СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ СОЛИ 2-ЭТИЛ-6-МЕТИЛ-3-ГИДРОКСИПИРИДИНА С НИКОТИНОВОЙ КИСЛОТОЙ, ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В КОЖЕ Российский патент 2019 года по МПК A61K31/44 A61P17/00 A61K9/127 

Изобретение относится к области медицины, а именно к липосомальной форме соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой, к способу ее получения, а также к способу улучшения микроциркуляции в коже с целью улучшения ее трофики и коррекции возрастных изменений в коже, и может быть использовано в косметологии и дерматологии.

Известен способ улучшения микроциркуляции периферических сосудов у здоровых животных в эксперименте, включающий прием препарата растительного происхождения, в качестве которого используют фитококтейль, содержащий родиолу розовую, элеутерококк, солодку голую и девясил высокий в виде смеси 70 % спиртовых настоек, взятых в соотношении 2:2:1:1 соответственно, и разведенной дистиллированной водой в соотношении 1:50. Прием фитококтейля осуществляют через зонд по 1 мл в соответствии с хронотипом животных с 16.00 до 18.00 час в течение 15 дней (RU 2440124, МПК А61К 36/00, опубл. 20.01.2012).

Известный способ позволяет повысить качество микроциркуляции периферических сосудов у здоровых животных в эксперименте, а также снизить риск развития осложнений при сердечно-сосудистой патологии в клинике и эксперименте. Недостатком способа является необходимость перорального применения препарата, что сопряжено с высоким риском развития нежелательных системных побочных эффектов.

Известен способ омоложения кожи лица и шеи, по которому предварительно обрабатывают кожу очищающими и увлажняющими средствами. Кожу распаривают. Проводят криовоздействие на кожу тампоном, смоченным жидким азотом. После этого в течение 10 мин воздействуют на кожу импульсным лазерным излучением с частотой следования импульсов 1000 Гц и мощностью излучения 4-8 Вт (RU 2308995, МПК А61N 5/067, А61В 18/02, опубл. 27.10.2007).

Известен способ косметической физиопрофилактики лица и шеи, включающий электростимуляцию мимических мышц лица и шеи низкочастотным током, биомеханическую стимуляцию в непрерывной последовательности в течение одного косметического сеанса. Предварительно перед стимуляцией проводят гальванизацию области печени и лазеромагнитную или высокочастотную электрическую обработку лица и шеи. При электростимуляции используют мягкие индивидуальные одноразовые процедурные электроды. Электроды выполнены из войлокоподобного углеродистого электропроводящего материала (RU 2117498, МПК А61N 1/18, А61N 5/06, А61N 1/36, опубл. 20.08.1998).

Известные аппаратные методики (а также иные аппаратные методики), нацеленные на местное воздействие лишены прямых системных побочных эффектов, однако их недостатками являются сложность, необходимость специального дорогостоящего обородувания и специально обученного персонала, что существенно ограничивает возможность широкого применения в домашних условиях.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому техническому решению является средство для ухода за ногами при хронической венозной недостаточности нижних конечностей, представляющее собой гель и содержит комплексный парфюмированный загуститель, мицеллярный раствор дигидрокверцетина, липосомальный концентрат «Флaвocoмы», микроэмульсионный концентрат, включающий в себя кремнийфторорганические жидкости, раствор желчи. В описании состава по тексту патента в качестве вспомогательных веществ также указывается токоферол никотиамид (RU 2359690, МПК A61K 36/48, A61K 31/715, A61K 31/355 и др., опубл. 27.06.2009).

Местное нанесение известной композиции приводит к улучшению микроциркуляции в коже в области нанесения. Недостатком способа является его многокомпонентность, что повышает риск развития побочных эффектов, в том числе аллергических реакций.

Известны кислые и буферные композиции для ухода за кожей, содержащие никотинамид, абсорбирующий агент и буферные агенты. Абсорбирующий агент является выбранным из группы, состоящей из крахмала, талька, каолина, стеарата алюминия, карбоната магния, диоксида титана, диоксида титана или оксида цинка, обработанного метиконом, диметиконом, циклопентасилоксаном, стеариновой или миристиновой кислотой, или их смесью. Буферные агенты состоят из цитратов, фосфатов или их смеси. Изобретение также относится к лекарственным средствам, содержащим упомянутые композиции, используемым для лечения и/или предотвращения слабых кожных раздражений, особенно пеленочного дерматита. Также, изобретение относится к применению упомянутых композиций в качестве антиуреазных средств (RU 2401100, МПК А61К 8/67, А61К 8/49, А 61Л 8/06 и др., опубл. 10.10.2010)

Известное решение относится к лекарственным средствам, содержащим упомянутые композиции, используемым для лечения и/или предотвращения слабых кожных раздражений, особенно пеленочного дерматита. Однако в известном решении не описано влияние препарата на микроциркуляцию.

Известна соль 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой, обладающая метаболической и кардиопротекторной активностью, и способ ее получения, а также способ коррекции метаболических нарушений при сахарном диабете и функциональных нарушений в миокарде (RU 2365582, МПК С07D 213/65, A61K 31/44, F 61P 3/10 и др., опубл. 27.08.2009).

В известном решении описана соль 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой, которая обладает метаболической и кардиопротекторной активностью и может быть использована в эндокринологии, кардиологии, неотложной терапии и реанимации. Не изучено влияние соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой на микроциркуляцию в коже. Активный ингредиент – производное никотиновой кислоты, представляющее собой соль 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и никотиновой кислоты, отличается от применяющихся производных никотиновой кислоты по химической структуре. Наличие 3-гидроксипиридинового компонента обеспечивает активному ингредиенту более мощный антиоксидантный потенциал, а значит более выраженный УФ-протекторный эффект, что является особо ценным для профилактики возрастных изменений в коже, обусловленных фотостарением.

Технический результат заключается в увеличении биодоступности при трансдермальном пути применения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой, и соответственно увеличении выраженности фармакологического эффекта активного вещества, выполнении функции депо, пролонгируя фармакологический эффект и позволяя оптимизировать режим применения за счет применения указанной липосомальной формы для улучшения микроциркуляции в коже при местном применении, кроме того наличие одного активного ингредиента и минимального количества вспомогательных веществ снижает вероятность развития аллергических и иных побочных реакций.

Сущность изобретения заключается в том, что способ получения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой включает растворение смеси лецитина и холестерина в соотношении 9:1 в хлороформе с последующим упариванием полученного раствора при температуре 37-40 °С и получением фосфолипидной пленки, которую в дальнейшем гидратируют в фосфатном буфере, содержащем никотинат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, при перемешивании при температуре 37-40 °С до полного эмульгирования. Полученную эмульсию обрабатывают на ультразвуковой установке. Способ применения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой заключается в нанесении местно в норме или при иммобилизационном стрессе липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой на предварительно депилированную кожу и оценке микроциркуляции в объеме 50 мкл однократно. Применение липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой для улучшения микроциркуляции в коже.

Исследования представлены в нижеследующих примерах.

Пример 1. Получение липосомальной формы никотината 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина

Смесь 0,9 г лецитина и 0,1 г холестерина растворяли в 9 мл хлороформа. Полученный раствор упаривали на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса при температуре 37 °С. Полученную фосфолипидную пленку гидратировали 34 мл фосфатного буфера (рН 7,4), содержащего 0,6 г никотината 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина при перемешивании магнитной мешалкой в течение 2 час при температуре 40 °С. Полученную эмульсию обрабатывали на ультразвуковой установке ИЛ100-6/1 с рабочей частотой 22 кГц 2 раза по 2 мин.

Пример 2. Проведение серии опытов по оценке влияния липосомальной формы препарата никотината 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина на микроциркуляцию в коже белых крыс

Опыты проводили на 16 здоровых белых лабораторных беспородных крысах обоего пола (8 самок и 8 самцов) массой 200-250 г., достигших половозрелости, полученных из питомника филиала «Столбовая» ФГБНУ НЦБМТ ФМБА. За день до проведения исследования осуществляли предварительную подготовку, выбривали участок кожи на дорсальной поверхности тела подопытной крысы размером приблизительно 2×2 см. На следующий день осуществляли исследование микроциркуляции в коже с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDf 100C и поверхностным датчиком TSD140. В течение всего времени исследования микроциркуляции животные находились под эфирно-уретановым наркозом.

Поверхностный датчик TSD140 фиксировали на определенном участке кожи с помощью лейкопластыря, во избежание смещения в течение эксперимента. Исследования производили при температуре окружающей среды 20-24 °С. Запись результатов лазерной допплеровской флоуметрии производилась программой AcqKnowledge, версия 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ).

Было проведено две серии экспериментов с белыми крысами. Животные 1-й группы составили контрольную группу. Непосредственно перед измерением микроциркуляции на депилированную кожу животных данной группы наносили «пустые» липосомы (липосомы с физиологическим раствором натрия хлорида). Животные 2-й группы (основной) получали липосомы с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина в том же режиме. Сразу после нанесения начинали запись показателей микроциркуляции, продолжительность регистрации в каждый момент времени составляла 5-7 сек, интервал между регистрациями – 10 мин, общее время исследования микроциркуляции у одного животного – 1 час.

При исследовании микроциркуляции у подопытных животных контрольной группы были получены результаты, представленные в табл. 1. Было выявлено, что после нанесения на кожу «пустых» липосом (с физиологическим раствором натрия хлорида) не отмечается какой-либо заметной тенденции к последовательному изменению (росту или уменьшению) перфузии в участке кожи, с которого производилась регистрация показателей.

При исследовании микроциркуляции у подопытных животных основной группы были получены результаты, представленные в табл. 2. Было выявлено, что нанесение на кожу липосом с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридином приводило к четко выраженной тенденции увеличения перфузии в участке кожи, с которого производилась регистрация показателей. Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с помощью пакета программ «Excel» с определением t-критерия Стьюдента, значимыми считали различия при р<0,05.

При статистическом анализе результатов исследования, представленных в примере 2, было обнаружено, что при применении липосом с физиологическим раствором животным контрольной группы не отмечалось достоверного изменения микроциркуляции в какой-либо момент времени исследования. В то же время использование липосом с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина приводило к постепенному увеличению перфузии в исследуемом участке кожи, на 20-й мин исследования – на 16 %, на 30-й мин – на 30 %, на 40-й мин – на 42 %, на 50-й мин – на 51 % и на 60-й мин – на 64 %, причем на 60-й мину различия по сравнению с исходными значениями перфузии стали достоверными (р<0,05). Результаты статистического анализа исследования (динамика изменения микроциркуляции в участке коже на дорсальной поверхности у интактных белых крыс) представлены в табл. 3.

Пример 3. Проведение серии опытов по оценке влияния липосомальной формы препарата никотината 2-этил,6-метил,3-гидроксипиридина на микроциркуляцию в коже белых крыс при иммобилизационном стрессе

В ряде исследований было установлено, что стресс, особенно хронический, вызывает нарушение микроциркуляции в коже, что оказывает выраженное влияние на трофику кожи, ее внешний вид, ускоряя процесс старения кожи. Разработка активных ингредиентов, способных устранять нарушения микроциркуляции, вызванные хроническим стрессом, является одной из важных задач косметологии. В рамках данной серии опытов было изучено влияние липосомальной формы никотината 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина на состояние микроциркуляции в коже крыс, подвергнутых хроническому стрессу. В качестве модели хронического стресса использовалась одна из общепринятых и хорошо воспроизводимых моделей стресса у лабораторных животных – модель иммобилизационного стресса.

В течение 5-ти дней до исследования микроциркуляции моделировали хронический иммобилизационный стресс путем ежедневного помещения крыс в держатель, продолжительность иммобилизации составляла 2 час, причем последний сеанс иммобилизации непосредственно предшествовал исследованию микроциркуляции. В течение всего периода моделирования иммобилизационного стресса животные содержались в одинаковых условиях на общем рационе питания.

Опыты проводили на 16 здоровых белых беспородных крысах обоего пола (8 самок и 8 самцов) массой 200-250 г, достигших половозрелости. За день до изучения микроциркуляции, также как и в предыдущем исследовании, производилась подготовка участка кожи – депиляция участка кожи на дорсальной поверхности тела крысы размером примерно 2×2 см. Подопытные животные, подвергнутые иммобилизационному стрессу, составили 2 группы, аналогично предыдущему эксперименту: 1-я группа – контрольная, 2-я группа – основная. Животных сразу после окончания последнего сеанса иммобилизации в держателе наркотизировали, после чего сразу производилось накожное нанесение тестируемого препарата (липосомы с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина) или плацебо (липосомы с физиологическим раствором натрия хлорида), и производили исследование микроциркуляции по отработанной ранее схеме (см. пример 2).

Результаты исследования микроциркуляции в участке коже на дорсальной поверхности белых крыс контрольной группы при иммобилизационном стрессе, которым производилась аппликация липосом с физиологическим раствором натрия хлорида представлены в табл. 4. У некоторых животных отмечалась невыраженная тенденция к небольшому увеличению перфузии в коже, однако изменения перфузии были непоследовательными и расценивались как случайные колебания микроциркуляции. Также была выявлена тенденция к более низким исходным значениям перфузии в коже, по сравнению с предыдущими результатами, полученными в примере 2 с интактными белыми крысами, не подвергавшимися иммобилизационному стрессу.

Результаты исследования микроциркуляции в участке коже на дорсальной поверхности белых крыс основной группы при иммобилизационном стрессе, которым производилась аппликация липосом с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина представлены в табл. 5. У всех подопытных животных отмечалась заметная тенденция к увеличению перфузии в коже. Также как и в контрольной группе, в основной группе была выявлена тенденция к более низким исходным значениям перфузии в коже, по сравнению исходными показателями в примере 2. Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с помощью пакета программ «Excel» с определением t-критерия Стьюдента, значимыми считали различия при р<0,05.

При статистическом анализе совокупных показателей исходной перфузии на 1-й мин исследования животных из обеих групп (контрольной и основной) в примере 2 (с интактными животными) и примере 3 (с животными, подвергнутыми иммобилизационному стрессу) были установлены достоверные различия (р=0,03), в группе животных с хроническим иммобилизационном стрессом перфузия в среднем была на 30 % меньше, чем в группе интактных крыс, не подвергавшихся иммобилизационному стрессу.

При анализе результатов исследования животных контрольной группы, подвергнутых иммобилизационному стрессу, которым наносили на исследуемый участок кожи липосомы с физиологическим раствором животным, было отмечено некоторое увеличение перфузии в коже по сравнению с исходными показателями в пределах от + 5 % до + 20 %, однако данные изменения ни в один из моментов времени исследования не были достоверными. Их появление можно объяснить протективным влиянием наркоза при стресс-реакции.

При анализе результатов исследования животных основной группы, подвергнутых иммобилизационному стрессу, которым наносили на исследуемый участок кожи липосомы с никотинатом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина было отмечено последовательное увеличению перфузии в исследуемом участке кожи, на 20-й мин исследования - на 24 %, на 30-й мин– на 47 %, на 40-й мин – на 65 %, на 50-й мин – на 86 % и на 60-й мин – на 90 %, причем на 30-й, 40-й, 50-й и 60-й мин различия по сравнению с исходными значениями перфузии были достоверными (р<0,05).

Результаты исследования микроциркуляции в участке коже на дорсальной поверхности белых крыс основной группы при иммобилизационном стрессе представлены в табл. 6.

Таким образом, липосомальная форма соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой способна улучшать микроциркуляцию в коже при местном применении как в норме, так и при иммобилизационном стрессе.

Исследования проведены в соответствии с этическими требованиями к работе с экспериментальными животными («Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1987 г.), Федеральный закон «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г., «Об утверждении правил лабораторной практики» (приказ МЗ РФ от 19.06.2003 г. № 267)) и одобрены локальным этическим комитетом.

По сравнению с известным решением предлагаемое заключается в увеличении биодоступности при трансдермальном пути применения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой, и соответственно увеличении выраженности фармакологического эффекта активного вещества, выполнении функции депо, пролонгируя фармакологический эффект и позволяя оптимизировать режим применения за счет применения указанной липосомальной формы для улучшения микроциркуляции в коже при местном применении, кроме того наличие одного активного ингредиента и минимального количества вспомогательных веществ снижает вероятность развития аллергических и иных побочных реакций.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к получению липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой. Для этого растворяют смесь лецитина и холестерина в соотношении 9:1 в хлороформе с последующим упариванием полученного раствора при температуре 37-40°С и получают фосфолипидную пленку, которую в дальнейшем гидратируют при температуре 37-40°С в фосфатном буфере, содержащем никотинат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина. Соотношение массы липидной фазы и объема фосфатного буфера составляет 1:34-1:40. Полученную эмульсию обрабатывают на ультразвуковой установке. Также предложен способ применения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой для местного нанесения и применение липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой для улучшения микроциркуляции в коже. Группа изобретений обеспечивает увеличение биодоступности соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой при трансдермальном пути применения ее липосомальной формы, кроме того, наличие одного активного ингредиента и минимального количества вспомогательных веществ снижает вероятность развития аллергических и иных побочных реакций. 3 н.п. ф-лы, 6 табл., 2 пр.

1. Способ получения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой включает растворение смеси лецитина и холестерина в соотношении 9:1 в хлороформе с последующим упариванием полученного раствора при температуре 37-40°С и получением фосфолипидной пленки, которую в дальнейшем гидратируют в фосфатном буфере, содержащем не более 2% никотината 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, при перемешивании при температуре 37-40°С до полного эмульгирования, соотношение массы липидной фазы к объему фосфатного буфера составляет 1:34-1:40, полученную эмульсию обрабатывают на ультразвуковой установке.

2. Способ применения липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой, полученной способом по п. 1, заключающийся в нанесении местно в норме или при иммобилизационном стрессе липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой на предварительно депилированную кожу и оценке микроциркуляции в объеме 50 мкл однократно.

3. Применение липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой, полученной способом по п. 1, для улучшения микроциркуляции в коже.