Способ моделирования нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц Российский патент 2019 года по МПК A61K33/42 G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для создания модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти при испытании различных способов лечения и профилактики остеонекрозов челюстей, вызываемых кустарно изготовленным метамфетамином.

Известен способ создания модели остеонекроза нижней челюсти у экспериментальных мышей, построенный на предварительном 12-недельном введении золедроновой кислоты (0,2 мг/кг) и дексаметазона (5 мг/кг, внутрибрюшинно, еженедельно) с последующей экстракцией первого нижнего моляра. [Hyo-Won Jang, Jin-Woo Kim, and In-Ho Cha. Development of animal model for Bisphosphonates-related osteonecrosis of the jaw (BRONJ) Maxillofac Plast Reconstr Surg. 2015 Dec; 37(1): 18.]. Недостатком аналога является то, что при моделировании остеонекроза используется препарат аминобисфосфонатной группы, в то время, как остеонекрозы, моделируемые при его использовании, по этиологическому фактору не полностью соответствуют остеонекрозам, возникающим у наркозависимых пациентов. Следует так же отметить, что исследуемый орган подвергается оперативному вмешательству исходом, которого является открытая рана в полости рта, создающая условия для течения остеонекротических процессов в септических условиях. Кроме этого, низкая частота введения аминобисфосфонатного препарата и имуносупресора (дексаметазона) в предварительном лекарственном воздействии затрудняет трактовку изменений, вызываемых золендроновой кислотой.

Наиболее близким к заявленному способу является способ создания модели остеонекроза нижней челюсти [ Curra, Camila Lopes CardosoII, Osny Ferreira , Marcos Martins CuriIV, Mariza Akemi MatsumotoV, Bruno Cavalini Cavenago, dos Santos, Joel Ferreira Santiago Junior Medication-related osteonecrosis of the jaw. Introduction of a new modified experimental model Acta Cirurgica Brasileira - Vol. 31 (5) 2016-309]. Остеонекротическую модель создают путем введения в хвостовую вену крысы золедроновой кислоты (35 мкг/кг каждые две недели в течение 8 недель) с последующей экстракцией верхнечелюстного резца. Недостатком ближайшего аналога является оперативное вмешательство, исходом которого является открытая послеоперационная рана, заживающая в септических условиях, а также введение золендроновой кислоты, которая относится к соединениям аминобисфосфонатной группы, образование которых маловероятно при изготовлении метамфетамина в кустарных условиях.

В основу предлагаемого способа поставлена задача создания модели остеонекроза нижней челюсти с использованием молекулярных аналогов примесей, образование которых возможно при синтезе метамфетамина в кустарных условиях.

Для решения поставленной задачи модель экспериментального остеонекроза создают путем ежедневного внутрижелудочного введения 3-х месячным крысам весом 100-120 г модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель

Способ моделирования нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц осуществляют следующим образом.

3-х месячным крысам осуществляют ежедневные внутрижелудочные введения модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель, что определяется минимальным сроком, при котором возникают морфологические изменения в костной ткани при воздействии остеотропных препаратов. По истечении указанного срока животных выводили из эксперимента под кетаминовым наркозом в дозе 44 мг/кг. Контрольная группа состояла из животных, которым производили внутрибрюшинное введение 1,0 мл физиологического раствора 1 раз в сутки в течение 3-х месяцев.

На фиг. представлено: А - Гиперостоз нижней челюсти, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×100. В - Зоны остеоцитарного остеолиза (1), сочетающиеся с участками интенсивной базофилии костного матрикса (2), окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400. С - зоны остеосклероза, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400. D - остеоидные массы в участках рарефикации кости, окраска по Массону-Голднеру, увеличение ×100. Е - Процессы метапластического остеогенеза (I) и миелофиброза (2) в костномозговой полости, окраска по Массону-Голднеру, увеличение ×400. F - Начало процесса облитерации гаверсова канала, в центре которого разрушенный сосуд с фибриноилным некрозом стенки, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×100.

Материалом для исследования служили скелетированные нижние челюсти крыс, фиксированные в 10% нейтральном забуференном формалине более 72 часов, декальцинированные в 14% растворе трилона Б, забуференном при рН 7,0. Далее осуществляли проводку с использованием изопропанола и минерального масла и заливали ткани парафином. Парафиновые срезы толщиной 3 мкм резали на ротационном микротоме Leica RM2245 лезвиями Surgipath DB80LX. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином по Массону-Голднеру. Гистологические препараты исследовались методом световой микроскопии с помощью микроскопа Olympus СХ-31, снабженном цифровой камерой Olympus C5050Z при увеличениях 100, 400, 1000.

При исследовании гистологических препаратов отмечено, что воздействие модельной смеси приводит к блокированию активности остеокластического компонента и смещению процессов перестройки кости в сторону остеоцитарного ремоделирования как компенсаторного процесса. Явления токсической васкулопатии, осложненной фибриноидным некрозом, а также высокие минерализирующие свойства модельной смеси привели к возникновению остеометапластических процессов, которые дополняют остеопролиферативный аппозиционный рост кости и приводят к гиперостозу с формированием афункциональных хрупких костных остеосклеротических масс. Динамика данной патологии сходна с процессами, развивающимися при оссифицирующем остите, который является одной из форм асептических остеонекротических поражений, и может быть расценена как нулевая стадия остеонекроза нижней челюсти (фиг. 1).

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для создания модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц при испытании различных способов лечения и профилактики остеонекрозов челюстей, вызываемых кустарно изготовленным метамфетамином. Способ включает ежедневные внутрижелудочные введения 3-месячным крысам модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием йода и красного фосфора, в дозе 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель. Изобретение позволяет создать модель остеонекроза нижней челюсти с использованием молекулярных аналогов примесей, образование которых возможно при синтезе метамфетамина в кустарных условиях. 1 ил.

Способ создания экспериментальной модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц, включающей воздействие остеотропным соединением фосфора, отличающийся тем, что осуществляют ежедневные внутрижелудочные введения 3-месячным крысам модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель.