2-(4-Метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлорид, обладающий гемостатической активностью Российский патент 2019 года по МПК C07D295/18 A61P7/04 

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса 4-арил-2-гидрокси-4-оксобут-2-еновых кислот, а именно к 2-(4-метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлориду (1) формулы:

обладающему гемостатической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве гемостатического средства.

Ближайшим аналогом по структуре заявляемому соединению является 4-(4-этилкарбоксифенил)амид 2-(4-метоксифенил)амино-4-оксо-4-фенилбут-2-еновой кислоты (2) [Синтез и противомикробная активность 2-(2,4-динитрофенилгидразоно)-4-оксобутановых кислот и их 3-бромпроизводных / В.О. Козьминых, А.О. Беляев, Е.Н. Козьминых [и др.] // Хим.-фарм. журн. - 2004. - Т. 38, №7. - С. 22-26] формулы:

Данные по гемостатической активности структурного аналога 2 в литературе отсутствуют.

Эталоном сравнения выбран этамзилат [диэтиламмония 2,5-диоксибензолсульфонат] (3), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2010. - С. 453-454].

Задачей изобретения является поиск в ряду производных 4-арил-2-гидрокси-4-оксобут-2-еновых кислот веществ с выраженной гемостатической активностью и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 2-(4-метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлорида (1), обладающего гемостатической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием 3-(4-метоксифенил)имино-5-(2,4-диметилфенил)-3Н-фуран-2-она (4) с пиперазином при эквимолекулярном соотношении реагентов в среде безводного толуола при кипячении реакционной смеси с выделением первоначально 2-(4-метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона (5). Далее соединение 5 растворяют при нагревании в безводном толуоле и пропускают через полученный раствор сухой хлороводород с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме:

Пример получения соединения 1. К суспензии 3,39 г (0,01 моль) 3-(4-метоксифенил)имино-5-(2,4-диметилфенил)-3Н-фуран-2-она (4) в 50 мл безводного толуола прибавляли суспензию 0,86 г (0,01 моль) пиперазина в 35 мл безводного толуола и кипятили раствор 0,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры 20-25°С, выпавший осадок соединения 5 отфильтровывали, перекристаллизовывали из ацетонитрила и высушивали. Далее 4,09 г (0,01 моль) соединения 5 растворяли в 50 мл толуола безводного, пропускали сухой хлороводород, выпавший осадок соединения 1 отфильтровывали и перекристаллизовывали из изопропилового спирта. Выход 3,30 г (74%). Т. пл. 238-239°С. Вычислено, %: С 64.93; Н 6.81; N 9.46. C₂₄H₃₂N₃O₃Cl. Найдено, %: С 64.97; Н 6.79; N 9.42. ИК-спектр (ФСМ-1201, вазелиновое масло, ν, см^-1): 3549, 3472 (NH_пипер., NH), 1709 (C¹=О), 1620, 1590 (C=С, С⁴=O). Спектр ЯМР ¹Н (Bruker 400 МГц, ДМСО-d₆, ГМДС, δ, м.д.): 1.14-3.32 м (14Н, C₄H₈N₂, 2СН₃), 3.74 с (3Н, ОСН₃), 6.79 с (1Н, С³Н), 7.29-7.68 м (7Н, С₆Н₃, C₆H₄), 8.42 с (1Н, NH), 12.81 с (1H, NH).

Заявляемое соединение 1 представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, легко растворимое в воде, растворимое в хлороформе, этиловом спирте, трудно растворимое в бензоле, толуоле.

Острую токсичность (ЛД₅₀) заявляемого соединения 1 определяли на белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-20 г при однократном введении внутрижелудочно через зонд на физиологическом растворе из расчета 0,1 мл/10 г. [Прозоровский, В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В.Б. Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко // Фармакология и токсикология. - 1978. - Т. 41. - №4. - С. 497-502]. За животными вели наблюдение в течение 14 дней, регулярно фиксируя общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координации движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние шерстного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи, потребление корма и воды, изменение массы тела. Эксперименты проводились в соответствии с международными этическими и научными стандартами проведения исследований на животных [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 13-50].

Гемостатическая активность соединения 1 изучалась in vitro путем определения времени свертывания крови с помощью коагулометра «АПГ4-02-П». Использовали цитратную (3,8%) кровь беспородных кроликов в соотношении 9:1 [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 453-477]. Для определения активности в кювету помещали 50 мкл цитратной крови и 50 мкл 0,2% водного раствора соединения 1, для контроля использовали 50 мкл изотонического раствора хлорида натрия. В качестве препарата сравнения служил этамзилат, 50 мкл которого добавляли в виде 0,2% водного раствора. Затем пробы инкубировали в течение 60 сек. Вносили 50 мкл 1% раствора хлорида кальция и приступали к измерению. Результаты исследования обработаны статистически с помощью программы MS Excel, 2003 и приведены в табл. 1.

Установлено, что ЛД₅₀ соединения 1 составляет 4930 мг/кг [4100-5900 мг/кг]. Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к классу практически нетоксичных веществ [Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977. - С. 196-197].

В ходе проведенных исследований (см. табл. 1) установлено, что соединение 1 проявляет выраженное гемостатическое действие. В процессе эксперимента оно достоверно уменьшает время свертываемости цитратной крови и превышает по активности этамзилат более чем в 2 раза. С учетом значений острой токсичности, соединение 1 имеет определенные преимущества перед препаратом сравнения в плане его безопасности и эффективности.

Таким образом, 2-(4-метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлорид проявляет более высокую гемостатическую активность по сравнению с эталонным препаратом, а также является практически нетоксичным, что делает возможным его использование в медицине для создания новых гемостатических препаратов.

Литература

1. Синтез и противомикробная активность 2-(2,4-динитрофе-нилгидразоно)-4-оксобутановых кислот и их 3-бромпроизводных / В.О. Козьминых, А.О. Беляев, Е.Н. Козьминых [и др.] // Хим.-фарм. журн. - 2004. - Т. 38, №7. - С. 22-26.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2010. - С. 453-454.

3. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - С. 13-50, 453-477.

4. Прозоровский, В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В.Б. Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко // Фармакология и токсикология. - 1978. - Т. 41. - №4. - С. 497-502.

5. Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977. - С. 196-197.

Изобретение относится к новому соединению - 2-(4-метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлориду формулы

.

Технический результат: получено новое соединение 1, обладающее высокой гемостатической активностью, а также низкой токсичностью. 1 табл., 1 пр.

2-(4-Метоксифениламино)-4-(2,4-диметилфенил)-1-(пиперазин-1-ил)бут-2-ен-1,4-диона гидрохлорид формулы:

,

обладающий гемостатической активностью.