Способ биологической стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при остаточных полостях после перенесённых нагноительных заболеваний лёгких и плевры Российский патент 2020 года по МПК A61M3/00 A61K35/16 A61P19/00 

Изобретение в области медицины, относящееся к хирургии и травматологии, в частности, к торакальной хирургии.

Изобретение относится к биологическому способу стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при нагноительных заболеваниях легких и плевры путем заполнения остаточной плевральной полости жировой тканью (липофилинг) в сочетании с введением плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP) и трансформацией в соединительную ткань.

При нагноительных заболеваниях легких и плевры с остаточной плевральной полостью (с наличием или отсутствием бронхиального свища) основным методом лечения является оперативный, направленный на декомпрессию плевральной полости, создания условий для адекватного дренажа плевральной полости, санации полости эмпиемы. Первым этапом обычно выполняется дренирование плевральной полости с постановкой дренажа в типичных точках, или по данным полипозиционного рентгенологического исследования. Основными задачами плановой операции у больных с остаточными плевральными полостями являются: прекращение бронхоплеврального сообщения, ликвидация остаточной полости. В связи с этим предложено множество оперативных пособий, включая различные варианты торакопластик, выполнение олеоторакса, экстраплеврального пневмолиза, миобронхопластики с использованием лоскутов широчайшей мышцы спины, или оментобронхопластики, вплоть до плевропульмонэктомии [Слободенюк И.Ф., Полежаев А.А., Нехай К.Х. с соавт. Тактические вопросы лечения эмпиемы плевры, осложненной бронхоплевральными свищами // Тихоокеанский медицинский журнал, 2011. - №1. - С. 41-44].

Имеются сообщения о применении аутологичных жировых стволовых клеток (ASC) путем обкалывания свищевого отверстия во время фибробронхоскопии [ Georgiev-Hristov Т., A new bronchoscopic treatment of tracheomediastinal fistula using autologous adipose-derived stem cells // Thorax. - 2008. - V. 63, N. 4 http://dx.doi.org/10.1136/thx.2007.083857; Petrella F., Spaggiari L., Acocella F. et al. Airway fistula closure after stem-cell infusion // New Engl. J. Med. - 2015. - Vol. 372, №1. - P. 96-97].

Недостатком этих способов лечения пациентов с остаточной плевральной полости является то, что чаще всего необходимо выполнять многоэтапные реконструктивно-восстановительные операции на грудной клетке. Однако при небольших остаточных полостях, расположенных в труднодоступных местах плевральной полости, возрасте пациентов, тяжелом фоновом состоянии пациентов, традиционные оперативные пособия не всегда применимы ввиду соматического состояния больных, обусловленным длительно существующим гнойным процессом в организме.

Кроме этого эффективность процедур инъекции стволовых клеток может быть снижена из-за повреждения клеток, а также при распространении их в нецелевые ткани. Чтобы преодолеть такие проблемы, изучается возможность совместного применения методик по доставке мезенхимальной стромальной клетки (MSC) с использованием инъекционных транспортных средств в качестве систем, дополнительно обеспечивающих благоприятную микросреду клеток. В литературе описаны способы применения для этих целей PRP, гиалуроновой кислоты (НА) и гидрогелей.

В своей работе мы применили методику сочетанного применения аутологичных жировых клеток и аутоплазмы, обогащенной тромбоцитами.

Наиболее близким к заявляемому способу относится патент по совместному применению плазмы, обогащенной тромбоцитами с озонотерапией при лечении длительно незаживающих ран анального канала для ускорения их эпителизации [Патент на изобретение РФ №2578853, дата начала отсчета срока действия патента: 27.03.2016, дата публикации заявки: 13.04.2015. Авторы: Багдасарян Лев Карапетович (RU), Титов Александр Юрьевич (RU), Багдасарян Самвел Львович (RU)]. По заявляемому способу авторы предлагают использовать технологии Plasmolifting, Plasmolifting-Gel и озонотерапии в качестве изолированного воздействия либо в сочетании друг с другом при острых анальных трещинах и длительно незаживающих ран анального канала для ускорения эпителизации последних.

Недостатком данного способа является предложенное авторами введение плазмы, обогащенной тромбоцитами только для поверхностных ран.

Для использования клеток жировой ткани, как источников стволовых клеток нами предлагается способ биологической стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при остаточных плевральных полостях путем заполнения их смесью, состоящей из собственной жировой ткани и плазмы, обогащенной тромбоцитами с целью трансформации ее в соединительную ткань. Способ заключается в приготовлении смеси, состоящей из 10% гомогенизированной взвеси жировой ткани в физиологическом растворе, адаптированной к введению через шприц и аутоплазмы, обогащенной тромбоцитами, при этом взвесь вводят точечно в остаточную плевральную полость, добиваясь тугого ее заполнения. Клетки жировой ткани для приготовления 10% гомогенизированной взвеси в физиологическом растворе представлены аутологичной жировой тканью реципиента, взятой из подкожной жировой клетчатки и/или сальника в асептических условиях операционной или перевязочной. Плазму, обогащенную тромбоцитами получали путем центрифугирования 2,0 мл венозной крови реципиента в пробирке «Plasmolifting™»

Пример.

В качестве примера был выполнен эксперимент на 44 нелинейных половозрелых белых крысах обоего пола массой 180-210 г. Выбор, содержание животных, моделирование патологических процессов и выведение крыс из опыта осуществляли на основе базисных нормативных документов МЗ РФ и рекомендаций ВОЗ [Zutphen L.F., BaumansV., Beynen A.C. Principlesoflaboratoryanimalscience. Amsterdam: Elsevier, 1993. 389 р.].

У всех животных была воспроизведена хроническая эмпиема плевры с формированием остаточной плевральной полости путем троекратного (с интервалом в 7 суток) внутриплеврального введения лабораторным животным (нелинейным крысам) бактериальной взвеси E. coli в физиологическом растворе 10⁹ КОЕ/мл (по стандарту мутности) в дозе 1 мл/кг массы тела для индуцирования гнойного воспаления плевры, с последующим 21-дневным перерывом в манипуляциях с целью отграничения патологического процесса. (Рационализаторское предложение №6 от 22.01.2018 г. «Способ моделирования остаточных плевральных полостей» Калашников А.В., Калашникова С.А., Айдаева С.Ш.).

После воспроизведения эмпиемы плевры животные были разделены на 4 группы: контрольная (n=11) в остаточную полость которым вводили 1,0 мл стерильного физиологического раствора и 3 опытных группы. Животным I опытной группы (n=11) стимуляцию спайкообразования осуществляли с применением методики липофилинга. Для этого в асептических условиях проводили изъятие 50 мг жировой ткани из подкожной жировой клетчатки передней брюшной стенки и гомогенизация в 450 мкл физиологического раствора на гомогенизаторе Minilys (Bertin Tec., USA). Полученную взвесь с помощью шприца вводили в остаточную плевральную полость. Животным II группы (n=11) еженедельно вводили в остаточную плевральную полость аутоплазму, обогащенную тромбоцитами. Животным III опытной группы (n=11) для заполнения полости эмпиемы выполнялось сочетанное введение жировой ткани реципиента и плазмы, обогащенной тромбоцитами.

Выведение животных из эксперимента осуществлялось на 30-ые сутки послеоперационного периода. Забор спаек проводили с максимальным сохранением точек прикрепления, с последующей фиксацией в 10% нейтральном формалине и стандартной гистологической методике, срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Масону.

При исследовании плевральных спаек животных контрольной группы определялась остаточная плевральная полость различного объема, спайки единичные, в 25,6% случаях отмечался гной в остаточной плевральной полости, стенки остаточных полостей характеризовались выраженной воспалительной реакцией, проявляющейся в виде диффузной лейкоцитарной инфильтрации плевры, очаговой деструкцией мезотелия и формированием тканевого детрита с аккумуляцией гноя в остаточной плевральной полости. По периферии очагов деструкции формировалась соединительная ткань, представленная преимущественно коллагеновыми волокнами. Однако сохранялась полость заполненная гноем, что так же свидетельствовало об активности воспалительного процесса.

У животных первой опытной группы гноя и детрита в остаточной плевральной полости не обнаружено, плевральные спайки были зрелыми и характеризовались преобладанием коллагеновых и эластических волокон, умеренной лимфогистиоцитарной инфильтрацией и редуцированным капиллярным руслом. Сформированные спайки локализовались в нижних отделах остаточной плевральной полости, при этом признаки воспаления в зоне спайки отсутствовали, что свидетельствовало о контролируемом адгезиогенезе при точечном введении гомогенезированной жировой ткани в остаточную плевральную полость.

У животных второй опытной группы были обнаружены спаечные сращения, представленные рыхлой волокнистой соединительной тканью с участками лейкоцитарной инфильтрации и умеренным количеством лимфоцитов, макрофагов. Наличие лейкоцитов свидетельствует об активном воспалении в зоне спайки, а, следовательно, о наличии риска развития бесконтрольного тотального спаечного процесса в плевральной полости.

У животных третьей опытной группы плевральные спайки были зрелыми и характеризовались преобладанием коллагеновых и эластических волокон, умеренной лимфогистиоцитарной инфильтрацией и редуцированным капиллярным руслом. У 40% животных остаточная плевральная полость не определялась. При гистологическом исследовании определялись зрелые спайки без признаков воспаления, что свидетельствовало о контролируемом адгезиогенезе при совместном применении методик липофилинга и плазмолифтинга.

Заявляемый способ биологического адгезиогенеза позволяет стимулировать спайкообразование в плевральной полости при остаточных плевральных полостях после перенесенных нагноительных заболеваниях легких и плевры, с формированием плевральных спаек, способствующих скорейшему заращению остаточной плевральной полости.

Совместное применение методик по доставке адипоцитов с использованием плазмолифтинга в качестве транспортных средств дополнительно обеспечивающих благоприятную микросреду клеток, позволяет избежать реакции отторжения введенной взвеси ткани иммунной системой. Использование гомогенизированной взвеси клеток и введение их в остаточную плевральную полость через шприц относится к малоинвазивным методикам, позволяет избежать объемных реконструктивно-пластических операций у данной категории больных.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Осуществляют сочетанное применение 10% аутологичной гомогенизированной взвеси жировой ткани, адаптированной к введению через шприц совместно с добавлением обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP). При этом гомогенизированную взвесь вводят точечно в остаточную плевральную полость интраплеврально с целью стимуляции формирования плевральных спаек, способствующих заполнению остаточной плевральной полости. Способ позволяет избежать объемных реконструктивно-пластических операций у данной категории больных, эффективно стимулировать спайкообразование в плевральной полости при остаточных плевральных полостях после перенесенных нагноительных заболеваний легких и плевры. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

1. Способ стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при остаточных плевральных полостях после воспалительных заболеваний легких и плевры, заключающийся в сочетанном применении 10% аутологичной гомогенизированной взвеси жировой ткани, адаптированной к введению через шприц совместно с добавлением обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP), отличающийся тем, что гомогенизированную взвесь вводят точечно в остаточную плевральную полость интраплеврально с целью стимуляции формирования плевральных спаек, способствующих заполнению остаточной плевральной полости.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что совместно с жировой тканью реципиента, взятой из подкожной жировой клетчатки и/или сальника в асептических условиях, добавлена аутологичная плазма, обогащенная тромбоцитами (PRP).