СПОСОБ ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕЧЕНИ ОЛЕНЕЙ Российский патент 2020 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к гельминтологическим исследованиям и может быть использовано для качественного и количественного учета гельминтов при ветсанэкспертизе органов или при выявлении причины смерти животного.

Известен способ гельминтологических исследований печени животных, при котором печень помещают в сосуд белого цвета, заливают водой, разминают руками и несколько раз промывают водой сливая через край сосуда надосадочную жидкость, а осадок исследуют на содержание гельминтов (справочник «Гельминтологические исследования животных и окружающей среды», Г.А. Котельников, М. «Колос» 1984 г. стр. 124).

Однако, данный способ позволяет выявлять в основном половозрелые формы фасциол и дикроцелиумов, так как преимагинальные (юные) формы, располагаясь при промываниях в над осадочной жидкости, при ее сливе удаляются в месте с ней.

Известен способ гельминтологического исследования печени животных обеспечивающий выявление половозрелых и юных форм трематод, при котором печень разрезают по желчным протокам на крупные куски и промывают в кювете с теплой водой, при этом живые гельминты оседают на дно и исследуются. Далее куски печени обрабатывают по вышеприведенному способу (разминают, замачивают водой и несколько раз промывают), а надосадочную жидкость фильтруют через сетку в отдельный сосуд, сетку промывают и задержавшуюся массу исследуют (См. там же, стр. 126) - прототип.

Недостатком данного способа является отсутствие возможности единовременного выявления половозрелых и юных форм гельминтов, что усложняет и удлиняет процесс. Кроме этого, разминание печени вручную довольно затруднительно из-за плотной паренхимы органа, при этом гельминты рвутся и деформируются, что затрудняет подсчет особей, желчные и кровеносные протоки с трудом разрываются руками, в результате чего приходится делать продольные разрезы. Процесс разминания сам по себе предопределяет наличие в осадке большого количества мелких и средних частей паренхимы от 0,5 до 2,5 см в диаметре, красящих пигментов и остаточной крови, поэтому осадок промывают не менее 5-6 раз, при этом подсчет гельминтов, из-за замутненности воды, приходится проводить партиями (8-12 раз) так как визуальный подсчет затруднен.

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение является обеспечение единовременного выявления половозрелых и юных форм гельминтов, снижение трудоемкости и времени процесса исследования.

Указанный технический результат достигается тем, что печень нарезается поперек желчных протоков на пластины толщиной 6-8 мм, при этом каждую пластину однократно промывают проточной водой, над сетчатой тканью. После чего содержимое ткани смывается в емкость для отстаивания и подсчета половозрастных и юных форм гельминтов, при этом размер ячеек сетчатой ткани не более 0,1×0,1 мм, а сетчатая ткань может быть закреплена на решетчатом поддоне.

Определение оптимальной толщины среза печеночных пластин проводили на 6 органах (у семейства оленевых желчный пузырь отсутствует), предварительно разрезав каждую печень на 3 равные доли. Поскольку паразиты в печени располагаются неравномерно, для уменьшения погрешности в исследованиях для каждой из толщин, от каждого органа брали разные части печени. Например, для толщины разреза в 3-5 мм от 1 печени взяли крайнюю правую часть органа; от 2 печени среднюю часть органа; от 3 печени крайнюю левую часть; от 4 печени так же крайнюю левую долю; от 5 крайнюю правую часть органа и от 6 печени среднюю долю. С другими вариантами толщины разрезов (6-8 и 9-12 мм) поступили аналогично. Таким образом, на каждый из исследуемых вариантов толщины получилось по 6 частей от органов по 2 доли, из которых одинаковы (2 левых, 2 средних, 2 правых) всего 18 частей.

В таблице 1 указано среднее значение количества паразитов в исследуемых органах.

Как показали исследования эффективность однократного (первого) промывания (количество вымытых паразитов, %) при толщине пластин 3, 4, 5 мм в опыте составила 97,6%, однако на практике очень сложно нарезать пластины такой толщины из-за эластичной структуры печени. Пластины толщиной 6, 7, 8 мм нарезаются свободно и так же предопределяют высокую эффективность первого промывания (95,0%) по которой можно судить об интенсивности инвазии, в то время как при нарезке пластин размером 9, 10, 11, 12 мм наблюдается высокий процент не отмытых гельминтов (14,5%) при котором эффективность первого промывания составила 85,5%, что вызывает необходимость осуществления повторных промываний. Поэтому оптимальной толщиной пластин печени следует считать 6-8 мм, при которой после первого промывания можно судить об интенсивности инвазии.

В таблицах 2 и 3 приведены сравнительные испытания заявленного способа и способа по прототипу. В каждом опыте было задействовано четыре органа.

Эффективность однократного (первого) промывания по заявленному способу.

Эффективность первого (однократного) промывания по прототипу.

Как показали сравнительные испытания, эффективность однократного промывания по заявленному способу составила 92,4-98,4% независимо от интенсивности инвазии органа, что предопределило возможность использования по заявленному способу однократного промывания осадка для констатации интенсивности инвазии, следует отметить, что время исследования органа сокращается до 25-30 минут, в то время как эффективность первого промывания по прототипу не дает ясной картины интенсивности инвазии, что предопределяет необходимость проведения 4-6 промываний, при длительности исследований органа от 60 до 100 минут. Процент эффективности первого промывания по прототипу находился в пределах от 57,8 до 83,7%

Пример осуществления способа. Печень обмывали в раковине от крови и химуса, который не редко попадает на поверхность органа при нутровке туши или вскрытии трупа животного. Далее укладывали печень на плоскую поверхность и разрезали поперек желчных протоков на пластины толщиной 6-8 мм. Каждую пластину промывали проточной водой над сетчатой тканью с ячеей 0,1×0,1 мм закрепленной на решетчатом поддоне. Кровь, желчь и гельминты под струей воды хорошо вымываются из печеночных протоков пластин, а на сетке остаются половозрелые паразиты и юные формы, небольшие сгустки крови, полупрозрачные пленки оболочки печени, что в малой степени, в дальнейшем, снижает прозрачность воды, в которой производили подсчет гельминтов. Содержимое сетчатой ткани смывали в емкость и после 2 минут отстаивания проводили подсчет юных форм паразитов плавающих на поверхности. После этого надосадочный слой воды сливали, а в осадке продолжали подсчет половозрелых гельминтов.

Время промывания одной пластины составляло 10-16 секунд в зависимости от размеров задействованной части печени (имеются в виду длина и ширина пластины).

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к гельминтологии, и может быть использовано для качественного и количественного учета гельминтов при ветсанэкспертизе органов или при выявлении причин смерти животного. Способ гельминтологического исследования печени оленей характеризуется тем, что печень нарезается поперек желчных протоков на пластины толщиной 6-8 мм, которые промываются под струей воды над сетчатой тканью, после чего содержимое сетчатой ткани смывается в емкость, где производится учет половозрастных и юных форм гельминтов. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 1 пр.

1. Способ гельминтологического исследования печени оленей, характеризующийся тем, что печень нарезают поперек желчных протоков на пластины толщиной 6-8 мм, при этом каждую пластину однократно промывают проточной водой над сетчатой тканью, после чего содержимое сетчатой ткани смывается в емкость для отстаивания и подсчета юных и половозрелых гельминтов.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что размер ячеек сетчатой ткани не превышает 0,1×0,1 мм.

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что сетчатая ткань может быть закреплена на решетчатом поддоне.