КОРМОВАЯ ДОБАВКА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2020 года по МПК A23K20/158 

Родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет Временной заявки на патент США № 62/454311, поданной 3 февраля 2017 года, и испрашивает приоритет Временной заявки на патент США № 62/395449, поданной 16 сентября 2016 года, обе они тем самым включаются в качестве ссылки во всей их полноте.

Уровень техники

Настоящее изобретение в целом относится к кормовым добавкам для животных, более конкретно, к кормовой добавке для животных, которая представляет собой синергическое сочетание ингредиентов, которые улучшают перевариваемость и поглощение жиров и других питательных веществ из корма для животных.

Задача выращивания сельскохозяйственных животных с помощью корма высокого качества при наименьших возможных затратах представляет собой большие проблемы при современном выращивании домашнего скота. С одной стороны, современные породы сельскохозяйственных животных растут быстро и с высокой эффективностью преобразуют корм в мясо, яйца или молоко. С другой стороны, эффективное преобразование требует достаточного снабжения питательными веществами. Увеличение стоимости кормов и доступность альтернативных исходных материалов для кормов заставляют производителей сельскохозяйственных животных использовать переформулированные диеты, которые являются более экономичными, но также более сложными для переваривания сельскохозяйственными животными. Из-за их высокой концентрации энергии, в корм обычно добавляют большие количества жиров и масел для удовлетворения растущих требований в ежедневно портебляемой энергии. Этот корм с высоким содержанием жиров, как правило, представляет проблематичные условия питания для сельскохозяйственных животных. По этой причине, имеется необходимость в кормовых добавках, которые могут улучшить перевариваемость и поглощение жиров и других питательных веществ из корма в современной индустрии выкармливания сельскохозяйственных животных.

Лизолецитины используются в течение многих лет для улучшения перевариваемости и поглощения питательных веществ, в частности, жиров, из корма. Постулируется, что лизолецитины, поступающие как добавки вместе с кормом, вместе с желчными солями, действуют как эмульгатор на первых стадиях пищеварения липидов (Zhang et al., 2011; AT4,1). При увеличении отношения поверхностного к объемному жиру в кишечном тракте, лизолецитины, как считается, повышают общую доступную площадь поверхности для липаз для присоединения к поверхности капель жира и таким образом усиливают гидролиз липидов. В дополнение к этому, в последнее время сделано предположение, что лизолецитины могут участвовать в образовании смешанных мицелл (Jansen, 2015; AT4.2). Таким образом, лизолецитины могут играть критическую роль посредством вытеснения продуктов гидролиза липидов (моноглицеридов и свободных жирных кислот) с поверхности капель, делая возможным продолжение гидролиза липидов. Наконец, лизолецитины, как известно, улучшают поглощение липидов, а возможно, и других питательных веществ (Jansen, 2015; AT4,2). Неизвестно является ли поглощение липидов вторичным эффектом вмешательства лизолецитина в образование мицелл или результатом прямого взаимодействия лизолецитинов с мембраной энтероцита или с белками мембраны энтероцита.

Моноглицериды генерируются в ходе процесса гидролиза липидов у животного (Lairon, 2009; AT4.3). В ходе процесса переваривания жиров и масел, комплекс колипаза-липаза сначала гидролизирует триглицериды в диглицериды и свободные жирные кислоты. На следующей стадии, комплекс колипаза-липаза гидролизирует диглицериды в моноглицериды и свободные жирные кислоты. Затем эти моноглицериды и свободные жирные кислоты организуются в виде смешанных мицелл, которые впоследствии поглощаются энтероцитами тонкого кишечника. Моноглицериды имеют очень широкий диапазон применений. В пищевой промышленности их используют в хлебобулочных изделиях, кондитерских изделиях, маргаринах, соках и молочных продуктах, где они могут функционировать как связывающее соединение, противовспенивающий агент, ароматизирующий агент, стабилизатор, загуститель, смазывающий материал и текстуризатор. В косметической промышленности, моноглицериды используют в различных маслах, мазях и увлажняющих кремах, где они функционируют в качестве усиливающего растекание и эмульгирующего (вода в масле) агента. Другие применения моноглицеридов включают PVC, фармацевтическую и текстильную промышленность.

Использование моноглицеридов в промышленности кормов ограничено. Конкретные моноглицериды, эстерифицированные короткоцепными жирными кислотами (<7 атомов углерода), используют в качестве агента против плесени и антимикробного агента (WO2010/106488; AT4.4). Моноглицериды с большей длиной цепи (>7 атомов углерода) по большей части используют в качестве технологической добавки для физической стабилизации препаратов. Насколько известно авторам, имеется одна коммерчески доступная кормовая добавка, которая содержит конкретный моноглицерид (глицерин моностеарат), и, как сообщается, улучшает переваривание и поглощение питательных веществ у животных (LipidMate; AT4.5). Однако нет доступной литературы относительно режима действия, демонстрируемого этими моноглицеридами, когда их добавляют в корм для увеличения переваривания и поглощения питательных веществ. В дополнение к этому, производитель предлагает высокие уровни введения (80-100 грамм на тонну корма) для достижения этих улучшений, и продукт не содержит лизолецитина и/или глицерина рицинолеата-полиэтиленгликоля.

Синтетический эмульгатор, который, обычно используют в промышленности кормов, представляет собой глицерин рицинолеат- полиэтиленгликоль (E484; Community Register of Feed Additives - EU Reg. No. 1831/2003). Глицерин рицинолеат-полиэтиленгликоль состоит из триглицеридной основной цепи, в которой жирные кислоты этоксилируются в промышленном процессе. В зависимости от условий процесса, степень этоксилирования может изменяться в пределах между 8 и 200 группами этиленоксида. Глицерин рицинолеат-полиэтиленгликоль представляет собой главный компонент этоксилированного касторового масла. Этоксилированное касторовое масло коммерциализуется как кормовая добавка для увеличения переваривания питательных веществ животными. Производители предлагают высокие уровни введения (200-500 грамм на тонну корма) для достижения этих улучшений. Постулируется, что эти синтетические эмульгаторы также действуют как эмульгатор на первых стадиях переваривания липидов, увеличивая отношение поверхностного и объемного жира в кишечном тракте (Excential Energy Plus; AT4.6). Однако имеется компромисс между увеличением эмульгирования жира и стерическим затруднением эмульгирующих компонентов, приклеивающихся к поверхности раздела капель липида. Если к поверхности раздела капель липида приклеиваются слишком много синтетических эмульгаторов, относительно большая молекула глицерина рицинолеата-полиэтиленгликоля может физически затруднять присоединение комплекса колипаза-липаза к границе раздела капли.

Сущность изобретения

Обнаружена формула продукта, состоящего из (1) лизолецитина или соединений, богатых очищенными лизофосфолипидами, (2) моноглицеридов и (3) синтетического эмульгатора или смеси синтетических эмульгаторов. Продукт является полезным в качестве кормовой добавки, поскольку он улучшает перевариваемость, поглощение и усвояемость питательных веществ. Кроме того, формула имеет несколько положительных физиологических эффектов, которые превышают выгоды от одного только лизолецитина, моноглицеридов или синтетических эмульгаторов.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 представляет собой график аккумуляции свободных жирных кислот в ходе гидролиза in vitro животного жира (Контроль), животного жира с лизолецитином, животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A) и животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B); экспериментальную обработку осуществляют в трех экземплярах; средние концентрации липидов (мг/мл) приводятся как функции времени (мин), при этом величины ошибки указывают величины стандартного отклонения.

Фиг.2 представляет собой диаграмму скорости высвобождения свободных жирных кислот, выраженной как наблюдаемая константа скорости (k) для гидролиза in vitro животного жира (Контроль), животного жира с лизолецитином, животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A) и животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B); данные представляют собой средние значение для трех наблюдений на обработку, величины ошибки показывают величины стандартного отклонения.

Фиг.3 представляет собой диаграмму поглощения моноглицеридов и свободных жирных кислот, генерируемых в ходе гидролиза in vitro животного жира (Контроль), животного жира с лизолецитином, животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A) и животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B) посредством монослоев дифференцированных Caco-2 и выраженных как процент нанесенных моноглицеридов и свободных жирных кислот; данные представляют собой средние значения для трех наблюдений на обработку, величины ошибки показывают величины стандартного отклонения.

Описание изобретения

Лизолецитины получают посредством ферментативного гидролиза лецитина. Лизолецитины, как правило, имеют общее количество лизофосфолипидов в пределах между 45 и 180 г/кг, из них 20-80 г/кг лизофосфатидилхолина, 10-40 г/кг лизофосфатидилэтаноламина, 10-40 г/кг лизофосфатидилинозитола и 5-20 г/кг лизофосфатидной кислоты (WP-08-00120; AT4.8). Нормы введения лизолецитина в корм для животных, как правило, находятся в пределах от 50 до 250 грамм на тонну корма, хотя можно использовать и другие нормы введения в зависимости от условий питания и видов животных. Для достижения желаемых эффектов нормы введения кормовых добавок по отношению к этоксилированному касторовому маслу, как правило, находятся в пределах от 200 до 500 грамм на тонну корма для животных. Подобным же образом, предлагается норма введения в пределах между 100 и 150 грамм на тонну корма для животных для кормовой добавки по отношению к моноглицеридам.

Настоящее изобретение описывает, что обычная норма введения лизолецитина, например, 150 грамм на тонну корма, может дополняться малыми количествами моноглицеридов, например, 25 граммов на тонну, и синтетических эмульгаторов, например, 2,5 грамма на тонну, для дополнительного усиления улучшений, получаемых за счет лизолецитинов. Уровни введения моноглицеридов и синтетического эмульгатора по настоящему изобретению, как правило, намного ниже обычно используемых норм введения. Тем не менее, комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора дает в результате неожиданную и синергическую реакцию, обеспечивая положительные физиологические воздействия, которые превышают выгоды от только одного лишь лизолецитина, моноглицеридов или синтетических эмульгаторов.

Из-за неожиданной природы синергических явлений, точный механизм действия смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора на момент изобретения неизвестен. Можно предположить, что в дополнение к известному воздействию лизофосфолипидов на эмульгирование липидов, малые количества соединений синтетического эмульгатора дополнительно оптимизируют эмульгирование липидов в корме.

Кроме того, превосходные эмульгирующие свойства синтетических эмульгаторов могут улучшать высвобождение липидов из матрикса корма и это может улучшать степень и долю покрытия липидов в корме лизофосфолипидами из добавки.

Изменения условий окружающей среды (например, высвобождения желчных солей из желчного пузыря), которые сопровождают поступление капель липидов в двенадцатиперстную кишку, инициируют смещение лизофосфолипидов с поверхности раздела капли в направлении формирования смешанных мицелл. Присутствие малых количеств моноглицеридов может дополнительно усиливать это смещение для формирования ʺначальныхʺ мицелл, поскольку моноглицериды и жирные кислоты необходимы, в дополнение к лизофосфолипидам и желчным солям. Малые количества свободных жирных кислот, как правило, уже генерируются посредством гидролиза триглицеридов в диглицериды и свободные жирные кислоты в ходе предуоденальной фазы переваривания липидов. Однако моноглицериды формируются только посредством гидролиза диглицеридов, который, как правило, происходит в тонком кишечнике животного. Посредством синергического действия лизофосфолипидов и моноглицеридов в ходе формирования начальных мицелл, моноглицериды, таким образом, могут играть критическую роль посредством вытеснения продуктов гидролиза с поверхности раздела и предоставления возможности для продолжения гидролиза липидов.

Другое взаимодействие между лизофосфолипидами из лизолецитина и моноглицеридами можно увидеть на поверхности раздела капель, когда желчные соли поступают на поверхность раздела капли. Наблюдается непосредственное взаимодействие между полярной головной группой поверхностно-активных соединений, таких как (лизо)фосфолипиды и моноглицериды, и солями желчных кислот, (Dreher et al., 1967; AT4.9). Это взаимодействие дает возможность гидрофобной лицевой части желчных солей вращаться и вступать в более тесный контакт с поверхностью раздела. Объединенное взаимодействие лизофосфолипидов и моноглицеридов с желчными солями может улучшить присоединение желчной соли к капле липида, что, в свою очередь, повышает скорость гидролиза.

Наконец, как описано для лизофосфолипидов, поглощение липидов и, возможно, других питательных веществ можно дополнительно улучшить как вторичное воздействие взаимного влияния моноглицеридов и лизофосфолипидов и образования мицелл.

Считая, что количество липидов в различных кормах может изменяться до большой степени, и считая, что норма введения соединений, нацеленных на улучшение и поглощение питательных веществ, как правило, связана с количеством липидов в корме, настоящее изобретение относится к применению комбинации лизолецитина при норме введения в пределах между 15 и 1500 грамм на тонну, моноглицеридов при норме введения в пределах между 2,5 и 250 грамм на тонну и синтетического эмульгатора при норме введения от 0,25 до 25 грамм на тонну корма.

Лизолецитины, моноглицериды и синтетические эмульгаторы могут применяться отдельно с порцией корма, объединяться в виде единой предварительной смеси или в виде препарата предварительных смесей. Продукты, либо по отдельности, либо в комбинации, могут применяться в виде жидкости или использоваться вместе с соответствующим носителем (например, с диоксидом кремния или фракцией растительных волокон) и применяться в виде сухих продуктов.

Лизофосфолипиды представляют собой активные компоненты лизолецитина. Следовательно, по настоящему изобретению, вместо лизолецитина, лизофосфолипиды также могут добавляться в предварительную смесь или корм как очищенные или концентрированные компоненты.

Моноглицериды состоят из глицериновой группы, которая эстерифицирована в положении sn-1, sn-2 или sn-3 жирной кислотой. Настоящее изобретение относится к моноглицеридам или смесям моноглицеридов, содержащим жирные кислоты с длиной цепи в пределах 1-24 атомов углерода, либо без двойных связей, либо с одной или несколькими двойными связями. Относительно количества двойных связей в моноглицеридах, моноглицериды, рассматриваемые в настоящем изобретении, включают соединения с йодным числом в пределах между 0 и 200 г I₂/100 г.

Синтетические эмульгаторы, рассматриваемые в настоящем изобретении, конкретно относятся к глицерину рицинолеату- полиэтиленгликолю (E484), содержащему от 8 до 200 групп этиленоксида. Настоящее изобретение относится в расширенном смысле ко всем эмульгаторам, включая, но, не ограничиваясь этим, эмульгаторы, как одобрено в Community Register of Feed Additives (EU Reg. No. 1831/2003), таким как сложные эфиры полиэтиленгликоля и жирных кислот из соевого масла (E487) и сорбитан монолаурат (E493). Относительно молекулярной структуры эмульгаторов, эмульгаторы, рассматриваемые в настоящем изобретении, включают эмульгаторы с гидрофильно-липофильным балансом (значением HLB) в пределах между 2 и 20.

Пример 1: Комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения гидролиза липидов in vitro .

В исследовательском подразделении Kemin Europa NV (Herentals, Belgium) модель гидролиза липидов in vitro используют для оценки влияния смесей лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора на образцы гидролиза липидов in vitro.

Материалы и методы

Животный жир, лизолецитин, моноглицериды и синтетический эмульгатор. Образец животного жира, предназначенный для использования в корме для животных, получают от Institute for Agricultural and Fisheries Research (ILVO, Merelbeke, Belgium). Лизолецитин (гидролизованный соевый лецитин с общим содержанием лизофосфолипида 124,9 г/кг), глицерин моноолеат (жирная кислота с 18 атомами углерода и одной двойной связью; йодное число 75,8 г I₂/100 г), глицерин моностеарат (жирная кислота с 18 атомами углерода без двойной связи; йодное число 0,6 г I₂/100 г) и синтетический эмульгатор (этоксилированное касторовое масло, содержащее в среднем 40 групп этиленоксида и со значением HLB 12,5) используют для приготовления смесей.

Смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Две смеси, указанные как Смесь A и Смесь B (Таблица 1), приготавливают посредством аккуратного взвешивания всех компонентов вместе. Затем Смесь A перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут с использованием магнитной мешалки. Из-за различий в вязкости моноглицеридов, Смесь B сначала нагревают до 60°C, а затем перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут.

Таблица 1 - Обзор содержания в Смеси A и Смеси B

Компонент Смесь A (г) Смесь B (г) Лизолецитин 84,5 84,5 Глицерин моноолеат 14,1 / Глицерин моностеарат / 14,1 Синтетический эмульгатор 1,4 1,4

Экспериментальная обработка. 1,20 г лизолецитина, 1,42 г Смеси A и 1,42 г Смеси B, каждой, диспергируют в 100,00 г животного жира для приготовления исходных дисперсий жира. Таким образом, конечные содержания лизолецитина для трех экспериментальных обработок идентичны (Таблица 2). Кроме того, обработки Смеси A и Смеси B различаются только типом введенного моноглицерида, (Таблица 1 и Таблица 2).

Таблица 2 - Обзор исходных дисперсий жира для оценки гидролиза липидов

Определение обработки Активный компонент (г) Животный жир (г) Лизолецитин Моноглицерид Синтетический эмульгатор Контроль / / / 100,00 Лизолецитин 1,20 / / 100,00 Смесь A 1,20 0,20 глицерина моноолеата 0,02 100,00 Смесь B 1,20 0,20 глицерина моностеарата 0,02 100,00

Модель гидролиза липидов. Модель гидролиза липидов, ранее описанная Jansen et al. (2015), используют для оценки воздействия компонентов на гидролиз липидов. Кишечную текучую среду, моделирующую голодное состояние, (FaSSIF), приготавливают посредством добавления 2,24 г порошка FaSSIF (Biorelevant.com Ltd, Croydon, United Kingdom) к 1 л фосфатного буфера (35 мМ, pH 6,5), содержащего 106 мМ NaCl. Аликвоты 0,25 г каждой из соответствующих исходных обработок жира (Таблица 2) и 14,75 мл FaSSIF добавляют в 50-мл центрифужные пробирки. Содержание каждой пробирки перемешивают в течение 30 сек с помощью высокосдвигового смесителя (24000 об/мин; IKA ULTRA-TURRAX T18, Staufen, Germany). Затем в каждую пробирку добавляют 24 мг панкреатина (P7545, Sigma Aldrich), и их инкубируют в течение двух часов при 40°C при встряхивании (250 об/мин). Конечное содержание панкреатических гидролизатов составляет 106 мМ NaCl, 1,6 г/л панкреатина, 1,6 г/л желчных солей и 16,7 г/л животного жира. На 0, 15, 30, 60, 90 и 120 мин инкубирования, 0,5-мл образец каждого панкреатического гидролизата отбирают и разбавляют в 9,5 мл тетрагидрофурана (THF, качество для ВЭЖХ, VWR International, Leuven, Belgium) для дезактивации ферментов и приготавливают соответствующее разбавление для анализа липидов. Каждое переваривание осуществляют по три раза. В конце инкубирования, образцы гидролиза для контрольной обработки, обработки со Смесью A и обработки со Смесью B погружают в жидкий азот и хранят при -80°C (смотри Пример 2).

Анализы липидов. В каждом образце, полученном в ходе переваривания липидов in vitro, степень гидролиза липидов анализируют с помощью ВЭЖХ. Свободные жирные кислоты определяют с помощью гель-проникающей хроматографии (колонка PL 1110-6520, 5 мкм 100A 300×7,5 мм, Agilent Technologies, Diegem, Belgium) с помощью испарительного детектора рассеяния света (ELSD 85, VWR International). THF используют в качестве подвижной фазы при скорости потока 0,5 мл/мин.

Вычисления и статистические анализы. Следующую далее кинетическую модель первого порядка, используемую ранее Jansen et al. (2015) для анализа данных по перевариваемости, применяют к данным, полученным для высвобождения свободных жирных кислот в ходе переваривания in vitro:

где k (мин^-1) представляет собой наблюдаемую константу скорости для высвобождения свободной жирной кислоты, C_t представляет собой количество (мг/мл) свободных жирных кислот, высвобождаемых в данный момент времени переваривания t (мин), и C_max представляет собой максимальное количество (мг/мл) высвобожденных свободных жирных кислот. Для определения наблюдаемой константы скорости (k), строят график ln ((C_max - C_t)/C_max) как функции t.

Наблюдаемые константы скорости для высвобождения свободной жирной кислоты подвергают анализу разброса (ANOVA). ANOVA для экспериментальных обработок осуществляют с помощью программного обеспечения STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), и средние значения разделяются с помощью процедуры наименьших значимых различий (LSD). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Гидролиз липидов. Аккумуляция свободных жирных кислот в ходе гидролиза in vitro животного жира, животного жира с 1,2% лизолецитина, животного жира с 2% лизолецитина, животного жира со Смесью A и животного жира со Смесью B показана на Фиг.1. В течение всего периода инкубирования 120 минут, количества свободных жирных кислот, аккумулированных как в Смеси A, так и в Смеси B заметно выше, чем для одного только животного жира и животного жира с лизолецитином.

Наблюдаемые константы скорости первого порядка для высвобождения свободных жирных кислот (k) составляют 10,0×10^-3 мин^-1, 14,12×10^-3 мин^-1, 15,06×10^-3 мин^-1 и 15,84×10^-3 мин^-1 для гидролиза in vitro животного жира (контроль), животного жира с лизолецитином, животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A) и животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B), соответственно. Сравнение наблюдаемых констант скорости первого порядка для аккумулирования свободных жирных кислот для каждой обработки представлено на Фиг.2.

Добавление лизолецитина, добавление Смеси A и добавление Смеси B оказывает значимое (P<0,05) воздействие на скорость высвобождения свободной жирной кислоты. Добавление лизолецитина повышает скорость высвобождения свободной жирной кислоты на 41%. Даже если добавляют одинаковые количества лизолецитина, Смесь A и Смесь B более успешно повышают скорость высвобождения свободной жирной кислоты. Добавление Смеси A и Смеси B повышает скорость высвобождения свободной жирной кислоты на 50% и 58%, соответственно.

Пример 2: Комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения поглощения липидов in vitro .

В научном подразделении Kemin Europa NV (Herentals, Belgium) разрабатывают модель на основе культуры клеток для оценки воздействия различных соединений на поглощение липидов in vitro. Для оценки влияния смесей лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора на поглощение липидов in vitro образцы для гидролиза (смотри Пример 1) наносят на монослои дифференцированных Caco-2.

Материалы и методы

Смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Смесь лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A, Таблица 1) и смесь лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B, Таблица 1) оценивают в этом эксперименте (смотри Пример 1).

Экспериментальные обработки. Образцы для гидролиза, полученные в конце гидролиза животного жира in vitro (Контроль), животного жира со Смесью A и животного жира со Смесью B (смотри Пример 1), погружают в жидкий азот и хранят при -80°C до экспериментов с поглощением.

Культура клеток. Клетки аденокарциномы ободочной и толстой кишки человека (Caco-2) получают из European Collection of Cell Cultures (Public Health England, Porton Down, Salisbury, UK). Исходный бульон с клетками Caco-2 используют между проходами 54 и 60. Клетки культивируют в среде Игла, модифицированной Дульбекко, дополненной 10% термически дезактивированной фетальной сыворотки теленка (Hyclone, Thermo scientific, Leuven, Belgium), 1% неэссенциальных аминокислот, 100 ед./мл пенициллина и 100 ед./мл стрептомицина. Клетки поддерживают при 37°C в увлажненной атмосфере с 5% CO₂ и пересевают обычным образом. Если не указано иного, среды для культивирования клеток и добавки поставляются Westburg (Leusden, The Netherlands).

Модель поглощения липидов. Клетки Caco-2 высевают на покрытых коллагеном вставках Transwell-COL (1,12 см², размер пор 0,4 мкм, Corning Costar Corporation, Cambridge, MA) в 24-луночных планшетах при плотности 2,5×10⁵ клеток на вставку и инкубируют в течение 21 дня, давая возможность клеткам для дифференцирования. В ходе инкубирования, среду (апикальную и базальную) заменяют три раза в неделю, и отслеживают трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER) (Millicell-ERS, Millipore, Overijse, Belgium). Затем различные образцы для гидролиза, полученные с помощью модели гидролиза липидов (Пример 1), разбавляют 25-кратно в FaSSIF и наносят на апикальную сторону монослоя. Одновременно, минимальная эссенциальная среда Игла (EMEM) с 5% термически дезактивированной фетальной сыворотки теленка, 2% L-глутамина и 1% не-эссенциальных аминокислот, наносится на базальную сторону монослоя. В начале и через 60 минут инкубирования, образец апикальной текучей среды отбирают и разбавляют двукратно в THF, и подвергают анализу липидов. Каждый эксперимент по поглощению осуществляют по три раза.

Анализы липидов. В каждом образце, полученном в ходе поглощения липидов in vitro, количество моноглицеридов и свободных жирных кислот анализируют с помощью ВЭЖХ. Моноглицериды и свободные жирные кислоты определяют с помощью гель-проникающей хроматографии (колонка PL 1110-6520, 5 мкм 100A 300 × 7,5 мм, Agilent Technologies, Diegem, Belgium) с помощью испарительного детектора рассеяния света (ELSD 85, VWR International). THF используют в качестве подвижной фазы при скорости потока 0,5 мл/мин.

Вычисления и статистические анализы. Поглощение моноглицеридов (%) в каждой лунке вычисляют следующим образом:

где MG₀ и MG₆₀ представляют собой соответствующее содержание моноглицеридов (мг/мл) до и после 60 минут инкубирования. Соответственно, поглощение свободных жирных кислот (%) вычисляют по соответствующим содержаниям свободных жирных кислот.

Величины поглощения моноглицеридов и свободных жирных кислот подвергают анализу разброса (ANOVA). ANOVA экспериментальных обработок осуществляют с помощью программного обеспечения STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), и средние значения разделяются с помощью процедуры наименьших значимых различий (LSD). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Поглощение липидов. Поглощение моноглицеридов и свободных жирных кислот, генерируемых в ходе гидролиза животного жира in vitro (контроль), животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моноолеата и синтетического эмульгатора (Смесь A) и животного жира со смесью лизолецитина, глицерина моностеарата и синтетического эмульгатора (Смесь B) представлено на Фиг.3. Поглощение моноглицеридов значительно выше (P<0,01) в Смеси A и Смеси B (35,0% и 40,6%, соответственно), чем в Контроле (14,5%). Подобным же образом, поглощение свободных жирных кислот значительно выше (P<0,05) в Смеси A и Смеси B (23,5% и 28,7%, соответственно), чем в Контроле (13,3%).

Следовательно, Смесь A и Смесь B больше, чем в два раза (а в случае Смеси B, почти в три раза) повышают поглощение моноглицеридов. В дополнение к этому, Смесь A и Смесь B повышают поглощение свободных жирных кислот более чем на 75%.

Пример 3: Сочетание лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения переваривания и поглощения питательных веществ in vivo .

Исследование рабочих характеристик с помощью бройлеров, заказанное Kemin Europa NV, осуществляют от октября 2015 года до 9 декабря 2015 года на экспериментальном птицеперерабатывающем предприятии на экспериментальной станции факультета наук о животных и биотехнологии, который принадлежит Banat's University of Agricultural Science and Veterinary Medicine „King Michael I of Romaniaʺ в Тимишоара. Задача представленных исследований заключалась в оценке характеристик птицы, которую кормят базовой диетой, базовой диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией, и птицы, которую кормят диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией и с добавлением двух различных смесей лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Одновременно, это исследование используют для оценки влияния смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора на характеристики массы тушки птиц.

Материалы и методы

Смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Лизолецитин (гидролизованный соевый лецитин с общим содержанием лизофосфолипида 124,9 г/кг), глицерин моноолеат (жирная кислота с 18 атомами углерода и одной двойной связью; йодное число 75,8 г I₂/100 г), глицерин моностеарат (жирная кислота с 18 атомами углерода без двойной связи; йодное число 0,6 г I₂/100 г) и синтетический эмульгатор (этоксилированное касторовое масло, содержащее в среднем 40 групп этиленоксида и имеющее значение HLB 12,5) используют для приготовления двух смесей, определенных как Смесь A и Смесь B (Таблица 3), их приготавливают посредством сначала точного взвешивания лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора вместе. Затем, жидкие смеси нагревают до 60°C и перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут перед тем, как их наносят на сухой носитель (Таблица 3).

Таблица 3 - Обзор экспериментальных кормовых добавок

Смесь Активный компонент (г) Носитель (г) Лизолецитин Моноглицерид Синтетический эмульгатор Смесь A 300 50 глицерина моноолеата 5 645 Смесь B 300 50 глицерина моностеарата 5 645

Диеты и диетические обработки. Диеты приготавливают с помощью кукурузы как главной зерновой составляющей и с соевой мукой в качестве главного источника белка. Приготавливают две базовых диеты: базовую диету, удовлетворяющую всем диетическим требованиям (T1; положительный контроль), и базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией (T2; отрицательный контроль; на 60 ккал/кг ниже по метаболизируемой энергии в стартерном комбикорме и на 80 ккал/кг ниже по метаболизируемой энергии в ростовом рационе и заключительном рационе). Общие композиции базовых диет стартерного комбикорма (0-14 дней), ростового рациона (15-35 дней) и заключительного рациона (35-42 дней) представлены в Таблице 4. Все диеты также содержат коммерческую смесь ферментов с фитазой (KEMZYME^® Plus P Dry 500 г/тонна, Kemin Europa NV, Herentals, Belgium).

Для базовой диеты с более низкой метаболизируемой энергией, сначала приготавливают одну загрузку корма (как для стартерного комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона), так что количественный состав экспериментальных диет является совершенно одинаковым для обработок T2, T3 и T4 (Таблица 5). Затем каждую из базовых диет с более низкой метаболизируемой энергией разделяют на равные загрузки и последовательно перемешивают в небольшом смесителе с различными премиксами для получения диетических обработок: T2, отрицательного контроля; T3, отрицательного контроля с 500 м.д. Смеси A кроме того; T4, отрицательного контроля с 500 м.д. Смеси B, кроме того.

Таблица 4 - Ингредиенты и питательная композиция экспериментальных диет стартерного комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона.

Объект (г/кг, если не отмечено иного) Базовая диета Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион Питательное вещество Кукуруза 360,4 382,1 405,4 360,4 390,5 416,2 Соевая мука (44% CP) 385,0 331,0 295,5 384,0 334,7 295,5 Пшеница 150,0 150,0 150,0 150,0 150,0 150,0 Лярд 45,0 57,0 65,0 37,0 43,0 51,4 Мука из жмыха семян подсолнечника
(34% CP) 20,0 44,0 50,0 20,0 33,0 41,0 Известняк 13,5 12,1 12,0 13,5 13,0 12,0 Пшеничные отруби 0,0 0,0 0,0 9,0 12,0 11,8 Монокальций фосфат 8,0 7,5 7,0 8,0 7,5 7,0 Витаминный и минеральный премикс 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 Лизин HCl 3,8 3,2 2,8 3,8 3,2 2,8 Метионин 3,4 2,8 2,0 3,4 2,8 2,0 NaHCO₃ 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 NaCl 1,9 1,9 2,0 1,9 1,9 2,0 Треонин 1,5 0,9 0,8 1,5 0,9 0,8 KEMZYME® Plus P Dry 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Вычисленное содержание питательных веществ Сырой белок 221,2 205,5 192,8 225,2 106,3 192,8 AMEn (ккал/кг) 3,063 3,109 3,143 3,005 3,027 3,064

CP: Сырой белок; AMEn: наблюдаемая метаболизируемая энергия

Таблица 5 - Обзор диетических обработок

Обработка Диета Кормовая добавка T1 Положительный контроль Базовая диета / T2 Отрицательный контроль Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией / T3 Смесь A Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Смеси A T4 Смесь B Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Смеси B

Птицы и их содержание. Исследование характеристик бройлеров осуществляют в Banat's University of Agricultural Science and Veterinary Medicine (Timişoara, Romania). Птицы содержатся в экспериментальной птицефабрике в 36 загонах с настилом каждый с доступной поверхностью 800 см². В целом 288 бройлеров - самцов в однодневном возрасте породы Ross 308 содержат по восемь птиц в загоне. Каждую диетическую обработку повторяют девять раз. Репликаты (загоны) располагают для обработок с однородным распределением обработок внутри помещения. Непосредственно после прибытия, птиц осматривает ветеринар ответственный за здоровье животных и выбирает по массе и распределяет для обработки для достижения максимальной возможной однородности в каждой группе и минимальных различий между всеми исследуемыми группами. Динамическая система вентиляции и нагрева обеспечивает оптимальную температуру и вентиляцию птицефабрики. В ходе всего периода исследований используют схему освещения из 23 часов света и 1 часа темноты. Корм подается ad libitum с помощью кормушек для корма (по 1 на загон). Птиц кормят мешанками с помощью трехфазной системы кормления (стартерный комбикорм, ростовой рацион и заключительный рацион). Питьевой водой снабжают ad libitum с помощью внутренней сети системы водоснабжения. Птиц кормят согласно рекомендациям 526/2007 CE. Дважды в день, животных и птицефабрику инспектируют на общее состояние здоровья, постоянство подачи корма и воды, а также относительно температуры и вентиляции, мертвых птиц, и неожиданных событий.

Измерения и регистрация. Для определения параметров характеристик, среднюю массу тела (ABW) регистрируют в каждом загоне в начале и через 14 дней, и потребление корма регистрируют между 0 и 14 днями. Ежедневную смертность и выбракованных животных регистрируют в каждом загоне.

В конце периода откармливания (в возрасте 42 дней), забивают по два цыпленка на каждый загон от обработок T1, T2 и T3 (положительный контроль, отрицательный контроль и Смесь A, соответственно). Сначала регистрируют живую массу птиц. Затем птиц перерабатывают согласно стандартным процедурам первичной переработки и регистрируют массу тушки в целом (после потрошения), грудки (с костью) и брюшного слоя жира.

Вычисления и статистические анализы. Среднее ежедневное увеличение массы (ADG) и отношение преобразования корма (FCR) вычисляют для 0-14 дней (период стартерного комбикорма). ADG (г/птица/день) вычисляют посредством вычитания средней массы тела для загона в начале периода измерений (в день 0) из средней массы тела в конце этого периода измерений (в день 14) и деления этой величины на количество дней в этом периоде измерения (14 дней). FCR вычисляют посредством деления среднего потребления корма (г/птица/день) для этого периода на ADG (г/птица/день) этого периода. Выход тушки, выход мяса грудки и содержание слоя брюшного жира соответственно вычисляют посредством деления массы тушки, грудки и слоя брюшного жира на живую массу птицы.

Данные характеристик (ABW, ADG, FCR), выход тушки, выход мяса грудки и содержания слоя брюшного жира подвергают анализу разброса (ANOVA). ANOVA экспериментальных обработок осуществляют с помощью программного обеспечения STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), и средние значения разделяются с помощью процедуры наименьших значимых различий (LSD). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Характеристики. ABW, ADG и FCR корма для птиц, диеты положительного контроля, диеты отрицательного контроля, диеты со Смесью A или диеты со Смесью B диета представлены в Таблице 6. ABW и ADG значительно выше для птиц, которых кормят диетой положительного контроля со Смесью A или Смесью B, чем для тех, которых кормят диетой отрицательного контроля. Добавление Смеси A или B может повысить ADG на 1,3 и 1,5 г/птица/день, соответственно. Кроме того, ABW и ADG значительно выше (16 г/птица и 1,1 г/птица/день, соответственно) для птиц, которых кормят диетой со Смесью B, чем для тех, которых кормят диетой положительного контроля. FCR значительно ниже для птиц, которых кормят диетой со Смесью A или Смесью B чем для птиц, которых кормят диетой отрицательного контроля. Добавление Смеси A или B может уменьшить FCR на 7 и 8 пунктов, соответственно. Следовательно, благодаря лучшему перевариванию и поглощению питательных веществ, птицы, которых кормят диетой, дополняемой смесь лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора могут восполнять дефицит энергии 60 ккал/кг на этой диете.

Таблица 6 - Средняя масса тела, среднее ежедневное увеличение массы и отношение преобразования корма

Обработка Средняя масса тела Среднее ежедневное увеличение массы Отношение преобразования корма (г/птица) (г/птица/день) T1 Положительный контроль 402^bc 26,1^bc 1,22^ab T2 Отрицательный контроль 397^c 25,7^c 1,26^b T3 Смесь A 415^ab 27,0^ab 1,19^a T4 Смесь B 418^a 27,2^a 1,18^a

^a-c Значения в колонках с различными верхними индексами статистически значимо различны (P<0,05)

Выход тушки, выход мяса грудки и слой брюшного жира. Выход тушки, выход мяса грудки и содержание слоя брюшного жира птиц, которых кормят диетой положительного контроля, диетой отрицательного контроля или диетой со Смесью A представлены в Таблице 7. Выход тушки и выход мяса грудки значительно выше у птиц, которых кормят диетой положительного контроля или диетой со Смесью A чем у птиц, которых кормят диетой отрицательного контроля. Кроме того, содержание слоя брюшного жира у птиц, которых кормят диетой со Смесью A значительно ниже, чем у птиц, которых кормят диетой положительного или отрицательного контроля. Последнее показывает, что добавление смеси лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора дает в результате лучшее использование поглощаемых питательных веществ для получения мяса.

Таблица 7 - Выход тушки (%), выход мяса грудки (%) и содержание слоя брюшного жира (%)

Обработка Выход тушки Выход мяса грудки Содержание слоя брюшного жира T1 Положительный контроль 72,8^a 28,9^a 1,07^b T2 Отрицательный контроль 71,6^b 27,6^b 1,19^c T3 Смесь A 72,6^a 28,9^a 0,91^a

a-c Значения в колонках с различными верхними индексами статистически значимо различны (P<0,05)

Пример 4: Комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения характеристик in vivo , переваривания и поглощения питательных веществ.

Исследование характеристик и перевариваемости питательных веществ у бройлеров осуществляют на экспериментальной птицефабрике Laboratory of Animal Husbandry, которая принадлежит Faculty of Veterinary Medicine of Aristotle University of Thessaloniki. Целью настоящего исследования является оценка характеристик и перевариваемости питательных веществ у птиц, которых кормят либо базовой диетой, удовлетворяющей всем диетическим требованиям, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией и дополняемой лизолецитином, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией и дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора.

Материалы и методы

Лизолецитин и смесь лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Лизолецитин (гидролизованный соевый лецитин), глицерин моноолеат (жирная кислота с 18 атомами углерода и одной двойной связью; йодное число 75,8 г I₂/100 г) и синтетический эмульгатор (этоксилированное касторовое масло, содержащее в среднем 40 групп этиленоксида и имеющее значение HLB 12,5) используют для приготовления двух продуктов для обработки, обозначаемых далее как сухой лизолецитин и сухая Смесь (Таблица 8). Для приготовления сухой Смеси, сначала приготавливают жидкую предварительную смесь. Для этого, лизолецитин, моноглицериды и синтетический эмульгатор сначала точно взвешивают вместе, нагревают до 60°C и перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут. Затем лизолецитин или предварительную смесь наносят на сухой носитель (Таблица 8) с получением соответствующих конечных продуктов для обработки (сухого лизолецитина и сухой Смеси, соответственно).

Таблица 8 - Обзор экспериментальных кормовых добавок

Продукт для обработки Активный компонент (г) Носитель (г) Лизолецитин Моноглицерид Синтетический эмульгатор Сухой лизолецитин 500 / / 500 Сухая смесь 300 50 5 645

Диеты и диетические обработки. Диеты приготавливают с помощью пшеницы и кукурузы в качестве главных зерновых культур и с соевой мукой в качестве главного источника белка. Приготавливают две базовых диеты: базовую диету, удовлетворяющую всем диетическим требованиям (T1; положительный контроль) и базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией (приблизительно 80 ккал/кг с более низкой метаболизируемой энергией). Общие композиции базовых диет стартерного комбикорма (0-14 дней), ростового рациона (15-35 дней) и заключительного рациона (35-42 дней) представлены в Таблице 9. Все диеты также содержат коммерческую смесь ферментов с фитазой (KEMZYME^® Plus P Dry 500 г/тонна, Kemin Europa NV, Herentals, Belgium) и диоксид титана (TiO₂, 3 г на кг корма) в качестве неперевариваемого маркера для эксперимента по перевариваемости.

Для базовой диеты с более низкой метаболизируемой энергией, сначала приготавливают одну загрузку корма (как для стартерного комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона) так, что количественный состав экспериментальных диет является совершенно одинаковым для обработки T2 и T3 (Таблица 10). Затем, базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией разделяют на равные загрузки и последовательно перемешивают в небольшом смесителе с различными премиксами для получения диетических обработок T2; отрицательного контроля с 500 м.д. сухого лизолецитина, кроме того, и T3; отрицательного контроля с 500 м.д. сухой смеси, кроме того. Учитывая концентрацию лизолецитина и смеси в сухом лизолецитине и сухой Смеси, таким образом T2 и T3 доставляют 250 г лизолецитина и 177,5 г смеси на тонну корма, соответственно.

Таблица 9 - Ингредиенты и состав питательных веществ экспериментальных диет для стартового комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона.

Объект (г/кг, если не отмечено иного) Базовая диета Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион Питательные вещества Пшеница 407,3 420,7 405,2 425,3 420,7 405,2 Соевая мука (47% CP) 300,0 300,0 260,0 296,0 300,0 260,0 Кукуруза 200,0 197,7 250,0 200,0 197,7 250,0 Кормовая мука из отходов производства сельди 20,0 / / 20,0 / / Известняк 13,8 13,6 12,9 13,8 13,6 12,9 Соевое масло 27,0 30,0 34,0 15,5 22,0 24,0 Пальмовое масло 8,0 15,0 16,5 5,5 11,5 13,0 Пшеничные отруби / / / / 11,5 13,5 Монокальций фосфат 7,5 7,2 6,6 7,5 7,2 6,6 Витаминный и минеральный премикс 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 Метионин 3,4 2,8 2,2 3,4 2,8 2,2 Лизин HCl 3,0 2,5 2,4 3,0 2,5 2,4 Треонин 1,4 1,2 0,9 1,4 1,2 0,9 NaCl 2,0 2,3 2,2 2,0 2,3 2,2 NaHCO₃ 1,1 1,5 1,6 1,1 1,5 1,6 KEMZYME® Plus P Dry 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Вычисленное содержание питательных веществ Сырой белок 224,8 211,0 193,9 224,9 212,8 196,1 Сырой жир 54,3 62,4 68,6 40,6 51,3 55,8 U/S-отношение 3,68 3,17 3,20 3,68 3,24 3,21 AMEn (ккал/кг) 3,012 3,053 3,131 2,938 2,973 3,036

CP: сырой белок; AMEn: наблюдаемая метаболизируемая энергия; U/S-отношение: отношение ненасыщенных и насыщенных жирных кислот (безразмерное)

Таблица 10 - Обзор диетических обработок

Обработка Диета Кормовая добавка T1 Контроль Базовая диета / T2 Лизолецитин Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Сухого лизолецитина T3 Смесь Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Сухой смеси

Птицы, диеты и их содержание. Исследование характеристик и перевариваемости бройлеров осуществляют в Aristotle University of Thessaloniki (Thessaloniki, Greece). Птицы содержатся на птицефабрике в 24 загонах с настилом, каждый, с доступной поверхностью 2,0 м². В целом 308 бройлеров - обоих полов в возрасте 408 дней (без разделения по полу) породы Ross 308 содержат по 17 птиц в загоне (8,5 птицы на м²). Каждую диетическую обработку повторяют восемь раз. Репликаты (загоны) располагают для обработок с однородным распределением обработок внутри помещения. Динамическая система вентиляции и нагрева обеспечивает оптимальную температуру и вентиляцию птицефабрики. В ходе всего периода исследований используют схему освещения из 23 часов света и 1 часа темноты. Корм подается ad libitum. Птиц кормят мешанками с помощью трехфазной системы кормления (стартерный комбикорм, ростовой рацион и заключительный рацион). Питьевой водой снабжают ad libitum. Дважды в день, животных и птицефабрику инспектируют на общее состояние здоровья, постоянство подачи корма и воды, а также температуру и вентиляцию, мертвых птиц и неожиданные события.

Отбор образцов и регистрация. Образцы каждой готовой диеты отбирают непосредственно после приготовления корма. Через 34 дня, в каждом загоне тонкий нейлоновый мат помещают кроме того материала подстилки для сбора экскрементов. Экскременты собирают в течение периода приблизительно 8 восьми часов посредством соскребывания экскрементов с нейлонового мата. Материалы иные, чем экскременты (например, перья и частицы корма) удаляют вручную перед сбором экскрементов. Однородный образец экскрементов, полученный с каждого загона, сразу же замораживают и впоследствии сушат вымораживанием. Среднюю массу тела (ABW) регистрируют в каждом загоне в начале и через 14, 28 и 42 дня жизни, и регистрируют потребление корма в пределах между 0 и 14 днями, 14 и 28 днями и 28, и 42 днями жизни. Регистрируют ежедневную смертность и выбракованных животных в каждом загоне.

Химические анализы корм аи экскрементов. Все анализы осуществляют в Aristotle University of Thessaloniki (Thessaloniki, Greece). Образцы корма и экскрементов анализируют на содержание сухого вещества (DM), сырого белка (CP, N × 6,25) и сырого жира (CF) согласно методам Association of Official Analytical Chemists (AOAC, 2003). Потребляемую энергию (GE) вычисляют с использованием калориметра с адиабатической бомбой (Calorimeter System C 5000 Control, IKA®, Staufen, Germany). Определение диоксида титана осуществляют с помощью оптической эмиссионной спектрометрии индуктивно связанной плазмы, следую процедуре van Brussel (van Bussel W., Kerkhof F., van Kessel T., Lamers H., Nous D., Verdonk H., Verhoeven B. (2010) Accurate Determination of Titanium as Titanium Dioxide for Limited Sample Size Digestibility Studies of Feed and Food Matrices by Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry With Real-Time Simultaneous Internal Standardization. Atom. Spectrosc. 31: 81-88).

Вычисления и статистические анализы. Среднее ежедневное увеличение массы (ADG) и отношение преобразования корма (FCR) вычисляют для 0-14 дней (период стартерного комбикорма), 15-28 дней (периода ростового рациона), 29-42 дней (периода заключительного рациона) и 0-42 дней (период выкармливания в целом). ADG (г/птица/день) вычисляют посредством вычитания ABW для каждого загона в начале периода измерения (например, в день 0) из средней массы тела в конце этого периода измерения (например, в день 14) и деления этого значения на количество дней в этом периоде измерения (например, 14 дней). FCR вычисляют посредством деления среднего потребления корма (г/птица/день) за этоот период на ADG (г/птица/день) за этот период. Выход тушки, выход мяса грудки и содержание слоя брюшного жира вычисляют соответственно посредством деления массы тушки, грудки и слоя брюшного жира на живую массу птицы.

Перевариваемости питательных веществ (DM, CP и CF) определяют с использованием концентраций трассера диоксида титана в экскрементах и в корме и вычисляют согласно Уравнению 1. Содержание наблюдаемой метаболизируемой энергии (AME) экспериментальных диет вычисляют из их соответствующих отношений диоксидов титана и соответствующих содержаний GE, как показывает Уравнение 2. Этот результат корректируют на нулевое удерживание азота с использованием энергетического эквивалента 8,22 ккал/г удерживаемого азота и получают значение AMEn диеты.

Уравнение 1. Вычисление наблюдаемых фекальных переваримостей питательных веществ. Nutrientdiet и nutrientexcreta представляют собой концентрации соответствующих питательных веществ (сухого вещества, сырого белка, сырого жира), анализируемые в образцах диеты и экскрементов (г/кг), и TiO₂diet и TiO₂excreta представляют собой концентрации диоксида титана, анализируемые в образцах диеты и экскрементов (г/кг).

Уравнение 2. Вычисление наблюдаемого содержания метаболизируемой энергии экспериментальных диет. GEdiet и GEexcreta представляют собой анализируемые значения потребляемой энергии образцов диеты и экскрементов (ккал/кг).

Данные характеристик (ABW, ADG, FCR) и перевариваемости (DM, CP и перевариваемости CF и AMEn) выхода тушки, выхода мяса грудки и содержания слоя брюшного жира подвергают анализу разброса (ANOVA). ANOVA экспериментальных обработок осуществляют с помощью STATGRAPHICS Centurion XVI программное обеспечение (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), и средние значения разделяются с помощью процедуры наименьших значимых различий (LSD). Загон с 17 животными представляет собой экспериментальную единицу, и каждая из трех обработок воспроизводится восемь раз (восемь загонов на обработку). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Характеристики. Таблица 11 приводит среднюю массу тела (г/птица) в 0, 14, 28 и 42 дни жизни птиц, которых кормят базовой диетой (Контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой только лизолецитином (лизолецитин, 250 г/тонна кроме того) или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (смесь, 177,5 г/тонна кроме того). Несмотря на пониженное содержание энергии диет с лизолецитином и смесью по сравнению с контрольной диетой (в пределах между 74 и 95 ккал на кг корма, Таблица 9), значимых различий в промежуточных и конечных ABW бройлерах не обнаружено (Таблица 11). Наивысшее конечное значение ABW наблюдается для птиц, которых кормят диетой со смесью (2856 г/птица по сравнению с 2849 г/птица).

Таблица 11 - Средняя масса тела (г/птица) в 0, 14, 28 и 42 дни жизни

Обработка Средняя масса тела День 0 День 14 День 28 День 42 T1 Контроль 44,44 403,15 1399,17 2848,54 T2 Лизолецитин 44,88 376,15 1378,50 2849,15 T3 Смесь 45,00 391,06 1402,49 2856,14

Среднее ежедневное увеличение массы (г/птица/день) для стартерного комбикорма (0-14 дни), ростового рациона (15-28 дни), заключительного рациона (29-42 дни) и периода выкармливания в целом (0-42 дни) у птиц, которых кормят базовой диетой (Контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой только лизолецитином (лизолецитин, 250 г/тонна кроме того), или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (смесь, 177,5 г/тонна кроме того), представлены в Таблице 12. Отношение преобразования корма для стартерного комбикорма (0-14 дни), ростового рациона (15-28 дни), заключительный рацион (29-42 дни) и период выкармливания в целом (0-42 дни) птиц, которых кормят базовой диетой (Контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой только лизолецитином (лизолецитин, 250 г/тонна, кроме того), или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (Смесь, 177,5 г/тонна, кроме того), представлены в Таблице 13. В соответствии с результатами ABW птиц, не наблюдается значимых различий ADG или FCR между любыми видами обработки. Следовательно, несмотря на пониженное содержание энергии диет с лизолецитином и смесью, птицы, которых кормят этими диетами, по-прежнему могут удовлетворять строгим стандартам характеристик как установлено с помощью Контрольной диеты.

Таблица 12 - Среднее ежедневное увеличение массы (г/птица/день)

Обработка Среднее ежедневное увеличение массы Стартерный комбикорм Ростовой рацион Заключительный рацион Выкармливание в целом T1 Контроль 25,62 71,14 103,53 66,76 T2 Лизолецитин 23,66 71,60 105,05 66,77 T3 Смесь 24,72 72,24 103,83 66,93

Таблица 13 - Отношение преобразования корма (FCR)

Обработка FCR Стартерный комбикорм Ростовой рацион Заключительный рацион Выкармливание в целом T1 Контроль 1,52 1,46 1,79 1,64 T2 Лизолецитин 1,66 1,40 1,74 1,61 T3 Смесь 1,50 1,48 1,77 1,63

Перевариваемость питательных веществ. Коэффициенты перевариваемости питательных веществ (%) (DM, CP, CF) и наблюдаемая метаболизируемая энергия, скорректированная на нулевое удерживание азота (AMEn, ккал/кг), определяемая для 35 дней жизни птиц, которых кормят базовой диетой (Контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой только лизолецитином (лизолецитин, 250 г/тонна, кроме того), или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (смесь, 177,5 г/тонна кроме того), представлены в Таблице 14. В противоположность параметрам характеристик, наблюдаются значимые различия между обработками для перевариваемости DM и CP, а также для AMEn. Перевариваемость DM значительно выше у птиц, которых кормят диетой со смесью, по сравнению с теми, которых кормят либо контрольной диетой, либо диетой с лизолецитином. Перевариваемость CP значительно выше у птиц, которых кормят смесью, по сравнению с диетой с лизолецитином. Хотя они и не являются статистически значимыми, сходные наблюдения делаются для переваривания CF. Наивысшее переваривание CF наблюдают у птиц, которых кормят диетой со смесью (89,68%), затем для тех, которых кормят диетой с лизолецитином (87,57%) и контрольной диетой (85,52%), соответственно. Улучшенная перевариваемость питательных веществ отражается также в значительном повышении AMEn, которое наблюдается для птиц, которых кормят диетой со смесью (3,513 ккал/кг), по сравнению с теми, которых кормят либо контрольной диетой, либо диетой с лизолецитином (3,220 и 3,255 ккал/кг, соответственно).

Таблица 14 - коэффициенты перевариваемости (%) и наблюдаемая метаболизируемая энергия (ккал/кг)

Обработка Коэффициент перевариваемости AMEn Сухое вещество Сырой белок Сырой жир T1 Контроль 69,74^b 66,06^ab 85,52 3,220b T2 Лизолецитин 69,71^b 58,32^b 87,57 3,255b T3 Смесь 75,56^a 70,97^a 89,68 3,513a

^a-b Значения в колонках с различными верхними индексами статистически значимо различны (P<0,05)

Как отражают данные характеристик, лизолецитин и смесь могут извлекать дефицит энергии (в пределах между 74 и 95 ккал на кг корма) в своих диетах, приводя к таким же характеристикам корма для птиц, при меньшей энергии в диете. Характеристики, вероятно, поддерживаются с помощью улучшенной перевариваемости питательных веществ, которая наблюдается.

Кроме того, хотя в диете с лизолецитином обеспечиваются более высокие количества лизолецитина (250 по сравнению со 150 г лизолецитин на тонну корма для диеты с изолецитином и смесью, соответственно), смесь более успешна в улучшении перевариваемости DM и CP. Перевариваемости DM и CP, соответственно, на 5,85% и 12,65% выше у птиц, которых кормят диетой со смесью, по сравнению с теми, которых кормят диетой с лизолецитином. Хотя эти различия и не значимые статистически, переваривание CF также на 2,11% и на 4,16% выше у птиц, которых кормят диетой со смесью, по сравнению с тем, которых кормят диетой с лизолецитином или контролем, соответственно. В дополнение к этому, AMEn также на 258 и 293 ккал/кг выше у птиц, которых кормят диетой со смесью, по сравнению с теми, которых кормят диетой с лизолецитином или контролем, соответственно. Принимая во внимание уже уменьшенное содержание энергии диеты, смесь, таким образом, является очень успешной в улучшении использования питательных веществ и энергии бройлерами, тем самым превышая выгоды дополнения только лизолецитином.

Пример 5: Комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения выхода мяса

Исследование с бройлерами осуществляют на экспериментальной птицефабрике Kemin Industries South Asia Private Limited. Целью представленных исследований является оценка выхода мяса у птиц, которых кормят либо базовой диетой, удовлетворяющей всем диетическим требованиям, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией и дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора.

Материалы и методы

Смесь лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Лизолецитин (гидролизованный соевый лецитин), глицерин моноолеат (жирная кислота с 18 атомами углерода и одной двойной связью; йодное число 75,8 г I₂/100 г) и синтетический эмульгатор (этоксилированное касторовое масло, содержащее в среднем 40 групп этиленоксида и имеющее значение HLB 12,5) используют для получения продукта для обработки, представленного в Таблице 15 как ʺсухая Смесьʺ. Для приготовления сухой Смеси, сначала приготавливают жидкую предварительную смесь, в которой моноглицериды и синтетический эмульгатор сначала точно взвешивают вместе, нагревают до 60°C и перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут. Затем предварительную смесь наносят на сухой носитель, также представленный в Таблице 15, с получением сухой Смеси.

Таблица 15 - Обзор экспериментальной кормовой добавки

Продукт для обработки Активный компонент (г) Носитель (г) Лизолецитин Моноглицерид Синтетический эмульгатор Сухая смесь 300 50 5 645

Диеты и диетические обработки. Диеты приготавливают с помощью кукурузы в качестве главной зерновой составляющей и с соевой мукой в качестве главного источника белка. Приготавливают две базовые диеты: базовую диету, удовлетворяющую всем диетическим требованиям (T1; положительный контроль), и базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией (приблизительно 100 ккал/кг). Общие композиции базовых диет стартерного комбикорма (0-14 дни), ростового рациона (15-28 дни) и заключительного рациона (29-42 дни) представлены в Таблице 16. Все диеты также содержат связующее токсфин (Toxfin^TM, 1 кг/тонна, Kemin Industries South Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, India), пробиотик (CLOSTAT^TM, 500 г/тонна, Kemin Industries South Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, India) и коммерческую смесь ферментов (KEMZYME^® XPF, 250 г/тонна, Kemin Industries South Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, India).

Таблица 16 - Ингредиенты и состав питательных веществ экспериментальных диет стартового комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона

Объект (г/кг, если не отмечено иного) Базовая диета Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион Питательные вещества Кукуруза 527,30 553,40 576,50 534,00 578,70 601,80 Соевая мука (45% CP) 341,60 292,80 256,50 348,90 289,30 253,00 Полированный рис 40,00 45,00 45,00 51,60 45,00 45,00 Мясная и костная мука (44% CP) 30,00 35,00 40,00 15,00 35,00 40,00 Масло из рисовых отрубей 20,30 28,70 37,70 4,00 6,90 16,00 Горчичный жмых 10,00 20,0 25,00 10,00 20,0 25,00 Дикальций фосфат 6,80 4,25 1,09 10,00 4,20 1,02 CaCO₃ 6,30 4,40 3,00 8,97 4,50 3,07 Метионин 2,90 2,37 2,08 2,97 2,32 2,04 Лизин 2,32 2,20 1,78 2,32 2,22 1,82 Треонин 0,62 0,50 0,46 0,62 0,50 0,45 NaCl 2,21 1,87 1,92 2,32 1,84 1,90 NaHCO₃ 1,87 1,80 1,18 2,10 1,82 1,20 Холин хлорид (60%) 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 ToxfinTM 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 CLOSTATTM 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 KEMZYME® XPF 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 Другие^a 4,70 4,70 4,70 4,70 4,70 4,70 Вычисленное содержание питательных веществ Сырой белок 213,7 200,7 190,6 213,0 201,0 191,0 Сырой жир 54,0 64,0 74,0 37,3 44,0 54,3 AMEn (ккал/кг) 2,900 2,980 3,060 2,800 2,880 2,960

CP: сырой белок; AMEn: наблюдаемая метаболизируемая энергия;

^a Другие ингредиенты представляют собой: подкислитель корма (0,5 г/кг), ингибитор плесени (1,0 г/кг), бетаин (0,5 г/кг), витаминный и минеральный премикс (0,5 г/кг), укрепляющие средства для печени (0,5 г/кг), антикокковый препарат (0,5 г/кг), микроскопические минералы (0,5 г/кг), кормовой антибиотик (0,5 г/кг), антиоксидант (0,1 г/кг) и фитазу (0,1 г/кг)

Для базовой диеты с более низкой метаболизируемой энергией, сначала приготавливают одну загрузку корма (как для стартерного комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона), так что количественный состав экспериментальных диет является совершенно одинаковым для обработок T2 и T3, показанных в Таблице 17. Затем, базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией разделяют на равные загрузки и последовательно перемешивают в небольшом смесителе с различными премиксами для получения диетических обработок T2; отрицательного контроля и T3; отрицательного контроля с 500 м.д. сухой смеси, кроме того.

Таблица 17 - Обзор диетических обработок

Обработка Диета Кормовая добавка T1 Положительный контроль Базовая диета / T2 Отрицательный контроль Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией / T3 Смесь Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Сухой смеси

Птицы, диеты и их содержание. Исследование бройлеров осуществляют на экспериментальной птицефабрике Kemin Industries South Asia Private Limited (Gummudipoondi, Tamil, India). Птицы содержатся на экспериментальной птицефабрике в 18 загонах с настилом. В целом 408 бройлеров - обеих полов в однодневном возрасте (без разделения по полу) породы Vencobb 430 содержат по 12 птиц в загоне. Каждую диетическую обработку повторяют шесть раз. Репликаты (загоны) располагают для обработок с однородным распределением обработок внутри помещения. Птицефабрика состоит из открытой системы содержания, отслеживающей температуру и освещение окружающей среды. Кормом снабжают ad libitum. Птиц кормят мешанками с трехфазной системой кормления (стартерный комбикорм, ростовой рацион и заключительный рацион). Питьевой водой снабжают ad libitum. Дважды в день, животных и птицефабрику инспектируют на общее состояние здоровья, постоянство подачи корма и воды, а также температуру и вентиляцию, мертвых птиц, и неожиданные события.

Отбор образцов и регистрация. Через 40 дней, выбранного случайным образом бройлера мужского пола из каждого загона забивают. Регистрируют массу каждой птицы. Затем каждую птицу перерабатывают согласно стандартным процедурам первичной переработки и регистрируют массу мясной ткани.

Вычисления и статистические анализы. Выход мяса вычисляют посредством деления массы мясной ткани на соответствующую живую массу птицы. Затем данные по выходу мяса подвергают анализу разброса (ANOVA). ANOVA экспериментальных обработок осуществляют с помощью программного обеспечения STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), и средние значения разделяются с помощью процедуры наименьших значимых различий (LSD). Загон с 12 животными представляет собой экспериментальную единицу, и каждую из трех обработок повторяют шесть раз (по шесть загонов на обработку). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Выход мяса. Таблица 18 приводит выход мяса (%)через 40 дней жизни птиц, которых кормят базовой диетой (положительный контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии (отрицательный контроль) или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (смесь).

Таблица 18 - Выход мяса (% от массы тела) через 40 дней жизни

Обработка Выход мяса T1 Положительный контроль 63,1^ab T2 Отрицательный контроль 61,4^b T3 Смесь 63,7^a

^a-b Значения с различными верхними индексами статистически значимо различны (P<0,05)

Птицы, которых кормят базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии (T2, отрицательный контроль) имеют численно пониженный выход мяса по сравнению с птицами, которых кормят базовой диетой (T1, положительный контроль). Однако птицы, которых кормят смесью (T3), имеют значительно повышенный выход мяса по сравнению с теми, которых кормят диетой отрицательного контроля (T2). Кроме того, самый высокий выход мяса наблюдают для птиц, которых кормят смесью (T3). Следовательно, несмотря на пониженное содержание энергии, птицы, которых кормят диетой со смесью, могут давать самый высокий выход мяса, благодаря добавлению сухой Смеси.

Пример 6: Комбинация лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора для улучшения отношения преобразования корма

Исследования характеристик бройлеров осуществляют на экспериментальной птицефабрике Southern Poultry Research, Athens, Georgia (USA). Целью представленных исследований является оценка увеличения массы тела и преобразования корма у птиц, которых кормят либо базовой диетой, удовлетворяющей всем диетическим требованиям, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией, либо диетой, приготовленной с более низкой метаболизируемой энергией и дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора.

Материалы и методы

Смесь лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора. Лизолецитин (гидролизованный соевый лецитин), глицерин моноолеат (жирная кислота с 18 атомами углерода и одной двойной связью; йодное число 75,8 г I₂/100 г) и синтетический эмульгатор (этоксилированное касторовое масло, содержащее в среднем 40 групп этиленоксида и имеющее значение HLB 12,5) используют для приготовления продукта для обработки, далее указанного как сухая Смесь, как показано в Таблице 19. Для приготовления сухой смеси, сначала приготавливают жидкую предварительную смесь. Для этого, сначала точно взвешивают вместе лизолецитин, моноглицериды и синтетический эмульгатор, нагревают их до 60°C и перемешивают приблизительно при 250 об/мин в течение 30 минут. Затем предварительную смесь наносят на сухой носитель, также показанный в Таблице 19, с получением сухой Смеси.

Таблица 19 - Обзор экспериментальных кормовых добавок

Продукт для обработки Активный компонент (г) Носитель (г) Лизолецитин Моноглицерид Синтетический эмульгатор Сухая смесь 300 50 5 645

Диеты и диетические обработки. Диеты приготавливают с помощью кукурузы в качестве главной зерновой составляющей и с соевой мукой в качестве главного источника белка. Приготавливают две базовые диеты: базовую диету, удовлетворяющую всем диетическим требованиям (T1; положительный контроль), и базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией (приблизительно 120 ккал/кг с более низкой метаболизируемой энергией). Общие композиции базовых диет стартерного комбикорма (0-21 дни), ростового рациона (22-35 дни) и заключительного рациона (36-42 дни) представлены в Таблице 20. Все диеты также содержат коммерческий фермент (Hostazym^® X 1,0, Huvepharma Inc., St. Louis, USA) и фитазу (Ronozyme^® HiPhos 2700 GT, DSM Nutritional Products, Ames, USA), антикокковый лекарственный препарат (Bio-Cox^®, Alpharma LLC, New Jersey, USA) и бацитрацин (BMD^® 50, Zoetis Inc., Kalamazoo, USA).

Таблица 20 - Ингредиенты и состав питательных веществ экспериментальных диет стартового комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона

Объект (г/кг, если не отмечено иного) Базовая диета Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион стартерный комбикорм ростовой рацион заключительный рацион Питательные вещества Кукуруза 554,6 605,2 653,0 536,1 604,8 650,2 Мука из лущеных соевых бобов 335,0 286,1 240,5 326,0 253,3 211,5 Обезжиренная DDGS 40,0 40,0 40,0 40,0 40,0 40,0 Птичий жир 24,3 22,8 21,6 20,0 20,0 20,0 Мясная и костная мука (55% CP) 20,0 20,0 20,0 35,3 43,6 42,2 CaCO₃ 9,9 8,2 7,9 13,2 11,2 10,1 Дикальций фосфат 8,3 7,4 6,5 9,2 7,9 7,5 NaCl 4,2 4,2 4,2 9,6 8,1 7,1 Пшеничные отруби 0,0 0,0 0,0 0,2 0,2 0,2 Метионин 2,8 2,1 2,1 4,2 4,2 4,2 Лизин 1,0 0,9 1,1 2,7 2,2 2,1 Треонин 0,0 0,0 0,0 0,0 0,2 0,3 Премикс из микроскопических миралов 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 Витаминный премикс 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 BMD^® 50 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Bio-Cox^® 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Hostazym^® X 1,0 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Ronozyme^® HiPhos 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Вычисленное содержание питательных веществ Сырой белок 230,0 210,0 192,0 229,2 201,6 185,0 Сырой жир 50 50 50 40 40 40 AMEn (ккал/кг) 3,084 3,125 3,160 2,964 3,005 3,040

CP: сырой белок; DDGS: высушенная барда с растворимыми веществами; AMEn: наблюдаемая метаболизируемая энергия

Для базовой диеты с более низкой метаболизируемой энергией, сначала приготавливают одну загрузку корма (как для стартерного комбикорма, ростового рациона и заключительного рациона), так что количественный состав экспериментальных диет является совершенно одинаковым для обработок T2 и T3, представленных в Таблице 21. Затем, базовую диету с более низкой метаболизируемой энергией разделяют на равные загрузки и последовательно перемешивают в небольшом смесителе с различными премиксами для получения диетической обработки T2; отрицательного контроля и T3; отрицательного контроля с 500 м.д. сухой смеси, кроме того.

Таблица 21 - Обзор диетических обработок

Обработка Диета Кормовая добавка T1 Положительный контроль Базовая диета / T2 Отрицательный контроль Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией / T3 Смесь Базовая диета с пониженной метаболизируемой энергией 500 м.д. Сухой смеси

Птицы, диеты и их содержание. Исследование характеристик бройлеров осуществляют на экспериментальной птицефабрике Southern Poultry Research, Inc. (Brock Road, Georgia, USA). Бройлерный птичник делят на загоны равных размеров, расположенные вдоль центрального прохода. Птицы содержатся в 48 загонах с настилом. В целом 2496 бройлеров - самцов в однодневном возрасте породы Cobb 500 содержат по 52 птицы в загоне (±11 птиц на м²). Каждую диетическую обработку повторяют 16 раз. Репликаты (загоны) располагают для обработок с однородным распределением обработок внутри помещения с использованием случайного расположения блоков. Кормом и питьевой водой снабжаются ad libitum. Птиц кормят с помощью трехфазной системы кормления (стартерный комбикорм, ростовой рацион и заключительный рацион). Птиц кормят раскрошенной диетой в стартерной фазе и гранулированными диетами в ростовой и заключительной фазах. От дня 1 до дня 7, корм подается на поддон, расположенный на настиле каждого загона. После этого диеты поступают из одного трубчатого фидера в каждом загоне. Дважды в день, животных и птицефабрику инспектируют на общее состояние здоровья, постоянство подачи корма и воды, а также температуры и вентиляции, мертвых птиц и неожиданные события.

Регистрация. Среднюю массу птицы на загон (г/птица) регистрируют в начале (День 0) и в конце (День 42) исследования. Потребление корма (г) на один загон регистрируют в течение всего периода выкармливания.

Вычисления и статистические анализы. Среднее ежедневное увеличение массы (ADG; г/птица/день) и отношение преобразования корма (FCR) вычисляют в течение всего периода выкармливания (дни 0-42). Затем данные ADG и FCR подвергают анализу разброса (ANOVA) с использованием пакета программного обеспечения JMP^® (SAS Inc., Cary, NC, USA), сравнивая средние значения с помощью t-критерия Стьюдента (P<0,05). Загон с 54 животными представляет собой экспериментальную единицу, и каждую из трех обработок повторяют 16 раз (16 загонов на одну обработку). Все определения значимости основываются на значении P равном или меньшем, чем 0,05.

Результаты

Характеристики. Таблица 22 приводит среднее ежедневное увеличение массы (г/птица/день) и FCR в течение всего периода выкармливания птиц, которых кормят базовой диетой (T1; положительный контроль), базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии (T2; отрицательный контроль), или диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора (T3; смесь). ADG птиц, которых кормят базовой диетой с пониженным содержанием метаболизируемой энергии (T2, отрицательный контроль), значительно ниже по сравнению с ADG птиц, которых кормят базовой диетой (T1, положительный контроль). Несмотря на пониженное содержание энергии, ADG птиц, которых кормят смесью (T3), ненамного ниже по сравнению с ADG птиц, которых кормят диетой положительного контроля (T1). Кроме того, птицы, которых кормят диетой отрицательного контроля (T2), имеют значительно более высокие значения FCR, чем те, которых кормят диетой положительного контроля. В противоположность, несмотря на пониженное содержание энергии, FCR птиц, которых кормят смесью (T3) ненамного ниже по сравнению с FCR птиц, которых кормят диетой положительного контроля (T1).

Таблица 22 - Среднее ежедневное увеличение массы (ADG; г/птица/день) и отношение преобразования корма (FCR)

Обработка ADG FCR T1 Положительный контроль 55,5^a 1,64^a T2 Отрицательный контроль 53,3^b 1,71^b T3 Смесь 54,1^ab 1,66^a

^a-b Значения с различными верхними индексами статистически значимо различны (P<0,05)

Следовательно, благодаря лучшему перевариванию и поглощению питательных веществ, птицы, которых кормят диетой, дополняемой смесью лизолецитина, моноглицеридов и синтетического эмульгатора, способны извлекать дефицит энергии 120 ккал/кг в диете.

Приведенное выше описание и чертежи содержат иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения. Приведенные выше варианты осуществления и способы, описанные в настоящем документе, могут изменяться на основе способностей, опыта и предпочтений специалистов в данной области. Само по себе перечисление стадий способа в определенном порядке не составляет каких-либо ограничений на порядок стадий способа. Приведенное выше описание и чертежи только объясняют и иллюстрируют изобретение, и настоящее изобретение не ограничивается ими, если только формула изобретения не ограничивается таким образом. Специалисты в данной области, имеющие описание перед собой, смогут осуществить его модификации и варианты без отклонения от рамок настоящего изобретения.

Изобретение относится к композиции кормовой добавки для животных. Кормовая добавка для животных содержит комбинацию, включающую лизолецитин в количестве 15-1500 грамм на тонну корма, моноглицерид(ы), выбранные из группы, состоящей из глицерина моноолеата и глицерина моностеарата в количестве 2,5-250 грамм на тонну корма, и синтетический эмульгатор в количестве 0,25-25 грамм на тонну корма. Способ приготовления кормовой добавки для животных предусматривает добавление в корм для животных вышеуказанной комбинации. Изобретение позволяет улучшить перевариваемость и поглощение жиров из корма для животных. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 22 табл., 6 пр.

1. Кормовая добавка для животных, содержащая комбинацию лизолецитина в количестве 15–1500 грамм на тонну корма, моноглицерид(ы), выбранные из группы, состоящей из глицерина моноолеата и глицерина моностеарата в количестве 2,5-250 грамм на тонну корма, и синтетический эмульгатор в количестве 0,25-25 грамм на тонну корма.

2. Кормовая добавка для животных по п.1, где кормовая добавка для животных может заменить дефицит энергии по меньшей мере 60 ккал/кг корма для животных.

3. Кормовая добавка для животных по п.1, где кормовая добавка для животных может заменить дефицит энергии по меньшей мере 75 ккал/кг корма для животных.

4. Кормовая добавка для животных по п.1, где кормовая добавка для животных может заменить дефицит энергии по меньшей мере 100 ккал/кг корма для животных.

5. Способ приготовления кормовой добавки для животных, включающий добавление комбинации в корм для животных, где комбинация содержит 15–1500 г на тонну корма лизолецитина, 2,5-250 грамм на тонну корма моноглицеридов, где указанные моноглицериды выбраны из группы, состоящей из глицерина моноолеата и глицерина моностеарата, и 0,25-25 грамм на тонну корма синтетического эмульгатора.

6. Способ по п.5, в котором способ включает применение кормовой добавки для животных с порцией корма или объединение кормовой добавки для животных в виде премикса или препаратов премиксов.

7. Способ по п.5, в котором кормовая добавка для животных представляет собой жидкость.

8. Способ по п.6, в котором кормовая добавка для животных наносится на соответствующий носитель и вводится как сухой продукт.