ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к соединению или веществу, обладающему активностью глюкагона, или к комбинации, включающей соединение или вещество, обладающее активностью глюкагона, и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, и к их терапевтическому применению.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В последние годы, по мере экономического развития и изменения характера питания, быстро растет частота заболеваний, связанных с метаболическим синдромом, включая различные заболевания, такие как ожирение, гиперлипидемия, гипертензия, артериосклероз, гиперинсулинемия, диабет или заболевания печени. Несмотря на то, что такие заболевания могут возникать независимо, обычно они тесно связаны друг с другом и в большинстве случаев сопровождаются различными симптомами.
Избыточная масса тела и ожирение приводят к повышению артериального давления и уровней холестерина, тем самым вызывая или усугубляя различные заболевания, такие как сердечные заболевания, сахарный диабет и артрит. Кроме того, избыточная масса тела и ожирение также становятся основной причиной роста распространенности артериосклероза, гипертензии, гиперлипидемии или сердечных заболеваний как у детей или подростков, так и у взрослых.
Ожирение является заболеванием, трудно поддающимся лечению, поскольку оно представляет собой комплексное заболевание, связанное с механизмами контроля аппетита и энергетического метаболизма. Поэтому для лечения ожирения одновременно необходимы как усилия со стороны пациентов с ожирением, так и способ, позволяющий воздействовать на патологические механизмы, связанные с контролем аппетита и энергетическим метаболизмом. Вследствие этого, были предприняты попытки разработать лекарственные средства для воздействия на такие патологические механизмы.
В результате этих попыток были разработаны такие лекарственные средства для лечения ожирения, как римонабант (Sanofi-Aventis), сибутрамин (Abbott), Контрейв (Contrave) (Takeda) и орлистат (Roche), но у них есть недостатки, заключающиеся в возможности серьезных нежелательных эффектов или пренебрежимо малых терапевтических эффектов на ожирение. Например, согласно сообщениям, одним из побочных эффектов римонабанта является расстройство центральной нервной системы, сибутрамин и Контрейв оказывают побочные эффекты на сердечнососудистую систему, а прием орлистата на протяжении одного года приводит к уменьшению массы тела лишь приблизительно на 4 кг.
В то же время, глюкагон вырабатывается поджелудочной железой при падении уровней глюкозы в крови в результате приема других лекарственных средств, либо заболеваний или дефицита гормонов или ферментов. Глюкагон посылает сигнал, приводящий к расщеплению гликогена в печени и последующему высвобождению глюкозы, что играет роль в повышении уровней глюкозы в крови до нормального диапазона. Помимо эффекта повышения уровней глюкозы в крови, глюкагон подавляет аппетит и активирует гормон-чувствительную липазу адипоцитов, способствуя липолизу и оказывая посредством этого эффект, препятствующий ожирению. Тем не менее применение глюкагона в качестве терапевтического агента ограничено ввиду его низкой растворимости и осаждения при нейтральном рН.
Одно из производных глюкагона, глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1), находится в разработке в качестве терапевтического агента для лечения гипергликемии у пациентов с диабетом. GLP-1 выполняет функции стимуляции синтеза и секреции инсулина, ингибирования секреции глюкагона, замедления опорожнения желудка, повышения утилизации глюкозы и снижения потребления пищи.
Эксендин-4, полученный из яда ящерицы и имеющий приблизительно 50%-ю аминокислотную гомологию с GLP-1, также известен как активатор рецептора GLP-1, в результате чего он уменьшает гипергликемию у пациентов с диабетом (J Biol Chem. 1992 Apr 15; 267(11):7402-5.). Тем не менее, есть сообщения о том, что лекарственные средства от ожирения, содержащие GLP-1 или эксендин-4, оказывают такие побочные эффекты, как тошнота и рвота.
В целом, известно, что глюкагон и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома оказывают противоположное действие, и, таким образом, их применяют в качестве терапевтических агентов при разных симптомах. В частности, в опубликованной для всеобщего ознакомления публикации патента Кореи №10-2017-0023066 раскрыт способ лечения диабета поддерживающей инсулинотерапией с одновременным антагонистическим воздействием на глюкагон посредством блокировки рецептора глюкагона антагонистическим антигенным белком.
То есть, поскольку в живом организме инсулин и глюкагон являются антагонистами друг друга, до настоящего времени не было сообщений о фармакотерапии с их одновременным совместным введением. В то же время, при введении пациенту различных терапевтических агентов в связи с метаболическим синдромом возможен риск побочных эффектов, таких как увеличение массы тела, передозировка и гипогликемия.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая задача
Задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить комбинацию, включающую вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить комбинацию, фармацевтическую композицию или набор, содержащие (включающую) вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, в частности комбинацию, фармацевтическую композицию или набор для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающий введение вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома индивиду, нуждающемуся в этом.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить композицию, содержащую пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, в частности фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить набор, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, в частности набор для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма, включающий введение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или конъюгата, содержащего указанный пептид, или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, индивиду, нуждающемуся в этом.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить применение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или конъюгата, содержащего указанный пептид, или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения гипогликемии, включающий введение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или конъюгата, содержащего указанный пептид, или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, индивиду, нуждающемуся в этом.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить применение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или конъюгата, содержащего указанный пептид, или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения гипогликемии.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения ожирения, включающий введение пептида или выделенного конъюгата с активностью в отношении рецептора глюкагона или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, индивиду, нуждающемуся в этом.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить применение пептида или выделенного конъюгата с активностью в отношении рецептора глюкагона или композиции для изготовления лекарственного средства (или фармацевтической композиции) для предупреждения или лечения ожирения.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить способ предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающий введение пептида или выделенного конъюгата с активностью в отношении рецептора глюкагона или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат, индивиду, нуждающемуся в этом.
Другая задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить применение пептида или выделенного конъюгата с активностью в отношении рецептора глюкагона или композиции для изготовления лекарственного средства (или фармацевтической композиции) для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
Техническое решение
Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложена комбинация, включающая вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к терапевтическому применению совместного введения вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к комбинации, фармацевтической композиции или набору, содержащим (включающей) вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, в частности к комбинации, фармацевтической композиции или набору для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона представляет собой нативный глюкагон или его агонист или производное.
В одном или более чем одном конкретном воплощении производное нативного глюкагона характеризуется тем, что одна или более чем одна аминокислота нативного глюкагона изменена и это изменение выбрано из группы, состоящей из замены, добавления, делеции, модификации и любой их комбинации.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 1:
X1-X2-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-F-X23-X24-W-L-X27-X28-X29-X30 (общая формула 1, SEQ ID NO: 45).
В приведенной выше общей формуле 1:
X1 представляет собой гистидин (Н), дезаминогистидил, N-диметилгистидил, β-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил, β-карбоксиимидазопропионил, триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой α-метилглутаминовую кислоту,
аминоизомасляную кислоту (Aib), D-аланин, глицин (G), N-метилглицин (Sar), серии (S) или D-серин;
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), аспарагиновую кислоту (D), серии (S), α-метилглутаминовую кислоту или цистеин (С) или отсутствует;
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутамин (Q), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V) или отсутствует;
Х18 представляет собой аланин (А), аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х19 представляет собой аланин (А), аргинин (R), серии (S), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х20 представляет собой лизин (K), гистидин (Н), глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D), аргинин (R), α-метилглутаминовую кислоту или цистеин (С) или отсутствует;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лейцин (L), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х23 представляет собой изолейцин (I), валин (V) или аргинин (R) или отсутствует;
Х24 представляет собой валин (V), аргинин (R), аланин (А), цистеин (С), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), глутамин (Q), α-метилглутаминовую кислоту или лейцин (L) или отсутствует;
Х27 представляет собой изолейцин (I), валин (V), аланин (А), лизин (K), метионин (М), глутамин (Q) или аргинин (R) или отсутствует;
Х28 представляет собой глутамин (Q), лизин (K), аспарагин (N) или аргинин (R) или отсутствует;
Х29 представляет собой лизин (K), аланин (А), глицин (G) или треонин (Т) или отсутствует; и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует (за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D), лизин (K) или цистеин (С);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лейцин (L), валин (V) или цистеин (С);
Х23 представляет собой изолейцин (I), валин (V) или аргинин (R);
Х24 представляет собой валин (V), аргинин (R), аланин (А), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), глутамин (Q) или лейцин (L);
Х27 представляет собой изолейцин (I), валин (V), аланин (А), метионин (М), глутамин (Q) или аргинин (R);
Х28 представляет собой глутамин (Q), лизин (K), аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y);
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин (С), треонин (Т) или валин (V);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), валин (V) или цистеин (С);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что: X1 представляет собой тирозин (Y);
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин (С), треонин (Т) или валин (V);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой лизин (K), аргинин (R), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е) или цистеин (С);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой глутамин (Q);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или
глутаминовую кислоту (Е);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q);
Х27 представляет собой изолейцин (I) или метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что: X1 представляет собой тирозин (Y);
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т);
Х10 представляет собой тирозин (Y);
Х12 представляет собой лизин (K);
Х13 представляет собой тирозин (Y);
Х14 представляет собой лейцин (L);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой лизин (K) или аргинин (R);
Х18 представляет собой аргинин (R);
Х19 представляет собой аланин (А);
Х20 представляет собой глутамин (Q), цистеин (С) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), цистеин (С), валин (V) или глутаминовую кислоту (Е);
Х23 представляет собой валин (V) или аргинин (R);
Х24 представляет собой глутамин (Q) или лейцин (L);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 отсутствует.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 2:
Y-Aib-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-Y-L-X15-X16-X17-R-A-X20-X21-F-V-X24-W-L-M-N-T-X30 (общая формула 2, SEQ ID NO: 46).
В приведенной выше общей формуле 2:
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е) или серии (S);
Х17 представляет собой лизин (K) или аргинин (R);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или глутаминовую кислоту (Е);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид имеет значение pI, отличающееся от значения pI (6,8) нативного глюкагона.
В одном или более чем одном конкретном воплощении пептид характеризуется тем, что каждая аминокислота по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и Х14, Х12 и Х16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28 в общей формуле 1 или 2 заменена на глутаминовую кислоту или лизин, способные образовывать кольцо.
В одном или более чем одном конкретном воплощении пептид характеризуется тем, что каждая аминокислота пары аминокислот Х12 и Х16, пары аминокислот Х16 и Х20 или пары аминокислот Х17 и Х21 общей формулы 1 или 2 заменена на глутаминовую кислоту или лизин, способные образовывать кольцо.
В одном или более чем одном конкретном воплощении пептид характеризуется образованием кольца между аминокислотами по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и Х14, Х12 и Х16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28 в общей формуле 1, приведенной выше.
В одном или более чем одном конкретном воплощении пептид характеризуется тем, что С-конец пептида амидирован.
В одном или более чем одном конкретном воплощении пептид характеризуется тем, что С-конец пептида не модифицирован.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид представляет собой производное нативного глюкагона, способное активировать рецептор глюкагона.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-44.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 15 и 36-44.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
В одном или более чем одном конкретном воплощении конъюгат характеризуется тем, что с веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона связано биологически совместимое вещество.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона находится в форме пептида, где биологически совместимое вещество связано с веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что биологически совместимое вещество выбрано из группы, состоящей из полимера, жирной кислоты, холестерина, альбумина и его фрагментов, альбумин-связывающего вещества, полимера из повторяющихся единиц с определенной аминокислотной последовательностью, антитела, фрагмента антитела, FcRn-связывающего вещества, соединительной ткани in vivo или ее производного, нуклеотида, фибронектина, трансферрина, сахарида, гепарина и эластина.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что FcRn-связывающее вещество представляет собой полипептид, содержащий Fc-область иммуноглобулина.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона связано с биологически совместимым веществом через линкер.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что линкер выбран из группы, состоящей из пептида, жирной кислоты, сахарида, полимера, низкомолекулярного соединения, нуклеотида и любой их комбинации.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что линкер представляет собой полиэтиленгликоль.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина агликозилирована.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина включает Fc-область иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из: (а) домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4; (б) домена СН1 и домена СН2; (в) домена СН1 и домена СН3; (г) домена СН2 и домена СН3; (д) комбинации одного или более чем одного домена, выбранного из домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4, и шарнирной области иммуноглобулина или части шарнирной области иммуноглобулина; и (е) димера каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что полипептид, содержащий Fc-область иммуноглобулина, находится в димерной форме.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой производное нативной Fc, где удалена область, способная образовывать дисульфидную связь, где удалены некоторые N-концевые аминокислоты, где добавлен N-концевой метиониновый остаток нативной Fc, где удален сайт связывания комплемента или где удалена область антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC).
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область, имеющую происхождение от иммуноглобулина, выбранного из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой агликозилированную Fc-область, имеющую происхождение от человеческого IgG4.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что линкер связан с цистеиновым остатком пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что линкер конъюгата связан как с пептидным сайтом с активностью в отношении рецептора глюкагона, так и с биологически совместимым веществом посредством ковалентных связей, образованных, соответственно, при взаимодействии одного конца линкера с аминной или тиоловой группой биологически совместимого вещества и другого конца линкера с аминной или тиоловой группой пептидного сайта.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома выбрано из группы, состоящей из инсулинотропного пептида, агониста рецептора глюкагоноподобного пептида 1-го типа (GLP-1), агониста рецептора лептина, ингибитора дипептидилпептидазы-4 (DPP-4), антагониста рецептора Y5, антагониста рецептора меланинконцентрирующего гормона (МКГ), агониста рецептора Y2/4, агониста рецептора меланокортина 3/4-го типа (МС3/4), ингибитора желудочной/панкреатической липазы, агониста рецептора 5-гидрокситриптамина типа 2С (5НТ2С), связанного с G-белками, агониста рецептора β3А, агониста рецептора амилина, антагониста грелина, антагониста рецептора грелина, агониста альфа-рецептора, активируемого пероксисомными пролифераторами (PPARα), агониста дельта-рецептора, активируемого пероксисомными пролифераторами (PPARδ), агониста фарнезоидного Х-рецептора (FXR), ингибитора ацетил-КоА-карбоксилазы, пептида YY, холецистокинина (CCK), ксенина, глицентина, обестатина, секретина, несфатина, инсулина и глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIP), бигуанидов, сульфонилмочевин, меглитинида, тиазолидиндиона (TZD), ингибитора натрий-глюкозного котранспортера (SGLT2) и ингибитора а-глюкозидазы.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома представляет собой агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1-го типа (GLP-1).
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1-го типа (GLP-1) выбран из группы, состоящей из эксенатида, ликсисенатида, дулаглутида, лираглутида, семаглутида, албиглутида и таспоглутида.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что ингибитор DPP-4 выбран из группы, состоящей из ситаглиптина, вилдаглиптина, саксаглиптина, алоглиптина, линаглиптина, Траженты®, анаглиптина, тенелиглиптина, трелаглиптина, гемиглиптина, омариглиптина, эвоглиптина и дутоглиптина, а ингибитор натрий-глюкозного котранспортера (SGLT2) характеризуется тем, что он выбран из группы, состоящей из эмпаглифлозина, дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина, этабоната ремоглифлозина, серглифлозина, ипраглифлозина, тофоглифлозина, лузеоглифлозина и эртуглифлозина.
Одно или более чем одно конкретное воплощение характеризуется тем, что метаболический синдром выбран из группы, состоящей из нарушения толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемии, дислипидемии, ожирения, диабета, гипертензии, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), артериосклероза, вызванного дислипидемией, атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца и инсульта.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащая вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, или комбинация, включающая указанные компоненты.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащая вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат, которая может быть введена совместно с соединением или веществом с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены набор для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащий вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, или комбинация или композиция, содержащая (включающая) указанные компоненты.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающий введение вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома индивиду, нуждающемуся в этом.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена композиция, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, в частности фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма.
Одно конкретное воплощение характеризуется тем, что метаболический синдром включает по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, состоящей из нарушения толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемии, дислипидемии, ожирения, диабета, гипертензии, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), артериосклероза, вызванного дислипидемией, атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца и инсульта.
Одно конкретное воплощение характеризуется тем, что пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона представляет собой нативный глюкагон или его агонист или производное.
Оно характеризуется тем, что производное нативного глюкагона по одному из конкретных воплощений представляет собой производное, где одна или более чем одна аминокислота нативного глюкагона изменена и это изменение выбрано из группы, состоящей из замены, добавления, делеции, модификации и любой их комбинации.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона представляет собой пептид, являющийся производным глюкагона и содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 1:
X1-X2-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-F-X23-X24-W-L-X27-X28-X29-X30 (общая формула 1, SEQ ID NO:45).
В приведенной выше общей формуле 1:
X1 представляет собой гистидин (Н), дезаминогистидил, N-диметилгистидил, β-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил, β-карбоксиимидазопропионил, триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой α-метилглутаминовую кислоту, аминоизомасляную кислоту (Aib), D-аланин, глицин (G), N-метилглицин (Sar), серии (S) или D-серин;
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), аспарагиновую кислоту (D), серии (S), α-метилглутаминовую кислоту или цистеин (С) или отсутствует;
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутамин (Q), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V) или отсутствует;
Х18 представляет собой аланин (А), аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х19 представляет собой аланин (А), аргинин (R), серии (S), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х20 представляет собой лизин (K), гистидин (Н), глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D), аргинин (R), α-метилглутаминовую кислоту или цистеин (С) или отсутствует;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лейцин (L), валин (V) или цистеин (С) или отсутствует;
Х23 представляет собой изолейцин (I), валин (V) или аргинин (R) или отсутствует;
Х24 представляет собой валин (V), аргинин (R), аланин (А), цистеин (С), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), глутамин (Q), α-метилглутаминовую кислоту или лейцин (L) или отсутствует;
Х27 представляет собой изолейцин (I), валин (V), аланин (А), лизин (K), метионин (М), глутамин (Q) или аргинин (R) или отсутствует;
Х28 представляет собой глутамин (Q), лизин (K), аспарагин (N) или аргинин (R) или отсутствует;
Х29 представляет собой лизин (K), аланин (А), глицин (G) или треонин (Т) или отсутствует; и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует (за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
В одном или более чем одном конкретном воплощении в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D), лизин (K) или цистеин (С);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лейцин (L), валин (V) или цистеин (С);
Х23 представляет собой изолейцин (I), валин (V) или аргинин (R);
Х24 представляет собой валин (V), аргинин (R), аланин (А), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), глутамин (Q) или лейцин (L);
Х27 представляет собой изолейцин (I), валин (V), аланин (А), метионин (М), глутамин (Q) или аргинин (R);
Х28 представляет собой глутамин (Q), лизин (K), аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y);
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин (С), треонин (Т) или валин (V);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), валин (V) или цистеин (С);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой тирозин (Y);
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин (С), треонин (Т) или валин (V);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой лизин (K), аргинин (R), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е) или цистеин (С);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой глутамин (Q);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой гистидин (Н), триптофан (W) или тирозин (Y) или отсутствует;
Х2 представляет собой серии (S) или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х13 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х14 представляет собой лейцин (L) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), лизин (K), аргинин (R), серии (S), цистеин (С) или валин (V);
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), глутаминовую кислоту (Е), аргинин (R) или цистеин (С);
Х19 представляет собой аланин (А) или цистеин (С);
Х20 представляет собой глутамин (Q), аспарагиновую кислоту (D) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или глутаминовую кислоту (Е);
Х23 представляет собой валин (V);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q);
Х27 представляет собой изолейцин (I) или метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
В фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений в общей формуле 1, приведенной выше, пептид характеризуется тем, что:
X1 представляет собой тирозин (Y);
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин (Т);
Х10 представляет собой тирозин (Y);
Х12 представляет собой лизин (K);
Х13 представляет собой тирозин (Y);
Х14 представляет собой лейцин (L);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), серии (S) или цистеин (С);
Х17 представляет собой лизин (K) или аргинин (R);
Х18 представляет собой аргинин (R);
Х19 представляет собой аланин (А);
Х20 представляет собой глутамин (Q), цистеин (С) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D), цистеин (С), валин (V) или глутаминовую кислоту (Е);
Х23 представляет собой валин (V) или аргинин (R);
Х24 представляет собой глутамин (Q) или лейцин (L);
Х27 представляет собой метионин (М);
Х28 представляет собой аспарагин (N) или аргинин (R);
Х29 представляет собой треонин (Т); и
Х30 отсутствует.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 2:
Y-Aib-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-Y-L-X15-X16-X17-R-A-X20-X21-F-V-X24-W-L-M-N-T-X30 (общая формула 2, SEQ ID NO: 46).
В приведенной выше общей формуле 2:
Х7 представляет собой треонин (Т), валин (V) или цистеин (С);
Х10 представляет собой тирозин (Y) или цистеин (С);
Х12 представляет собой лизин (K) или цистеин (С);
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или цистеин (С);
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е) или серии (S);
Х17 представляет собой лизин (K) или аргинин (R);
Х20 представляет собой глутамин (Q) или лизин (K);
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту (D) или глутаминовую кислоту (Е);
Х24 представляет собой валин (V) или глутамин (Q); и
Х30 представляет собой цистеин (С) или отсутствует.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид имеет значение pI, отличающееся от значения pI (6,8) нативного глюкагона, например, значение pI, равное 6,5 или менее и равное 7,0 или более.
В случае фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений, это конкретное воплощение настоящего изобретения характеризуется тем, что каждая аминокислота по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и Х14, Х12 и Х16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28 в общей формуле 1 или 2 заменена на глутаминовую кислоту или лизин, способные образовывать кольцо.
В случае фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений, это конкретное воплощение настоящего изобретения характеризуется тем, что каждая аминокислота пары аминокислот Х12 и Х16, пары аминокислот Х16 и Х20 или пары аминокислот Х17 и Х21 общей формулы 1 или 2 заменена на глутаминовую кислоту или лизин, способные образовывать кольцо.
В случае фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений, это конкретное воплощение настоящего изобретения характеризуется образованием кольца (лактамного кольца) между аминокислотами по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и X14, Х12 и X16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28 в общей формуле 1 или 2, приведенной выше.
В случае фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений, это конкретное воплощение настоящего изобретения характеризуется тем, что в общей формуле 1 или 2 Х16 представляет собой глутаминовую кислоту и Х20 представляет собой лизин, и образованием лактамного кольца между боковой цепью Х16 и боковой цепью Х20.
В случае фармацевтической композиции по любому из конкретных воплощений пептид по этому воплощению характеризуется тем, что С-конец пептида амидирован или не модифицирован.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид представляет собой производное нативного глюкагона, способное активировать рецептор глюкагона.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-44.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 15 и 36-44.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептид находится в форме длительно действующего конъюгата, где биологически совместимое вещество связано с пептидным сайтом, в частности с пептидным сайтом, содержащим аминокислотную последовательность общей формулы 1 или 2.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что биологически совместимое вещество выбрано из группы, состоящей из полимера, жирной кислоты, холестерина, альбумина и его фрагментов, альбумин-связывающего вещества, полимера из повторяющихся единиц с определенной аминокислотной последовательностью, антитела, фрагмента антитела, FcRn-связывающего вещества, соединительной ткани in vivo или ее производного, нуклеотида, фибронектина, трансферрина, сахарида, гепарина и эластина.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что FcRn-связывающее вещество представляет собой полипептид, содержащий Fc-область иммуноглобулина.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что пептидный сайт связан с биологически совместимым веществом через линкер.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что линкер выбран из группы, состоящей из пептида, жирной кислоты, сахарида, полимера, низкомолекулярного соединения, нуклеотида и любой их комбинации.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что линкер представляет собой полиэтиленгликоль.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина агликозилирована.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина включает Fc-область иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из:
(а) домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4;
(б) домена СН1 и домена СН2;
(в) домена СН1 и домена СН3;
(г) домена СН2 и домена СН3;
(д) комбинации одного или более чем одного домена, выбранного из домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4, и шарнирной области иммуноглобулина или части шарнирной области иммуноглобулина; и
(е) димера каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что полипептид, содержащий Fc-область иммуноглобулина, находится в димерной форме.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой производное нативной Fc, где удалена область, способная образовывать дисульфидную связь, где удалены некоторые N-концевые аминокислоты, где добавлен N-концевой метиониновый остаток, где удален сайт связывания комплемента или где удалена область антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC).
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область, имеющую происхождение от иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что Fc-область иммуноглобулина представляет собой агликозилированную Fc-область, имеющую происхождение от человеческого IgG4.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что с цистеиновым остатком пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, имеющего аминокислотную последовательность приведенной выше общей формулы 1 или 2, связан линкер.
Фармацевтическая композиция по любому из конкретных воплощений характеризуется тем, что линкер конъюгата связан как с пептидным сайтом, так и с биологически совместимым веществом посредством ковалентных связей, образованных, соответственно, при взаимодействии одного конца линкера с аминной или тиоловой группой биологически совместимого вещества и другого конца линкера с аминной или тиоловой группой пептидного сайта с активностью в отношении рецептора глюкагона, то есть пептидного сайта, содержащего аминокислотную последовательность общей формулы 1 или 2.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения гипогликемии, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, и фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения гипогликемии, содержащей пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или выделенный конъюгат, содержащий пептидный сайт, содержащий последовательность, идентичную последовательности пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона или содержащую такую последовательность, и биологически совместимое вещество, ко валентно связанное с пептидным сайтом.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, и фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма, содержащей пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или выделенный конъюгат, содержащий пептидный сайт, содержащий последовательность, идентичную последовательности пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона или содержащую такую последовательность, и биологически совместимое вещество, ковалентно связанное с пептидным сайтом.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения ожирения, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, и фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения ожирения, содержащей пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или выделенный конъюгат, содержащий пептидный сайт, содержащий последовательность, идентичную последовательности пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона или содержащую такую последовательность, и биологически совместимое вещество, ковалентно связанное с пептидным сайтом.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, и фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном конкретном воплощении настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащей пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или выделенный конъюгат, содержащий пептидный сайт, содержащий последовательность, идентичную последовательности пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона или содержащую такую последовательность, и биологически совместимое вещество, ковалентно связанное с пептидным сайтом.
Полезные эффекты
Введение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона или совместное введение вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома по настоящему изобретению может быть эффективно применено в предупреждении или лечении метаболического синдрома, такого как ожирение, диабет и неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), врожденного гиперинсулинизма и/или гипогликемии.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На ФИГ. 1 показаны изменения массы тела, измеренные в течение 4 недель введения лекарственного средства, в сравнении с массой тела до введения.
На ФИГ. 2(A) представлена диаграмма, на которой показана масса брыжеечного жира после 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 2(Б) представлена диаграмма, на которой показаны изменения HOMA-IR, являющегося индексом чувствительности к инсулину, после 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 3 показаны изменения уровня глюкозы в крови в течение 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 4 показаны изменения массы тела, измеренные в течение 4 недель введения лекарственного средства, в сравнении с массой тела до введения.
На ФИГ. 5(A) представлена диаграмма, на которой показана масса брыжеечного жира после 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 5(Б) представлена диаграмма, на которой показаны изменения HOMA-IR, являющегося индексом чувствительности к инсулину, после 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 6 показаны изменения уровня глюкозы в крови в течение 4 недель введения лекарственного средства.
На ФИГ. 7 показаны эффекты введения лекарственного средства на уменьшение массы тела.
На ФИГ. 8(A) и 8(Б) показаны уменьшение массы жировой ткани и снижение уровня липидов в крови.
На ФИГ. 9 показаны изменения уровня глюкозы в крови.
НАИЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее настоящее изобретение будет описано подробно. В то же время, каждое из описаний и воплощений, раскрытых здесь, может быть применено здесь к описанию других описаний и воплощений. То есть, объем настоящего изобретения включает все комбинации различных факторов, раскрытых здесь. Более того, объем настоящего изобретения не следует ограничивать подробными описаниями, представленными ниже.
Кроме этого, специалистам в данной области будет ясно, или они смогут убедиться, применяя не более чем рутинные эксперименты, что существует множество эквивалентов конкретных воплощений настоящего изобретения. Подразумевается, что такие эквиваленты входят в объем последующей формулы изобретения.
Во всем описании использованы не только традиционные однобуквенные и трехбуквенные коды встречающихся в природе аминокислот, но также трехбуквенные коды, обычно используемые для других аминокислот, таких как а-аминоизомасляная кислота (Aib) и N-метилглицин (Sar). Кроме того, аминокислоты, указанные здесь, обозначены сокращениями, соответствующими правилам номенклатуры IUPAC-IUB, как показано ниже.
Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложено терапевтическое применение совместного введения вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
В частности, согласно одному аспекту настоящего изобретения предложены комбинация, фармацевтическая композиция или набор, содержащие (включающая) вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома. В одном воплощении предложены комбинация, фармацевтическая композиция или набор для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
При использовании здесь термин «комбинация» предназначен для использования в случае совместного введения вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, и его можно понимать как имеющий то же значение, что «комбинированное применение». Комбинация может быть введена:
а) как смесь (1) вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и (2) соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома; или
б) в раздельных формах (1) вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и (2) соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, без ограничения указанными вариантами.
При введении вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома в раздельных формах, вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома могут быть изготовлены по отдельности и введены одновременно, по отдельности, последовательно или в обратном порядке.
В настоящем изобретении совместное введение относится не просто к одновременному введению как вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата, так и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, но его можно понимать как введение в лекарственной форме, где вещества способны к совместному действию на индивида, таким образом, что оба компонента могут выполнять свои функции на уровне, идентичном их естественным функциях, или более высоком уровне. Поэтому при использовании термина «совместное введение» следует понимать, что компоненты вводят одновременно, по отдельности, последовательно или в обратном порядке. Когда введение проводят последовательно, в обратном порядке или по отдельности, конкретных ограничений относительно порядка введения нет, но интервал между двумя компонентами следует устанавливать так, чтобы не были утрачены полезные эффекты совместного введения.
При использовании здесь термин «композиция, содержащая комбинацию», относится, к комбинации, включающей вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, или к композиции, содержащей указанную комбинацию, которая может быть применена терапевтически, без ограничения указанными вариантами. Например, композиция может быть применена для предупреждения или лечения метаболического синдрома, без ограничения указанными вариантами. При использовании здесь термин «композиция, содержащая комбинацию», может быть использован взаимозаменяемо с «композицией».
Композицию, содержащую комбинацию, по настоящему изобретению изготавливают для совместного введения вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, и вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома могут быть включены в одну композицию или в отдельные композиции. В частности, вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома могут быть введены одновременно, по отдельности, последовательно или в обратном порядке, без ограничения указанными вариантами.
При использовании здесь термин «набор» может включать комбинацию или композицию по настоящему изобретению для совместного введения вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома. В частности, набор по настоящему изобретению может содержать единую композицию вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, или отдельные композиции вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, и может дополнительно содержать вещество, необходимое для совместного введения этих двух компонентов, без ограничения указанными вариантами.
Вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона включает различные вещества со значимым уровнем активности в отношении рецептора глюкагона, например, вещество в форме соединения или пептида.
Несмотря на отсутствие конкретных ограничений, вещество со значимым уровнем активности в отношении рецептора глюкагона может представлять собой не только нативный глюкагон, но также вещество, демонстрирующее in vitro активность в отношении рецептора глюкагона, составляющую 0,1% или более, 1% или более, 2% или более, 3% или более, 4% или более, 5% или более, 6% или более, 7% или более, 8% или более, 9% или более, 10% или более, 20% или более, 30% или более, 40% или более, 50% или более, 60% или более, 70% или более, 80% или более, 90% или более или 100% или более по сравнению с нативным лигандом соответствующего рецептора (нативным глюкагоном).
Например, вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона может представлять собой нативный глюкагон или его агонист или производное, без ограничения указанными вариантами.
Производное глюкагона по настоящему изобретению включает пептид, имеющий по меньшей мере одну аминокислоту, отличающуюся от аминокислотной последовательности нативного глюкагона, пептид, измененный модификацией последовательности нативного глюкагона, и имитаторы нативного глюкагона, способные активировать рецептор глюкагона аналогично нативному глюкагону. Например, производное нативного глюкагона представляет собой производное, где одна или более чем одна аминокислота нативного глюкагона изменена и это изменение выбрано из группы, состоящей из замены, добавления, делеции, модификации и любой их комбинации, без ограничения указанными вариантами.
Производное глюкагона может иметь измененное значение pI, отличающееся от значения pI нативного глюкагона, и, вследствие этого, иметь улучшенные физические свойства. Кроме того, производное глюкагона может иметь улучшенную растворимость при сохранении активности по активации рецептора глюкагона, без ограничения указанным вариантом.
Кроме того, производное глюкагона может представлять собой глюкагон, не встречающийся в природе.
В то же время, нативный глюкагон может содержать следующую аминокислотную последовательность:
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (SEQ ID NO: 1).
При использовании здесь термин «изоэлектрическая точка» или «pI» относится к значению рН, при котором суммарный заряд молекулы, такой как полипептид или пептид, равен нулю (0). В случае полипептида с множеством заряженных функциональных групп, сумма их зарядов при значении pI равна нулю (0). При рН выше pI общий суммарный заряд полипептида будет отрицательным, а при рН ниже pI общий суммарный заряд полипептида будет положительным.
Значения pI можно определить на геле с фиксированным градиентом рН, состоящем из полиакриламида, крахмала или агарозы, с применением изоэлектрического фокусирования или спрогнозировать, например, по аминокислотной последовательности с использованием инструмента pl/MW tool (http://expasy.org/tools/pi_tool.html; Gasteiger et al., 2003) на сервере ExPASy.
При использовании здесь термин «измененная pI» относится к pI, отличающейся от pI нативного глюкагона вследствие замены части аминокислотной последовательности нативного глюкагона на аминокислотный остаток, имеющий отрицательный заряд или положительный заряд, то есть к сниженному или повышенному значению pI. Пептид с такой измененной pI представляет собой производное глюкагона и может демонстрировать улучшенную растворимость и/или высокую стабильность при нейтральном рН. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничено таким производным.
Конкретнее, производное глюкагона может иметь измененное значение pI, отличающееся от значения pI (6,8) нативного глюкагона, еще конкретнее, значение pI менее 6,8, в частности 6,7 или менее, конкретнее, 6,5 или менее, и более 6,8, в частности 7 или более, конкретнее, 7,5 или более, без ограничения указанными вариантами, и объем настоящего изобретения включает любое значение pI, отличающееся от значения pI нативного глюкагона. В частности, объем настоящего изобретения включает любые производные глюкагона при условии их меньшей агрегации, чем у нативного глюкагона, благодаря улучшенной растворимости при нейтральном рН вследствие значения pI, отличающегося от значения pI нативного глюкагона.
Конкретнее, производное глюкагона может иметь значение pI от 4 до 6,5 и/или от 7 до 9,5, конкретнее, от 7,5 до 9,5, еще конкретнее, от 8,0 до 9,3, без ограничения указанными вариантами. В данном случае, поскольку производное глюкагона имеет значение pI выше или ниже значения pI нативного глюкагона, возможно получение улучшенной растворимости и повышенной стабильности по сравнению с нативным глюкагоном. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничено таким производным.
В частности, производное нативного глюкагона может быть модифицировано любым способом замены, добавления, делеции и модификации некоторых аминокислот нативного глюкагона или любой их комбинацией.
Примеры производного глюкагона, полученные комбинацией описанных выше способов, включают пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислоту, отличающуюся от аминокислотной последовательности нативного глюкагона, делецию N-концевого аминокислотного остатка и выполняющий функцию активации рецептора глюкагона, без ограничения указанным пептидом. Производные нативного глюкагона по настоящему изобретению могут быть получены комбинацией различных способов получения производных.
Кроме того, такое изменение для получения производных нативного глюкагона включает все изменения с использованием аминокислот L-типа или D-типа и/или ненативных аминокислот и/или изменение нативной последовательности, например, изменение функциональной группы боковой цепи, образование внутримолекулярных ковалентных связей, такое как образование кольца между боковыми цепями, метилирование, ацилирование, убиквитинирование, фосфорилирование, аминогексанирование (aminohexanation), биотинилирование и тому подобное. Кроме того, изменение включает замену ненативным соединением.
Кроме того, изменение включает все изменения с присоединением одной или более чем одной аминокислоты к N- и/или С-концу нативного глюкагона.
Аминокислоты, используемые для замены или добавления могут представлять собой не только 20 аминокислот, обычно обнаруживаемые в человеческих белках, но также атипичные аминокислоты или аминокислоты, не встречающиеся в природе. Коммерческие источники атипичных аминокислот могут включать Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. и Genzyme Pharmaceuticals. Пептиды, содержащие эти аминокислоты, и обычные пептидные последовательности могут быть синтезированы и приобретены у коммерческих поставщиков, например, American Peptide Company, Bachem или Anygen (Корея).
Сходным образом, могут также быть получены производные аминокислот, например, может бить использована 4-имидазолуксусная кислота.
Поскольку глюкагон имеет значение pI выше 7, он нерастворим в растворе, имеющем физиологический рН (от рН 4 до рН 8), и склонен к осаждению при нейтральном рН. В водном растворе с рН 3 или ниже глюкагон растворим на начальной стадии, но выпадает в осадок в течение одного часа, образуя гель. Поскольку гелеобразный глюкагон состоит главным образом из р-складчатых волокон, введение осажденного глюкагона через инъекционную иглу или посредством внутривенной инфузии может приводить к закупорке кровеносных сосудов, и поэтому глюкагон не подходит для использования в качестве агента для инъекций. Для задержки осаждения обычно используют кислые композиции (от рН 2 до рН 4), что позволяет сохранять глюкагон в относительно неагрегированном состоянии на протяжении короткого периода времени. Тем не менее, при низком рН глюкагнон образует волокна очень быстро, и поэтому эти кислые композиции необходимо вводить сразу после изготовления.
Производное глюкагона по настоящему изобретению включает производные, разработанные для увеличения продолжительности действия посредством изменения значения pI нативного глюкагона заменой аминокислотных остатков, имеющих отрицательные заряды и положительные заряды. Эти производные могут иметь улучшенную растворимость и/или высокую стабильность при нейтральном рН, по сравнению с нативным глюкагоном, вследствие измененного значения pI.
В одном конкретном воплощении производное глюкагона может представлять собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 1:
X1-X2-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-F-X23-X24-W-L-X27-X28-X29-X30 (общая формула 1, SEQ ID NO:45).
В приведенной выше общей формуле 1:
X1 представляет собой гистидин, дезаминогистидил, N-диметилгистидил, β-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил, β-карбоксиимидазопропионил, триптофан или тирозин или отсутствует;
Х2 представляет собой α-метилглутаминовую кислоту, аминоизомасляную кислоту (Aib), D-аланин, глицин, N-метилглицин (Sar), серии или D-серин;
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х13 представляет собой тирозин или цистеин;
Х14 представляет собой лейцин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, серии, α-метилглутаминовую кислоту или цистеин или отсутствует;
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутамин, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, серии, цистеин или валин или отсутствует;
Х18 представляет собой аланин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин, валин или цистеин или отсутствует;
Х19 представляет собой аланин, аргинин, серии, валин или цистеин или отсутствует;
Х20 представляет собой лизин, гистидин, глутамин, аспарагиновую кислоту, аргинин, α-метилглутаминовую кислоту или цистеин или отсутствует;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лейцин, валин или цистеин или отсутствует;
Х23 представляет собой изолейцин, валин или аргинин или отсутствует;
Х24 представляет собой валин, аргинин, аланин, цистеин, глутаминовую кислоту, лизин, глутамин, α-метилглутаминовую кислоту или лейцин или отсутствует;
Х27 представляет собой изолейцин, валин, аланин, лизин, метионин, глутамин или аргинин или отсутствует;
Х28 представляет собой глутамин, лизин, аспарагин или аргинин или отсутствует;
Х29 представляет собой лизин, аланин, глицин или треонин или отсутствует; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует
(за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
Конкретнее, в общей формуле 1, приведенной выше:
X1 представляет собой гистидин, триптофан или тирозин или отсутствует;
Х2 представляет собой серии или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х13 представляет собой тирозин или цистеин;
Х14 представляет собой лейцин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, серии или цистеин;
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, серии, цистеин или валин;
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин или цистеин;
Х19 представляет собой аланин или цистеин;
Х20 представляет собой глутамин, аспарагиновую кислоту, лизин или цистеин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лейцин, валин или цистеин;
Х23 представляет собой изолейцин, валин или аргинин;
Х24 представляет собой валин, аргинин, аланин, глутаминовую кислоту, лизин, глутамин или лейцин;
Х27 представляет собой изолейцин, валин, аланин, метионин, глутамин или аргинин;
Х28 представляет собой глутамин, лизин, аспарагин или аргинин; Х29 представляет собой треонин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует (за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
Примеры пептида включают пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-44, в частности состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-44, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, несмотря на то, что он описан в настоящем изобретении как «пептид, состоящий из определенной SEQ ID NO:», это не исключает мутацию, которая может произойти естественным образом или в результате присоединения незначащей последовательности выше или ниже аминокислотной последовательности SEQ ID NO, или «молчащую» мутацию, при условии, что пептид обладает активностью, которая идентична или эквивалентна активности пептида, состоящего из указанной аминокислотной последовательности, и даже при наличии присоединения или мутации последовательности он очевидным образом входит в объем настоящего изобретения.
Описания, представленные выше, могут также быть применены к другим конкретным воплощениям или аспектам настоящего изобретения, без ограничения указанными воплощениями или аспектами.
В частности, в общей формуле 1, приведенной выше:
X1 представляет собой гистидин, триптофан или тирозин;
Х2 представляет собой серии или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин, треонин или валин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х13 представляет собой тирозин или цистеин;
Х14 представляет собой лейцин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, серии или цистеин;
Х17 представляет собой глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, цистеин или валин;
Х18 представляет собой аргинин или цистеин;
Х19 представляет собой аланин или цистеин;
Х20 представляет собой глутамин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, валин или цистеин;
Х23 представляет собой валин;
Х24 представляет собой валин или глутамин;
Х27 представляет собой метионин;
Х28 представляет собой аспарагин или аргинин;
Х29 представляет собой треонин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует.
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 11-17, 19-27, 29, 31, 33 и 35-44, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 11-17, 19-27, 29, 31, 33 и 35-44, без ограничения указанными вариантами.
В частности, в общей формуле 1, приведенной выше:
X1 представляет собой тирозин;
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой цистеин, треонин или валин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин;
Х13 представляет собой тирозин или цистеин;
Х14 представляет собой лейцин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, серии или цистеин;
Х17 представляет собой лизин, аргинин, цистеин или валин;
Х18 представляет собой аргинин или цистеин;
Х19 представляет собой аланин или цистеин;
Х20 представляет собой глутамин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или цистеин;
Х23 представляет собой валин;
Х24 представляет собой глутамин;
Х27 представляет собой метионин;
Х28 представляет собой аспарагин или аргинин;
Х29 представляет собой треонин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует (за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 14, 17, 19-25, 27, 29, 33, 35-38, 40-42 и 44, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 14, 17, 19-25, 27, 29, 33, 35-38, 40-42 и 44, без ограничения указанными вариантами.
В частности, в общей формуле 1, приведенной выше:
X1 представляет собой гистидин, триптофан или тирозин или отсутствует;
Х2 представляет собой серии или аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х13 представляет собой тирозин или цистеин;
Х14 представляет собой лейцин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, серии или цистеин;
Х17 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, серии, цистеин или валин;
Х18 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин или цистеин;
Х19 представляет собой аланин или цистеин;
Х20 представляет собой глутамин, аспарагиновую кислоту или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
Х23 представляет собой валин;
Х24 представляет собой валин или глутамин;
Х27 представляет собой изолейцин или метионин;
Х28 представляет собой аспарагин или аргинин;
Х29 представляет собой треонин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует (за исключением случая, когда аминокислотная последовательность общей формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-13, 15, 17, 20-24, 26-30 и 32-44, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-13, 15, 17, 20-24, 26-30 и 32-44, без ограничения указанными вариантами.
В частности, в общей формуле 1, приведенной выше:
X1 представляет собой тирозин;
Х2 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
Х7 представляет собой треонин;
Х10 представляет собой тирозин;
Х12 представляет собой лизин;
Х13 представляет собой тирозин;
Х14 представляет собой лейцин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, серии или цистеин;
Х17 представляет собой лизин или аргинин;
Х18 представляет собой аргинин;
Х19 представляет собой аланин;
Х20 представляет собой глутамин. цистеин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту, цистеин, валин или глутаминовую кислоту;
Х23 представляет собой валин или аргинин;
Х24 представляет собой глутамин или лейцин;
Х27 представляет собой метионин;
Х28 представляет собой аспарагин или аргинин;
Х29 представляет собой треонин; и
Х30 отсутствует.
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 16, 18, 19, 25 и 31, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 16, 18, 19, 25 и 31, без ограничения указанными вариантами.
Конкретнее, пептид может представлять собой пептид содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 2:
Y-Aib-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-Y-L-X15-X16-X17-R-A-X20-X21-F-V-X24-W-L-M-N-T-X30 (общая формула 2, SEQ ID NO: 46).
В приведенной выше общей формуле 2:
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту или серии;
Х17 представляет собой лизин или аргинин;
Х20 представляет собой глутамин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
Х24 представляет собой валин или глутамин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует.
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 15 и 36-44, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 15 и 36-44, без ограничения указанными вариантами. Еще конкретнее, пептид может включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, 20 или 37 или состоящий (главным образом) из указанной аминокислотной последовательности. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничено указанными вариантами.
В частности, в общей формуле 2, приведенной выше:
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту или серии;
Х17 представляет собой лизин или аргинин;
Х20 представляет собой глутамин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
Х24 представляет собой глутамин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует, без ограничения указанными вариантами.
Примеры пептида могут включать пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 36-38, 40-42 и 44, в частности пептид, состоящий (главным образом) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 36-38, 40-42 и 44, без ограничения указанными вариантами.
Тем не менее, среди выделенных пептидов, пептиды, соответствующие SEQ ID NO: 2-11, 14, 16-35, 49 и 50, в частности SEQ ID NO: 19, 33, 49 и 50, могут иметь комбинацию вне заявленного диапазона, без ограничения указанными вариантами, и все пептиды, раскрытые в формуле изобретения, входят в объем настоящего изобретения, если в формуле изобретения не указано иное.
Описанное выше производное глюкагона может содержать внутримолекулярную связь (например, ковалентную поперечную сшивку или нековалентную поперечную сшивку) и, в частности, иметь форму, содержащую кольцо. В частности, производное глюкагона может иметь форму, где кольцо образовано между 16-й и 20-й аминокислотами пептида, без ограничения указанным вариантом.
Неограничивающие примеры кольца могут включать лактамную связь (лактамное кольцо).
Кроме того, производное глюкагона включает все производные, модифицированные с включением кольца или включением аминокислоты, способной образовывать кольцо в целевом положении.
Кольцо может быть образовано между боковыми цепями аминокислот производного глюкагона, например, возможно образование лактамного кольца между боковой цепью лизина и боковой цепью глутаминовой кислоты, без ограничения указанным вариантом.
Например, в пептиде, содержащем аминокислотную последовательность общей формулы 1 или 2, каждая аминокислота по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и Х14, Х12 и Х16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28 в общей формуле 1 или 2 может быть заменена на глутаминовую кислоту или лизин, без ограничения указанными вариантами. В Xn (где n является натуральным числом), п указывает на положение аминокислоты с N-конца аминокислотной последовательности.
Кроме того, в пептиде, содержащем аминокислотную последовательность общей формулы 1 или 2, каждая аминокислота пары аминокислот Х12 и Х16, пары аминокислот Х16 и Х20 или пары аминокислот Х17 и Х21 может быть заменена на глутаминовую кислоту или лизин, способные образовывать кольцо, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, в общей формуле 1 или 2, приведенной выше, возможно образование кольца (например, лактамного кольца) между аминокислотами по меньшей мере одной пары аминокислот из пар аминокислот Х10 и Х14, Х12 и Х16, Х16 и Х20, Х17 и Х21, Х20 и Х24, и Х24 и Х28, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, в общей формуле 1 или 2, приведенной выше, Х16 может представлять собой глутаминовую кислоту, и Х20 может представлять собой лизин, и возможно образование лактамного кольца между боковой цепью Х16 и боковой цепью Х20, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, несмотря на то, что пептид по настоящему изобретению может представлять собой пептид с не модифицированным N-концом и/или С-концом, к концам этого пептида может быть присоединен любой пептид в форме варианта, где N-конец и/или С-конец химически модифицирован или защищен органическими группами или аминокислотами, для защиты от протеаз in vivo и одновременного повышения его стабильности, и пептид по настоящему изобретению может также включать такой пептид. Когда С-конец не модифицирован, этот конец пептида по настоящему изобретению содержит карбоксильную группу, без ограничения указанным вариантом.
В частности, поскольку N- и С-концы химически синтезированных пептидов имеют электрический заряд, возможно ацетилирование N-конца и/или амидирование С-конца для устранения этих зарядов, но воплощение не ограничено указанными вариантами.
Если не указано иное, подробные описания «пептида» по настоящему изобретению или «конъюгата», где пептид ковалентно связан с биологически совместимым веществом, раскрытые в описании, или методики, указанные в формуле изобретения, могут быть применены не только к пептиду или конъюгату, но также к соли пептида или конъюгата (например, фармацевтически приемлемой соли пептида) или к их сольватированной форме. Таким образом, несмотря на то, что в описании описаны только «пептид» или «конъюгат», их описания могут также быть применены к их определенным солям, их определенным сольватам и сольватам определенных солей. Такие соли могут, например, иметь форму фармацевтически приемлемой соли. Конкретных ограничений по типам солей нет.Тем не менее, соли могут иметь форму, безопасную и эффективную у млекопитающих, без ограничения указанным вариантом.
Термин «фармацевтически приемлемый» относится к веществу, которое может быть эффективно использовано для предполагаемого применения в рамках фармако-медицинского решения, не приводя к чрезмерной токсичности, раздражению, аллергическим реакциям и тому подобному.
При использовании здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, имеющей происхождение от фармацевтически приемлемой неорганической кислоты, органической кислоты или основания. Примеры подходящей кислоты могут включать соляную кислоту, бромноватую кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, фосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, и-толуолсульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту и бензолсульфоновую кислоту. Примеры подходящих оснований для получения соли могут включать щелочные металлы, такие как натрий и калий, щелочно-земельные металлы, такие как магний, и аммоний.
Кроме того, при использовании здесь термин «сольват» относится к комплексу пептида, конъюгата или его соли по настоящему изобретению и молекул растворителя.
Кроме того, пептид, являющийся производным глюкагона, по настоящему изобретению может быть синтезирован по длине методом, хорошо известным в данной области, например, автоматическим синтезатором пептидов, и может быть получен с применением технологий генной инженерии.
В частности, пептид по настоящему изобретению может быть получен методом стандартного синтеза, в системе рекомбинантной экспрессии или любым другим методом, известным в данной области. Таким образом, производное глюкагона по настоящему изобретению может быть синтезировано множеством методов, включая следующие методы:
(а) метод пошагового синтеза пептида или сборки его фрагментов твердофазным или жидкофазным методом, пошагово или сборкой фрагментов, с последующим выделением и очисткой конечного пептидного продукта;
(б) метод экспрессии конструированной нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, в клетке-хозяине и выделения продукта экспрессии из культуры клеток-хозяев;
(в) метод бесклеточной экспрессии конструированной нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, in vitro и выделения продукта экспрессии; или
метод получения пептидных фрагментов любой комбинацией методов (а), (б) и (в), получения пептида связыванием пептидных фрагментов с последующим выделением пептида.
В одном конкретном воплощении желаемые производные глюкагона могут быть получены получением слитого гена, кодирующего слитый белок, содержащий партнер по слиянию и производное глюкагона, посредством генетической модификации, трансформацией клетки-хозяина слитым геном, экспрессией слитого белка, его расщеплением и выделением производного глюкагона из слитого белка с использованием протеазы или соединения. Для этого, между полинуклеотидами, кодирующими, соответственно, партнера по слиянию и производное глюкагона, может быть введена последовательность ДНК, кодирующая аминокислотный остаток, расщепляемый протеазой, такой как фактор Ха или энтерокиназа, или соединением, таким как CNBr или гидроксиламин.
В более конкретном воплощении вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона (например, производное глюкагона, например, пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 1 или 2, приведенной выше) может иметь форму длительно действующего конъюгата, где указанное вещество связано с биологически совместимым веществом, способным увеличивать период полувыведения in vivo, без ограничения указанным вариантом. Биологически совместимое вещество может быть использовано взаимозаменяемо с носителем.
В частности, в конъюгате вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона находится в форме пептида, а биологически совместимое вещество может быть связано с его пептидным сайтом с активностью в отношении рецептора глюкагона, без ограничения указанным вариантом.
Конкретнее, конъюгат содержит пептидный сайт и биологически совместимое вещество, ковалентно связанное с пептидным сайтом, где пептидный сайт может иметь последовательность, идентичную аминокислотной последовательности общей формулы 1 или 2 или содержащую такую последовательность.
При использовании здесь термин «длительно действующий конъюгат» относится к конъюгату, имеющему структуру, содержащую биологически активное вещество (например, вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или инсулинотропный пептид), связанное с биологически совместимым веществом или носителем, и демонстрирующему увеличенную продолжительность усиленных эффектов (например, больший период полувыведения in vivo) по сравнению с биологически активным веществом, не связанным с биологически совместимым веществом или носителем. В длительно действующем конъюгате биологически совместимое вещество или носитель может быть ковалентно связано с биологически активным веществом, без ограничения указанным вариантом.
В одном конкретном воплощении настоящего изобретения конъюгат производного глюкагона может иметь увеличенную продолжительность усиленных эффектов по сравнению с нативным глюкагоном или производными глюкагона, не связанными с носителем.
При использовании здесь термин «биологически совместимое вещество» относится к веществу, связанному с биологически активным веществом (например, веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона или инсулинотропным пептидом) для увеличения продолжительности эффектов биологически активного вещества по сравнению с биологически активным веществом, не связанным с биологически совместимым веществом или носителем. Биологически совместимое вещество может быть ковалентно связано с биологически активным веществом, без ограничения указанным вариантом.
Примерами биологически совместимого вещества могут быть полимер, жирная кислота, холестерин, альбумин и его фрагменты, альбумин-связывающее вещество, полимер из повторяющихся единиц с определенной аминокислотной последовательностью, антитело, фрагмент антитела, FcRn-связывающее вещество, соединительная ткань in vivo или ее производное, нуклеотид, фибронектин, трансферрин, сахарид, гепарин или эластин, без ограничения указанными вариантами.
Примером полимера может быть полимер, выбранный из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации, без ограничения указанными вариантами.
Полиэтиленгликоль является термином, включающим все из гомополимера этиленгликоля, ПЭГ-сополимера или монометил-замещенного ПЭГ-полимера (мПЭГ), без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, биологически совместимое вещество включает полиаминокислоты, такие как полилизин, полиаспарагиновая кислота и полиглутаминовая кислота, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, жирная кислота может обладать аффинностью связывания в отношении альбумина в живом организме, без ограничен указанным вариантом.
Конкретнее, FcRn-связывающее вещество может представлять собой Fc-область иммуноглобулина и, еще конкретнее, Fc-область IgG, без ограничения указанными вариантами.
С биологически совместимым веществом может быть соединена по меньшей мере одна боковая цепь аминокислоты вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона по настоящему изобретению для увеличения его растворимости и/или периода полувыведения in vivo и/или повышения биодоступности. Эти модификации могут снижать клиренс терапевтических белков и пептидов.
Биологически совместимое вещество может быть растворимым (амфипатичным или гидрофильным), нетоксичным и/или фармацевтически приемлемым.
Специалисту в данной области известно, что модифицированное таким образом производное глюкагона будет оказывать лучший терапевтический эффект по сравнению с нативным глюкагоном. Таким образом, производное глюкагона по настоящему изобретению также включает варианты описанного выше производного глюкагона.
Биологически совместимое вещество может быть связано с веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона непосредственно или через линкер. Биологически совместимое вещество может быть ковалентно связано с веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона непосредственно или через линкер.
В частности, линкер может представлять собой пептидильный линкер или не пептидильный линкер.
Пептидильный линкер может содержать одну или более чем одну аминокислоту, например, от 1 до 1000 аминокислот, без ограничения указанным вариантом. В настоящем изобретении могут быть использованы различные пептидные линкеры, известные в данной области, и они могут включать, например, линкер [GS]x, линкер [GGGS]x и линкер [GGGGS]x, где х является натуральным числом, составляющим 1 или более. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничено указанными вариантами.
В настоящем изобретении «непептидильный линкер» включает биологически совместимый полимер, состоящий из двух или более повторяющихся единиц, связанных друг с другом. Повторяющиеся единицы связаны друг с другом любой ковалентной связью, отличной от пептидной связи. Этот непептидильный линкер может быть компонентом, входящим в состав конъюгата по настоящему изобретению.
В настоящем изобретении непептидильный линкер может быть использован взаимозаменяемо с непептидильный полимером.
В одном конкретном воплощении биологически совместимое вещество может быть ковалентно связано с пептидом через непептидильный линкер, содержащий реакционноспособные группы на обоих концах, связанные, соответственно, с биологически совместимым веществом (в частности с Fc-областью иммуноглобулина) и пептидным лекарственным средством.
В частности, непептидильный линкер может быть выбран из группы, состоящей из жирной кислоты, сахарида, полимера, низкомолекулярного соединения, нуклеотида и любой их комбинации.
Несмотря на отсутствие конкретных ограничений указанными вариантами, полимер по настоящему изобретению может иметь молекулярную массу, составляющую более 0 кДа и равную приблизительно 100 кДа или менее, в частности входящую в диапазон от приблизительно 1 кДа до приблизительно 100 кДа, конкретнее, от приблизительно 1 кДа до приблизительно 20 кДа, без ограничения указанными вариантами.
Несмотря на отсутствие конкретных ограничений указанными вариантами, непептидный линкер может быть выбран из группы, состоящей из биоразлагаемого полимера, такого как полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированный полиол, поливиниловый спирт, полисахарид, декстран, поливинилэтиловый эфир, полимолочная кислота (PLA) и сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA), липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
В более конкретном воплощении непептидильный полимер может представлять собой полиэтиленгликоль, без ограничения указанным вариантом. Кроме того, объем настоящего изобретения также включает его производные, известные в данной области, и производные, которые могут быть легко получены с применением методик, известных в данной области.
Ограничений относительно непептидильного полимера, доступного в настоящем изобретении, нет, при условии, что он обладает устойчивостью к протеазе in vivo. Молекулярная масса непептидильного полимера может составлять более 0 кДа и быть равной приблизительно 100 кДа или менее, в частности входить в диапазон приблизительно от 1 кДа до 100 кДа, конкретнее, от приблизительно 1 кДа до приблизительно 20 кДа, без ограничения указанными вариантами. Кроме того, непептидильный линкер по настоящему изобретению, связанный с полипептидом, содержащим Fc-область иммуноглобулина, может представлять собой не только полимер одного типа, но также комбинацию разных типов полимеров.
При использовании здесь термин «приблизительно» относится к диапазону, включающему все из плюс/минус 0,5, плюс/минус 0,4, плюс/минус 0,3, плюс/минус 0,2, плюс/минус 0,1 или тому подобного и включает все значения, эквивалентные значениям, указанным сразу после термина «приблизительно», или значениям, входящим в сходный диапазон, без ограничения указанными вариантами.
В частности, линкер может быть связан как с пептидным сайтом, так и с биологически совместимым веществом посредством ковалентных связей, образованных, соответственно, при взаимодействии одного конца линкера с аминной или тиоловой группой биологически совместимого вещества и другого конца линкера с аминной или тиоловой группой пептидного сайта, в частности аминокислотной последовательности общей формулы 1 или 2.
В определенном воплощении один конец непептидильного линкера может быть ковалентно связан с аминной или тиоловой группой Fc-области иммуноглобулина, а другой конец линкера может быть ковалентно связан с аминной или тиоловой группой производного глюкагона. В частности, непептидильный полимер может содержать реакционноспособные группы, связанные, соответственно, с биологически совместимым веществом, в частности с Fc-областью иммуноглобулина, и производным глюкагона, на обоих концах. Например, реакционноспособные группы могут образовывать ковалентные связи с биологически совместимым веществом и производным глюкагона посредством взаимодействия с аминной группой N-конца или лизина или тиоловой группой цистеина производного глюкагона и взаимодействия с аминной группой N-конца или лизина или тиоловой группой цистеина биологически совместимого вещества (в частности, например, Fc-области иммуноглобулина), без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, реакционноспособные группы непептидильного полимера, подлежащего связыванию с биологически совместимым веществом, в частности с Fc-областью иммуноглобулина, и производным глюкагона, могут быть выбраны из группы, состоящей из альдегидной группы, малеимидной группы и сукцинимидного производного, без ограничения указанными вариантами.
В приведенном выше описании альдегидная группа может представлять собой пропиональдегидную группу или бутиральдегидную группу, без ограничения указанными вариантами.
В приведенном выше описании сукцинимидное производное может представлять собой сукцинимидилвалерат, сукцинимидилметилбутанонат, сукцинимидилметилпропионат, сукцинимидилбутанонат, сукцинимидилпропионат, N-гидроксисукцинимид, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилкарбоксиметил или сукцинимидилкарбонат, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, конечный продукт, полученный восстановительным аминированием через альдегидные связи, стабильнее связи, образованной амидной связью. Альдегидная реакционноспособная группа селективно взаимодействует с N-концом при низком рН, в то время как при высоком рН, например, при рН 9,0, она образует ковалентную связь с лизиновым остатком.
Кроме того, реакционноспособные группы двух концов могут быть одинаковыми или разными, например, на одном конце может присутствовать малеимидная группа, а на другом конце может присутствовать альдегидная группа, пропиональдегидная группа или бутиральдегидная группа. Тем не менее, конкретных ограничений относительно реакционноспособных групп нет, при условии, что Fc-область иммуноглобулина и производное глюкагона могут быть связаны с соответствующими концами непептидильного линкера.
Например, непептидильный линкер может содержать, в качестве реакционноспособных групп, малеимидную группу на одном конце и альдегидную группу, пропиональдегидную группу или бутилальдегидную группу на другом конце.
При использовании полиэтиленгликоля, имеющего гидроксильные группы в качестве реакционноспособных групп на обоих концах, в качестве непептидильного полимера длительно действующий белковый конъюгат по настоящему изобретению может быть получен активацией гидроксильных групп с получением различных реакционноспособных групп посредством известных химических реакций или с использованием имеющегося в продаже полиэтиленгликоля, имеющего модифицированные реакционноспособные группы.
В одном конкретном воплощении непептидильный полимер может быть связан с цистеиновым остатком, конкретнее, с группой -SH цистеина, производного глюкагона, без ограничения указанным вариантом. В этой связи, непептидильный полимер может представлять собой полиэтиленгликоль, без ограничения указанным вариантом, и может также представлять собой непептидильные полимеры любых других типов, как описано выше.
В одном конкретном воплощении конъюгат может представлять собой конъюгат, где пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, 20 или 37, связан с Fc-областью иммуноглобулина через непептидильный полимер, где непептидильный полимер может быть связан с цистеиновым остатком, расположенным в 30-м положении аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, цистеиновым остатком, расположенным в 17-м положении аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, или цистеиновым остатком, расположенным в 30-м положении аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничено указанными вариантами. В этой связи, непептидильный полимер может представлять собой полиэтиленгликоль, без ограничения указанным вариантом, и может включать непептидильные полимеры любых других типов, как описано выше.
При использовании малеимид-ПЭГ-альдегида малеимидная группа может быть связана с группой -SH производного глюкагона тиоэфирной связью, а альдегидная группа может быть связана с группой -NH2 Fc-области иммуноглобулина восстановительным аминированием, однако это лишь пример и настоящее изобретение не ограничено указанными вариантами.
Кроме того, в конъюгате реакционноспособная группа непептидильного полимера может быть связана с группой -NH2, расположенной на N-конце Fc-области иммуноглобулина, однако это лишь пример.
При использовании здесь термин «Fc-область иммуноглобулина» относится к области, содержащей константную область 2 тяжелой цепи (СН2) и/или константную область 3 тяжелой цепи (СН3) без вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина. Fc-область иммуноглобулина может представлять собой компонент, входящий в состав группировки белкового конъюгата по настоящему изобретению.
Fc-область иммуноглобулина может содержать шарнирную область константной области тяжелой цепи, без ограничения указанным вариантом. Кроме того, Fc-область иммуноглобулина по настоящему изобретению может представлять собой расширенную Fc-область, содержащую часть или всю константную область 1 тяжелой цепи (СН1) и/или константную область 1 легкой цепи (CL1) без вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина, при условии, что Fc-область иммуноглобулина оказывает практически идентичные или усиленные эффекты по сравнению с нативным типом. Кроме того, Fc-область иммуноглобулина может представлять собой область, из которой удалена протяженная часть аминокислотной последовательности, соответствующей СН2 и/или СН3.
Например, Fc-область иммуноглобулина по настоящему изобретению может включать: (1) домен СН1, домен СН2, домен СН3 и домен СН4; (2) домен СН1 и домен СН2; (3) домен СН1 и домен СН3; (4) домен СН2 и домен СН3; (5) комбинацию одного или более чем одного домена, выбранного из домена СН1, домена СН2, домена СН3 и домена СН4, и шарнирной области иммуноглобулина (или части шарнирной области иммуноглобулина); или (6) димер каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи. Тем не менее, данное воплощение не ограничено указанными вариантами.
Кроме того, в одном конкретном воплощении Fc-область иммуноглобулина может находиться в димерной форме и одна молекула производного глюкагона ковалентно связана с одной Fc-областью в димерной форме, где Fc-область иммуноглобулина может быть связана с производным глюкагона через непептидильный полимер. В то же время, две молекулы производного глюкагона могут также быть симметрично связаны с одной Fc-областью в димерной форме. В таком случае Fc иммуноглобулина может быть связана с производными глюкагона через непептидильные линкеры. Тем не менее, данное воплощение не ограничено описанными выше примерами.
Кроме того, Fc-область иммуноглобулина по настоящему изобретению включает не только нативные аминокислотные последовательности, но также производные этих последовательностей. Производные последовательностей относятся к аминокислотным последовательностям, отличающимся от нативной аминокислотной последовательности по меньшей мере одним аминокислотным остатком вследствие делеции, добавления, неконсервативной или консервативной замены или любой их комбинации.
Например, в случае Fc IgG, в качестве подходящих сайтов для модификации могут быть использованы аминокислотные остатки в положениях 214-238, 297-299, 318-322 или 327-331, которые, как известно, важны для связывания.
Кроме того, различные типы производных могут быть получены, например, удалением области, способной образовывать дисульфидную связь, удалением нескольких аминокислот с N-конца нативной Fc или присоединением метионинового остатка к N-концу нативной Fc. Кроме того, для устранения эффекторных функций может быть удален сайт связывания комплемента, например, удален сайт связывания Clq, или может быть удален сайт антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC). Методики получения этих производных последовательностей Fc-области иммуноглобулина раскрыты в публикациях международных заявок на патенты №№WO 97/34631, WO 96/32478 и так далее.
В данной области хорошо известны аминокислотные замены в белках и пептидах, не приводящие к изменению их активности (Н. Neurath, R.L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). Наиболее частыми заменами являются замены между аминокислотными остатками, например, Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu и Asp/Gly. При необходимости Fc-область может быть модифицирована фосфорилированием, сульфатированием, акрилированием, гликозилированием, метилированием, фарнезилированием, ацетилированием, амидированием и тому подобным.
Описанные выше производные Fc могут обладать биологической активностью, идентичной биологической активности Fc-области по настоящему изобретению, и улучшенной структурной стабильностью при нагревании, изменении рН или тому подобном.
Кроме того, эта Fc-область может быть получена из нативных форм, выделенных in vivo от людей или животных, таких как коровы, козы, свиньи, мыши, кролики, хомяки, крысы или морские свинки, или могут представлять собой их рекомбинанты или производные, полученные из трансформированных животных клеток или микроорганизмов. В этой связи, Fc-область может быть получена из нативного иммуноглобулина выделением полноразмерного иммуноглобулина из живого организма человека или животного и обработкой выделенного иммуноглобулина протеазой. При обработке полноразмерного иммуноглобулина папаином происходит его расщепление на Fab- и Fc-области, в то время как при обработке полноразмерного иммуноглобулина пепсином происходит его расщепление на pF'c- и F(ab)2-фрагменты. Fc или pF'c могут быть выделены с применением эксклюзионной хроматографии или тому подобного. В более конкретном воплощении Fc-область человеческого происхождения представляет собой рекомбинантную Fc-область иммуноглобулина, полученную из микроорганизма.
Кроме того, Fc-область иммуноглобулина может иметь естественное содержание гликанов, повышенные или сниженное содержание гликанов по сравнению с естественным типом или быть представлена в дегликозилированной форме. Увеличение или уменьшение содержания гликанов или удаление гликанов Fc иммуноглобулина может быть проведено любыми методами, обычно применяемыми в данной области, такими как химический метод, ферментный метод и генно-инженерный метод с использованием микроорганизма. В этой связи, Fc-область иммуноглобулина, полученная при удалении гликанов, демонстрирует существенное снижение аффинности связывания с Clq и снижение или утрату антителозависимой цитотоксичности или комплемент-зависимой цитотоксичности, и, таким образом, она не приводит к ненужным иммунным ответам в живых организмах. На основании этого, дегликозилированная или агликозилированная Fc-область иммуноглобулина может быть более подходящей в качестве носителя лекарственного средства применительно к задачам настоящего изобретения.
При использовании здесь термин «дегликозилирование» относится к Fc-области, из которой гликан удален с использованием фермента, а термин «агликозилирование» относится к негликозилированной Fc-области, полученной в прокариотах, конкретнее, в E.coli.
В то же время, Fc-область иммуноглобулина может иметь происхождение от людей или животных, таких как коровы, козы, свиньи, мыши, кролики, хомяки, крысы или морские свинки. В более конкретном воплощении Fc-область иммуноглобулина может иметь происхождение от людей.
Кроме того, Fc-область иммуноглобулина может иметь происхождение от IgG, IgA, IgD, IgE, или IgM, или любой их комбинации или гибрида. В более конкретном воплощении она имеет происхождение от IgG или IgM, являющихся наиболее распространенными белками в человеческой крови, а в еще более конкретном воплощении она имеет происхождение от IgG, который, как известно, увеличивает период полувыведения лиганд-связывающих белков. В еще более конкретном воплощении Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4, а в наиболее конкретном воплощении Fc-область иммуноглобулина представляет собой агликозилированную Fc-область, имеющую происхождение от человеческого IgG4, без ограничения указанными вариантами.
В то же время, Fc-область иммуноглобулина по настоящему изобретению может быть образована посредством связи между полипептидом, кодирующим одноцепочечную Fc-область иммуноглобулина одного происхождения, и одноцепочечным полипептидом другого происхождения с образованием димера или мультимера. То есть, возможно получение димера или мультимера с использованием двух или более Fc-фрагментов, выбранных из группы, состоящей из Fc-фрагмента IgG, Fc-фрагмента IgA, Fc-фрагмента IgM, Fc-фрагмента IgD и Fc-фрагмента IgE.
Комбинация, композиция или набор по настоящему изобретению могут быть использованы для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
При использовании здесь термин «предупреждение» относится ко всем действиям, направленным на ингибирование или задержку развития целевого заболевания, например, метаболического синдрома, посредством введения вещества с активностью глюкагона или его конъюгата, соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома или комбинации, или композиции, содержащей указанные компоненты. При использовании здесь термин «лечение» относится ко всем действиям, направленным на облегчение или благоприятное изменение симптомов, связанных с целевым заболеванием, например, метаболического синдрома, посредством введения вещества с активностью глюкагона или его конъюгата, соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома или комбинации, или композиции, содержащей указанные компоненты.
При использовании здесь термин «введение» относится к введению определенного вещества пациенту любым подходящим способом, и путь введения композиции может представлять собой, без ограничения, любой общепринятый способ введения, позволяющий осуществлять доставку композиции к мишени в живых организмах, например, внутрибрюшинное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, внутрикожное введение, пероральное введение, местное введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение или интратекальное введение.
Производное глюкагона или конъюгат, содержащий указанное производное, могут быть использованы сами по себе или в комбинации с соединением или веществом с терапевтической активностью против метаболического синдрома для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
Кроме того, вещество с активностью глюкагона или его конъюгат по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве лекарственного средства для предупреждения увеличения массы тела, ускорения уменьшения массы тела, уменьшения избыточной массы тела и лечения заболевания и состояния здоровья, включающего, без ограничения, ожирение, включая патологическое ожирение (например, посредством контроля аппетита, диеты, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), воспаления, связанного с ожирением, заболевания желчного пузыря, связанного с ожирением, и апноэ во время сна, связанного с ожирением. Вещество с активностью глюкагона или его конъюгат по настоящему изобретению могут также быть использованы для лечения метаболического синдрома, отличного от ожирения, то есть нарушения толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемии, дислипидемии, ожирения, диабета, гипертензии, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), артериосклероза, вызванного дислипидемией, атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца, инсульта и тому подобного. Тем не менее, при этих состояниях эффекты пептида по настоящему изобретению могут быть полностью или частично опосредованы описанным выше эффектом на массу тела или могут не зависеть от него.
При использовании здесь термин «метаболический синдром» относится к симптому, при котором различные заболевания, возникающие из-за хронических метаболических расстройств, возникают сами по себе или в комбинации. В частности, примеры заболеваний, принадлежащих к метаболическому синдрому, могут включать нарушение толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемию, дислипидемию, ожирение, диабет, гипертензию, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), артериосклероз, вызванный дислипидемией, атеросклероз, артериосклероз, ишемическую болезнь сердца и инсульт, без ограничения указанными заболеваниями.
При использовании здесь термин «ожирение» относится к состоянию здоровья, при котором в организме есть избыток жировой ткани. Когда индекс ожирения (индекс массы тела), значение, полученное делением массы тела человека (кг) на квадрат его/ее роста (м2), составляет 25 или более, у этого человека определяют ожирение. Причиной ожирения обычно является энергетический дисбаланс, когда избыток поступающей энергии относительно расхода энергии сохраняется на протяжении длительного времени.
Ожирение является метаболическим заболеванием, поражающим весь организм, повышает вероятность развития диабета и гиперлипидемии, повышает риск развития половой дисфункции, артрита и сердечно-сосудистых заболеваний и связано с развитием рака.
Поскольку производное глюкагона по настоящему изобретению имеет улучшенную растворимость и высокую стабильность при нейтральном рН вследствие измененного значения pI, отличающегося от значения pI нативного глюкагона, а также обладает активностью в отношении рецептора глюкагона, это производное глюкагона может быть эффективно использовано для предупреждения или лечения целевого заболевания, такого как метаболический синдром.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. При использовании здесь термин «фармацевтически приемлемый» относится к количеству, достаточному для оказания терапевтических эффектов без появления побочных эффектов, которое может быть легко определено специалистом в данной области, исходя из факторов, хорошо известным в области медицины, таких как тип заболевания, возраст, масса тела, состояние здоровья, пол пациента и его чувствительность к лекарственным средствам, путь введения, способ введения, частота введения, продолжительность лечения и лекарственное средство, используемое в комбинации или одновременно.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, содержащая вещество с активностью глюкагона и его конъюгат, может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель. Несмотря на отсутствие конкретных ограничений относительно фармацевтически приемлемого носителя, в случае перорального введения могут быть использованы связывающий агент, смазывающий агент, разрыхлитель, эксципиент, солюбилизатор, диспергатор, стабилизатор, суспендирующий агент, краситель и корригент, в случае препаратов для инъекционного введения могут быть использованы, в комбинации, буфер, консервант, обезболивающий агент, солюбилизатор, изотонический агент и стабилизатор, и в случае препарата для местного введения могут быть использованы основа, эксципиент, смазывающий агент, консервант и тому подобное.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в различных формах в комбинации с указанным выше фармацевтически приемлемым носителем. Например, в случае перорального введения фармацевтическая композиция может быть изготовлена в форме таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, вафель и тому подобного. В случае препаратов для инъекционного введения фармацевтическая композиция может быть изготовлена в форме ампулы, содержащей одну дозу, или в форме, содержащей несколько доз. Фармацевтическая композиция может также быть изготовлена в форме растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, препаратов с длительным высвобождением и тому подобного.
В то же время, примеры носителя, эксципиента и разбавителя, подходящих для включения в композиции, могут включать лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, аморфную целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния или минеральные масла. Кроме того, фармацевтическая композиция может дополнительно содержать наполнитель, антикоагулянт, смазывающий агент, увлажнитель, корригент, консервант и тому подобное.
Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в форме, выбранной из группы, состоящей из таблеток, пилюль, порошков, гранул, капсул, суспензий, композиций для приема внутрь, эмульсий, сиропов, стерилизованных водных растворов, неводных растворителей, лиофилизированных препаратов и суппозиториев.
Кроме того, композиция может быть изготовлена в виде стандартной лекарственной формы, подходящей для введения в организм пациента, в частности в форме, применимой для введения пептидных лекарственных средств, способом, обычно применяемым в данной области, и введена посредством перорального пути введения или парентерального пути введения, такого как внутрикожный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, интрамедуллярный, интратекальный, интравентрикулярный, внутрилегочный, трансдермальный, подкожный, внутрибрюшинный, интраназальный, кишечный, местный, сублингвальный, вагинальный или ректальный путь введения, с применением способа введения, обычно применяемого в данной области, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, вещество с активностью глюкагона или его конъюгат могут быть использованы в комбинации с различными носителями, разрешенными в качестве лекарственных средств, такими как физиологический раствор или органический растворитель. В качестве лекарственных средств для повышения стабильности или всасываемости могут быть использованы углеводы, такие как глюкоза, сахароза или декстран, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или глутатион, хелатирующие агенты, белки с низкой молекулярной массой или другие стабилизаторы.
Вводимая доза и частота введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть определены в зависимости от типа лекарственного средства как активного ингредиента в совокупности с различными связанными с ним факторами, такими как заболевание, подлежащее лечению, путь введения, возраст, пол и масса тела пациента и тяжесть заболевания.
Несмотря на отсутствие конкретных ограничений указанным вариантом, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать компонент (активный ингредиент) в количестве от 0,01% до 99% по массе.
Общая эффективная доза композиции по настоящему изобретению может быть введена пациенту в виде одной дозы или в виде множества доз с применением протокола дробного введения на протяжении длительного периода времени. Количество эффективного ингредиента фармацевтической композиции по настоящему изобретению может варьировать в соответствии с тяжестью заболевания. В частности, предпочтительная суточная доза пептида, являющегося производным глюкагона, или его конъюгата по настоящему изобретению может составлять от приблизительно 0,0001 мкг до приблизительно 500 мг на 1 кг массы тела пациента. Тем не менее, поскольку доза пептида или конъюгата определяется как эффективная доза для пациента с учетом различных факторов, таких как возраст, масса тела, состояние здоровья и пол пациента, тяжесть заболевания, питание, скорость выведения, а также путь и частота введения фармацевтической композиции, подходящая эффективная доза для конкретного применения композиции по настоящему изобретению может быть определена специалистом в данной области с учетом этих факторов. Конкретных ограничений относительно состава, пути введения и способа введения фармацевтической композиции нет, при условии получения эффектов, предусмотренных настоящим изобретением.
Поскольку фармацевтическая композиция по настоящему изобретению имеет отличную устойчивость и активность in vivo, это позволяет, среди прочего, существенно снизить кратность и частоту введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
В частности, поскольку фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит производное глюкагона с измененным значением pI, отличающимся от значения pI нативного глюкагона, в качестве активного ингредиента, это позволяет получить улучшенную растворимость и/или высокую стабильность при нейтральном рН, и поэтому фармацевтическая композиция может быть эффективно использована для изготовления стабильной глюкагоновой композиции для лечения целевого заболевания такого как метаболический синдром.
При терапии для предупреждения или лечения метаболического синдрома фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома может дополнительно содержать соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, в дополнение к веществу с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгату, и терапия может дополнительно включать дополнительное применение указанного соединения или вещества.
Примеры соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома для совместного введения или включения в композицию по настоящему изобретению могут включать инсулинотропный пептид, агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1-го типа (GLP-1), агонист рецептора лептина, ингибитор дипептидилпептидазы-4 (DPP-4), антагонист рецептора Y5, антагонист рецептора меланинконцентрирующего гормона (МКГ), агонист рецептора Y2/4, агонист рецептора меланокортина 3/4-го типа (МС3/4), ингибитор желудочной/панкреатической липазы, агониста рецептора 5-гидрокситриптамина типа 2С (5НТ2С), связанного с G-белками, агонист рецептора βА, агонист рецептора амилина, антагонист грелина, антагонист рецептора грелина, агонист альфа-рецептора, активируемого пероксисомными пролифераторами (PPARα), агонист дельта-рецептора, активируемого пероксисомными пролифераторами (PPARδ), агонист фарнезоидного Х-рецептора (FXR), ингибитор ацетил-КоА-карбоксилазы, пептид YY, холецистокинин (ССK), ксенин, глицентин, обестатин, секретин, несфатин, инсулин, глюкозозависимый инсулинотропный пептид (GIP), бигуаниды, препараты сульфонилмочевины, меглитинид, тиазолидиндион (TZD), ингибитор натрий-глюкозного котранспортера (SGLT2) и/или ингибитор a-глюкозидазы, без ограничения указанными вариантами. Конкретнее, указанное соединение или вещество может представлять собой ингибитор DPP-4, ингибитор SGLT2 или агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1-го типа (GLP-1), без ограничения указанными вариантами. Кроме того, указанное соединение или вещество может включать все лекарственные средства с терапевтическим эффектом на ожирение и лекарственные средства, ингибирующие воспаление и фиброз печени.
В частности, при использовании здесь термин «агонист рецептора GLP-1» относится к веществу (соединению, пептиду, аминокислоте и тому подобному) с активностью в отношении рецептора GLP-1, как к одному из веществ, обладающих терапевтической активностью против метаболического синдрома, и может быть использован взаимозаменяемо с «аналогом GLP-1». Агонист рецептора GLP-1 может обладать in vitro активностью в отношении рецептора GLP-1, составляющей 0,1% или более, 1% или более, 2% или более, 3% или более, 4% или более, 5% или более, 6% или более, 7% или более, 8% или более, 9% или более, 10% или более, 20% или более, 30% или более, 40% или более, 50% или более, 60% или более, 70% или более, 80% или более, 90% или более или 100% или более по сравнению с активностью нативного лиганда (GLP-1) указанного рецептора.
Ингибитор DPP-4 может быть выбран из группы, состоящей из ситаглиптина (например, Янувии®), вилдаглиптина, саксаглиптина, алоглиптина, линаглиптина, Траженты®, анаглиптина, тенелиглиптина, трелаглиптина, гемиглиптина, омариглиптина, эвоглиптина и дутоглиптина; и
ингибитор SGLT2 может быть выбран из группы, состоящей из эмпаглифлозина (например, Джардинс®), дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина, этабоната ремоглифлозина, серглифлозина, ипраглифлозина, тофоглифлозина, лузеоглифлозина и эртуглифлозина, но они не ограничены указанными вариантами, при условии, что они могут быть введены совместно с веществом с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгатом по настоящему изобретению и обладают терапевтической активностью.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащая вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат, характеризующаяся тем, что она может, вероятно, быть введена совместно с соединением или веществом с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
Вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона, конъюгат, содержащий указанное вещество, композиция, содержащая указанные вещество или конъюгат, метаболический синдром, предупреждение, лечение и фармацевтическая композиция соответствуют приведенным выше описаниям.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающий введение (1) вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и (2) соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома индивиду, нуждающемуся в этом.
Вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона, конъюгат, содержащий указанное вещество, композиция, содержащая указанные вещество или конъюгат, метаболический синдром, предупреждение и лечение соответствуют приведенным выше описаниям.
В настоящем изобретении индивид относится к субъекту, у которого подозревают наличие метаболического синдрома, и субъект, у которого подозревают наличие метаболического синдрома, относится к млекопитающим, таким как крысы и скот, включая людей с метаболическим синдромом или риском развития этого заболевания, но возможно включение любого индивида, которого можно лечить производным глюкагона или композицией, содержащей указанное производное, по настоящему изобретению, без ограничения. Кроме того, введение фармацевтической композиции, содержащей производное глюкагона, по настоящему изобретению индивиду, у которого подозревают наличие метаболического синдрома, может приводить к эффективному лечению индивида. Метаболический синдром соответствует приведенному выше описанию.
Способ по настоящему изобретению может включать введение индивиду комбинации или фармацевтической композиции, содержащей (включающей) (1) вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгат и (2) соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, в фармацевтически эффективном количестве. Способ по настоящему изобретению может включать введение (1) вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и (2) соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома, в одной композиции или в раздельных композициях, одновременно, по отдельности, последовательно или в обратном порядке, без ограничения указанными вариантами.
Подходящая суточная доза, в виде болюса или множества доз, может быть определена доктором в рамках тщательного медицинского анализа. Для задач настоящего изобретения предпочтительно, чтобы конкретное терапевтически эффективное количество для конкретного пациента применялось по-разному в зависимости от различных факторов, включая тип и степень ответа, который необходимо достичь, конкретная композиция, в том числе применение других композиций, соответствующих случаю, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание пациента, время введения, путь введения, скорость выведения композиции, продолжительность лечения, лекарственное средство, применяемое в комбинации или одновременно с конкретной композицией, и сходные факторы, хорошо известные в области медицины.
В то же время, несмотря на отсутствие конкретных ограничений, способ предупреждения или лечения метаболического синдрома может представлять собой способ совместного введения, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена композиция, в частности фармацевтическая композиция, для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма, содержащая пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид.
Метаболический синдром может представлять собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, состоящей из нарушения толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемии, дислипидемии, ожирения, диабета, гипертензии, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), артериосклероза, вызванного дислипидемией, атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца и инсульта, без ограничения указанными вариантами.
Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона включает вещество в форме пептида, обладающее значимым уровнем активности в отношении рецептора глюкагона, и относится к веществу с активностью в отношении рецептора глюкагона.
Вещество с активностью в отношении рецептора глюкагона, конъюгат, содержащий указанное вещество, композиция, содержащая указанные вещество или конъюгат, метаболический синдром, предупреждение и лечение соответствуют приведенным выше описаниям.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть использована для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма.
При использовании здесь термин «гипогликемия» относится к состоянию патологического снижения уровня глюкозы в крови. Уровень глюкозы в крови ниже 50 мг/дл обычно расценивают как гипогликемию, без ограничения указанным вариантом. Гипогликемия обычно возникает, когда человек, принимающие такие лекарственные средства, как пероральные гипогликемические агенты или инсулин, потребляет меньше пищи или испытывает большие физические нагрузки. Кроме того, гипогликемия может быть вызвана употреблением алкоголя, применением лекарственного средства, снижающего уровень глюкозы в крови, тяжелым физическим заболеванием, дефицитом гормонов, таких как адренокортикотропные гормоны или глюкагон, опухолями поджелудочной железы, продуцирующими инсулин, аутоиммунным заболеванием против инсулина, резекцией желудка, наследственными расстройствами углеводного метаболизма или тому подобным.
В настоящем изобретении гипогликемия включает как острую гипогликемию, так и хроническую гипогликемию.
Симптомы гипогликемии включают слабость, дрожь, бледность, усиленное потоотделение, головокружение, тревожность, нервозность, учащенное сердцебиение, ощущение голода, головную боль, утомляемость и тому подобное. Когда гипогликемия продолжается длительное время, возможно развитие судорог или припадков, приводящих к сотрясению и потере сознания.
В отдельных случаях гипогликемия может быть вызвана стойким гиперинсулинизмом, обусловленным генетическими дефектами. Причины гиперинсулинизма, обусловленного генетическими дефектами, могут включать мутацию SUR или гена Kir6.2 на хромосоме 11р15.1, повышение активности GK вследствие мутации гена глюкокиназы(GK) на хромосоме 7р15-р13 и повышение АТФ в бета-клетках островков поджелудочной железы вследствие активации глутаматдегидрогеназы (GDH) в результате мутации GDH.
В то же время, одной из причин тяжелой и стойкой гипогликемии у новорожденных и детей является врожденный гиперинсулинизм. Врожденный гиперинсулинизм может быть обусловлен временным усилением секреции инсулина у детей с недостаточной массой тела при рождении, или рожденных матерями с диабетом, и ненормальным функционированием клеток поджелудочной железы вследствие генетической мутации. Известно, что для лечения врожденного гиперинсулинизма может быть использован глюкагон.
Кроме того, пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве лекарственного средства для предупреждения увеличения массы тела, ускорения уменьшения массы тела, уменьшения избыточной массы тела и лечения заболевания и состояния здоровья, включающего, без ограничения, ожирение, включая патологическое ожирение (например, посредством контроля аппетита, диеты, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), воспаления, связанного с ожирением, заболевания желчного пузыря, связанного с ожирением, и апноэ во время сна, связанного с ожирением. Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона или конъюгат, содержащий указанный пептид, по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения метаболического синдрома, а также ожирения, то есть связанных с ними заболеваний, таких как нарушение толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемия, дислипидемия, ожирение, диабет, гипертензия, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), артериосклероз, вызванный дислипидемией, атеросклероз, артериосклероз, ишемическая болезнь сердца и инсульт.Тем не менее, при этих состояниях эффекты пептида по настоящему изобретению могут быть полностью или частично опосредованы описанным выше эффектом на массу тела или могут не зависеть от него.
При использовании здесь термин «ожирение» относится к состоянию здоровья, при котором в организме есть избыток жировой ткани. Когда индекс ожирения (индекс массы тела), значение, полученное делением массы тела человека (кг) на квадрат его/ее роста (м2), составляет 25 или более, у этого человека определяют ожирение. Причиной ожирения обычно является энергетический дисбаланс, когда избыток поступающей энергии относительно расхода энергии сохраняется на протяжении длительного времени. Ожирение является метаболическим заболеванием, поражающим весь организм, повышает вероятность развития диабета и гиперлипидемии, повышает риск развития половой дисфункции, артрита и сердечно-сосудистых заболеваний и связано с развитием рака.
Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона по настоящему изобретению может также быть эффективно использован сам по себе для предупреждения или лечения метаболического синдрома, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма, и производное глюкагона может демонстрировать улучшенную растворимость и высокую стабильность при нейтральном рН вследствие измененного значения pI, отличающегося от значения pI нативного глюкагона, и обладать активностью в отношении рецептора глюкагона, что позволяет эффективно использовать его для предупреждения или лечения целевого заболевания, такого как гипогликемия, ожирение, метаболический синдром и врожденный гиперинсулинизм.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона, то есть производное глюкагона.
Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона соответствует приведенному выше описанию.
Конкретнее, он характеризуется тем, что производное представляет собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 1, представленную в SEQ ID NO: 45. Описания и комбинации выделенного пептида, содержащего аминокислотную последовательность приведенной выше общей формулы 1, соответствуют описаниям, приведенным выше.
Он характеризуется тем, что производное представляет собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже общей формулы 2:
Y-Aib-QGTF-X7-SD-X10-S-X12-Y-L-X15-X16-X17-R-A-X20-X21-F-V-X24-W-L-M-N-T-X30 (общая формула 2, SEQ ID NO: 46).
В приведенной выше общей формуле 2:
Х7 представляет собой треонин, валин или цистеин;
Х10 представляет собой тирозин или цистеин;
Х12 представляет собой лизин или цистеин;
Х15 представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин;
Х16 представляет собой глутаминовую кислоту или серии;
Х17 представляет собой лизин или аргинин;
Х20 представляет собой глутамин или лизин;
Х21 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
Х24 представляет собой валин или глутамин; и
Х30 представляет собой цистеин или отсутствует.
Конкретнее, пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 2, приведенной выше, может иметь структуру, где Х16 представляет собой глутаминовую кислоту, Х20 представляет собой лизин и между боковыми цепями Х16 и Х20 общей формулы 2 образовано лактамное кольцо, без ограничения указанным вариантом.
Кроме того, С-конец пептида, содержащего аминокислотную последовательность общей формулы 2, приведенной выше, может быть амидирован или может быть не модифицирован, без ограничения указанными вариантами.
Кроме того, пептид может представлять собой производное глюкагона, способное активировать рецептор глюкагона, без ограничения указанным вариантом.
Конкретнее, пептид может содержать аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 15 и 36-44, без ограничения указанными вариантами.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены выделенный полинуклеотид, кодирующий указанное производное глюкагона, вектор, содержащий указанный полинуклеотид, и выделенные клетки, содержащие указанный полинуклеотид или вектор.
Производное глюкагона соответствует приведенному выше описанию.
В частности, производное может представлять собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 1, представленную в SEQ ID NO: 45. К описаниям и комбинациям, относящимся к выделенному пептиду, содержащему аминокислотную последовательность общей формулы 1, применимы все описания и комбинации, описанные выше. Кроме того, производное может, в частности, представлять собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 1, представленную в SEQ ID NO: 46. К описаниям и комбинациям, относящимся к выделенному пептиду, содержащему аминокислотную последовательность общей формулы 2, применимы все описания и комбинации, описанные выше.
При использовании здесь термин «гомология» указывает на сходство последовательности с аминокислотной последовательностью дикого типа или нуклеотидной последовательностью дикого типа, и сравнение гомологии может быть проведено визуально или с применением имеющейся в продаже программы для проведения сравнения. При использовании имеющейся в продаже компьютерной программы гомология двух или более последовательностей может быть выражена как процент (%) и может быть рассчитана гомология (%) смежных последовательностей.
При использовании здесь термин «рекомбинантный вектор» относится к ДНК-конструкции, содержащей ген, кодирующий целевой пептид, например, производное глюкагона, и функционально связанный с подходящей регуляторной последовательностью для экспрессии целевого пептида, например, производного глюкагона, в подходящей клетке-хозяине.
Регуляторная последовательность может включать промотор, инициирующий транскрипцию, операторную последовательность для регуляции транскрипции, последовательность, кодирующую подходящий сайт связывания рибосом на мРНК, и последовательность регуляции терминации транскрипции и трансляции. После трансформации подходящей клетки-хозяина рекомбинантным вектором он может проходить репликацию или функционировать независимо от генома хозяина и может быть интегрирован в геном.
Конкретных ограничений относительно вектора, используемого здесь, нет, при условии, что рекомбинантный вектор проходит репликацию в клетках-хозяевах, и может быть использован любой вектор, известный в данной области. Примеры вектора, известного в данной области, могут включать естественную или рекомбинантную плазмиду, космиду, вирус и бактериофаг.Конкретных ограничений относительно вектора, доступного в настоящем изобретении, нет, и могут быть использованы любые известные векторы экспрессии.
Рекомбинантный вектор используют для трансформации клеток-хозяев для получения производного глюкагона по настоящему изобретению. Кроме того, как часть настоящего изобретения такие трансформированные клетки могут представлять собой клетки или клеточные линии, используемые для пролиферации фрагментов нуклеиновых кислот и векторов по настоящему изобретению или используемые при культивировании для рекомбинантного получения производного глюкагона по настоящему изобретению.
При использовании здесь термин «трансформация» относится к введению рекомбинантного вектора, содержащего полинуклеотид, кодирующий целевой белок, в клетку-хозяина, таким образом, что происходит экспрессия белка, кодируемого полинуклеотидом, в клетке-хозяине. Полинуклеотид, используемый для трансформации, может быть введен в хромосому клетки-хозяина или расположен вне хромосомы, при условии экспрессии белка в клетке-хозяине.
Кроме того, полинуклеотид включает ДНК и РНК, кодирующую целевой белок. Полинуклеотид может быть введен в клетку-хозяина в любой форме, при условии введения полинуклеотида в клетку-хозяина и экспрессии белка в ней. Например, полинуклеотид может быть введен в клетку-хозяина в форме экспрессионной кассеты, представляющей собой генную конструкцию, содержащую все обязательные элементы, необходимые для саморепликации. Обычно экспрессионная кассета может содержать промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, сигнал терминации транскрипции, сайт связывания рибосом и сигнал терминации трансляции. Экспрессионная кассета может иметь форму самореплицируемого вектора экспрессии. Кроме того, полинуклеотид может быть введен в клетку-хозяина в своей исходной форме и функционально связан с последовательностью, необходимой для экспрессии в клетке-хозяине, без ограничения указанным вариантом.
Кроме того, при использовании здесь термин «функционально связанный» обозначает функциональную связь между последовательностью гена, кодирующего полипептид по настоящему изобретению, и последовательностью промотора, инициирующего и опосредующего транскрипцию нуклеотидной последовательности.
Конкретных ограничений относительно хозяев, подходящих для настоящего изобретения, нет, при условии экспрессии в них полинуклеотида по настоящему изобретению. Конкретные примеры хозяев, доступных в настоящем изобретении, могут включать бактерии, принадлежащие к роду Escherichia, такие как Е. coli, бактерии, принадлежащие к роду Bacillus, такие как Bacillus subtilis, бактерии, принадлежащие к роду Pseudomonas, такие как Pseudomonas putida, дрожжи, такие как Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae и Schizosaccharomyces pombe, клетки насекомых, таких как Spodoptera frugiperda (Sf9), и клетки животных, такие как СНО, COS и BSC.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен выделенный конъюгат, где пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона связан с биологически совместимым веществом, увеличивающим период полувыведения in vivo. Конъюгат может представлять собой длительно действующий конъюгат.
В частности, в качестве выделенного конъюгата, содержащего пептидный сайт и биологически совместимое вещество, связанное с пептидным сайтом ковалентной связью, предложен выделенный конъюгат, где пептидный сайт содержит аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной
последовательности общей формулы 1 или 2 или содержащую такую последовательность.
Производное глюкагона, аминокислотная последовательность общей формулы 1 или 2, биологически совместимое вещество и конъюгат соответствуют приведенным выше описаниям.
В частности, производное может представлять собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 1, представленную в SEQ ID NO: 45. К описаниям и комбинациям, относящимся к выделенному пептиду, содержащему аминокислотную последовательность общей формулы 1, применимы все описания и комбинации, описанные выше.
Конкретнее, он характеризуется тем, что производное представляет собой выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность общей формулы 2, представленную в SEQ ID NO: 46. К описаниям и комбинациям, относящимся к выделенному пептиду, содержащему аминокислотную последовательность общей формулы 2, применимы все описания и комбинации, описанные выше.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма, гипогликемии, ожирения или метаболического синдрома, включающий введение индивиду пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или конъюгата, содержащего указанный пептид, или композиции, содержащей указанный пептид или конъюгат.
Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона, конъюгат, содержащий указанный пептид, композиция, содержащая указанный пептид или конъюгат, врожденный гиперинсулинизм, гипогликемия, ожирение, метаболический синдром, предупреждение и лечение соответствуют приведенным выше описаниям.
В настоящем изобретении индивид относится к субъекту, у которого подозревают наличие врожденного гиперинсулинизма, гипогликемии, ожирения или метаболического синдрома, и субъект, у которого подозревают наличие врожденного гиперинсулинизма, гипогликемии, ожирения или метаболического синдрома, относится к млекопитающим, таким как крысы и скот, включая людей с указанным заболеванием или риском развития этого заболевания, но возможно включение любого индивида, которого можно лечить производным глюкагона или композицией, содержащей указанное производное, по настоящему изобретению, без ограничения. Кроме того, введение фармацевтической композиции, содержащей пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона по настоящему изобретению индивиду, у которого подозревают наличие врожденного гиперинсулинизма, гипогликемии или ожирения, может приводить к эффективному лечению индивида. Врожденный гиперинсулинизм, гипогликемия, ожирение и метаболический синдром соответствуют приведенным выше описаниям.
Способ по настоящему изобретению может включать введение фармацевтической композиции, содержащей пептид, в фармацевтически эффективном количестве. Подходящая суточная доза, в виде болюса или множества доз, может быть определена врачом в рамках тщательного медицинского анализа. Тем не менее, для задач настоящего изобретения предпочтительно, чтобы конкретное терапевтически эффективное количество для конкретного пациента применялось по-разному в зависимости от различных факторов, включая тип и степень ответа, который необходимо достичь, конкретная композиция, в том числе применение других композиций, соответствующих случаю, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание пациента, время введения, путь введения, скорость выведения композиции, продолжительность лечения, лекарственное средство, применяемое в комбинации или одновременно с конкретной композицией, и сходные факторы, хорошо известные в области медицины.
В то же время, несмотря на отсутствие конкретных ограничений, способ предупреждения или лечения метаболического синдрома может представлять собой способ совместного введения, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома.
При использовании термина «совместное введение» следует понимать, что компоненты вводят одновременно, по отдельности или последовательно. Когда введение проводят последовательно или по отдельности, интервал между двумя компонентами следует устанавливать так, чтобы не были утрачены полезные эффекты совместного введения.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона, или выделенного конъюгата, или композиции для изготовления лекарственных средств (или фармацевтической композиции) для предупреждения или лечения врожденного гиперинсулинизма, гипогликемии, ожирения или метаболического синдрома.
Пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона, выделенный конъюгат, композиция, врожденный гиперинсулинизм, гипогликемия, ожирение и метаболический синдром соответствуют приведенным выше описаниям.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Тем не менее, следующие примеры приведены исключительно для пояснения настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения не ограничен приведенными примерами.
Пример 1: Получение клеточной линии, демонстрирующей цАМФ-ответ на глюкагон
Проводили ПЦР с использованием области гена человеческого рецептора глюкагона, соответствующей открытой рамке считывания (ORF) в кДНК (OriGene Technologies, Inc., США) в качестве матрицы, и прямого и обратного праймеров SEQ ID NO: 47 и 48, содержащих сайты рестрикции EcoRI и XhoI, соответственно.
В связи с этим, ПЦР проводили на протяжении в общей сложности 30 циклов в следующих условиях: 95°С на протяжении 60 секунд для денатурации, 55°С на протяжении 60 секунд для отжига и 68°С на протяжении 30 секунд для элонгации. Амплифицированные ПЦР-продукты подвергали электрофорезу в 1,0%-м агарозном геле с последующим элюированием, получая полосу 450 п. о.
Прямой праймер (SEQ ID NO: 47):
5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3'.
Обратный праймер (SEQ ID NO: 48):
5'-СТА ACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3'.
ПЦР-продукт клонировали в известный вектор экспрессии для клеток животных, x0GC/dhfr, получая рекомбинантный вектор xOGC/GCGR.
Клетки СНО DG44, культивированные в среде DMEM/F12, дополненной 10% FBS, трансформировали полученным рекомбинантным вектором x0GC/GCGR с использованием липофектамина и культивировали в селективной среде, содержавшей 1 мг/мл G418 и 10 нМ метотрексата. Из них отбирали отдельные клональные клетки методикой серийного разведения и, в завершение, отбирали из них клеточную линию, демонстрировавшую отличный цАМФ-ответ на глюкагон зависимым от концентрации образом.
Пример 2: Синтез производного глюкагона
Для получения производного глюкагона с улучшенными физическими свойствами аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1) нативного глюкагона заменяли аминокислотными остатками с отрицательными и положительными зарядами, синтезируя производные глюкагона, показанные в Таблице 1 ниже. Относительную активность in vitro, описанную здесь, измеряли методом, описанным в Примере 4 ниже.
В аминокислотных последовательностях, описанных в Таблице 1, аминокислота, отмеченная как X, представляет собой ненативную аминокислоту, аминоизомасляную кислоту (Aib), подчеркнутые аминокислоты соответствуют образованию лактамного кольца между боковыми цепями пары аминокислот, «-» в аминокислотной последовательности указывает на отсутствие аминокислотного остатка в соответствующем положении, и «-» в столбце «Кольцо» указывает на отсутствие образования кольца.
Пример 3: Измерение pI производного глюкагона
Для определения улучшенных физических свойств производных глюкагона, синтезированных в Примере 2, значения pI рассчитывали по аминокислотным последовательностям с использованием инструмента pI/Mw (http://expasy.org/tools/pi tool.html; Gasteiger et al., 2003) на сервере ExPASy.
Как показано в Таблице 1 выше, несмотря на то, что нативный глюкагон SEQ ID NO: l имел pI 6,8, некоторые производные глюкагона по настоящему изобретению продемонстрировали значения pI в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 6. Поскольку производные глюкагона имеют значения pI ниже или выше значения pI нативного глюкагона, они могут демонстрировать улучшенную растворимость и более высокую стабильность в условиях нейтрального рН по сравнению с нативным глюкагоном.
При использовании производных глюкагона по настоящему изобретению в качестве терапевтических агентов для лечения целевого заболевания, такого как метаболический синдром, они позволяют повысить приверженность пациентов к лечению, и производные глюкагона также подходят для введения в комбинации с другими агентами против ожирения или противодиабетическими агентами, и поэтому производные глюкагона по настоящему изобретению могут быть эффективно использованы в качестве терапевтических агентов для лечения метаболического синдрома, а также ожирения, диабета, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), дислипидемии и ишемической болезни сердца.
Пример 4: Измерение цАМФ-активности производного глюкагона
Активность производных глюкагона, синтезированных в Примере 2, измеряли в клеточных линиях с человеческими рецепторами глюкагона, полученных в Примере 1. Конкретно, проводили субкультивирование трансформированных клеточных линий 3-4 раза в неделю, аликвотировали их в 384-луночном планшете в количестве 6×103 клеток на лунку и культивировали на протяжении 24 часов. Нативный глюкагон и производные глюкагона суспендировали в буфере на основе сбалансированного солевого раствора Хэнкса (HBSS), содержавшем 0,5 мМ 3-изобутил-1-метилксантина (IBMX), 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 5 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES), с культивированными клетками, в концентрации 200 нМ и 1600 нМ, соответственно, подвергали 10 непрерывным раундам 4-кратного разведения, вносили в планшет из набора для цАМФ-анализа (LANCE cAMP 384 kit, PerkinElmer), добавляли к культивированным клеткам и измеряли значения их флуоресценции. При измерении наибольшее значение флуоресценции принимали за 100%, на основании этого значения рассчитывали значения ЕС50 производных глюкагона и сравнивали каждое из их с ЕС50 нативного глюкагона. Полученные результаты показаны в Таблице 1 выше.
Пример 5: Получение конъюгата, содержащего производное глюкагона и Fc
иммуноглобулина (конъюгата «производное глюкагона - Fc-область
иммуноглобулина»)
Конъюгат получали, отбирая производное глюкагона, полученное в Примере 2 выше, со значением pI от 6 до 7 и активностью in vitro 200% или более в качестве репрезентативного производного глюкагона. Для пегилирования цистеинового остатка производного глюкагона с использованием 10 кДа ПЭГ, имеющего малеимидную группу и альдегидную группу на обоих концах, соответственно, то есть малеимид-ПЭГ-альдегида (10 кДа, NOF, Япония), производные глюкагона и малеимид-ПЭГ-альдегид подвергали взаимодействию в молярном отношении от 1:1 до 5 при концентрации белка от 3 мг/мл до 10 мг/мл при низкой температуре на протяжении 1-3 часов. В данном случае взаимодействие проводили в среде, содержавшей 50 мМ трис-буфер (рН 7,5) с добавлением от 20% до 50% изопропанола. По завершении взаимодействия реакционный раствор переносили на SP Sepharose HP (GE Healthcare, США) для очистки производных глюкагона, монопегилированных по цистеину.
Затем очищенные монопегилированные производные глюкагона и Fc иммуноглобулина подвергали взаимодействию в молярном отношении от 1:2 до 10 при концентрации белка от 10 мг/мл до 50 мг/мл при 4-8°С на протяжении 12-18 часов. Взаимодействие проводили в среде с добавлением от 10 мМ до 50 мМ цианборгидрида натрия в качестве восстанавливающего агента и от 10% до 20% изопропанола в буфер со 100 мМ фосфата кальция (рН 6,0). По завершении взаимодействия раствор взаимодействующих веществ переносили на колонку для очистки Butyl Sepharose FF (GE Healthcare, США) и колонку для очистки Source ISO (GE Healthcare, США), проводя очистку конъюгата, содержащего производное глюкагона и Fc иммуноглобулина.
После получения степень чистоты, которую анализировали хроматографией с обращенной фазой, эксклюзионной хроматографией и ионообменной хроматографией, составляла 95% или более.
В этой связи, конъюгат, где производное глюкагона связано с Fc иммуноглобулина посредством ПЭГ, называли «конъюгатом, содержащим производное глюкагона и Fc иммуноглобулина», «длительно действующим конъюгатом производного глюкагона» или «длительно действующим производным глюкагона», что может быть использовано здесь взаимозаменяемо.
Экспериментальный пример 1: Эффект на уменьшение массы тела и повышение чувствительности к инсулину у мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жиров
Для данного эксперимента использовали мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жиров, которые находят широкое применение в качестве модели ожирения у животных. Масса тела мышей входила в диапазон приблизительно от 50 г до 55 г. Во время этого эксперимента животных содержали группами по 7 мышей и обеспечивали им свободный доступ к воде. Свет выключали с 18:00 до 6:00.
Экспериментальные группы, получавшие корм с высоким содержанием жиров, включали следующие группы. Группа 1: введение эксципиента без длительно действующего глюкагона (5 мл/кг, инъекция один раз в 2 суток) - контроль (наполнитель). Группа 2: введение лекарственного средства от ожирения, являющегося аналогом GLP-1 (Саксенда®, 50 нмоль/кг, инъекция два раза в сутки). Группа 3: введение длительно действующего производного глюкагона (1,2 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 4: введение ингибитора DPP-4 (ситаглиптин, 49,2 мг/кг, инъекция один раз в сутки).
Эксперимент прекращали на 28 сутки и изменения массы тела мышей в каждой группе измеряли в ходе эксперимента с интервалами 2 суток, а изменения уровня глюкозы в крови измеряли до введения и на 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25 и 28 сутки после введения. При прекращении эксперимента измеряли массу жировой ткани и HOMA-IR.
По результатам измерения изменений массы тела, как показано на ФИГ. 1, было подтверждено, что группа введения длительно действующего производного глюкагона (1,2 нмоль/кг, один раз в 2 суток) продемонстрировала уменьшение массы тела на 34,5% по сравнению с массой тела до введения, и эти эффекты превосходили уменьшение массы тела на 2,6%, 16,3% и 0,1% при использовании контроля (наполнитель), лекарственного средства от ожирения, являющегося аналогом GLP-1 (Саксенда®), и ингибитора DPP-4 (ситаглиптин), соответственно. Как показано на ФИГ. 2(A) и 2(Б), было подтверждено, что уменьшение массы тела было вызвано значительным уменьшением количества жировой ткани при повышении чувствительности к инсулину, исходя из результатов измерения HOMA-IR. Кроме того, как показано на ФИГ. 3, было подтверждено, что глюкагон оказывает более выраженные эффекты на уменьшение массы тела, чем аналог GLP-1 и ингибитор DPP-4, при дозе, не приводящей к риску гипергликемии, исходя из отсутствия повышения уровней глюкозы в крови в периоде введения препарата.
Статистический анализ проводили, сравнивая группу эксципиента (контроль) с экспериментальными группами посредством 1-факторного ANOVA.
Результаты, показанные выше, указывают на то, что пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона по настоящему изобретению может быть использован в качестве лекарственного средства для предупреждения или лечения различных метаболических синдромов, гипогликемии или врожденного гиперинсулинизма.
Экспериментальный пример 2: Эффект совместного введения длительно действующего производного глюкагона и лекарственного средства от диабета для перорального введения на уменьшение массы тела и повышение чувствительности к инсулину у мышей с ожирением, индуцированным диетой с
высоким содержанием жиров
Для данного эксперимента использовали мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жиров, которые находят широкое применение в качестве модели ожирения у животных. Масса тела мышей входила в диапазон приблизительно от 50 г до 55 г. Во время этого эксперимента животных содержали группами по 7 мышей и обеспечивали им свободный доступ к воде. Свет выключали с 18:00 до 6:00.
Экспериментальные группы, получавшие корм с высоким содержанием жиров, включали следующие группы. Группа 1: введение эксципиента без длительно действующего глюкагона (5 мл/кг, инъекция один раз в 2 суток) - контроль (наполнитель). Группа 2: введение лекарственного средства от ожирения, являющегося аналогом GLP-1 (Саксенда®, 50 нмоль/кг, инъекция два раза в сутки). Группа 3: введение длительно действующего производного глюкагона (1,2 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 4: введение ингибитора DPP-4 (ситаглиптин, 49,2 мг/кг, инъекция один раз в сутки). Группа 5: введение ингибитора SGLT2 (эмпаглифлозин, 12,3 мг/кг, инъекция один раз в сутки). Группа 6: совместное введение ситаглиптина (49,2 мг/кг, инъекция один раз в сутки) с длительно действующим производным глюкагона (1,2 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток) и Группа 7: совместное введение эмпаглифлозина (12,3 мг/кг, инъекция один раз в сутки) с длительно действующим производным глюкагона (1,2 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Длительно действующее производное глюкагона, использованное в данном эксперименте, представляло собой длительно действующее производное по Примеру 5.
Эксперимент прекращали на 28 сутки и изменения массы тела мышей в каждой группе измеряли в ходе эксперимента с интервалами 2 суток, а изменения уровня глюкозы в крови измеряли до введения и на 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25 и 28 сутки после введения. При прекращении эксперимента измеряли массу жировой ткани и HOMA-IR.
По результатам измерения изменений массы тела, как показано на ФИГ. 4, было подтверждено, что группы совместного введения длительно действующего производного глюкагона (1,2 нмоль/кг, один раз в 2 суток) с ингибитором DPP-4 (ситаглиптином) или ингибитором SGLT2 (эмпаглифлозином) продемонстрировали более выраженные эффекты уменьшения массы тела на 46,9% и 39,5%, соответственно, по сравнению с уменьшением массы тела в группе, получавшей только длительно действующее производное глюкагона, и эффекты совместного введения были более выраженными, чем в контроле (наполнитель) и в группах, получавших лекарственное средство от ожирения, являющееся аналогом GLP-1 (Саксенда®), ингибитор DPP-4 (ситаглиптин) и ингибитор SGLT2 (эмпаглифлозин), которые продемонстрировали уменьшение массы тела на 2,6%, 16,3%, 0,1% и 10,4%, соответственно. Как показано на ФИГ. 5(A) и 5(Б), было подтверждено, что уменьшение массы тела вызвано значительным уменьшением количества жировой ткани при повышении чувствительности к инсулину, исходя из результатов измерения HOMA-IR. Кроме того, как показано на ФИГ. 6, было подтверждено, что совместное введение оказывает более выраженные эффекты на уменьшение массы тела, чем аналог GLP-1 и ингибитор DPP-4, при дозе, не приводящей к риску гипергликемии, исходя из отсутствия повышения уровней глюкозы в крови в периоде введения препарата. Кроме того, было подтверждено, что при совместном введении производного глюкагона с лекарственным средством от диабета для перорального введения, таким как ингибитор DPP-4 ситаглиптин и ингибитор SGLT2 эмпаглифлозин, можно ожидать усиления терапевтических эффектов на ожирение благодаря дополнительному уменьшению массы тела и улучшения эффектов контроля уровней глюкозы в крови в результате повышения чувствительности к инсулину.
Статистический анализ проводили, сравнивая группу эксципиента (контроль) с экспериментальными группами посредством 1-факторного ANOVA. Экспериментальный пример 3: Определение эффекта длительно действующего производного глюкагона и длительно действующего аналога GLP-1 на уменьшение массы тела и дополнительного эффекта совместного введения у мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жиров Для данного эксперимента использовали мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жиров, которые находят широкое применение в качестве модели ожирения у животных. Масса тела мышей входила в диапазон приблизительно от 50 г до 55 г. Во время этого эксперимента животных содержали группами по 7 мышей и обеспечивали им свободный доступ к воде. Свет выключали с 18:00 до 6:00.
Экспериментальные группы, получавшие корм с высоким содержанием жиров, включали следующие группы. Группа 1: введение эксципиента без длительно действующего глюкагона (5 мл/кг, инъекция один раз в 2 суток) - контроль (наполнитель). Группа 2: введение аналога GLP-1 (Саксенда®, 50 нмоль/кг, инъекция два раза в сутки). Группа 3: введение длительно действующего аналога GLP-1 (Оземпик®, 20,5 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 4: введение длительно действующего аналога GLP-1 (Трулисити®, 2,7 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 5: введение длительно действующего производного глюкагона (2,0 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 6: совместное введение аналога GLP-1 (Саксенда®, 50 нмоль/кг, инъекция два раза в сутки) и длительно действующего производного глюкагона (2,0 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 7: совместное введение длительно действующего аналога GLP-1 (Оземпик®, 20,5 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток) и длительно действующего производного глюкагона (2,0 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Группа 8: совместное введение длительно действующего аналога GLP-1 (Трулисити®, 2,7 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток) и длительно действующего производного глюкагона (2,0 нмоль/кг, инъекция один раз в 2 суток). Длительно действующее производное глюкагона, использованное в данном эксперименте, представляло собой длительно действующее производное по Примеру 5.
Эксперимент прекращали на 28 сутки и по ходу эксперимента изменения массы тела мышей в каждой группе оценивали с интервалом 2 суток. При прекращении эксперимента измеряли уровни липидов в крови, массу жировой ткани и уровни глюкозы в крови.
По результатам измерения изменений массы тела, как показано на ФИГ. 7, было подтверждено, что группы совместного введения длительно действующего производного глюкагона (2,0 нмоль/кг, один раз в 2 суток) с аналогом GLP-1 (Саксенда®), длительно действующим аналогом GLP-1 (Оземпик®) и длительно действующим аналогом GLP-1 (Трулисити®) продемонстрировали более выраженные эффекты уменьшения массы тела на 47,54%, 45,71% и 43,68%, соответственно, по сравнению с массой тела до введения, и это уменьшение массы тела было больше уменьшения массы тела на 39,88%, полученного при применении длительно действующего производного глюкагона самого по себе, и указанные эффекты были больше, чем в группах контроля (наполнитель), лекарственного средства от ожирения, являющегося аналогом GLP-1 (Саксенда®), длительно действующего аналога GLP-1 (Оземпик®) и длительно действующего аналога GLP-1 (Трулисити®), продемонстрировавших увеличение массы тела на 1,34% и уменьшение массы тела на 18,10%, 12,38% и 3,81%, соответственно.
Кроме того, как показано на ФИГ. 8(A) и 8(Б), были дополнительно подтверждены уменьшение массы жировой ткани и снижение уровней липидов в крови, аналогично эффектам уменьшения массы тела.
Кроме того, как показано на ФИГ. 9, было подтверждено, что глюкагон оказывает более выраженные эффекты на уменьшение массы тела, чем аналог GLP-1, использованный в качестве другого лекарственного средства от ожирения, и что при дозе, не приводящей к риску гипергликемии, исходя из отсутствия повышения уровней глюкозы в крови в периоде введения препарата, можно ожидать усиления терапевтических эффектов совместного введения благодаря дополнительному уменьшению массы тела посредством совместного введения с аналогом GLP-1.
Статистический анализ проводили, сравнивая группу эксципиента (контроль) с экспериментальными группами посредством 1-факторного ANOVA.
Результаты, показанные выше, указывают на то, что совместное введение вещества с активностью в отношении рецептора глюкагона или его конъюгата и соединения или вещества с терапевтической активностью против метаболического синдрома может быть применено в качестве лекарственного средства для предупреждения или лечения метаболического синдрома.
Изложенное выше описание настоящего изобретения приведено в целях пояснения, и специалистам в данной области будет ясно, что возможны различные изменения и модификации без изменения технической концепции и основных признаков настоящего изобретения. Таким образом, очевидно, что описанные выше воплощения являются пояснительными во всех аспектах и не ограничивают настоящее изобретение. Различные воплощения, раскрытые здесь, не являются ограничивающими, при этом истинные объем и сущность изобретения определены последующей формулой изобретения. Настоящее изобретение ограничено только приложенной формулой изобретения, а также полным объемом эквивалентов, соответствующих приложенной формуле изобретения.
--->
<110> HANMI PHARM. CO., LTD.
<120> THERAPEUTIC USE OF GLUCAGON AND COMBINATION INCLUDING THE SAME
<130> OPA19215
<150> KR 10-2018-0118462
<151> 2018-10-04
<150> KR 10-2018-0118463
<151> 2018-10-04
<160> 50
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 2
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 2
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Asp Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 3
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Glu Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 4
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Asp Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 5
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 5
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Glu Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 6
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 6
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Glu Ala Asp Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<400> 7
Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Glu Ala Asp Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 8
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 8
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Asp Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Ile Asn Thr
20 25
<210> 9
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 9
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Asp Ala Gln Asp Phe Val Val Trp Leu Ile Asn Thr
20 25
<210> 10
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 10
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Cys Asp Ala Asp Asp Phe Val Val Trp Leu Ile Asn Thr
20 25
<210> 11
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 11
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Cys Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 12
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 12
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 13
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 13
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Cys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 14
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 14
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 15
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 15
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Cys Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Gln Asp Phe Val Val Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 16
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 16
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Val Phe Val Gln Trp Leu Met Arg Thr
20 25
<210> 17
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 17
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Val Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Arg Thr
20 25
<210> 18
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 18
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Cys Asp Phe Arg Leu Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 19
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 19
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Cys Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 20
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 20
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 21
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 21
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Cys Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 22
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 22
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Cys Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 23
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 23
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Cys Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 24
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 24
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 25
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 25
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Cys Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 26
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 26
Trp Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 27
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 27
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Val Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 28
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 28
Trp Xaa Gln Gly Thr Phe Val Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Cys Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 29
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 29
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 30
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 30
Trp Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 31
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(21)
<223> аминокислоты в положениях 17 и 21 образуют кольцо
<400> 31
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 32
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(19)
<223> аминокислоты в положениях 15 и 19 образуют кольцо
<400> 32
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Cys
1 5 10 15
Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 33
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 33
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 34
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 34
Trp Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Cys Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 35
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 35
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Cys Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 36
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 36
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 37
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 37
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 38
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 38
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Cys Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 39
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 39
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Val Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 40
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 40
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Val Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 41
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты в положениях 16 и 20 образуют кольцо
<400> 41
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Cys Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 42
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 42
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Cys Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 43
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 43
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<400> 44
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 45
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa представляет собой гистидин, дезаминогистидил, N-диметилгистидил,
бета-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил, бета-карбокси-
имидазопропионил, триптофан или тирозин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой альфа-метилглутаминовую кислоту,
аминоизомасляную кислоту (Aib), D-аланин, глицин, Sar (N-метилглицин),
серин или D-серин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa представляет собой треонин, валин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa представляет собой тирозин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa представляет собой лизин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa представляет собой тирозин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)
<223> Xaa представляет собой лейцин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)
<223> Xaa представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или
цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)
<223> Xaa представляет собой глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, серин,
альфа-метилглутаминовую кислоту или цистеин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)
<223> Xaa представляет собой аспарагиновую кислоту, глутамин, глутаминовую
кислоту, лизин, аргинин, серин, цистеин или валин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)
<223> Xaa представляет собой аланин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую
кислоту, аргинин, валин или цистеин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)
<223> Xaa представляет собой аланин, аргинин, серин, валин или цистеин или
отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)
<223> Xaa представляет собой лизин, гистидин, глутамин, аспарагиновую кислоту,
лизин, аргинин, альфа-метилглутаминовую кислоту или цистеин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)
<223> Xaa представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лейцин,
валин или цистеин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)
<223> Xaa представляет собой изолейцин, валин или аргинин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)
<223> Xaa представляет собой валин, аргинин, аланин, цистеин, глутаминовую кислоту,
лизин, глутамин, альфа-метилглутаминовую кислоту или лейцин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)
<223> Xaa представляет собой изолейцин, валин, аланин, лизин, метионин,
глутамин или аргинин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)
<223> Xaa представляет собой глутамин, лизин, аспарагин или аргинин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)
<223> Xaa представляет собой лизин, аланин, глицин или треонин или отсутствует
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)
<223> Xaa представляет собой цистеин или отсутствует
<400> 45
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Xaa Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
<210> 46
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa представляет собой треонин, валин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa представляет собой тирозин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa представляет собой лизин или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)
<223> Xaa представляет собой аспарагиновую кислоту или цистеин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)
<223> Xaa представляет собой глутаминовую кислоту или серин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)
<223> Xaa представляет собой лизин или аргинин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)
<223> Xaa представляет собой глутамин или лизин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)
<223> Xaa представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)
<223> Xaa представляет собой валин или глутамин
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)
<223> Xaa представляет собой цистеин или отсутствует
<400> 46
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Xaa Ser Asp Xaa Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Arg Ala Xaa Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr Xaa
20 25 30
<210> 47
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> прямой праймер
<400> 47
cagcgacacc gaccgtcccc ccgtacttaa ggcc 34
<210> 48
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> обратный праймер
<400> 48
ctaaccgact ctcggggaag actgagctcg cc 32
<210> 49
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту
<400> 49
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Cys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 50
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное глюкагона
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой аминоизомасляную кислоту
<400> 50
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Cys Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Фармацевтическая композиция, содержащая инсулин и глюкагон | 2019 |
|
RU2823246C2 |
| ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ КОНЪЮГАТА ТРОЙНОГО АГОНИСТА ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ, ОБЛАДАЮЩЕГО АКТИВНОСТЯМИ В ОТНОШЕНИИ ВСЕХ ИЗ РЕЦЕПТОРОВ ГЛЮКАГОНА /GLP-1/GIP, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЛЕГКОГО | 2020 |
|
RU2829342C1 |
| Композиция для лечения гиперлипидемии, содержащая производное оксинтомодулина | 2013 |
|
RU2768853C1 |
| Жидкая композиция | 2021 |
|
RU2838973C1 |
| Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение | 2012 |
|
RU2733544C2 |
| Конъюгат физиологически активного вещества длительного действия и его применение | 2018 |
|
RU2773823C2 |
| Новые производные оксинтомодулина и содержащая их фармацевтическая композиция для лечения ожирения | 2012 |
|
RU2739209C2 |
| Комплекс аналога инсулина со сниженной аффинностью к инсулиновому рецептору и его применение | 2018 |
|
RU2779462C2 |
| FC-фрагмент IgG4, содержащий модифицированную шарнирную область | 2014 |
|
RU2800558C1 |
| Антитела против TIGIT и их применение | 2019 |
|
RU2750705C1 |
Группа изобретений относится к комбинации для предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающей (1) конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и (2) соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, выбранное из группы, состоящей из ситаглиптина, эмпаглифлозина, лираглутида, семаглутида и дулаглутида, где указанная комбинация включает конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома в количестве от 0,01 до 99% по массе, и где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую SEQ ID NO: 37, также относится к набору для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащему: (1) конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина; и (2) соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, выбранное из группы, состоящей из ситаглиптина, эмпаглифлозина, лираглутида, семаглутида и дулаглутида, где указанная комбинация включает конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома в количестве от 0,01 до 99% по массе, и где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую SEQ ID NO: 37. Настоящие изобретения обеспечивают синергетический эффект, обусловленный сочетанием конкретных веществ в комбинации. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл., 7 пр.
1. Комбинация для предупреждения или лечения метаболического синдрома, включающая
(1) конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и
(2) соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, выбранное из группы, состоящей из ситаглиптина, эмпаглифлозина, лираглутида, семаглутида и дулаглутида,
где указанная комбинация включает конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома в количестве от 0,01 до 99% по массе, и
где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую SEQ ID NO: 37.
2. Комбинация по п. 1, где C-конец пептида амидирован;
где C-конец пептида не модифицирован; или
где пептид представляет собой производное нативного глюкагона, способное активировать рецептор глюкагона.
3. Комбинация по п. 1, где конъюгат находится в форме, где биологически совместимое вещество связано с пептидом с активностью в отношении рецептора глюкагона.
4. Комбинация по п. 1, где пара аминокислот в положениях 16 и 20 образует кольцо.
5. Комбинация по п. 3, где пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона связан с биологически совместимым веществом через линкер.
6. Комбинация по п. 5, где линкер выбран из группы, состоящей из пептида, жирной кислоты, сахарида, полимера, низкомолекулярного соединения, нуклеотида и любой их комбинации; или
где линкер представляет собой полиэтиленгликоль.
7. Комбинация по п. 6, где полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты, олигонуклеотида и любой их комбинации.
8. Комбинация по п. 1, где Fc-область иммуноглобулина агликозилирована;
где Fc-область иммуноглобулина включает Fc-область иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из: (а) домена CH1, домена CH2, домена CH3 и домена CH4; (б) домена CH1 и домена CH2; (в) домена CH1 и домена CH3; (г) домена CH2 и домена CH3; (д) комбинации одного или более чем одного домена, выбранного из домена CH1, домена CH2, домена CH3 и домена CH4, и шарнирной области иммуноглобулина или части шарнирной области иммуноглобулина; и (е) димера каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи;
где полипептид, содержащий Fc-область иммуноглобулина, находится в димерной форме;
где Fc-область иммуноглобулина представляет собой производное нативной Fc, из которой удалена область, способная образовывать дисульфидную связь, из которой удалены некоторые N-концевые аминокислоты, к которой добавлен N-концевой метиониновый остаток, из которой удален сайт связывания комплемента или из которой удалена область антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC);
где Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область, имеющую происхождение от иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM;
где Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4;
где Fc-область иммуноглобулина представляет собой агликозилированную Fc-область, имеющую происхождение от человеческого IgG4.
9. Комбинация по п. 6, где линкер связан с цистеиновым остатком пептида с активностью в отношении рецептора глюкагона; или
где линкер конъюгата связан как с пептидным сайтом, так и с биологически совместимым веществом посредством ковалентных связей, образованных, соответственно, при взаимодействии одного конца линкера с аминной или тиоловой группой биологически совместимого вещества и другого конца линкера с аминной или тиоловой группой пептидного сайта с активностью в отношении рецептора глюкагона.
10. Комбинация по п. 1, где метаболический синдром выбран из группы, состоящей из нарушения толерантности к глюкозе, гиперхолестеринемии, дислипидемии, ожирения, диабета, гипертензии, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), артериосклероза, вызванного дислипидемией, атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца и инсульта.
11. Набор для предупреждения или лечения метаболического синдрома, содержащий:
(1) конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина; и
(2) соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома, выбранное из группы, состоящей из ситаглиптина, эмпаглифлозина, лираглутида, семаглутида и дулаглутида,
где указанная комбинация включает конъюгат, содержащий пептид с активностью в отношении рецептора глюкагона и биосовместимое вещество, представляющее собой Fc-область иммуноглобулина, и соединение или вещество с терапевтической активностью против метаболического синдрома в количестве от 0,01 до 99% по массе, и
где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую SEQ ID NO: 37.
| KR 1020180002544, 08.01.2018 | |||
| ХАРКЕВИЧ Д.А | |||
| Фармакология, Москва, Медицина, 1987, с.50-51 | |||
| ОКОРОЧЕНКОВ С.А | |||
| и др | |||
| Синтез и биологические свойства конъюгатов гемина с незащищенными пептидами // Вестник МИТХТ, 2010, т | |||
| Кипятильник для воды | 1921 |
|
SU5A1 |
| Контрольный стрелочный замок | 1920 |
|
SU71A1 |
| ЯКУБКЕ Х.-Д и др | |||
| Аминокислоты, пептиды, белки, М: Мир, 1985, с.92-94 | |||
| Фармацевтическая технология: Технология | |||
