СПОСОБ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ С ЛАТЕНТНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ Российский патент 2020 года по МПК G01N33/53 

Область техники

Изобретение относится к области медицины, преимущественно к фтизиатрии и педиатрии, и может быть использовано для повышения эффективности диагностики туберкулезной инфекции у детей и подростков.

Уровень техники

Распространенность латентной туберкулезной инфекции в мире, по разным данным, составляет, по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), около 1,6 млрд человек. Дифференцирование активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков является одной из приоритетных задач для ВОЗ с целью достижения ликвидации туберкулеза как распространенного заболевания [World Health Organization. The End ТВ Strategy. Global Strategy and Targets for Tuberculosis Prevention, Care and Control after 2015. www.who.int/tb/post 2015_November2015. (in Russian)].

В России все дети с положительным кожным тестом «Диаскин-тест» (тест с аллергеном туберкулезным рекомбинантным - «АТР») с целью исключения активной туберкулезной инфекции должны проходить рентгенологическое обследование -компьютерную томографию органов грудной клетки и при отсутствии очевидных рентгенологических признаков туберкулеза легких, им рекомендуют профилактические курсы химиотерапии одним-двумя противотуберкулезными препаратами: изониазид или в сочетании с пиразинамидом или этамбутолом и рифампицином [Федеральные клинические рекомендации по лечению латентно туберкулезной инфекции у детей и подростков. Москва, 2015 г.]. ВОЗ также рекомендует для стран с заболеваемостью туберкулезом (менее 100 на 100 тыс. чел. населения) проводить еще более длительные, до 6-9 месяцев, химиопрофилактические курсы лечения изониазидом пациентов с латентной туберкулезной инфекции, особенно в группах контактных по туберкулезу и у пациентов с ВИЧ-инфекцией [Getahun Н., Matteelli A., Abubakar I., Abdel Aziz М., Baddeley A., Barreira D., Den Boon S. et al. Management of latent Mycobacterium tuberculosis infection: WHO guidelines for low tuberculosis burden countries. Eur. Respir. J. 2015; 46(6): 1563-76]. В связи с этим актуальность разработки иммунологического метода определения признаков активной туберкулезной инфекции, что позволило бы выделить среди детей и подростков с латентной инфекцией группу пациентов высокого риска развития туберкулеза является особенно важной. Прежде всего, речь идет о детях, у которых при компьютерной томографии органов грудной клетки выявляются мягкотканные очаги (1-5 мм) в легочной ткани. Поскольку до сих пор во фтизиатрии нет определенного мнения о характере этих мелких очагов, иммунологические признаки активности туберкулезной инфекции, характерные для пациентов детского возраста с маловыраженными формами туберкулеза, могли бы быть важным критерием для назначения своевременного специфического лечения.

Активная туберкулезная инфекция у детей и подростков, отличается от туберкулеза органов грудной клетки у взрослых чаще всего отсутствием выраженных инфильтративно-деструктивных поражений легочной ткани, отсутствием выделяемой мокроты и, соответственно, низкой частотой выделения возбудителя - микобактерий туберкулеза (МБТ). В связи с этим иммунологические признаки активной туберкулезной инфекции, особенно в этой группе пациентов, рассматриваются в качестве актуальной задачи.

В числе известных и разрабатываемых методов в научной литературе обсуждаются отдельные или комбинированные методы дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции.

Из уровня техники известен способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции путем определения уровня белка IP-10 для, индуцируемом интерфероном гамма [J. Wergerland et al. IP-10 differentiated between active and latent tuberculosis irrespective HIV status and declines during therapy J. of Infection 2015, 70, 381-391]. Исследование было проведено на взрослых пациентах; при этом критерием активности признается очень высокий уровень определяемого белка IP-10 - 2547 пг/мл. Однако, по нашим данным у детей и подростков с активной туберкулезной инфекцией средний уровень антиген-индуцированного белка IP-10 составил 105 пг/мл, тогда как при латентной инфекции - 73,5 пг/мл.

Известен способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у взрослых с помощью количественного анализа индукции фактора некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) в образцах крови после инкубации с антигенами ESAT-6-CFP-10 [Wang F, Hou Н, Xu L, Jane М, Peng J, et al. (2013) Mycobacterium Tuberculosis-Specific TNF-a Is a Potential Biomarker for the Rapid Diagnosis of Active Tuberculosis Disease in Chinese Population. PLoS ONE 8(11): е79431]. По данным китайских авторов у больных туберкулезом определяется существенно более высокий уровень антиген-индуцированного ФНО-альфа, по сравнению с пациентами при латентной туберкулезной инфекции. Чувствительность этого метода - 70% при специфичности - 90%. Однако, как показали проведенные исследования у детей и подростков уровень ФНО-альфа в группе детей с активной туберкулезной инфекцией был, в среднем, 223±28,6 пг\мл, тогда как при латентной инфекции 103,7±10 пг/мл, но эти различия не были статистически значимы; концентрации антиген-индуцированного ФНО-альфа при латентной инфекции были вариабельными от 20 пг/мл до 400 пг/мл. При определенной закономерности результатов этих исследований недостаточная эффективность дифференцирования пациентов с активной и латентной инфекцией не позволяет его использовать для определения признаков активности среди пациентов детско-подросткового возраста.

Известен также молекулярно-биологический метод дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции по критерию экспрессии некоторых генов в клетках мононуклеаров периферической крови [Shih-Wei Lee, Lawrence Shih-Hsin Wu, Guan-Mau Huang, Kai-Yao Huang, Tzong-Yi Lee and Julia Tzu-Ya Weng. Gene expression profiling identifies candidate biomarkers for active and latent tuberculosis. - BMC Bioinformatics 2016, 17]. Способ заключается в определении уровня экспрессии четырех генов: PTRC, ASUN, NEMF и DHX29 в клетках периферической крови был различен у лиц с латентной и активной стадии туберкулеза и у здоровых. Однако, проведенные нами исследования по анализу экспрессии указанных генов в клетках периферической крови пациентов детско-подросткового возраста не подтвердили возможности выбора определенных критериев для дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков.

Из уровня техники также известен способ оценки активности туберкулезной инфекции у детей и подростков, включающий внесение в пробы цельной крови пациента, специфических антигенов: ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6, гибридного белка CFP10-ESAT-6, определение уровня ИФН-γ в пробах через 72 часа после внесения в кровь специфических антигенов, и при значимом увеличении уровня ИФН-γ - положительной реакции на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и отрицательной - отсутствие изменения уровня ИФН-γ - на гибрид CFP10-ESAT-6 диагностируют латентную туберкулезную инфекцию, при положительной на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и гибрид CFP10-ESAT-6 - активную туберкулезную инфекцию, при положительной на ППД-Л и отрицательной одновременно на Rv2660c, ESAT-6, гибрид CFP10-ESAT-6 - поствакцинальную аллергию [RU 2586279, 10.06.2016]. Данный способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции, к сожалению, противоречит широко применяемому в мировой литературе и практике методу определения туберкулезного инфицирования, в том числе латентной инфекции, поскольку в нем утверждается, что при «отрицательной реакции на гибридный белок ESAT-6-CFP10, отсутствии изменений уровня ИФН-γ определяют латентную туберкулезную инфекцию», но именно положительные реакции на указанный гибридный белок являются основанием для определения туберкулезного инфицирования, в том числе при использовании соответствующих методов: кожного тоста с антигеном туберкулезным рекомбинатным (ATP, коммерческое наименование «Диаскинтест», и наборов реагентов"QuantiFeronTBGold" и T-SPOT-TB".

Наиболее близким аналогом к заявляемому является способ иммунологического дифференцирования больных туберкулезом у лиц, ранее контактировавших с больными туберкулезом, которые предположительно имеют латентную форму туберкулезной инфекции по определению в сыворотке крови противотуберкулезных антител и уровню неоптерина в плазме крови [Е.В. Васильева и др. «Сравнительная ценность квантиферонового теста, неоптерина и специфических противотуберкулезных антител для клинико-лабораторной диагностики туберкулеза легких», опубликованная в журнале Клиническая лабораторная диагностика, 2013, №5, стр. 21-26]. исследования специфических антител проводились с помощью тест-системы «ИФА -анти ТУБ», производившейся в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, которая основана на использовании в качестве антигена фильтрата культуры МБТ, т.е. туберкулина. Однако, чувствительность определения антител в этой тест-системе относительно невысока, т.е. у заведомо больных туберкулезом - 54%, а у исследуемых контактных лиц с латентной формой инфекции - только 6%.

Туберкулезная инфекция у детей и подростков в раннем периоде ее активности чрезвычайно мало выражена, т.е. отсутствует выделение МБТ с мокротой, которую в случаях ее выделения, дети заглатывают. Ранние признаки активности туберкулезной инфекции при использовании рентгенологических методов обследования, в том числе компьютерная томография органов грудной клетки, часто имеют мало выраженный характер, например, «определяются мелкие внутрилегочные мягкотканные очаги размером 1-5 мм». Таким образом, существует потребность в разработке достоверных способов определения ранних признаков активности туберкулезной инфекции у детей и подростков при наличии латентной формы этой инфекции.

Техническая проблема решается путем использования комбинации двух тестов: специфического - гуморального, путем определения антител в сыворотке крови к специфическим белкам микобактерий туберкулеза ESAT-6-CFP-10 и относительно неспецифического теста - определения молекулы неоптерина в концентрации не менее 9 наномоль/мл.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом заявляемого изобретения является разработка иммунологического способа определения активности туберкулезной инфекции у детей и подростков с чувствительностью при минимально выраженных ее формах составляет 75,6% при специфичности 76,5%.

Технический результат достигается способом дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков, заключающимся в определении в сыворотке крови пациентов с латентной инфекцией антител, к специфическому рекомбинантному антигену ESAT-6-CFP-10, и определении в плазме крови неоптерина, при положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, определяемых с помощью иммуноферментного анализа с не менее, чем 3-кратным превышением оптической плотности опытного образца по сравнению с контрольным образцом (сыворотка не инфицированного пациента, что определяет индекс активности антител) и неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л делают вывод об активной форме туберкулезной инфекции у детей и подростков. При этом определение антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 проводят в образцах сыворотки крови, а определение неоптерина в образцах плазмы пациента. Для определения антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 сыворотку пациента используют в разведении 1:40, а в качестве контроля используют сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro при использовании набора реагентов QuantiFeron TBGold ("Cellestis").

Предпочтительно в качестве теста, определяющего наличие туберкулезного инфицирования использовать кожный тест или тесты in vitro, определяющие значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма при инкубации образцов крови с антигеном ESAT-6-CFP-10 с помощью наборов реагентов "Quantiferon ТВ gold" или "ТВ SPOT.TB".

Определение специфических антител к специфическому для М. tuberculosis рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, позволяет получать не менее 32% положительных результатов при исследовании сывороток крови у детей и подростков с латентной туберкулезной инфекцией, при 87% положительных результатах у детей и подростков с различными формами активной туберкулезной инфекции, а также количественное определение уровня неоптерина с концентрацией, характерной для пациентов детско-подросткового возраста с установленным туберкулезом, не менее 9 наномоль/л.

Преимущества способа состоят в возможности выявить ранние признаки активной туберкулезной инфекции у детей и подростков (лица до 18 лет включительно (ст. 54 СК РФ)) при отсутствии очевидных рентгенологических признаков туберкулеза, отсутствии выделения микобактерий с мокротой или других очевидных признаков воспаления. При этом используется минимальное количество (1-3 мл) венозной крови. Результаты исследований могут рассматриваться как вероятные предикторы активной туберкулезной инфекции и служить более точным, по сравнению с традиционным, обоснованием для профилактического лечения противотуберкулезными препаратами, которые обладают побочными гепатотоксичными свойствами.

Осуществление изобретения

Проведенные исследования 75 пациентов отделения туберкулеза у детей и подростков ФГБУ «НМИЦ ФПИ» Минздрава России с признаками активной туберкулезной инфекции, в основном, с диагнозом туберкулеза внутригрудных лимфоузлов показали, что у 65 (87,2%) этих пациентов обнаруживались специфические противотуберкулезные антитела к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10.

Повышенный уровень неоптерина в плазме крови, который составлял не менее 9 наномоль/мл у 31 пациента из 41 (75,6%), у которых в момент исследования определялся активный туберкулезный процесс в легких при среднем уровне 15,4±2,6 наномоль/мл.

Проведенные исследования среди 149 пациентов детско-подросткового возраста с наличием латентной туберкулезной инфекции выявили 48 пациентов (32%), у которых отмечалась положительная реакция на присутствие противотуберкулезных антител, которые определяют с помощью заявленного способа к специфическому рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, из которых у 17 из 48 пациентов концентрация неоптерина в образцах плазмы крови при количественном исследовании с помощью иммуноферментного анализа составляла не менее 9 нг/л. В результате клинико-рентгенологического обследования этой группы пациентов с использованием компьютерной томографии органов грудной клетки в 6 случаях был поставлен диагноз «туберкулез внутригрудных лимфоузлов»; в 6 случаях в легочной ткани этих пациентов определялись мягкотканные мелкие (1-5 мм) очаги в легочной ткани и в 5 случаях рентгенологических признаков туберкулеза обнаружено не было. На основании полученных данных можно заключить, что чувствительность иммунологического способа определения активности туберкулезной инфекции у детей и подростков при минимально выраженных ее формах составляет 75,6% при специфичности 70,6%. Однако, в отношении тех случаев, когда рентгенологических признаков не было выявлено, они могут рассматриваться как предикторы, что требует особого наблюдения и повторных исследований.

Осуществление изобретения проводится на основании положительных результатов специфического кожного теста, основанного на использовании рекомбинантного антигенного белка ESAT-6-CFP-10 (Диаскин-тест) или положительных результатов определения индукции интерферона-гамма к этому же специфическому для микобактерий туберкулеза (МБТ) белку с исследованием образцов цельной крови in vitro (наборы реагентов "QuantiFERON TBGold", "Т-SPOT.ТВ"или «Тубинферон» Россия), определении антител в сыворотке крови к приведенным выше антигенам и количественного определения молекулы неоптерина в образцах плазмы в концентрации не менее 9 наномоль/л. Заявляемый способ определения противотуберкулезных антител существенно более специфичен и чувствителен, по сравнению с ранее описанным в работе Е.В. Васильевой и сотрудников [«Клиническая лабораторная диагностика», 2013, №5, стр. 21-26), в которой использовали неспецифический антигенный продукт (фильтрат культуры МБТ)]. Заявленный способ обнаруживает антитела у детей с активной формой туберкулезной инфекции в 87,2% случаев, а при латентной форме в 32,1% случаев.

В цитируемой работе Е.В. Васильевой также описывается определение концентрации молекулы неоптерина у взрослых пациентов - больных туберкулезом легких, у большинства которых в мокроте выделялись микобактерий туберкулеза. Однако, у пациентов детско-подросткового возраста даже при наличии очевидных рентгенологических признаков активной туберкулезной инфекции микобактерий туберкулеза очень редко выделяются с мокротой.

В нашем исследовании пороговым уровнем неоптерина при активной инфекции была принята концентрация в 9 ннаномоль/л. Из 41 пациента детско-подросткового возраста (3-14 лет), у которых в период исследования определялась активная форма туберкулезной инфекции, концентрация неоптерина выше 9 наномоль/л была установлена у 31 пациента (75,6%). Положительный результат определения специфических антител среди пациентов с высоким уровнем неоптерина (не менее 9 наномоль/л) определялся в 82% случаев.

В нашем исследовании были также 149 пациентов, находившихся под амбулаторным наблюдением фтизиатров Московского областного противотуберкулезного диспансера.

Были изучены результаты продукции в цельной крови in vitro ряда антиген-индуцированных цитокинов: интерферона-гамма, белка IP-10 и фактора некроза опухолей альфа при использовании в качестве антигена-индуктора слитного белка ESAT-6-CFP-10, полученного и очищенного от липополисахаридов в нашей лаборатории. Было проведено определение антител сыворотки крови к этому же специфическому слитному белку и уровни продукции в плазме крови острофазных белков: С-реактивного белка, сывороточного амилоида А, а также неоптерина.

Для определения специфических антител рекомбинантный белок ESAT6-CFP-10 (ООО «Мон-А») в концентрации 5 мкг/мл сорбировали в лунках поливинилхлоридного планшета и проводили исследование с помощью традиционного иммуноферментного анализа [«Иммуноферментный анализ», Москва, изд. «Мир»,1988 г. 444 стр. ; М.А. Владимирский, А.А. Приймак, Г.А. Ермолин, В.М. Должанский, «Иммуноферментный твердофазный метод выявления антител к микобактериям для серологической диагностики туберкулеза», Лабораторное дело, 1986 г. №9, стр. 558-561]. Сыворотки исследуемых пациентов исследовали при разведении фосфатно-солевым буферным раствором (2% бычьего сывороточного альбумина, РН -7,2) в соотношении 1:40; в качестве контроля использовали сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro при использовании набора реагентов QuantiFeron TBGold ("Cellestis"). Результаты анализов измеряли по оптической плотности при 490 нм на планшетном фотометре компании БиоРад. Результаты считались положительными при не менее, чем двукратном превышении оптической плотности (ОП) в опытной пробе, по сравнению с контрольным образцом. Определение активной туберкулезной инфекции оценивается при не менее, чем трехкратном превышении ОП в опытной пробе.

Было также проведено изучение уровня неоптерина в неинкубированной плазме крови исследуемых пациентов. Концентрацию неоптерина определяли с помощью набора реагентов для иммуноферментного анализ компании «Gen Way» (Германия). В результате проведенных исследований мы определили пороговый уровень неоптерина 9 наномоль/л, который был принят для детей и подростков в качестве положительного критерия для оценки клеточного иммунного ответа. Для взрослых пороговым уровнем считается концентрация 10 наномоль /л.

Способ реализуется при следующих условиях:

- положительном кожном тесте - реакции на специфический рекомбинантный антиген ESAT-6-CFP-10 («Диаскин-тест»), либо положительном результате ин-витрового теста при использовании наборов "Quantiferon TBgold" или "ТВ SPOT.ТВ", определяющих значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма,

- положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 при не менее, чем 3-х кратном превышении ОП опытной пробы по сравнению с контрольным образцом.

- определении неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л.

Результаты применения ESAT-6-CFP-10 для определения специфических антител у детей и подростков с активной туберкулезной инфекцией были положительными у 87,2% пациентов, а при латентной туберкулезной инфекции положительные результаты наблюдали у 32,1% детей и подростков.

Наиболее дифференцирующим признаком оказалось определение в качестве маркера иммунного ответа неоптерина при концентрации выше 9 наномоль/л, который определяли у 75,6% детей, у которых в период исследования определялась активная форма туберкулеза поступивших для стационарного лечения. Средний уровень неоптерина у пациентов с активной туберкулезной инфекцией - 15,4±2,6 нномоль/л. Частично пролеченные пациенты дают более низкие цифры неоптерина. Gen Way Biotech Inc.

Из 149 пациентов с латентной формой инфекции, который определялся по результатам Диаскин-теста или при анализе антиген-специфической индукции интерферона-гамма у 49 пациентов был отмечен положительный результат определения специфических антител к белку Esat-6-CFP-10, из которых у 17 уровень неоптерина был не менее или более 9 нг/мл.

При анализе данных компьютерной томографии органов грудной клетки у 6 из 17 пациентов этой группы определялись рентгенологические признаки активной инфекции: «туберкулез внутригрудных лимфоузлов», у 6 пациентов определялись - мелкие (1-5 мм) мягкотканные очаги субплеврально или в легочной ткани в 5 случаях данные компьютерной томографии соответствовали норме.

Таким образом, для дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков наиболее эффективной была следующая комбинация признаков:

- положительная кожная реакция на специфический рекомбинантный антиген ESAT-6-CFP-10 («Диаскин-тест»), либо положительный результат ин-витрового теста при использовании наборов "Quantiferon TBgold" или "ТВ spot", определяющих значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма;

- положительный результат определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10

- определение неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л.

Примеры постановки диагноза заявляемым способом.

К. 2007 г.р., подросток женского пола. Положительный кожный тест с рекомбинантным специфическим антигеном («Диаскинтест»), положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма в цельной крови с антигеном ESAT-6-CFP-10 - 151 пг/мл, при пороговом положительном уровне - не менее 14 пг/мл;, положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в три раза превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина в плазме - 26,4 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки определяются мелкие кальцинированные очаги в нижних долях обеих легких. Поставлен диагноз: первичный туберкулезный комплекс.

П. 2002 г.р., подросток муж пола. Положительный кожный тест - Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10 - 26,3 пг/мл, положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции более, чем в два раза превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина в плазме - 15,8 наномоль/л. По результатам компьютерной томографии - туберкулез внутригрудных лимфоузлов в фазе кальцинации.

Г. 2003 г.р., подросток женского пола. Положительный гиперергический кожный тест - Диаскинтест - 22 мм, Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 24,9 пг/мл; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в шесть раз превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина - 18 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки - незначительные изменения в легких - два маленьких участка фиброза 3 мм и 5 мм.

В. 2008 г.р., ребенок женского пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 33,6 пг/мл; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в шесть раз превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 10 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки - мелкие субплевральные очаги.

В. 2006 г. р., по др. муж. пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 128 пг/л; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции, в семь раз превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 11,6 наномоль/л. По результатам компьютерной томографии органов грудной клетки поставлен диагноз: туберкулез внутригрудных лимфоузлов, госпитализирован в Центральный НИИ туберкулеза.

С. 2002 г.р., подр. муж. пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 24,4 пг/л; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции, в три раза превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 14,3 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки определяется мягкотканный очаг 5 мм в 9-м сегменте левого легкого.

А. Подросток мужского пола 2003 г.р. Положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина - 9,9 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. При этом другой патологии, особенно патологии аутоиммунной природы, которая могла бы быть причиной иммунологических признаков, подозрительных на наличие активно туберкулезной инфекции не обнаружено. Вывод: пациент нуждается в проведении химиопрофилактического курса. Химиопрофилактический курс проводили с использованием двух противотуберкулезных препаратов в течение 2-х месяцев. После проведения курса - положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина в плазме крови - 4 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. Вывод: у пациента латентная туберкулезная инфекция. Целесообразно повторить исследование иммунологических показателей, используемых для определения активной туберкулезной инфекции через три месяца.

М. Подросток мужского пола 2006 г.р. Положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина в плазме крови - 4 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. Вывод: у пациента латентная туберкулезная инфекция. Целесообразно повторить исследование иммунологических показателей, используемых для определения активной туберкулезной инфекции через три месяца.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков. Для этого у пациентов при положительном кожном тесте с аллергеном туберкулезным рекомбинатным (АТР) или при положительной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма проводят определение специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 в образцах сыворотки крови и определение неоптерина в образцах плазмы крови пациента. При положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 при не менее, чем троекратном превышении оптической плотности опытного образца по сравнению с контролем в иммуноферментном анализе и уровне неоптерина не менее 9 наномоль/л делают вывод об активной туберкулезной инфекции у детей и подростков. При этом в качестве в качестве контроля используют сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro. Использование данного способа позволяет проводить дифференцирование активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков, определили пороговый уровень неоптерина 9 наномоль/л, который был принят для детей и подростков в качестве положительного критерия для оценки клеточного иммунного ответа. 2 з.п. ф-лы.

1. Способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков, характеризующийся тем, что у пациентов при положительном кожном тесте с аллергеном туберкулезным рекомбинатным (АТР) или при положительной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма, проводят определение специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 в образцах сыворотки крови и определение неоптерина в образцах плазмы крови пациента, при положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 при не менее, чем троекратном превышении оптической плотности опытного образца по сравнению с контролем в иммуноферментном анализе и уровне неоптерина не менее 9 наномоль/л делают вывод об активной туберкулезной инфекции у детей и подростков, при этом в качестве в качестве контроля используют сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве теста, определяющего наличие туберкулезного инфицирования используют кожный тест или тесты in vitro, определяющие значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма при инкубации образцов крови с антигеном ESAT-6-CFP-10 с помощью наборов реагентов "Quantiferon TBgold" или "ТВ SPOT.TB".

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что для определения антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 сыворотку пациента используют в разведении 1:40, а определение реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro проводят с использованием набора реагентов QuantiFeron TBGold ("Cellestis").