СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ СМЕСЕЙ, ИМИТИРУЮЩИХ ЦЕЛЬНУЮ КРОВЬ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ, ДЛЯ ОБУЧЕНИЯ СТУДЕНТОВ МЕТОДИКАМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ0 И РЕЗУС-ФАКТОРА Российский патент 2020 года по МПК A61K35/12 A61K31/60 A61P43/00 

Изобретение относится к биомедицине, а именно к медицинскому и биологическому образованию, и может быть использовано для освоения и закрепления умений и навыков по определению групп крови человека по системе АВ0 и резус-фактора на лабораторных занятиях у студентов медицинских и биологических специальностей вузов и колледжей.

Из медицинской практики известно, что использование образцов настоящей крови и ее фракций в учебном процессе нецелесообразно. Это существенно ограничивает освоение студентами медицинских и биологических специальностей вузов практических умений и навыков, в частности, по определению содержания гемоглобина, гематокрита, групп крови, резус-фактора пациентов и подбору донора и реципиента для процедуры переливания эритроцитарной массы или цельной крови при трансфузионной терапии. Подобный подход также ограничивает педагогическую перспективу формирования профессиональной компетентности будущего врача и специалиста-биолога (биохимика).

Известен способ определения группы крови в котором используют стандартные реакции гемагглютинации на твердой фазе, в которых для определения группы крови человека используются цельная кровь и анти-А, анти-В и анти-АВ-сыворотки, то есть α-, β- и α,β-изогемагглютинирующие сыворотки, соответственно [1]. Данные стандартные реакции гемагглютинации на твердой фазе заключаются в определении наличия или отсутствия на поверхности эритроцитов крови эритроцитарных антигенов, имеющих основополагающее значение для диагностики группы крови.

Недостатком этого способа, применяемого в учебном процессе, является использование дорогостоящих образцов настоящей крови человека и диагностических изогемагглютинирующих сывороток.

Известен способ определения резус-фактора человека. Для него используется цельная кровь, сыворотка анти-резус и контрольная сыворотка [2]. Данные реакции гемагглютинации на твердой фазе заключаются в определении наличия или отсутствия на поверхности эритроцитов крови эритроцитарных антигенов, имеющих определяющее значение для диагностики резус-фактора.

Недостатком этого способа, применяемого в учебном процессе, является использование дорогостоящих образцов настоящей крови человека и диагностических изогемагглютинирующих сывороток.

Наиболее близким по технической сути к заявляемому способу является способ, который и принят в качестве прототипа. Этот способ включает использование смесей, имитирующих цельную кровь и диагностические сыворотки коровьего молока или белка сырого куриного яйца, разведенных водой и подкрашенных до цвета крови 2,5-3% раствором красителя «прямого алого» и имитаторов изогемагглютинирующих сывороток с использованием воды и 2% раствора сульфосалициловой кислоты [3].

Недостатком этого способа является то, что он не позволяет при обучении студентов одновременно с определением групп-крови выполнить методику по определению резус-фактора с использованием кровь-имитирующих смесей. Также недостатком способа является безальтернативность компонентного состава смесей, имитирующих диагностические сыворотки.

Техническим результатом предлагаемого способа является приобретение и закрепление студентами умений и навыков как по определению групп крови человека по системе АВ0 так и по определению резус-фактора. Кроме того способ позволит развить уверенность при формирования профессиональной компетентности будущего врача и специалиста-биолога (биохимика).

Технический результат достигается тем, что с помощью имитаторов сыворотки анти-резус и контрольной сыворотки дополнительно определяют резус-фактор, а в качестве красителя, вводимого в имитатор крови, используют 2% раствор понсо и по результатам теста устанавливают резус-положительную или резус-отрицательную принадлежность крови.

Алгоритм этапов предлагаемого способа включает:

1 этап - приготовление лаборантом имитатора крови человека. Имитатором образца крови человека являются цельное или восстановленное сухое молоко, разведенные водой в 2 раза и подкрашенные до цвета крови 2% раствором красителя понсо.

2 этап - приготовление лаборантом имитаторов диагностических сывороток. В качестве имитаторов α- и β-изогемагглютинирующих сывороток, которые при смешивании с имитатором крови человека визуально продемонстрируют реакцию гемагглютинации, используется 2% раствор сульфосалициловой кислоты. Для получения заведомо отрицательной реакции гемагглютинации в качестве α- и β- изогемагглютинирующих сывороток предложена вода.

3 этап - приготовление лаборантом четырех комплектов имитаторов изогемагглютинирующих сывороток, расположенных в четырех лабораторных штативах. Каждый штатив должен быть маркирован, поскольку рассчитан на диагностику только одной из четырех групп крови: «0» (I группа крови), «А» (II группа крови), «В» (III группа крови) или «АВ» (IV группа крови). Имитаторы изогемагглютинирующих сывороток разливают в четыре флакона, находящихся на каждом из штативов (можно использовать пробирки). Флаконы маркируют следующим образом: сыворотка группы крови «0» (анти-АВ-сыворотка), сыворотка группы крови «А» (анти-В-сыворотка), сыворотка группы крови «В» (анти-А-сыворотка), сыворотка группы крови «АВ» (анти-АВ-антитела отсутствуют).

4 этап - определение обучающимся группы крови человека. Реакция проводится на твердой фазе, поэтому каждый штатив должен быть дополнен планшетом (или пластиной) белого цвета. Поверхность планшета разделяют на секторы, маркированные в соответствии с четырьмя группами крови (см. табл. 1-4).

5 этап - приготовление лаборантом двух комплектов имитаторов изогемагглютинирующих сывороток, расположенных в двух лабораторных штативах. Каждый штатив должен быть маркирован, поскольку рассчитан на диагностику только одного из двух типов резус-факторов: Rh+ (положительный резус-фактор) или Rh- (отрицательный резус-фактор). Имитаторы изогемагглютинирующих сывороток разливают в два флакона, находящихся на каждом из штативов (можно использовать пробирки). Флаконы маркируют следующим образом: «сыворотка анти-резус» и «контрольная сыворотка (не анти-резус)».

6 этап - определение обучающимся резус-фактора. Реакция проводится на твердой фазе, поэтому каждый штатив должен быть дополнен планшетом (или пластиной) белого цвета. Поверхность планшета разделяют на секторы, маркированные в соответствии с двумя типами резус-факторов (см. табл. 5).

К занятию со студентами подготовка всех этапов данного способа проводится лаборантом.

Примеры способа определения групп крови и резус-фактора (действия, представленные в примерах, выполняются студентами):

1. Пример определения крови группы «0» (I группа). Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный четырьмя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Во все четыре флакона («анти-АВ-сыворотка», «анти-В-сыворотка», «анти-А-сыворотка», «ни анти-А-, ни анти-В-сыворотка») внесена вода. С имитатором крови человека во всех секторах планшета (то есть с маркировкой по сывороткам групп крови «А», «В», «АВ», «0») реакция агглютинации с имитаторами сывороток из всех четырех флаконов будет отрицательной (см. табл. 1). По результатам теста студент диагностирует у пациента группу крови «0» (I группа), что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению групп крови человека.

2. Пример определения крови группы «А» (II группа). Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный четырьмя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Первый флакон (анти-АВ-сыворотка) заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты, каждый из которых в секторе планшета «сыворотка группы крови 0» даст положительную реакцию агглютинации с имитатором крови человека. Второй флакон заполнен дистиллированной водой (анти-В-сыворотка): в секторе планшета «сыворотка группы крови А» реакция с имитатором крови будет отрицательная. Третий флакон заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты (анти-А-сыворотка): в секторе планшета «сыворотка группы крови В» реакция агглютинации с имитатором крови будет положительная. Четвертый флакон заполнен водой (сыворотка, не содержащая анти-А- и анти-В-антител): в секторе планшета «сыворотка группы крови АВ» реакция с имитатором крови будет отрицательная. По результатам теста (см. табл. 2) студент диагностирует у пациента группу крови «А», что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению групп крови человека.

3. Пример определения крови группы «В» (III группа). Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный четырьмя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Первый флакон (анти-АВ-сыворотка) заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты, каждый из которых в секторе планшета «сыворотка группы крови 0» даст положительную реакцию агглютинации с имитатором крови человека. Второй флакон заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты (анти-В-сыворотка): в секторе планшета «сыворотка группы крови А» реакция с имитатором крови в том и другом случае будет положительная. Третий флакон заполнен водой (анти-А-сыворотка): в секторе планшета «сыворотка группы крови В» реакция агглютинации с имитатором крови будет отрицательная. Четвертый флакон заполнен водой (сыворотка, не содержащая анти-А- и анти-В-антител): в секторе планшета «сыворотка группы крови АВ» реакция с имитатором крови будет отрицательная. По результатам теста (см. табл. 3) студент диагностирует у пациента группу крови «В» (III группа), что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению групп крови человека.

4. Пример определения крови группы «АВ» (IV группа). Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный четырьмя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Первый флакон (анти-АВ-сыворотка) заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты, каждый из которых в секторе планшета «сыворотка группы крови 0» даст положительную реакцию агглютинации с имитатором крови человека. Второй и третий флаконы также заполнены 2% раствором сульфосалициловой кислоты (анти-В-сыворотка и анти-А-сыворотка): в секторе планшета «сыворотка группы крови А» и в секторе планшета «сыворотка группы крови В» реакция агглютинации с имитатором крови в том и другом случае будет положительная. Четвертый флакон заполнен водой (сыворотка, не содержащая анти-А- и анти-В-антител): в секторе планшета «сыворотка группы крови АВ» реакция с имитатором крови будет отрицательная. По результатам теста (см. табл. 4) студент диагностирует у пациента группу крови «АВ» (IV группа), что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению групп крови человека.

5. Пример определения положительного резус-фактора Rh+ человека. Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный двумя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Первый флакон (сыворотка анти-резус) заполнен 2% раствором сульфосалициловой кислоты, каждый из которых в секторе планшета «сыворотка положительного резус-фактора Rh+» даст положительную реакцию агглютинации с имитатором крови человека. Второй флакон заполнен водой (контрольная сыворотка): в секторе планшета «контрольная сыворотка (не анти-резус)» реакция с имитатором крови будет отрицательная. По результатам теста (см. табл. 5) студент диагностирует у пациента резус-положительную принадлежность крови (Rh+ резус-фактор), что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению резус-фактора человека.

6. Пример определения отрицательного резус-фактора Rh- человека. Студенту выдается соответствующий штатив, укомплектованный двумя флаконами имитаторов диагностических сывороток. Первый и второй флаконы (сыворотка анти-резус и контрольная сыворотка, соответственно) заполнены водой: в секторах планшета «сыворотка отрицательного резус-фактора Rh-» и «контрольная сыворотка (не анти-резус)» реакция с имитатором крови в том и другом случае будет отрицательная. По результатам теста (см. табл. 5) студент диагностирует у пациента резус-отрицательную принадлежность крови (Rh- резус-фактор), что аналогично визуальной диагностике результатов стандартного теста-прототипа по определению резус-фактора человека.

Предложенный способ прошел испытание на практических занятиях по иммунологии у студентов 2 курса специальностей «Лечебное дело» и «Педиатрия», у студентов 4 курса специальности «Биология» в ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет»; внедрен и успешно используется в течение 3 лет на кафедре физиологии человека и животных, патофизиологии, гистологии; кафедре общей и факультетской хирургии, кафедра педиатрии и детской хирургии при обучении студентов старших курсов и интернов.

Точность воспроизведения результатов предложенного способа составляет 100%. Каждый студент может многократно и самостоятельно воспроизвести данный обучающий способ, используя учебные пособия и методические указания по общим вопросам переливания крови. Это позволит закрепить знания и умения студентов, развить самостоятельность и уверенность, что важно для формирования профессиональной компетентности будущего врача и специалиста-биолога (биохимика).

Данный обучающий способ позволяет заменить дорогостоящие образцы настоящей крови человека и диагностические изогемагглютинирующие сыворотки их имитаторами.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б. Безопасное переливание крови: Руководство для врачей. - СПб.: Питер, 2000. - 320 с.

2. Минеева Н.В. Разновидности антигена D и определение резус-принадлежности крови / Н.В. Минеева // Клиническая лабораторная диагностика. - 2009. - №3. - С. 17-19.

3. Патент 2464028 Рос. Федерация, МПК А61K 31/60, А61K 35/12, А61Р 43/00.

Применение смесей, имитирующих цельную кровь и диагностические сыворотки, для обучения студентов методике определения групп крови по системе АВ0 / В.С. Авдеева, С.П. Черенков; патентообладатель ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию». - №2010140410/15; заявл. 01.10.2010; опубл. 20.10.2012, Бюл. №3. - 4 с.

Изобретение относится к биомедицине, а именно к применению смесей, имитирующих цельную кровь и диагностические α-, β- и α,β-изогемагглютинирующие сыворотки для обучения студентов методикам определения групп крови по системе AB0 и резус-фактора. Применение смесей, имитирующих цельную кровь и диагностические α-, β- и α,β-изогемагглютинирующие сыворотки для обучения студентов методикам определения групп крови по системе AB0 и резус-фактора, включающее приготовление имитатора крови человека и имитаторов α-, β- и α,β-изогемагглютинирующих сывороток, где в качестве смесей, имитирующих цельную кровь, используют цельное или восстановленное сухое молоко, разведенное водой в соотношении 1:1, в качестве имитаторов изогемагглютинирующих сывороток используют воду и 2% раствор сульфосалициловой кислоты, далее проводят определение группы крови по системе AB0 по реакции агглютинации, причем в качестве красителя, вводимого в имитатор крови, используют 2% раствор понсо, а с помощью имитаторов сыворотки анти-резус и контрольной сыворотки дополнительно определяют резус-фактор, в качестве сыворотки анти-резус используют 2% раствор сульфосалициловой кислоты, при ее использовании определяют положительный резус-фактор Rh+, а в качестве контрольной сыворотки используют воду, при ее использовании определяют отрицательный резус-фактор Rh- и по результатам теста устанавливают резус-положительную или резус-отрицательную принадлежность крови. Способ обеспечивает 100% точность определения групп крови и резус-фактора, позволяет самостоятельно выполнить методики за счет их безопасности, простоты, воспроизводимости, однозначности интерпретации, низкой стоимости на лабораторных занятиях студентов медицинских и биологических специальностей вузов и колледжей. 5 табл., 5 пр.

Применение смесей, имитирующих цельную кровь и диагностические α-, β- и α,β-изогемагглютинирующие сыворотки для обучения студентов методикам определения групп крови по системе AB0 и резус-фактора, включающее приготовление имитатора крови человека и имитаторов α-, β- и α,β-изогемагглютинирующих сывороток, где в качестве смесей, имитирующих цельную кровь, используют цельное или восстановленное сухое молоко, разведенное водой в соотношении 1:1, в качестве имитаторов изогемагглютинирующих сывороток используют воду и 2% раствор сульфосалициловой кислоты, далее проводят определение группы крови по системе AB0 по реакции агглютинации, отличающийся тем, что в качестве красителя, вводимого в имитатор крови, используют 2% раствор понсо, а с помощью имитаторов сыворотки анти-резус и контрольной сыворотки дополнительно определяют резус-фактор, в качестве сыворотки анти-резус используют 2% раствор сульфосалициловой кислоты, при ее использовании определяют положительный резус-фактор Rh+, а в качестве контрольной сыворотки используют воду, при ее использовании определяют отрицательный резус-фактор Rh- и по результатам теста устанавливают резус-положительную или резус-отрицательную принадлежность крови.