Способ оценки динамики и полноты контракции сгустков крови для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности Российский патент 2020 года по МПК A61B5/00 G01N33/86 

Предлагаемое изобретение относится к области удовлетворения жизненных потребностей человека, может быть применено в медицине, а именно - в акушерстве, для диагностики (оценки, определения) риска невынашивания беременности из-за угрозы развития предтромботических или тромботических состояний. Способ используется исключительно для прогнозирования удачного исхода беременности. Краткая сущность заключается в том, что диагностику проводят посредством измерения степени контракции (сжатия) сгустка крови в образцах крови на этапе планирования беременности, в результате чего становится воможным диагностика и планирование удачного либо неудачного исхода беременности.

Использованные термины и определения:

Гемокоагуляция – это процесс, при котором кровь из жидкого состояния превращается в гель, образуя сгусток крови. Это приводит к гемостазу, прекращению кровотечения из поврежденного сосуда, а затем к его восстановлению. Нарушения гемокоагуляции могут приводить как к кровотечениям, так и тромбозам, в случае, если образовавшийся сгусток крови перекроет просвет артерии или вены и остановит или затруднит кровоток.

Контракция – процесс спонтанного сжатия сгустка крови, происходящего под действием сократительных белков тромбоцитов, актина и миозина.

Лаг-период контракции – это отрезок времени, необходимый для уменьшения размера сгустка менее 95% от исходного.

По данным Всемирной организации здравоохранения частота невынашивания беременности составляет 10-25%. Ежегодно на свет появляется 2,6 миллиона мертворожденных детей, при этом многие из этих случаев смерти можно было предотвратить [Глобальная стратегия охраны здоровья женщин, детей и подростков (2016-2030)]. У женщин с привычным невынашиванием беременности (далее по тексту – ПНБ) во время беременности часто наблюдается патологическая гиперкоагуляция, которая приводит к микротромбозу сосудов хориона или плаценты, что, в конечном итоге, приводит к выкидышу или преждевременным родам [Rai R., Tuddenham E., Backos M., Jivrai S., Gaddal S., Cork B., Regan L. Thromboelastography, whole-blood haemostasis and recurrent miscarriage. Hum Reprod. 2003; 18(12):2540-3].

Основываясь на выше изложенном, возможно сделать вывод о крайне высокой актуальности решения данной проблемы, которая до настоящего времени не нашла надлежащего разрешения в мире.

Из исследованного уровня техники заявителем выявлены аналоги предлагаемого изобретения. При описании аналогов использована их (аналогов) терминология.

Известен «Способ прогноза осложнений беременности у пациенток с тромбофилией» [патент RU 2429478. МПК G01N 33/49 (2006.01). Сущность изобретения состоит в том, что способ прогноза осложнений беременности у пациенток с тромбофилией на основе комплексной оценки изменений в системе гемостаза отличается тем, что определяют значения параметров коагулограммы: фибринолитическую активность (ФА), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), продукты деградации фибрина (Д-Димеры) и международное нормализованное отношение (MHO) и вычисляют интегральный показатель коагуляции (ИПК) по формуле:

ИПК = 0,06 ФА+0,25 МНО+0,08 Д-Димер+0,54 АЧТВ+6,54

где:

ИПК – интегральный показатель коагуляции;

ФА – фибринолитическая активность, мин.;

MHO – международное нормализованное отношение, ед.;

Д-Димер – продукты деградации фибрина, нг/мл;

АЧТВ – активированное частичное тромбопластиновое время, сек,

и, получив значение ИПК больше или равно 1, прогнозируют высокий риск осложнений беременности, ассоциированных с тромбозами, а при ИПК меньше 1 делают заключение о низком риске тромбогенных гестационных осложнений.

Исследование проводят утром натощак, пунктируют локтевую вену пациентки иглой одноразового пользования и забирают 4,5 мл крови в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствора цитрата натрия. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин в течение 15 мин. Полученную бедную тромбоцитами плазму переносят в другую пробирку и помещают в анализатор для проведения исследования. Определяют фибринолитическую активность (ФА), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), продукты деградации фибрина (Д-димер) и международное нормализованное отношение (MHO) стандартными методами и вычисляют ИПК. При ИПК ≥1 риск ассоциированных с тромбозами осложнений беременности оценивается как высокий, при ИПК <1 – тромбогенный риск гестационных осложнений низкий.

Недостатком известного способа является множественность и неоднозначность вариантов интерпретации (толкования) полученных показателей коагулограммы.

Следствием неоднозначности интерпретации показателей коагулограммы является низкая для практического применения достоверность диагностики на основе полученных численных показателей коагулограммы. При этом достоверность получаемых результатов зависит от многих факторов, таких как:

- технические характеристики использованного для измерений прибора той или иной фирмы-производителя;

- комплектация оборудования;

- чистота и чувствительность используемых реагентов.

Например, поочередно применяя аналитическое оборудование и реагенты двух различных фирм-производителей для анализа функционального состояния системы гемостаза у одного и того же человека, получают несовпадающие, существенно различающиеся показатели.

Такое несовпадение существенно снижает результативность применения (эффективность) способа, и, как следствие, ограничивает область применения в медицинской практике известного способа по патенту RU 2429478.

Известен «Способ диагностики синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови» [Авторское свидетельство СССР SU 1520450, М.кл. G01N 33/86. Приоритет от 28.12.1987. Опубликовано 07.11.1989. Описание изобретения к а.с. БИ № 41]. Сущность способа заключается в том, что диагностику внутрисосудистого свертывания крови производят путем тромбоэластографии цитратной плазмы крови, и отличается способ тем, что, с целью ускорения и упрощения диагностики синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания, производят одновременно тромбоэлектро-графическое исследование равных объёмов цитратной крови и плазмы, определяют время коагуляции в этих пробах, вычисляют отношение первого показателя к второму и при величине его 1,1 и менее диагностируют синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

Недостатками известного способа являются низкая чувствительность известного способа, обусловленная высокой погрешностью измерений. Кроме того, известный способ обладает низкой воспроизводимостью результатов, приводящих к невозможности выявления существенных для практики тонких сдвигов (изменений, отклонений) в системе свертывания крови, что в свою очередь проводит низкой эффективности известного способа при использовании по назначению.

Известен способ (метод) оценки состояния клеточного звена гемостаза при помощи выполнения унифицированных скрининговых тестов на анализаторах оптико-механического типа [Макацария А. Д. Тромбофилии и противотромботическая терапии в акушерской практике. /А.Д.Макацария, В.О.Бицадзе. // -М.:Триада-Х, 2003. - 904с.]. Эти скрининговые тесты позволяют выявлять нарушения со стороны факторов-ферментов, факторов-субстратов, кофакторов, ингибиторов каскада свертывания крови, а также действие некоторых лекарственных препаратов или аутоантител. Анализатор представляет собой электромагнитомеханическое устройство для исследования свертывания (коагуляции) плазмы крови или крови в стационарных и поликлинических условиях.

Недостатком способа (метода) является то, что тесты, отражая изменения в отдельных звеньях системы гемостаза, не характеризуют общий свертывающий потенциал крови и, вследствие изложенного, не обеспечивают возможность достоверного прогнозирования возникновения тромбозов, которые играют ключевую роль в развитии тяжелых акушерских осложнений. Недостаток ограничивает область эффективного применения данного способа по назначению.

Известен «Способ доклинического прогнозирования невынашивания беременности» [Патент России RU 2123698]. «Способ доклинического прогнозирования невынашивания беременности», который осуществляется путем исследования крови, отличается тем, что определяют содержание растворимых фибрин-мономерных комплексов в плазме крови и при показателях более 5,5Ч10^-2 г/л; 6,5Ч10^-2 г/л и 7Ч10^-2 г/л соответственно в первом, втором и третьем триместрах беременности прогнозируют угрозу невынашивания беременности.

Недостатком является то, что известный способ обладает низкой для применения в практике чувствительностью и специфичностью, вследствие чего не удовлетворяет современным требованиям медицинской практики, предъявляемым к лабораторным тестам, что делает известный способ неприменимым для практики диагностики и прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности, что существенно ограничивает область применения способа назначению.

Известен «Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах» [патент России RU 2272574]. Сущностью является «Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах», его осуществляют путем исследования периферической крови беременной, отличается способ тем, что с 28-й недели гестации в сыворотке крови до и после проведения курса сохраняющей терапии определяют количественный показатель нитрат-ионов и при его увеличении на 10% или более относительно первоначального значения прогнозируют исход беременности в виде преждевременных родов.

Недостатком известного способа является то, что он обеспечивает возможность существенно запоздалого прогнозирования исхода беременности – только с 3-го триместра, и осуществляется с двукратным исследованием периферической крови беременной.

Вследствие запоздалого прогнозирования исхода беременности известное изобретение не позволяет еще при планируемой беременности и/или на ранних сроках беременности определить наличие или отсутствие риска привычного невынашивания беременности и не обеспечивает возможность своевременного, применения профилактических мер для минимизации вероятности невынашивания, предотвращения нежелательного исхода беременности.

Общеизвестно, что возможно более ранняя диагностика нарушений или болезни в организме и своевременно (на начальной стадии нарушения или болезни) предпринятое профилактическое лечение этих нарушений существенно позитивно результативнее по сравнению с последствиями запоздалого выявления и лечения нарушений или болезни в организме пациента. Недостатки существенно ограничивают область применения известного способа.

Известен способ диагностики нарушений системы гемостаза путём определения генетических полиморфизмов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени в препаратах ДНК человека и определение серологических маркеров антифосфолипидного синдрома (далее по тексту – АФС) при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) [Путилова Н.В. Вессел-Дуэ-Ф в профилактике тромбофилических осложнений у беременных с дефектами гемостаза / Н.В.Путилова, М.В.Сивова. // Уральский медицинский журнал № 12 (52), 2008. – С. 63-66.].

Данный способ имеет существенный недостаток – неоднозначность интерпретации результатов применения известного способа, так как он оценивает только генетическую предрасположенность к спонтанному прерыванию беременности , но не учитывает состояния гемостаза в конкретный момент времени у конкретного пациента, что может привести к прерыванию беременности, даже при отсутствии патологии на генетическом уровне, что ограничивает возможность постановки однозначного диагноза, вследствие наличия риска невынашивания беременности по иным, не связанным с генетикой, причинам.

Основываясь на изложенном, возможно сделать вывод общего характера о том, что имеется наличие существенных для практики не идентифицированных на дату представления заявочных материалов факторов, а именно - не выявленных изменений и отклонений в системе свертывания крови, наличие которых и приводит к невынашиванию беременности.

Неоднозначность интерпретации подтверждается и наличием общеизвестного в медицине факта – наличие отдельных полиморфизмов не всегда реализуется в нарушениях гемостаза.

Поэтому наличие отдельных полиморфизмов не характеризует фактическое состояние свертывающей системы крови у конкретного пациента, не определяет однозначно реальный риск развития гестационных осложнений, приводящих к невынашиванию беременности. Указанный недостаток не обеспечивает возможность эффективного применения известного способа по назначению.

Известен «Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах» [Патент России RU 2630573.]. Сущность изобретения заключается в том, что способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах путем исследования периферической венозной крови до начала сохраняющей терапии у беременных женщин с клиническими признаками угрожающих преждевременных родов в сроках гестации 24-34 недели, отличается тем, что в плазме крови определяют показатель резистентности активного фактора Va свертывания крови к активированному протеину С и при его значении, равном 0,94 или менее, прогнозируют преждевременные роды.

Недостатком является высокая специфичность известного способа, выражающаяся в сильной зависимости результатов от уровня квалификации исследователя (зависимость от влияния человеческого фактора), следствием чего является сложность его осуществления, особенно – для массового применения.

Недостаток существенно ограничивает область применения способа по патенту RU 2630573, делает известный способ не эффективным для диагностики и прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности в условиях массового применения.

По результатам анализа выявленного уровня техники наиболее близким аналогом по совокупности совпадающих признаков в целом - прототипом с заявленным техническим решением, но не используемого для диагностики и прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности, является «Способ оценки динамики и полноты ретракции (контракции) кровяного сгустка» [патент RU 2596926]. Сущность способа по прототипу заключается в том, что производят взятие пробы крови пациента в содержащие цитрат натрия емкости, берут двухканальную измерительную кювету, внутреннюю поверхность кюветы ополаскивают детергентом – раствором Тритона X-100 на хлориде натрия, затем удаляют остатки детергента, в цитратную кровь добавляют хлорид кальция и тромбин, кровь переносят в измерительную кювету, которую помещают в предварительно прогретую термостатируемую камеру, где в автоматическом режиме фоторегистрируют и фиксируют изменение размеров двумерного изображения сгустка крови, по результатам фиксации строят кинетическую кривую (график) зависимости изменения площади S проекции сгустка крови от времени t, по построенной кривой определяют и оценивают параметры динамики ретракции (контракции) сгустка крови, при этом характеризующие процесс средние значения - конечной степени ретракции сгустка крови здоровых доноров, равное 51,9%; лаг-период, равный 72,6 с; время достижения сгустка от исходного размера - 344,7 с; время достижения сгустка от конечного размера - 348,5 с; величину площади под кинетической кривой 785,2 у.е.; среднюю скорость ретракции 0,041 у.е./с принимают за норму, при отклонениях от указанных норм – диагностируют патологическое состояние системы гемостаза пациента. Частоту замеров и общее время измерения изменяют настройками прибора. Изменение размеров двумерного изображения сгустка крови регистрируют и фиксируют каждые 15 с в течение 20 мин. Образование сгустка и активацию тромбоцитов стимулируют добавлением к рекальцифицированной цитратной крови свежеразмороженного раствора тромбина до конечной концентрации 1 ЕД/мл. С использованием кинетической кривой ретракции определяют дополнительные параметры процесса ретракции крови. С использованием кинетической кривой ретракции определяют конечную степень ретракции сгустка крови. С использованием кинетической кривой ретракции определяют лаг-период. С использованием кривой ретракции определяют время сжатия сгустка на 1/4 от исходного размера. С использованием кинетической кривой ретракции определяют время достижения 1/2 от конечного сжатия сгустка. С использованием кинетической кривой ретракции определяют площадь под кривой. С использованием кинетической кривой ретракции определяют среднюю скорость ретракции.

Известный способ оценки динамики и полноты ретракции (контракции) кровяного сгустка, хотя во многом подобен заявленному техническому решению, но не решает весьма актуальную проблему диагностики для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности – из-за наличия существенных недостатков.

Недостаком известного способа при использовании по назначению является его пригодность только для общей, то есть неконкретной диагностики – наличия или отсутствия патологического состояния системы гемостаза пациента, при отсутствии возможности выявления (постановки) конкретного диагноза, а именно – для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности.

Прогнозирование вероятности спонтанного прерывания беременности невозможно из-за отсутствия в известном способе конкретных, присущих только этой патологии, цифровых характеристик и показателей патологического состояния системы гемостаза планирующей беременность пациентки, использование которых позволяет, как в заявленном техническом решении, достоверно диагностировать наличие или отсутствие риска спонтанного прерывания беременности будущей матери из-за патологического состояния её системы гемостаза.

Недостаток делает невозможным использование способа по патенту RU 2596926 для предварительного, на стадии планируемой беременности, прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности, что исключает возможность применения известного изобретения по назначению.

Анализ известных, наиболее информативных и применяемых в медицине способов прогнозирования спонтанного прерывания беременности позволяет сделать вывод общего характера, о том, что на дату представления заявочных материалов в мире отсутствует надежный и высокоэффективный способ прогнозирования тромботических осложнений у беременных женщин и связанного с тромботическими осложнениями риска невынашивания беременности.

Целью заявленного изобретения является своевременная, заранее, до наступления негативных последствий выполненная диагностика связанных с риском невынашивания беременности патологических изменений гемостаза у женщин. Такая диагностика обосновывает и обеспечивает принятие соответствующих мер медицинской терапии, снижающих вероятность невынашивания беременности.

Техническим результатом заявленного изобретения является способ диагностики часто встречающейся патологии беременных женщин, позволяющий медработникам принять меры предотвращения невынашиваемости плода (ребенка) еще заранее, например – на этапе планирования или на ранних стадиях беременности.

Врожденные и приобретенные нарушения гемостаза являются одним из патогенетических факторов невынашивания беременности, диагностика и прогнозирование которого (невынашивания) важны для профилактики акушерской патологии – диагностика позволяет выбрать и применять известные средства и меры профилактики патологии.

Сущностью заявленного технического решения является способ оценки динамики и полноты ретракции кровяного сгустка для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности, заключающийся в том, что

берут пробы крови пациентки в содержащие цитрат натрия емкости,

переносят цитратную кровь в пробирку и добавляют хлорид кальция и 1 ЕД/мл тромбина,

берут двухканальную измерительную кювету,

ополаскивают раствором Тритона X-100 на хлориде натрия внутренние поверхности каналов кюветы, удаляют остатки детергента,

переносят в измерительную кювету цитратную кровь с добавленным хлоридом кальция и тромбина,

проводят фотофиксацию в автоматическом режиме изменения размеров двумерного изображения сгустка крови,

проводят построение по результатам фиксации кинетической кривой зависимости изменения площади проекции сгустка от времени,

определяют и оценивают по построенной кривой параметры динамики контракции сгустка крови, отличающийся тем, что

производят измерение температуры тела обследуемой пациентки,

в термостатируемой камере устанавливают температуру тела обследуемой пациентки,

измерительную кювету с исследуемой кровью помещают в термостатируемую камеру;

производят диагностику путём сравнения показателей кинетики контракции сгустка крови обследуемой пациентки с усредненными показателями кинетики контракции сгустка крови ранее рожавших небеременных женщин без отягощенного акушерского анамнеза и предшествующих осложнений беременности и принятыми за норму:

– конечной степени контракции сгустка К = 42±1%, в % от начального размера изображения сгустка крови,

– лаг-период = 199±17 сек,

– площадь S под кривой кинетики контракции = 304±16 у.е.,

– cредняя скорость контракции = 0,034 ±0,001 % /сек

и при:

– уменьшении конечной степени контракции сгустка крови К менее 37±2% при норме 42±1%,

– увеличении лаг-периода A более 257±21 сек при норме 199±17 сек,

– уменьшении площади S под кривой контракции сгустка крови менее 260±15 у.е. при норме 304±16 у.е.,

– уменьшении средней скорости контракции менее 0,031±0,001 %/ сек, при норме 0,034 ±0,001 %/сек

диагностируют высокую вероятность невынашивания беременности вследствие тромботических осложнений и принимают профилактические меры медицинской помощи.

Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг.1 – Фиг.2.

На Фиг.1 приведены графики, показывающие результат осуществления заявленного способа путём оценки динамики и полноты контракции сгустков крови: небеременных женщин с привычным

невынашиванием беременности и небеременных женщин без этого отягощенного акушерского анамнеза, где:

1 – кинетическая кривая (график) контракции сгустков крови небеременных женщин с привычным невынашиванием беременности;

2 – кинетическая кривая (график) контракции сгустков небеременных женщин без отягощенного акушерского анамнеза;

- по оси Х отложена продолжительность времени t контракции сгустка крови, в секундах (сек);

- по оси Y отложена степень контракции сгустка крови K, %;

- А – конечная степень контракции, %;

- В – лаг-период, сек;

- S – площадь под кинетической кривой (в условных единицах, например – см², далее по тексту – у.е.);

На Фиг.2 приведена Таблица сопоставительного анализа прототипа и заявленного способа.

Заявленное техническое решение в целом осуществляют, например, следующим путем.

Исследование проводят у пациентки, определяющей состояние своего здоровья как нормальное, не проявляющей видимые признаки наличия заболевания, например – простудного, преимущественно утром, натощак.

Измеряют и определяют температуру тела обследуемой пациентки. Производят взятие пробы крови пациентки в емкости, например – в известные вакуумные пробирки, содержащие 3,8% цитрата натрия, например, фирмы Vacuette TUBE (Greiner Bio-One GmbH, Австрия), в соотношении 9:1 (кровь : цитрат натрия) по объёму.

Для определения контракции сгустка крови используют кювету, преимущественно двухканальную, например – размером 12×7×1 мм, производства компании «ГемаКор», Россия. Для предотвращения прилипания сгустка к внутренним стенкам кюветы, её (кювету) ополаскивают 4%-ным раствором Тритона Х-100 в 0,15М NaCl.

Для запуска процесса свертывания крови и активации тромбоцитов к цитратной крови добавляют 2 мМ хлорида кальция и 1 ЕД/мл тромбина (конечная концентрация), таким образом получают рекальцифицированную цитратную кровь – исследуемый образец крови.

Затем в каждый из каналов прозрачной кюветы переносят по 80 мкл образца, а саму кювету помещают в прогретую до ранее измеренной температуры тела пациентки камеру регистрирующего прибора, например – «Регистратора Тромбодинамики» (производства фирмы «ГемаКор», Россия) и двумерные изображения (проекции) сгустков крови фоторегистрируют, например – автоматически, каждые 15 сек в течение 1200 секунд (20 мин).

При мéньшей 1200 сек (20 мин) продолжительности фоторегистрации существенно снижается достоверность результата, при бóльшей продолжительности фоторегистрации – достоверность результата повышается несущественно.

Для применения в медицинской практике продолжительность процесса фоторегистрации сгустка крови в течение 1200 сек является оптимальной – за однократное посещение пациенткой медицинского учреждения, без излишней затраты времени, удается выполнить высокодостоверную диагностику возможных осложнений планируемой беременности, что позволяет своевременно применять профилактическое лечение и по сравнению с прототипом существенно расширяет область применения способов диагностики.

На Фиг.1 приведены графики, показывающие результат осуществления заявленного способа путём оценки динамики и полноты контракции сгустков крови: небеременных женщин с привычным невынашиванием беременности и небеременных женщин без этого отягощенного акушерского анамнеза.

Кинетическую кривую (график) контракции сгустка крови в зависимости от времени строят, используя результаты фоторегистрации происходящих изменений в образце сгустка крови.

На Фиг.1 показана усредненная (по 50 пациенткам) кинетическая кривая 1 (с показом среднего значения ± стандартной ошибки среднего значения) контракции сгустка крови женщин, до планируемой беременности, имевших привычное (многократное) невынашивание беременности (ПНБ) в анамнезе.

Таким образом, из приведенного на Фиг.1 графика видно, что кинетическая кривая 1 контракции крови женщин с ПНБ лежит достоверно ниже кинетической кривой 2, отражающей процесс контракции сгустков крови у женщин без отягощенного акушерского анамнеза.

Кинетическая кривая 2 контракции сгустков крови здоровых женщин ограничивает существенно бóльшую площадь S₂ под кинетической кривой 2 по сравнению с площадью S₁ под кинетической кривой 1.

Соответственно, кинетическая кривая 1 контракции сгустка крови женщин с привычным невынашиванием беременности (ПНБ) ограничивает существенно мéньшую площадь S₁ фигуры между осью координат Х и кривой 1 (под кривой 1) по сравнению с площадью S₂ фигуры под кинетической кривой 2 контракции сгустков крови здоровых женщин. Различие между величинами площадей S₁ и S₂ отражает снижение, по сравнению с нормой, степени контракции сгустка крови женщин с ПНБ.

Изменение показателей контракции у женщин с ПНБ в сторону угнетения контракции имеет существенное значение и является основанием для достоверной диагностики (про)тромботических состояний и прогнозирования тромботического риска, а также результатов профилактики и лечения тромбозов.

Далее заявителем представлена более детальная и конкретизированная информация о достоверности прогноза по заявленному способу.

На Фиг.1 показаны экспериментально полученные кинетические кривые конечных степеней контракции А сгустков крови:

– вынашивающих беременность здоровых женщин (кинетическая кривая 2);

– женщин, до беременности (планируемой) имеющих привычное невынашивание (кинетическая кривая 1).

Усредненные показатели конечной степени контракции (К_2А ≈43%) сгустков крови А (кинетическая кривая 2) приняты в качестве 100% (стопроцентно) достоверной информации, свидетельствующей об отсутствии вероятности спонтанного прерывания беременности (риска) невынашивания беременности, а именно – из-за угрозы развития предт тромботических и тромботических состояний.

Показатели контракции (К_1А ≈37%) сгустков крови А (кинетическая кривая 1) женщин, до беременности имеющих привычное невынашивание, свидетельствуют о наличии вероятности спонтанного прерывания беременности (риска) из-за угрозы развития предтромботических и тромботических состояний. Показатели (К_2А – К_1А) = (43% – 37%)= 6%.

Это позволяет утверждать, что заявленный способ позволяет с достаточной для медицинской практики достоверностью более 90% [(100% – 6%) = 94% > 90%] диагностировать вероятность спонтанного прерывания беременности и при необходимости назначить антикоагулянтную или антиагрегантную терапию.

Ниже представлены средние значения принятых за норму и характеризующих кинетику контракции расчетных параметров, полученных на образцах крови небеременных женщин, ранее рожавших без отягощенного акушерского анамнеза и предшествующих осложнений беременности:

1) конечная степень контракции сгустка К = (42±1)% (конечный размер сжимающегося сгустка в % от начального размера сгустка крови);

2) лаг-период В = (199±17) сек;

3) площадь под кинетической кривой S₂ = (304±16) условных единиц (по тексту – у.е.)

4) cредняя скорость контракции = (0,034 ±0,001) % /сек.

Отклонения от указанных нормальных значений свидетельствуют о приводящих к прерыванию беременности патологических изменениях системы гемостаза в организме пациентки. Поскольку движущей силой контракции сгустка являются тромбоциты, заявленный способ используют прежде всего как тест для характеристики количества и функционального состояния тромбоцитов. Снижение (по сравнению с нормой) или отсутствие контракции сгустка свидетельствует о возможных предтромботических и тромботических состояниях, которые могут стать причиной наличия риска прерывания беременности. Например, при снижении количества тромбоцитов до 110 тыс/мкл наблюдается падение степени контракции К сгустка до 14% при норме (42±1)%.

Заявленный способ прогнозирования применим в комплексной диагностике заболеваний, связанных с рисками тромботических осложнений, приводящих к невынашиванию беременности.

У пациенток с привычным невынашиванием беременности (ПНБ) при использовании заявленного технического решения наблюдаются и выявляются отклонения от нормальных значений следующих параметров:

1) конечная степень контракции К_1A сгустка крови уменьшается в пределах К_1A = (37±2)%, при норме К_2A = (42±1)%;

2) лаг-период увеличивается в пределах (257±21) сек, при норме (199±17) сек;

3) площадь S₁ под кривой 1 уменьшается в пределах (260±15) условных единиц, при норме (304±16) у.е.;

4) cредняя скорость контракции уменьшается в пределах (0,031±0,001) %/сек, при норме (0,034±0,001) %/сек.

При получении свидетельствующих о патологии результатов обследования по усмотрению врача дополнительно делают развернутый анализ крови с лейкоформулой, оценку функционального состояния тромбоцитов и последующей консультацией гематолога. Совместное определение кинетики контракции сгустков крови и коагулограммы позволяет провести дифференциальную (различительную и уточненную) диагностику нарушений системы гемостаза у пациента и с достаточной для медицинской практики достоверностью (более 90%) диагностировать вероятность спонтанного прерывания беременности и при выявлении патологических показателей назначить антикоагулянтную или антиагрегантную терапию.

Важно отметить, что при этом результаты скрининговых тестов (активированного частичного тромбопластинового времени, протромбинового и тромбинового времени) остаются в пределах нормы.

Отклонение от нормальных показателей динамики и полноты контракции сгустков крови у пациенток данной группы, выявляемое только с применением заявленного способа, свидетельствует о высокой вероятности приводящих к невынашиванию беременности тромботических осложнений и необходимости их профилактики.

Заявленный способ прогнозирования спонтанного прерывания беременности путем контракции сгустка крови позволяет прогнозировать возможные (пред)тромботические состояния, которые могут развиться у женщин в процессе беременности и привести к прерыванию беременности.

Предлагаемое изобретение актуально для женщин, не принимающих антикоагулянтных, антиагрегантных и тромботических препаратов, а также не имеющих доказанный антифосфолипидный синдром.

Заявленный способ показал высокую эффективность при его (способа) использовании в медицинских учреждениях города Казань.

Пример 1. Пациентка М., 31 год, планируемая беременность четвертая, желательная. В анамнезе 2 выкидыша на малых сроках, кесарево сечение на 40-й неделе.

Проведено исследование по описанному выше заявленному способу: взяли пробу крови пациентки в содержащие цитрат натрия емкости, перенесли цитратную кровь в пробирку и добавили хлорид кальция и 1 ЕД/мл тромбина, взяли двухканальную измерительную кювету, ополаскивали раствором Тритона X-100 на хлориде натрия внутренние поверхности каналов кюветы, удалили остатки детергента, перенесли в измерительную кювету цитратную кровь с добавленным хлоридом кальция и тромбина, поместили кюветы в предварительно прогретую термостатируемую камеру, провели фотофиксацию в автоматическом режиме изменения размеров двумерного изображения сгустка крови, провели построение по результатам фиксации кинетической кривой (графика) зависимости изменения площади проекции сгустка от времени, определили и оценили по построенной кривой параметры динамики контракции сгустка крови, исследование проводили на этапе планирования пациенткой М. беременности – степень контракции составила 28%, лаг-период 135 сек, площадь под кинетической кривой 190 у.е, cредняя скорость контракции 0,023 %/сек. После этого проведены развернутый анализ крови с лейкоформулой, оценка функционального состояния тромбоцитов, консультация гематолога. Согласно анализам, определено наличие вероятности спонтанного прерывания беременности (наличие риска выкидыша при беременности).

Диагноз: носительство генетических протромботических полиморфизмов. Гиперкоагуляционный синдром.

Заключение: прогноз исхода беременности – выкидыш, в случае отсутствия специфической профилактики.

Для предотвращения нежелательного исхода планируемой беременности пациентке была назначена профилактическая терапия антикоагулянтами.

Пациентка забеременела, на 5 неделе степень контракции составила 17%, лаг-период 720 сек, площадь под кинетической кривой 72 у.е., cредняя скорость контракции 0,014 %/сек. Рекомендованные процедуры и терапевтическое лечение для предотвращения нежелательного исхода планируемой беременности пациенткой выполнены лишь частично, не в полной мере, с нарушениями сроков приема лекарств.

Основанный на заявляемом способе прогноз впоследствии подтвердился – на 6-й неделе беременности произошел выкидыш. Это подтвердило достоверность диагностики по заявленному способу.

Пример 2. Пациентка В., 27 лет, планируемая беременность третья, желательная. В анамнезе 1 выкидыш на малых сроках, 1 выкидыш на 19 неделе беременности.

Проведено исследование по описанному выше заявленному способу: контракция сгустка крови исследована на этапе планирования пациенткой В. беременности – степень контракции составила 16%, лаг-период 555 сек, площадь под кинетической кривой 83 у.е, cредняя скорость контракции 0,001%/сек. После чего проведены развернутый анализ крови с лейкоформулой, оценка функционального состояния тромбоцитов, консультация гематолога. Согласно анализам определено наличие вероятности спонтанного прерывания беременности (наличие риска выкидыша при беременности).

Диагноз: носительство генетических протромботических полиморфизмов.

Заключение: прогноз исхода беременности – выкидыш, в случае отсутствия специфической профилактики.

Для предотвращения нежелательного исхода планируемой беременности пациентке была назначена профилактическая терапия антикоагулянтами.

Пациентка забеременела, на 5 неделе степень контракции составила 41%, лаг-период 240 сек, площадь под кинетической кривой 252 у.е., cредняя скорость контракции 0,027 %/сек. Рекомендованные процедуры и терапевтическое лечение для предотвращения нежелательного исхода планируемой беременности пациенткой выполнены. Показатели контракции на 5 неделе говорят о нормализации состояния гемостаза и эффективности терапии, что подтверждает благоприятный исход беременности.

Основанный заявляемым способом прогноз впоследствии подтвердился – терапия помогла, беременность прошла без осложнений, родился здоровый ребенок. Это подтвердило достоверность диагностики по заявленному способу.

Таким образом, из описанных выше жизненных примеров можно сделать логический вывод, что заявителем достигнуты поставленные задачи и заявленный технический результат путем заявленной совокупности существенных признаков, включенных в независимый пункт формулы изобретения. А именно – с использованием заявленного технического решения возможна (практически осуществима) своевременная, заранее, до наступления негативных последствий выполненная диагностика патологических изменений гемостаза у женщин, связанных с риском невынашивания беременности. Диагностика обеспечивает принятие соответствующих мер медицинской терапии, снижающих риск невынашивания беременности – как планируемых, так и на ранних стадиях беременности.

Диагностика в результате применения заявленного способа по сравнению с прототипом является объективной, основанной на инструментальных измерениях, в отличие от присущего прототипу наличию влияния субъективных (вносимых человеком-исследователем) диагностических факторов. Например, заявленный способ не зависит от уровня квалификации выполняющего исследование работника, его физического и психологического состояния – так как способ является выполняемым инструментально и основанным на процессах, выполняемых с минимальным и несущественным вмешательством человека (оператора). Несущественным потому, что участие диагностирующего человека сводится лишь к запуску не влияющей на процесс контракции фотографической фиксации в автоматизированном режиме серии изображений двумерной проекции сгустка крови с последующей компьютерной обработкой и компьютерным расчетом параметров процесса. Полученные результаты – объективны, так как избавлены от влияния субъективных факторов, и более информативны, так как оценивают динамику контракции определяемыми стандартным способом количественными параметрами.

Осуществляемая по заявленному техническому решению оценка процесса контракции кровяного сгустка избавлена от недостатков аналогов и прототипа, позволяет ввести в медицинскую практику новый способ для диагностики женщин с привычным невынашиванием беременности (ПНБ) из-за нарушений гемостаза, что, по данным ВОЗ, поможет сохранить беременность более 2,5 млн. женщин.

Заявленное техническое решение повышает достоверность диагностики, способствует результативной профилактике нарушений и повышению рождаемости. Итогом применения заявляемого способа является повышение качества жизни людей, способствующее решению демографических проблем.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как при определении уровня техники не обнаружено средство, которому присущи признаки, идентичные (то есть совпадающие по исполняемой ими функции и форме выполнения этих признаков) всем признакам, перечисленным в формуле изобретения, включая характеристику назначения.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, поскольку из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, имеющие признаки, совпадающие с существенными признаками заявленного изобретения, и не установлена известность влияния существенных признаков на указанный технический результат.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, так как может быть осуществлено с применением имеющихся в свободном доступе известных отечественных инструментов, оборудования, материалов, реактивов, комплектующих деталей и узлов, при этом может быть за короткий срок освоен медицинским персоналом и использован в практической деятельности медицинских учреждений.

Изобретение относится к области медицины. Способ оценки динамики и полноты ретракции кровяного сгустка для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности заключается в том, что берут пробы крови пациентки в содержащие цитрат натрия емкости, переносят цитратную кровь в пробирку и добавляют хлорид кальция и 1 ЕД/мл тромбина, берут двухканальную измерительную кювету, ополаскивают раствором Тритона X-100 на хлориде натрия внутренние поверхности каналов кюветы, удаляют остатки детергента, переносят в измерительную кювету цитратную кровь с добавленным хлоридом кальция и тромбина, проводят фотофиксацию в автоматическом режиме изменения размеров двумерного изображения сгустка крови, проводят построение по результатам фиксации кинетической кривой зависимости изменения площади проекции сгустка от времени, определяют и оценивают по построенной кривой параметры динамики контракции сгустка крови, при этом производят измерение температуры тела обследуемой пациентки, в термостатируемой камере устанавливают температуру тела обследуемой пациентки, измерительную кювету с исследуемой кровью помещают в термостатируемую камеру; производят диагностику путём сравнения показателей кинетики контракции сгустка крови обследуемой пациентки с усредненными показателями кинетики контракции сгустка крови ранее рожавших небеременных женщин без отягощенного акушерского анамнеза и предшествующих осложнений беременности и принятыми за норму. Изобретение обеспечивает диагностику часто встречающейся патологии беременных женщин, позволяющую медработникам заранее принять меры предотвращения невынашиваемости плода. 2 пр., 2 ил.

Способ оценки динамики и полноты ретракции кровяного сгустка для прогнозирования вероятности спонтанного прерывания беременности, заключающийся в том, что

берут пробы крови пациентки в содержащие цитрат натрия емкости,

переносят цитратную кровь в пробирку и добавляют хлорид кальция и 1 ЕД/мл тромбина,

берут двухканальную измерительную кювету,

ополаскивают раствором Тритона X-100 на хлориде натрия внутренние поверхности каналов кюветы, удаляют остатки детергента,

переносят в измерительную кювету цитратную кровь с добавленным хлоридом кальция и тромбина,

проводят фотофиксацию в автоматическом режиме изменения размеров двумерного изображения сгустка крови,

проводят построение по результатам фиксации кинетической кривой зависимости изменения площади проекции сгустка от времени,

определяют и оценивают по построенной кривой параметры динамики контракции сгустка крови, отличающийся тем, что

производят измерение температуры тела обследуемой пациентки,

в термостатируемой камере устанавливают температуру тела обследуемой пациентки,

измерительную кювету с исследуемой кровью помещают в термостатируемую камеру;

производят диагностику путём сравнения показателей кинетики контракции сгустка крови обследуемой пациентки с усредненными показателями кинетики контракции сгустка крови ранее рожавших небеременных женщин без отягощенного акушерского анамнеза и предшествующих осложнений беременности и принятыми за норму:

– конечной степени контракции сгустка К = 42±1%, в % от начального размера изображения сгустка крови,

– лаг-период = 199±17 с,

– площадь S под кривой кинетики контракции = 304±16 у.е.,

– cредняя скорость контракции = 0,034 ±0,001 %/с

и при:

– уменьшении конечной степени контракции сгустка крови К менее 37±2% при норме 42±1%,

– увеличении лаг-периода A более 257±21 с при норме 199±17 с,

– уменьшении площади S под кривой контракции сгустка крови менее 260±15 у.е. при норме 304±16 у.е.,

– уменьшении средней скорости контракции менее 0,031±0,001 %/с, при норме 0,034 ±0,001 %/с

диагностируют высокую вероятность невынашивания беременности вследствие тромботических осложнений и принимают профилактические меры медицинской помощи.