных яичников СПКЯ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой крыс с СПКЯ (M2), мишени путей инсулиновых рецепторов IRS1 и IRS2 (P<0,0001, FDR=4,9e-5), мишени пути PI3K-Akt-mTOR, чувствительные к рапамицину (P<0,0001, FDR=2,6e-5), и митохондриальные гены митохондрий у крыс в экспериментальной группе А+В (М1) были значительно повышены. Также видно, что по сравнению с контрольной группой (M2) крыс с синдромом поликистозных яичников, мишень интерферона, связанная с воспалением (P<0,0001, FDR<0,0001), мишень пути коллагена, связанная с фиброзом (P<0,0001, FDR =3,5e-5), и мишень деления мезенхимальных клеток (P<0,0001, FDR<0,0001) у крыс в экспериментальной группе A+B (M1) были значительно снижены. Следовательно, можно видеть, что крысы с синдромом поликистозных яичников, получавшие лечение фармацевтической композицией по данному изобретению, могут восстанавливать нормальную чувствительность к инсулину (инсулин/IGF-IRS-PI3K-mTOR) и митохондриальный метаболизм и снижать воспаление и фиброз, тем самым вызывая реверсию резистентности к инсулину, синдрома саркопении и метаболического синдрома.

Пример 49

Аналогично, твердофазный иммуноферментный анализ инсулина натощак (ELISA, Abcam) проводили на образцах сыворотки мышей в каждой группе из Примера 33 и рассчитывали показатель инсулинорезистентности HOMA-IR, как показано на Фиг. 49.

На Фиг. 49 показаны результаты ELISA инсулина и результаты показателя инсулинорезистентности HOMA-IR в образцах сыворотки у мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ фармацевтическая композиция А+В по данному изобретению может эффективно снижать уровень инсулина в сыворотке натощак (Р<0,05) и показатель инсулинорезистентности (Р<0,05). Следовательно, можно считать, что фармацевтические терапевтические средства A+B по данному изобретению могут эффективно повышать чувствительность к инсулину у пациентов с НАСГ и уменьшать резистентность к инсулину и гиперинсулинемию точно так же, как имитация физических упражнений (van der Windt et al. 2018, doi: 10.3727/ 105221617X15124844266408).

Пример 50

Аналогично, твердофазный иммуноферментный анализ адипонектина (ELISA, Abcam) проводили на образцах сыворотки мышей в каждой группе из Примера 33, как показано на Фиг. 50.

На Фиг. 50 показаны результаты ELISA адипонектина в образцах сыворотки мышей с НАСГ. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой с НАСГ фармацевтическая композиция А+В по данному изобретению может эффективно повышать уровень адипонектина в сыворотке (P<0,001). Следовательно, можно считать, что фармацевтическое терапевтическое средство A+B по данному изобретению может эффективно стимулировать метаболизм глюкозы и липидов и ингибировать воспаление посредством адипонектина, точно так же, как имитация физических упражнений (Simpson & Singh 2008, doi: 10.1038/oby.2007.53).

Пример 51

Мышей группировали и подвергали воздействию в соответствии с тем же методом, что и в Примере 8, за исключением того, что образцы сыворотки от каждой группы мышей подвергали анализу жидкофазной масс-спектрометрии (ЖХ-МС, колонка Waters XBridge C18 и Xevo G2-XS) через 1 час., и были выявлены наиболее заметные маркеры малых молекул, как показано на Фиг. 51.

На Фиг. 51 показаны сравнительные результаты жидкостного масс-спектрометрического анализа образцов сыворотки мышей в контрольной группе 1 и контрольной группе 3. Можно видеть, что по сравнению с контрольной группой 3 (холостой контроль), лекарственное средство А (контрольная группа 1) может эффективно образовывать различные производные салицилата в сыворотке, и большая часть времен удерживания составляет от 5 до 5,5 минут, как и у ацетилсалициловой кислоты (https://mona.fiehnlab.ucdavis.edu/spectra/display/EQ357853). Следовательно, можно считать, что любое производное салициловой кислоты может имитировать эффективность лекарственного средства А в организме с ожирением.

В свете вышеприведенных примеров можно легко увидеть, что фармацевтическая композиция по данному изобретению демонстрирует очень хороший синергетический эффект в контроле уровня сахара в крови по сравнению с применением отдельных компонентов в фармацевтической композиции по данному изобретению, особенно с точки зрения снижения уровня глюкозы в плазме натощак и снижения уровня глюкозы в плазме после приема пищи. В то же время данное изобретение может эффективно лечить или предотвращать метаболические синдромы, вызванные ожирением, ожирением печени, сахарным диабетом 2 типа и резистентностью к инсулину.

Предпочтительные варианты осуществления данного изобретения подробно описаны выше. Однако данное изобретение не ограничивается конкретными деталями, упомянутыми в представленных выше вариантах осуществления. В рамках технической концепции данного изобретения в технические решения данного изобретения может быть внесено множество простых модификаций. Эти простые модификации входят в объем охраны данного изобретения.

Кроме того, следует отметить, что каждый конкретный технический признак, описанный в вышеупомянутых конкретных вариантах осуществления, можно комбинировать любым подходящим образом при условии отсутствия противоречия. Для того чтобы избежать ненужного повторения, настоящее изобретение не будет далее описывать различные возможные комбинации.

Кроме того, различные варианты осуществления данного изобретения также можно произвольно комбинировать, если такая комбинация не нарушает сущность данного изобретения, что также следует рассматривать как раскрытие данного изобретения.

Изобретение относится к борьбе с метаболическими заболеваниями. Способ лечения одного или нескольких из избыточной массы тела, ожирения, висцерального ожирения, абдоминального ожирения, неалкогольного стеатогепатита, синдрома поликистозных яичников у субъекта включает введение указанному субъекту терапевтического средства А и терапевтического средства В один или более раз в сутки, при этом терапевтическое средство А представляет собой салицилат или его фармацевтически приемлемую соль, а терапевтическое средство В представляет собой триметазидин или его фармацевтически приемлемую соль. Изобретение обеспечивает повышение эффективности снижения массы тела. 24 з.п. ф-лы, 51 ил., 51 пр.

1. Способ лечения одного или нескольких из избыточной массы тела, ожирения, висцерального ожирения, абдоминального ожирения, неалкогольного стеатогепатита, синдрома поликистозных яичников у субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтического средства А и терапевтического средства В один или более раз в сутки, при этом терапевтическое средство А представляет собой салицилат или его фармацевтически приемлемую соль, а терапевтическое средство В представляет собой триметазидин или его фармацевтически приемлемую соль.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что субъект страдает ожирением, висцеральным ожирением и/или абдоминальным ожирением.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что у субъекта концентрация глюкозы в крови или сыворотке натощак превышает 110 мг/дл.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что у субъекта постпрандиальная концентрация глюкозы в плазме равна или превышает 140 мг/дл.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что субъект имеет значение HbA1c, равное или превышающее 6,5%, необязательно равное или превышающее 8,0%.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где концентрация триглицеридов в крови субъекта равна или превышает 150 мг/дл.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект имеет концентрацию холестерина ЛПВП в крови менее 40 мг/дл у субъекта женского пола или концентрацию холестерина ЛПВП в крови менее 50 мг/дл у субъекта мужского пола.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где систолическое кровяное давление субъекта равно или превышает 130 мм рт. ст., а диастолическое кровяное давление равно или превышает 85 мм рт. ст.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где у субъекта концентрация холестерина ЛПНП в крови равна или превышает 130 мг/дл.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где субъекту противопоказана монотерапия метформином и/или имеется непереносимость терапевтической дозы метформина.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где субъектом является индивидуум с недостаточным контролем гликемии после лечения одним или несколькими противодиабетическими лекарственными средствами.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где субъектом является человек.

13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что терапевтическое средство А представляет собой аспирин или его фармацевтически приемлемую соль.

14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что

i) терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят в массовом соотношении от 1:1 до 10:1 в сутки; и/или

ii) терапевтическое средство A вводят в дозе от 0,3 мг/кг до 120 мг/кг массы тела в сутки, а терапевтический агент B вводят в дозе от 0,05 мг/кг до 500 мг/кг массы тела в сутки.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят в массовом соотношении 6:1 в сутки.

16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят одновременно.

17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В содержатся в одной лекарственной форме.

18. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят последовательно.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что терапевтическое средство А вводят до терапевтического средства В.

20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что терапевтическое средство А вводят после терапевтического средства В.

21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят перорально или инъекционно.

22. Способ по любому из пп. 1-21, отличающийся тем, что способ предназначен для лечения ожирения.

23. Способ по любому из пп. 1-21, где способ предназначен для лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ).

24. Способ по любому из пп. 1-21, где способ предназначен для лечения неалкогольного стеатогепатита.

25. Способ по любому из пп. 1-24, где терапевтическое средство А и терапевтическое средство В вводят один раз в сутки.