Способ сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex для проведения акарограммы и оценки подвижности взрослых особей Российский патент 2020 года по МПК A01K67/33 

Изобретение относится к паразитологии, в частности, к дерматологии, и может быть использовано для сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex для проведения акарограммы.

Целью исследования является сохранение живых и подвижных особей клещей рода Demodex для дальнейшего исследования их жизнеспособности при воздействии различных лекарственных препаратов и субстанций.

Демодекоз - опасная болезнь, вызываемая подкожным клещом Demodex folliculorum, которая становится причиной значительного ухудшения состояния кожи. Это маленькое членистоногое, живущее в сальных железах и волосяных фолликулах человека и животных. В норме присутствует у каждого человека - не более 2-5 особей клещей рода Demodex на 1 см² не вызывая патологической реакции кожи человека, однако существуют причины, способствующие их переходу в патогенную форму.

Пример: локальное повышение температуры, ультрафиолетовое (УФ)-облучение, иммунодефицита состояния человека, связанные с заболеваниями нервной, сосудистой, гормональной систем, пищеварительного тракта [1, 9]. Эти факторы влияют образованию многочисленных прыщей, угревой сыпи, а в дальнейшем и язв. Кожа выглядит при этом бугристой. Покраснения, которые являются одним из первых симптомов клещевой инфекции, усугубляются с течением заболевания. Зуд становится постоянным спутником для больных демодекозом из-за продуктов жизнедеятельности «лицевых» клещей, вызывающие аллергическую реакцию, лицо зудит и чешется. Симптомы усиливаются в ночное время суток. Днем активность подкожных клещей намного ниже, это связано с тем, что демодекс боится света.

Одной из проблем проведения исследований демодекоза является недостаточная выживаемость паразитов с момента взятия соскоба до микроскопического исследования. В настоящее время применяются различные методики обработки исследуемого материала [1-3]. Например, после нанесения исследуемого материала на предметное стекло, добавляют каплю 10% щелочи или глицерина, или керосина и накрывают покровным стеклом. После этого проводят микроскопическое исследование.

В доступной нам литературе нет информации о длительности сохранения материала для проведения акарограммы и оценки подвижности взрослых особей клещей.

Техническим результатом изобретения, является способ сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex, применяемый для дальнейшего исследования их жизнеспособности при воздействии различных лекарственных препаратов и субстанций, с учетом акарограммы и оценки их подвижности. Оценка подвижности клещей рода Demodex проверяется в процессе проведения диагностических процедур, где составляется акарограмма. При акарограмме определяются 5 стадий развития клещей, при оценке подвижности определяется ее степень: + - слабая степень подвижности; ++ - средняя степень подвижности; +++ - сильная степень подвижности.

Способ осуществляется следующим образом. Пациенту необходимо отказаться от умывания на протяжение 1-2 суток, исключает использование любых очищающих средств для того, чтобы в анализе были обнаружены взрослые особи клеща. Применение кислотных или щелочных средств могут губительны для клещей, а также способствовать их более глубокому проникновению. Соскоб кожи пораженных областей берут в вечернее время суток, так как в это время паразиты наиболее активны в таком случае, взрослые особи с большей долей вероятности попадут в соскоб, снятый с кожи пациента. После взятия материала с помощью скальпеля его наносят на предметное стекло тонким слоем. Наш опыт показал, что в условиях комнатной температуры (от +20°С до +25°С), отсутствии световых и химических раздражителей, нормальном уровне кислорода в воздухе, а также при наличии питательной среды для клещей рода Demodex (секрет сальных желез, роговые клетки эпидермиса) выживаемость взрослых особей составляет от 2 до 7 суток.

Сущность способа заключается в нахождении клещей в его естественной питательной среде при оптимальной температуре, отсутствии световых и химических раздражителей, нормальном уровне кислорода.

Подтверждение отдельных критериев показано в различных научных работах западных коллег. По данным Litwin D и соавт. оптимальной температурой in vitro для клещей Demodex folliculorum и Demodex brevis является 16-22°С, также паразиты являются фотонегативными и выживают в условиях помещения в серокультуру или сыворотку человека [4]. Маслодудова Е.Н. и соавт. пишут при температуре +30-40°С и в условиях отсутствия света клещи проявляют максимальную активность [6]. Работа Nath, А. K. и соавт. Показывает, что клещи рода Demodex относятся к аэробам и могут обитать на стержне волоса [7]. Кроме того, Tsai YJ и соавт. пишут о наибольшей активности клещей вида Demodex canis, относящихся к роду Demodex, в ночное время [5].

В нашей работе показано влияние различных лекарственных препаратов (Ивермектин 1%, Дегтярная мазь 5%, Скипидарная мазь 2%, Салициловая мазь 5%, Цинковая мазь 5%, Серная мазь 10%) на активность паразитов [8].

Таким образом, способ сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex для проведения акарограммы и оценки подвижности взрослых особей клещей позволяет проводить наиболее точную и качественную характеристику демодекоза.

Литература.

1. Сирмайс Н.С, Абесадзе Г.А., Устинов М.В. Демодекоз: патогенетические аспекты при различных дерматозах лица. Метод. пос. М: 2013; 26 с.

2. Лавриненко М.В., Ревенко Ж.А. Современные представления о биологии, эпидемиологии, патогенезе и клинике демодекоза. Клиническая инфектология и паразитология, 2013, №4 (07), с. 118-126.

3. Hatice Gamze Hamdi BEKER AKBULUT The effects of sebum configuration on Demodex spp.density. Turk J Med Sci, (2016) 46: 1415-1421.

4. Litwin D, Chen W, Dzika E, Korycihska J. Human Permanent Ectoparasites; Recent Advances on Biology and Clinical Significance of Demodex Mites: Narrative Review Article. Iran J Parasitol. 2017; 12(1): 12-21.

5. Tsai YJ, Chung WC, Wang LC, et al. The dog mite, Demodex canis: prevalence, fungal co-infection, reactions to light, and hair follicle apoptosis. J Insect Sci. 2011;11:76.

6. E.H. Маслодудова, E.H. Макарова, Т.Л. Бурым, Е.В. Семенова Особенности биологии demodex folliculorum и его распространение среди населения городов Макеевка и Донецк. Проблеми охорони природи техногенного репону. - Донецьк: ДонНУ, 2010. - No 1 (10): 133.

7. Nath, А.К., Timshina, D.К., Thappa, D.М., & Sinclair, R. (2012). Demodex in an aerobic environment on the eyelashes. Australasian Journal of Dermatology, 53(2), 159-160.

8. K.H. Пустовая, Г.А. Пьявченко, M.B. Арисов, В.И. Ноздрин Подвижность особей и акарограмма как критерии оценки действия препаратов против клещей рода Demodex у человека.

9. Lacey N., Kavanagh K., Tseng S.С. Under the lash: Demodex mites in human diseases // Biochemistry (London).

10. Адаскевич В.П. Демодекоз: этиология, патогенез, клинические формы, диагностика, лечение // Дерматовенерология. Косметология, 2015, №1(01), с. 60-71.

11. Инструкция по диагностике, лечению и профилактике демодекоза // М-во здравоохранения Респ. Беларусь, М-во сел. хоз-ва и продовольствия Респ. Беларусь; [В.Г. Панкратов и др.]. Минск: Белорус. гос. мед. ун-т, 2001, 18 с.

12. Sharma Y.K., Gupta A. Human demodex mite: The versatile mite of dermatological importance. Indian J Dermatol 2014;59(3):302.

13. Jing X, Shuling G, Ying L. Environmental scanning electron microscopy observation of the ultrastructure of Demodex. Microsc Res Tech. 2005; 68(5):284-289.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex для проведения акарограммы и оценки подвижности взрослых особей, включающий отказ пациента на 1-2 суток перед взятием соскоба от умывания, взятие с исключением любых очищающих средств соскоба кожи пораженных областей пациента с помощью скальпеля вместе с сальными железами и роговыми клетками эпидермиса, нанесение соскоба на предметное стекло тонким слоем, в условиях комнатной температуры от 20°С до +25°С при отсутствии световых и химических раздражителей, с доступом кислорода. Изобретение позволяет сохранить живых и подвижных особей клещей рода Demodex для дальнейшего исследования их жизнеспособности при воздействии различных лекарственных препаратов и субстанций. 1 пр.

Способ сохранения жизнедеятельности клещей рода Demodex для проведения акарограммы и оценки подвижности взрослых особей, включающий отказ пациента на 1-2 суток перед взятием соскоба от умывания, взятие с исключением любых очищающих средств соскоба кожи пораженных областей пациента с помощью скальпеля вместе с сальными железами и роговыми клетками эпидермиса, нанесение соскоба на предметное стекло тонким слоем, в условиях комнатной температуры от 20°С до +25°С при отсутствии световых и химических раздражителей, с доступом кислорода.