Способ коррекции эндотелиальной дисфункции пептидом, имитирующим альфа-спираль B эритропоэтина, при ADMA-подобной модели преэклампсии Российский патент 2020 года по МПК G09B23/28 A61K38/14 A61P15/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных животных с помощью асиалированного эритропоэтина (RU № 2707060, публ. 21.11.2019, Бюл. № 33), при котором осуществляют воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar путём ежедневного с 14 по 20 день беременности внутрибрюшинного введения L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. Коррекцию моделируемой патологии проводят путём подкожного введения асиалированного эритропоэтина с 10 по 20 сутки беременности в дозе 2,4 мкг/кг 1 раз в день.

Недостатком указанного способа является то, что асиалированный эритропоэтин по сравнению с рекомбинантным эритропоэтином хоть и лишен остатков сиаловых кислот, но полипептидная цепь состоит так же из 165 аминокислоты. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3790672/)

Это оставляет его высокую стоимость и относительно большой размер молекулы, что затрудняет его проникновения в ткани.

Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели патологии у беременных животных с использованием асиалированного эритропоэтина неудовлетворительны.

Одним из направлений устранения этого недостатка, является создание производных состоящих из более короткой полипептидной цепи, но повторяющих его активный центр для связывания с рецептором. Таким решением является пептид, имитирующий α-спираль B эритропоэтина со следующей аминокислотной последовательностью: Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser.

Однако, не смотря на очевидные предпосылки, вопрос об эффективности исследуемого производного в связи с изменением его времени жизни остается неоднозначным. Это связано с тем, что в различных тканях и органах метаболические, регуляторные и другие процессы имеют свои не только временные, но и другие особенности. Плацента представляет собой динамично развивающийся орган со сложным сочетанием процессов органогенеза и аппоптоза. Кроме этого изменение пространственной структуры, массы и заряда так же оставляют вопрос о проницаемости его через тканевые барьеры и в частности через фетоплацентарный открытым.

В связи с выше изложенным, задачей изобретения является создание способа коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающего использование пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB имеющим следующую последовательность аминокислот - Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser), обладающего меньшими размерами по сравнению с эритропоэтинами.

Задача достигается тем, что на фоне моделирования преэклампсии в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция эндотелиальной дисфункции пептидом, имитирующим α-спираль B эритропоэтина (P-αB), внутрибрюшинным введением в дозировке 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 сутки беременности. Это приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции при моделируемой патологии. Данный эффект связан с цитопротективным и антиоксидантным действием пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Инновационный пептид, имитирующий альфа-спираль b-эритропоэтина (P-αB) вводится с 10 по 20 сутки беременности внутрибрюшинно в дозировке 50 мкг/кг/сут. На 21 день беременности под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводят катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Проводят сосудистые пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ)- внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) – внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) – патент №2301015 от 20.06.2007 г. (Бюл. №17).

Для всех данных была применена описательная статистика: данные проверены на нормальность распределения. Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения были подсчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m). Для анализа межгрупповых различии использовали t-критерий Стьюдента.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое расслабление (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) и увеличение КЭД с 1,25±0,04 у контрольной группы беременных животных до 3,11±0,20 (р<0,05). Кроме этого, наблюдался значительный подъем систолического и диастолического артериального давления с 128,8±2,61 мм рт.ст и 80,8±2,10 мм рт.ст. до 202,8±6.28 мм рт.ст. и 138,40±2,95 мм рт. ст. соответственно. Внутрибрюшное введение пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB) 1р/сутки (50 мкг/кг) с 10 по 20 сутки беременности приводило к достоверному снижению КЭД до 2,0±0,06, что меньше, чем в группе животных с введением L-NAME (р<0,05), а так же к снижению систолического и диастолического артериального давления – 142,80 ± 1,98 и 90,40 ± 5,21 мм рт. ст. соответственно. Результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1

Группа САД,
мм рт. ст. ДАД,
мм рт. ст. КЭД,
усл. ед. Беременные (Интактные) 128,8±2,61^y 80,8±2,10^y 1,25±0,04^y Беременные + L-NAME (25 мг/кг) 202,8±6,28^* 138,40±2,95^* 3,11±0,20^* Беременные + L-NAME (25 мг/кг) + P-αB (50 мкг/кг) 142,8±1,98^*y 90,4±5,21^*y 2,0±0,06^*y

Примечания: САД, ДАД – систолическое и диастолическое артериальное давление (мм рт. ст.); КЭД – коэффициент эндотелиальной дисфункции; ^*- р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; ^y- р<0,05 в сравнении с группой L-NAME.

Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции в условиях воспроизводимой нами ADMA подобной модели преэклампсии у беременных крыс пептидом, имитирующим α-спираль B эритропоэтина (P-αB) при внутрибрюшинном введении с указанной выше дозировкой.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии включает воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, коррекцию моделируемой патологии путем внутрибрюшинного введения пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB), в дозе 50 мкг/кг/сут с 10-х по 20-е сутки беременности. Способ приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции при моделируемой патологии. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающий воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, отличающийся тем, что для коррекции моделируемой патологии внутрибрюшинно вводят пептид, имитирующий α-спираль B эритропоэтина (P-αB), в дозе 50 мкг/кг/сут с 10-х по 20-е сутки беременности.