Ингаляционный гексапептид для лечения респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6 Российский патент 2020 года по МПК A61K9/72 A61K38/08 A61P11/00 A61P31/00 

Область изобретения

[0001] Настоящее изобретение относится к области здравоохранения. Более конкретно, изобретение относится к применению ингаляционного гексапептида в лечении респираторных заболеваний, связанных с повышенной продукцией интерлейкина-6.

Предпосылки создания изобретения

[0002] Респираторные заболевания, также известные как заболевания легких, представляют собой группу заболеваний, поражающих дыхательную систему. В соответствии с Международной классификацией болезней 10-й редакции Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), заболевания дыхательной системы классифицируются как острые инфекции верхних дыхательных путей (J00-J06), грипп и пневмония (J09-J18), другие острые нижние респираторные инфекции (J20-J22), другие заболевания верхних дыхательных путей (J30-J39), хронические заболевания нижних дыхательных путей (J40-J47), заболевания легких, вызванные внешними агентами (J60-J70), другие респираторные заболевания, главным образом влияющие на интерстиций (J80-J84), гнойные и некротические состояния нижних дыхательных путей (J85-J86), другие заболевания плевры (J90-J94) и другие заболевания дыхательной системы (J95-J99). Респираторные заболевания являются основными причинами смерти и инвалидности в мире. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) поражает более 200 миллионов человек в мире. Астма поражает до 334 миллионов человек по всему миру. Инфекции нижних дыхательных путей и пневмония являются двумя основными причинами смерти, ежегодно приводя к более чем 4 миллионам смертей. Форум международных респираторных обществ. Forum of International Respiratory Societies. The Global Impact of Respiratory Disease. 2^nd Edition. Sheffield, European Respiratory Society, 2017.

[0003] Интерлейкин-6 (IL-6) представляет собой небольшой цитокин (21 кДа), который вырабатывается клетками врожденной иммунной системы и эпителиальными клетками легких. IL-6 является основным регулятором острой фазы иммунного процесса и выработки антител. Однако перепроизводство IL-6 способствует развитию различных респираторных заболеваний и связано с тяжестью этих заболеваний. Повышенная экспрессия IL-6 в эпителиальных клетках легких наблюдалась у пациентов с астмой и другими респираторными заболеваниями. Rincon M., Irvin CG. Role of IL-6 in asthma and other inflammatory pulmonary diseases. Int J Biol Sci. 2012;8(9):1281-90. Повышенные уровни IL-6 были обнаружены у пациентов с астмой. Yokoyama A. et al. Am J Respir Crit Care Med. 1995 May;151(5):1354-8. Повышенные уровни IL-6 являются прогностическими факторами увеличения смертности у пациентов с ХОБЛ. Celli BR et al.. Am J Respir Crit Care Med. 2012, 185(10):1065-72. Повышенные уровни IL-6 были связаны с острым респираторным дистресс-синдромом (ОРДС) и пневмонией, вызванной различными вирусными инфекциями. McGonagle D. et al. Autoimmun Rev. 2020, 19(6):102537. Liu B. et al. J Autoimmun. 2020, 111:102452. Повышенные уровни IL-6 наблюдались при пневмонии, вызванной вирусом гриппа A/H1N1. Davey RT Jr et al. PLoS One. 2013;8(2):e57121. Повышенные уровни IL-6 предсказывали тяжесть заболевания у пациентов с внебольничной пневмонией. Ramírez P. et al. Crit Care Med. 2011, 39(10):2211-7. Высокие концентрации IL-6 в сыворотке и жидкости бронхоальвеолярного лаважа были связаны с тяжестью заболевания и плохим исходом у пациентов с пневмонией. Bordon J. et al. Int J Infect Dis. 2013, 17(2):e76-83. Более высокие уровни IL-6 были связаны с ранней смертностью пациентов с внебольничной пневмонией. Bacci MR et al. J Med Biol Res. 2015, 48(5):427-32. Повышение концентрации IL-6 отражает тяжесть заболевания у пациентов с внебольничной пневмонией. Zobel K. et al. BMC Pulm Med. 2012, 12:6. Концентрации IL-6 были ниже у выживших пациентов, чем у невыживших пациентов с внебольничной пневмонией. Lee YL et al. J Crit Care. 2010, 25(1):176.e7-13. Повышенные уровни IL-6 были связаны с легочным фиброзом. Papiris SA et al. Cytokine. 2018, 102:168-172. Повышенные уровни IL-6 увеличивали риск смерти у госпитализированных пациентов с пневмонией.. Andrijevic I. et al. Ann Thorac Med. 2014, 9(3):162-7. Таким образом, избыточная экспрессия IL-6 способствует развитию тяжести респираторных заболеваний. Следовательно, существует большая потребность в безопасных и эффективных подходах для противодействия активности IL-6 у пациентов с респираторными заболеваниями.

[0004] Коронавирусная инфекция 2019 (COVID-19) вызывается вирусом SARS-CoV-2 и характеризуется диффузным альвеолярным повреждением легких, микротромбозами и синдромом высвобождения цитокинов. Повышенные уровни IL-6 связаны с острым респираторным дистресс-синдромом (ARDS) и пневмонией, вызванной вирусом SARS-CoV-2. McGonagle D. et al. Autoimmun Rev. 2020, 19(6):102537. Раннее повышение уровня IL-6 предсказывало внутрибольничную смертность у пациентов с COVID-19. Luo M. et al. JCI Insight. 2020:139024. Повышенные уровни IL-6 у пациентов с COVID-19 были предиктором более тяжелого течения заболевания и необходимости интенсивной терапии. Gubernatorova EO et al. Cytokine Growth Factor Rev. 2020, 53:13-24. Мета-анализ ряда исследований COVID-19 показал, что пороговый уровень IL-6 1,7 пг/мл в сыворотке больных COVID-19 можно использовать в качестве разграничителя между тяжелыми и нетяжелыми формами заболевания. Henry BM et al. Clin Chem Lab Med. 2020, 58(7):1021-1028. Следовательно, существует большая потребность в безопасных и эффективных подходах для снижения активности IL-6 у пациентов с COVID-19.

[0005] Антагонисты интерлейкина-6 представляют собой класс терапевтических средств, которые направлены против самого IL-6 (например, силтуксимаб) или рецептора IL-6 (например, тоцилизумаб). Тоцилизумаб представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональное антитело к человеческому рецептору интерлейкина-6 подкласса иммуноглобулина IgG1 с молекулярной массой приблизительно 148 кДа. Европейский патент 0628639B; Патент США 5795965; Японский патент 3370324B. Тоцилизумаб связывается как с мембранными (mIL-6R), так и с растворимыми (sIL-6R) рецепторами интерлейкина-6 (IL-6R), тем самым снижая действие IL-6. Национальная комиссия по здравоохранению Китая включила использование тоцилизумаба в руководства по лечению пациентов с COVID-19. Было показано, что тоцилизумаб снижает тяжесть заболевания COVID-19 и смертность в группе пациентов с COVID-19. Zhang C. et al. Int J Antimicrob Agents. 2020, 55(5):105954. Xu X. et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2020, 117(20):10970-10975. Однако эффективность и безопасность антагонистов интерлейкина-6 при лечении COVID-19 еще не была продемонстрирована в решающих многоцентровых клинических испытаниях фазы 3.

[0006] Гексапептид H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH представляет собой аналог динорфина A (1-6) с заменой Gly на D-Ala в положении 2 аминокислотной последовательности. Гексапептид является сильным основанием и используется в форме нетоксичных солей с кислотами. Диацетатная соль гексапептида является коммерчески доступным лекарственным средством в Российской Федерации в форме инъекций под названием даларгин для лечения заболеваний пищеварительной системы, в частности острого панкреатита, язв желудка и двенадцатиперстной кишки, с историей клинического применения более 30 лет. Гексапептид продемонстрировал широкий спектр биологических активностей в диапазоне доз от 1 до 1000 мкг/кг массы тела млекопитающего. Использование гексапептида в виде внутримышечных инъекций или внутривенных вливаний, раскрыты в патентах RU 2032422, 2241488, 2198641, 2104717, 2270025, 2351334, 2343885, 2405534, 2363455, 2515550, 2180598, 2635083, 2436588, 2473325, 2144831, 2646569, 2200026, 2146530, 2155608, 2185176, 2139725, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2416398, 2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416, 2228762, 2185849, 2496493, 2366417, 2017488, 2167671, 2181564, 2284192, 2290203, 2286793, 2366432, 2299065, 2429002, 2196603, 2142814, 2285522, 2203693, 2230549, 2180591, 2142736, 2113856, 2217139, 2266752, 2261722, 2362580, 2223741, 222814869, 2217186, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2657416, 2416398, 2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416. Было показано, что инъекции гексапептида полезны для снижения уровней IL-6 в плазме крови пациентов, страдающих от ишемической болезни сердца. Dontsov AV. Klin Med (Mosk). 2017, 95(2):127-31. Патент RU 2672888 раскрывает применение интраназального гексапептида в качестве агента, обладающего прямой противовирусной активностью, при лечении острых респираторных вирусных инфекций. Внутримышечные инъекции гексапептида использовались для лечения пневмонии у взрослых. Borovskaya et al. Bulletin physiology and pathology of respiration. 2004, 17:85-88. Внутривенные вливания гексапептида использовались для лечения респираторного дистресс-синдрома у новорожденных. Биченов Р.Г. Роль даларгина в комплексном лечении новорожденных детей с респираторным дистресс-синдромом. 14.00.37. Анестезиология и реанимация. Кандидатская диссертация. Ростов-на-Дону, 2000. Однако эффективность лечения респираторных заболеваний с использованием инъекционных форм гексапептида ограничена, во-первых, очень быстрым удалением гексапептида из кровообращения с периодом полураспада в несколько минут из-за быстрого расщепления пептидазами и, во-вторых, очень низкой абсорбции гексапептида тканями легких, составляющей 0,4% от общей дозы препарата, вводимого путем внутривенной инъекции. Kalenikova EI et al. Pharmacokinetics of dalargin. Problems of Biological, Medical and Pharmaceutical Chemistry. 1988, 34 (1): 75-83.

[0007] Внутрилегочная доставка лекарств представляет собой способ введения, который обеспечивает непосредственное местное лечение респираторных заболеваний. По сравнению с внутривенными или внутримышечными инъекциями этот способ обеспечивает безболезненную и безопасную альтернативу. Однако повышение концентрации пептидаз, таких как эластаза и катепсин G из нейтрофилов в легких, возникающих при воспалении, было определено как потенциальный барьер для доставки пептидов при вдыхании для лечения респираторных заболеваний, поскольку эти ферменты способствуют быстрой гидролитической деградации пептидов в легких. Fellner RC et al. Mol Cell Pediatr. 2016, 3(1):16. Было обнаружено, что патологические высокие концентрации IL-6 вызывают дегрануляцию нейтрофилов и значительное доза-зависимое высвобождение нейтрофильных пептидаз. Bank U. et al. Inflammation. 1995, 19(1):83-99. В этом контексте повышенная активность нейтрофильных пептидаз в легких, вызванная повышенными концентрациями IL-6, является потенциальным барьером для доставки пептидов путем ингаляций для лечения респираторных заболеваний, связанных с повышенной продукцией IL-6.

[0008] Из уровня техники ничего не известно об эффективности введенного в легкие гексапептида формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH или его солей в лечении респираторных заболеваний, связанных с повышенной продукцией IL-6.

Краткое описание изобретения

[0009] Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что вводимый внутрилегочно гексапептид формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

значительно более эффективен для предотвращения, уменьшения или устранения симптомов респираторных заболеваний, связанных с IL-6, у млекопитающего по сравнению с тем же гексапептидом в той же дозе, но вводимым путем инъекций.

[0010] Первый аспект изобретения относится к применению гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

[0011] Согласно другому аспекту, изобретение относится к применению водной фармацевтической композиции, содержащей гексапептид формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

[0012] В соответствии с другим аспектом, изобретение относится к способу лечения респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, который включает стадию легочного введения эффективного количества гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли в млекопитающего, нуждающегося в этом.

[0013] В предпочтительном варианте осуществления изобретения, фармацевтически приемлемой солью гексапептида формулы (I) является диацетат.

[0014] В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, респираторное заболевание, связанное с интерлейкином-6, выбирают из группы, состоящей из острого респираторного дистресс-синдрома, острой инфекции нижних дыхательных путей, пневмонии, отека легких, бронхита, трахеобронхита, хронической обструктивной болезни легких и астмы. Более предпочтительно, острая инфекция нижних дыхательных путей представляет собой COVID-19.

[0015] В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, гексапептид формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в легкие в форме аэрозоля с размером частиц от 0,1 до 10 микрон, более предпочтительно, от 1 до 5 микрон.

[0016] В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, водную фармацевтическую композицию, содержащую гексапептид формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, вводят в легкие в форме аэрозоля с размером частиц от 0,1 до 10 микрон, более предпочтительно от 1 до 5 микрон.

[0017] В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, эффективное количество гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в способе по изобретению составляет от 0,001 до 1,00 мг на кг массы тела млекопитающего.

[0018] Из-за легочного пути введения гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли данное изобретение обеспечивает безболезненную и безопасную альтернативу инъекциям гексапептида в ходе лечения респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6.

[0019] Из-за прямой местной доставки гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в легкие данное изобретение обеспечивает особенно выгодный способ для достижения терапевтически эффективных уровней гексапептида (I) в легком, которые не могут быть достигнуты с инъекциями гексапептида (I).

[0020] Из-за улучшенной доставки гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в легкие путем легочного введения данное изобретение обеспечивает особенно выгодные композиции и способы по сравнению с инъекциями гексапептида для предотвращения, ослабления или устранения симптомов респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6, у млекопитающих, нуждающихся в этом.

Краткое описание рисунков

[0021] На РИС.1 показаны репрезентативные гистологические препараты легких мышей, окрашенные гематоксилин-эозином, полученные до (0 ч) и после (24, 72 и 120 ч) индукции острого повреждения легких, характеризующегося повышенным уровнем интерлейкина- 6 в легких.

[0022] На РИС.2 показаны средние уровни мРНК ± ошибка среднего для интерлейкина-6 в легких здоровых мышей («Интактные»); мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида («ЛПС»); мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида, леченных внутримышечными инъекциями гексапептида (I) диацетата («ЛПС+ГП(I) в.м.»); и мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида, леченных ингаляциями гексапептида (I) диацетата («ЛПС+ГП(I) инг.»).

[0023] На РИС.3 показаны кривые выживаемости Каплана-Мейера для мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида («ЛПС»); мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида, получавших внутримышечные инъекции диацетата гексапептида (I) («ЛПС+ГП(I) в.м.»); и мышей с острым повреждением легких, вызванным последовательным введением α-галактозилцерамида и липополисахарида, леченных ингаляционным ведением в легкие гексапептида (I) диацетата («ЛПС+ГП(I) инг.»).

[0024] На РИС.4 показан процент пациентов с тяжелой формой COVID-19, отвечающих на стандартную терапию («Контроль») или внутрилегочные ингаляции диацетата гексапептида (I) («ГП(I) инг»). Пациент с уровнем IL-6 в сыворотке менее 1,7 пг/мл после лечения считался отвечающим на терапию («респондером»), а с уровнем IL-6 в сыворотке выше 1,7 пг мл считался невосприимчивым к терапии («не-респондером»).

Подробное описание изобретения

[0025] Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что вводимый внутрилегочно гексапептид формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

значительно более эффективен для предотвращения, уменьшения или устранения симптомов респираторных заболеваний, связанных с IL-6, у млекопитающего по сравнению с тем же гексапептидом в той же дозе, но вводимым путем инъекций.

[0026] Первый аспект изобретения относится к применению гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

[0027] Гексапептид формулы (I), короткое название гексапептид (I), имеет химическое название тирозил-D-аланил-глицил-фенилаланил-лейцил-аргинин, химическая формула C₃₅H₅₁N₉O₈, молекулярная масса 725,84 дальтон и регистрационный номер CAS 81733-79-1 в качестве идентификатора.

[0028] Настоящее изобретение относится ко всем фармацевтически приемлемым солям и сольватам гексапептида формулы (I). Неисключительные примеры таких фармацевтически приемлемых солей включают хлорид, бромид, сульфат, ацетат, пируват, малат, фумарат и цитрат.

[0029] В предпочтительном варианте осуществления изобретения, фармацевтически приемлемой солью гексапептида формулы (I) является диацетат, химическое название тирозил-D-аланил-глицил-фенилаланил-лейцил-аргинина диацетат.

[0030] Гексапептид формулы (I) может быть получен любым способом, известным в данной области, в частности твердофазным синтезом. Гексапептид формулы (I) и его соли и сольваты коммерчески доступны, например, в каталоге Bachem № 4030569.0100 (https://shop.bachem.com/4030569.html). Гексапептид (I) диацетат представляет собой коммерчески доступный активный фармацевтический ингредиент, который выпускается несколькими производителями в Российской Федерации, например. ООО "Берахим" (Обнинск, Россия).

[0031] Используемый здесь термин «интерлейкин-6», короткое название «IL-6», относится к нативному интерлейкину-6 любого вида, включая мышь, крысу, быка и человека, предпочтительно человека.

[0032] Используемый здесь термин «респираторное заболевание» относится к заболеванию, поражающему дыхательную систему. Термин «дыхательная система» относится к дыхательным путям и легким.

[0033] Используемый здесь термин «респираторное заболевание, связанное с интерлейкином-6» относится к респираторному заболеванию, связанному с перепроизводством интерлейкина-6. Такие респираторные заболевания включают острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС); ОРДС, связанный с COVID-19; острую инфекцию нижних дыхательных путей, такую как COVID-19; пневмонию; вирусную пневмонию; пневмонию, связанную с COVID-19; отек легких; бронхит; трахеобронхит; хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ); и астму.

[0034] В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, респираторное заболевание, связанное с интерлейкином-6, выбирают из группы, состоящей из острого респираторного дистресс-синдрома; острой инфекции нижних дыхательных путей; пневмонии; отека легких; бронхита; трахеобронхита; хронической обструктивной болезни легких; и астмы. Более предпочтительно, острая инфекция нижних дыхательных путей представляет собой COVID-19.

[0035] Используемый здесь термин «легочное введение» относится к введению лекарственного средства через легкие путем ингаляции. Термин «ингаляция», используемый в отношении составов и композиций по изобретению, является синонимом «легочного введения». Используемый здесь термин «вдыхание» относится к вдыханию паров или дисперсии твердых или жидких частиц содержащих лекарственное средство. В конкретных примерах вдыхание может происходить через распылитель или другое устройство для доставки аэрозоля.

[0036] В некоторых вариантах осуществления изобретения, гексапептид формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить легочно в форме аэрозоля. Из уровня техники хорошо известны многочисленные способы и устройства, которые можно применять для генерирования указанных аэрозолей в терапевтически полезных диапазонах размеров и концентраций. В частности, это небулайзеры, дозированные ингаляторы (MDI) и ингаляторы для сухого порошка (DPI). Pilcer G. et al. Int J Pharm. 2010, 392(1-2):1-19. Распылители, такие как струйные распылители или ультразвуковые распылители, используются для доставки водных фармацевтических препаратов. Дозированный ингалятор MDI суспендирует или растворяет порошки лекарственного средства в жидких пропеллентах, и, когда отмеренное количество пропеллента высвобождается из накопительного контейнера, пропеллент испаряется и быстро расширяется для диспергирования порошкообразного лекарственного средства или жидкого лекарственного средства с каплями. Такие пропелленты включают, но не ограничиваются, хлорфторуглеродами, гидрохлорфторуглеродами или углеводородами. Ингалятор для сухого порошка DPI доставляет точно отмеренную дозу лекарства в легкие в виде сухого порошка. Он предназначен для создания аэрозоля лекарственного порошка в потоке воздуха для вдоха. При осуществлении изобретения любые способы и устройства, включая небулайзеры, MDI и DPI, могут использоваться для легочной доставки гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.

[0037] Используемый здесь термин «аэрозоль» относится к суспензии жидких или твердых частиц в газообразной среде. При осуществлении изобретения гексапептид (I) или его фармацевтически приемлемую соль могут быть введены легочно в виде аэрозоля в форме жидких составов и сухих порошков.

[0038] В предпочтительном варианте осуществления изобретения, гексапептид (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в легкие в форме аэрозоля с размером частиц от 0,1 до 10,0 микрон, более предпочтительно от 1 до 5 микрон.

[0039] Используемый здесь термин «лечение» означает предотвращение, уменьшение или ингибирование развития заболевания, к которому применяется этот термин, или одного или нескольких симптомов этого заболевания. Термин «лечение» относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим мерам. Те, кто нуждается в лечении, включают тех, у кого уже есть расстройство, тех, кто склонен иметь расстройство, теху у кого диагностировано расстройство, или тех, у кого расстройство должно быть предотвращено.

[0040] Используемый здесь термин «млекопитающее» относится к любому животному, классифицированному как млекопитающее, например, мыши, крысе, и человеку. Предпочтительным млекопитающим является человек.

[0041] При осуществлении изобретения гексапептид формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль могут быть использованы в качестве активного фармакологического ингредиента в составе фармацевтической композиции, которая может быть приготовлена в виде твердого вещества, полутвердого вещества или жидкости.

[0042] Согласно другому аспекту, изобретение относится к применению водной фармацевтической композиции, содержащей гексапептид формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

[0043] При осуществлении изобретения водная фармацевтическая композиция содержит от 0,1 до 100 мг/мл гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

[0044] В предпочтительном варианте водная фармацевтическая композиция содержит от 0,9 до 1,1 мг/мл гексапептида (I) диацетата.

[0045] Используемый здесь термин «вспомогательное вещество» описывает любой ингредиент, кроме гексапептида (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах композиции могут содержать вспомогательное вещество в количестве от 0,001 до 99,999%.

[0046] Неисключительные примеры вспомогательных веществ для использования в водной фармацевтической композиции по изобретению включают очищенную воду, воду для инъекций, буферные системы для поддержания рН 3,0-8,5, регуляторы тоничности растворов, антимикробные консерванты, поверхностно-активные вещества, такие как неионные и амфифильные поверхностно-активные вещества, стабилизаторы и эмульгаторы.

[0047] Используемый здесь термин «водная фармацевтическая композиция» означает, что фармацевтическая вода, например очищенная вода или вода для инъекций является необходимым вспомогательным веществом композиции по изобретению.

[0048] Используемый здесь термин «фармацевтическая вода» относится к воде, которая соответствует требованиям нормативных документов Российской Федерации и/или других стран, например, требования ФС.2.2.0020.15 «Очищенная вода» и требования ФС.2.2.0019.15 «Вода для инъекций» фармакопеи Российской Федерации; и/или CPMP/QWP/158/01 «Note for Guidance on Quality of Water for Pharmaceutical Use», EMEA, 2002. Предпочтительно, фармацевтическая вода выбирается из группы, состоящей из очищенной воды и воды для инъекций.

[0049] Используемый здесь термин «буферная система» описывает комбинацию кислоты и основания в количествах, достаточных для поддержания желаемого уровня pH. Неэксклюзивные примеры фармацевтически приемлемых буферных систем для поддержания рН в диапазоне от 3,0 до 8,5 описаны в Фармакопее Российской Федерации (OFS.1.3.0003.15 «Буферные растворы») и включают ацетатный буфер, цитратный буфер, сукцинатный буфер, фосфат буфер и имидазольный буфер.

[0050] Неисключительные примеры регуляторов тоничности включают подходящий осмотически активный неорганический агент, такой как хлориды, сульфаты или фосфаты натрия, кальция или магния; подходящий осмотически активный органический агент, такой как сахара и сахарные спирты, в частности трегалоза, маннитол и сорбитол. Предпочтительным регулятором тоничности является хлорид натрия в количестве от 0,1 до 0,9% от указанной композиции.

[0051] При осуществлении изобретения водную фармацевтическую композицию вводят в внутрилегочно в виде паров или дисперсий жидких частиц в газообразной среде, тем самым доставляя от 0,1 до 50 мг гексапептида (I) или его фармацевтически приемлемой соли в легкое млекопитающего. Предпочтительно, композицию вводят в количестве, которое доставляет 10 мг гексапептида (I) диацетата в легкое млекопитающего.

[0052] При осуществлении изобретения водную фармацевтическую композицию вводят в легкие с использованием небулайзера или дозирующего ингалятора (MDI).

[0053] Используемый здесь термин «небулайзер» относится к ингаляционному устройству, которое превращает жидкое лекарственное средство для распыления в дисперсию в газовой среде для доставки активного фармацевтического ингредиента в легкие. Неисключительные примеры небулайзеров включают компрессоры, ультразвуковые или другого типа небулайзеры.

[0054] В некоторых вариантах осуществления изобретения, водная фармацевтическая композиция находится под давлением в упаковке с дозирующей системой клапан-распылитель (аэрозоли и спрэи) для последующего распыления.

[0055] В предпочтительном варианте осуществления изобретения, водная фармацевтическая композиция вводится в легкие в форме аэрозоля с размером частиц от 0,1 до 10,0 микрон, более предпочтительно от 1 до 5 микрон.

[0056] При осуществлении изобретения водная фармацевтическая композиция может быть в форме единичной дозированной форме, подходящей для однократного легочного введения точной дозы. Используемый здесь термин «единичная дозированная форма» относится к физически дискретной единице композиции по изобретению, подходящей для введения в млекопитающего легочным путем. Уровень конкретной эффективной дозы для любого конкретного млекопитающего зависит от многих факторов, включая вид млекопитающего; заболевание и его степень тяжести, конкретный используемый состав; возраст, вес, общее состояние здоровья и пол субъекта; продолжительность введения; продолжительность лечения; сочетание с другими лекарственными средствами и/или дополнительными видами терапии, а также другие подобные факторы, хорошо известные в медицинской технике.

[0057] В некоторых вариантах осуществления изобретения, единичная дозированная форма содержит гексапептид (I) или его фармацевтически приемлемую соль в количестве от 1,0 до 10,0 мг.

[0058] При осуществлении настоящего изобретения, композицию по настоящему изобретению можно получить с помощью процедур, хорошо известных в данной области. Такие процедуры включают, но не ограничиваются, смешиванием гексапептида (I) или его фармацевтически приемлемой соли с другими ингредиентами композиции обычными способами. Руководство по приготовлению композиций по изобретению можно найти в "Remington: The science and practice of pharmacy" 20^th ed. Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3 и " Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology", edited by Swarbrick, J. & J. C. Boylan, Marcel Dekker, Inc., New York, 1988 ISBN 0-8247-2800-9 или более поздние издания.

[0059] В соответствии с другим аспектом, изобретение относится к способу лечения респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, который включает стадию легочного введения эффективного количества гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли в млекопитающего, нуждающегося в этом.

[0060] Используемый здесь термин «эффективное количество» относится к количеству активного фармацевтического ингредиента, которое является достаточным для того, чтобы вызвать уменьшение, обращение, облегчение или ингибирование развития заболевания, к которому применяется этот термин, или одного или нескольких симптомов этой болезни.

[0061] В предпочтительном варианте осуществления изобретения, эффективное количество гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 0,001 до 1,00 мг/кг на кг массы тела млекопитающего.

[0062] При осуществлении изобретения эффективное количество гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли можно вводить в легкие путем непрерывной ингаляции в течение периода от 1 минуты до 2 часов, предпочтительно от 30 до 60 минут.

[0063] При осуществлении изобретения эффективное количество гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли можно вводить в легкие один или два раза в день в течение одного дня или дольше.

[0064] Из-за легочного пути введения гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли данное изобретение обеспечивает безболезненную и безопасную альтернативу инъекциям гексапептида в ходе лечения респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6.

[0065] Из-за прямой местной доставки гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в легкие данное изобретение обеспечивает особенно выгодный способ для достижения терапевтически эффективных уровней гексапептида (I) в легком, которые не могут быть достигнуты с инъекциями гексапептида (I).

[0066] Из-за улучшенной доставки гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в легкие путем легочного введения данное изобретение обеспечивает особенно выгодные композиции и способы по сравнению с инъекциями гексапептида для предотвращения, ослабления или устранения симптомов респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6, у млекопитающих, нуждающихся в этом.

[0067] Следующие примеры представлены для демонстрации изобретения. Примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения каким-либо образом.

Пример 1

[0068] Пример показывает фармацевтическую композицию для легочного введения.

[0069] Таблица 1.

Ингредиент Содержание в 1 мл Гексапептид (I) диацетат 0,1-100,0 мг Очищенная вода до 1 мл Фосфатный буфер pH 3,0-8,5

[0070] Водную фармацевтическую композицию готовят следующим образом. Коммерчески доступный гексапептида (I) диацетат, фармакопейного качества (ООО Берахим, Обнинск, Россия), растворяют в очищенной воде в количествах, указанных в таблице 1, и pH раствора доводят до 3,0-8,5 с использованием фосфатного буфера. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм для приготовления стерильного раствора без консервантов. Раствор разливают во флаконы. Водную фармацевтическую композицию вводят в легкие ингаляционно с использованием небулайзера в рекомендуемой дозе для лечения респираторного заболевания, связанного с IL-6, у субъекта, нуждающегося в этом.

Пример 2

[0071] Этот пример показывает предпочтительную водную фармацевтическую композицию для легочного введения.

[0072] Таблица 2.

Ингредиент Содержание в 1 мл Гексапептид (I) диацетат 1 мг Очищенная вода до 1 мл

[0073] Водную фармацевтическую композицию готовят следующим образом. Коммерчески доступный гексапептид (I) диацетат фармакопейного качества (ООО Берахим, Обнинск, Россия), растворяют в очищенной воде в количествах, указанных в таблице 2. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм для приготовления стерильный раствор без консервантов с pH около 4,8. Раствор разливают в ампулы и герметизируют в стерильной атмосфере. Водную фармацевтическую композицию вводят в легкие в дозе 10 мг на субъекта с использованием небулайзера для лечения респираторного заболевания, связанного с IL-6.

Пример 3

[0074] В этом примере показана водная фармацевтическая композиция для легочного введения в единичной дозированной форме.

[0075] Таблица 3.

Ингредиент Сдержание в одном флаконе Гексапептид (I) диацетат фармакопейный 10 мг Вода для инъекций до 10 мл рН 4.8

[0076] Водную фармацевтическую композицию готовят следующим образом. Коммерчески доступный фармакопейного качества гексапептида (I) диацетат (ООО Берахим, Обнинск, Россия), растворяют в воде для инъекций в количестве, указанном в таблице 3, чтобы получить раствор гексапептида (I) диацетата в концентрации около 1 мг/мл, выход 100%. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм (Merck Millipore), чтобы приготовить стерильный раствор без консервантов, выход 99,9%. Раствор разливают в стерильные флаконы по 10 мл в токе азота или любого другого не содержащего кислорода инертного газа и герметично закрывают стерильной бутилкаучуковой пробкой и алюминиевой обжимкой. Полученную водную фармацевтическую композицию в стандартной лекарственной форме вводят в легкие субъекту, страдающему респираторным заболеванием, связанным с IL-6, например, COVID-19.

Пример 4

[0077] Этот пример иллюстрирует модель для оценки эффективности гексапептида (I) или его фармацевтически приемлемой соли при лечении респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6.

[0078] Эффективность диацетата гексапептида (I) была протестирована на модели острого повреждения легких (ОПЛ), сопровождаемого острым респираторным дистресс-синдромом (ОРДС). Модель ОПЛ/ОРДС индуцируется внутритрахеальным введением липополисахарида (ЛПС) как описано в D'Alessio FR. Mouse Models of Acute Lung Injury and ARDS. Methods Mol Biol. 2018, 1809:341-350 с некоторыми изменениями, чтобы сделать модель более летальной. Для этой цели самцам мышей C57Bl/6 предварительно вводили 1 мкг/мышь α-галактозилцерамид (α-GalCer, KRN7000, Sigma-Aldrich), как описано в Aoyagi T. et al. Int Immunol. 2011, 23(2):97-108, и через 24 часа мышам вводили интратрахеально ЛПС (E.coli; 300 мкг/мышь) с добавлением 10 мкл/мышь полного адъюванта Фрейнда и 100 мкг/мышь мурамилпептида. Эта модель характеризуется острым перепроизводством интерлейкина-6 в легких, причем перепроизводство IL-6 связано с острым повреждением легких, отеком легких, острым респираторным дистресс-синдромом, пневмонией и высокой летальностью. Другими симптомами смоделированного респираторного заболевания, связанного с IL-6, были угнетение двигательной активности, нарушение координации, недостаточное широкое раскрытие век и опущение, низкий мышечный тонус, снижение аппетита, потребления воды и мочеиспускания; а также нарушение дыхания. На РИС.1 показаны окрашенные гематоксилином-эозином гистологические препараты здоровой ткани легких до введения α-галактозилцерамида/ЛПС (0 ч) и препараты легких, полученные от животных через 24, 72 и 120 ч после введения ЛПС. Препараты легких у здоровых животных характеризуются умеренным кровоснабжением, отсутствием патологических изменений в строме и паренхиме, а также в стенках бронхов и бронхиол. Напротив, препараты легких от животных, индуцированных α-галактозилцерамидом/ЛПС, характеризуются бронхопневмонией с участками разрушения стенок бронха и бронхиол, дескваматированным эпителием и накоплением воспалительного инфильтрата, то есть признаками острого повреждения легких, вызванного вызванного воспалением связанным с перепроизводством IL-6.

[0079] Чтобы оценить динамику продукции IL-6 в легких, ОПЛ/ОРДС индуцировали у самцов мышей C57Bl/6 последовательным введением α-галактозилцерамида и ЛПС, как описано выше. Уровни IL-6 определяли в водном экстракте гомогенатов легких, полученных от животных, в разное время (n=6 на каждый момент времени) после инъекции ЛПС (группа «ЛПС»). Для сравнения, уровни IL-6 в водных экстрактах гомогенатов легких были определены у шести здоровых наивных мышей (группа «Интактные»). Измерения проводились, используя Bio-Plex® MAGPIX™ Multiplex Reader (Bio-Rad, SN: 12250707) и коммерчески доступную стандартную панель (Bio-Plex Pro™ Mouse Cytokine Th17 Panel A 6-Plex # M6000007NY) в соответствии с инструкциями производителя. Анализ полученных данных проводился в программе Bio-Plex Data Pro (версия 1.0.0.06) компании Bio-Rad. Результаты представлены в таблице 4 как среднее ± ошибка среднего концентраций IL-6 в гомогенатах легких. Для справки, уровни IL-6 в водных экстрактах гомогенатов легких у интактных мышей («Интактные») составили 119±9 пг/мл.

[0080] Таблица 4.

Группа Уровни IL-6 в гомогенатах легких, пг/мл 2 ч 7 ч 12 ч ЛПС 1876 ± 196* 843 ± 93 434 ± 39

*Достоверное отличие от Интактных (p<0.05).

[0081] В таблице 4 показано, что мыши индуцированные введением α-галактозилцерамида и ЛПС характеризуются увеличением продукции интерлейкина-6 в легких в среднем 15.7 раз по сравнению со здоровыми интактными животными. Следовательно, эта модель ОПЛ/ОРДС полезна для оценки эффективности лекарств в лечении респираторных заболеваний, связанных с перепроизводством IL-6.

[0082] В целом, модель ОПЛ/ОРДС воспроизводит основные признаки респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6, у людей, таких как перепроизводство IL-6 в легких, альвеолярное диффузное повреждение легких, острый респираторный дистресс-синдром, отек легких и пневмония.

Пример 5

[0083] Этот пример показывает, что легочное введение обеспечивает лучшую доставку диацетата гексапептида (I) в легкие по сравнению с инъекциями.

[0084] Самцов мышей C57Bl/6 рандомизировали в две группы по восемнадцать животных в каждой. В первой группе («ГП(I) в.м.») мыши получали 10 мг/кг гексапептида (I) диацетата в 50 мкл водного раствора путем внутримышечной инъекции. Во второй группе («ГП(I) инг.») мыши получали ингаляцией 10 мг/кг гексапептида (I) диацетата в 50 мкл водного раствора. Легкие выделяли до (0 мин) и после (1, 5, 15, 60 мин) введения диацетата гексапептида (I) от трех животных в каждый момент времени в обеих группах. Концентрации гексапептида (I) в гомогенатах легких в каждый момент времени (0, 1, 5, 15, 60 мин) измеряли с использованием ВЭЖХ Aglient HPLC 1260 с детектором Agilent 6545XT Accurate mass Q-TOF LC/MS. Площади под фармакокинетическими кривыми (AUC) абсорбции диацетата гексапептида (I) легкими в течение 60 мин составили 6446 нг/мл и 2991 нг/мл для легочного введения и инъекций соответственно. Таким образом, легочное введение обеспечивает по меньшей мере двукратно увеличенную доставку диацетата гексапептида (I) в легкие по сравнению с инъекциями в той же дозе.

Пример 6

[0085] Этот пример показывает, что легочное введение диацетата гексапептида (I) ингибирует избыточную экспрессию IL-6 в легких.

[0086] Самцов мышей C57Bl/6 рандомизировали в четыре группы по шесть животных в каждой. Первая группа была интактной («Интактные»). ОПЛ/ОРДС индуцировали в группах со 2 по 4 последовательным введением α-галактозилцерамида и ЛПС, как описано в примере 4 изобретения. Во второй группе («ЛПС») мыши получали 50 мкл физиологического раствора путем ингаляции через час после введения ЛПС. В третьей группе («ЛПС+ГП(I) в.м.») мыши получали 100 мкг/кг гексапептида (I) диацетата в 50 мкл водного раствора путем внутримышечной инъекции через один час после введения ЛПС. В четвертой группе («ЛПС+ГП(I) инг.») мыши получали 100 мкг/кг гексапептида (I) диацетата в 50 мкл водного раствора путем ингаляции через один час после введения ЛПС. Через 3 часа легкие были извлечены у мышей всех групп, и содержание мРНК IL-6 было измерено в гомогенатах легких с помощью количественной ПЦР в реальном времени. мРНК выделяли с использованием «РНК Экстран Кит» (Синтол, Россия) в соответствии с протоколом производителя. кДНК синтезировали с использованием супермикса с реагентами Ревепта-L (АмплиСенс, Россия). ПЦР в реальном времени проводили с использованием сенсорной системы ПЦР в реальном времени CFX96 (BioRad, CA) и специфических праймеров IL-6-F-5'-ATGAAGTTCCTCTCTGCAAG-3 'и IL-6-R-5'-GTGTAATTAAGCCTCCGACT-3'. Данные были нормализованы к GAPDH. Результаты представлены на РИС.2 как кратное изменение среднего значения мРНК IL-6 в легких ± средняя ошибка. Односторонний ANOVA с последующим пост-тестом Тьюки демонстрирует статистически значимое различие между группами. Значительное увеличение экспрессии IL-6 в 6,3 раза было обнаружено у мышей группы «ЛПС» по сравнению с мышами группы «Интактные» (р<0,01). Легочное введение диацетата гексапептида (I) значительно ингибировало ЛПС-индуцированное перепроизводство IL-6 у мышей в группе "ЛПС+ГП(I) инг" (р<0,01), тогда как эффект инъекционного диацетата гексапептида (I) был недостоверным (р=0,21) по сравнению с мышами группы «ЛПС». Таким образом, диацетат гексапептида (I), вводимый в легкие, ингибирует избыточную экспрессию IL-6 в легких, связанную с респираторным заболеванием.

Пример 7

[0087] В этом примере показано влияние ингаляции гексапептида (I) на уровни IL-6 в легких и сыворотке.

[0088] Самцов мышей C57Bl/6 рандомизировали в три группы по шесть животных в каждой. Первая группа была интактной («Интактные»). ОПЛ/ОРДС индуцировали в группах 2 и 3 последовательным введением α-галактозилцерамида и ЛПС, как описано в примере 4 изобретения. Во второй группе («ЛПС»), мыши получали 50 мкл физиологического раствора путем ингаляции через час после введения ЛПС. В третьей группе («ЛПС+ГП(I) инг.»), мыши получали ингаляцию 100 мкг/кг диацетата гексапептида (I) в 50 мкл водного раствора через один час после введения ЛПС. Уровни IL-6 измеряли в сыворотке и в водных экстрактах гомогенатов легких, полученных от животных через семь часов после введения физиологического раствора или ЛПС, с использованием коммерчески доступной стандартной панели (Bio-Plex Pro™ Mouse Cytokine Th17 Panel A 6-Plex # M6000007NY) как описано в примере 4 изобретения. Результаты представлены в таблице 5 как среднее значение ± ошибка среднего концентраций IL-6 (пг/мл) в гомогенатах легких и сыворотке.

[0089] Таблица 5.

Группа Концентрация IL-6, пг/мл Сыворотка Легкие (1) Интактные 61 ± 7* 119 ± 9* (2) ЛПС 191 ± 21 926 ± 106 (3) ЛПС+ГП(I) инг. 29 ± 6* 75 ± 10*

*Достоверное отличие от ЛПС (p<0,05).

[0090] Таблица 5 показывает, что ЛПС индуцировал увеличение уровней IL-6 в 7,8 (р<0,05) и 2,9 раз (р<0,05) в легких и сыворотке, соответственно, по сравнению с интактным контролем. Легочное введение диацетата гексапептида (I) в мышей индуцированных ЛПС приводило к снижению уровней IL-6 в 12,3 (p<0,05) и 6,5 (p<0,05) раз в легких и сыворотке, соответственно, по сравнению с нелеченным ЛПС-индуцированным контролем. Таким образом, легочное введение диацетата гексапептида (I) значительно снижает уровни IL-6 в легких и сыворотке млекопитающих, страдающих респираторным заболеванием, связанным с перепроизводством интерлейкина-6.

Пример 8

[0091] Этот пример иллюстрирует дозозависимый эффект ингаляционного диацетата гексапептида (I) при лечении респираторного заболевания, связанного с IL-6.

[0092] Самцов мышей C57Bl/6 рандомизировали в пять групп по шесть животных в каждой. ОПЛ/ОРДС индуцировали во всех группах последовательным введением α-галактозилцерамида и ЛПС, как описано в примере 4 изобретения. В первой группе мыши получали ингаляцией 50 мкл физиологического раствора. В других группах мыши получали диацетат гексапептида (I) в дозах 1, 10, 100 и 1000 мкг/кг в виде растворов в 50 мкл воды. Уровни IL-6 измеряли в водных экстрактах гомогенатов легких, полученных от животных через шесть часов после инъекции ЛПС, с использованием коммерчески доступной стандартной панели (Bio-Plex Pro™ Mouse Cytokine Th17 Panel A 6-Plex # M6000007NY), как описано в примере 4 изобретения. Результаты представлены в таблице 6 как среднее значение ± ошибка среднего концентраций IL-6 в гомогенатах легких.

[0093] Таблица 6.

Доза гексапептида (I) диацетата, мкг/кг Содержание IL-6 в легких, пг/мл 0 (физ. раствор) 1043 ± 122 1 287 ± 49* 10 106 ± 15* 100 89 ± 9* 1000 446 ± 72*

*Достоверно отличается от физ. раствора (p<0,05).

[0094] Таблица 6 показывает, что легочное введение диацетата гексапептида (I) в дозах от 1 до 1000 мкг/кг (от 0,001 до 1 мг/кг) значительно снижает перепроизводство IL-6 в легких животных, страдающих респираторным заболеванием, связанным с IL-6.

Пример 9

[0095] Этот пример иллюстрирует терапевтическую эффективность ингаляций диацетата гексапептида (I) по сравнению с инъекциями.

[0096] Самцов мышей C57Bl/6 рандомизировали в три группы по 15 животных в каждой. ОПЛ/ОРДС индуцировали у всех мышей последовательным введением α-галактозилцерамида и ЛПС, как описано в примере 4 по изобретению. В первой группе («ЛПС») мыши получали внутримышечно 50 мкл физиологического раствора ежедневно, один раз в день, начиная со дня инъекции ЛПС. Во второй группе («ЛПС+ГП(I) в.м.») мыши получали внутримышечно диацетат гексапептида (I) 100 мкг/кг в 50 мкл водного раствора ежедневно, один раз в день, начиная со дня инъекции ЛПС. В третьей группе («ЛПС+ГП(I) инг.») мыши получали ингаляционно 100 мкг/кг гексапептида (I) диацетата в 50 мкл водного раствора ежедневно, один раз в день, начиная со дня инъекции ЛПС. Через 72 часа ЛПС-индуцированное ОПЛ/ОРДС привело к гибели 87% (13/15), 27% (4/15) и 7% (1/15) животных в группах «ЛПС», «ЛПС+ГП(I) в.м.», и «ЛПС+ГП(I) инг.», соответственно. На РИС.3 показаны кривые выживаемости Каплана-Мейера для 144 часов наблюдений после введения ЛПС. Анализ Каплана-Мейера показывает, что между группами была достоверная разница (р<0,0001; логранк-тест Мантеля-Кокса). Медиана выживаемости составила 24 часа в группе «ЛПС». Гексапептид (I) диацетат достоверно уменьшал гибель животных как в группе «ЛПС+ГП(I) в.м.» (p<0,0001), так и в группе «ЛПС+ГП(I) инг.» (p<0,0001), по сравнению с группой «ЛПС». Однако терапевтический эффект ингаляционного диацетата гексапептида (I) был выше, чем эффект, достигнутый с помощью инъекций диацетата гексапептида (I). Отношение риска (hazard ratio) для групп «ЛПС+ГП(I) инг.»/«ЛПС+ГП(I) в.м.» был 0,2295 (95% ДИ от 0,0397 до 1,372; логранк), то есть вероятность гибели животных в группе мышей, получавших ингаляционный гексапептид (I), была ниже в 4,4 раза, чем в группе мышей, получавших инъекции гексапептида (I). Таким образом, диацетат гексапепида (I) более эффективен при введении в легкие, чем инъекции диацетата гексапептида (I), в снижении смертности, связанной с перепроизводством IL-6.

Пример 10

[0097] Этот пример показывает, что ингаляционный диацетат гексапептида (I) был полезен при лечении COVID-19.

[0098] Мета-анализ клинических исследований COVID-19 выявил, что уровень 1,7 пг/мл интерлейкина-6 в сыворотке строго отличает тяжелую форму (>1,7 пг/мл) от легкой формы COVID-19 (<1,7 пг/мл). Henry BM et al. Clin Chem Lab Med. 2020, 58(7):1021-1028.

[0099] Ингаляции гексапептида (I) диацетата использовались при лечении пациентов с COVID-19 в ходе клинических испытаний, утвержденных комитетом по этике исследований человека. Каждый протокол исследования соответствует этическим принципам Хельсинкской декларации 1975 года, что нашло свое отражение в предварительном одобрении комитетом по исследованиям человека. Письменное информированное согласие было получено от каждого участника, включенного в исследование. Пациенты с подтвержденным диагнозом COVID-19, которые имели уровни IL-6 в крови >1,7 пг/мл, были рандомизированы в две группы. В первой группе (контроль, n=75) пациенты получали ежедневную стандартную терапию, рекомендованную Министерством здравоохранения Российской Федерации (версии с 5-й по 7-ю руководств по лечению COVID-19). Во второй группе (ГП(I), n=11) пациенты получали 10 мг гексапептида (I) диацетата ингаляционно один раз в день ежедневно в течение 5 дней. Уровни IL-6 в сыворотке крови оценивали с помощью коммерчески доступного анализа ELISA до начала лечения (на 0-й день) и после лечения (на 5-й день). В день 0 не было статистически значимой разницы между группами (р=0,8495; непарный двусторонний критерий Стьюдента), уровни IL-6 в сыворотке крови (среднее значение ± средняя ошибка) при этом составляли 21,2 ± 3,3 и 19,5 ± 6,2 пг/мл в группах 1 и 2, соответственно. Пороговое значение 1,7 пг/мл для IL-6 в сыворотке крови использовалось в качестве критерия различия между тяжелой и легкой формами COVID-19 при оценке реакции индивидуума на лечение. Пациент считался отвечающим на лечение (респондером), если уровень IL-6 в сыворотке крови на 5-й день лечения был ниже 1,7 пг/мл, и не отвечающим на лечение (не-респондером), если уровень IL-6 в сыворотке крови на 5-й день лечения был выше 1,7 пг/мл. Пятидневное лечение ингаляционным диацетатом гексапептида (I) привело к снижению уровня IL-6 в 2,8 раза с 19,5 ± 6,2 до 6,9 ± 2,3 пг/мл. При этом уровни IL-6 менее 1,7 пг/мл были достигнуты у 54,5% пациентов, получавших ингаляционный диацетат гексапептида (I), и только у 29,3% пациентов в контрольной группе. Таким образом, 54,5% пациентов, получавших ингаляционный диацетат гексапептида (I), ответили на лечение по сравнению с 29,3% пациентов в контрольной группе (РИС.4). Поскольку пороговый уровень в 1,7 пг/мл различает тяжелую и легкую формы COVID-19, эти результаты показывают, что в течение одного и того же периода лечения степень тяжести COVID-19 была ослаблена у 54,5% пациентов, получавших ингаляционный гексапептид (I) диацетат, по сравнению с 29,3% пациентов на стандартной терапии. Таким образом, диацетат гексапептида (I) при легочном введении был полезен при лечении COVID-19.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к инфекционным и внутренним болезням, и предназначена для лечения COVID-19. Применяют гексапептид формулы (I): H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I) или его фармацевтически приемлемую соль в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом. Также для лечения респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, применяют водную фармацевтическую композицию, содержащую указанный гексапептид или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом. Кроме того, способ лечения респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, включает стадию легочного введения эффективного количества указанного гексапептида или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающему, нуждающемуся в этом. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность предотвращения, уменьшения или устранения симптомов респираторного заболевания, связанного с IL-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 10 пр., 6 табл., 4 ил.

1. Применение гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

2. Применение гексапептида формулы (I) по п.1, отличающееся тем, что фармацевтически приемлемая соль - это диацетат.

3. Применение водной фармацевтической композиции, содержащей гексапептид формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество в лечении респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, путем легочного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

4. Применение водной фармацевтической композиции по п.3, отличающееся тем, что фармацевтически приемлемая соль - это диацетат.

5. Применение водной фармацевтической композиции по пп.3, 4, отличающееся тем, что композицию вводят в легкие в форме аэрозоля с размером частиц от 1 до 5 микрон.

6. Способ лечения респираторного заболевания, связанного с интерлейкином-6, где респираторное заболевание представляет собой COVID-19, где способ включает стадию легочного введения эффективного количества гексапептида формулы (I):

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I)

или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающему, нуждающемуся в этом.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемая соль - это диацетат.

8. Способ по пп.6, 7, отличающийся тем, что гексапептид формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в форме водного аэрозоля, имеющего размер частиц от 1 до 5 микрон.

9. Способ по пп.6-8, отличающийся тем, что эффективное количество гексапептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 0,001 до 1,000 мг на кг массы тела млекопитающего.