Композиция для коррекции возрастных изменений кожи и способ ее получения Российский патент 2021 года по МПК A61K8/73 A61K8/96 A61Q19/08 

Область техники.

Изобретение относится к косметологии и предназначено для коррекции возрастных изменений кожи.

Уровень техники.

В последние годы регенеративная медицина стала самостоятельной бурно развивающейся дисциплиной. Разработки ведутся по самым разным направлениям медицины. В косметологии также уделяется внимание препаратам, содержащим эндогенные стволовые клетки и другие компоненты, стимулирующие восстановление и омолаживание тканей.

Так, из уровня техники известна композиция, содержащая обогащенную тромбоцитами плазму и гиалуроновую кислоту, и предназначенная для стимуляции заживления ран и использования в косметических целях путем смешивания с кремом и нанесения на кожу (патент RU 2667964, 11.03.2011).

Известно применение биополимера, который может быть инъецирован подкожным или внутрикожным путем в форме монофазного гидрогеля, содержащего гель, полученный из сшитой гиалуроновой кислоты и одной из ее физиологически приемлемых солей. Биополимер используется для заполнения морщин и стимуляции эпидермальных клеток и/или поддержания механических свойств плотности и эластичности кожи. (патент RU 2448740, 06.12.2007).

Известно использование обогащенной тромбоцитами плазмы для приготовления препарата для внутридермального введения для стимуляции репаративных и трофических процессов в коже (патент RU 2470677, 19.10.2011).

Также известен способ получения композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ASC), первичной культуры (Р0), выращенные ex-vivo, смешанные с отобранной жировой тканью. для применения в качестве агента для обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга молочной железы или филинга стволовыми клетками молочной железы, косметический способ обогащенного стволовыми клетками липофилинга лица или филинга стволовыми клетками лица и косметический способ введения агента в кожу. Изобретение обеспечивает коррекцию объемных дефектов (патент 2660561, 26.06.2014)

Недостатком известных препаратов, предназначенных для стимуляции восстановительных процессов в тканях, является то, что они являются одно- или двухкомпонентными композициями, обладающими ограниченным набором стимулирующих факторов.

Задачей настоящего изобретения является разработка композиции, предназначенной для коррекции возрастных изменений кожи, содержащий более широкий спектр стимулирующих регенерацию компонентов, разработка способа ее получения и применения.

Для решения этой задачи мы предлагаем композицию для коррекции возрастных изменений кожи, включающую стромально-васкулярную фракцию(SVF) 5-20% по объему, тромбоцитарную аутологичную плазму(PRP) 5-75% по объему, 0,1-3% водный раствор гиалуроновой кислоты 20-75% по объему.

Также мы предлагаем способ получения заявляемой композиции для коррекции возрастных изменений кожи, заключающийся в том, что предварительно из жировой ткани пациента выделяют стромально-васкулярную фракцию(SVF), из крови пациента получают тромбоцитарную аутологичную плазму(PRP), затем в стерильный одноразовый шприц №1 с резьбовой насадкой для иглы помещают SVF, в стерильный шприц №2 с резьбовой насадкой для иглы вносят PRP; шприц №3 с резьбовой насадкой для иглы наполняют 0,1-3% водным раствором гиалуроновой кислоты, к четырехконцевому коннектору с резьбовым способом соединения со шприцами, через насадки, последовательно подсоединяют шприц №1; шприц №2; шприц №3; и пустой шприц №4, содержимое шприцов №1 и №3 перемещают в шприц №4, затем производят попеременное перемещение жидкостей из шприца №2 в шприц №4 в обе стороны, после чего конечный продукт выдерживают в шприце №4.

Также мы предлагаем способ коррекции возрастных изменений кожи с помощью предлагаемой композиции, включающий проведение инъекций композиции подкожно, папульно или болюсно, процедуры проводятся однократно с интервалом 3-9 месяцев.

Техническим результатом заявленного изобретения является получение композиции, обладающей высоким потенциалом стимуляции регенерации соединительной и хрящевой ткани и имеющей возможность использования при широком круге лечебных и косметологических процедур.

Такой эффект достигается за счет использования в составе композиции стромально-васкулярной фракции (SVF), тромбоцитарной аутологичной плазмы (PRP), раствора гиалуроновой кислоты.

SVF - это клеточный комплекс, включающий в себя мезенхимальные стволовые клетки (МСК), эндотелиальные и гладкомышечные клетки кровеносных сосудов и их предшественники, перициты, фибробласты. Основным компонентом SVF являются МСК, способные к самообновлению и мультипотентной дифференцировке. Механизм действия SVF основан на разнородной клеточной популяции, приводящей к стимуляции дифференцировки клеток, ангиогенезу, иммуномодулирующему, антиапоптотическому эффектам и соответственно восстановлению поврежденных клеток и тканей. Регенеративное действие SVF, реализуемое мультипотентными стволовыми и прогениторными клетками, в целом сходными с МСК костного мозга по морфологии и иммунофенотипу связано с их способностью мигрировать в зоны повреждения. Паракринный механизм действия МСК является основным.

PRP содержит мощные факторы, способствующие регенерации: PDGF (platelet-derived growth factor) - инициирует процесс регенерации включая заживление костей и сосудов, активирует макрофаги; VEGF(vascular endothelial growth factor), обладает заметными ангиогенными, митогенными и улучающими проницаемость кровеносных сосудов свойствами. Известно, что TGF(transforming growth factor beta) способствует клеточному митозу и дифференциации для сращивания тканей и костей, воздействует на мезенхимные стволовые клетки, остеобластные клетки-предшественники и фибробласты, а также ингибирует образование остеокластов. Известно, что EGF(epidermal growth factor) индуцирует эпителиальное развитие и способствует ангиогенезу.

Гели на основе гиалуроновой кислоты (ГК) для инъекций широко используются в косметических целях, для наполнения или замены биологических тканей, а также для регидратации кожи методом мезотерапии. Импланты на основе гиалуроновой кислоты применяются для протезирования синовиальной жидкости в суставах. Гиалуроновая кислота является биодеградируемым биополимером, мономеры гиалуроновой кислоты имеют активные полярные окончания, что позволяет им посредством химических связей удерживать молекулы биологически активных веществ, с которыми они взаимодействуют.Биодеградация крупномеров гиалуроновой кислоты происходит под действием фермента человеческого организма гиалуронидазы, которая производит отделение мономеров с концов полимерных цепей, чем больше масса крупномера, тем длиннее цепь и тем дольше происходит биодеградация и распад полимера. При ферментативном распаде полимеров происходит высвобождение биологически активных веществ в том числе сигнальных молекул, которые удерживались за счет химического взаимодействия после смешивания с активными факторами из тромбоцитарной аутологичной плазмы и стромально-васкулярной фракции. Удержание и пролонгированное поступление в ткань биологически активных факторов и сигнальных молекул позволяет значительно продлевать действие препарата, минимум на срок резорбции гиалуроновой кислоты. Для дополнительной пролонгации лечебного эффекта используют сшитую гиалуроновую кислоту, за счет сшивания крупномеров в трехмерные формы гиалуронидаза медленнее отщепляет мономеры при этом срок биодеградации увеличивается, а терапевтический эффект продлевается.

Опытным путем авторов были подобраны такие соотношения указанных компонентов, при которых обеспечивается максимально выраженный эффект.

Кроме высокой эффективности предлагаемой методики, следует отметить простоту и безопасность способа создания биопрепарата в присутствии пациента, поскольку все активные компоненты, предназначенные для использования в композиции аутологичного импланта получают от самого пациента, смешивание составных частей конечного продукта происходит в асептических условиях благодаря технологии смешивания при помощи крестообразного коннектора с резьбовыми адаптерами для шприцов, имеющий выходную канюлю типа luer-lock, исключающими неконтролируемое разъединение и порчу компонентов.

Сущность изобретения.

Приготовление заявляемой композиции включает следующие этапы:

1 этап: получение SVF. У пациента под местной анестезией осуществляют забор жировой ткани в нижней трети брюшной стенки методом липосакции. Полученный липоаспират обрабатывают коллагеназой в течение 15 минут.Затем полученную суспензию центрифугируют при 600g в течение 5 мин, жировое кольцо и супернатант удаляют, а осадок стромальных клеток ресуспендируют в физиологическом растворе так, чтобы концентрация МСК составляла около 5-7 млн клеток/мл. Указанной взвесью заполняют шприц №1 - шприц, имеющий выходную канюлю типа luer-lock.

2 этап: получение аутологичной тромбоцитарной плазмы крови включает забор венозной крови в шприц с предварительно набранным антикоагулянтом. Шприц закрывают, содержимое перемешивают и вводят в пробирку. Проводят центрифугирование при комнатной температуре со скоростью вращения 1800 об/мин в течение 10 мин. Проводят сбор надосадочного слоя плазмы, богатой тромбоцитами, в шприц №2- шприц, имеющий выходную канюлю типа luer-lock.

3 этап.Подготовка и подогрев в термостате до 37°С шприца, предварительно наполненного 0,1-3% водным раствором гиалуроновой кислоты поперечно сшитой (например, торговой марки REVI, производитель CLC International г.Тюмень) - шприца №3 - шприца, имеющего выходную канюлю типа luer-lock.

4 этап - подсоединение шприцев 1-3 и пустого шприца №4 - шприца, имеющего выходную канюлю типа luer-lock, через крестообразный коннектор. Для смешивания используется четырехконцевой коннектор с резьбовым способом соединения, к коннектору последовательно подсоединяются: шприц №1 с SVF; шприц №2 с PRP; шприц №3 с ГК; шприц №4 стерильные с резьбовой насадкой для иглы типа luer-lock в качестве накопителя конечного продукта (КП). Коннектор выполнен из материала, допускающего транспортировку инфузионных растворов и продуктов, полученных из плазмы крови.

5 этап - перемещение содержимого шприцев №1-3 в шприц №4 для получения конечного продукта. Перемещение производится в следующей последовательности: шприц №4 переводится в положение набор при этом внутри шприца создается разрежение воздуха шприцы №1 и №3 переводятся в положение нагнетающее давление при этом происходит процесс перетекания жидкостей из области повышенного давления шприцев №1 и №3 в область пониженного давления шприца №4. После полного опорожнения шприцев №1 и №3 жидкость из них оказывается в шприце №4. Затем производится попеременное 10-кратное перемещение жидкостей из шприца №2 в шприц №4 в обе стороны. Конечный продукт остается в полном составе и в достаточной степени смешения на 5 минут в шприце №4 в термостате при температуре близкой к нормальной температуре тела величиной 37°С.

Способ применения дает возможность использовать различные техники инъекций. Инъекции можно производить папульным и/или болюсным способом. При папульном способе введения игла шприца вводится в кожу под углом 30-40(на глубину примерно 1-2 мм, образуется микропапула (ее диаметр примерно 1 мм), затем таким же образом производят следующий укол на расстоянии 5-7 мм от предыдущего. За один прокол вводится 0,01-0,02 мл препарата. Инъекции проводятся по ходу морщин либо по линиям натяжения кожи. При болюсном способе введения игла погружается в кожу до уровня надкостницы, вводится препарат в объеме 0,05-0,1 мл. Инъекции проводятся по линиям натяжения кожи.

Процедуры проводятся однократно с интервалом 3-9 месяцев.

Изобретение применяют в косметологии для лечения возрастных изменений кожи лица, декольте и кистей рук.

Осуществление изобретения.

Пример 1: Пациентка К. Н. женщина 57 лет, худощавого телосложения выраженные мимические морщины на лбу, заметные мимические морщины в латеральном углу глаз по типу гусиных лапок. Кожа сухая истонченная нормальной пигментации. На передней поверхности шеи две поперечные морщины по всей поверхности шириной 6 мм глубиной около 1 мм. В зоне декольте кожа ровная, нормально пигментирована сухая, истонченная. Кожа кистей рук истончена, пациентка жалуется на постоянную сухость кожи рук. У женщины менопауза около 7 лет, хронических заболеваний нет, гормональный профиль соответствует возрасту, образ жизни подвижный, занимается фитнесом. От применения препаратов, содержащих ботулотоксин категорически отказывается.

Перед процедурой пациентке проводили фотографирование цифровой видеокамерой, замеряли уровень гидратации на различных участках кожи лица и рук методом корнеометрии, проводили У3-сканирование кожи.

Назначены инъекции композиции согласно заявленному изобретению для коррекции мимических морщин лица и шеи, содержащей 0,5 мл фракции SVF; 1 мл PRP и 1 мл 0,1% водного раствора гиалуроновой кислоты поперечно сшитой торговой марки REVI производитель CLC International г.Тюмень. Проведены инъекции препарата в морщины на лбу возвратно- поступательно, как бы поднимая препаратом дно морщин наружу, в область вокруг глаз и висков по линиям натяжения кожи мелкопапульно с расстоянием между папулами 5-7 мм. За один прокол вводится 0,01-0,02 мл препарата. Для коррекции возрастных изменений кожи кистей рук и зоны декольте назначены инъекции композиции согласно указанному изобретению в виде композиции, содержащей 1 мл SVF; 2 мл PRP и 1 мл гиалуроновой кислоты торговой марки REVI, инъекции по 0,07 мл произведены болюсно с интервалом 2 см между вколами по линиям натяжения кожи.

Через 3 недели после процедуры проведен осмотр. Результат пациенткой оценен как «потрясающий», лобные и мимические морщины визуально уменьшились. Объективно: глубина морщин на шее уменьшилась, количество морщин вокруг глаз сократилось по результатам фотографирования, уровень гидратации на различных участках кожи лица повысился на 10-20%, на коже рук повышение уровня гидратации составило 30%. У3-сканирование кожи показало повышение эхогенности дермального слоя, равномерность распределения сигнала, что свидетельствует о восстановлении структуры коллагеновых и эластиновых волокон.

Пример 2. пациентка М., 43 г.Жалобы на выраженные горизонтальные морщины на лбу.

Назначены инъекции композиции согласно заявленному изобретению, содержащей 5% по объему фракции SVF; 75% по объему PRP и 20% по объему 1% водного раствора гиалуроновой кислоты поперечно сшитой торговой марки REVI производитель CLC International г.Тюмень. Проведены инъекции препарата в морщины на лбу возвратно- поступательно, как бы поднимая препаратом дно морщин наружу, с расстоянием между вколами 5-7 мм. За один прокол вводится 0,01-0,02 мл препарата.

Через 3 недели после проведения процедуры осуществлен осмотр.

Для объективизации результатов воздействия было проведено ультразвуковое исследование. На сравнительных снимках, проведенных на ультразвуковом аппарате DUB SkinSkanner до и после процедуры отчетливо отмечались выравнивание (сглаживание) поверхности кожи и повышение эхо-плотности дермального слоя кожи непосредственно под морщинами.

Пример 3. Пациентка А. женщина 48 лет. Предъявляла жалобы на наличие распространенных возникновение морщин на лице, снижение эластичности кожи, ее сухость. На передней поверхности шеи две поперечные морщины по всей ширине глубиной около 1 мм.

Назначены инъекции композиции согласно заявленному изобретению для коррекции мимических морщин лица и шеи, содержащей 20% по объему фракции SVF; 5% по объему PRP и 75% по объему 3% водного раствора гиалуроновой кислоты поперечно сшитой торговой марки REVI производитель CLC International г.Тюмень. Проведены инъекции препарата в кожу лба, в область вокруг глаз и висков по линиям натяжения кожи мелкопапульно с расстоянием между папулами 5-7 мм. За один прокол вводилось 0,01-0,02 мл препарата.

Через 3 недели после процедуры проведен осмотр. Глубина морщин на шее уменьшилась, количество морщин вокруг глаз сократилось по результатам фотографирования, уровень гидратации на различных участках кожи лица повысился на 10-15%. У3-сканирование кожи показало повышение эхогенности дермального слоя, равномерность распределения сигнала, что свидетельствует о восстановлении структуры коллагеновых и эластиновых волокон.

Заявляемую композицию использовали при коррекции морщин у 15 пациентов. После проведенного курса инъекций наблюдалось повышение увлажненности и эластичности кожи, выравнивание ее рельефа, что подтверждалось как визуально, так и инструментальными методами исследования кожи.

Группа изобретений относится к косметологии. Композиция для коррекции возрастных изменений кожи включает стромально-васкулярную фракцию (SVF) 5–20% по объему, тромбоцитарную аутологичную плазму (PRP) 5-75 % по объему, 0,1–3% водный раствор гиалуроновой кислоты 20-75% по объему. Также раскрыты способ получения композиции для коррекции возрастных изменений кожи и способ коррекции возрастных изменений кожи. Группа изобретений обеспечивает высокий потенциал стимуляции регенерации соединительной и хрящевой тканей. 3 н.п. ф-лы, 1 пр.

1. Композиция для коррекции возрастных изменений кожи, включающая стромально-васкулярную фракцию (SVF) 5–20% по объему, тромбоцитарную аутологичную плазму (PRP) 5-75 % по объему, 0,1–3% водный раствор гиалуроновой кислоты 20-75% по объему.

2. Способ получения композиции для коррекции возрастных изменений кожи по п.1, заключающийся в том, что предварительно из жировой ткани пациента выделяют стромально-васкулярную фракцию (SVF), из крови пациента получают тромбоцитарную аутологичную плазму (PRP), затем в стерильный одноразовый шприц № 1 с резьбовой насадкой для иглы помещают SVF, в стерильный шприц № 2 с резьбовой насадкой для иглы вносят PRP; шприц № 3 с резьбовой насадкой для иглы наполняют 0,1–3% водным раствором гиалуроновой кислоты, к четырехконцевому коннектору с резьбовым способом соединения со шприцами, через насадки, последовательно подсоединяют шприц № 1; шприц № 2; шприц № 3; и пустой шприц № 4, содержимое шприцов № 1 и № 3 перемещают в шприц № 4, затем производят попеременное перемещение жидкостей из шприца № 2 в шприц № 4 в обе стороны, после чего конечный продукт выдерживают в шприце № 4.

3. Способ коррекции возрастных изменений кожи с помощью композиции по п.1, отличающийся тем, что проводят инъекции композиции подкожно, папульно или болюсно, при этом проводят по одной процедуре с интервалом 3–9 месяцев.