ПЕПТИДЫ МОРСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И НУКЛЕОТИДЫ РЫБ, КОМПОЗИЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ Российский патент 2020 года по МПК A61K38/01 A61K31/7052 A61P3/10 

Область техники, к которой относится изобретение

Предлагаются продукты и побочные продукты, полученные из рыб, и их применение для поддержания здоровья, в питании и пищевых продуктах, а также в медицинских лечебных мероприятиях.

Уровень техники

Содержание глюкозы в крови (гликемия) после приема пищи наряду с гиперинсулинемией и липидимией играют роль в развитии хронических метаболических заболеваний, например ожирения, сахарного диабета типа 2 и ишемической болезни сердца. Имеются данные, связывающие постпрандиальную гликемию или колебания уровня глюкозы в крови с развитием указанных состояний или с ухудшением показателей умственной и физической деятельности.

Имеющиеся данные показывают, что если перед приемом пищи потребляются белки вместе с углеводами, то постпрандиальный уровень глюкозы в крови меньше; сахаропонижающий эффект в особенности связан с белками молочных продуктов, например с белками сыворотки. В проведенных недавно исследованиях, в которых сравнивался эффект белков сыворотки и их гидролизата, было показано, что потребление сывороточных белков перед приемом пищи снижает количество съеденной пищи, уровень глюкозы и инсулина после еды и отношение суммарной площади под кривой (AUC) содержания глюкозы и инсулина в крови зависимым от дозы образом. В противоположность этому белковый гидролизат не влиял на регуляцию уровня глюкозы в крови ни механизмом, зависимым от инсулина, ни механизмом, не зависимым от инсулина.

Результаты исследований также свидетельствуют, что белки из морских источников перспективны как ингредиенты функциональных пищевых продуктов, используемых при ряде проблем со здоровьем, связанных с метаболическим синдромом, включая стойко повышенный уровень сахара в крови и диабет типа 2, а также с анаболизмом и катаболизмом жиров и белков в связи с управлением составом тела и естественным возрастным атрофическим дегенеративным изменением скелетной мускулатуры (саркопенией).

Исследования также свидетельствуют, что пептиды из морских источников в сочетании с нуклеотидами из морских источников могут ослаблять воспаление и стимулировать функционирование желудочно-кишечного тракта.

Раскрытие изобретения

В настоящем документе предлагается способ снижения концентрации глюкозы в крови после приема пищи у индивида, включающий введение ему до или во время приема пищи, эффективного количества комбинации пептидов из морских источников и нуклеотидов, полученных из рыб, достаточного для снижения концентрации глюкозы в крови.

Также предлагается применение комбинации пептидов из морских источников и нуклеотидов, полученных из рыб, для снижения концентрации глюкозы в крови у индивида после приема пищи, включающий введение этому индивиду до или после приема пищи эффективного количества указанной комбинации.

Также предлагается композиция, содержащая комбинацию пептидов, выделенных из морских источников, и нуклеотидов, выделенных из рыб, в соотношении около 10:1 (масса/масса) от суммарной массы композиции.

Также предлагается способ повышения уровня глюкагон-подобного пептида-1 (GLP-1) в крови индивида, включающий введение индивиду, нуждающемуся в понижении уровня GLP-1 в крови, эффективного количества пептидов морского происхождения, причем эти пептиды вводят в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В частности, пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

Также предлагается способ снижения постпрандиальной концентрации уровня грелина в крови индивида, включающий введение индивиду, нуждающемуся в понижении уровня грелина в крови, эффективного количества пептидов морского происхождения, причем эти пептиды вводят в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В частности пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

Также предлагается способ обеспечения чувства насыщения у индивида, включающий введение нуждающемуся в том индивиду пептидов морского происхождения в дозе от около 20 мг на 1 кг массы тела до 25 мг на 1 кг массы тела, причем эти пептиды вводят в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения.

Осуществление изобретения

Для описаний в настоящем документе и в прилагающейся формуле изобретения единственное число включает значение множественного числа, если только из контекста не следует с очевидностью иного. Таким образом, например, слово «соединение» относится к более чем одному соединению. Также союз «или» означает «и/или», если только не указано иного. Сходным образом слова «содержать» и «включать» и их производные (например, «содержащий» и включающий») употребляются как взаимозаменяемые и не носят ограничивающего характера.

В настоящем документе предлагается способ снижения постпрандиальной концентрации глюкозы в крови у индивида, включающий введение ему эффективного количества комбинации пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, достаточного для понижения концентрации глюкозы в крови у данного индивида, причем указанная комбинация вводится в организм до приема пищи или во время него.

В одном из воплощений изобретения индивид является животным, конкретнее – млекопитающим.

В одном из воплощений индивид является человеком.

В одном из воплощений изобретения индивид нуждается в снижении уровня глюкозы в крови.

В одном из воплощений уровень GLP-1 в крови индивида повышается, в частности, когда данный индивид нуждается в таком повышении.

В одном из воплощений предлагается способ, включающий введение эффективного количества комбинации пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, индивиду, у которого уровень гликозилированного гемоглобина (HbA1C) в крови равен или превышает 6 на протяжении промежутка времени, достаточного для снижения уровня HbA1C в крови, в частности, когда уровень HbA1C в крови превышает 6,5, конкретнее - когда уровень HbA1C превышает 7.

В одном из воплощений предлагается способ, включающий введение эффективного количества комбинации пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, индивиду на протяжении промежутка времени, достаточного для снижения резистентности к инсулину у данного индивида, в частности, когда данный индивид нуждается в таком снижении.

В одном из воплощений предлагается способ управления уровнем глюкозы в крови у индивида.

В одном из воплощений предлагается фармацевтический препарат, содержащий комбинацию пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, в количестве, достаточном для лечения, который вводится индивиду, нуждающемуся в таком лечении в связи с наличием у него состояния, выбираемого из группы, состоящей из преддиабетического состояния, диабета или ожирения.

В одном из воплощений предлагается добавка к пище, содержащая комбинацию пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, в количестве, достаточном для поддержания у индивида нормального уровня сахара в крови и/или нормальной массы тела.

В одном из воплощений предлагается пищевой продукт, конкретнее – функциональный пищевой продукт, содержащий комбинацию пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, в количестве, достаточном для поддержания у индивида нормального уровня сахара в крови.

В одном из воплощений предлагается пищевой продукт, конкретнее – функциональный пищевой продукт, содержащий комбинацию пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, в количестве, достаточном для поддержания у индивида уровня глюкозы в крови.

В одном из воплощений данного изобретения предлагается способ, включающий потребление пищевого продукта, конкретнее – функционального пищевого продукта, содержащего комбинацию пептидов морского происхождения и нуклеотидов, полученных из рыб, в количестве, достаточном для управления уровнем глюкозы в крови индивида.

Также предлагается способ повышения уровня глюкагон-подобного пептида-1 (GLP-1) в крови индивида, включающий введение индивиду, нуждающемуся в понижении уровня GLP-1 в крови, эффективного количества пептидов морского происхождения, причем эти пептиды вводят в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В частности пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

Также предлагается способ снижения постпрандиальной концентрации грелина в крови индивида, включающий введение индивиду, нуждающемуся в понижении уровня грелина в крови, эффективного количества пептидов морского происхождения, причем эти пептиды вводят в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В частности, пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

В одном из воплощений предлагается способ повышения постпрандиальной концентрации глюкагон-подобного пептида-1 (GLP-1) в крови индивида, включающий введение нуждающемуся в том индивиду от около 20 мг на 1 кг массы тела до 25 мг на 1 кг массы тела. В частности, пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

В одном из воплощений предлагается способ снижения постпрандиальной концентрации грелина в крови индивида, включающий введение индивиду, нуждающемуся в понижении уровня грелина в крови, от около 20 мг на 1 кг массы тела до 25 мг на 1 кг массы тела. В частности, пептиды морского происхождения вводят индивиду до или во время приема пищи.

В одном из воплощений предлагается способ обеспечения чувства насыщения у индивида, включающий введение нуждающемуся в том индивиду от около 20 мг на 1 кг массы тела до 25 мг на 1 кг массы тела. В частности, пептиды морского происхождения вводят индивиду в течение промежутка времени, достаточного для обеспечения у него чувства насыщения. В другом воплощении данного изобретения предлагается способ обеспечения чувства насыщения у индивида в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения, в частности при содержании указанных нуклеотидов менее 10%, конкретнее менее 5%, конкретнее менее 1%, конкретнее менее 0,1%, еще более конкретно – при полном отсутствии нуклеотидов морского происхождения.

В одном из воплощений предлагается добавка к пище, содержащая пептиды морского происхождения в количестве, достаточном для поддержания у индивида нормального уровня GLP-1, причем эту добавку принимают в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В одном из воплощений данного изобретения предлагается добавка к пище, содержащая пептиды морского происхождения в количестве, достаточном для поддержания у индивида нормального уровня грелина, причем эту добавку принимают в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения.

В одном из воплощений изобретения предлагается пищевой продукт, конкретнее – функциональный пищевой продукт, содержащий пептиды морского происхождения в количестве, достаточном для поддержания у индивида нормального уровня GLP-1, причем этот пищевой продукт, конкретнее – функциональный пищевой продукт, потребляют в отсутствие (в основном) нуклеотидов морского происхождения. В одном из воплощений изобретения предлагается пищевой продукт, конкретнее – функциональный пищевой продукт, содержащий пептиды морского происхождения в количестве, достаточном для поддержания у индивида уровня грелина в крови.

В одном конкретном воплощении поддержание уровня GLP-1 и нормального состояния здоровья и/или уровня грелина или нормального состояния здоровья включает управление чувством голода, чувством насыщения, массой тела и/или ожирением у индивида. В частности, управление уровнем GLP-1 и/или уровнем грелина обеспечивает поддержание нормальной массы тела.

В одном из воплощений предлагается фармацевтический препарат, содержащий пептиды морского происхождения в количестве, достаточном для лечения ожирения.

Также предлагается применение комбинации пептидов из морских источников и нуклеотидов из рыб, описанной выше.

В одном из воплощений предлагаются пептиды морского происхождения, используемые в сочетании с нуклеотидами из морских источников, в количестве от около 5 мг до около 50 мг на 1 кг массы тела индивида, в частности от около 5 мг до около 40 мг на 1 кг массы тела, конкретнее от около10 мг до около 30 мг на 1 кг массы тела, еще конкретнее около 20 мг на 1 кг массы тела индивида. В более конкретном воплощении пептиды морского происхождения, используемые в сочетании с нуклеотидами из морских источников, предлагаются в количестве около 10 мг на 1 кг массы тела индивида. В другом воплощении изобретения пептиды морского происхождения, используемые в сочетании с нуклеотидами из морских источников, предлагаются в количестве около 25 мг на 1 кг массы тела индивида.

В одном из воплощений предлагаются нуклеотиды морского происхождения в количестве от около 0,8 мг до около 8 мг на 1 кг массы тела индивида, в частности от около 0,8 мг до около 6 мг на 1 кг массы тела, конкретнее - от около 2 мг до около 6 мг на 1 кг массы тела, еще конкретнее - около 4 мг на 1 кг массы тела индивида. В более конкретном воплощении нуклеотиды морского происхождения предлагаются в количестве около 2 мг на 1 кг массы тела индивида. В другом воплощении нуклеотиды морского происхождения предлагаются в количестве около 3 мг на 1 кг массы тела индивида.

В одном из воплощений данного изобретения предлагается способ, включающий введение индивиду пептидов морского происхождения в разовой дозе по меньшей мере в количестве, выбираемом из группы, состоящей из 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 125 мг, 150 мг, 175 мг, 200 мг, 225 мг, 250 мг, 275 мг, 300 мг, 325 мг, 350 мг, 400 мг, 425 мг, 450 мг, 475 мг, 500 мг, 1000 мг, 1500 мг 2000 мг, 2500 мг и 3000 мг. В одном из конкретных воплощений изобретения разовая доза включает нуклеотид из рыб в количестве, составляющем около 10% от массы пептидов морского происхождения, конкретно - около 15% от массы пептидов морского происхождения, более конкретно - около 20% от массы пептидов морского происхождения, еще конкретнее - около 25% от массы пептидов морского происхождения.

В одном из воплощений изобретения пептиды морского происхождения являются частью пищевого продукта, конкретнее - функционального пищевого продукта, состав которого таков, что количество пептидов морского происхождения в одной порции составляет 200-2500 мг.

В одном из воплощений изобретения пептиды морского происхождения и нуклеотиды морского происхождения, в частности дезоксирибонуклеотиды в виде натриевой соли, присутствуют в одной порции пищевого продукта, конкретнее - функционального пищевого продукта, в соотношении от 1:4 до 1:10. Содержание нуклеотидов морского происхождения может варьировать от 20 мг до 250 мг. В одном из воплощений изобретения предлагается способ, включающий введение индивиду нуклеотидов морского происхождения в разовой дозе по меньшей мере в количестве, выбираемом из группы, состоящей из 3 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 13 мг, 15 мг, 18 мг, 20 мг, 23 мг, 25 мг, 28 мг, 30 мг, 33 мг, 35 мг, 40 мг, 44 мг, 45 мг, 48 мг, 50 мг, 100 мг, 150 мг, 200 мг, 250 мг и 300 мг. В одном из конкретных воплощений изобретения разовая доза включает нуклеотиды из рыб в количестве, составляющем около 10% от массы пептидов морского происхождения, конкретно - около 15% от массы пептидов морского происхождения, более конкретно - около 20% от массы пептидов морского происхождения, еще конкретнее - около 25% от массы пептидов морского происхождения.

В другом воплощении изобретения предлагается композиция, содержащая комбинацию выделенных из морских источников пептидов и выделенных из рыб нуклеотидов в соотношении (пептиды:нуклеотиды) от около 10:1 до около 2:1, в частности от около 6,4:1 до около 4:1, конкретнее около 4:1 суммарной массы указанной комбинации.

Также в настоящем документе предлагается применение пептидов из морских источников и нуклеотидов из рыб для снижения постпрандиальной концентрации глюкозы в крови индивида, включающее введение этому индивиду эффективного количества комбинации пептидов из морских источников и нуклеотидов из рыб, достаточного для снижения концентрации глюкозы в крови данного индивида.

Пептиды из морских источников могут быть получены, например (не ограничиваясь перечисленными здесь источниками) из рыб, морских водорослей, ракообразных и моллюсков. В настоящем документе предлагаются пептиды из морских источников, выбираемых из группы, состоящей из рыб, морских водорослей, ракообразных и моллюсков. В одном конкретном воплощении изобретения пептиды морского происхождения являются пептидами из рыб. В настоящем документе термин «выделенные» применительно к пептидам морского происхождения означает, как правило, гидролизат белков, полученных путем соответствующей обработки морских источников, конкретнее – рыб. В настоящем документе термин «выделенные» применительно к нуклеотидам рыб означает ДНК рыб или ее фрагменты и физиологически приемлемые их соли, в частности соли натрия. В одном конкретном воплощении изобретения выделенные из рыб нуклеотиды содержат ДНК, экстрагированную из рыбьих молок (см., например, патент Норвегии № 20014670). В одном конкретном воплощении изобретения рыбьи нуклеотиды представляют собой по существу чистую ДНК или ее фрагменты, в частности эти нуклеотиды содержат менее 2% белка. Термин «выделенные» в контексте данного изобретения не подразумевает ограничения возможностей практического осуществления воплощений данного изобретения с целью объединить выделенные ингредиенты, например, с рыбой или продуктами из рыб, при изготовлении фармацевтической продукции, добавок к пище или пищевых продуктов, конкретнее – функциональных пищевых продуктов.

В одном из воплощений изобретения предлагается способ получения пептидов из морских источников, включающий:

- смешивание материала морского происхождения, служащего сырьем, с водой и ферментом, в результате чего получается сырьевая смесь; в частности, фермент выбирается из числа эндопептидаз;

- гомогенизирование полученной сырьевой смеси, в результате чего получается гомогенат;

с) нагревание полученного гомогената в течение промежутка времени продолжительностью до около 45 минут, в результате чего получается продукт инкубации;

d) инактивирование фермента, в результате чего получается продукт инкубации. содержащий инактивированный фермент;

е) при необходимости отделение костей от продукта инкубации, в результате чего получается продукт инкубации, содержащий растворимую в воде фракцию, богатую белком;

f) отделение водорастворимой и богатой пептидами фракции от остальной части продукта инкубации, в результате чего получается пептидный продукт – гидролизат;

g) при необходимости фильтрование и ультрафильтрация полученного гидролизата для удаления микрочастиц; и

h) при необходимости высушивание полученного гидролизата распылением, в результате чего получается сыпучий порошок.

В одном из воплощений изобретения выделенные из морских источников пептиды - это пептиды морского происхождения, по меньшей мере 70% которых, в частности, по меньшей мере 75% и конкретнее - по меньшей мере 85%, имеют молекулярную массу менее 5000 дальтон (Да). В другом воплощении изобретения 90% пептидов морского происхождения имеют молекулярную массу менее 10 000 (2) Дa. В одном из воплощений данного изобретения в пептидах морского происхождения содержание безводного белка составляет 95%. В одном конкретном воплощении изобретения пептиды морского происхождения характеризуются распределением по молекулярной массе, представленном как «профиль I»:

Пептид (молекулярная масса, Да) Содержание (на сухой вес)

>20 кДа 0-5%

15 кДа-20 кДа 0-5%

10 кДа-15 кДа 0-5%

8 кДа-10 кДа 0-5%

6 кДа-8 кДа 0-5%

4 кДа-6 кДа 0-10%

2 кДа-4 кДа 0-15%

1 кДа-2 кДа 0-50%

0,5 кДа-1 кДа 0-50%

0,2 кДа-0,5 кДа 0-75%

<0,2 кДа 0-75%.

Суммарное содержание пептидов 100% (на сухой вес).

В одном из воплощений изобретения распределение пептидов по молекулярной массе в килодальтонах (в расчете на сухой вес каждый независимо от других) следующее («профиль 2»):

Пептид (молекулярная масса) Содержание (на сухой вес)

>20 кДа около <0,1%

15 кДа-20 кДа около <0,1

10 кДа-15 кДа около <0,1

8 кДа -10 кДа около 0,1

6 кДа -8 кДа около 0,5%

4 кДа -6 кДа около 1,9

2 кДа -4 кДа около 6,3

1 кДа -2 кДа около 13,0

0,5 кДа-1 кДа около 18,5

0,2 кДа-0,5 кДа около 23,8

<0,2 кДа около 24,0

Свободные аминокислоты 0-20%, в частности около 3,5

Отношение

незаменимые аминокислоты:заменимые аминокислоты 0,4-0,9, в частности около 0,7

В одном из воплощений изобретения суммарное количество аминокислот с разветвленной боковой цепью составляет или превышает около 15,31% от общего количества аминокислот.

В одном из воплощений изобретения количество незаменимых аминокислот составляет около 36,70% от общего количества аминокислот.

В одном из воплощений изобретения пептиды морского происхождения такие, как описано в патенте Норвегии № 20040450.

Получение пептидов из морского источника, как правило, начинается с измельчения свежей или замороженной мышечной ткани рыб, после чего ее смешивают с водой в соотношении 1:1 в инкубаторе (например, в инкубаторе объемом 1-20 м³, указанный диапазон не имеет ограничительного характера). Увеличивают температуру до 50-55°C, перемешивая смесь предпочтительно со скоростью 50-80 об/мин. К смеси прибавляют ферментный «коктейль», состоящий из смеси протеаз и пептидаз (например, продукт Protamex^® производства компании NOVOZYMES, Дания) и доводят температуру до около 50-55°C; полученный гомогенат инкубируют в течение 45 минут при температуре 50-55°C и pH 6-8, предпочтительно при рН 6-7. Затем температуру увеличивают до 85-90°C и держат при этой температуре в течение 10-15 минут для того, чтобы ферменты инактивировались. Продукт указанной инкубации пропускают через сито, чтобы удалить косточки и частицы ткани, после чего отделяют растворимую фракцию от не гидролизуемого ферментами/нерастворимого материала путем центрифугирования; полученную растворимую фракцию, богатую пептидами, обезвоживают, в результате чего получается концентрат, который высушивают распылением, так что получается порошок.

Аминокислотный состав пептидов морского происхождения, полученных описанным выше способом, представлен в таблице 1.

Taблица 1.Содержание аминокислот (в расчете на сухой вес)

Аминокислота Суммарно (мг/г) Свободные (мг/г) % от суммарного Незаменимые Гистидин 13,5 0,26 1,93 Треонин 30,9 1,20 3,88 Метионин 22,1 2,30 10,41 Фенилаланин 23,2 2,75 11,85 Валин 36,9 1,94 5,26 Изолейцин 30,1 1,91 6,35 Лейцин 60,3 6,35 10,53 Лизин 71,3 1,36 1,91 Триптофан 6,0 0,48 8,00 Суммарно незаменимые 367,0 18,55 5,05 Суммарно разветвленные 153,1 10,21 6,66 Заменимые Аспарагиновая к-та 73,32 1,18 1,49 Аспарагин - 0,38 - Глутаминовая к-та 125,0 5,30 4,24 Глутамин - 0,78 - Гидроксипролин 1,0 0,08 8,00 Серин 36,0 1,11 3,08 Глицин 50,9 1,22 2,40 Аланин 47,8 3,26 6,82 Пролин 29,7 0,49 1,65 Тирозин 22,7 1,43 6,30 Аргинин 51,1 1,47 2,88 Цистин Нет данных 0,01 - Суммарно заменимые 521 16,96 3,25 Таурин 6,6 6,60 100 Суммарно все аминокислоты
аминокислоты 737,8 35,26 4,77 0,70 1,09

Химический состав пептидов морского происхождения, полученных, как описано выше, представлен в таблице 2. (Мышьяк присутствует в связанном виде в составе органических соединений и не токсичен).

Taблица 2. Химический состав

Основные компоненты Содержание (%) Белки(Nx6,25) > 88,0 Жиры (суммарно) < 0,2 Углеводы 0 Вода < 3,0 Зольные вещества 10,0 Минеральные вещества Соль (NaCl) 0,1 Натрий 1,7 Хлорид 0,07 Тяжелые металлы частей на миллион Свинец 0,1 Кадмий 0,03 Ртуть 0,11 Мышьяк 49,0

Состав микрофлоры, присутствующей в препарате пептидов морского происхождения, полученном, как описано выше, представлен в таблице 3.

Таблица 3. Микробиологические показатели

Микроорганизмы Количество на 1 г порошка Cуммарно (30^oC) 100 Enterobacteriaceае (37^oC) 0 E. coli (44,5^oC) 0 Staphylococcus(коагулазоположительные) (коагулазоположительные) 0 ASR-Clostridium (37^oC) 50 ASR-Clostridium (37^oC) – 2 суток 50 Salmonella spp Нет/25 г Listeria monocytogenes 0 Плесневые грибы < 10 Дрожжевые грибы < 10

Распределение пептидов по молекулярной массе в пептидном гидролизате из морских источников, полученном, как описано выше, представлено в таблице 4.

Taблица 4. Распределение пептидов по молекулярной массе в гидролизате белка из морских источников

Молекулярная масса Аминокислоты г/100г
растворимых пептидов г/100 г
сухой массы Хроматографические
данные > 20 000 Да < 0,1 0 20 000-15 000 Да < 0,1 0 15 000-10 000 Да < 0,1 0 10 000-8000 Да 88-71 0,1 0,09 8000-6000 Да 70-53 0,6 0,54 6000-4000 Да 52-36 2,1 1,89 4000-2000 Да 35-18 7,2 6,48 2000-1000 Да 17-10 14,8 13,32 1000-500 Да 9-5 21,0 18,90 500-200 Да 4-2 27,0 24,30 < 200 Да < 2 27,2 24,48 Расчетные значения Свободные аминокислоты 5,1 4,59 Дипептиды 19,89 > 10 000 Да
> 88
0,1
0 >88 0,1 0 0 < 10 000 Да
< 88 <88 99,9 9 90,0 < 2000 Да
< 17 <17
< <17 90,0 0 81,0 < 1000 Да
< 9
75,2
67,7 <9 75,2 67,7

В расчетах для представленных результатов использовались следующие величины:

- Средняя молекулярная масса аминокислот = 132;

- Средняя молекулярная масса аминокислотного остатка в составе пептида = 113,5;

- Молекулярная масса наименьшего возможного дипептида (глицил-глицина) = 132;

- Молекулярная масса наибольшего возможного дипептида (триптил-триптофана) = 390.

В другом воплощении данного изобретения предлагается разовая доза, содержащая эффективное количество пептидов морского происхождения и нуклеотидов из рыб.

В некоторых воплощениях данного изобретения пептиды морского происхождения и/или нуклеотиды из рыб вводят индивиду в виде единой (не составной) лекарственной формы, например одну лекарственную форму или две, или более лекарственных форм. В настоящем документе термин «лекарственная форма» относится к физической форме для пути введения препарата в организм. Термин «лекарственная форма» может относиться к любой обычно используемой или приемлемой с медицинской точки зрения форме для введения препарата, например, к формам для перорального введения, формамс для внутривенного введения или формам для внутрибрюшинного введения. В некоторых воплощениях данного изобретения пептиды морского происхождения и/или нуклеотиды из рыб вводят в виде единой (не составной) лекарственной формы, например как разовую дозу. В настоящем документе термин «разовая доза» относится к количеству пептидов морского происхождения и/или нуклеотидов из рыб, вводимому индивиду в виде единой (не составной) лекарственной формы, например, в виде желатиновой капсулы. Термин «разовая доза» также может относиться к единой (не составной) лекарственной форме с одной дозой пригодного в контексте данного изобретения твердого вещества, жидкости, сиропа, безалкогольного напитка или пищевого продукта, в частности функционального пищевого продукта, например (не ограничиваясь указанным здесь) тех, что используются для введения в организм фармацевтических препаратов, добавок к пище и пищевых продуктов, в частности функциональных пищевых продуктов; при этом суммарная доза пептидов морского происхождения и/или нуклеотидов из рыб вводится индивиду за короткий промежуток времени, например за 1, 2, 3 минуты или 5, 10, 20, 30 минут от введения первой части дозы. Таким образом, в случае, если, например, лекарственная форма представляет собой пищевой продукт, в частности функциональный пищевой продукт, она может быть частью любого пищевого продукта в количестве 200-2000 мг на порцию этого продукта, в частности функционального пищевого продукта, причем порция определяется производителем/контролирующим органом на основании типа пищевого продукта, в частности функционального пищевого продукт; например, лекарственную форму можно разбрызгивать по пищевому продукту и съедать вместе с остальной пищей в количестве, указанном выше в расчете на порцию.

В одном из воплощений изобретения разовая доза вводится в организм посредством единичной (стандартной) лекарственной формы, например таблеток, капсул (в том числе крахмальных и желатиновых), пеллетов (микросфер), драже, порошков и гранул. В одном конкретном воплощении изобретения предлагаются капсулы и/или таблетки, содержащие около 500 мг пептидов морского происхождения и около 50 мг нуклеотидов морского происхождения.

В одном из воплощений изобретения предлагается единая (не составная) лекарственная форма, представляющая собой напиток и содержащая около 1500 мг, в частности около 2000 мг пептидов морского происхождения. В одном из воплощений изобретения предлагается единая (не составная) лекарственная форма, представляющая собой напиток и содержащая около 150 мг, в частности около 200 мг нуклеотидов морского происхождения.

В некоторых воплощениях изобретения индивиду, подлежащему лечению, вводят по меньшей мере одну разовую дозу в сутки. В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемые лекарственные формы принимают один или несколько раз в сутки. Например, если индивид принимает четыре капсулы в сутки и каждая капсула содержит около 500 мг пептидов морского происхождения и/или нуклеотидов из рыб, то все четыре капсулы можно принимать за один раз (один раз в сутки) или по две капсулы два раза в сутки, или по одной капсуле каждые 6 часов. Разовая доза может содержать различное количество пептидов морского происхождения или нуклеотидов из рыб. В некоторых воплощениях данного изобретения разовая доза содержит около 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 125 мг, 150 мг, 175 мг, 200 мг, 225 мг, 250 мг, 275 мг, 300 мг, 325 мг, 350 мг, 400 мг, 425 мг, 450 мг, 475 мг, 500 мг, 1000 мг, 1500 мг 2000 мг, 2500 мг и 3000 мг.

В настоящем документе термин «введение» (индивиду/в организм и т.п.) применительно к композиции по изобретению относится к применению/приему этой композиции, например пероральному приему или парентеральному (например, через слизистые, внутривенно, внутримышечно, подкожно, ректально, интравагинально или путем вдыхания) введению. Термин «введение» подразумевает также назначение описанной в настоящем документе композиции индивиду медицинским работником. Термин «введение» может также включать предоставление потребителю информации о препарате, например инструктирование пациента по поводу введения композиции по данному изобретению таким образом, какой предлагается в настоящем документе для лечения. Введение может осуществляться, например, парентеральным, подкожным, внутривенным (болюсно или инфузионно), внутримышечным или внутрибрюшинным путем. Лекарственные формы для этих способов введения могут включать обычные формы (жидкие растворы или суспензии), твердые формы, пригодные для приготовления раствора или суспензии в жидкости перед инъекцией, или эмульсии.

В одном конкретном воплощении изобретения путь введения пероральный. В одном конкретном воплощении данного изобретения пептиды морского происхождения и/или нуклеотиды из рыб вводят индивидам в форме добавки к пище, пищевого продукта, фармацевтического препарата или напитка, в частности пищевого продукта, напитка или пищевой добавки, конкретнее пищевого продукта и напитка, конкретнее – пищевого продукта. В частности пищевой продукт является функциональным или лечебным (например, пищевой продукт в виде состава, подлежащего поеданию или введению извне под наблюдением врача и предназначенного для специфического воздействия путем питания на заболевание или состояние, для которого на основании общепринятых научных основ путем медицинской экспертизы установлены определенные требования в отношении питания).

Термин «добавка к пище» взаимозаменяем с термином «биологически активная добавка» (БАД) и может включать готовые пищевые продукты.

Пептиды морского происхождения и/или нуклеотиды из рыб могут входить в состав лекарственной формы. Эти лекарственные формы включают (не ограничиваясь перечисленным здесь) таблетки, капсулы (в том числе желатиновые и крахмальные), микросферы (пеллеты), драже, порошки и гранулы. Парентеральные лекарственные формы включают (не ограничиваясь перечисленным здесь) растворы, суспензии, эмульсии, частицы, покрытые оболочкой, и сухие порошки, содержащие эффективное количество пептидов морского происхождения и/или нуклеотидов из рыб, как предлагается по данному изобретению. В некоторых воплощениях изобретения лекарственная форма включается в состав пищевого продукта или смешивается с ним. Для покрытия частиц в данной области техники известны различные вещества, в том числе производные целлюлозы, например микрокристаллическая целлюлоза, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза; производные полиалкиленгликолей, например полиэтиленгликоль; тальк, крахмал, метакрилаты и проч. В некоторых воплощениях изобретения предлагаемая лекарственная форма представляет собой капсулу, наполненную раствором, суспензией или эмульсией, содержащей пептиды морского происхождения и/или нуклеотиды из рыб. В данной области техники известно, что в таких препаратах вместе с активными ингредиентами могут содержаться фармацевтически приемлемые эксципиенты, например разбавители, наполнители, дезинтегрирующие агенты, связующие агенты, вещества, улучшающие скольжение, поверхностно-активные вещества, гидрофобные носители, водорастворимые носители, эмульгирующие агенты, забуферивающие вещества, увлажняющие агенты, солюбилизирующие агенты, консерванты, ароматизирующие агенты, агенты, маскирующие вкус, подсластители и проч. Пригодные по изобретению эксципиенты могут включать, например, растительные масла (например, кукурузное, сафлоровое, подсолнечное или улучшенное рапсовое масло). В некоторых воплощениях изобретения консервантом может служить антиоксидант, например сульфит натрия, сульфит калия, метабисулфит, бисульфиты, тиосульфаты, тиоглицерин, тиосорбит, цистеина гидрохлорид, альфа-токоферол и их комбинации. Представленные ниже примеры не имеют ограничительного характера и приводятся только с иллюстративной целью.

Примеры

Пример 1

Было проведено исследование двойным слепым методом, в котором участвовали 12 здоровых испытуемых мужского пола, получавшие четыре различных типа пищи, приведенных ниже.

1. Пища А (контрольная): казеин (30%) + углеводы (55% мальтодекстрины) + жиры (11% триглицериды со средней длиной цепи (MCT)); то есть 30 г белка (казеин) на 100 г пищи.

2. Пища B: в контрольной пище 10% казеина заменено на пептиды морского происхождения (гидролизат белка из морских источников) - неочищенный белок (N x 6,25); то есть белковая часть пищи состоит на 3,2% из пептидов морского происхождения и на 26,7% из казеина.

3. Пища С: в контрольной пище 10% казеина заменено на пептиды из сыворотки (гидролизат сывороточных пептидов) – неочищенный белок (N x 6,25); то есть 3,2 г белка - это сывороточные пептиды и 26.8 г - казеин.

4. Пища D в контрольной пище 10% казеина заменено на пептиды морского происхождения (гидролизат белка из морских источников) - неочищенный белок (N x 6,25); то есть белковая часть пищи состоит на 3,2% (3,2 г на 100 г пищи) из пептидов морского происхождения и на 26,7% из казеина, + добавка 0,5% (0,5 г на 100 г пищи) нуклеотидов из ДНК морского происхождения (порошок из рыбьих молок); поправка на изменение содержания азота не вводилась, поскольку количество добавленной ДНК мало.

Испытуемых просили после съедания экспериментальной пищи находиться в постели; у них брали образцы крови не позже чем через 5 минут до поедания экспериментальной пищи и на протяжении 120 минут после этого с 20 минутными интервалами. Прием пищи занимал 5 минут.

Испытуемым давали ту или иную (из четырех указанных выше) пищу в случайном порядке. Пищу В, С и D испытуемые принимали в количестве, эквивалентном 20 мг пептидов на 1 кг массы тела на одну дозу, и результат сравнивали с эффектом приема контрольной пищи А в эквивалентном по содержанию энергии и белка количестве.

Во всех образцах крови определяли глюкозу и инсулин. В образцах, взятых за 5 минут до приема пищи (время 0), через 60 мин и через 100 мин после приема пищи определяли гормоны GLP-1 и грелин. Образцы для определения GLP-1 собирали в пробирки, содержащие ингибитор протеаз в качестве стабилизирующего агента.

Указанные выше типы пищи давали испытуемым в жидком виде. В воде разводили порошок, состоящий из казеина, кукурузных мальтодекстринов (DE 20-21) и растительных жиров (порошок MCT), к которому добавляли либо (1) гидролизат белков, выделенных из филе атлантической трески, либо (2) гидролизат сывороточных белков, либо (3) гидролизат рыбьих белков + нуклеотиды морского происхождения, а именно натриевую соль ДНК, выделенной из молок атлантической трески (Gadus morhua); эту смесь, которая получалась наподобие жидкого крема, готовили перед употреблением. Пропорция: на 1 г порошка 4 мл холодной воды.

Такая пища содержала 30% белка, 11% жиров и 55% углеводов; энергосодержание составляло 4,4 ккал на 1 г сухого вещества. Чтобы все четыре типа пищи были на вкус одинаковыми, в них добавляли клубничный ароматизатор (натуральный).

Каждый испытуемый принимал указанные типы пищи в одном и том же количестве, эквивалентном 20 мг пептидов на 1 кг массы тела (то есть в объеме приема пищи учитывалась масса тела индивида).

День 1

Испытуемые приходили на эксперимент утром натощак (их просили ничего не есть до опыта). Перед приемом пищи у них определяли жизненные показатели и брали образец крови. После приема экспериментальной пищи брали образцы крови в следующие моменты времени: через 20 мин, 40 мин, 60 мин, 80 мин, 100 мин и 120 мин.

День 3

Испытуемые приходили на эксперимент утром натощак (их просили ничего не есть до опыта). Перед приемом пищи у них брали образец крови. После приема экспериментальной пищи брали образцы крови в следующие моменты времени: через 20 мин, 40 мин, 60 мин, 80 мин, 100 мин и 120 мин.

День 5

Испытуемые приходили на эксперимент утром натощак (их просили ничего не есть до опыта). Перед приемом пищи у них брали образец крови. После приема экспериментальной пищи брали образцы крови в следующие моменты времени: через 20 мин, 40 мин, 60 мин, 80 мин, 100 мин и 120 мин.

День 7

Испытуемые приходили на эксперимент утром натощак (их просили ничего не есть до опыта). Перед приемом пищи у них брали образец крови. После приема экспериментальной пищи брали образцы крови в следующие моменты времени: через 20 мин, 40 мин, 60 мин, 80 мин, 100 мин, 120 мин.

Результаты

Рассчитывали площадь под кривой, взяв среднее (по всем 12 испытуемым) значение реакции и используя сумму значений положительной реакции в размерности миллимоль глюкозы на литр крови, превышающих исходный уровень (на фигурах - 0 на оси ординат); при этом отрицательные значения (значения ниже исходного уровня, отражающие синдром отмены инсулина) в расчет не брали. Были получены следующие результаты:

1. Контрольная пища – 5,2 ммоль/л.

2. Пища с сывороточными пептидами – 5,2 ммоль/л.

3. Пища с пептидами морского происхождения – 4,6 ммоль/л.

4. Пища с пептидами и нуклеотидами из морских источников – 4,2 ммоль/л.

Сравнение типов пищи:

1. Контрольная пища и пища с сывороточными пептидами – нет разницы.

2. Контрольная пища и пища с пептидами морского происхождения – после приема пищи с пептидами морского происхождения уровень глюкозы в крови на 13% меньше, чем после приема контрольной пищи.

3. Пища с сывороточными пептидами и пища с пептидами морского происхождения - после приема пищи с пептидами морского происхождения уровень глюкозы в крови на 13% меньше, чем после приема пищи с сывороточными пептидами.

4. Контрольная пища и пища с пептидами и нуклеотидами морского происхождения – после приема пищи с пептидами и нуклеотидами морского происхождения уровень глюкозы в крови на 19% меньше, чем после приема контрольной пищи.

Также было обнаружено, что пептиды морского происхождения снижали постпрандиальный подъем уровня глюкозы в крови по сравнению с контрольной пищей и пищей с сывороточными пептидами на 0,7 ммоль/л и 0,8 ммоль/л, соответственно (то есть на 33% и на 35%, соответственно).

Глюкагоноподобный пептид и грелин

Определяли концентрацию грелина в четыре различных момента времени после приема экспериментальной пищи; если считать, что концентрация грелина падает максимально через 60 минут после приема пищи, то полученные результаты показали, что:

1. Контрольная пища: -14,3 нг/л.

2. Пища с сывороточными пептидами: - 21,2 нг/л.

3. Пища с пептидами морского происхождения: - 26,6 нг/л.

4. Пища с пептидами и нуклеотидами морского происхождения: - 3,5 нг/л.

Концентрация грелина в крови обратным образом связана с чувством голода, так что чем меньше его содержание в крови, тем сильнее чувство насыщения. Полученные данные показывают, что пептиды морского происхождения значительно влияют на секрецию грелина и, предположительно, на чувство насыщения. В случае пептидов морского происхождения (без нуклеотидов) результат был выше, чем с сывороточными пептидами. Сочетание пептидов и нуклеотидов морского происхождения не имело эффекта.

Определяли также концентрацию GLP-1 в четыре различных момента времени после приема экспериментальной пищи; если считать, что концентрация GLP-1 возрастает максимально через 60 минут после приема пищи, то полученные результаты показали, что:

1. Контрольная пища: 0,76 нг/л.

2. Пища с сывороточными пептидами: 0,28 нг/л.

3. Пища с пептидами морского происхождения: 0,99 нг/л.

4. Пища с пептидами и нуклеотидами морского происхождения: 0,61 нг/л.

В организме GLP-1 выполняет различные функции, в том числе участвует в регуляции чувства голода и чувства насыщения. При повышении концентрации GLP-1 в крови чувство голода слабеет, а чувство насыщения продляется.

Полученные данные показывают, что добавка пептидов морского происхождения влияет на секрецию GLP-1, причем этот эффект превышает таковой пищи с сывороточными пептидами. Более выраженное влияние пептидов морского происхождения на секрецию глюкагоноподобного пептида должно, предположительно, влиять на чувство голода. Добавка комбинации пептидов и нуклеотидов морского происхождения не имела никакого эффекта в отношении секреции GLP-1.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа снижения концентрации глюкозы в крови индивида после приема пищи, включающего введение этому индивиду эффективного количества комбинации пептидов, выделенных из морских рыб, и нуклеотидов, выделенных из рыбьих молок, причем указанную комбинацию вводят индивиду до или во время приема пищи; при этом пептиды, выделенные из морских рыб, и нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, присутствуют в соотношении от 2:1 до 10:1 суммарной массы указанной комбинации; причем пептиды, выделенные из морских рыб, получены ферментативным гидролизом. Группа изобретений также касается композиции, содержащей пептиды, выделенные из морских рыб, и нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, в соотношении 10:1 (масса/масса) относительно суммарной массы. Группа изобретений обеспечивает снижение уровня глюкозы в крови индивида. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 1 пр., 4 табл.

1. Способ снижения концентрации глюкозы в крови индивида после приема пищи, включающий введение этому индивиду эффективного количества комбинации пептидов, выделенных из морских рыб, и нуклеотидов, выделенных из рыбьих молок, достаточного для снижения концентрации глюкозы в крови индивида, причем указанную комбинацию вводят индивиду до или во время приема пищи; при этом пептиды, выделенные из морских рыб, и нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, присутствуют в соотношении от 2:1 до 10:1 суммарной массы указанной комбинации; причем пептиды, выделенные из морских рыб, получены ферментативным гидролизом по меньшей мере одного белка морских рыб и имеют молекулярную массу в диапазоне от менее и равно 200 до 20000 Дa; и при этом нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, представляют собой по существу чистую ДНK или её фрагменты с содержанием белка менее 2%.

2. Способ по п. 1, в котором индивид является человеком.

3. Способ по п. 1, в котором индивид нуждается в снижении концентрации глюкозы в крови.

4. Способ по п. 1, в котором пептиды, выделенные из морских рыб, принимают в количестве от 5 мг до 50 мг на 1 кг массы тела индивида.

5. Способ по п. 4, в котором пептиды, выделенные из морских рыб, принимают в количестве 20 мг на 1 кг массы тела индивида.

6. Способ по п. 1, в котором указанную комбинацию вводят индивиду в течение промежутка времени, достаточного для снижения у него резистентности к инсулину.

7. Способ по п. 1, в котором указанную комбинацию вводят индивиду, у которого уровень HbA1C равен или больше 6, в течение промежутка времени для снижения уровня HbA1C.

8. Способ по п. 7, в котором уровень HbA1C превышает 6,5.

9. Способ по п. 8, в котором уровень HbA1C превышает 7.

10. Способ по п. 1, в котором указанная комбинация предлагается в виде добавки к пище для регуляции уровня глюкозы в крови индивида.

11. Способ по п. 1, в котором указанная комбинация предлагается в виде фармацевтического препарата для лечения состояния, выбираемого из группы, состоящей из преддиабетического состояния или диабета.

12. Способ по п. 1, в котором указанная комбинация предлагается в виде добавки к пище для поддержания нормального уровня сахара в крови.

13. Способ по п. 1, в котором нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, предлагаются в количестве, составляющем 25% от массы пептидов, выделенных из морских рыб.

14. Композиция, содержащая комбинацию пептидов, выделенных из морских рыб, и нуклеотидов, выделенных из рыбьих молок, в соотношении 10:1 (масса/масса) относительно суммарной массы указанной комбинации, причем эта комбинация предлагается в количестве, эффективном для снижения уровня глюкозы в крови индивида; причем пептиды, выделенные из морских рыб, получены ферментативным гидролизом по меньшей мере одного белка морских рыб и имеют молекулярную массу в диапазоне от менее и равно 200 до 20000 Дa; и при этом нуклеотиды, выделенные из рыбьих молок, представляют собой по существу чистую ДНK или её фрагменты с содержанием белка менее 2%.