2-{ [2-(Адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио} этаноат натрия, обладающий ранозаживляющей и противовоспалительной активностью Российский патент 2023 года по МПК C07C323/48 C07C319/12 A61K31/15 A61P17/02 

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса 2-гидразинилпроизводных 4-арил-4-оксобутановых кислот, а именно к 2-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этаноат натрия (1) формулы:

обладающему противовоспалительной и ранозаживляющей активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного ранозаживляющего средства.

Ближайшим аналогом по структуре заявляемому соединению является 2-{2-[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразинил}-4-оксо-4-фенилбут-2-еновая кислота (2) [Химия иминофуранов IX. Синтез и циклизация (2Z)-2-{(2Z)-2-[2-(3-R-адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразинил}-4-(гет)-арил-4-оксобут-2-еновых кислот / Н.А. Пулина, А.С. Кузнецов, А.Е. Рубцов // Журн. орган. химии. - 2015. - Т. 51, вып. 7. - С. 986-990] формулы:

Данные по ранозаживляющей и противовоспалительной активности структурного аналога 2 в литературе отсутствуют.

Эталоном сравнения выбраны:

1) Противовоспалительный препарат диклофенак (натриевая соль 2-[(2,6-дихлорфенил)амино]-фенилуксусной кислоты) (3), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [https://grls.rosminzdrav.ru/].

2) Препарат для наружного применения с антибактериальным и стимулирующим регенерацию тканей действием мазь «Левомеколь» (диоксометилтетрагидропиримидин + хлорамфеникол) (4), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [https://grls.rosminzdrav.ru/].

Задачей изобретения является поиск в ряду 2-гидразинилпроизводных 4-арил-4-оксобутановых кислот веществ с выраженной ранозаживляющей и противовоспалительной активностью с низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 2-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этаноата натрия (1), обладающего ранозаживляющей и противовоспалительной активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют первоначальным взаимодействием 3-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразоно}-5-(β-нафталил)фуран-2(3H)-она (5) с меркаптоуксусной кислотой при эквимолекулярном соотношении реагентов в среде безводного толуола при 20-25°С с выделением 2-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этановой кислоты (6). Далее кислоту 6 растворяют в 95% этаноле и прибавляют насыщенный раствор гидрокарбоната натрия в 95% этаноле, при перемешивании, выделяют целевой продукт известными методами по схеме:

Пример 1 получения соединения 1.

К раствору 4,12 г (0,01 моль) 3-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразоно}-5-(β-нафталил)фуран-2(3H)-она (5) в 40 мл абсолютного толуола прибавляли 0,71 мл (0,01 моль) меркаптоуксусной кислоты и кипятили 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры 20-25°C, выпавший осадок соединения 6 отфильтровывали, перекристаллизовывали из ацетонитрила и высушивали. Далее 5,05 г (0,01 моль) соединения 6 растворяли в 40 мл 95% этанола, прикапывали насыщенный раствор гидрокарбоната натрия в 95% этаноле при перемешивании до выпадения осадка в течение 1 ч, далее охлаждали до температуры 5-0°С. Выпавший осадок соединения 1 отфильтровывали и перекристаллизовывали из изопропилового спирта. Выход 5,93 г (88%). Т.пл. 238-240°С. Найдено, %: С 63.71; Н 5.28; N 5.26; S 6.01 С₂₈Н₂₇N₂NaO₅S. Вычислено, %: С 63.87; Н 5.17; N 5.32; S 6.09.

ИК-спектр (ФСМ-1201, вазелиновое масло, ν, см^-1): 3293 уш (NH, COO^-), 1665 (AdCO), 1625, 1583 уш. (С=О, С=С, С=N). ЯМР ¹Н спектр (Varian Mercury Plus (300 МГц), ГМДС, ДМСО-d6, δ, м.д.)): 1.44-2.21 м (15 H, адамантил), 2.39 c (2H, CH₂), 6.24 с (1Н, С³Н), 6.51-7.92 м (7Н, С₁₀Н₇), 7.98 с (1Н, N=CH), 13.06 с (1Н, NH).

Заявляемое соединение 1 представляет собой оранжевое кристаллическое вещество, легко растворимое в воде, растворимое в хлороформе, труднорастворимое в этаноле, нерастворимое в бензоле, толуоле.

Острую токсичность (ЛД₅₀) заявляемого соединения 1 определяли на белых беспородных мышах обоего пола массой 18-22 г при пероральном пути введения в виде взвеси в 2% крахмальном растворе. Для расчетов использован метод Прозоровского В.Б. [Прозоровский, В. Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований / В. Б. Прозоровский // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - № 7. - C. 2090-2120]. Наблюдение за животными проводили в течение 14 суток после введения каждой дозы. Регистрировались летальность, время гибели животных, симптоматика отравления, осуществлялись ежедневное наблюдение общего состояния и поведения, взвешивание, оценка потребления корма и воды.

Изучение ранозаживляющей активности проводилось на крысах массой 170,0 - 190,0 г., обоего пола (контрольная и опытные группы включали по 6 животных). Влияние на заживление линейных асептических ран кожи изучали ранотензиометрическим методом. В асептических условиях под кратковременным эфирным наркозом фиксировали животное, выстригали шерсть на спине, производили 2 параллельных разреза кожи до подкожной клетчатки. Раны зашивали рядом узловых швов с расстоянием между стежками в 5 мм. Раны животных подопытных групп ежедневно в течение 7 суток обрабатывали мазевыми композициями (исследуемое вещество в мазевой композиции, чистая мазевая основа и мазь «Левомеколь»). В одной из контрольных групп обработку не производили, в другой контрольной группе раны обрабатывали мазевой альгинатной основой. На 7-е сутки после операции определяли силу разрыва рубца в опытных и контрольных группах [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / ред. кол.: А.Н. Миронов, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильев [и др.]. - Москва: Гриф и К, 2012. - C. 472-477]. Силу разрыва рубца устанавливали на устройстве для определения прочности на разрыв заживающих ран [Горбунов, С.М. Устройство для определения прочности на разрыв заживающих ран / С.М. Горбунов, И.В. Заиконникова, Н.Г. Абдрахманова // Фармакологическая регуляция регенераторных процессов в эксперименте и клинике. Йошкар-Ола. - 1979. - С. 100-104]. Ранозаживляющее действие оценивали по увеличению прочности послеоперационного рубца на разрыв по сравнению с контролем. Модельный образец мази изготавливали на 5%-ной гидрофильной основе, состоящей из порошка альгината натрия и воды очищенной. Альгинатную основу получали путём растворения 2,0 г альгината натрия в 38 мл воды очищенной, нагретой до 60°С, при постоянном перемешивании. Соединение 1 вводили в мазевую основу в концентрации 5 %.

Противовоспалительную активность изучали в опытах на белых беспородных крысах обоего пола массой 220-260 г. Соединение 1 вводили перорально в дозе 50 мг/кг в виде взвеси в 2% крахмальном растворе за час до моделирования острого каррагенинового воспаления. Каррагениновый отек вызывали субплантарной инъекцией 0.1 мл 1% раствора флогогена в заднюю лапу крысы. Объем стопы регистрировали онкометрически через 1, 3 и 5 часов после моделирования воспаления. Увеличение объема стопы, свидетельствующее о развитии отека, рассчитывали в процентах к исходной величине. О противовоспалительной активности судили по показателю торможения отека, который определяли в процентах по отношению к показателям контрольной группы [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / ред. кол.: А.Н. Миронов, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильев [и др.]. - Москва: Гриф и К, 2012. - C. 746-758]. Контрольным животным вводили эквиобъемное количество 2% крахмального раствора. Препаратом сравнения служил диклофенак в дозе 10 мг/кг, вводимый аналогично. Результаты обработаны статистически с определением t-критерия Стьюдента с помощью программы MS Excel, 2003 и представлены в таблице.

Установлено, что ЛД₅₀ соединения 1 при пероральном введении составляет 3710 мг/кг. Согласно классификации токсичности препаратов соединение 1 относится к 5 классу веществ [Юрасова А.А. Внедрение в Российской Федерации современной модели классификации опасности химической продукции / А.А. Юрасова, А.С. Макарова, Д.О. Скобелев // Токсикологический вестник. - 2011. - № 1. - С. 2-10] и ГОСТ 32419-2013 соединение относится к 5 классу токсичных веществ.

Таблица 1
Ранозаживляющая, противовоспалительная активность и острая токсичность соединения 1 и препаратов сравнения Соединение ЛД₅₀,
мг/кг % торможения каррагенинового отека Сила разрыва рубца, г 1 час 3 часа 5 часов 1 3710 45,7±6,8 ^***1 35,6±7,4^***1**2 59,1±3,8^**1 632,0±58,7^**1**2 Контроль (без обработки) - - - - 374,8±40,0 Мазевая основа - - - - 456,4±40,5 ^**1**2 «Левомеколь» - - - - 548,3±24,2 ^**1 Диклофенак натрия 750 40,2±4,8 65,6±4,3^***1 60,1±4,7^***1 - ^*=р < 0,05, ^**= р < 0,01, ^***= р < 0,001

1-по сравнению с контролем; 2-по сравнению с препаратом сравнения

Как видно из таблицы, соединение 1 проявило выраженную ранозаживляющую активность, превышающую действие препарата сравнения. Обнаружено, что на 7 сутки после нанесения линейной раны применение мази «Левомеколь» повышает силу разрыва рубца на 46% относительно контроля без обработки и по сравнению с чистой мазевой основой - на 20 %. Обработка линейной раны композицией, содержащей 5% соединения 1, вызывает повышение прочности рубца на 69 % по сравнению с контролем без обработки и на 38,6 % по сравнению с чистой мазевой основой, что свидетельствует о более высокой эффективности изучаемого соединения 1.

Установлено, что соединение 1 обладает выраженным противовоспалительным действием, поскольку изучаемый эффект через 1 и 5 часов после индукции воспаления сравним с активностью диклофенака. При этом, соединение 1 менее токсично препарата сравнения в 5 раз. Следовательно, по терапевтической эффективности соединение 1 не уступает препарату сравнения, однако с учетом показателей острой токсичности превосходит его по безопасности.

Таким образом, 2-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этаноат натрия (1) проявляет более высокую ранозаживляющую и противовоспалительную активность по сравнению с соответствующими эталонными препаратами, а также является нетоксичным соединением, что делает возможным его использование в медицине для создания новых ранозаживляющих и противовоспалительных лекарственных средств.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Химия иминофуранов IX. Синтез и циклизация (2Z)-2-{(2Z)-2-[2-(3-R-адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиден]гидразинил}-4-(гет)-арил-4-оксобут-2-еновых кислот / Н.А. Пулина, А.С. Кузнецов, А.Е. Рубцов // Журн. орган. химии. - 2015. - Т. 51, вып. 7. - С. 986-990.

2. https://grls.rosminzdrav.ru.

3. Прозоровский, В.Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований / В. Б. Прозоровский // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - № 7. - C. 2090-2120.

4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / ред. кол.: А.Н. Миронов, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильев [и др.]. - Москва: Гриф и К, 2012. - C. 472-477, 746-758.

5. Горбунов, С.М. Устройство для определения прочности на разрыв заживающих ран / С.М. Горбунов, И.В. Заиконникова, Н.Г. Абдрахманова // Фармакологическая регуляция регенераторных процессов в эксперименте и клинике. Йошкар-Ола. - 1979. - С. 100-104.

6. Юрасова А.А. Внедрение в Российской Федерации современной модели классификации опасности химической продукции / А.А. Юрасова, А.С. Макарова, Д.О. Скобелев // Токсикологический вестник. - 2011. - №1. - С. 2-10.

Изобретение относится к области органической химии и фармацевтики, а именно к биологически активному веществу класса 2-гидразинилпроизводных 4-арил-4-оксобутановых кислот. Раскрывается 2-{[2-(адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этаноат натрия формулы 1, обладающий ранозаживляющей и противовоспалительной активностью. Изобретение обеспечивает эффективное противовоспалительное и ранозаживляющее действие при низкой токсичности. 1 табл., 1 пр.

2-{[2-(Адамантан-1-ил)-2-оксоэтилиденгидразинил-4-(β-нафталил)-4-оксобут-2-еноил]тио}этаноат натрия, обладающий ранозаживляющей и противовоспалительной активностью.