ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности и к медицине, а именно к лекарственному средству, оказывающему противовоспалительное действие посредством ограничения продукции провоспалительных цитокинов и, напротив, увеличения уровня противовоспалительных факторов, что может быть использовано в терапии острых воспалительных процессов инфекционного и неинфекционного генеза, включая острый респираторный дистресс синдром, воспалительные повреждения различных органов и систем.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Актуальной проблемой современной медицины является эффективная терапия воспалительных повреждений различных органов и систем, включая острое диффузное повреждение легочной ткани, полиорганную недостаточность, вызванную избыточной воспалительной реакцией, обусловленной избыточным иммунным ответом на патоген или травму, а не воздействием непосредственно патогена или травмы [Fajgenbaum D.C., June C.H. 2019].
В настоящее время средством выбора в терапии острого диффузного повреждения легочной ткани - острого респираторного дистресс синдрома (ОРДС) является дексаметазон, применение которого позволяет улучшить состояние больного, но мало сказывается на конечных результатах лечения и снижении летальности, которая составляет 40 - 45 % всех пациентов с ОРДС [Ruan S.Y., Lin H.H., Huang C.T.2014 Lewis SR, Pritchard MW. 2019].
Учитывая, что терапевтическое действие дексаметазона сопряжено с высоким риском развития многочисленных тяжелых метаболических, иммунологических и органных нарушений, необходимо лекарственное средство с аналогичной или более высокой терапевтической активностью, лишенное комплекса негативных реакций.
В настоящее время известно, что рибофуранозилгипоксантин (инозин), природный, биологически активный метаболит, который подобно аденозину, метаболиту с выраженной противовоспалительной активностью, через аденозиновые рецепторы A2А нейтрофилов, макрофагов, A2A лейкоцитов ограничивает их участие в воспалительном процессе [Mager LF, Burkhard R/ 2020, da Rocha Lapa F, da Silva MD 2012, Welihinda A.A. et al. 2016].
Инозину присуща нейро-, гепато-, кардиопртекторная, противовоспалительная и противосудорожная фармакологические активности.
Инозин используется в фармакологических решениях как самостоятельно, так и в комбинации с другими фармакологически активными молекулами, позволяющими усилить тот или иной вариант его терапевтического действия или терапевтическое действие используемой молекулы или молекул. В частности, противовирусное действие инозина усилено в фармакологическом решении, заключающимся в создании препарата на его основе - изопринозина, цитопротекторное терапевтическое действие - комбинированием рибоксина с янтарной кислотой, рибофлавина мононуклеатидом натрия и никотинамидом (патент РФ № 2228745 C1 от20.05.2004), детоксицирующая активность усилена составом ремаксол (патент РФ № 2240116 от 20.11.2004г). Несмотря на различные лекарственные средства с использованием инозина в них не достигнуто целевое использование противовоспалительного действия инозина, иными словами в настоящее время отсутствует фармакологическое решение, целенаправленно реализующее его противовоспалительное фармакологическое действие.
Известно, что дисульфид глутатиона (или окисленный глутатион, GSSG) - димер трипептида глутатиона, γ-глутамилцистеинилглицина, проявляет антиоксидантные, противовоспалительные, гепатопротекторные свойства и также влияет, как и глутатион, на систему цитокинов. Данные свойства были учтены при создании средства для профилактики и лечения инфекций, вызванных бета-коронавирусами. Указанное средство предназначено для снижения риска возникновения и/или облегчения симптомов заражения бета-коронавирусной инфекцией в виде раствора для ингаляции, и включает композицию дисульфид глутатиона и глутатион дисульфид S-оксида в сочетании с инозином (RU 2747890 C1 от 17.05.2021). Однако данным предлагаемым составом не решался вопрос повышения противовоспалительного действия инозина.
В качестве наиболее близкого аналога может быть указана фармацевтическая композиция, обеспечивающая доставку после перорального или внутривенного введения терапевтически эффективного количества глутатиона восстановленного пациенту-млекопитающему для лечения симптомов, связанных с воспалением, которое сопровождает высвобождение фактора некроза опухоли-альфа при таких заболеваниях, например как инфекция, поражающая дыхательные пути (US 20070077258 A1 от 2007.04.05). Хотя среди перечисленных заболеваний указан респираторный дистресс синдром, такая возможность не подкреплена какими-либо экспериментальными данными, а на практике нами обнаружено, что известная композиция не обеспечивает предупреждение его развития.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей настоящего изобретения является разработка нового лекарственного средства (средства по изобретению - AФ-01), обладающего противовоспалительной активностью, которое могло бы быть использовано при широком спектре воспалительных поражений. В частности, задачей изобретения является создание фармацевтической субстанции на основе фармацевтической композиции, полученной из рибофуранозилгипоксантина (инозин) и потенциатора его противовоспалительного действия, включающего дисульфид глутатиона, содержащий координационное соединение платины, в виде Pt⋅S-глутатион с содержанием Pt -1.5×10-3 М на 1 кг дисульфида глутатиона и S-оксид дисульфида глутатиона.
Фармацевтическая субстанция с противоспалительной активностью может быть использована для изготовления лекарственного средства и его введения пациенту в этом нуждающемуся, ингаляционно, энтерально, парентерально или для наружного применения как самостоятельно, так и в сочетании с другими терапевтическими препаратами. Предпочтительным направлением применения средства по изобретению являются заболевания, патогенез которых определяется воспалительной реакцией инфекционного и неинфекционного генеза. В частности, пневмонии - поражение легких инфекционного и неинфекционного генеза, при которых использование средства по изобретению позволяет уменьшить воспалительную реакцию и предупредить развитие острого респираторного дистресс синдрома (ОРДС) и, соответственно, повреждение ткани легкого.
Техническим результатом данного изобретения является усиление противовоспалительного действия, обеспечение возможности терапии различных заболеваний воспалительного характера, в том числе таких тяжелых как ОРДС, при этом без побочных эффектов, присущих глюкокортикоидам.
Указанный технический результат достигается за счет получения композиции, в составе которой рибофуранозилгипоксантин или его фармацевтически приемлемая соль любым известным способом смешивается и образует гомогенное вещество с дисульфид глутатионом или его фармацевтически приемлемой солью, представленным в виде координационного соединения Pt⋅S-глутатиона с содержанием Pt -1.5×10-3М на 1 кг дисульфида глутатиона и S-оксид дисульфида глутатиона.
В качестве фармацевтически приемлемых солей дисульфид глутатиона могут быть использованы натриевые, калиевые, литиевые соли. Аналогично и в отношении инозина.
Предпочтительно количество дисульфида глутатиона или его фармацевтически приемлемой соли и рибофуранозилгипоксантина или его фармацевтически приемлемой соли берется в равных массовых соотношениях 1:1, и может составлять от 90-99.5 мас.% от массы всей композиции.
Количество глутатион дисульфид S-оксида предпочтительно составляет 0.1-10 мас.% от массы всей композиции.
Количество вводимой в композицию платины в составе координационного соединения не превышает физиологически допустимых значений для данного металла. Однако это значение может быть превышено в случае, когда для достижения терапевтического эффекта требуются большие количества платины, вводимой в составе координационного соединения.
Как правило, композиция содержит металл (Ме) - платину, представленный в виде координационного(-ых) соединений, содержащих связь Pt⋅S-глутатион, из расчета 10-10 моль до 1*10-2 моль на 1 кг композиции, предпочтительно 1*10-5 моль на 1 кг композиции.
Полученная фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую субстанцию и используется для приготовления лекарственного средства с противоспалительной активностью. Таким образом, вторым объектом изобретения является лекарственное средство для предупреждения или лечения воспалительных заболеваний, включающее вышеуказанную композицию в терапевтически эффективном количестве совместно с фармацевтически приемлемыми эксципиентами.
Лекарственное средство может быть выполнено в форме, пригодной для наружного, ингаляционного, энтерального или парентерального введения.
Лекарственное средство может быть использовано при воспалительных заболеваниях, инфекционного и неинфекционного генеза. Предпочтительно воспалительные заболевания представляют собой заболевания легких инфекционного и неинфекционного генеза с острым респираторным дистресс синдромом.
Пациенту, включая пациентов с пневмонией - воспалительным заболеванием легких инфекционного и неинфекционного генеза для профилактики и лечения ОРДС, лекарственное средство вводят как самостоятельно, так и в сочетании с другими лекарственными препаратами.
Использованные понятия.
Дисульфид глутатиона (или окисленный глутатион, GSSG) - димер трипептида глутатиона, γ-глутамилцистеинилглицина, в котором две молекулы указанного трипептида соединены друг с другом ковалентной дисульфидной связью между цистеиновыми остатками.
Координационное соединение платины подразумевает соединение Pt⋅S-глутатион, в котором глутатион выступает в качестве лиганда, в определенном порядке размещаясь (координируясь) с платиной, выступающей комплексообразователем
В соответствии с настоящим изобретением дисульфид глутатиона или его фармацевтически приемлемая соль, глутатион дисульфид S-оксид, Pt⋅S-глутатион могут быть получены любым известным из уровня техники способом по патенту RU 2659161 С1, опубл. 17.11.2017.
Глутатион дисульфид S-оксида (также называемый глутатион тиосульфинат, или GS(O)SG) или сульфон димер трипептида глутатиона, γ-глутамилцистеинилглицина, в котором две молекулы указанного трипептида соединены друг с другом ковалентной дисульфидной связью между цистеиновыми остатками. Один из атомов серы в составе дисульфидной связи имеет двойную связь с кислородом.
Рибофуранозилгипоксантин (или инозин) - это нуклеозид, состоящий из гипоксантина, связанного с остатком рибозы (рибофуранозы) посредством β-N9-гликозидной связи. Инозин может быть получен любым известным из уровня техники способом
«Фармацевтически приемлемые эксципиенты» представляют собой вещества, известные специалисту в данной области техники и подходящие для создания лекарственного средства, включающего предлагаемую в настоящем изобретении композицию, в форме для наружного, ингаляционного, энтерального, парентерального или др. введения. Например, в качестве эксципиентов могут использоваться любые известные фармацевтически приемлемые неорганические или органические носители, консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие вещества, эмульгаторы, подсластители, красители, корригенты, соли для регулирования осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты и другие необходимые компоненты.
«Фармацевтически приемлемые» подразумеваются соединения, которые не вызывают токсических или иных нежелательных эффектов при введении в организм пациента.
Липополисахарид Escherichia coli O111:B4 при проникновении в нижние дыхательные пути и альвеолы инициировало развитие воспалительного процесса в легких. Липополисахарид (ЛПС), присоединяясь к CD14/TLR4/ MD2-рецепторному комплексу на поверхности клеток системы мононуклеарных фагоцитов, вызывает индукцию секреции провоспалительных факторов, в том числе фактор некроза опухоли (TNF-alpha), интерлейкина 1 (IL-1), и других, и тем самым запускает неспецифический каскад воспалительных реакций. В связи с этим, ЛПС используется в качестве экспериментального агента в фармакологии как для изучения механизмов воспаления, так и для разработки и апробации новых фармакологических средств, направленных на подавление различных звеньев воспалительного каскада.
«Пациент» обозначает человека или другое млекопитающее, птиц, земноводных или рыб, в организм которых тем или иным способом вводится композиция.
Пневмония острое воспалительное заболевание легких инфекционного (бактерии, грибы, вирусы, простейшие) и неинфеккционного (аутоиммунное, химическое, лучевое поражение) генеза острое инфекционное заболевания, которое вызывают бактерии, вирусы, грибы или простейшие, протекающее с поражением тканей легкого.
ОРДС - осложнение пневмонии, острый респираторный дистресс синдром угрожающее жизни острое диффузное повреждение легочной ткани инфекционного и неифекционного генеза, приводящее к острой дыхательной недостаточности.
Способ получения композиции проиллюстрирован примером № 1
Противовоспалительную активность субстанции на основе полученной композиции оценивали на модели липополисахарид-индуцированной острой пневмонии и острого респираторного дистресс синдрома (ОРДС) у половозрелых лабораторных крыс (пример №2).
Пневмонию и ОРДС у лабораторных животных индуцировали интратрахеальным введением липополисахарида Escherichia coli O111:B4.
Эффективность терапии средством по изобретению AФ-01 сравнивали с эффективностью терапии инозином и принятым стандартом в лечении острого респираторного дистресс синдрома, средством противовоспалительного действия - препаратом дексаметазон.
Оценка влияния средства по изобретению на выраженность воспалительного ответа проводилась по значениям общепринятых гематологических, иммунологических, биохимических, гемостатических показателей в крови, включая значения маркеров про- и противовоспалительного ответа: TNFα - фактор некроза опухолей-α; IL-1β - интерлейкин-1β; IL-6 - интерлейкин-6; IL-2 - интерлейкин-2; CRP - С-реактивный белок. Маркеры эндотелиальной дисфункции: END-1 - эндотелин 1 типа; NO - оксид азота (II). Маркеры активности про-, противосвертывающих систем: АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время; ПВ - протромбиновое время; ТВ - тромбиновое время; ФГН - фибриноген; ATIII - активность антитромбина. Цитологическому исследованию был подвергнут бронхолегочный лаваж крыс, из которого были изготовлены цитологические препараты, окрашенные по Паппенгейму. Анализ цитологических препаратов сопровождался полуколичественной оценкой клеточности мазков и клеточного состава не менее чем в 10 полях зрения при увеличении 1000
На фоне терапии острого респираторного дистресс-синдрома у лабораторных крыс наблюдалось уменьшение степени тяжести воспалительных изменений в легких животных, снижение интенсивности и характера лейкоцитарной инфильтрации легочной ткани, уменьшение концентрации основных маркеров воспалительного процесса (TNFα, С-реактивный белок) и повышение уровня IL-2 - одного из индикаторных маркеров противовоспалительного ответа. Интерлейкина-2 в числе прочего, способствует генерации, выживаемости и функциональной активности регуляторных Т-лимфоцитов. Активность этой популяции лимфоцитов направлена на ограничение избыточного воспалительного ответа, а также предупреждение развития аутоиммунных реакций. Действие средства по изобретению предопределило умеренное снижение прогемостатического потенциала крови и увеличение активности фибринолитической системы. Снижение уровня эндотелина 1 типа и повышение значений оксида азота указывает на способность средства по изобретению предупреждать развитие эндотелиальной дисфункции и благоприятно влиять на микроциркуляцию. Гистологическая картина при противовоспалительном терапевтическом действии средства по изобретению сопоставимо с гистологической картиной при терапевтическом действии дексаметазона. Однако в отличии от дексаметазона терапевтическое действие средства по изобретению лишено той совокупности побочных реакций, которые предопределены при использовании дексаметазона и требуют дополнительной длительной терапии.
В частности, средство по изобретению в отличии от глюкокортикоидов в целом и дексаметазона в частности, оказывая противовоспалительное действие, не вызывает нарушений липидного, белкового, и минерального и гормонального обменов. Не приводит к атрофии кожи и мышц, иммунодепрессии, остеопорозу, стероидным язвам пищеварительного тракта.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг. 1. - Разделение средства по изобретению на фракции
Фиг. 2 - Срез легкого крысы. Интактные животные. Группа 1. Незначительное утолщение альвеолярных перегородок, слабовыраженная мононуклеарная инфильтрация. Окр. Гематоксилин-эозин. Ув. 400
Фиг. 3 - Цитологический препарат. бронхоальвеолярного лаважа крысы. Интактные животные. Группа 1. Отмечается низкая клеточность мазка. Выявляются единичные макрофаги и лимфоциты. Окр. по Паппенгейму. Ув. 1000
Фиг. 4 - Срез легкого крысы. ОРДС. Группа 2. Значительное утолщение альвеолярных перегородок, выраженная смешанноклеточная воспалительная инфильтрация с большим количеством активированных нейтрофилов. В просвете альвеол также выявляются инфильтраты. Окр. Гематоксилин-эозин. Ув. 400
Фиг. 5 - Цитологический препарат бронхоальвеолярного лаважа крысы. ОРДС
Группа 2. Отмечается высокая клеточность мазка. Определяется смешанная клеточная популяция, представленная как макрофагами, так и в большом количестве дегенеративными нейтрофилами. Окр. по Паппенгейму. Ув. 1000.
Фиг. 6 - Срез легкого крысы. ОРДС, лечение инозин. Группа 3. Значительное утолщение альвеолярных перегородок, выраженная смешанноклеточная воспалительная инфильтрация, преимущественно мононуклеарными клетками. Окр. Гематоксилин-эозин. Ув. 400.
Фиг. 7 - Цитологический препарат бронхоальвеолярного лаважа крысы. ОРДС, Лечение инозин. Отмечается значительная клеточность мазка. Определяется смешанная клеточная популяция, представленная преимущественно макрофагами, дегенеративными нейтрофилами и лимфоцитами. Окр. по Паппенгейму. Ув. 1000.
Фиг. 8 - Срез легкого крысы. ОРДС, лечение: средство по изобретению. Группа 4. Умеренное утолщение альвеолярных перегородок, незначительная смешанноклеточная воспалительная инфильтрация, представленная преимущественно мононуклеарными клетками. Окр. Гематоксилин-эозин. Ув. 400.
Фиг. 9 - Цитологический препарат бронхоальвеолярного лаважа крысы. ОРДС. Лечение-средство по изобретению. Группа 4. Отмечается умеренная клеточность мазка. Определяется смешанная клеточная популяция, представленная преимущественно макрофагами и лимфоцитами. Окр. по Паппенгейму. Ув. 1000.
Фиг. 10 - Срез легкого крысы. ОРДС, лечение: дексаметазон. Группа 5. Незначительное утолщение альвеолярных перегородок, незначительная смешанноклеточная воспалительная инфильтрация, представленная преимущественно мононуклеарными клетками. Окр. Гематоксилин-эозин. Ув. 400.
Фиг. 11 - Цитологический препарат. ОРДС, лечение: дексаметазон. Группа 5. Отмечается умеренная клеточность мазка. Определяется смешанная клеточная популяция, представленная преимущественно макрофагами и лимфоцитами. Окр. по Паппенгейму. Ув. 1000.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение поясняется конкретными примерами осуществления изобретения, которые носят иллюстрирующий характер и никоим образом не ограничивают объем заявленных притязаний.
Сокращения:
GSH - глутатион (восстановленный глутатион);
GSSG - окисленный глутатион (дисульфид глутатиона);
GSO3H - глутатионсульфоновая кислота;
GS(O)SG - глутатион дисульфид S-оксида или сульфон;
GS(O2)SG - глутатион дисульфид S-диоксида.
HPLC (ВЭЖК) - высокоэффективная жидкостная хромотография;
Пример 1. Получение композиции противовоспалительного средства.
Смешивают эквимолярные количеств рибофуранозилгипоксантина с 1М раствором дисульфида глутатиона, содержащим координационное соединение платины, в виде Pt•S-глутатиона с содержанием Pt -1.5×10-3 М на 1 кг дисульфида глутатиона и S-оксид дисульфида глутатиона (2.2 %). (HPLC контроль полученной композиции приведен на фиг. 1.).
Пример 2. Исследование противовоспалительной эффективности средства по изобретению на экспериментальной модели липополисахарид-индуцированной острой пневмонии у половозрелых лабораторных крыс для профилактики и лечения острого респираторного дистресс-синдрома.
Исследуемые вещества:
1. противовоспалительное средство по изобретению - AФ-01 (композиция, полученная в примере 1);
2. инозин;
3. дексаметазон.
Исследования выполнены на половозрелых аутбредных крысах. Моделирование острой пневмонии осуществлено инстилляцией раствора липополисахарида (ЛПС) Escherichia coli O111:B4 производства Sigma-Aldrich в дозе 10 мг/кг, растворенного в 0,2мл физиологического раствора в трахею. Липополисахарид был введен безоперационным путем при помощи металлического атравматического зонда, введенного в трахею мануальным методом под контролем клинического состояния животного (на всем протяжении процедуры и в течение 2 часов после извлечения зонда).
Проникновение ЛПС в нижние дыхательные пути и альвеолы инициировало развитие воспалительного процесса в легких. ЛПС, присоединяясь к CD14/TLR4/ MD2-рецепторному комплексу на поверхности клеток системы мононуклеарных фагоцитов, вызывает индукцию секреции провоспалительных факторов, в том числе фактор некроза опухоли (TNF-alpha), интерлейкина 1 (IL-1), и других, и тем самым запускает неспецифический каскад воспалительных реакций. В связи с этим, ЛПС используется в качестве экспериментального агента в фармакологии как для изучения механизмов воспаления, так и для разработки и апробации новых фармакологических средств, направленных на подавление различных звеньев воспалительного каскада. При этом в зависимости от дозы, пути и способа введения ЛПС можно моделировать разные виды легочной патологии, наиболее распространенными из которых являются острое повреждение легких (модель острой пневмонии), острый респираторный дистресс синдром (ОРДС), фиброз легкого [Рыбакова А.В., Макарова М.Н. 2013].
Противовоспалительное средство по изобретению, инозин и дексаметазон вводились лабораторным крысам в объеме, эквивалентном объему, предусмотренному для введения этим животным.
Характеристика исследуемых групп
Примечание: * - дозы для введения были определены в ранее проведенных экспериментах
Оценка влияния средства по изобретению на выраженность воспалительного ответа проводилась по значениям общепринятых гематологических, иммунологических, биохимических, гемостатических показателей в крови с использованием специализированных коммерческих наборов фирм (Cloud-Clone Corp., НПО «Ренам»). Анализу был подвергнут бронхолегочный лаваж. Гистологическому исследованию были подвергнуты легкие животных.
Иммунологические показатели включали значения маркеров про- и противовоспалительного ответа:
TNFα - фактор некроза опухолей-α;
IL-1β - интерлейкин-1β;
IL-6 - интерлейкин-6;
IL-2 - интерлейкин-2.
Биохимические показатели включали:
CRP - С-реактивный белок;
END-1 - эндотелин 1 типа;
NO - оксид азота (II);
Гемостазиологических показателей включали:
АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время;
ПВ - протромбиновое время;
ТВ - тромбиновое время;
ФГН - фибриноген;
ATIII - активность антитромбина.
Патоморфологические исследования
Цитологическому исследованию был подвергнут бронхолегочный лаваж крыс, из которого были изготовлены цитологические препараты, окрашенные по Паппенгейму. Анализ цитологических препаратов сопровождался полуколичественной оценкой клеточности мазков и клеточного состава не менее чем в 10 полях зрения при увеличении 1000 на основании следующих критериев:
* для клеточности мазка:
0 - отсутствие клеток в поле зрения;
1 - минимальное количество клеток (1-10);
2 - незначительное (11-20);
3 - умеренное (21-50);
4 - большое (51-100);
5 - максимальное (более 100).
* для оценки качественного клеточного состава:
0 - отсутствие клеток в поле зрения;
1 - в поле зрения только мононуклеарные клетки (клетки макрофагально-гистиоцитарного ряда, лимфоциты, плазмоциты);
2 - в поле зрения смешанный клеточный состав, с преобладанием мононуклеарных клеток;
3 - смешанный клеточный состав, представленный в равном соотношении мононуклеарами и гранулярными лейкоцитами;
4 - смешанный клеточный состав с преобладанием гранулярных лейкоцитов (нейтрофилы, эозинофилы);
5 - клеточный состав представлен исключительно нейтрофилами и эозинофилами.
Гистологическому исследованию были подвергнуты фрагменты легких крыс. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 часов, после чего по общепринятой методике заливали в парафин. Затем изготавливали срезы толщиной 3-5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Анализ образцов сопровождался полуколичественной оценкой следующих показателей: общая степень выраженности патологий, воспалительная инфильтрация альвеолярных перегородок и альвеол, характер воспалительной инфильтрации.
Полуколичественная оценка степени выраженности патологически изменений проводилась в баллах от 0 до 5, где:
0 - отсутствие патологии;
1 - минимальные повреждения;
2 - незначительные повреждения;
3 - умеренные повреждения;
4 - выраженные повреждения;
5 - тяжелые повреждения.
Оценка площади патологически измененных участков (отношение площади повреждения ткани легких от общей площади среза в %) выполнена визуально. Характер воспалительной инфильтрации в альвеолярных перегородках и альвеолах оценивался полуколичественно в баллах на основании следующих критериев:
0 - отсутствие воспалительной инфильтрации;
1 - мононуклеарная инфильтрация (клетки макрофагально-гистиоцитарного ряда, лимфоциты, плазмоциты);
2 - смешанноклеточная инфильтрация с преобладанием мононуклеарных клеток;
3 - смешанноклеточная инфильтрация, представленная в равном соотношении мононуклеарами и гранулярными лейкоцитами;
4 - смешанноклеточная инфильтрация с преобладанием гранулярных лейкоцитов (нейтрофилы, эозинофилы);
5 - исключительно нейтрофильная и эозинофильная инфильтрация.
Анализ гистологических и цитологических препаратов проводился при помощи светооптического микроскопа Carl Zeiss Axioskop 2 Plus при увеличении 40-, 100-, 400-, 1000-кратно. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Carl Zeiss AxioCam ERc5s и программного обеспечения AxioVision 4.8.
В цельной крови при помощи гематологического анализатора MicroCC-20 Plus (ветеринарный) определялись значения клинических показателей.
Анализируемые иммунологические и биохимические показатели определялись в плазме крови подопытных животных при помощи автоматического биохимического анализатора А-15 и многофункционального планшетного анализатора EnSpire Multilabel Plate Reader.
Результаты исследования
Действие ЛПС Escherichia coli O111:B4 «Sigma-Aldrich» в дозе 10 мг/кг привело к развитию выраженного воспалительного поражения дыхательной системы подопытных животных. Адекватность выбранных условиях моделирования воспалительного процесса подтверждает отсутствие летальности в группах. Животные находились под непрерывным наблюдением после введения AФ-01 и препаратов сравнения. После введения ЛПС у животных в группах 2 - 5 наблюдалось умеренное снижение двигательной активности и общее угнетение. Отклонений в поведении животных после первого введения средства по изобретению в группе 4 не отмечено. Достоверных отличий по клинической картине интоксикации между обследованными группами не отмечено.
Патологоанатомическое исследование легких животных после этаназии не выявило макроскопически выраженных патологических изменений и существенных отличий между интактными и зараженными крысами. Ткань легких у всех исследованных животных была неравномерного розового окраса, с чередующимися участками ателектаза (более темные, спавшиеся участки) и незначительного эмфизематозного расширения (более светлые, воздушные). При этом, по данным микроскопического анализа установлено, что развитие острого респираторного дистресс-синдрома сопровождалось выраженными структурно-функциональными изменениями легочной ткани подопытных крыс.
Характерные гистологические изменения в ткани легкого и цитологическая картина в бронхолегочном лаваже в группах 1-5 приведены на фиг. 2-11.
Сводные результаты динамики патоморфологических показателей в группах 2-5 с моделированным острым респираторным дистресс-синдромом представлены в таблице 2.
Влияние средства по изобретению- AФ-01 на динамику патоморфологических показателей у лабораторных крыс с моделированным острым респираторным дистресс-синдромом (Me [QQ])
[3,00-3,75]
[2,3-3,3]
[1,3 - 2,7]
[2,0 - 3,0]
[21,3-33,8]
[10,0 - 25,0]
[16,3 - 33,8]
[15,0 - 25,0]
[3,0 - 5,0]
[2,0 - 5,0]
[2,0 - 3,0]
[1,0 - 2,0]
[1,0 - 4,0]
[1,0 - 1,5]
[0,3 - 2,0]
[0,8 - 2,0]
[3,3 - 4,0]
[1,0 - 2,0]
[2,0 - 2,8]
[2,0 - 3,0]
[2,0 - 4,0]
[1,0 - 2,5]
[0,3 - 2,0]
[1,0 - 2,0]
* - отличия от группы «ОРДС» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05)
1 - 0 - отсутствие видимых патологических изменений; 1 - минимальные повреждения; 2 - незначительные повреждения; 3 - умеренные повреждения; 4 - выраженные повреждения; 5 - тяжелые повреждения
2 - 0 - отсутствие воспалительной инфильтрации; 1 - мононуклеарная инфильтрация (клетки макрофагально-гистиоцитарного ряда, лимфоциты, плазмоциты); 2 - смешанноклеточная инфильтрация с преобладанием мононуклеарных клеток; 3 - смешанноклеточная инфильтрация, представленная в равном соотношении мононуклеарами и гранулярными лейкоцитами; - смешанноклеточная инфильтрация с преобладанием гранулярных лейкоцитов (нейтрофилы, эозинофилы); 5 - исключительно нейтрофильная и эозинофильная инфильтрация
Результаты изменения клеточности бронхоальвеолярного лаважа у лабораторных крыс в группах 1-5 представлены в таблице 3.
Влияние средства по изобретению- AФ-01 и препаратов сравнения на степень клеточности бронхоальвеолярного лаважа у лабораторных крыс с моделированным ОРДС (M±SE)
* - отличия от группы «Контроль» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05),
** - отличия от группы «ОРДС» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05)
1 - 0 - отсутствие клеток в поле зрения; 1 - минимальное количество клеток (1-10); 2 - незначительное количество клеток (11-20); 3 - умеренное количество клеток (21-50); 4 - большое количество клеток (51-100); 5 - максимальное количество клеток (более 100)
2 - 0 - отсутствие клеток в поле зрения; 1 - в поле зрения только мононуклеарные клетки (клетки макрофагально-гистиоцитарного ряда, лимфоциты, плазмоциты); 2 - в поле зрения смешанный клеточный состав, с преобладанием мононуклеарных клеток; 3 - смешанный клеточный состав, представленный в равном соотношении мононуклеарами и гранулярными лейкоцитами; 4 - смешанный клеточный состав с преобладанием гранулярных лейкоцитов (нейтрофилы, эозинофилы); 5 - клеточный состав представлен исключительно нейтрофилами и эозинофилами
В группе 1 (интактные животные) выявлено незначительное утолщение альвеолярных перегородок, слабовыраженная мононуклеарная инфильтрация (фиг. 2). В мазке бронхоальвеолярного лаважа обнаружены единичные макрофаги и лимфоциты (фиг. 3, группа 1).
При гистологическом исследовании ткани легких при ОРДС были выявлены специфические воспалительные изменения, вызванные ЛПС у животных в группе 2, характеризовавшиеся интенсивной смешанно-клеточной воспалительной инфильтрацией альвеолярных перегородок, с заполнением воспалительными клетками (преимущественно нейтрофильными гранулоцитами) просветов альвеол (фиг. 4-5, табл. 2 и табл. 3).
Результат терапии ОРДС инозином (группа 3) оценивается как тенденция снижения воспалительного ответа. Наблюдалось некоторое снижение как общей степени распространенности и выраженности воспалительного процесса в легких, так и уменьшение интенсивности инфильтрации легочной ткани и характера представленных в инфильтрате клеточных популяций (табл. 2). Инфильтрация пораженных применением ЛПС легких происходила, преимущественно, за счет макрофагов и в меньшей степени - лимфоцитов (фиг. 6-7). Снижение клеточности бронхоальвеолярного лаважа было относительно незначительным (табл. 3).
Терапия ОРДС AФ-01 (группа 4) способствовала предупреждению развития и коррекции патоморфологических воспалительных изменений тканей легкого крыс. Наблюдалось статистически значимое снижение как общей степени распространенности и выраженности воспалительного процесса в легких, так и снижение интенсивности инфильтрации легочной ткани и характера представленных в инфильтрате клеточных популяций (табл. 2). В группе животных, получавших терапию противовоспалительным средством по изобретению, инфильтрация пораженных применением ЛПС легких происходила, преимущественно, за счет мононуклеарных клеток (преимущественно макрофагов, в меньшей степени - лимфоцитов (фиг. 8-9). Отмечено значительное снижение клеточности бронхоальвеолярного лаважа сопоставимое с эффектом от применения дексаметазона (табл. 3, группы ОРДС+ AФ-01 и ОРДС+дексаметазон).
Терапия ОРДС дексаметазон (группа 5) способствовала предупреждению развития и коррекции патоморфологических воспалительных изменений тканей легкого. Наблюдалось статистически значимое снижение как общей степени распространенности и выраженности воспалительного процесса в легких, так и снижение интенсивности инфильтрации легочной ткани и характера представленных в инфильтрате клеточных популяций, изменение клеточности бронхоальвеолярного лаважа (табл. 2 и табл. 3) сопоставимое с эффективностью AФ-01 . В группе животных, получавших дексаметазон, выявлено умеренное утолщение альвеолярных перегородок, небольшая смешанноклеточная воспалительная инфильтрация, представленная преимущественно мононуклеарными клетками. инфильтрация пораженных применением ЛПС легких происходила, преимущественно, за счет мононуклеарных клеток (преимущественно макрофагов, в меньшей степени - лимфоцитов (фиг. 10-11).
Выраженных количественных и качественных изменений клеточных популяций форменных элементов крови в ходе оценки общего клинического анализа крови у животных с ОРДС, не получавших лечение, не отмечалось (табл. 4). На наш взгляд, это закономерное наблюдение с учетом краткосрочности периода наблюдений (менее суток) от момента инициации заболевания и локализации процесса, преимущественно, в тканях легких.
Наиболее существенными нарушениями гемограммы крыс с ОРДС, отражающими системный характер модели патологического процесса, являлось клинически умеренное, но статистически значимое уменьшение количества эритроцитов в единице объема крови (гематокрит меньше в среднем на 14,6% (р=0,002), общее содержание эритроцитов меньше в среднем на 20,5% (p<0,001). С учетом короткой продолжительности эксперимента, объяснением этого результата является увеличение внутрисосудистого гемолиза вследствие системных проявлений воспалительного процесса.
Одним из явных факторов, указывающим на наличие таких проявлений воспаления, является увеличение скорости оседания эритроцитов (табл. 4) в крови крыс группы «ОРДС» по сравнению с контрольными значениями: в среднем в 2 раза (р=0,027).
Влияние препарата средства по изобретению - AФ-01 на динамику гематологических показателей у лабораторных крыс с моделированным острым респираторным дистресс-синдромом (Me [QQ])
дексаметазон
96,5] *,**
58,8] *,**
50,9]*
699]*, **
* - отличия от группы «Контроль» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05),
** - отличия от группы «ОРДС» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05)
WBC - общее содержание лейкоцитов; LYMa - абсолютное количество лимфоцитов; MIDa - абсолютное содержание смеси моноцитов, эозинофилов, базофилов и клеток на различных стадиях дифференциации; GRAa - абсолютное количество лимфоцитов; LYM% - относительное количество лимфоцитов; MID% - относительное содержание смеси моноцитов, эозинофилов, базофилов и клеток на различных стадиях дифференциации; GRA% - относительное количество лимфоцитов; RBC - содержание эритроцитов; HGB - концентрация гемоглобина; МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах; МСН - среднее содержание гемоглобина в эритроците; MCV - средний объём эритроцитов; RDW-CV - ширина распределения эритроцитов по среднему объёму; RDW-SD - ширина распределения эритроцитов (стандартное отклонение); НСТ - гематокрит; PLT - содержание тромбоцитов; MPV - средний объём тромбоцитов; PDW - ширина распределения тромбоцитов (стандартное отклонение); РСТ - тромбоцитокрит; P-LCR - коэффициент «больших» тромбоцитов; СОЭ - Скорость оседания эритроцитов
Применение инозина в качестве средства для лечения экспериментального ОРДС способствовало быстрой коррекции количественных и качественных нарушений эритроидного компонента системы крови подопытных животных. При этом сохранение количественных показателей преимущественно происходило за счет увеличения содержания в периферической крови форменных элементов крови без увеличения уровня гемоглобина (табл. 4), что свидетельствует о высокой мобилизации молодых нормоцитов и ретикулоцитов в красном костном мозге при терапии инозином. Это подтверждает и анализ среднего размера клеток. В группе животных с ОРДС, получавших инозин, MCV в среднем превышал контрольные значения и значения группы нелеченых крыс в 1,5 раза и 1,4 раза, соответственно (p<0,001).
Анализ влияния применения инозина и тестируемого препарата AФ-01 для терапии ОРДС на показатели эритроидного ростка кроветворения установил безопасность их применения в отношении оцениваемых показателей (табл. 4).
На всем протяжении периода наблюдений отмечался крайне низкий уровень общего содержания гемоглобина в крови крыс всех обследованных групп (табл. 4). Вместе с тем, показатели, отражающие среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (МСНС и МСН) находились в пределах обычной нормы для этого вида животных.
Одновременно на фоне развития патологического процесса наблюдался рост удельного веса крупных форм тромбоцитов в общей популяции этих клеток. Уровень MPV и P-LCR у животных группы «ОРДС» статистически значимо превышал контрольные значения в среднем на 9% (p<0,001) и 19% (р=0,041), соответственно. Это свидетельствует о мобилизации тромбоцитов из депо (и, прежде всего, из красного костного мозга) на фоне развития воспалительных изменений в легких животных и об увеличении прогемостатического потенциала системы крови крыс.
Достоверных отличий между средними величинами вышеуказанных показателей групп нелеченых крыс и животных, получавших лекарственные препараты, выявлено не было (p>0,05), за исключением группы, получавшей дексаметазон (табл. 4). Общее содержание тромбоцитов у этих животных оказалось существенно сниженным, статистически значимо меньшим по сравнению и с контрольными значениями, и со значениями, полученными в группе нелеченных животных.
Одновременно с этим обращал на себя внимание факт увеличения содержания в крови подопытных крыс популяции мононуклеарных клеток, на фоне применения AФ-01 и дексаметазона, статистически значимо отличающегося от показателей группы «ОРДС» (табл. 4). Этот процесс может иметь важное прогностически благоприятное значение.
Динамика значений про- и противовоспалительных иммунологических маркеров, биохимических и гемостазиологических показателей активности патологического процесса приведена в табл. 5.
Влияние средства по изобретению- AФ-01 и препаратов сравнения на динамику значений иммунологических, биохимических и гемостазиологических показателей в крови при ОРДС (Me [QQ])
[0,92 - 6,32[
[5,56 - 20,00]
[4,32 - 18,00]
[0,61 - 10,31]
[0,73 - 10,01]
[5,94 - 49,6]
[14,50 - 29,05]
[15,10 - 31,70]
[33,3 - 40,38]**
[3,17 - 21,42]**
[0,96 - 9,10]
[10,65-17,73] *
[6,11-14,22] *
[2,71 - 11,85] **
[1,83 - 9,94] **
[31,13 - 49,53]
[46,10 - 71,05]
[46,10 - 71,05]
[37,93 - 48,90] **
[36,98 - 49,17] **
[12,25- 07,30]
[25,85-256,70]
[27,94-219,68]
[26,15 - 85,20]
[24,17 - 83,12]
[37,75 - 44,50]
[29,25 - 39,00]
[31,12 - 39,75]
[33,75 - 41,75]
[28,12 - 37,43]
[24,50 - 28,00]
[17,25-23,00] *
[19,11-22,01] *
[19,00 - 24,75] *
[17,41 - 23,37] *
[22,25 - 25,50]
[15,25-19,75] *
[15,17-19,93] *
[17,00 - 22,00] *
[15,87 - 21,43] *
[4,33 - 5,80]
[5,28 - 8,43]
[5,29 - 7,74]
[4,85 - 6,83]
[4,53 - 6,12]
[83,25 - 89,50]
[68,50-77,75] *
[71,44-79,83] *
[77,75 - 82,75] **
[75,98 - 83,04] **
* - отличия от группы «Контроль» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05),
** - отличия от группы «ОРДС» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05)
TNFα - фактор некроза опухолей-α; IL-2 - интерлейкин-2; CRP - С-реактивный белок; END-1 - эндотелин 1 типа; NO - оксид азота (II); АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время; ПВ - протромбиновое время; ТВ - тромбиновое время; ФГН - фибриноген; ATIII - антитромбин
Развитие ОРДС у крыс характеризовалось, по сравнению с контрольными значениями, выраженной тенденцией к росту концентрации в крови фактора некроза опухолей-α (в среднем больше в 2,1 раза, р=0,074) и эндотелина 1 типа (в среднем больше в 1,3 раза, р=0,089), достоверным увеличением содержания С-реактивного белка (в среднем в 3,2 раза, р=0,017), снижением продолжительности коагуляционных тестов (протромбиновое время: в среднем в 1,4 раза (р=0,016); тромбиновое время: в среднем в 1,3 раза (р=0,013), отражающих активность внешнего и общего каскадов системы свертывания, а также статистически значимым уменьшением активности антиромбина III в среднем в 1,2 раза (р=0,007), указывающим на угнетение работы фибринолитической системы (табл. 5).
Терапевтический эффект от применения инозина в терапии липополисахарид-индуцированного ОРДС по критериям про- и противовоспалительного ответа указывает на тенденцию ограничения воспалительной реакции, нормализацию функциональной активности эндотелия (табл. 5).
Терапевтическое действие средства по изобретению AФ-01 для терапии экспериментального ОРДС проявилось значительной степенью коррекции нарушений воспалительного характера. Отмечено достоверное снижение уровня С-реактивного белка в крови подопытных животных (в среднем 1,4 раза, р=0,021), концентрации эндотелина 1 типа (в среднем в 1,4 раза, р=0,036) и увеличение активности антитромбина III (в среднем в 1,1 раза, р=0,005). Это свидетельствует о выраженном противовоспалительном действии тестируемого препарата, способности нормализовать функциональную активность эндотелия, антигемостатический потенциал крови (табл. 5). Противовоспалительное действие средства по изобретению AФ-01 было сопоставимо с противовоспалительной активностью дексаметазона (табл. 5). Однако противовоспалительный эффект средства по изобретению AФ-01 имеет отличный о дексаметазона механизм противовоспалительного действия. В частности, особенностью активности средства по изобретению AФ-01 являлось значительное увеличение концентрации интерлейкина-2 в крови подопытных животных, превышающее аналогичный показатель в группе крыс, не получавших лечение, в среднем в 1.7 раза (р=0,003). Интерлейкин-2 в числе прочего, способствует генерации, выживаемости и функциональной активности регуляторных Т-лимфоцитов. Действие этой популяции лимфоцитов направлена на ограничение избыточного воспалительного ответа, а также предупреждение развития аутоиммунных реакций (Abbas et al., 2018).
Противовоспалительное терапевтическое действие средства по изобретению AФ-01 проявилось непосредственно в очаге воспалительного процесса, о чем свидетельствуют значения маркеров про- и противовоспалительного ответа в бронхолегочном лаваже ОРДС (табл. 6).
Влияние средства по изобретению- AФ-01 и препаратов сравнения на динамику значений иммунологических показателей в бронхолегочном лаваже при ОРДС в эксперименте (Me [QQ])
дексаметазон
[0,45 - 6,42]
[3,09 - 17,06]*
[2,59 - 11,06]*
[1,01 - 7,85]
[1,17 - 7,34]
[15,03 - 122,05]
[35,78 - 209,03]
[38,23 - 165,12]
[21,15 - 135,95]
[21,49 - 129,67]
[50,03 - 112,48]
[19,85 - 141,90]
[29,87 - 168,70]
[50,53 - 272,20]
[21,24 - 129,11]
[6,75 - 7,95]
[6,65 - 7,85]
[6,44 - 7,68]
[6,75 - 7,98]
[5,12 - 7,32]
[2,78 - 8,43]
[7,68 - 12,59] *
[5,43 - 10,07] *
[3,49 - 7,18] **
[3,07 - 6,27] **
* - отличия от группы «Контроль» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05),
** - отличия от группы «ОРДС» достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05)
TNFα - фактор некроза опухолей-α; IL-1β - интерлейкин-1β; IL-2 - интерлейкин-2; IL-6 - интерлейкин-6; CRP - С-реактивный белок; END-1 - эндотелин 1 типа
В группе животных с ОРДС без лечения наблюдалось значительное увеличение содержания фактора некроза опухолей-α по сравнению с контрольными значениями (в среднем в 8,7 (!) раза, р=0,041) и концентрации эндотелина 1 типа (в среднем в 2,6 раза, р=0,027).
Терапевтический эффект от применения инозина в терапии липополисахарид-индуцированного ОРДС по критериям про- и противовоспалительного ответа указывает на тенденцию ограничения воспалительной реакции, нормализацию функциональной активности эндотелия (табл. 6).
Терапия ОРДС средством по изобретению AФ-01 обеспечила существенное снижение интенсивности воспаления, что нашло свое отражение в величинах изменения уровня различных маркеров про- и противовоспалительного ответа в бронхиальном лаваже (табл. 6). Концентрация фактора некроза опухолей- α и эндотелина 1 типа снижалась до уровня, статистически сопоставимого с контрольными значениями (р=0,305 и р=0,396, соответственно). При этом наблюдалась достоверная разница со средними величинами содержания эндотелина 1 типа в группе крыс, не получавших лечение (в среднем ниже в 1,8 раза, р=0,016). Аналогично с результатами, полученными при анализе иммунологических маркеров в крови обследованных крыс, в бронхолегочном лаваже животных, получавших AФ-01 , также наблюдалась выраженная тенденция к росту содержания интерлейкина-2 по сравнению с показателями группы «ОРДС» (в среднем выше в 3 раза, р-0,059). По уровню изменения значений маркеров провоспалительного ответа бронхолегочном лаваже при ОРДС противовоспалительное действие средства по изобретению AФ-01 было сопоставимо с противовоспалительной активностью дексаметазона (табл. 6). Однако противовоспалительный эффект средства по изобретению AФ-01 имеет отличный о дексаметазона механизм противовоспалительного действия. В частности, особенностью активности средства по изобретению AФ-01 являлось значительное увеличение концентрации интерлейкина-2 в крови подопытных животных, превышающее аналогичный показатель в группе крыс, не получавших лечение. Тогда как уровень интерлейкина-2 не увеличивалась при использовании дексаметазона в сравнении с величиной у животных, не получавших лечения. Интерлейкина-2 в числе прочего, способствует генерации, выживаемости и функциональной активности регуляторных Т-лимфоцитов. Действие этой популяции лимфоцитов направлена на ограничение избыточного воспалительного ответа, а также предупреждение развития аутоиммунных реакций (Abbas et al., 2018).
Таким образом противовоспалительная активность средства по изобретению AФ-01 в дозе 10 мг/кг массы тела у лабораторных крыс с острым респираторным дистресс-синдромом обеспечила уменьшение степени тяжести воспалительных изменений в легких животных превосходящее противовоспалительный эффект инозина и сопоставимое с противовоспалительной эффективностью дексаметазона.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Рыбакова А.В., Макарова М.Н., Соколов В.Д., Крышень К.Л., Ходько С.В., Макаров В.Г. Методические указания по экспериментальному моделированию лпс индуцированной острой пневмонии у крыс. Сообщение №1 // Международный вестник ветеринарии. 2013. № 4. С. 106-117.
2. Abbas et al., Revisiting IL-2: Biology and therapeutic prospects Sci. Immunol. 3, eaat1482, 2018.
3. Branchett W.J., Lloyd C. M. Regulatory cytokine function in the respiratory tract. Mucosal Immunol 2019; 12(3): 589-600.
4. [Fajgenbaum D.C., June C.H., Cytokine Storm//N Engl J Med 2020;383:2255-73. DOI: 10.1056/NEJMra2026131].
5. Lewis SR, Pritchard MW, Thomas CM, Smith AF. Pharmacological agents for adults with acute respiratory distress syndrome. Cochrane Database of Systematic Reviews 2019, Issue 7. Art. No.: CD004477.
6. Mager LF, Burkhard R, Pett N, Cooke NCA, Brown K, Ramay H, et al. Microbiome-derived inosine modulates response to checkpoint inhibitor immunotherapy. Science 2020;369:1481-9.
7. da Rocha Lapa F, da Silva MD, de Almeida Cabrini D, Santos AR. Anti-inflammatory effects of purine nucleosides, adenosine and inosine, in a mouse model of pleurisy: evidence for the role of adenosine A2 receptors//Purinergic Signal. 2012 Dec;8 (4):693-704.
8. Ruan S.Y., Lin H.H., Huang C.T. et al. Exploring the heterogeneity of effects of corticosteroids on acute respiratory distress syndrome: a systematic review and meta-analysis // Crit. Care. - 2014, 18: R63.
9. Welihinda A.A. et al. The adenosine metabolite inosine is a functional agonist of the adenosine A2A receptor with a unique signaling bias// Cell Signal. 2016 Feb 19;28(6):552-560.
Группа изобретений относится к области фармацевтики и может быть использована для предупреждения или лечения воспалительных заболеваний. Предложена фармацевтическая композиция с противовоспалительным действием, содержащая рибофуранозилгипоксантин или его фармацевтически приемлемую соль, дисульфид глутатиона или его фармацевтически приемлемую соль, представленный в виде координационного соединения, содержащего Pt-S-глутатионовую связь, с содержанием Pt -1.5× 10-3 молей на 1 кг дисульфида глутатиона, и S-оксид дисульфида глутатиона. Также предложены лекарственное средство и его применение для предупреждения и лечения воспалительных заболеваний лёгких инфекционного или неинфекционного генеза. Композиция обеспечивает усиление противовоспалительного действия, а также возможность терапии различных заболеваний воспалительного характера без побочных эффектов, присущих глюкокортикоидам. 3 н. и 6 з.п. формулы, 11 ил., 6 табл., 2 пр.
1. Фармацевтическая композиция с противовоспалительным действием, характеризующаяся тем, что содержит рибофуранозилгипоксантин или его фармацевтически приемлемую соль, дисульфид глутатиона или его фармацевтически приемлемую соль, представленный в виде координационного соединения, содержащего Pt-S-глутатионовую связь, с содержанием Pt -1.5×10-3 молей на 1 кг дисульфида глутатиона, и S-оксид дисульфида глутатиона.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где массовое соотношение рибофуранозилгипоксантина и дисульфида глутатиона в виде указанного координационного соединения составляет 1:1.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой количество S-оксида дисульфида глутатиона составляет 0,1-10 мас.% от общей композиции.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что количество Pt в композиции составляет от 1×10-10 молей до 1 *10-3 молей на 1 кг композиции.
5. Лекарственное средство для предупреждения или лечения воспалительных заболеваний, включающее композицию по любому из пп. 1-4 в терапевтически эффективном количестве совместно с фармацевтически приемлемыми эксципиентами.
6. Лекарственное средство по п. 5, характеризующееся тем, что выполнено в форме, пригодной для наружного, ингаляционного, энтерального или парентерального введения.
7. Лекарственное средство по п. 5, где воспалительные заболевания представляют собой заболевания инфекционного или неинфекционного генеза.
8. Лекарственное средство по п. 7, где воспалительные заболевания представляют собой заболевания легких инфекционного или неинфекционного генеза с острым респираторным дистресс-синдромом.
9. Применение лекарственного средства по п. 5 для предупреждения и лечения воспалительных заболеваний лёгких инфекционного или неинфекционного генеза.
