СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ МЕНИНГИОМ В ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫЙ ПЕРИОД Российский патент 2019 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии и онкологии и может быть использовано для прогнозирования рецидива менингиом в послеоперационном периоде.

Известно, что для менингиом характерны медленный рост, особенно Grade I, они являются хирургически удалимыми. Однако атипичные (Grade II по ВОЗ) и анапластические (Grade III по классификации ВОЗ) значительно более агрессивны, могут неожиданно рецидивировать, снижая качество жизни, с компрессией или прорастанием в жизненно важные анатомические образования головного мозга с развитием выраженного неврологического дефицита (см. Ozaki S., Nishizaki Т., Ito Н., Sasaki K. Comparative genomic hybridization analysis of genetic alterations associated with malignant progression of meningioma. J Neurooncol 1999; 41: 167-74).

Признанные в настоящий момент прогностические критерии: гистологическая стадия и объем хирургической резекции, гистопатология (менинготелиоматозная, смешанная, фибробластическая, атипичная). Частота рецидивов первых трех подтипов в течение 5 лет составляет 12% при тотальном удалении и до 39% при субтотальном (см. Weber R.G., Bostrom J., Wolter M., Baudis M., Collins V.P., Reifenberger G., Lichter P. Analysis of genomic alterations in benign, atypical, and anaplastic meningiomas: toward a genetic model of meningioma progression. Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94: 14719-24).

При одновременной оценке гистологической стадии опухоли и объема резекции точность прогноза возрастает, составляя 5% рецидивов в течение 5 лет при ее тотальном удалении (см. Бекяшев А.Х., Патогенез менингиом (обзор литературы). Опухоли головы и шеи, №4, 2011. С. 26-40). Однако ядерная атипия является не очень надежным критерием оценки прогноза рецидивирования менингиомы, так как, дегенеративная атипия встречается и в доброкачественных менингиомах, а митотически активные менингиомы иногда оказываются мягкими по характеру течения, что может подразумевать в этих случаях диссоциацию между потерей клеточной дифференцировки и аномалиями клеточного цикла.

Возможность прогнозирования рецидива менингиомы позволит планировать и проводить мероприятия, направленные на предотвращение ее рецидива, прорастания или компрессию жизненно важных анатомических образований головного мозга с развитием выраженного неврологического дефицита, снижения качества жизни.

Из патентных и литературных источников известны разные способы прогнозирования рецидивов опухолевых заболеваний.

1. «Способ прогнозирования течения опухолевого процесса в головном мозге» (см. патент RU 2635628 С1, опубл. 14.11.2017 г., Бюл. №32), который включает получение парафинового блока из биоптата опухоли, который микротомируют, полученный срез окрашивают, сканируют и сопоставляют его с парафиновым блоком, из которого затем выделяют опухолевую ткань, после чего ее депарафинизируют, гидротируют, ферментативно разрушают в ней оболочку клеток до получения суспензии клеточных ядер, суспензию окрашивают флюорестентным красителем и проводят ДНК цитометрию. Если количество анеуплоидных ядер в полученной суспензии меньше или равно 21%, прогнозируют благоприятное течение опухолевого процесса, выше 21% - неблагоприятное. Однако, анэуплоидия, которой предшествует каскад аномальных митотических делений, обнаруживается при всех онкологических заболеваниях (см. Олюшин В.Е., Мацко Д.Е., Улитин А.Ю., Тастанбеков М М., Чиркин В.Ю., Гоголева Е.А., Григорян М.В. «Результаты комбинированного лечения атипических и злокачественных церебральных менингиом», Нейрохирургия, №2, 2012. С. 87-88). При этом, в менингиомах количество анэуплоидных ядер встречается в различной степени, что не может быть специфическим фактором прогноза рецидивов менингиом.

2. «Способ прогнозирования развития направленности патологического процесса у больных с опухолями головного мозга» (см. патент RU 2568602 С1, опубл. 20.11.2015 г., Бюл. №32), включающий проведение хирургического лечения по удалению опухоли и последующее лабораторное исследование, при этом на 5-е сутки после проведенного хирургического лечения определяют степень радикальности проведенной операции, при этом иммуноферментным методом в плазме крови до операции и на 5-е сутки после оперативного лечения определяют уровень нейротрофического фактора мозга (BDNF) и при повышении уровня BDNF после оперативного лечения от 2260 пг/мл и выше по сравнению с исходным определяют субтотальное удаление опухоли и прогнозируют неблагоприятную патологическую направленность процесса, при уровне BDNF ниже 2259 пг/мл определяют тотальное удаление новообразования и прогнозируют благоприятную направленность процесса. Предлагаемый способ позволяет своевременно определить радикальность выполненного хирургического лечения и получить прогноз о направленности развития патологического процесса, своевременно скорректировать тактику ведения больного в послеоперационном периоде и принять адекватные меры для разработки патогенетической терапии с целью предотвращения развития продолженного роста опухоли мозга, а также помогает повысить точность и специфичность данного прогноза. Нейротрофический фактор мозга -белок, относящийся к классу цитокинов, семейству факторов роста и подсемейству нейротрофинов, экспрессируется в глиальных клетках и преимущественно нейрональных. Известно, что у больных с менингиомами в плазме крови выявляется более высокое среднее значение BDNF. При исследовании BDNF через 5 дней после удаления опухоли его концентрация будет выше у пациентов с выявленным рецидивом менингиомы через полгода после оперативного удаления опухоли. Однако, проведенные авторами исследования указали на данную как у больных с менингиомами, так и у больных с аденомами гипофиза, а учитывая, что нейротрофический фактор мозга - белок, относится к классу цитокинов, экспрессируется в глиальных клетках и преимущественно нейрональных, судить однозначно о его прогностическом значении нецелесообразно (см. СТМ, 2014. Том 6, №3. С. 6).

3. «Способ предоперационного определения степени злокачественности и гистологического подтипа опухолей оболочек головного мозга» (см. патент RU 2589652 С1, опубл. 10.07.2016, Бюл. №19), ы котором проводят анализ МРТ снимков в режиме Т1 с контрастированием поэтапно. Для этого вначале определяют интенсивность каждого пикселя в области опухоли на контрастных МРТ Т1 взвешенных снимках. Затем выполняют нормализацию интенсивности каждого пикселя на интактную ткань белого вещества головного мозга пациента с учетом коэффициента смещения гистограммы относительно среднего цвета фона базы данных МРТ снимков пациентов с опухолями мозговых оболочек головного мозга. Формируют гистограмму нормализованной интенсивности пикселов на МРТ снимках. Определяют положение пика гистограммы. На основании сравнения его значения с пределами значений разных гистологических типов опухолей мозговых оболочек, указанных в базе данных, определяют гистологический тип опухоли и соответствующую ему степень злокачественности. Способ обеспечивает высокую точность распознавания гистологического типа новообразований по МРТ снимкам в дооперационном периоде. Однако в послеоперационном периоде прогнозировать рецидивы менингиом по гистограмме нормализованной интенсивности пикселов на МРТ снимках не представляется возможным.

4. «Способ прогнозирования рецидива злокачественного опухолевого заболевания» (см. патент RU 2620306 С2, опубл. 24.05.2017, Бюл. №15) позволяет получить заключение о вероятности рецидива злокачественных опухолей у онкобольных после проведенного лечения на основании оценки кожной иммунологической реакции гиперчувствительности замедленного типа в ответ на введение опухоле-ассоциированных антигенов (ОАА). Согласно этому способу у пациента определяют степень выраженности кожной иммунологической реакции гиперчувствительности замедленного типа. Пациенту внутрикожно вводят опухолеассоциированные антигены с последующим измерением размеров гиперемии (покраснения) кожи в миллиметрах. Измерение производят в установленное контрольное время после внутрикожного введения опухолеассоциированных антигенов. Отсутствие гиперемии кожи или размер гиперемии кожи меньше установленной контрольной величины указывает на высокий риск рецидива онкозаболевания. Размер гиперемии кожи свыше установленной контрольной величины указывает на низкий риск рецидива онкозаболевания. Указанный технический результат обеспечивается также и тем, что способ используется в комбинации с дополнительными диагностическими методами исследования пациента (клиническими, лабораторно-инструментальными и др.), например оценкой психоэмоционального состояния, лабораторных показателей крови и др. для повышения точности прогнозирования рецидива злокачественных опухолей. Но данный способ не является специфичным в отношении менингиом.

5. «Способ прогнозирования рецидивов и метастазов рака легкого» (см. патент RU 2243564 С1, опубл. 27.12.2004, Бюл. №36), в котором исследуют уровень антител к антигенам опухоли легкого с использованием реакции пассивной гемагглютинации. Выявление показателя 1/8 и выше свидетельствует о наличии рецидива или метастаза, что является основанием для проведения химиотерапии, а при уровне антител 1/4 противоопухолевую химиотерапию отменяют. Однако данный способ специфичен только в отношении рака легких.

6. «Способ прогнозирования течения онкологических заболеваний» (см. патент RU 2018835 С1, опубл. 30.08.1994 г.), в котором в лимфоцитах и нейтрофилах определяют содержание гистамина, рассчитывают отношение первого показателя ко второму и при значении этого отношения более 0,9 прогнозируют появление рецидивов и метастазов. Данным способом возможно прогнозировать рецидив опухоли уже через 4-45 суток после проведения анализа. Однако повышение уровня гистамина является неспецифической реакцией организма, которая наблюдается также при целом ряде заболеваний и приеме некоторых лекарственных препаратов, что не позволяет считать определяют содержание гистамина в лимфоцитах и нейтрофилах пациента патогенетически обоснованным и применять его для прогноза рецидивов менингиом.

7. «Способ прогнозирования рецидива солидных опухолей» (см. патент RU 2184971 С1, опубл. 10.07.2002 г., Бюл. №19), при котором не реже 1 раза в месяц в крови исследуют процентное содержание общих Т-лимфоцитов и при превышении верхнего предела среднестатистического значения его нормы прогнозируют начало рецидива опухоли. Основными недостатками данного способа является его неспецифичность по отношению к новообразованиям как таковым, особенно - менингиомам.

8. «Способ прогнозирования ранних рецидивов или/и метастазов рака шейки матки» (см. патент RU 2247377 С2, опубл. 27.02.2005 г., Бюл. №6). С целью выявления развития патологического процесса до клинического его появления, определяют отношение абсолютного числа лимфоцитов к абсолютному числу моноцитов периферической крови, полученное соотношение делят на 4,05. При значениях полученного результата выше единицы можно утверждать об отсутствии рецидива заболевания в течение первого года наблюдения, а показатель ниже единицы указывает на продолженный рост опухоли или ее рецидив рака в первый год после лечения. Способ может быть использован для диагностики до клинической манифестации рецидивов и/или метастазов для шейки матки после сочетанной лучевой терапии. Основной недостаток данного способа - селективность в отношении рака шейки матки, в частности, после сочетанной лучевой терапии.

9. Существуют способы прогнозирования возникновения рецидивов, основанные на гистологических и иммуногистохимических методах исследования опухолевого материала серозного рака яичников (см. патент RU 2290078 С1, опубл. 27.12.2006 г., Бюл. №36); мелкоклеточного рака легкого (см. патент RU 2498305 С1, опубл. 10.11.2013 г., Бюл. №31); рака тела матки (см. патент RU 2250077 С2, опубл. 20.04.2005 г., Бюл. №11). Основными недостатками указанных способов являются их селективность в отношении серозного рака яичников, мелкоклеточного рака легкого, рака тела матки и невозможность прогнозирования рецидива опухолевого процесса на этапах комбинированного лечения, так как получению опухолевого материала для исследования возможно только во время хирургической операции.

10. «Способ прогнозирования возникновения рецидивов рака шейки матки» (см. патент RU 2485523 С2, опубл. 20.06.2013, Бюл. №17), при котором проводится биохимическое исследование суточной мочи больной, определяют андростерон и этиохоланолон, вычисляют отношение между ними. В случае отношения 0,75 мг/сут и ниже прогнозируют рецидив болезни в первые 2 года, а при значении их отношения, превышающем 0,75 мг/сут - прогнозируют длительный безрецидивный период до 10 лет и более. Способ призван обеспечить возможность раннего, доклинического выявления рецидива заболевания, а также возможность производства индивидуального подбора лечебных воздействий для каждой больной но направлен только на прогнозирование рецидивов рака шейки матки и неспецифичен в отношении менингиом.

11. «Способ прогнозирования рецидивов рака гортани» (см. патент RU 2389030 С1, опубл. 10.05.2010 г., Бюл. №13), при котором у больных раком гортани после оперативного удаления опухоли в процессе их диспансерного наблюдения исследуют уровень андростерона и эстрадиола в суточной моче и определяют отношение первого ко второму. При величине отношения выше 3-х - прогнозируют появление рецидива заболевания или метастаза. При величине отношения показателя ниже 3 - длительный безрецидивный период. Способ позволяет прогнозировать рецидивы рака гортани, но неспецифичен для менингиом.

12. «Способ прогнозирования рецидива рака молочной железы» (см. патент RU 2263319 С2, опубл. 27.10.2005 г., Бюл. №30), согласно которого в динамике наблюдения за женщинами в менопаузе после комплексного лечения предполагают появление рецидива рака молочной железы при снижении соотношения концентрации эстриола и суммы концентраций эстрона и эстрадиола в моче с 1,68±0,23 у больных без рецидива до 0,74±0,12 у пациенток, проживших без рецидива менее одного года, до 0,65±0,13 у больных, проживших без рецидива от 2 до 6 лет, и до 0,50±0,10 у больных с безрецидивным периодом от 6 до 10 лет. Способ позволяет установить наличие рецидива рака молочной железы на доклиническом этапе, но эффективен только для больных раком молочной железы и не позволяет судить о появлении рецидивов менингиом.

13. «Способ прогнозирования рецидива у больных меланомой кожи» (см. патент RU 2275637 С2, опубл. 27.04.2006, Бюл. №12). Этим способом определяют суточную экскрецию с мочой эстрона, эстрадиола и эстриола у женщин репродуктивного возраста, рассчитывают величину соотношения экскреции эстриола и суммарной величины экскреции эстрадиола и эстрона после лечения и на этапе контрольного наблюдения. При увеличении данного соотношения прогнозируют рецидив через 11-12 месяцев после лечения. Способ также неспецифичен в отношении менингиом.

14. «Способ прогнозирования метастазов и/или рецидивов рака почки» (см. патент RU 2064179 С1). Так с целью доклинического выявления метастазов и рецидивов рака почки после радикального удаления основного очага опухоли определяется отношение свободных 17-оксикетостероидов (17-ОКС) к их сумме в суточной моче. При коэффициенте отношения от 0,01 до 0,07 прогнозируют наличие метастазов и рецидивов. Но выявленное соотношение между свободными и общими фракциями 17-ОКС указывает на уже имеющееся распространенное опухолевое заболевание, что не позволяет использовать данный способ как для прогнозирования дальнейшего течения опухолевого процесса у больных, получивших лечение по поводу первичного рака почки, так для прогнозирования рецидивов менингиом.

15. «Способ прогнозирования развития рецидивов у больных раком слизистой оболочки рта» (см. патент RU 2635535 С1, опубл. 13.11.2017, Бюл. №32), согласно которому в ткани опухоли, взятой во время оперативного вмешательства, определяют уровень транскрипционного фактора каппа-В - NF-κВ рб5 и при его значении 16,0 УЕ/мг белка в лунке и более прогнозируют высокий риск развития рецидивов в срок от 6 до 24 месяцев. Изобретение позволяет прогнозировать риск рецидивирования заболевания, проводить объективный контроль за развитием злокачественного процесса (рака СОПР), предположить развитие рецидивов до их клинического проявления и включить больных в группу риска для интенсивного наблюдения, своевременно принять меры для назначения адъювантного лечения. Однако в литературе описано, что с прогрессией менингиомы и атипичной или анапластической гистологией связано большое количество цитогенетических изменений, включая наличие дицентрических или кольцевых хромосом, потери плеч хромосом 1p, 6q, 9р, 10, 14q, и 18q, а также амплификации в областях 1q, 9q, 12q, 15q, 17q и 20q (см. Гомазков О.А. «Нейротрофические факторы мозга», Справочно-информационное издание. Электронная версия. М. 2004; см. Шиманский В.Н. Докт. Дисс Менингиомы основания задней черепной ямки: клиника, диагностика, лечение. 2005 г.; см. Buschges R., Ichimura K., Weber R.G., Reifenberger G., Collins V.P. Allelic gain and amplification on the long arm of chromosome 17 in anaplastic meningiomas. Brain Pathol 2002; 12: 145-53; см. Cai D.X., Banerjee R., Scheithauer B.W., Lohse СМ., Kleinschmidt-Demasters B.K., Perry A. Chromosome 1p and 14q FISH analysis in clinicopathologic subsets of meningioma: diagnostic and prognostic implications. J Neuropathol Exp Neurol 2001; 60: 628-36; см. Cai D.X., James C.D., Scheithauer B.W., Couch F.J., Perry A. PS6K amplification characterizes a small subset of anaplastic meningiomas. Am J Clin Pathol 2001; 115: 213-8).

Для менингиом характерна высокая встречаемость NF2 (22ql2) и белка 4.1В определяющихся при помощи FISH-делеций, но транскрипционный фактор каппа-В - NF-κВ рб5 для менингиом неспецифичен.

16. «Способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом» (см. патент RU 2478206 С1, опубл. 27.03.2013, Бюл. №9), сущность которого заключается в определении активности глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ) в лимфоцитах периферической крови. При сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности НАДФМДГ в пределах от 0,25 до 6,21 мкЕ прогнозируют возникновение рецидива у больных острым лейкозом. Изобретение позволяет своевременно диагностировать прогрессирование острого лейкоза, корректировать план и тактику лечения данной категории больных и улучшить результаты их реабилитации. Однако данный способ не специфичен для менингиом.

17. «Способ прогнозирования развития направленности патологического процесса у больных с опухолями головного мозга» (см. патент RU 2483410 С2, опубл. 10.11.2011, Бюл. №31), включающий операцию, спектрофотометрические исследования, отличающийся тем, что в 1 сутки после операции в ликворе определяется активность протеиназы широкой субстратной специфичности - плазмина, при повышении показателя до 0,200 КЕ\мл прогнозируют развитие рецидива опухоли в течение 4-5 месяцев после операции, а при активности плазмина выше 0,200 КЕ\мл прогнозируют безрецидивное течение послеоперационного периода в течение двух лет. Однако плазмин не является показателем, специфичным в отношении менингиом.

18. «Способ прогнозирования развития направленности патологического процесса у больных с опухолями головного мозга» (см. патент RU 2568602 С1, опубл. 20.11.2015, Бюл. №32), при котором иммуноферментным методом в плазме крови до операции и на 5-е сутки после оперативного лечения определяют уровень нейротрофического фактора мозга (BDNF) и при повышении уровня BDNF после оперативного лечения от 2260 пг/мл и выше по сравнению с исходным уровнем определяют субтотальное удаление опухоли и прогнозируют неблагоприятную патологическую направленность процесса, при уровне BDNF ниже 2259 пг/мл определяют тотальное удаление новообразования и прогнозируют благоприятную направленность процесса. Известно также, что ранее показатель количества мозгового нейтрофильного фактора (BDNF) в сыворотке крови использовался для дифференциальной диагностики малых интрацеребральных гематом и малых глубинных инфарктов головного мозга (см. патент RU 2470306 С1, опубл. 20.12.2012, Бюл. №35), а также для прогнозирования нарушения моторного развития у детей первого года жизни с перинатальными гипоксическими поражениями головного мозга (см. патент RU 2319154 С1, опубл. 10.03.2008, Бюл. №7). BDNF контролирует квантовый рилизинг нейротрансмиттеров и участвует в модуляции процессов памяти и обучения. Поскольку BDNF высвобождается из пресинаптических спинальных нейронов под влиянием болевых импульсов, постулирована его роль как медиатора центральной сенситизации при хронической боли. Экспрессия BDNF в нейронах гиппокампа предотвращает провоцируемые электровоздействием эпилептогенные судороги у крыс. Нейротрофин-3 и BDNF оказывают протективное действие при повреждениях гиппокампальных нейронов, связанных с инсультом. Выявлена экспрессия мРНК этих факторов при компрессионной травме мозга в эксперименте. Выявлено увеличение уровня BDNF в цереброспинальной жидкости новорожденных детей, подвергшихся родовой асфиксии. Уровень NGF у таких младенцев оказался пониженным (см. Гомазков О.А. «Нейротрофические факторы мозга), поэтому учитывая неоднозначность мозгового фактора роста, использование его в качестве фактора прогнозирования рецидива менингиом некорректно.

Шиманский В.Н. (см. Шиманский В.Н. Докт. Дисс Менингиомы основания задней черепной ямки: клиника, диагностика, лечение. 2005 г.) предложил исследование делеции 9р21 в качестве прогностического фактора рецидивов менингиом. Гомозиготная делеция 9р21 выявляется только в анапластических менингиомах основания задней черепной ямки. Наличие в опухоли делеции 9р (гомозиготной и гетерозиготной) статистически достоверно ассоциируется с более высоким показателем рецидивирования в послеоперационном периоде. Однако данный метод достаточно дорогостоящий, и для поточного прогнозирования рецидивов менингиом не всегда применим.

В.Е. Олюшин, Д.Е. Мацко, А.Ю. Улитин (см. Олюшин В.Е., Мацко Д.Е., Улитин А.Ю., Тастанбеков М М., Чиркин В.Ю., Гоголева Е.А., Григорян М.В. «Результаты комбинированного лечения атипических и злокачественных церебральных менингиом», Нейрохирургия, №2, 2012. С. 87-88) считают необходимым обязательно проводить иммуногистохимические исследования гистологического материала больных с определением индекса пролиферативной активности Ki-67, позволяющего выявить больных с высоким риском рецидивирования опухоли. Известно также (см. Бывальцев В.А., Степанов И.А, Белых Е.Г. Биология менингеальных опухолей головного мозга. Сибирский медицинский журнал (Иркутск), 2015, №4 С. 15-19), что WNT/β-катенин - внутриклеточный путь, которому также придают важнейшее значение в патогенезе менингиом. У данного внутриклеточного каскада обнаружены мутации гена АРС (adenomatous polyposis coli) и Е-кадгерина, а для доброкачественных форм менингиом, в отличие от злокачественных, характерна делеция АРС. Однако, утрата гена белка Е-кадгерина и накопление в ядре опухолевых клеток свойственны большинству злокачественных форм менингеальных опухолей. Ген АРС в клетке регулирует активность WNT/β-катенинового каскада и тем самым выполняет туморсупрессорную функцию, а Е-кадгерин, значимо снижает опухолевую инвазию и рост. Однако, при определении белковых уровней VEGF А в сравнительно большом числе менингиом не удалось подтвердить связи со степенью васкуляризации, которая в отличие от глиом не коррелирует со степенью злокачественности.

Тем не менее, уровни VEGF А были повышены в атипических менингиомах по сравнению с доброкачественными до сих пор не было установлено четкой корреляции между каким-либо из этих фактором и ангиогенезом или степенью злокачественности менингиомы. Роль других факторов роста (эпидермального, трансформирующего, инсулиноподобного и др.) противоречива и мало изучен, проблема остается нерешенной.

Также известен «Способ прогнозирования течения опухолевого процесса в головном мозге» (см. патент RU 2635628 С1, опубл. 14.11.2017 г., Бюл. №32). Изобретение относится к медицине, а именно онкологии, патоморфологии, и касается способа прогнозирования течения опухолевого процесса в головном мозге. Способ включает получение парафинового блока из биоптата опухоли, полученный парафиновый блок микротомируют, полученный срез окрашивают, сканируют и сопоставляют его с парафиновым блоком, из которого затем выделяют опухолевую ткань, после чего ее депарафинизируют, гидротируют, ферментативно разрушают в ней оболочку клеток до получения суспензии клеточных ядер, суспензию окрашивают флюорестентным красителем и проводят ДНК цитометрию. Если количество анеуплоидных ядер в полученной суспензии меньше или равно 21%, прогнозируют благоприятное течение опухолевого процесса, выше 21% неблагоприятное. Однако, анэуплоидия, которой предшествует каскад аномальных митотических делений, обнаруживается при всех онкологических заболеваниях (см. Олюшин В.Е., Мацко Д.Е., Улитин А.Ю., Тастанбеков М М., Чиркин В.Ю., Гоголева Е.А., Григорян М.В. «Результаты комбинированного лечения атипических и злокачественных церебральных менингиом», Нейрохирургия, №2, 2012. С. 87-88). При в менингиомах количество анэуплоидных ядер встречается в различной степени, что не может быть специфическим фактором прогноза рецидивов менингиом.

Техническим результатом предлагаемого авторами изобретения является разработка способа прогнозирования рецидива менингиом, позволяющего достоверно судить о появлении рецидива опухоли в послеоперационном периоде.

Технический результат проявляется при реализации заявленного способа - определение экспрессии белка Циклин-D1 в ткани опухоли менингиомы иммуногистохимическим методом.

В случае экспрессии белка Циклин-D1 не выше 3% прогнозируется безрецидивное течение менингиомы. Если экспрессия белка Циклин-D1 свыше 3% - прогнозируется рецидив опухоли менингиомы.

Технический результат достигается тем, что во время операции по удалению мениннгиомы получают фрагмент ткани опухоли, замораживают ткани опухоли, получают микросрезы, окрашивают их иммуногистохимическим реактивом с антителами к белку Циклин-D1, микроскопируют и проводят иммуногистохимическое исследование для определения экспрессии белка Циклин-D1, выраженного в процентах, при экспрессии белка Циклин-D1 более 3% ядер клеток в менингиоме прогнозируют высокую вероятность ее рецидива, при наличии диффузной ядерной экспрессии белка Циклин-D1 не более 3% прогнозируют безрецидивное течение менингиомы.

Способ осуществляется следующим образом.

После удаления опухоли и фиксации ее в забуференном растворе формалина в течение 24 часов, изопропиловой автоматизированной проводки в гибридном гистопроцессоре Logos фирмы «Milestone» (Италия), изготавливаются гистологические срезы толщиной не более 2,5 мкм на микротоме фирмы Leica (Германия), с последующим окрашиванием гистологических препаратов гематоксилином-эозином. Иммуногистохимический этап исследования выполнялся в иммуностейнере Aitostainer Link48 фирмы Dako (Дания). Выполнялось иммуногистохимическое исследование с использованием антитела к Циклин-D1. После депарафинизации и пробоподготовки тонкий срез помещался на специально подготовленные стекла с адгезивным покрытием. Используемые клоны, разведение антитела к Циклин-D1, его демаскировка приведены в таблице №1. После завершения иммуногистохимического этапа исследования с помощью светового микроскопа фирмы Leica DM1000 с фотокамерой (Германия) проводится количественный подсчет количества ядер клеток в опухоли на 100 клеток при увеличении х400. Среди опухолевой ткани выбираются наиболее «активные» участки, экспрессирующие ядерный белок Циклин-D1. Реакция считается позитивной, если ядерное окрашивание яркое, контрастное, занимает всю площадь ядра.

На основании полученных морфологических данных (гистологический, иммуногистохимический методы исследования) было установлено, что ядерная экспрессия белка Циклин-D1 имеет дискретное и диффузное окрашивание и имеет величины до 3% и более 3% экспрессируемых ядер клеток.

Реализуемость заявляемого способа подтверждается примерами из клинической практики:

Пример №1. Больная С. Четырежды оперирована в РОКБ по поводу менингиомы левой лобной области (1997-2012), в последний раз 25.10.12 г. в РНИОИ (хирург И.В. Балязин-Парфенов) Г/а от 29.10.2012 г. - менинготелиоматозная менингиома. Страдает головными болями.

04.02.2013 г. выполнена операция по поводу продолженного роста менингиомы рекраниотомия, удаление опухоли.

15.08.13 г. - рекраниотомия в левой лобно-височной области, радикальное удаление опухоли. Г/а - менинготелиоматозная менингиома с участками повышенной клеточности.

Из образцов парафиновых блоков получены микропрапараты, окрашенные антителами к белку Циклин-D1, выявившую экспрессию свыше 7%.

Через 5 месяцев после операции у больной при проведении комплексного неврологического обследования, включающего выполнение МРТ, транскраниального УЗИ, был обнаружен опухолевый узел размерами 12×12×10 мм левой лобно-височной области с перифокальным отеком окружающей ткани головного мозга. Данные изменения в головном мозге были оценены как рецидив менингиомы. Больная проходит радиолучевую терапию.

Пример №2. Больная П., 04.03. 1971 г.р. Дата поступления: 26.02.2010 г.

На МРТ головного мозга в г. Таганроге, где визуализирована опухоль (менингиома) левой СЧЯ базальной локализации, размерами 75×60×55 мм, растущая из медиальных отделов левого малого крыла основной кости, с образованием перифокального отека вследствие компрессии головного мозга, левого бокового желудочка, обходной цистерны и латеральной дислокации мозга.

Дата операции: 04.03.2010 г.

Диагноз: Менингиома средней черепной ямки, птериональной области и крыла основной кости слева.

Название операции: костно-пластическая трепанация черепа, дополненная резекционной краниотомией в левой лобно-птериональной области, радикальное удаление опухоли (Sympson I).

Ход операции: под общим эндотрахеальным наркозом из левостороннего арбалетного доступа в левой лобно-птериональной области выполнена костно-пластическая трепанация черепа, дополненная резекционной краниотомией. Обнаружены зона роста опухоли из птериональной твердой мозговой оболочки и участок костного роста в виде эндостоза в большом крыле основной кости. Зона роста опухоли обильно васкуляризирована, одна из ее магистральных артерий - гипертрофированная левая средняя оболочечная артерия, которая коагулирована. Твердая мозговая оболочка (ТМО) напряжена, слабо передает пульсацию головного мозга, вскрыта циркулярно окаймляющим зону роста опухоли разрезом. Обнаружена плотная бугристая опухоль серовато-вишневого цвета, обильно васкуляризированая, с множеством арахноидальных спаек. После коагуляции питающих сосудов начата мобилизация опухоли в лобной области. Опухоль, размерами 12×10×8 см располагалась в Сильвиевой яме с переходом на лобную, височную и теменную области, удалена радикально по Sympson I, с сохранением дренирующих магистральных вен и целостности паутинной оболочки. Гемостаз в ране. Пластика ТМО искусственной ТМО Duraform. Костный лоскут обработан термически по Г.С. Тиглиеву и В.Е. Олюшину, уложен на место и фиксирован отдельными узловыми шелковыми швами. Швы на апоневроз и кожу. Асептическая повязка.

При гистологическом исследовании была обнаружена менинготелиоматозная менингиома с участками богатой клетками, имеющая причудливые клеточные структуры.

При иммуногистохимическом исследовании было установлено, что клетки опухоли в отдельных участках экспрессировали белок циклин Д1 более 3% (4-5%), что указывало на агрессивное поведение клеток опухоли.

Спустя 3,5 месяца была выполнена повторная операция, удаление рецидива опухоли, которая в отдельных участках имела ядерную экспрессию циклина Д1 более 15%, что указывало на наличие очагов атипической менингиомы. Данный клинический случай демонстрирует агрессивное течение рецидивной менингиомы головного мозга.

Пример №3. Больная М, 1979 г.р. Дата поступления: 15.07.2016 г.

На МРТ головного мозга в г. Ростове-на-Дону была диагностирована опухоль (менингиома) правой лобной доли, размерами 25×10×15 мм, с образованием перифокального отека вследствие компрессии головного мозга.

При поступлении в стационар был установлен диагноз менингиомы правой лобной доли, в связи с чем, было выполнено оперативное вмешательство в объеме костно-пластической трепанации черепа с выполнением радикального удаления опухоли.

В ходе операции было установлено, что твердая мозговая оболочка (ТМО) напряжена, слабо передает пульсацию головного мозга, вскрыта циркулярно окаймляющим зону роста опухоли разрезом. Обнаружена плотноэластическая опухоль серовато-вишневого цвета, полнокровная. После коагуляции питающих сосудов начата мобилизация опухоли в лобной области. Опухоль, размерами 25×10×8 см располагалась в Сильвиевой яме с переходом на лобную области, удалена радикально по Sympson I, с сохранением дренирующих магистральных вен и целостности паутинной оболочки. Гемостаз в ране. Пластика ТМО искусственной ТМО Duraform. Костный лоскут обработан термически по Г.С. Тиглиеву и В.Е. Олюшину, уложен на место и фиксирован отдельными узловыми шелковыми швами. Швы на апоневроз и кожу. Асептическая повязка.

При гистологическом исследовании была обнаружена менинготелиоматозная менингиома с «вихреватыми» участками, имеющая причудливые клеточные структуры.

При иммуногистохимическом исследовании было установлено, что клетки опухоли в отдельных участках экспрессировали белок циклин Д1 не более 1-2%, что указывало на благоприятное биологическое поведение клеток опухоли.

После операции состояние больной оставалось благоприятным, регулярно выполнялись контрольные МРТ и по настоящее время рецидивов опухоли обнаружено не было. Данным способом был рассчитан прогноз для 25 больных.

Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что его применение позволяет прогнозировать рецидивирование менингиомы в послеоперационном периоде.

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и онкологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидивов менингиом в послеоперационном периоде. Для этого во время операции по удалению менингиомы получают фрагмент опухолевой ткани. После чего фрагмент замораживают и получают микросрезы, которые окрашивают реактивом с антителами к белку Циклин-D1. Затем полученный препарат микроскопируют и проводят иммуногистохимическое исследование для определения экспрессии белка Циклин-D1, выраженного в процентах. При наличии экспрессии белка Циклин-D1 менее 3% прогнозируют безрецидивное течение менингиомы. При экспрессии белка Циклин-D1 свыше 3% прогнозируют высокую вероятность рецидива менингиомы. Изобретение позволяет прогнозировать рецедив менингиомы у пациента в послеоперационном периоде. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования рецидивов менингиом в послеоперационный период, заключающийся в том, что во время операции по удалению менингиомы получают фрагмент ткани опухоли, замораживают ткани опухоли, получают микросрезы, окрашивают их иммуногистохимическим реактивом с антителами к белку Циклин-D1, микроскопируют и проводят иммуногистохимическое исследование для определения экспрессии белка Циклин-D1, выраженного в процентах, при экспрессии белка Циклин-D1 более 3% ядер клеток в менингиоме прогнозируют высокую вероятность ее рецидива, а при наличии диффузной ядерной экспрессии белка Циклин-D1 не более 3% прогнозируют безрецидивное течение менингиомы.