Способ коррекции микроциркуляции в плаценте пептидом, имитирующим альфа-спираль B эритропоэтина, при ADMA-подобной модели преэклампсии Российский патент 2020 года по МПК A61K38/08 A61K38/14 G09B23/28 A61P9/14 A61P15/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии.

Наиболее близким к заявленному решению является Способ коррекции микроциркуляции в плаценте асиалированным эритропоэтином при ADMA-подобной модели преэклампсии (RU № 2709833, опубл. 23.12.2019, Бюл. № 36.), в котором воспроизводят модель преэклампсии у крыс линии Wistar путём ежедневного с 14 по 20 сутки беременности внутрибрюшинного введения L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. При этом для коррекции моделируемой патологии вводят асиалированный эритропоэтин подкожно в дозировке 2,4 мкг/кг 1 раз в сутки с 10 по 20 сутки беременности.

Недостатком указанного способа является то, что асиалированный эритропоэтин по сравнению с рекомбинантным эритропоэтином хоть и лишен остатков сиаловых кислот, но полипептидная цепь состоит так же из 165 аминокислоты. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3790672/)

Это оставляет его высокую стоимость и относительно большой размер молекулы, что затрудняет его проникновения в ткани.

Поэтому результаты коррекции микроциркуляции при ADMA-подобной модели патологии у беременных животных с использованием асиалированного эритропоэтина неудовлетворительны.

Одним из направлений устранения этого недостатка, является создание производных состоящих из более короткой полипептидной цепи, но повторяющих его активный центр для связывания с рецептором. Таким решение является пептидом имитирующим α-спираль B эритропоэтина со следующей аминокислотной последовательностью: Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser.

Однако, не смотря на очевидные предпосылки, вопрос об эффективности исследуемого производного в связи с изменением его времени жизни остается неоднозначным. Это связано с тем, что в различных тканях и органах метаболические, регуляторные и другие процессы имеют свои не только временные, но и другие особенности. Плацента представляет собой динамично развивающийся орган со сложным сочетанием процессов органогенеза и апоптоза. Кроме этого изменение пространственной структуры, массы и заряда так же оставляют вопрос о проницаемости его через тканевые барьеры и в частности фетоплацентарный открытым.

В связи с выше изложенным, задачей изобретения является создание способа коррекции нарушений микроциркуляции при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающего использование пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB, имеющий следующую последовательность аминокислот - Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser).

Задача достигается тем, что на фоне моделирования преэклампсии в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция микроциркуляции в плаценте пептидом, имитирующим α-спираль B эритропоэтина (P-αB), внутрибрюшинным введением в дозировке 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 сутки беременности. Это приводит к выраженной коррекции микроциркуляции в плаценте при моделируемой патологии. Данный эффект связан с явным цитопротективным и антиоксидантным действием пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится в брюшную полость в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Пептид, имитирующий α-спираль B эритропоэтина (P-αB) вводится внутрибрюшинно в дозе 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 день беременности.

На 21 день беременности под наркозом измеряли микроциркуляцию в плаценте. Исследование микроциркуляции в плаценте проводили с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф MP150 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDf100C и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕд).

Для всех данных была применена описательная статистика: данные проверены на нормальность распределения. Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения были подсчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m). Для анализа межгрупповых различии использовали t-критерий Стьюдента.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к нарушению микроциркуляции в плаценте, о чем свидетельствует снижение ее величины с 465,9±28,79 ПЕд у интактных беременных животных до 211,8±6,03 ПЕд (р<0,05) в группе контроля.

Введение пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB) внутрибрюшинно в дозировке 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 сутки беременности на фоне ADMA-подобной модели преэклампсии у беременных крыс приводило к достоверному повышению уровня микроциркуляции в плаценте до 343,2±5,98 ПЕд, что выше, чем у животных в группе с введением L-NAME (р<0,05), однако ниже чем у животных в интактной группе. Результаты исследований приведены в таблице 1.

Таблица 1

Группа Микроциркуляция,
ПЕд. Беременные (интактные) 465,9±28,79^y Беременные + L-NAME (25 мг/кг) 211,8±6,03^* Беременные + L-NAME (25 мг/кг) + P-αB (50 мкг/кг/сут) 343,2±5,98^*y

Примечания: ^*- р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; ^y- р<0,05 в сравнении с группой L-NAME.

Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте в условиях воспроизводимой нами ADMA подобной модели преэклампсии у беременных крыс пептидом, имитирующим α-спираль B эритропоэтина (P-αB) при внутрибрюшинном введении в дозировке 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 сутки беременности.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте. Для этого осуществляют воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. Коррекцию моделируемой патологии проводят путем внутрибрюшинного введения пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (P-αB), в дозе 50 мкг/кг/сут с 10-х по 20-е сутки беременности. Способ приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции в условиях воспроизводимой ADMA-подобной модели преэклампсии у беременных крыс. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающий воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 сутки беременности внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, отличающийся тем, что для коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте вводят пептид, имитирующий α-спираль B эритропоэтина P-αB, внутрибрюшинно в дозировке 50 мкг/кг/сут с 10 по 20 сутки беременности.