Способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета у крыс Российский патент 2020 года по МПК G09B23/28 

Описание патента на изобретение RU2712153C1

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Согласно литературным источникам на сегодняшний день сахарный диабет является одной из актуальных медико-социальных проблем современного общества. Рост заболеваемости позволяет говорить о глобальной эпидемии сахарного диабета (Javeed N, Matveyenko AV. Circadian Etiology of Type 2 Diabetes Mellitus. Physiology (Bethesda). 2018;33(2):138-150. DOI: 10.1152/physiol.00003.2018; Schmidt AM. Highlighting Diabetes Mellitus: The Epidemic Continues. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2018;38(1):e1-e8. DOI: 10.1161/ATVBAHA.117.310221). Широкая распространенность сахарного диабета и многообразие патогенетических вариантов данного заболевания обусловливают актуальность поиска и разработки новых пероральных противодиабетических препаратов.

Одним из закономерно вытекающих осложнений сахарного диабета является постепенное снижение плотности костной ткани, приводящее к развитию остеопороза.

Для изучения патофизиологических изменений, в том числе и остеопороза, у экспериментальных животных на фоне сахарного диабета и поиска инновационных препаратов для лечения осложнений сахарного диабета в лабораторной практике наибольшее распространение получили стрептозотоцин-индуцированные модели СД. (А.А.Спасов, М.П.Воронкова, Г.Л.Снигур, Н.И.Чепляева, В.М.Чепурнова Экспериментальная модель сахарного диабета типа 2. Биомедицина. 2011. №3 С. 12-18).

Недостатком данного решения является то, что моделирование остеопороза на фоне СД требует поддержания гипергликемии в течение длительного времени, а при известных схемах моделирования стрептозотоцин-индуцированного СД происходит выбывание значительной части экспериментальных животных вследствие гибели или выздоровления. При описанной методике введение стрептозотоцина в дозе 65 мг/кг осуществляется внутрибрюшинно, что протекает с образованием спаечных процессов кишечника ввиду агрессивности среды вводимого вещества и требует предварительного введения никотинамида в дозе 230 мг/кг.

Задачей предлагаемого изобретения является создание более эффективного способа моделирования сахарного диабета у крыс, позволяющего сформировать остеопоротические нарушения в костной ткани с сохранением большего количества животных в эксперименте и получением стабильно высоких цифр гипергликемии на протяжении длительного периода.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного СД, подтверждаемый морфологическими изменениями костной ткани при микроскопии, снижением плотности костной ткани при денситометрии, а также низкой летальностью животных и стабильной гипергликемией.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета, включающий однократное введение стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг внутривенно в хвостовую вену крысам линии Wistar с дальнейшим мониторингом уровня гликемии, затем через 7 дней от первого введения повторное введение стрептозотоцина в дозе 20 мг/кг животным с уровнем гликемии менее 15 ммоль/л, после чего на 57 сутки при помощи аппарата мультиспектральной системы визуализации проводят анализ плотности костной ткани.

Основным преимуществом предлагаемого способа является двухэтапное введение стрептозотоцина, позволяющее снизить летальность у животных с высокой чувствительностью к стрептозотоцину и снизить процент выздоровления у животных с низкой чувствительностью к стрептозотоцину.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Исследование проводилось на 50 самцах крыс линии Wistar массой 200-250 г. Введение стрептозотоцина в 0,1 М цитратном буфере производили натощак в хвостовую вену, после чего в течение 24-48 ч экспериментальным животным заменяли воду на 5 % раствор глюкозы.

Первое введение стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг проводилось всем крысам. Через 7 дней после первого введения животным, имеющим уровень гликемии ниже 15 ммоль/л производили повторное введение стрептозотоцина в дозе 20 мг/кг. В течение эксперимента животные содержались в индивидуальных клетках, ежедневно фиксировались уровень глюкозы крови (Select OneTouch), объем выпитой жидкости и масса потребляемого корма.

На 3 сутки после начала эксперимента количество умерших крыс составило 7. Средняя концентрация глюкозы крови у выживших животных составил 14,1±2,7 ммоль/л. В последующие дни у 10 крыс из 43 наблюдалась тенденция к стойкому увеличению уровня глюкозы (<20 ммоль/л), в то время как у оставшихся уровень гликемии постепенно снижался, доходя до физиологических значений к седьмому дню эксперимента. После повторного введения стрептозотоцина у 51,5 % произошло стойкое повышение уровня глюкозы крови выше 20 ммоль/л, оставшиеся животные были исключены из эксперимента.

В последующие 1,5 месяца эксперимента у 55% животных уровень глюкозы составил от 20 до 33 ммоль/л и у 45% - выше 33 ммоль/л.

Было замечено, что животные, потреблявшие более 150 мл воды за сутки, имели уровень глюкозы крови выше 33,3 ммоль/л. Кроме того, в ходе наблюдений экспериментально был отработан оптимальный режим кормления крыс – 2 раза в день, утром и вечером, что обеспечило стабильно высокий уровень гипергликемии.

У 7 крыс в эксперименте возникло нагноение хвоста в месте инъекции стрептозотоцина, которое наблюдалось на 2-3 неделе наблюдения. Это нагноение интерпретировано как следствие паравазального введения стрептозотоцина и устранено с помощью обработки фукорцином.

На 57-е сутки при помощи аппарата мультиспектральной системы визуализации In-Vivo MS FX PRO производства компании Bruker с программным модулем денситометрии проводили анализ плотности костной ткани. Денситометрию проводили на изъятых и очищенных от окружающих тканей бедренных костях ex vivo. Анализу подвергались три участка бедренной кости: дистальный и проксимальный метафизы и диафиз. Учитывались следующие показатели: «Bone column density» (BCD) – характеризует степень затухания рентгеновского излучения при прохождении через столб длинной трубчатой кости; «Bone Surface Density» (BSD) – плотность поверхности костной ткани в изучаемой локализации. Первичные результаты подвергали статистической обработке в MS Excel с расчетом в группах средних значений и стандартных ошибок; достоверность отличий определяли по t-тесту Стьюдента.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Уровень глюкозы в крови у крыс с моделированием СД начиная с 3-го дня после введения стрептозотоцина достоверно превосходил таковой у интактных животных. При этом уровень гипергликемии нарастал в течение 21 дня, а затем держался на достигнутом уровне (±10%) до конца исследования.

При проведении денситометрии на 57 сутки обнаружили статистически значимое снижение изучаемых показателей плотности костной ткани у крыс с СД по сравнению с интактными животными, кроме того, изучаемые показатели варьировали в зависимости от области исследования.

Так, значения показателя «Bone column density» (BCD) составили у интактных крыс: в проксимальном метафизе – 7,04±0,18г/см3, в диафизе – 8,93±0,05г/см3, в дистальном метафизе – 6,71±0,29г/см3. В то же время значения данного показателя у крыс с СД равнялись 6,11±0,11г/см3, 7,99±0,09г/см3и 5,88±0,25г/см3соответственно (p<0,001). Значения показателя «Bone Surface Density» (BSD) составили у интактных крыс: в проксимальном метафизе – 0,292±0,001г/см2, в диафизе – 0,129±0,001г/см2, в дистальном метафизе – 0,296±0,02г/см2. В то же время значения данного показателя у крыс с СД равнялись 0,22±0,02г/см2 (p<0,05), 0,124±0,001г/см2 (p>0,05), и 0,225±0,001г/см2соответственно (p<0,05). Результаты денситометрического исследования бедренной кости ex vivo у крыс с 8-недельным сахарным диабетом и интактных животных приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Примечание: * – при р< 0,05 в сравнении с группой интактных животных.

Таким образом, применение предлагаемого изобретения позволит создавать более эффективный способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета, подтверждаемого морфологическими изменениями костной ткани при микроскопии, снижением плотности костной ткани при денситометрии, а также низкой летальностью животных и стабильной гипергликемией.

Похожие патенты RU2712153C1

название год авторы номер документа
Способ экспериментального моделирования сахарного диабета 2 типа в сочетании с менопаузой у самок крыс стока Wistar 2022
  • Тимкина Наталья Владимировна
  • Симаненкова Анна Владимировна
  • Байрамов Алекбер Азизага Оглы
  • Каронова Татьяна Леонидовна
  • Байрашева Валентина Кузьминична
  • Кириченко Анастасия Сергеевна
  • Гринева Елена Николаевна
RU2808010C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА И КОМБИНИРОВАННОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2013
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2565401C2
Способ создания трансляционной модели диабетического фенотипа хронической сердечной недостаточности 2023
  • Старченко Анастасия Дмитриевна
  • Лискова Юлия Владимировна
  • Стадников Александр Абрамович
  • Чернышева Татьяна Викторовна
  • Саликова Светлана Петровна
RU2817822C1
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА I ТИПА У КРЫС 2009
  • Закирьянов Артур Русланович
  • Великий Дмитрий Алексеевич
  • Онищенко Нина Андреевна
  • Клименко Елена Даниловна
  • Поздняков Олег Михайлович
RU2400822C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ УМЕНЬШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНСУЛИНУ И ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА, СПОСОБ УМЕНЬШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНСУЛИНУ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА ИНСУЛИНОМ И/ИЛИ ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ 2011
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2509572C2
Способ коррекции стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета у крыс с использованием лекарственного средства на основе амида гетероциклических кислот 2018
  • Корокин Михаил Викторович
  • Покровский Михаил Владимирович
  • Покровская Татьяна Григорьевна
  • Корокина Лилия Викторовна
  • Пересыпкина Анна Александровна
  • Гудырев Олег Сергеевич
  • Кочкарова Индира Султановна
  • Победа Анна Сергеевна
  • Автина Татьяна Валерьевна
  • Куликов Александр Леонидович
RU2687979C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ УМЕНЬШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНСУЛИНУ И ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА ИНСУЛИНОМ И/ИЛИ ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ 2010
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2531048C2
КОМПЛЕКСНОЕ СОЕДИНЕНИЕ ОКСОВАНАДИЯ (IV) С ДИМЕТИЛСУЛЬФОКСИДОМ, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИДИАБЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2014
  • Спасов Александр Алексеевич
  • Холуйская Светлана Николаевна
  • Воронкова Мария Павловна
  • Чепляева Наталья Ивановна
RU2559894C1
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В КОСТНОЙ ТКАНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОСТЕОПОРОЗЕ И ПЕРЕЛОМАХ НА ЕГО ФОНЕ L-НОРВАЛИНОМ 2013
  • Гудырев Олег Сергеевич
  • Раджкумар Денсинг Самуэл Радж
  • Файтельсон Александр Владимирович
  • Покровский Михаил Владимирович
  • Ремизов Павел Павлович
  • Соболев Михаил Сергеевич
  • Покровская Татьяна Григорьевна
  • Корокин Михаил Викторович
  • Кочкаров Владимир Исхакович
  • Арустамова Анна Александровна
  • Ванян Александр Шотаевич
  • Проценко Роман Викторович
  • Автина Татьяна Валерьевна
  • Затолокина Мария Алексеевна
RU2540926C1
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В КОСТНОЙ ТКАНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОСТЕОПОРОЗЕ И ПЕРЕЛОМАХ НА ЕГО ФОНЕ КОМБИНАЦИЕЙ L-НОРВАЛИНА И РОЗУВАСТАТИНА 2013
  • Гудырев Олег Сергеевич
  • Раджкумар Денсинг Самуэл Радж
  • Файтельсон Александр Владимирович
  • Покровский Михаил Владимирович
  • Ремизов Павел Павлович
  • Соболев Михаил Сергеевич
  • Покровская Татьяна Григорьевна
  • Корокин Михаил Викторович
  • Кочкаров Владимир Исхакович
  • Арустамова Анна Александровна
  • Ванян Александр Шотаевич
  • Проценко Роман Викторович
  • Хощенко Юрий Александрович
  • Григоренко Александр Петрович
RU2540927C1

Реферат патента 2020 года Способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета у крыс

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения патофизиологии остеопороза на фоне сахарного диабета и поиска инновационных препаратов для лечения осложнений сахарного диабета. Способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета включает однократное введение стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг внутривенно в хвостовую вену крысам линии Wistar с дальнейшим мониторингом уровня гликемии, затем через 7 дней от первого введения производится повторное введение стрептозотоцина в дозе 20 мг/кг животным с уровнем гликемии менее 15 ммоль/л, после чего на 57 сутки при помощи аппарата мультиспектральной системы визуализации проводят анализ плотности костной ткани. Изобретение обеспечивает снижение летальности у животных с высокой чувствительностью к стрептозотоцину и снижение процента выздоровления у животных с низкой чувствительностью к стрептозотоцину. 1 табл., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 712 153 C1

Способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета, включающий однократное введение стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг внутривенно в хвостовую вену крысам линии Wistar с дальнейшим мониторингом уровня гликемии, затем через 7 дней от первого введения повторное введение стрептозотоцина в дозе 20 мг/кг животным с уровнем гликемии менее 15 ммоль/л, после чего на 57 сутки при помощи аппарата мультиспектральной системы визуализации проводят анализ плотности костной ткани.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2020 года RU2712153C1

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА I ТИПА У КРЫС 2009
  • Закирьянов Артур Русланович
  • Великий Дмитрий Алексеевич
  • Онищенко Нина Андреевна
  • Клименко Елена Даниловна
  • Поздняков Олег Михайлович
RU2400822C1
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ АЛЛОКСАНОВОГО ДИАБЕТА 2013
  • Данилова Ирина Георгиевна
  • Гетте Ирина Федоровна
  • Булавинцева Татьяна Сергеевна
RU2534411C1
Способ моделирования гипогонадизма, вызванного метаболическими нарушениями 2016
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Скурихин Евгений Германович
  • Ермакова Наталия Николаевна
  • Пахомова Ангелина Владимировна
  • Першина Ольга Викторовна
  • Крупин Вячеслав Андреевич
  • Кудряшова Анастасия Игоревна
RU2611936C1
А.А
Спасов, М.П
Воронкова, Г.Л
Снигур, Н.И
Чепляева, В.М
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
Биомедицина
Способ приготовления лака 1924
  • Петров Г.С.
SU2011A1

RU 2 712 153 C1

Авторы

Покровский Михаил Владимирович

Гудырев Олег Сергеевич

Замыцкий Ярослав Михайлович

Солдатов Владислав Олегович

Поветка Елена Евгеньевна

Даты

2020-01-24Публикация

2019-07-30Подача