ПРИМЕНЕНИЕ ПЛИНАБУЛИНА В КОМБИНАЦИИ С ИНГИБИТОРАМИ КОНТРОЛЬНОЙ ТОЧКИ ИММУННОГО ОТВЕТА Российский патент 2020 года по МПК A61K31/496 A61K39/395 A61K45/06 A61P35/00 

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ НА ЛЮБЫЕ ПРИОРИТЕТНЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №62/115,468, поданной 12 февраля 2015 г., и предварительной заявки на патент США №62/255,259, поданной 13 ноября 2015 г., содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Область техники

[0002] Настоящее изобретение относится к области химии и медицины. Более конкретно, настоящее изобретение относится к Плинабулину, композициям, содержащим Плинабулин, и его применению при лечении.

Описание предшествующего уровня техники

[0003] Раковые заболевания человека включают многочисленные генетические и эпигенетические изменения, в результате которых образуются неоантигены, которые иммунная система потенциально может распознать (Sjoblom и др., 2006). Приобретенная иммунная система, состоящая из Т- и В-лимфоцитов, обладает мощным противораковым потенциалом с широким спектром активности и превосходной специфичностью в отношении ответа на различные опухолевые антигены.

[0004] В недавних исследованиях в области иммунотерапии рака значительные усилия были сфокусированы на подходах, улучшающих противоопухолевый иммунитет путем адоптивного переноса активированных эффекторных клеток, иммунизации против соответствующих антигенов, обеспечения неспецифических иммуностимулирующих агентов, таких как цитокины, или удаления ингибиторов противораковых эффекторных клеток. Работы в области разработки специфичных ингибиторов контрольных точек иммунного ответа начали обеспечивать новые иммунотерапевтические подходы к лечению рака, включая разработку антитела, ипилимумаба, которое связывает и ингибирует антиген-4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA-4) для лечения пациентов с меланомой поздней стадии (Hodi и др., 2010). Хотя рак остается неизлечимым заболеванием у подавляющего большинства пациентов, существует особая потребность в разработке эффективных терапевтических агентов, которые можно применять при иммунотерапии рака.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к фармацевтической композиции, содержащей Плинабулин и один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа.

[0006] Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к способу лечения рака, причем указанный способ включает совместное введение Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа субъекту, нуждающемуся в этом.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0007] На ФИГ. 1А показана экспрессия маркеров созревания ДК CD40, CD80, CD86 и MHCII в дендритных клетках, обработанных Плинабулином в различных концентрациях и представляющим собой контроль липополисахаридом (ЛПС); на ФИГ. 1В представлена жизнеспособность дендритных клеток, обработанных Плинабулином и ЛПС.

[0008] На ФИГ. 2А представлена экспрессия маркера CD40 в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках; на ФИГ. 2В представлена экспрессия маркера CD80 в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках; на ФИГ. 2С представлена экспрессия маркера CD86 в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках; на ФИГ. 2D представлена экспрессия маркера MHCII в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках.

[0009] На ФИГ. 3А представлено образование ИЛ-1β в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках; на ФИГ. 3В представлено образование маркера ИЛ-6 в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках; на ФИГ. 3С представлено образование ИЛ-12р40 в дендритных клетках, обработанных Плинабулином, Паклитакселом, Этопозидом или в контрольных клетках.

[0010] На ФИГ. 4А-4С представлено индуцируемое Плинабулином усиление противоопухолевого эффекта антитела против PD-1 и антитела против CTLA-4 в модели опухоли МС-38 у иммунокомпетентных мышей. На ФИГ. 4А представлено влияние на рост опухоли; на ФИГ. 4В представлено влияние на среднюю массу опухоли при вскрытии; на ФИГ. 4С представлено время, когда опухоли достигают 10-кратного увеличения от их исходного объема.

[0011] На ФИГ. 5А-5С представлены результаты анализа сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS) опухолей при вскрытии, полученных в исследовании, описанном в Примере 6. На ФИГ. 5А представлено влияние на содержание Treg-клеток; на ФИГ. 5В представлено соотношение CD8+ клеток и Treg-клеток; на ФИГ. 5С представлено влияние на макрофаги.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВАРИАНТА РЕАЛИЗАЦИИ

[0012] Плинабулин, (3Z,6Z)-3-бензилиден-6-{[5-(2-метил-2-пропанил)-1H-имидазол-4-ил]метилен}-2,5-пиперазиндион, представляет собой синтетический аналог природного соединения фенилагистина. Плинабулин можно легко получить посредством способов и процедур, подробно описанных в патентах США №№7,064,201 и 7,919,497, которые полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации Плинабулин может эффективно способствовать поглощению антигена и миграции дендритных клеток в лимфатические узлы, где дендритные клетки презентируют опухолеспецифические антигены для праймирования иммунных эффекторных клеток. Воздействие Плинабулина на дендритные клетки может индуцировать созревание дендритных клеток и значимым образом увеличить их способность к премированию Т-клеток. В некоторых вариантах реализации Плинабулин может опосредовать уменьшение размера опухоли посредством иммунной модуляции микроокружения опухоли для усиления противоопухолевых иммуномодулирующих эффектов. В некоторых вариантах реализации можно достигнуть существенного терапевтического синергизма при комбинировании Плинабулина с ингибиторами контрольной точки иммунного ответа.

[0013] Некоторые варианты реализации относятся к применению Плинабулина в комбинации с одним или более ингибиторами контрольной точки иммунного ответа, такими как ингибиторы CTLA4 (антиген-4 цитотоксических Т-лимфоцитов), PD-1 (белок 1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд 1 запрограммированной гибели клеток), PD-L2 (лиганд 2 запрограммированной гибели клеток), PD-L3 (лиганд 3 запрограммированной гибели клеток), PD-L4 (лиганд 4 запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов) и TIM-3 (иммуноглобулин Т-клеток и белок 3 муцина). В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой лиганд, связывающийся с PD-1. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой лиганд, связывающийся с CTLA-4.

[0014] PD-1 представляет собой ключевой рецептор контрольной точки иммунного ответа, экспрессия которого осуществляется активированными Т- и В-клетками, и который опосредует иммуносупрессию. PD-1 является членом семейства рецепторов CD28, которое включает CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 и BTLA. В контексте настоящего описания термин «PD-1» включает PD-1 человека (hPD-1), его варианты, изоформы и гомологи hPD-1 иных видов и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с hPD-1.

[0015] Были идентифицированы различные гликопротеиновые лиганды клеточной поверхности для PD-1, включая PD-L1, PD-L2, PD-L3 и PD-L4, которые экспрессируются на антигенпрезентирующих клетках, а также во многих типах рака человека, и, как было показано, они понижающе регулируют активацию Т-клеток и секрецию цитокинов при связывании с PD-1. В контексте настоящего описания термин «PD-L1» включает PD-L1 человека (hPD-L1), его варианты, изоформы и гомологи hPD-L1 иных видов и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с hPD-L1. В контексте настоящего описания термин «PD-L2» включает PD-L2 человека (hPD-L2), его варианты, изоформы и гомологи hPD-L2 иных видов и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с hPD-L2. В контексте настоящего описания термин «PD-L3» включает PD-L3 человека (hPD-L3), его варианты, изоформы и гомологи hPD-L3 иных видов и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с hPD-L3. В контексте настоящего описания термин «PD-L4» включает PD-L4 человека (hPD-L4), его варианты, изоформы и гомологи hPD-L4 иных видов и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с hPD-L4.

[0016] CTLA-4 (антиген-4, ассоциировании с цитотоксическими Т-лимфоцитами) представляет собой белковый рецептор, который, функционируя как контрольная точка иммунного ответа, понижающе регулирирует иммунную систему. CTLA4 обнаруживают на поверхности Т-клеток, он также является членом суперсемейства иммуноглобулинов (Ig); CTLA-4 содежит один внеклеточный домен Ig. Транскрипты CTLA-4 были обнаружены в популяциях Т-клеток, обладающих цитотоксической активностью, что свидетельствует о том, что CTLA-4 может функционировать при цитолитическом ответе.

Определения

[0017] Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации полностью включены посредством ссылки. В случае, когда существует множество определений для термина в настоящем документе, обладают приоритетом те, которые представлены в данном разделе до тех пор, пока не указано иное.

[0018] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие абсорбцию агенты и им подобные. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев, когда любая обычная среда или агент несовместим с активным ингредиентом, их применение предполагается в указанных терапевтических композициях. Кроме того, могут быть включены различные адьюванты, как, например, обычно применяемые в данной области техники. Предположения по включению различных компонентов в фармацевтические композиции описаны, например, в публикации Gilman et al. (Eds.) (1990); Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может представлять собой моносахарид или производное моносахарида.

[0019] В контексте настоящего описания термин «субъект» означает человека или млекопитающего, не являющегося человеком, например, собаку, кошку, мышь, крысу, корову, овцу, свинью, козу, не являющегося человеком примата или птицу, например, курицу, а также любого другого позвоночного или беспозвоночного.

[0020] Термин «млекопитающее» используют в его обычном биологическом смысле. Таким образом, он специфически включает, но не ограничивается ими, приматов, включая обезьян (шимпанзе, человекообразных обезьян, макак) и людей, крупный рогатый скот, лошадей, овец, коз, свиней, кроликов, собак, кошек, грызунов, крыс, мышей, морских свинок или им подобных.

[0021] В контексте настоящего описания «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» относится к количеству терапевтического агента, которое эффективно для облегчения, в некоторой степени, или для снижения вероятности возникновения одного или более симптомов заболевания или состояния, и может включать лечение болезни или состояния.

[0022] В контексте настоящего описания «лечить», «лечение» или «лечение» относится к введению соединения или фармацевтической композиции субъекту для профилактических и/или терапевтических целей. Термин «профилактическое лечение» относится к лечению субъекта, который еще не проявляет симптомы заболевания или состояния, но который подвержен или иным образом подвержен риску конкретного заболевания или состояния, при котором лечение снижает вероятность того, что у указанного пациента будет развиваться указанная болезнь или состояние. Термин «терапевтическое лечение» относится к осуществлению лечения субъекта, уже страдающему от заболевания или состояния.

[0023] В контексте настоящего описания термин «химиотерапевтический агент» относится к агенту, который уменьшает, предотвращает, смягчает, ограничивает и/или замедляет рост метастазов или новообразований, или вызывает гибель неопластических клеток непосредственно путем некроза или апоптоза новообразований или любого другого механизма, или который можно иным образом применять в фармацевтически эффективном количестве для уменьшения, предотвращения, смягчения, ограничения и/или замедления роста метастазов или новообразований у субъекта с неопластическим заболеванием. Химиотерапевтические агенты включают, но не ограничиваются ими, например, фторпиримидины; пиримидиновые нуклеозиды; пуриновые нуклеозиды; антифолаты, агенты на основе платины; антрациклины/антрацендионы; эпиподофиллотоксины; камптотецины; гормоны; гормональные комплексы; противогормональные; ферменты, белки, пептиды и поликлональные и/или моноклональные антитела; алкалоиды винка; таксаны; эпотилоны; антимикротрубочковые агенты; алкилирующие агенты; антиметаболиты; ингибиторы топоизомеразы; противовирусные и различные другие цитотоксические и цитостатические агенты.

Введение и фармацевтические композиции

[0024] Некоторые варианты реализации относятся к фармацевтической композиции, содержащей Плинабулин и один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа.

[0025] В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1, PD-L1, PD-L2, PD-L3, PD-L4, CTLA-4, LAG3, В7-Н3, В7-Н4, KIR или TIM3. В некоторых вариантах реализации указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1. В некоторых вариантах реализации указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой лиганд, связывающийся с PD-L1. В некоторых вариантах реализации указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-L1. В некоторых вариантах реализации указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-L2 или комбинированный ингибитор PD-L1/PD-L2. В некоторых вариантах реализации указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор CTLA-4.

[0026] В некоторых вариантах реализации описанная в настоящем документе композиция содержит первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа и второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа, при этом указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа отличается от указанного второго ингибитора контрольной точки иммунного ответа. В некоторых вариантах реализации указанные первый и второй ингибиторы контрольной точки иммунного ответа независимо представляют собой ингибитор PD-1, PD-L1, PD-L2, PD-L3, PD-L4, CTLA-4, LAG3, В7-Н3, В7-Н4, KIR или TIM3. В некоторых вариантах реализации указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор CTLA-4. В некоторых вариантах реализации указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-L1, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор CTLA-4. В некоторых вариантах реализации указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-L2, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибитор CTLA-4.

[0027] В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа может представлять собой небольшой пептидный агент, который может ингибировать функцию регуляции Т-клеток. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа может представлять собой малую молекулу (например, менее, чем 500 дальтон), которая может ингибировать функцию регуляции Т-клеток. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа может представлять собой молекулу, обеспечивающую костимуляцию активации Т-клеток. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа может представлять собой молекулу, обеспечивающую костимуляцию активации природных клеток-киллеров. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа может представлять собой антитело. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L1. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L2. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L3. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L4. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4. В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4, LAG3, В7-Н3, В7-Н4, KIR или TIM3.

[0028] Указанное антитело можно выбрать из α-CD3-APC, α-CD3-APC-H7, α-CD4-ECD, α-CD4-PB, α-CD8-PE-Cy7, α-CD-8-PerCP-Cy5.5, α-CD11c-APC, α-CD11b-PE-Cy7, α-CD11b-AF700, α-CD14-FITC, α-CD16-PB, α-CD19-AF780, α-CD19-AF700, α-CD20-PO, α-CD25-PE-Cy7, α-CD40-APC, α-CD45-Биотина, Стрептавидин-ВУ605, α-CD62L-ECD, α-CD69-APC-Cy7, α-CD80-FITC, α-CD83-Биотина, Стрептавидин-РЕ-Су7, α-CD86-PE-Cy7, α-CD86-PE, α-CD123-PE, α-CD154-PE, α-CD161-PE, α-CTLA4-PE-Cy7, α-FoxP3-AF488 (клон 259D), IgG1-изотип-AF488, α-ICOS (CD278)-PE, α-HLA-A2-PE, α-HLA-DR-PB, α-HLA-DR-PerCPCy5.5, α-PD1-APC, VISTA, костимулирующей молекулы OX40 и CD137.

[0029] В описанной в настоящем документе композиции можно применять различные антитела (Abs), включая антитела, обладающие высоким сродством к связыванию с PD-1 PD-L1, PD-L2, PD-L3 или PD-L4. mAb человека (HuMAbs), которые специфическим образом связываются с PD-1 (например, связываются с PD-1 человека и могут вступать в перекрестную реакцию с PD-1, полученным от других видов, таких как яванский макак) с высоким сродством, раскрыты в патенте США №8008449, который полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки. HuMAbs, которые специфическим образом связываются с PD-L1 с высоким сродством, раскрыты в патенте США №7943743, который полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки. Другие mAb против PD-1 описаны, например, в патентах США №№6808710, 7488802 и 8168757 и в публикации РСТ № WO 2012/145493, все из которых полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки. mAb против PD-L1 описаны, например, в патентах США №№7635757 и 8217149, публикации США №2009/0317368 и публикациях РСТ № WO 2011/066389 и WO 2012/14549, все из которых полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки.

[0030] В некоторых вариантах реализации HuMAbs против PD-1 можно выбрать из 17D8, 2D3, 4Н1, 5С4 (также упоминаемый в настоящем документе как ниволумаб), 4А1 1, 7D3 и 5F4, все из которых описаны в патенте США №8008449. В некоторых вариантах реализации HuMAbs против PD-1 можно выбрать из 3G10, 12А4 (также упоминаемый в настоящем документе как BMS-936559), 10А5, 5F8, 10Н10, 1В12, 7Н1, 1 1Е6, 12В7 и 13G4, все из которых описаны в патенте США №7943743.

[0031] В некоторых вариантах реализации указанная композиция может дополнительно содержать один или более фармацевтически приемлемых разбавителей. В некоторых вариантах реализации указанный фармацевтически приемлемый разбавитель может включать Коллифор (Kolliphor) HS15® (полиоксил(15)-гидроксистеарат). В некоторых вариантах реализации указанный фармацевтически приемлемый разбавитель может включать пропиленгликоль. В некоторых вариантах реализации указанные фармацевтически приемлемые разбавители могут включать коллифор и пропиленгликоль. В некоторых вариантах реализации указанные фармацевтически приемлемые разбавители могут включать коллифор и пропиленгликоль, при этом содержание коллифора составляет приблизительно 40% по массе, а содержание пропиленгликоля составляет приблизительно 60% по массе в расчете на общую массу разбавителей. В некоторых вариантах реализации указанная композиция может дополнительно содержать один или более других фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

[0032] Для получения описанных в настоящем документе фармацевтических композиций можно применять стандартные методы для фармацевтических составов, таких как те, которые описаны в Remington's Science and Practice of Pharmacy, 21th Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005), полностью включенном в настоящую заявку посредством ссылки. Соответственно, некоторые варианты реализации включают фармацевтические композиции, содержащие: (а) безопасное и терапевтически эффективное количество Плинабулина или его фармацевтически приемлемых солей; (b) ингибитор контрольной точки иммунного ответа и (с) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество или их комбинацию.

[0033] Другие варианты реализации включают совместное введение Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа в отдельных композициях. Таким образом, некоторые варианты реализации включают первую фармацевтическую композицию, содержащую: (а) безопасное и терапевтически эффективное количество Плинабулина или его фармацевтически приемлемых солей и (b) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество или их комбинацию; и вторую фармацевтическую композицию, содержащую: (а) один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа и (b) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество или их комбинацию.

[0034] Введение описанных в настоящем документе фармацевтических композиций может осуществляться при помощи любого из принятых способов введения для агентов, которые применяют аналогичным образом, включая, но не ограничиваясь ими, перорально, сублингвально, буккально, подкожно, внутривенно, интраназально, местно, трансдермально, внутрикожно, внутрибрюшинно, внутримышечно, интрапульмонариально, вагинально, ректально или внутриглазно. Пероральные и парентеральные способы введения являются обычными при лечении показаний, которые являются предметом предпочтительных вариантов реализации.

[0035] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие абсорбцию агенты и им подобные. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением того, что любая обычная среда или агент несовместим с активным ингредиентом, их применение предполагается в терапевтических композициях. Кроме того, могут быть включены различные адъюванты, как, например, обычно применяемые в данной области техники. Критерии по включению различных компонентов в фармацевтические композиции описаны, например, в публикациях Gilman et al. (Eds.) (1990); Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

[0036] Некоторыми примерами веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей или их компонентов, являются сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и метилцеллюлоза; порошкообразный трагакант; солод; желатин; тальк; твердые смазывающие вещества, такие как стеариновая кислота и стеарат магния; сульфат кальция; растительные масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и масло теобромы; полиолы, такие как пропиленгликоль, глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; альгиновая кислота; эмульгаторы, такие как TWEENS; смачивающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия; красители; ароматизаторы; таблетирующие агенты, стабилизаторы; антиоксиданты; консерванты; вода, не содержащая пирогены; изотонический физиологический раствор и фосфатные буферные растворы.

[0037] Описанные в настоящем документе композиции предпочтительно получают в единичной лекарственной форме. В контексте настоящего описания термин «единичная лекарственная форма» представляет собой композицию, содержащую количество соединения или композиции, которое является подходящим для введения животному, предпочтительно млекопитающему-субъекту, в однократной дозировке согласно надлежащей медицинской практике. Однако получение лекарственной формы с однократной дозировкой или единичной лекарственной формы не означает, что лекарственную форму вводят один раз в день или один раз на курс терапии. Предполагается, что такие лекарственные формы вводят один, два, три или более раз в день, и их можно вводить в виде инфузии в течение периода времени (например, от приблизительно 30 минут до приблизительно 2-6 часов) или вводить в виде непрерывной инфузии, и их можно назначать более одного раза во время курса терапии, хотя отдельное введение специальным образом не исключают. Специалисту в данной области техники будет понятно, что указанный состав специально не рассматривают в качестве полного курса терапии, и такие решения остаются для специалистов в области лечения, нежели чем получения составов.

[0038] Описанные выше подходящие композиции могут представлять собой любую из множества подходящих форм для различных способов введения, например, для перорального, сублингвального, буккального, назального, ректального, местного (включая трансдермальный и внутрикожный), глазного, интрацеребрального, внутричерепного, интратекального, внутриартериального, внутривенного, внутримышечного или других парентальных способов введения. Специалисту в данной области техники будет понятно, что композиции для перорального и назального введения включают композиции, которые вводят путем ингаляции, и их получают с применением доступных методик. В зависимости от конкретного желаемого способа введения можно применять множество фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в данной области техники. Фармацевтически приемлемые носители включают, например, твердые или жидкие наполнители, разбавители, гидротропы, поверхностно-активные вещества и инкапсулирующие вещества. Могут быть включены необязательные фармацевтически активные материалы, которые по существу не влияют на ингибирующую активность указанного соединения или композиции. Количество носителя, используемого в сочетании с указанным соединением или композицией, является достаточным для того, чтобы обеспечить практическое количество материала для введения указанного соединения в однократной дозе. Методы и композиции для получения лекарственных форм, подходящих в описанных в настоящем документе способах, описаны в следующих ссылках, которые все включены в настоящую заявку посредством ссылки: Modern Pharmaceutical, 4th Ed., главы 9 и 10 (Banker & Rhodes, editors, 2002); Lieberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (1989); и Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 8th Edition (2004).

[0039] Можно применять различные лекарственные формы для перорального введения, включая такие твердые формы, как таблетки, капсулы (например, твердые желатиновые капсулы и жидкие желатиновые капсулы), гранулы и нерасфасованные порошки. Таблетки могут быть спрессованы, перетерты, покрыты энтеросолюбильной оболочкой, сахаром, пленкой или могут быть спрессованы множество раз и содержать подходящие связующие вещества, смазывающие вещества, разбавители, дезинтегрирующие агенты, красители, ароматизаторы, антислеживающие агенты и агенты, понижающие температуру замерзания. Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают водные растворы, эмульсии, суспензии, растворы и/или суспензии, восстановленные из нешипучих гранул, и шипучие препараты, восстановленные из шипучих гранул, содержащие подходящие растворители, консерванты, эмульгаторы, суспендирующие агенты, разбавители, подсластители, агенты, понижающие температуру замерзания, красители и ароматизаторы.

[0040] Фармацевтически приемлемые носители, подходящие для получения лекарственных форм с однократной дозировкой для перорального введения, хорошо известны в данной области техники. Таблетки обычно содержат распространенные фармацевтически совместимые адъюванты в качестве инертных разбавителей, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, маннит, лактоза и целлюлоза; связующие вещества, такие как крахмал, желатин и сахароза; разрыхлители, такие как крахмал, альгиновая кислота и кроскармелоза; смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота и тальк. Для улучшения характеристик расхода порошковой смеси можно применять глиданты, такие как диоксид кремния. Для внешнего вида можно добавлять красители, такие как FD&C-красители. Подсластители и ароматизаторы, такие как аспартам, сахарин, ментол, перечная мята и фруктовые ароматизаторы, являются подходящими адьювантами для жевательных таблеток. Капсулы обычно содержат один или более твердых разбавителей, раскрытых выше. Отбор компонентов носителя зависит от вторичных критериев, таких как вкус, стоимость и стабильность при хранении, которые не являются критическими, и специалист в данной области техники может его легко осуществить.

[0041] Композиции для перорального введения также содержат жидкие растворы, эмульсии, суспензии и им подобные. Фармацевтически приемлемые носители, подходящие для получения таких композиций, хорошо известны в данной области техники. Типичные компоненты носителей для сиропов, эликсиров, эмульсий и суспензий включают этанол, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, жидкую сахарозу, сорбит и воду. Для суспензии типичные суспендирующие агенты включают метилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, AVICEL RC-591, трагакант и альгинат натрия; типичные смачивающие агенты включают лецитин и полисорбат 80; и типичные консерванты включают метилпарабен и бензоат натрия. Жидкие композиции для перорального введения могут также содержать один или более компонентов, таких как подсластители, ароматизаторы и красители, раскрытые выше.

[0042] Такие композиции также можно покрыть путем обычных способов, обычно при помощи зависящих от рН или времени покрытий, таким образом, что предлагаемая композиция высвобождается в желудочно-кишечном тракте вблизи желаемого места применения или в разное время для увеличения желаемого действия. Такие лекарственные формы, обычно включают, но не ограничиваются ими, один или более из ацетатфталата целлюлозы, поливинилацетат фталата, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, этилцеллюлозы, покрытия Eudragit, восков и шеллаков.

[0043] Описанные в настоящем документе композиции могут необязательно содержать другие лекарственные вещества.

[0044] Другие композиции, подходящие для обеспечения системной доставки указанных предлагаемых соединений, включают лекарственные формы для подъязычного, буккального и носового способов ввеедений. Такие композиции обычно содержат один или более растворимых веществ-наполнителей, таких как сахароза, сорбит и маннит; и связующих веществ, таких как аравийская камедь, микрокристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза. Также могут быть включены глиданты, смазывающие вещества, подсластители, красители, антиоксиданты и ароматизаторы, раскрытые выше.

[0045] Жидкая композиция, которую приготавливают для местного офтальмологического применения, приготавливают таким образом, что ее можно вводить местно в глаз. Уровень комфорта можно обеспечить на максимально возможном высоком уровне, хотя иногда критерии для составов (например, стабильность лекарственного средства) могут обуславливать необходимость менее оптимального уровня комфорта. В случае, когда невозможно достичь максимального уровня комфорта, указанную жидкость можно приготовить таким образом, что жидкость будет переносимой для пациента для местного офтальмологического применения. Кроме того, офтальмологически приемлемую жидкость можно либо упаковать для однократного применения, либо она может содержать консервант для предотвращения заражения при многократных применениях.

[0046] Для офтальмологического применения растворы или лекарственные средства часто получают с применением физиологического солевого раствора в качестве основной среды-носителя. Офтальмологические растворы можно предпочтительным образом поддерживать при удобном рН при помощи соответствующей буферной системы. Указанные составы могут также содержать обычные фармацевтически приемлемые консерванты, стабилизаторы и поверхностно-активные вещества.

[0047] Консерванты, которые можно применять в раскрытых в настоящем документе фармацевтических композициях, включают, но не ограничиваются ими, бензалконийхлорид, РНМВ, хлорбутанол, тимеросал, ацетат фенилртути и нитрат фенилртути. Подходящим поверхностно-активным веществом является, например, Tween 80. Аналогичным образом, в раскрытых в настоящем документе офтальмологических препаратах можно применять различные подходящие среды-носители. Эти среды-носители включают, но не ограничиваются ими, поливиниловый спирт, повидон, гидроксипропилметилцеллюлозу, полоксамеры, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и очищенную воду.

[0048] Регуляторы тоничности можно добавлять по мере необходимости или удобства. Они включают, но не ограничиваются ими, соли, в частности хлорид натрия, хлорид калия, маннит и глицерин, или любой другой подходящий офтальмологически приемлемый регулятор тоничности.

[0049] Различные буферы и средства для регулирования рН можно применять до тех пор, пока полученный препарат является офтальмологически приемлемым. Для многих композиций значение рН будет составлять от 4 до 9. Соответственно, буферы включают ацетатные буферы, цитратные буферы, фосфатные буферы и боратные буферы. Кислоты или основания можно применять для регулирования рН данных составов по мере необходимости.

[0050] Офтальмологически приемлемые антиоксиданты включают, но не ограничиваются ими, метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, ацетилцистеин, бутилированный гидроксианизол и бутилированный гидрокситолуол.

[0051] Другими вспомогательными компонентами, которые могут быть включены в офтальмологические препараты, являются хелатирующие агенты. Подходящим хелатирующим агентом является эдетат динатрия, хотя другие хелатирующие агенты также можно применять вместо или в сочетании с ним.

[0052] Для местного применения используют кремы, мази, гели, растворы или суспензии и т.д., содержащие раскрытую в настоящем документе композицию. Составы для местного применения могут в целом состоять из фармацевтического носителя, сорастворителя, эмульгатора, усилителя проникновения, системы консервирования и смягчающего средства.

[0053] Для внутривенного введения описанные в настоящем документе композиции можно растворить или диспергировать в фармацевтически приемлемом разбавителе, таком как физиологический раствор или раствор декстрозы. Подходящие вспомогательные вещества могут быть включены для достижения желаемого рН, включая, но не ограничиваясь ими, NaOH, карбонат натрия, ацетат натрия, HCl и лимонную кислоту. В различных вариантах реализации значение рН конечной композиции составляет от 2 до 8 или предпочтительно от 4 до 7. Обладающие антиоксидантными свойствами вспомогательные вещества могут включать бисульфит натрия, ацетон-бисульфит натрия, формальдегид натрия, сульфоксилат, тиомочевину и ЭДТА. Другие неограничивающие примеры подходящих вспомогательных веществ, обнаруживаемых в окончательной внутривенной композиции, могут включать фосфаты натрия или калия, лимонную кислоту, винную кислоту, желатин и углеводы, такие как декстроза, маннит и декстран. Другие приемлемые вспомогательные вещества описаны в публикациях Powell et al., Compendium of Excipients for Parenteral Formulation, PDA J. Pharm. Sci. and Tech. 1998, 52 238-311 и Nema et al., Excipients and Their Role in Approved Injectable Products: Current Usage and Future Directions, PDA J. Pharm. Sci. and Tech. 2011, 65 287-332, обе из которых полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки. Антимикробные агенты также могут быть включены для придания раствору бактериостатических или фунгистатических свойств, включая, но не ограничиваясь ими, нитрат фенилртути, тимеросал, бензетония хлорид, бензалкония хлорид, фенол, крезол и хлорбутанол.

[0054] Указанные композиции для внутривенного введения можно предложить обеспечивающим уход лицам в виде одного или более твердых веществ, которые восстанавливают при помощи подходящего разбавителя, такого как стерильная вода, физиологический раствор или декстроза в воде, незадолго до введения. В других вариантах реализации указанные композиции предложены в растворе, готовом для парентерального введения. В других вариантах реализации указанные композиции предложены в растворе, который дополнительно разбавляют перед введением. В вариантах реализации, которые включают введение комбинации описанного в настоящем документе соединения и другого агента, указанную комбинацию можно предложить лицам, осуществляющим уход, в виде смеси, или осуществляющие уход лица могут смешать два агента до введения, или два агента можно вводить отдельно.

[0055] Фактическая доза активных соединений, описанных в настоящем документе, зависит от конкретного соединения и от состояния, подлежащего лечению; выбор соответствующей дозы находится в пределах знаний квалифицированного специалиста. В некоторых вариантах реализации суточная доза Плинабулина может составлять от приблизительно 0,25 мг/кг до приблизительно 120 мг/кг или более массы тела, от приблизительно 0,5 мг/кг или менее до приблизительно 70 мг/кг, от приблизительно 1,0 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг массы тела или от приблизительно 1,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг массы тела. Таким образом, для введения человеку с массой тела 70 кг диапазон дозировки будет составлять от приблизительно 17 мг в день до приблизительно 8000 мг в день, от приблизительно 35 мг в день или менее до приблизительно 7000 мг в день или более, от приблизительно 70 мг на день до приблизительно 6000 мг в день, от приблизительно 100 мг в день до приблизительно 5000 мг в день или от приблизительно 200 мг до приблизительно 3000 мг в день.

[0056] В некоторых вариантах реализации описанные в настоящем документе композиции можно применять в комбинации с другими терапевтическими агентами. В некоторых вариантах реализации описанные в настоящем документе композиции можно вводить или применять в комбинации со средствами для лечения, такими как препараты для химиотерапии, радиотерапии и биологические препараты.

Способы лечения

[0057] Некоторые варианты реализации относятся к способу лечения рака с применением описанной в настоящем документе фармацевтической композиции для субъекта, нуждающегося в этом. Некоторые варианты реализации относятся к способу лечения рака, включающему совместное введение Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах реализации субъект может представлять собой животное, например, млекопитающее, человека. В некоторых вариантах реализации субъект является человеком.

[0058] Некоторые варианты реализации относятся к способам обеспечения костимуляции активации Т-клеток против рака путем совместного введения Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа. Некоторые варианты реализации относятся к способам обеспечения костимуляции природных клеток-киллеров против рака путем совместного введения Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа.

[0059] В некоторых вариантах реализации рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с PD-1. В некоторых вариантах реализации указанный лиганд, связывающийся с PD-1, представляет собой PD-L1. В некоторых вариантах реализации указанный лиганд, связывающийся с PD-1, представляет собой PD-L2.

[0060] В некоторых вариантах реализации способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих лиганд, связывающийся с PD-1. В некоторых вариантах реализации указанный способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих PD-L1. В некоторых вариантах реализации способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих PD-L2. В некоторых вариантах реализации способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих PD-L3 или PD-L4.

[0061] В некоторых вариантах реализации идентификация раковых клеток, экспрессирующих лиганд, связывающийся с PD-1, включает применение анализа для определения присутствия указанного связывающегося лиганда. Примеры применимого анализа включают, но не ограничиваются ими, набор PD-L1 IHC 22С3 pharmDx и PD-L1 IHC 28-8 pharmDx, доступные от Dako.

[0062] В некоторых вариантах реализации рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с CTLA-4. В некоторых вариантах реализации указанный лиганд, связывающийся с CTLA-4, представляет собой В7.1 или В7.2.

[0063] В некоторых вариантах реализации способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих лиганд, связывающийся с CTLA-4. В некоторых вариантах реализации способ лечения рака, описанный в настоящем документе, дополнительно включает идентификацию раковых клеток, экспрессирующих В7.1 или В7.2.

[0064] В некоторых вариантах реализации ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ниволумаб, пембролизумаб, пидилизумаб, ипилимумаб, дакарбазин, BMS 936559, атезолизумаб, дурвалимумаб или любые их комбинации.

[0065] В некоторых вариантах реализации рак представляет собой рак головы и шеи, рак легких, рак желудка, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак груди, рак почек, рак мочевого пузыря, рак яичников, рак шейки матки, меланому, глиобластому, миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой почечно-клеточный рак, злокачественную меланому, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), рак яичников, лимфому Ходжкина или плоскоклеточную карциному. В некоторых вариантах реализации рак выбран из рака груди, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака предстательной железы, меланомы, лейкоза, рака яичников, рака желудка, почечно-клеточного рака, рака печени, рака поджелудочной железы, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой солидную опухоль или гематологический рак.

[0066] В некоторых вариантах реализации рак не содержит клеток, экспрессирующих PD-1, PD-L1 или PD-L2 на обнаруживаемых уровнях.

[0067] В некоторых вариантах реализации рак выбран из рака груди, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака предстательной железы, меланомы, лейкоза, рака яичников, рака желудка, почечно-клеточного рака, рака печени, рака поджелудочной железы, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой солидную опухоль или гематологический рак.

[0068] Некоторые варианты реализации относятся к способу индуцирования созревания дендритных клеток у пациента с раком, включающему введение композиции, содержащей Плинабулин, пациенту с раком.

[0069] Некоторые варианты реализации относятся к способу нарушения ассоциированной с раком сосудистой сети опухоли у субъекта, включающему совместное введение указанному субъекту соединения плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа.

[0070] Различные виды рака ассоциируют с образованием сосудистой сети опухоли. В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из меланомы, рака поджелудочной железы, колоректальной аденокарциномы, опухоли головного мозга, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, гормонального рефракторного метастатического рака предстательной железы, метастатического рака груди, немелкоклеточного рака легких, почечно-клеточного рака, рак головы и шеи, рака предстательной железы, рака толстой кишки, анапластического рака щитовидной железы.

[0071] Некоторые варианты реализации включают совместное введение композиции и/или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, с дополнительным лекарственным средством. Например, как это описано выше, некоторые варианты реализации включают совместное введение Плинабулина с одним или более ингибиторами контрольной точки иммунного ответа. Под «совместным введением» подразумевается, что два или более агентов вводят таким образом, что введение одного или более агентов оказывает влияние на эффективность и/или безопасность одного или более других агентов независимо от того, когда или каким образом они фактически были введены. В одном варианте реализации указанные агенты вводят одновременно. В одном из таких вариантов реализации введение в комбинации осуществляют путем комбинирования агентов в лекарственной форме с однократной дозировкой. В другом варианте реализации указанные агенты вводят последовательно. В одном варианте реализации указанные агенты вводят посредством одного и того же способа, как, например, перорально или внутривенно. В другом варианте реализации указанные агенты вводят различными способами, как, например, один вводят перорально, а другой вводят в.в. В некоторых вариантах реализации период времени между введением одного или более агентов и введением совместно вводимого одного или более агентов может составлять приблизительно 1 час, 2 часа, 3 часа, 5 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 15 часы, 18 часов, 20 часов, 24 часа, 36 часов, 48 часов, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 14 дней, 21 день, 28 дней или 30 дней.

[0072] В некоторых вариантах реализации цикл лечения может включать совместное введение Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа в комбинации с введением только Плинабулина или введение только одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа. В некоторых вариантах реализации Плинабулин и один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа вводят совместно в 1 день с последующим введением только Плинабулина через 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 2 недели или 3 недели, и затем последующим совместным введением Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа через 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 2 недели или 3 недели. В некоторых вариантах реализации Плинабулин и один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа вводят одновременно на 1 день с последующим введением только Плинабулина или только одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа в день, выбранный между 2 и 31 днем, и затем последующим совместным введением Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа в день, выбранный между 3 и 31 днем. В некоторых вариантах реализации Плинабулин и один или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа совместно вводят в 1 день с последующим введением только Плинабулина на 8 день и затем последующим совместным введением Плинабулина и одного или более ингибиторов контрольной точки иммунного ответа на 15 день. В некоторых вариантах реализации цикл лечения можно повторять два или более раз.

[0073] Примеры дополнительных лекарственных средств включают другие химиотерапевтические агенты.

[0074] В некоторых вариантах реализации указанный химиотерапевтический агент может быть выбран из группы, состоящей из абиратерона ацетата, Абитрексата (Метотрексата), Абраксана (состав, содержащий наночастицы Паклитаксела, стабилизированный альбумином), ABVD, ABVE, ABVE-PC, АС, АС-Т, Адцетриса (Брентуксимаба ведотин), ADE, Адо-Трастузумаб Эмтанзина, Адриамицина (Доксорубицин гидрохлорид), Афатиниб дималеата, Афинитора (Эверолимус), Акинзео (Нетупитант и Палоносетрон гидрохлорид), Альдара (Имиквимод), Альдеслейкина, Алесенса (Алектиниб), Алектиниба, Алемтузумаба, Алимта (Пеметрексед динатрия), Алокси (Палоносетрон гидрохлорид), Амбохлорина (Хлорамбуцил), Амбоклорина (Хлорамбуцил), Аминолевулиновой кислоты\Анастрозола, Апрепитанта, Аредиа (Памидронат динатрий), Аримидекса (Анастрозол), Аромазина (Экземестан), Арранона (Неларабин), триоксида мышьяка, Арзерра (Офатумумаб), Аспарагиназы Erwinia chrysanthemi, Авастина (Бевацизумаб), Акситиниба, Азацитидина, ВЕАСОРР, Беценума (Кармустин), Белеодака (Белиностат), Белиностата, Бендамустин гидрохлорида, ВЕР, Бевацизумаба, Бексаротина, Бексара (Тозитумомаб и Йод 1-131 Тозитумомаб), Бикалутамида, BiCNU (Кармустин), Блеомицина, Блинатумомаба, Блинцито (Блинатумомаб), Бортезомиба, Босулифа (Босутиниб), Босутиниба, Брентуксимаб ведотина, Бусульфана, Кабазитаксела, Кабозантиниб-8-Малата, CAF, Кэмпаса (Алемтузумаб), Камптозара (Иринотекан гидрохлорид), Капецитабина, САРОХ, Карака (Флуороурацил-топический), Карбоплатина, КАРБОПЛАТИН-ТАКСОЛА, Карфилзомиба, Кармубриса (Кармустин), Кармустина, импланта Кармустина, Касодекса (Бикалютамид), CeeNU (Ломустин), Церитиниба, Церубидина (Даунорубицин гидрохлорид), Церварикса (рекомбинантная двухвалентная вакцина против HPV), Цетуксимаба, Хлорамбуцила, ХЛОРАМБУЦИЛ-ПРЕДНИЗОНА, CHOP, Цисплатина, Клафена (Циклофосфамид), Клофарабина, Клофарекса (Клофарабин), Клолара (Клофарабин), CMF, Кобиметиниба, Кометрика (Кабозантиниб-S-Малат), COPDAC, СОРР, COPP-ABV, Космегена (Дактиномицин), Котеллика (Кобиметиниб), Кризотиниба, CVP, Циклофосфамида, Цифоса (Ифосфамид), Цирамза (Рамуцирумаб), Цитарабина, липосомального Цитарабина, Цитозара-U (Цитарабин), Цитоксана (Циклофосфамид), Дабрафениба, Дакарбазина, Дакогена (Децитабин), Дактиномицина, Даратумумаба, Дарзалекса (Даратумумаб), Дазатиниба, Даунорубицин гидрохлорида, Децитабина, Дегареликса, Денилейкин дифтитокса, Деносумаба, ДепоЦита (липосомальный Цитарабин), Дексаметазона, Дексразоксан гидрохлорида, Динутуксимаба, Доцетаксела, Доксила (липосомальный Доксорубицин гидрохлорид), Доксорубицин гидрохлорида, липосомального Доксорубицин гидрохлорида, Докс-SL (липосомальный доксорубицин гидрохлорид), DTIC-Dome (Дакарбазин), Эфудикса (Флуороурацил-топический), Элитека (Разбуриказа), Элленс (Эпирубицин гидрохлорид), Элотузумаба, Элоксантина (Оксалиплатин), Элтромбопаг Оламина, Эменда (Апрепитант), Эмплисити (Элотузумаб), Энзалутамида, Эпирубицин Гидрохлорида, EPOCH, Эрбитукса (Цетуксимаб), Эрибулин Мезилата, Эриведжа (Висмодегиб), Эрлотиниб гидрохлорида, Эрвиназа (Аспарагиназа Erwinia chrysanthemi), Этофоса (Этопозид фосфат), Этопозида, Этопозид фосфата, Эвацета (липосомальный Доксорубицин гидрохлорид), Эверолимуса, Эвиста (Ралоксифен гидрохлорид), Эксеместана, 5-FU (Флуороурацил для инъекций), 5-FU (Флуороурацил-топический), Фарестона (Торемифен), Фаридака (Панобиностат), Фаслодекса (Фулвестрант), FEC, Фемара (Летрозол), Филграстима, Флудара (Флударабин фосфат), Флударабин фосфата, Флуороплекса (Флуороурацил-топический), Флуороурацила для инъекций, Флуороурацил-топического, Флутамида, Фолекса (Метотрексат), Фолекс PFS (Метотрексат), ФОЛФИРИ, ФОЛФИРИ-БЕВАЦИЗУМАБА, ФОЛФИРИ-ЦЕТУКСИМАБА, ФОЛФИРИНОКСА, ФОФОКСА, Фолотина (Пралатрексат), FU-LV, Фулвестранта, Гардасила (рекомбинантная четырехвалентная вакцина против HPV), Гардасила 9 (рекомбинантная девятивалентная вакцина против HPV), Газива (Обинутузумаб), Гефитиниба, Гемцитабин гидрохлорида, ГЕМЦИТАБИН-ЦИСПЛАСТИНА, ГЕМЦИТАБИН-ОКСАЛИПЛАТИНА, Гемтузумаб Озогамицина, Гемзара (Гемцитабин гидрохлорид), Гилотриф (Афатиниб дималеат), Гливека (Иматиниб мезилат), Глиадела (имплантат Кармустина), Глиадела wafer (имплантат Кармустина), Глюкарпидазы, Гозерелин ацетата, Халавена (Эрибулин мезилат), Герцептина (Трастузумаб), рекомбинантной двухвалентной вакцины против HPV, рекомбинантной девятивалентной вакцина против HPV, рекомбинантной четырехвалентной вакцины против HPV, Хикамтина (Топотекан гидрохлорид), Hyper-CVAD, Ибранса (Палбоциклиб), Ибритумомаб Тиуксетана, Ибрутиниба, ICE, Иклусига (Понатиниб гидрохлорид), Идамицина (Идарубицин гидрохлорид), Иделализиба, Ифекса (Ифосфамид), Ифосфамида, ИЛ-2 (Альдеслейкин), Иматиниб мезилата, Имбрувика (Ибрутиниб), Имиквимода, Имлигика (Талимоген Лагерпарепвек), Инлита (Акситиниб), рекомбинантного Интерферона Альфа-2b, интерлейкина-2 (альдеслейкин), Интрона А (рекомбинантный интерферон альфа-2b), Йод I-131 Тозитумомаба и Тозитумомаба, Ипилимумаба, Иресса (Гефитиниб), Иринотекан гидрохлорида, липосомального Иринотекан гидрохлорида, Истодакса (Ромидепсин), Иксабепилон, Иксазомиб цитрата, Иксемпра (Иксабепилон), Джакави (Руксолитиниб фосфат), Джевтана (Кабазитаксел), Кадцила (Адо-трастузумаб Эмтазин), Кеоксифена (Ралоксифен гидрохлорид), Кепиванса (Палифермин), Кейтруда (Пембролизумаб), Кипролиса (Карфильзомиб), Ланреотид ацетата, Лапатиниб дитозилата, Леналидомида, Ленватиниб мезилата, Ленвима (Ленватиниб мезилат), Летрозола, кальций лейковорина, Лейкерана (Хлорамбуцил), Лейпролид ацетата, Левулана (Аминолевулиновая кислота), Линфолизина (Хлорамбуцил), ЛипоДокса (липосомальный Доксорубицин гидрохлорид), Ломустина, Лонсурфа (Трифлуридин и Типирацил гидрохлорид), Лупрона (Лейпролид ацетат), Люпрон Депо (Лейпролид ацетат), Люпрон Депо-Пед (Лейпролид ацетат), Люпрон Депо-3 Month (Лейпролид ацетат), Люпрон Депо-4 Month (Лейпролид ацетат), Линпарза (Олапариб), Маркибо (липосомальный Винкристин сульфат), Матулана (Прокарбазин гидрохлорид), Мехлорэтамин гидрохлорида, Мегаса (Мегестрол ацетат), Мегестрол ацетата, Мекиниста (Траметиниб), Меркаптопурина, Месна, Меснекса (Месна), Метазоластона (Темозоломид), Метотрексата, Метотрексата LPF (Метотрексат), Мексата (Метотрексат), Мексата-AQ (Метотрексат), Митомицина С, Митоксантрон гидрохлорида, Митозитрекса (Митомицин С), МОРР, Мозобила (Плериксафор), Мустаргена (Мехлорэтамин гидрохлорид), Мутамицина (Митомицин С), Милеран (Бусульфан), Милосара (Азацитидин), Милотарга (Гемтузумаб Озогамицин), Паклитаксела в виде наночастиц (состав, содержащий наночастицы Паклитаксела, стабилизированный альбумином), Навелбина (Винорелбин Тартрат), Нецитумумаба, Неларабина, Неосара (Циклофосфамид), Нетупитанта и Палоносетрон гидрохлорида, Неупогена (Филграстим), Нексавара (Сорафениб Тозилат), Нилотиниба, Нинларо (Иксазомиб цитрат), Ниволумаба, Нолвадекса (Тамоксифен цитрат), Нплата (Ромиплостим), Обинутузумаба, Одомзо (Сонидегиб), ОЕРА, Офатумумаба, OFF, Олапариба, Омацетаксин мепесукцината, Онкаспара (Пэгаспаргаза), Ондансетрон гидрохлорида, Онивид (липосомальный Иринотекан гидрохлорид), Онтака (Денилейкин Дифтитокс), Опдиво (Ниволумаб), ОРРА, Осимертиниба, Оксалиплатина, Паклитаксела, состава, содержащего наночастичы Паклитаксела, стабилизированного альбумином, PAD, Палбоциклиба, Палифермина, Палоносетрон гидрохлорида, Палоносетрон гидрохлорида и Нетупитанта, Памидронат динатрия, Панитумумаба, Панобиностата, Параплата (Карбоплатин), Параплатина (Карбоплатин), Пазопаниб гидрохлорида, PCV, Пэгаспаргазы, Пэгинтерферона Альфа-2b, ПЭГ-Интрона (Пэгинтерферон Альфа-2b), Пембролизумаба, Пеметрекседа Динатрия Перьета (Пертузумаб), Пертузумаба, Платинола (Цисплатин), Платинола-AQ (Цисплатин), Плериксафора, Помалидомида, Помалиста (Помалидомид), Понатиниб гидрохлорида, Портразза (Нецитумумаб), Пралатрексата, Преднизона, Прокарбазин гидрохлорида, Пролейкина (Альдеслейкин), Пролиа (Денозумаб), Промакта (Элтромбопаг Оламин), Провенге (Сипулейцел-Т), Пуринетола (Меркаптопурин), Пуриксана (Меркаптопурин), Радий-223 дихлорида, Ралоксифен гидрохлорида, Рамуцирумаба, Расбуриказы, R-CHOP, R-CVP, рекомбинантной двухвалентной вакцины против вируса папилломы человека (HPV), рекомбинантной девятивалентной вакцины против вируса папилломы человека (HPV), рекомбинантной четырехвалентной вакцины против вируса паппиломы человека (HPV), рекомбинантного Интерферона Альфа-2b, Регорафениба, R-ЕРОСН, Ревлимида (Леналидомид), Реуматрекса (Метотрексат), Ритуксимаба, Ролапитант гидрохлорида, Ромидепсина, Ромиплостима, Рубидомицина (Даунорубицин гидрохлорид), Руксолитиниб фосфата, аэрозоля Склерозол для интраплеврального введения (Тальк), Силтуксимаба, Сипулейцела-Т, Соматулина Депо (Лантреотид ацетат), Сонидегиба, Сорафениб Тозилата, Сприцела (Дазатиниб), СТАНФОРДА V, стерильного порошка талька (Тальк), Стериталька (Тальк), Стиварга (Регорафениб), Сунитиниб малата, Сутента (Сунитиниб малат), Силатрона (Пэгинтерферон Альфа-2b), Сильванта (Силтуксимаб), Синовира (Талидомид), Синрибо (Омацетаксин мепесукцинат), Таблоида (Тиогуанин), ТАС, Тафинлара (Дабрафениб), Тагриссо (Осимертиниб), Талька, Талимоген Лагерпарепвека, Тамоксифен цитрата, Тарабина PFS (Цитарабин), Тарцева (Эрлотиниб гидрохлорид), Таргретина (Бексаротен), Тасигна (Нилотиниб), Таксола (Паклитаксел), Таксотера (Доцетаксел), Темодара (Темозоломид), Темозоломида, Темсиролимуса, Талидомида, Тиогуанина, Тиотепа, Толака (Флуороурацил-топический), Топосара (Этопозид), Топотекан гидрохлорида, Торемифена, Торисела (Темсиролимус), Тозитумомаба и Йод I-131 Тозитумомаба, Тотекта (Дексразоксан гидрохлорид), TPF, Трабектедина, Траметиниба, Трастузумаба, Треанда (Бендамустин гидрохлорид), трифлуридин и типирацил гидрохлорида, Трисенокса (триоксид мышьяка), Тикерба (Лапатиниб дитозилат), Унитуксина (Динутуксимаб), Уридин триацетата, VAC, Вандетаниба, VAMP, Варуби (Ролапитант гидрохлорид), Вектибикса (Панитумумаб), VeIP, Велбана (Винбластин сульфат), Велкейда (Бортезомиб), Велсара (Винбластин сульфат), Вемурафениба, ВеПезида (Этопозид), Виадура (Лейпролид ацетат), Видазы (Азацитидин), Винбластин сульфата, Винкасара PFS (Винкристин сульфат), Винкристин сульфата, липосомального Винкристин сульфата, Винорелбин Тартрата, VIP, Висмодегиба, Вистогарда (Уридин триацетат), Вораксаза (Глукарпидаза), Вориностата, Вотриента (Пазопаниб гидрохлорид), Велковорина (кальция лейковорин), Ксалкори (Кризотиниб), Кселода (Капецитабин), КСЕЛИРИ, КСЕЛОКСА, Иксгева (Денозумаб), Ксофиго (Радий-223 дихлорид), Кстанди (Энзалутамид), Йервоя (Ипилимумаб), Йонделиса (Трабектедин), Зальтрапа (Зив-Афлиберцепт), Зарсио (Филграстим), Зелборафа (Вемурафениб), Зевалина (Ибритумомаб Тиуксетан), Зинекарда (Дексразоксан гидрохлорид), Зив-Афлиберцепта, Зофрана (Ондансетрон гидрохлорид), Золадекса (Гозерелин ацетат), Золедроновой кислоты, Золинза (Вориностат), Зомета (Золедроновая кислота), Зиделиг (Иделализиб), Зикадиа (Церитиниб) и Зитига (Абиратерон ацетат).

[0075] Чтобы дополнительно проиллюстрировать данное изобретение, включены следующие примеры. Разумеется, что указанные примеры не должны толковаться как конкретные ограничения указанного изобретения. Вариации данных примеров в рамках объема притязаний относятся к компетенции специалиста в данной области техники и считаются входящими в объем данного изобретения, как это описано и заявлено в настоящем документе. Читателю будет понятно, что квалифицированный специалист посредством настоящего изобретения и специалист в данной области техники способен получить и применить указанное изобретение без исчерпывающих примеров.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Влияние Плинабулина на созревание дендритных клеток

[0076] Линии клеток: незрелую линию клеток ДК мыши SP37A3 (предоставленная Merck KGaA) культивировали в среде Дульбекко, модифицированной по способу Искова (IMDM, Sigma), дополненной 10% термоинактивированной и исследованной на содержание эндотоксина ФБС (РАА), пируватом натрия (Gibco) пенициллин/стрептомицин L-глутаминовой смесью (Gibco), минимальной питательной средой (MEM) Eagle, содержащей незаменимые аминокислоты (Sigma), Ципроксином (Bayer) и 0,05 ммоль/л 2-меркаптоэтанолом (Gibco). Полную среду IMDM дополняли 20 нг/мл рекомбинантным GM-CSF мыши и 20 нг/мл рекомбинантным M-CSF мыши (оба от Peprotech). Линии клеток мышиной опухоли EG7 и 3LL-OVA получали от АТСС или их предоставлял Douglas Т. Fearon (Cancer Research UK Cambridge Institute, Li Ka Shing Center, Университет Кембриджа, Кембридж, Великобритания) соответственно. Все линии клеток исследовали и проверяли на отсутствие микоплазмы. Подтверждали экспрессию OVA в EG7 и 3LL-OVA и Thy1.1 в RMAThy1.1 соответственно; геномную аутентификацию не проводили.

[0077] DC7 (линия ДК мыши, Merck) высевали (8×10⁴ клеток/лунку, 96-луночный планшет с плоским дном, обработанный культурой ткани) в 180 мкл полной среды IMDM [среда IMDM (Sigma), дополненная 10% термоинактивированной и исследованной на содержание эндотоксина ФБС (РАА), пируватом натрия (Gibco), пенициллин/стрептомицин L-глутаминовой смесью (Gibco), MEM, содержащей незаменимые аминокислоты (Sigma), и 0,05 мМ 2-меркаптоэтанолом (Gibco)]. Полную среду IMDM дополняли 20 нг/мл рекомбинантным GM-CSF мыши. Адгезию ДК осуществляли в течение двух часов перед добавлением Плинабулина, среды или ЛПС в качестве контролей в 10-кратной концентрации в количестве 20 мкл. ДК инкубировали с Плинабулином в различных концентрациях (0,001 мкМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ, 10 мкМ), средой и ЛПС соответственно в течение 20 часов. Супернатанты данных культур собирали и применяли для обнаружения образования цитокинов при помощи ИФА (наборы, доступные от BD), и указанные клетки окрашивали при помощи красителя для окраски жизнеспособных клеток LD-IR (Invitrogen), а также при помощи меченых флуорохромом моноклональных антител против CD80, CD86, CD40 и MHCII для проточного цитометрического анализа. Клетки анализировали с применением цитометра BD Fortessa, оборудованного программным обеспечением DIVA. Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) маркеров созревания ДК CD40, CD80, CD86 и MHCII в живых клетках нормировали по MFI данных маркеров, обнаруживаемых в необработанных (средой) ДК. Как представлено на ФИГ. 1А, Плинабулин значимым образом увеличивал экспрессию всех четырех маркеров созревания ДК: CD40, CD80, CD86 и MHCII. Жизнеспособность ДК значимо не изменялась ни при одной из исследуемых концентраций лекарственного средства, определенной с применением окрашивания при помощи SytoxGreen, как это представлено на ФИГ. 1В.

Пример 2. Сравнение Плинабулина с Паклитакселом и Этопозидом при созревании дендритных клеток

[0078] Два других противораковых лекарственных средства, Паклитаксел и Этопозид, также исследовали для сравнения их влияния на созревание ДК с Плинабулином. SP7A3 DC (линия ДК мыши, Merck) высевали (8×10⁴ клеток/лунку, 96-луночный планшет с плоским дном, обработанный культурой ткани) в 180 мкл полной среды IMDM [среда IMDM (Sigma), дополненная 10% термоинактивированной и исследованной на содержание эндотоксина ФБС (РАА), пируватом натрия (Gibco), пенициллин/стрептомицин L-глутаминовой смесью (Gibco), MEM, содержащей незаменимые аминокислоты (Sigma) и 0,05 мМ 2-меркаптоэтанолом (Gibco)]. Полную среду IMDM дополняли 20 нг/мл рекомбинантным GM-CSF мыши. Адгезию ДК осуществляли в течение двух часов до того, как добавляли Плинабулин, Паклитаксел, Этопозид, среду или ЛПС (положительный контроль) в 10-кратной концентрации в 20 мкл. ДК инкубировали с Плинабулином (0,001 мкМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ, 10 мкМ), Паклитакселом (0,001 мкМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ, 10 мкМ), Этопозидом (0,001 мкМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ, 10 мкМ), средой и ЛПС (положительный контроль) соответственно в течение 20 часов. Супернатанты данных культур собирали и применяли для обнаружения образования цитокинов при помощи ИФА (наборы, доступные от BD), и указанные клетки окрашивали при помощи красителя для окраски жизнеспособных клеток LD-IR (Invitrogen), а также при помощи меченых флуорохромом моноклональных антител против CD80, CD86, CD40 и MHCII для проточного цитометрического анализа. Клетки анализировали с применением цитометра BD Fortessa, оборудованного программным обеспечением DIVA. Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) маркеров созревания ДК CD40 (ФИГ. 2А), CD80 (ФИГ. 2В), CD86 (ФИГ. 2С) и MHCII (ФИГ. 2D) в живых клетках нормировали по MFI данных маркеров, обнаруживаемых в необработанных (средой) ДК. Образование провоспалительных цитокинов ИЛ-1β (ФИГ. 3А), ИЛ-6 (ФИГ. 3В) и ИЛ-12р40 (ФИГ. 3С) также обнаруживали при помощи ИФА. Супернатанты культур ДК анализировали на определение данных провоспалительных цитокинов, которые, как это было продемонстрировано, играют решающую роль в регуляции функции Т-клеток и противоопухолевых иммунных ответах.

[0079] Было отмечено, что Плинабулин является наиболее высокоэффективным индуктором созревания ДК среди всех трех лекарственных средств. Плинабулин продемонстрировал гораздо большую экспрессию всех четырех маркеров созревания ДК, CD 40, CD 80, MHCII и CD 86, чем Паклитаксел и Этопозид. Плинабулин также продемонстрировал значимо повышенную экспрессию всех четырех маркеров по сравнению с ЛПС, представляющим положительный контроль. Плинабулин запускал механизм повышенного образования ИЛ-1b, ИЛ-6 и ИЛ-12 по сравнению с Паклитакселом, Этопозидом и ЛПС. В связи с этим, Плинабулин увеличивал повышающую регуляцию маркеров созревания и образование провоспалительных цитокинов, что приводило к улучшению стимулирующей способности Т-клеток.

Пример 3. Синергетический эффект Плинабулина и ингибиторов контрольной точки иммунного ответа (антитело против PD-1)

[0080] Комбинированное лечение Плинабулином и ингибитором контрольной точки иммунного ответа PD-1 исследуют в сравнении с лечением только Плинабулином и лечением только антителом против PD-1. Исследования проводят с применением мышей в возрасте семи-десяти недель, которым подкожно осуществляют инъекцию опухолевых клеток МС-38. Получали пять групп для исследования, каждая группа содержала 9 мышей.

[0081] Мышам Группы 1 вводят физиологический раствор; мышам Группы 2 вводят разбавитель для Плинабулина (в отсутствие Плинабулина); мышам Группы 3 вводят Плинабулин, растворенный в разбавителе в концентрации 7,5 мг/кг; мышам Группы 4 вводят антитело против PD-1, а мыши Группы 5 получают комбинированное лечение Плинабулином/антителом против PD-1. Мышам с комбинированным лечением Плинабулином/антителом против PD-1 (Группа 5) дважды в неделю (1 день и 4 день каждой недели) вводят Плинабулин (7,5 мг/кг), который растворяют в разбавителе с последующим введением антитела против PD-1 через час после каждого введения Плинабулина. Мышам группы лечения только Плинабулином (Группа 3) или лечения только антителом (Группа 4) вводят Плинабулин (7,5 мг/кг, растворенный в разбавителе) или только антитело два раза в неделю (1 день и 4 день каждой недели). Мышам Группы 1 и 2 вводят только физиологический раствор или разбавитель для Плинабулина два раза в неделю.

[0082] Каждое лечение начинают при размере опухоли около 125 мм³ и его продолжают до достижения опухоли размера 1500 мм³. Если средний размер опухоли в любой группе не достигает 1500 мм³ в течение экспериментального 45 дня, лечение прекращают и продолжают оценивать размер опухоли. Для определения эффективности каждого лечения собираются следующие данные: коэффициент смертности до достижения опухолью размера 1500 мм³; масса тела мышей, оцениваемая два раза в неделю, включая до лечения; скорость роста опухоли, определяемая измерением размера опухоли (дважды в неделю); индекс роста опухоли; общий коэффициент выживаемости и время, необходимое для удвоения размера опухоли. Результаты исследований комбинированного лечения Плинабулином и антителом против PD-1 показывают, что Плинабулин обладает синергетическим эффектом с антителом против PD-1 в ингибировании роста опухоли.

Пример 4. Стимуляция in vivo OVA-специфичных OT-I и ОТ-II Т-клеток

[0083] Клетки SP37A3 или семидневные BMDC возбуждают импульсами в течение 1 часа с полноразмерным белком OVA (0,1 мг/мл) до активации при помощи Плинабулина или с пептидом OVA257-264 (Т4)/пептидом OVA323-339 (500 нг/мл после активации) и добавляют при указанных соотношениях к CD8+/CD4+ Т-клеткам, очищенным от OT-I/OT-II трансгенных мышей (2×10⁵ общего количества клеток/лунку, 96-луночный планшет с круглым дном). До совместного культивирования CD4⁺ Т-клетки нагружают красителем eFluor670 для определения пролиферации. Пролиферацию оценивают через 3 дня с применением проточной цитометрии.

Пример 5. Стимуляция in vivo антигенспецифичных CD4+ и CD8+ Т-клеток

[0084] Клетки Лангерганса (LC) и клетки селезенки, полученные из интактных ОТ-I и ОТ-II трансгенных мышей (Ly5.2), метят при помощи eFluor670 и адоптивно переносят в C57BL/6-Ly5.1-мышей. Через 24 часа мышей иммунизируют посредством инъекции в основу хвоста пептида OVA257-264 (Т4: SIINFEKL, низкоаффинный вариант SIINFEKL) или пептида OVA323-339 совместно с Плинабулином или ЛПС. Пролиферацию OT-I CD8+ и ОТ-II CD4+ Т-клеток оценивают через 4 дня после адоптивного переноса при помощи проточной цитометрии.

Пример 6. Анализ хоминга ДК к дренирующим опухоль LN

[0085] Для обнаружения хоминга ДК при инъекции Плинабулина мышам, несущим подкожные опухоли EG7, интраокулярно осуществляют инъекцию FITC-конъюгированного декстрана (100 мг/мышь, Sigma) совместно с Плинабулином или ФСБ/носителем (пустой контроль). Содержащие одиночные клетки суспензии, полученные из дренирующих и недренирующих опухоль лимфатических узлов (LN), получают через 48 часов после инъекции Плинабулина и анализируют при помощи проточной цитометрии.

Пример 7. Синергетический эффект Плинабулина и ингибиторов контрольных точек иммунного ответа (антитело против PD-1 и антитело против CTLA-4)

[0086] Комбинированное лечение Плинабулином и PD-1-ингибитором контрольной точки иммунного ответа в комбинации с CTLA-4-ингибитором контрольной точки иммунного ответа исследовали в сравнении с лечением только Плинабулином, с лечением только антителом против PD-1 или с лечением антителом против PD-1 в комбинации с антителом против CTLA-4. Исследования проводили с применением мышей в возрасте семи-десяти недель, которым подкожно осуществляли инъекцию опухолевых клеток МС-38. Получали шесть групп для исследования, и каждая группа содержала 10 мышей.

[0087] Мышам Группы 1 вводили IgG2a и среду-носитель для Плинабулина; мышам Группы 2 вводили Плинабулин, растворенный в разбавителе в концентрации 7,5 мг/кг; мышам Группы 3 вводили антитело против PD-1; мыши Группы 4 получали комбинированное лечение Плинабулином/антителом против PD-1; мышам Группы 5 вводили комбинированные антитела против PD-1/CTLA-4; а мыши Группы 6 получали комбинированное лечение антителом против PD-1/ антителом против CTLA-4/Плинабулином. Мышам с комбинированным лечением Плинабулином/антителом против PD-1 (Группа 4) и лечением Плинабулином/антителом против PD-1/CTLA-4 (Группа 6) дважды в неделю вводили (1 день и 4 день каждой недели) Плинабулин (7,5 мг/кг), который растворяли в разбавителе, с последующим введением антитела(антител) через один час после каждого введения Плинабулина. Мышам с лечением только Плинабулином (Группа 2) или лечением только антителом(-ами) (Группы 3 и 5) вводили Плинабулин (7,5 мг/кг, растворенный в разбавителе) или антитело(-а) один раз в неделю (1 день и 4 день каждой недели).

[0088] Каждое лечение начинали при размере опухоли около 125 мм³ и продолжали до достижения опухолью размера 3000 мм³. Когда средний размер опухоли в Группе 1 достигал 3000 мм³, эксперимент заканчивали. Для определения эффективности каждого лечения собирали следующие данные: коэффициент смертности до достижения опухолью размера 3000 мм³; масса тела мышей, оцениваемая два раза в неделю, включая до лечения; скорость роста опухоли, определяемая измерением размера опухоли (дважды в неделю); индекс роста опухоли; общий коэффициент выживаемости; масса опухоли при вскрытии и время, необходимое для 10-кратного увеличения размера опухоли. При вскрытии ткани взвешивали и подвергали FACS-анализу.

[0089] Результаты исследований комбинированного лечения Плинабулином и антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 продемонстрировали, что Плинабулин обладал синергетическим эффектом с антителами при ингибировании роста опухоли, и при нем наблюдали самое продолжительное время для достижения 10-кратного увеличения массы опухоли среди шести групп исследования. На ФИГ. 4А представлено влияние Групп 1, 5 и 6 на рост опухоли. Как представлено на ФИГ. 4А, в Группе 6, комбинированное лечение Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4, наблюдали лучшее ингибирование роста опухоли, чем в Группе 5, группа лечения комбинацией антитела против PD-1 и антитела против CTLA-4, и обе группы 5 и 6 продемонстрировали ингибирование роста опухоли по сравнению с контрольной Группой 1. На ФИГ. 4В представлено влияние шести групп лечения на среднюю массу опухоли при вскрытии. Как представлено на ФИГ. 4В, комбинированное лечение Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 приводило к наименьшей средней массе опухоли при вскрытии, за которым следовала группа лечения Плинабулином и антителом против PD-1. На ФИГ. 4С представлено время для достижения опухолями 10-кратного увеличения от их исходного объема в шести группах лечения. Как представлено на ФИГ. 4С, в группе лечения комбинированным Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 наблюдали наибольшее время для достижения опухолями 10-кратного увеличения от их исходного объема. Таким образом, лечение либо только Плинабулином, либо в комбинации с антителом против PD-1 или антителами против PD-1 и CTLA-4 приводило к уменьшению массы опухоли при вскрытии. Комбинированное лечение Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 обладало лучшим ингибирующим влиянием на опухоль, нежели чем лечение Плинабулином и антителом против PD-1, которое продемонстрировало лучшее ингибирующее влияние на опухоль, чем лечение только Плинабулином.

[0087] На ФИГ. 5 показаны результаты FACS-анализа опухолей при вскрытии, включая процент изменения содержания Treg-клеток, соотношение CD8+/Treg и процент содержания макрофагов в CD45+ лимфоцитах в описанной выше модели опухоли МС-38 CRC. На ФИГ. 5А представлено влияние шести групп лечения на процент содержания Treg-клеток. Как представлено на ФИГ. 5А, лечение Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4, лечение Плинабулином и антителом против PD-1 и лечение только Плинабулином продемонстрировало снижение % содержания Treg-клеток по сравнению с группой сравнения без Плинабулина. На ФИГ. 5В представлено соотношение CD8+ клеток и Treg-клеток. Как представлено на ФИГ. 5В, лечение Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 продемонстрировало наивысшее соотношение клеток CD8+/Treg. На ФИГ. 5С представлено влияние шести групп лечения на содержание макрофагов. Как представлено на ФИГ. 5С, все группы лечения Плинабулином, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4, лечения Плинабулином и лечения антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4 продемонстрировали снижение процента содержания макрофагов по сравнению с соответствующими группами сравнения.

[0091] Таким образом, FACS-анализ опухолевой ткани продемонстрировал, что лечение только Плинабулином, Плинабулином и ингибиторами контрольной точки иммунного ответа (например, Плинабулин с антителом против PD-1, Плинабулин с антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4) ассоциировали со снижением процента содержания регуляторных Т-клеток (Treg-клетки), снижением процента содержания макрофагальных окрашенных клеток и сопутствующим увеличением соотношения клеток CD8+/Treg. Уменьшение процентного содержания Treg-клеток и окрашенных макрофагальных клеток и увеличение соотношения клеток CD8+/Treg были более значимыми в группах лечения Плинабулином и ингибиторами контрольных точек иммунного ответа, чем в группе лечения только Плинабулином или только антителом (антителами). Эти данные продемонстрировали синергетические иммуно-онкологические свойства комбинированного лечения с применением Плинабулина и ингибиторов контрольной точки иммунного ответа (например, антитела против PD-1 и антитела против CTLA-4).

В контексте настоящего описания раскрыты композиции, содержащие Плинабулин и по меньшей мере один ингибитор контрольной точки иммунного ответа для лечения рака. В некоторых вариантах реализации предложены способы лечения рака путем совместного введения Плинабулина и по меньшей мере одного ингибитора контрольной точки иммунного ответа субъекту, нуждающемуся в этом. 3 н. и 26 з.п. ф-лы, 7 пр., 15 ил.

1. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая Плинабулин и один или более ингибитор контрольной точки иммунного ответа, причем указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1, PD-L1 или CTLA-4, причем указанный рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с PD-1 или CTLA-4.

2. Композиция по п. 1, содержащая первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа и второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа, причем указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа отличается от указанного второго ингибитора контрольной точки иммунного ответа.

3. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что указанный первый и указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа независимо представляет собой антитело против PD-1, PD-L1, CTLA-4.

4. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4.

5. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L1, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4.

6. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1.

7. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L1.

8. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4.

9. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанное антитело против PD-1, PD-L1 или CTLA-4 выбрано из α-CTLA4-PE-Cy7 или α-PD1-APC.

10. Композиция по любому из пп. 1-9, которая дополнительно содержит одно или более фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

11. Композиция по любому из пп. 1-10, отличающаяся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ниволумаб, пембролизумаб, пидилизумаб, ипилимумаб, BMS 936559, атезолизумаб, дурвалумаб или любые их комбинации.

12. Способ лечения рака, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-11 субъекту, нуждающемуся в этом, причем указанный рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с PD-1 или CTLA-4.

13. Способ лечения рака, включающий совместное введение Плинабулина и одного или более ингибитора контрольной точки иммунного ответа субъекту, нуждающемуся в этом, причем указанный один или более ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1, PD-L1 или CTLA-4, причем указанный рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с PD-1 или CTLA-4.

14. Способ по любому из пп. 12, 13, отличающийся тем, что указанный рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с PD-1.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный лиганд, связывающийся с PD-1, представляет собой PD-L1.

16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой рак головы и шеи, рак легких, рак желудка, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак груди, рак почек, рак мочевого пузыря, рак яичников, рак шейки матки, меланому, глиобластому, миелому, лимфому или лейкемию.

17. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой почечно-клеточный рак, злокачественную меланому, немелкоклеточный рак легких (НМРЛ), рак яичников, лимфому Ходжкина или плоскоклеточную карциному.

18. Способ по любому из пп. 12, 13, отличающийся тем, что указанный рак включает раковые клетки, экспрессирующие лиганд, связывающийся с CTLA-4.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанный лиганд, связывающийся с CTLA-4, представляет собой B7.1 или B7.2.

20. Способ по любому из пп. 13-19, включающий первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа и второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа, причем указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа отличается от указанного второго ингибитора контрольной точки иммунного ответа.

21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа и указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа независимо представляет собой антитело против PD-1, PD-L1 или CTLA-4.

22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанный первый ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1, а указанный второй ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4.

23. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-1.

24. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против PD-L1.

25. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой антитело против CTLA-4.

26. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанное антитело против PD-1, PD-L1 или CTLA-4 выбрано из α-CTLA4-PE-Cy7 или α-PD1-APC.

27. Способ по любому из пп. 13-26, отличающийся тем, что указанный ингибитор контрольной точки иммунного ответа представляет собой ниволумаб, пембролизумаб, пидилизумаб, ипилимумаб, BMS 936559, атезолизумаб, дурвалумаб или любые их комбинации.

28. Способ по п. 12 или 13, отличающийся тем, что указанный рак выбран из рака груди, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака предстательной железы, меланомы, лейкоза, рака яичников, рака желудка, почечно-клеточного рака, рака печени, рака поджелудочной железы, лимфом и миеломы.

29. Способ по п. 12 или 13, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой солидную опухоль или гематологический рак.