ПРИМЕНЕНИЕ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СОЛОДКИ, АНТИДОТА, ПОЛУЧЕННОГО ИЗ НЕЕ, И ПРИМЕНЕНИЕ УКАЗАННОГО АНТИДОТА Российский патент 2021 года по МПК A61K36/484 A61P39/00 A61P39/02 

Настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного экстракта растения солодки (Glycyrrhiza) и к антидоту для перорального применения для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина и к применению указанного антидота.

Препараты растения Glycyrrhiza, или солодки, использовались в качестве лекарств с древних времен и также упоминаются в традиционной китайской медицине в качестве одной из 50 основных трав. Glycyrrhiza - это греческий термин, уже описывающий основное свойство корня этого растения, а именно то, что он имеет сладкий вкус и, кроме того, что это корень, где ʺglycosʺ означает сладкий, а ʺrhizeʺ означает корень. Среди всех видов Glycyrrhiza наиболее подходящим вероятно является Glycyrrhiza glabra, являясь наиболее важным представителем солодки, помимо Glycyrrhiza uralensis, который в основном используется в традиционной китайской медицине. Вещества, содержащиеся в корне солодки inter alia давно известны своим противовоспалительным и муколитическим действием, при этом основным компонентом среди определяющих эффективность ингредиентов корня солодки является, прежде всего, глицирризиновая кислота, в частности 18-бета-глицирризиновая кислота. Содержание глицирризиновой кислоты варьируется в зависимости от обработки корня солодки и его происхождения. Таким образом, различное содержание глицирризиновой кислоты может быть получено из одного и того же корня в зависимости от его обработки. В качестве других важных ингредиентов корня солодки было определено около 9% азотсодержащих веществ, до 3,5% жира, незначительное содержание таннинов, до более 30% крахмала, эфирные масла, L-аспарагин, до 10% соляного раствора и около 4% смол, яблочная кислота и щавелевая кислота.

Важный компонент корня солодки, глицирризиновая кислота, была inter alia исследована Liu et al. (Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 2014, 39(19), 3841 et seq.) в отношении ее эффекта на липополисахарид-(LPS)-индуцируемую экспрессию цитокинов в макрофагах, и было обнаружено, что она проявляет противовоспалительную активность.

Фунгитоксины являются токсичными продуктами вторичного метаболизма, которые образуются плесневыми грибами. В зависимости от их типа и концентрации в кормах они оказывают негативные эффекты на продуктивность и здоровье сельскохозяйственных животных, поскольку они могут inter alia вызывать интоксикацию фунгитоксинами. Эти негативные последствия включают потерю работоспособности, тошноту, диарею, снижение фертильности, ослабление иммунной системы, развитие рака и повреждение нервной системы. Фунгитоксины, таким образом, представляют риск для здоровья и, следовательно, экономический риск, который по меньшей мере является таким же серьезным.

Он даже усиливается за счет того, что плесневые грибы способны одновременно образовывать различные фунгитоксины и вторичные метаболиты. Поэтому современные аналитические методы, которые являются высокоточными, в большинстве случаев обнаруживают несколько фунгитоксинов и вторичных метаболитов в сырьевых материалах, следовательно, и в образцах кормов. Streit et al., Toxins, 2013, 5, 504, et seq. обнаружили фунгитоксины и вторичные метаболиты в более чем 90% испытанных сырьевых материалов и образцов кормов. Было обнаружено от 7 до 69 метаболитов на образец. Из-за присутствия синергетических эффектов, которые детально не исследованы, даже очень низкие концентрации одновременно образующихся фунгитоксинов могут оказывать неблагоприятные эффекты на сельскохозяйственных животных.

Различные виды плесневых грибов продуцируют фунгитоксины, являющиеся вредными для сельского хозяйства, например, Aspergillus, Fusarium и Penicillium (Frisvad et al., Adv. Exp. Med. Biol., 2006, 571, 3 et seq.). Наиболее известные и наиболее широко исследованные плесневые токсины в области питания животных включают афлатоксины, например афлатоксин B1, трихотецены, например дезоксиниваленол, зеараленон, охратоксин А и фумонизины, например, фумонизин B1.

Документ CN10512673A (D1) описывает чайный продукт, содержащий сладкую древесину, который можно использовать для ингибирования и предотвращения токсиновых нагрузок или эффектов токсинов.

Документ RASHIN MOHSENI ET AL: ʺAntoitoxin characteristic of licorice extrаctr: the inhibitory effect on aflatoxin production in Aspergillus parasiticusʺ, JOURNAL OF FOOD SAFETY, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC, UNITED STATES, Bd. 34, No. 2, January 1, 2014 (2014-01-01) указывает, что экстракты Glycyrrhiza glabra обладают антитоксиновой активностью и способны снижать продукцию афлатоксинов.

К настоящему времени известно более 500 различных фунгитоксинов и их вторичных метаболитов, важными представителями которых являются боверицин (CAS-№: 26048-05-5), энниатины (CAS-N0: 11113-62-5), такие как энниатин A (CAS-№: 2503-13-1), A1 (CAS-№: 4530-21-6), B (CAS-№: 917-13-5), B1 (CAS-№: 19914-20-6), B2, B3, и апицидин (CAS-№: 183506-66-3). В работе Streit et al. (Toxins, 2012, 4, 788 et seq.) указано, что боверицин был обнаружен в 89%, различные энниатины в 96% и апицидин в 66% образцов. Энниатины можно было обнаружить в 37%, 68% и 76%, соответственно, протестированных образцов пищи (n=4,251), образцов кормов (n=3,640) и в 141 различных образцах непереработанных зерновых (n=2,647), тогда как боверицин был обнаружен в 20%, 21% и 54%, соответственно, испытанных образцов пищи (n=732), образцов кормов (n=861) и в 198 образцах различных непереработанных зерновых (n=554). Все образцы были собраны в Европе в период между 2000 и 2013 годами (EFSA Journal, 2014, 12, 3802).

Энниатины (ENN), боверицин (BEA) и апицидин (API) могут быть отнесены к одной группе на основании типа их синтеза. Они образуются в результате биосинтеза пептидов и имеют общую полипептидную структуру. Энниатины и боверицин имеют симметричные структуры и включают три пептидные связи с чередующимися сложноэфирными и амидными связями. Апицидин не имеет симметричной структуры и включает четыре пептидные связи, которые являются амидными связями. Далее энниатины, боверицин и апицидин указаны под общим названием ʺполипептидные фунгитоксиныʺ как подгруппа фунгитоксинов. Расстройства и заболевания, вызываемые полипептидными фунгитоксинами у субъектов, таких как люди и животные, указаны в настоящей заявке как ʺинтоксикации полипептидными фунгитоксинамиʺ. Напротив, дезоксиниваленол и афлотоксин B1 получают совершенно другим путем, то есть биосинтезом изобутила, и они имеют полиизопреновую структуру.

Интоксикации полипептидными фунгитоксинами, вызываемые энниатинами, боверицином и апицидином:

Известно, что энниатины демонстрируют цитотоксические эффекты на клеточные линии млекопитающих в анализах in vitro. Высокое содержание энниатина может быть обнаружено в тощей кишке, печени и жировой ткани крыс, из чего можно заключить, что наибольшая абсорбция происходит в тощей кишке или тонком кишечнике. McKee et al. (J. Nat. Prod, 1997, 60, 431 et seq.) продемонстрировали, что высокие дозы энниатинов были летальными для испытуемых мышей в исследовании, при этом даже низкие дозы приводили к потере массы тела.

Боверицин, по меньшей мере у домашней птицы, связан с увеличением массы сердца. Даже низкие концентрации боверицина вызывают токсические эффекты в анализах in vitro.

Park et al. (Appl. Environ. Microbiol., 1999, 86, 126 et seq.) показали, что апицидин, который является циклическим ингибитором гистондеацетилазы, проявляет токсические эффекты у крыс, особенно такие, как потеря массы тела, кровотечения в брюшной полости, кишечнике и мочевом пузыре, с последующим смертью. Кроме того, антипролиферативные и цитотоксические эффекты могут быть обнаружены в клеточных линиях млекопитающих.

Общие признаки интоксикаций полипептидными фунгитоксинами у сельскохозяйственных животных, в частности у свиней и домашней птицы, включают отсутствие аппетита и диарею, что негативно влияет на такие параметры производительности, как живая масса, коэффициент усвоения корма или масса яйца.

Первым шагом для избежания вредных токсинов, то есть как фунгитоксинов, так и полипептидных фунгитоксинов, является применение подходящих методов ведения сельского хозяйства и хорошие условия хранения аграрных продуктов. Анализ образцов кормов, однако, показал, что эти меры недостаточны. Таким образом, кормовые добавки используются для защиты животных от неблагоприятных эффектов фунгитоксинов на их здоровье и продуктивность. Они включают различные ингредиенты.

Эффективные кормовые добавки уже применяются в случаях загрязнения кормов фунгитоксинами, таким как афлатоксины, зеараленоны, трихотецены, охратоксин А и фумонизины. Однако до сих пор не были известны никакие кормовые добавки, действующие на полипептидные фунгитоксины: боверицин, энниатины и/или апицидин.

Таким образом, существует реальная потребность в снижении содержания полипептидных фунгитоксинов в пищевых продуктах и кормах в максимально возможной степени и подавлении, насколько это возможно, любых полипептидных фунгитоксинов, содержащихся в них, путем использования кормовых добавок и/или веществ или групп веществ, абсорбирующих или разрушающих или обезвреживающих такие полипептидные фунгитоксины.

Для решения этой задачи, по меньшей мере, один препарат солодки, выбранный из группы, состоящей из муки, водного экстракта, водного/этанольного экстракта, водного сухого экстракта и водного/этанольного сухого экстракта всего растения солодки или корней солодки, необязательно вместе с по меньшей мере одним эксципиентом для перорального применения, используют в соответствии с настоящим изобретением для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы энниатинов, в частности энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3; боверицина и апицидина, в аграрных продуктах. К удивлению, было обнаружено, что при использовании препарата солодки, выбранного из группы, состоящей из муки, водного экстракта, водного/этанольного экстракта, водного сухого экстракта и водного/этанольного сухого экстракта всего растения солодки или корней солодки, можно ингибировать токсические эффекты полипептидных фунгитоксинов, выбранных из группы энниатинов, в частности энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3; боверицина и апицидина, в аграрных продуктах до такой степени, что опасности для субъекта, потребляющего такие продукты, в частности для людей или животных, больше не будет, или, в частности, опасность существенно уменьшится.

Почти полное, в частности, существенное уменьшение токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы, состоящей из энниатинов, апицидина или боверицина, будет достигаться при использовании растения солодки (Glycyrrhiza) из группы, состоящей из Glycyrrhiza glabra и Glycyrrhiza uralensis.

При использовании водного сухого экстракта растения солодки, в частности из корней растения Glycyrrhiza glabra, который содержит от 4% (масс/масс) до 10% (масс/масс), в частности 7% (масс/масс) глицирризиновой кислоты, к удивлению, может достигаться еще большее снижение эффектов специфических полипептидных фунгитоксинов, т.е. боверицина, энниатинов и также апицидина, хотя известно, что глицирризиновая кислота как таковая не проявляет никакой активности, и используемое количество глицирризиновой кислоты поэтому просто считают эквивалентной мерой для активных ингредиентов. При использовании по меньшей мере одного препарата солодки в соответствии с настоящим изобретением стало возможным, в частности, полностью устранять токсический эффект по меньшей мере одного специфического полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы энниатинов, в частности энниатина A, энниатина A1, энниатина B и энниатина B1; боверицина и апицидина, или уменьшать их токсический эффект до такой степени, чтобы не не было никакого возможного вредного воздействия на организм животного или даже человека.

Точная дозировка препаратов солодки и, следовательно, гарантия наиболее полного снижения токсических эффектов полипептидных фунгитоксинов, т.е. энниатинов, апицидина и боверицина, будет возможна, если, в соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, водный сухой экстракт, в частности из корней растения Glycyrrhiza glabra, с содержанием глицирризиновой кислоты от 4% (масс/масс) до 10% (масс/масс), в частности 7% (масс/масс), или эквивалентное количество одного из других препаратов солодки в соответствии с настоящим изобретением, используют в количестве по меньшей мере, 1 г, предпочтительно от 1 г до 100 г, особенно предпочтительно от 7 г до 50 г для бройлеров, особенно предпочтительно от 5 г до 30 г для кур-несушек, и особенно предпочтительно от 5 г до 30 г для свиней, в частности для племенных поросят, на тонну аграрного продукта, в частности корма или пищевого продукта.

Эквивалентность относится к концентрациям фитогенных материалов или веществ, содержащихся в препаратах солодки. Хорошо охарактеризованным и легко поддающимся количественному измерению веществом является глицирризиновая кислота, которая содержится в корнях солодки. Фракция глицирризиновой кислоты в препаратах солодки служит индикатором концентрации вместе взятых фитогенных веществ или активных веществ.

Под эквивалентным количеством препаратов солодки понимают такие количества, при которых общее количество глицирризиновой кислоты является одинаковым. Таким образом, 100 г сухого экстракта с 4% (масс/масс) глицирризиновой кислоты, например, эквивалентно 50 г сухого экстракта с 8% (масс/масс) глицирризиновой кислоты. Если, например, используют 50 г водного сухого экстракта с 10% (масс/масс) глицирризиновой кислоты на тонну корма, то эквивалентно этому будет введение 100 г другого препарата солодки, в частности другого водного сухого экстракта, с содержанием 5% (масс/масс) глицирризиновой кислоты.

Эффективность препаратов солодки или антидотов, или противоядий, на основе солодки в соответствии с изобретением, в частности их положительные эффекты на параметры продуктивности сельскохозяйственных животных, страдающих от интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, повышается с повышением количества используемых препаратов солодки или антидотов, или противоядий, на основе солодки. При концентрациях полипептидных фунгитоксинов в пищевых продуктах или кормах, таких как 34 ч/млрд энниатина A, 40 ч/млрд энниатина A1, 510 ч/млрд энниатина B, 392 ч/млрд энниатина B1, 4 ч/млрд энниатина B2, 0,34 ч/млрд энниатина B3, 717 ч/млрд боверицина и 122 ч/млрд апицидина, заметны явные положительные эффекты на параметры продуктивности, в частности увеличение массы и яйценоскости, и, следовательно, хорошая эффективность препаратов солодки или антидотов, или противоядий, на основе солодки против интоксикаций полипептидными фунгитоксинами. Оптимальное количество используемых препаратов солодки или антидотов, или противоядий, на основе солодки всегда должно коррелировать с концентрацией полипептидных фунгитоксинов. Чем больше полипептидных фунгитоксинов в пище или корме, тем больше необходимое количество препаратов солодки или антидотов, или противоядий, на основе солодки.

Особенно хорошие результаты будут получены при применении препаратов солодки, когда сельскохозяйственных продукт выбран из пищевых продуктов или кормов, состоящих из, или содержащих, по меньшей мере одного продукта, загрязненного по меньшей мере одним полипептидным фунгитоксином, и выбран из группы, включающей злаки, кукурузу, рис, сою и другие бобовые, рапс, злаковые травы, душистые травы.

Так как, в соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, используют такие препараты солодки, где дополнительный содержащийся эксципиент выбран из группы, состоящей из инертных носителей, витаминов, минералов, фитогенных веществ, ферментов и других компонентов для детоксикации микотоксинов, таких как разлагающие микотоксины ферменты, в частности афлатоксиноксидазы, эрготамингидролазы, эрготаминамидазы, зеараленонэстеразы, зеараленонлактоназы, зеараленонгидролазы, охратоксинамидазы, фумонизинаминотрансферазы, фумонизинкарбоксилтрансферазы, аминополиоламиноксидазы, дезоксиниваленолэпоксидгидролазы, дезоксиниваленолдегидрогеназы, дезоксиниваленолоксидазы, трихотецендегидрогеназы, трихотеценоксидазы; и микотоксин-трансформирующие микроорганизмы, такие как DSM 11798; и микотоксин-связывающие вещества, например, микробные клеточные стенки или неорганические материалы, такие как бентонит, стало возможным также разлагать или обезвреживать другие полипептидные фунгитоксины, частично встречающиеся даже в больших количествах, помимо полипептидных фунгитоксинов: энниатинов, боверицина и апицидина.

В дополнение к использованию препаратов солодки для снижения токсического эффекта полипептидных фунгитоксинов в пищевых продуктах или кормах также существует потребность в продукте, который противодействует неблагоприятным эффектам таких полипептидных фунгитоксинов после их возможного попадания в пищеварительный тракт.

Для решения этой задачи настоящее изобретение также направлено на антидот для перорального применения для снижения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы энниатинов, в частности энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3; боверицина и апицидина, включающий по меньшей мере один препарат солодки, выбранный из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней солодки, необязательно вместе с по меньшей мере одним эксципиентом. Пероральное применение по меньшей мере одного препарата солодки, необязательно вместе с по меньшей мере одним дополнительным эксципиентом, в качестве антидота позволяет нейтрализовать или ингибировать или предотвращать неблагоприятные эффекты полипептидных фунгитоксинов одновременно с их попаданием в пищеварительный тракт. Поскольку препарат солодки выбран из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней солодки, его можно принимать вместе с возможно загрязненным пищевым или кормовым продуктом, чтобы сразу предотвратить какое-либо вредное действие на организм.

Особенно полезный эффект обеспечивается при помощи антидота, если, в соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, препарат солодки выбран из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней солодки, необязательно вместе по меньшей мере с одним эксципиентом. В таком случае его можно употреблять вместе с возможно загрязненным пищевым или кормовым продуктом, чтобы немедленно предотвратить любое вредное действие на организм.

Антидот будет проявлять особенно полезную и, в частности, равномерно хорошую активность, если растение солодки выбрано из группы, состоящей из Glycyrrhiza glabra и Glycyrrhiza uralensis.

Поскольку, в соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, используют водный сухой экстракт, содержащий от 4% (масс/масс) до 10% (масс/масс), в частности 7% (масс/масс) глицирризиновой кислоты, полипептидные фунгитоксины, содержащиеся в пищевых продуктах или кормовых продуктах, могут полностью обезвреживаться при попадании в пищеварительный тракт, при этом будут предотвращены неблагоприятные эффекты глицирризиновой кислоты, известные из литературы, а именно такие симптомы, как гипертензия или задержка воды.

В соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, предпочтительно используют по меньшей мере 1 г водного сухого экстракта с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс), предпочтительно от 1 г до 100 г, особенно предпочтительно от 7 г до 50 г для бройлеров, особенно предпочтительно от 5 г до 40 г для кур-несушек, и особенно предпочтительно от 5 г до 30 г для свиней, в частности племенных поросят, или эквивалентные количества на тонну аграрного продукта, в частности корма или пищевого продукта. Благодаря такому применению стало возможным практически полностью обезвредить полипептидные фунгитоксины энниатин, боверицин и апицидин в пищевых или кормовых продуктах для безопасного предотвращения или даже защиты от возникновения неблагоприятных эффектов, таких как симптомы отравления у людей и животных.

Поскольку, в соответствии с дальнейшим усовершенствованием изобретения, антидот дополнительно разработан таким образом, что он содержит более 50% (масс/масс), предпочтительно более 90% (масс/масс), в частности 100% (масс/масс), по меньшей мере одного препарата солодки, стало возможным использовать синергетические эффекты ингредиентов препаратов солодки. При этом, к удивлению, было обнаружено, что наиболее известный компонент препаратов солодки, т.е. сама глицирризиновая кислота, не проявляет какой-либо активности против полипептидных фунгитоксинов. Поэтому положительное действие препаратов солодки в соответствии с изобретением против полипептидных фунгитоксинов основано на других ингредиентах корня солодки, досконально не известных, или ингредиентах корня солодки, активность которых точно не известна, но которые способствуют желаемому эффекту, в частности предотвращению неблагоприятного действия полипептидных фунгитоксинов.

Поскольку антидот дополнительно разработан таким образом, что по меньшей мере один эксципиент выбран из группы, состоящей из инертных носителей, витаминов, минералов, фитогенных веществ, ферментов и других компонентов для детоксикации микотоксинов, таких как разлагающие микотоксины ферменты, в частности афлатоксиноксидазы, эрготамингидролазы, эрготаминамидазы, зеараленонэстеразы, зеараленонлактоназы, зеараленонгидролазы, охратоксинамидазы, фумонизинаминотрансферазы, фумонизинкарбоксилтрансферазы, аминополиоламинооксидазы, дезоксиниваленолэпоксидгидролазы, дезоксиниваленолдегидрогеназы, дезоксиниваленолоксидазы, трихотецендегидрогеназы, трихотеценоксидазы; и микотоксин-трансформирующие микроорганизмы, такие как DSM 11798; и микотоксин-связывающие вещества, например, микробные клеточные стенки или неорганические материалы, такие как бентонит, это позволило расширить положительные эффекты в отношении других потенциально вредных веществ, таких как микотоксины из группы фумонизинов, афлатоксинов, дезоксиниваленола, трихотеценов или охратоксинов.

В этом отношении также может быть предпочтительным использовать антидот для получения препарата для перорального применения для предотвращения или лечения интоксикаций полипептидными фунгитоксинами. Такой препарат можно, в частности, использовать для профилактики и лечения интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, выбранными из группы, включающей энниатины, в частности энниатин A, энниатин A1, энниатин B, энниатин B1, энниатин B2 или энниатин B3; боверицин и апицидин. При этом, в частности, можно предотвращать или лечить вредные эффекты полипептидных фунгитоксинов, в то же время не приводя к каким-либо неблагоприятным эффектам, вызываемым глицирризиновой кислотой, таким как гипертензия или т.п.

Под субъектами следует понимать людей и животных, но особенно сельскохозяйственных животных, предпочтительно свиней и домашнюю птицу, такую как бройлеры или куры-несушки, индюков, крупный рогатый скот или телят.

Интоксикации полипептидными фунгитоксинами главным образом могут быть вызваны загрязненными кормами или пищевыми продуктами, то есть теми, которые загрязнены полипептидными фунгитоксинами, при этом такие низкие количества полипептидного фунгитоксина, как 500 ч/млрд, уже проявляют токсические эффекты. Интоксикация полипептидными фунгитоксинами, в частности у домашнего скота, в настоящей заявке определяется как заболевание, вызываемое полипептидными фунгитоксинами, выбранными из группы, включающей энниатины, в частности энниатин A, энниатин A1, энниатин B, энниатин B1, энниатин B2 или энниатин B3; боверицин и апицидин, и приводящее к ухудшению по меньшей мере одного параметра производительности по меньшей мере на 4%, предпочтительно на 10%, по сравнению с группой положительного контроля.

У бройлеров явные внешние признаки интоксикации полипептидными фунгитоксинами, в частности ухудшение параметров производительности, возникают по меньшей мере при общей концентрации полипептидных фунгитоксинов около 5000 ч/млрд, в частности 4986,34 ч/млрд.

У кур-несушек явные внешние признаки интоксикации полипептидными фунгитоксинами, в частности ухудшение параметров производительности, возникают по меньшей мере при общей концентрации полипептидных фунгитоксинов около 2000 ч/млрд, в частности 1985 ч/млрд.

У свиней, в частности, у племенных поросят, явные внешние признаки интоксикации полипептидными фунгитоксинами, в частности ухудшение параметров производительности, возникают по меньшей мере при общей концентрации полипептидных фунгитоксинов около 7000 ч/млрд, в частности 7183,6 ч/млрд.

Любой описанный выше антидот или препарат солодки можно использовать в качестве антидотов на основе солодки для лечения и/или профилактики интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, при этом предпочтительным является водный сухой экстракт из корня Glycyrrhiza glabra.

Эффективное количество антидота на основе солодки зависит от количества полипептидных фунгитоксинов, содержащихся в загрязненном корме или пище, и может также зависеть от соответствующего субъекта. Эффективное количество антидота на основе солодки в форме 100% водного сухого экстракта из корня Glacyrrhiza glabra с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс) на килограмм корма или пищи приблизительно составляет:

- по меньшей мере 1мг, 1мг - 100мг, предпочтительно 7мг - 50мг для бройлеров;

- по меньшей мере 1мг, 1мг - 100мг, предпочтительно 5мг - 40мг для кур-несушек;

- по меньшей мере 1мг, 1мг - 100мг, предпочтительно 5мг - 40мг для свиней, в частности племенных поросят.

Специалистам в данной области техники будет понятно, что 100% водный сухой экстракт из корня Glycyrrhiza glabra с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс) можно заменить любым другим описанным в настоящей заявке антидотом на основе солодки сразу после того, как он будет использован, в эквивалентном количестве.

Это эффективное количество является достаточным, чтобы почти полностью сделать неэффективной токсическую активность полипептидных фунгитоксинов, почти устраняя таким образом неблагоприятные эффекты полипептидных фунгитоксинов на здоровье субъектов и их параметры производительности.

Далее изобретение будет объяснено более подробно при помощи иллюстративных вариантов осуществления.

Пример 1: Получение препаратов солодки

В следующих испытаниях и примерах в качестве препарата солодки использовали высушенный распылением сухой экстракт, содержащий в качестве конечного продукта 7% (масс/масс) глицирризиновой кислоты и 0,003% (масс/масс) глицирретиновой кислоты. Содержание глицирризиновой кислоты и глицирретиновой кислоты может варьироваться в зависимости от исходного вещества и технологического процесса, как известно специалистам в данной области. Такие препараты солодки с отклонениями в концентрациях глицирризиновой кислоты и глицирретиновой кислоты также охватываются изобретением, при этом их применяемые количества должны быть адаптированы к содержанию фитогенных ингредиентов с целью обеспечения использования соответственно эквивалентных количеств, в расчете на содержание глицирризиновой кислоты.

Этот экстракт получают следующим образом: После сбора 3-4-летнего корня Glycyrrhiza glabra его сначала измельчают и растирают в порошок с водой с получением тонкодисперсной пульпы, указанную пульпу кипятят и концентрируют в течение нескольких часов, в частности 3 часов. После того, как экстракт фильтруют и дают отстояться, его снова экстрагируют методом водно-паровой экстракции при пониженном давлении. Таким образом, получают натуральный концентрированный сок, который затем снова кипятят при постоянном перемешивании и снова концентрируют с получением водного экстракта солодки.

На следующей стадии обработки и сушки водный экстракт солодки сушат распылением. Этот высокоскоростной метод испарения основан на сушке мелких капель в имеющем нужную температуру инертном осушающем газе. При этом жидкая композиция распыляется на мелкие капли и равномерно распределяется в осушающем воздухе распылительной сушилки. Это приводит к увеличению общей площади поверхности жидкости и обеспечивает возможность сушки продукта в течение короткого времени. Конечный продукт представляет собой сухой свободнотекучий порошок с относительно однородным размером частиц, то есть сухой экстракт солодки. После этого осуществляют качественную оценку продукта, и его можно снова растворить при пероральном приеме субъектами или для осуществления дополнительных испытаний (Karasaaslaan und Dalgici, J. Food Sci. Technol., 2014, 51(11), 3014 et seq.; Bauer et al., Lehrbuch der Pharmazeutischen Technologie, 2012, ISBN 978-3-8047-2552-2).

Пример 2: Защитный эффект сухого экстракта солодки против полипептидных фунгитоксинов in vitro

Для испытания корреляций полипептидных фунгитоксинов на эпителиальной ткани в контролируемых условиях осуществляли испытания in vitro. В них использовали хорошо охарактеризованные системы испытаний, основанные на клеточных культурах и описанные в литературе. Для кормовых добавок предпочтительными были эпителиальные клетки из соответствующего органа, например, в данном случае клетки IPEC-J2 из кишечника свиньи. Используемые эпителиальные клетки из кишечника свиньи обладают таким преимуществом, что они являются нетрансформированными клетками и при этом обладают всеми важными свойствами нормальных клеток кишечника и большим физиологическим сходством, таким как образование жизнеспособных белков плотных контактов, которые, прежде всего, важны для кишечного барьера, а также экспрессия характерных ферментов и транспортных систем (например, P-гликопротеин, цитохром P450 3A4, транспортеры вит. B 12 и т.д.).

Такие системы испытаний in vitro представляют собой важные и одобренные методы для прогнозирования результатов in vivo, даже позволяя отказаться от исследований биодоступности. Человеческая клеточная линия, клетки Caco-2, которые во многих аспектах очень похожи на клетки IPEC-J2, уже была известна из публикаций в конце 1980-х годов для исследования транспорта фармацевтических веществ. Позднее были обнаружены хорошие корреляции между данными проницаемости, полученными из клеточных монослоев, и скоростью пероральной абсорбции. Именно поэтому эта модель нашла свое применение в фармацевтической промышленности. Кроме того, американский разрешительный орган, FDA, опубликовал директиву по этому вопросу, обеспечивающую контекст для так называемой Биофармацевтической системы классификации (BCS), определение кишечной проницаемости посредством валидированных систем клеточных культур. На основании таких in vitro данных в некоторых случаях возможен отказ от исследований биодоступности.

Для исследований in vitro сухого экстракта солодки последний экстрагировали еще раз, получая таким образом вторичный экстракт солодки. Вторичный экстракт солодки получали путем отвешивания 1 г сухого экстракта солодки и 9 мл 70% этанола, смешивания и встряхивания при 700 об/мин в течение одного часа при комнатной температуре. После этого раствор центрифугировали и жидкий супернатант стерильно фильтровали с использованием фильтра 0,2 мкм и затем разбавляли средой IPEC-J2. Вторичный экстракт солодки испытывали in vitro при следующих концентрациях: 250 мкг, 500 мкг и 1000 мкг сухого экстракта солодки на мл среды в испытываемой композиции, далее также указаны как 250, 500 и 1000 мкг/мл вторичного экстракта солодки.

Тот факт, что этанольные экстракты способны растворять больше ингредиентов, чем чисто водные экстракты, и поэтому ближе к ситуации in vivo, в которой из-за кислотных или щелочных условий и различных ферментов в полости рта-желудочно-кишечном тракте также растворяется больше ингредиентов, чем при чисто водной экстракции, был основной причиной того, что были получены вторичные экстракты с 70% этанолом для анализов in vitro.

В литературе глицирризиновая кислота считается одним из основных фитогенных компонентов корня солодки. Концентрации глицирризиновой кислоты и глицирретиновой кислоты в полученных вторичных экстрактах солодки определяли с использованием ЖХ-МС/МС (Agilent 1290 Infinity и Sciex 5500 QTrap). Для этого каждый из этих экстрактов разделяли с использованием колонки Kinetex Biphenyl (100×3 мм). Мониторинг множественных реакций (MRM) осуществляли при 471/105 и 471/119 Да для глицирретиновой кислоты и при 823/453 и 823/647 Да для глицирризиновой кислоты. Благодаря хорошей растворимости глицирризиновой кислоты и глицирретиновой кислоты можно ожидать, что общее количество, содержащееся в водном сухом экстракте, также растворяется во вторичном экстракте. Полученные сухие экстракты солодки содержали 7% (масс/масс) глицирризиновой кислоты и 0,03% (масс/масс) глицирретиновой кислоты.

Эффективность лекарственной формы in vivo всегда зависит от биодоступности вещества и, следовательно, также от биокинетического процесса - это обычно не относится к экспериментам in vitro. По этой причине часто необходимо использовать более высокие концентрации в экспериментах in vitro, чтобы можно было наблюдать те же эффекты, что и in vivo (Gülden and Seibert, ALTEX 22, Special Issue 2, 2005). Концентрации 250 мкг, 500 мкг и 1000 мкг сухого экстракта солодки на мл среды, которые используют в представленных анализах in vitro, соответствуют концентрациям in vivo от около 250 до 1 кг сухого экстракта солодки на тонну корма или пищи. Это в 33-50 раз больше, чем от 5 г/т до 30 г/т, используемых в испытаниях in vivo (см. Примеры 3-5).

Метод TEER, описанный Geens и Niewold (Cytotechnology, 2011, 63, 415 et seq.), использовали в адаптированной форме. В этой модели in vitro эпителиальные клетки кишечника свиньи (IPEC-J2, DSMZ №: ACC 701, пассаж 1-15) культивируют во вставке на проницаемой полиэфирной мембране (площадь поверхности 1,12 см², размер пор 0,4 мкм, диаметр мембраны 12 мм) и дифференцируют в инкубаторе в течение 8 дней при 39°С и 5% СО₂. В расчете на одну вставку, 1×10⁵ клеток в 0,5 мл среды наносят на соответствующую мембрану. В течение указанного периода дифференциации использованную среду аспирировали через день и заменяли свежей средой. Вставку фиксировали в 12-луночном клеточном культуральном планшете и клетки снабжали 1,5 мл среды снизу (базолатеральный компартмент) и 0,5 мл среды сверху (апикальный компартмент). Эти компартменты отражают сторону кишечника (апикальная ʺАʺ) и сторону крови (базолатеральная ʺВʺ). Среда представляет собой среду DMEM/Ham's F12 (1:1), дополненную 1% IST, 2,5 мМ Glutamax, 16 мМ Hepes, 6 нг/мл EGF, 5% фетальной телячьей сыворотки и 100 МЕ/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина.

Дифференцированные клетки образуют клеточный барьер, являясь тесно связанными между собой белками плотных контактов. Кроме того, эти клетки ориентированы поляризованным образом, как в кишечнике свиньи, и могут использоваться в качестве репрезентативной модели. Поскольку кишечный барьер представляет собой первую линию защиты в пищеварительном тракте против патогенов и токсинов, для здоровья важно, чтобы он оставался неповрежденным. Неповрежденность клеточного барьера измеряют при помощи вольт-омметра: электрическое сопротивление между двумя компартментами указывают как TEER (трансэпителиальное электрическое сопротивление) значение и представляют в кОм × см². Вольт-омметр должен быть установлен на ʺмощностьʺ и ʺRʺ перед каждым измерением. Более длинный электрод затем вводят в базолатеральный компартмент, а более короткий электрод вводят в апикальный компартмент. При этом нелья затрагивать клеточный слой.

Вторичный экстракт солодки с концентрацией 100 мг/мл разбавляют средой до желаемой концентрации (250 мкг/мл, 500 мкг/мл или 1000 мкг/мл). Использованную среду в апикальном компартменте аспирируют и дополняют 250 мл токсина и 250 мкл экстракта солодки (оба дважды концентрированные в среде) и инкубируют в течение еще 72 часов при 39°C и 5% CO₂. Через 24 часа, 48 часов и 72 часа осуществляют измерение TEER. Все измерения осуществляют как минимум в трех повторах, из которых берут средние значения для дальнейших расчетов.

Таблица 1
Осуществление TEER анализа в клеточной культуре День 0 Высевание клеток во вставки День 2, 4, 7 Обновление среды День 8 Добавление токсинов (отрицательный контроль);
Добавление экстрактов солодки (Glycyrrhiza контроль);
Никакого добавления (необработанные клетки; клеточный контроль);
Добавление токсинов и экстракта солодки;
Добавление глицирризиновой кислоты День 9, 10, 11 Измерение TEER значения День 11 Испытание на цитотоксичность

Значение TEER было постоянным для необработанных клеток (клеточный контроль) с дня 8 по день 11, также после добавления вторичного экстракта солодки при концентрациях 250 мкг/мл, 500 мкг/мл или 1000 мкг/мл (Glycyrrhiza контроль) в день 8.

При добавлении полипептидных фунгитоксинов, боверицина, энниатинов и апицидина, в различных концентрациях (0,2-10 мкМ) (отрицательный контроль) в день 8 значение TEER, однако, снижалось, поскольку токсины повреждают кишечный барьер.

Одновременное добавление полипептидных фунгитоксинов при концентрациях 0,438 мкМ для апицидина, 5 мкМ для энниатина A, B, B1, боверицина и 10 мкМ для энниатина A1, каждого вместе с вторичным экстрактом солодки при концентрациях 250 мкг/мл, 500 мкг/мл или 1000 мкг/мл показало значительно меньшее или вообще никакого снижения значения TEER по сравнению с соответствующим отрицательным контролем. Таким образом, добавление вторичного экстракта солодки может противодействовать негативным эффектам полипептидных фунгитоксинов (см. Таблицу 2). Расчет защитных эффектов вторичных экстрактов солодки относительно полипептидных фунгитоксинов осуществляли по следующей формуле:

Защитный эффект (%)=(TEER среднее значение (токсин+экстракт)/TEER среднее значение (токсин) × 100) - 100

Например, для энниатина A [5мкМ], инкубированного с 1000мкг/мл вторичного экстракта солодки, через 24 часа:

TEER среднее значение энниатин A: 3,928кОм × см²

TEER среднее значение энниатин A+вторичный экстракт солодки: 6,451кОм × см²

Защитный эффект: (6,451кОм × см²/3,928кОм × см²) × 100) - 100=64,2%

После последнего измерения TEER в день 11 осуществляли испытание на цитотоксичность (тест с нейтральным красным), чтобы исключить цитотоксический эффект концентраций испытываемого токсина и экстракта солодки. Испытания осуществляли исключительно в нецитотоксическом диапазоне концентраций с клеточной выживаемостью более 99%.

Таблица 2
Защитный эффект 250 мкг/мл, 500 мкг/мл и 1000 мкг/мл вторичного экстракта солодки против энниатинов А, А1, В, В1, боверицина и апицидина при измерении в трех различных точках времени (24, 48 и 72 часа, соответствующих дням 9, 10 и 11) Токсин Энниатин A
5 мкМ Энниатин A1
10 мкМ Энниатин B
5 мкМ Энниатин B1
5 мкМ Боверицин
5 мкМ Апицидин
0,438 мкМ Время вторичный экстракт солодки 250 мкг/мл 24 ч 11,8 2,6 6,1 2,9 12,8 2,1 48 ч 34,8 11,6 4,8 3,6 2,0 3,0 72 ч 28,5 6,8 4,6 3,5 1,5 7,7 вторичный экстракт солодки 500 мкг/мл 24 ч 13,3 11,9 5,5 21,9 26,2 8,4 48 ч 36,6 23,5 8,5 16,7 18,4 16,4 72 ч 41,4 20,3 15,0 27,3 27,6 19,6 вторичный экстракт солодки 1000 мкг/мл 24 ч 64,2 28,9 15,3 31,4 0,3 42,4 48 ч 45,8 68,5 25,0 27,5 44,7 24,0 72 ч 37,6 72,1 21,4 59,8 19,1 17,8

Наиболее сильные защитные эффекты вторичного экстракта солодки наблюдали в случае энниатина А ([1000 мкг/мл] через 24 часа и 48 часов, [500 мкг/мл] через 72 часа) и A1 ([1000 мкг/мл] через 48 часов и 72 часа). Со всеми токсинами можно было наблюдать зависимое от концентрации улучшение, обеспечиваемое вторичными экстрактами солодки. Хорошие эффекты также наблюдали против энниатинов В и В1, при этом самая высокая концентрация экстракта солодки (1000 мкг/мл) оказывала, прежде всего, положительное влияние на значение TEER. Положительные эффекты против боверицина и апицидина наблюдали при 500 мкг/мл и 1000 мкг/мл вторичного экстракта солодки.

Эффект глицирризиновой кислоты

Для исследования возможного эффекта глицирризиновой кислоты против энниатинов А, А1, В, В1, боверицина и апицидина, вместо вторичного экстракта солодки испытывали глицирризиновую кислоту при концентрации 70 мкг/мл (что соответствует 1000 мкг/мл вторичного экстракта солодки) в испытании TEER, описанном выше. Тем не менее, никакого положительного эффекта нельзя было наблюдать относительно отрицательных контролей. Это явно указывает на то, что положительный эффект препаратов солодки удивительным образом не зависит от самого известного фитогенного вещества солодки, а именно глицирризиновой кислоты.

Анализы связывания

Чтобы лучше понять механизм положительного или защитного действия препаратов солодки, осуществляли анализы связывания с водным сухим экстрактом солодки и полипептидными фунгитоксинами.

Для этого 1,000 мл буферного раствора (1,36 г тригидрата ацетата натрия и 0,79 г ацетата кальция, pH=8,0) предварительно инкубировали с 100 г кормовой основы (корм для поросят, состоящий из 50% (масс/масс) пшеницы, 10% (масс/масс) пшеничных отрубей, 20% (масс/масс) сои, 10% (масс/масс) ячменя, 10% (масс/масс) минералов) (24 часа при 4°C) для минимизирования эффектов адсорбции гидрофобных токсинов на стекле. После этого твердые вещества отделяли центрифугированием и прозрачный раствор переносили в 50-мл стеклянные сосуды. К этим 50 мл добавляли такое количество водного сухого экстракта солодки с 7% (масс/масс) глицирризиновой кислоты, чтобы концентрация экстракта в композиции для анализа связывания составляла 3 мг/л и 3 г/л, соответственно. После этого добавляли токсины, энниатины A, A1, B, B1, боверицин и апицидин, так, чтобы концентрация каждого в анализе связывания достигала 100 ч/млрд. Затем композиции для анализа связывания инкубировали при 37°С при постоянном перемешивании в течение 24 часов. В начале и через 24 часа отбирали образцы и анализировали их на энниатины А, А1, В, В1, боверицин и апицидин методом ЖХ-МС/МС, как описано выше. Никакого снижения концентрации токсина не было определено ни в одной из испытанных концентраций экстракта (3 г/л или 3 мг/л). Поэтому исключается, что положительный защитный эффект препаратов солодки обусловлен адсорбцией или абсорбцией токсинов на компонентах или растворенными веществами препарата солодки.

Пример 3: Анализ кормления бройлеров

Для оценки эффекта препаратов солодки против полипептидных фунгитоксинов у домашней птицы осуществляли анализы кормления бройлеров с использованием солодки как антидота в качестве кормовой добавки. Антидот на основе солодки включал 100% водный сухой экстракт солодки из корней растения Glycyrrhiza glabra с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс). Водный сухой экстракт солодки получали, как описано в Примере 1.

С этой целью 800 бройлеров Ross, имеющих начальную массу тела 40 г, были распределены на четыре группы для испытания, с разделением каждой на 10 секций по 20 цыплят в каждой. Корм обеспечивали неограниченно.

Группа положительного контроля получала обычный корм для цыплят (фаза 1, дни 0-14: кукуруза 58%, соя HP 31,25%, премикс BR 5%, универсальный 6,25%, мега-фат 1,25%, соевое масло 2,50%, аминокислоты 0,50%, монокальций фосфат 0,25%. Фаза 2, дни 15-35: кукуруза 6%, соя HP 29,35%, премикс BR 5%, универсальный 6,0%, мега-фат 2,50%, соевое масло 2,00%, аминокислоты 0,15%).

Группа отрицательного контроля получала корм для цыплят того же состава, что и группа положительного контроля, но загрязненный полипептидными фунгитоксинами. Общее загрязнение полипептидными фунгитоксинами составило 4986,34 ч/млрд, при этом конечный корм для цыплят включал боверицин в количестве 1197 ч/млрд, энниатины в количестве 2763,34 ч/млрд (энниатин A 34 ч/млрд, энниатин A1 175 ч/млрд, энниатин B 1700 ч/млрд, энниатин B1 803 ч/млрд, энниатин B2 51 ч/млрд, энниатин B3 0,34) и апицидин в количестве 1026 ч/млрд. Естественное загрязнение афлатоксином и дезоксиниваленолом составляло < 1 ч/млрд каждого и, следовательно, было несущественным.

Обе экспериментальные группы получали тот же корм, загрязненный полипептидными фунгитоксинами, что и группа отрицательного контроля, и, кроме того, антидот на основе солодки в соотношении 7 г (экспериментальная группа 1) и 50 г (экспериментальная группа 2) на тонну корма. Период испытаний составлял 35 дней, животных взвешивали в дни 0 и 35.

Параметры производительности, живая масса и коэффициент усвоения корма представлены в Таблицах 4 и 5. Животные из группы отрицательного контроля страдали от интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, вызывающими жидкий стул и значительное снижение живой массы (ухудшение на 11,4%) и ухудшение коэффициента усвоения корма (ухудшение на 4,9%) по сравнению с группой положительного контроля. Введение антидота на основе солодки в двух экспериментальных группах приводило к снижению токсического эффекта полипептидных фунгитоксинов и, следовательно, к гораздо менее выраженной или больше не присутствующей интоксикации полипептидными фунгитоксинами, таким образом, заметно улучшая, при обоих соотношениях в смеси, живую массу бройлеров и коэффициент усвоения корма по сравнению с группой отрицательного контроля.

Таким образом, антидот на основе солодки или препарат солодки в соответствии с изобретением можно использовать для снижения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина в аграрных продуктах и для улучшения параметров производительности, живой массы и коэффициента усвоения корма, загрязненного полипептидными фунгитоксинами, для сельскохозяйственных животных, в частности бройлеров, а также для лечения и профилактики интоксикаций полипептидными фунгитоксинами.

Таблица 4
Эффект антидота на основе солодки или препарата солодки на живую массу День Группа положительного контроля [г] Группа отрицательного контроля[г] Экспериментальная группа 1 [г] Экспериментальная группа 2 [г] 35 1963 1739 1870 1897 Таблица 5
Эффект антидота на основе солодки или препарата солодки на коэффициент усвоения корма за период наблюдения 35 дней День Группа положительного контроля [г/г] Группа отрицательного контроля [г] Экспериментальная группа 1 [г/г] Экспериментальная группа 2 [г/г] 1-35 1,74 1,83 1,76 1,74

Пример 4: Анализ кормления кур-несушек

Для оценки эффекта препаратов солодки против полипептидных фунгитоксинов у домашней птицы осуществляли анализы кормления кур-несушек с использованием антидота на основе солодки в качестве кормовой добавки. Антидот на основе солодки включал 100% водный сухой экстракт солодки из корней растения Glycyrrhiza glabra с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс). Водный сухой экстракт солодки получали, как описано в Примере 1.

С этой целью 160 кур-несушек Lohmann Brown были распределены на четыре группы для испытания, с разделением каждой на 10 секций по 4 курицы в каждой. Корм обеспечивали неограниченно. Испытание начинали в возрасте 22 недель.

Группа положительного контроля получала обычный корм для кур-несушек (пшеница 32,1%, кукуруза 30,00%, соя HP 25,00%, карбонат кальция 8,60%, премикс для кур-несушек 2,00%, рапсовое масло 1,90%, Биотроник SE форте 0,40%) (Биотроник - это торговая марка Erber Aktiengesellschaft).

Группа отрицательного контроля получала корм для кур-несушек того же состава, что и группа положительного контроля, но загрязненный полипептидными фунгитоксинами. Общее загрязнение полипептидными фунгитоксинами составило 1985 ч/млрд, при этом конечный корм для кур-несушек включал боверицин в количестве 835 ч/млрд, энниатины в количестве 1028 ч/млрд (энниатин A 35 ч/млрд, энниатин A1 76 ч/млрд, энниатин B 510 ч/млрд, энниатин B1 392 ч/млрд, энниатин B2 15 ч/млрд) и апицидин в количестве 122 ч/млрд. Естественное загрязнение афлатоксином и дезоксиниваленолом составляло < 1 ч/млрд каждого и, следовательно, было несущественным.

Две экспериментальные группы получали тот же корм, загрязненный полипептидными фунгитоксинами, что и группа отрицательного контроля, и, кроме того, антидот на основе солодки в соотношении 5 г (экспериментальная группа 1) и 40 г (экспериментальная группа 2) на тонну корма. Период испытания составил 14 дней.

Параметры производительности, яйценоскость (процент кур, несущих яйцо в день), средняя масса яйца и коэффициент усвоения корма определяли в ходе периода испытания, и они представлены в Таблице 6. Животные в группе отрицательного контроля страдали от интоксикации полипептидными фунгитоксинами, вызывавшими появление жидкого стула и, в частности, значительное ухудшение параметров производительности (яйценоскость: ухудшение на 6,1%; масса яйца: ухудшение на 3,6%; коэффициент усвоения корма: ухудшение на 7,1%). Введение антидота на основе солодки в двух экспериментальных группах приводило к снижению токсического эффекта полипептидных фунгитоксинов и, следовательно, к гораздо менее выраженной или больше не присутствующей интоксикации полипептидными фунгитоксинами, таким образом, заметно улучшая, при обоих соотношениях в смеси, параметры производительности по сравнению с группой отрицательного контроля.

Таким образом, антидот на основе солодки или препарат солодки в соответствии с изобретением можно использовать для снижения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина в аграрных продуктах, а также для улучшения параметров производительности, яйценоскости, средней массы яиц и коэффициента усвоения корма, для загрязненных полипептидными фунгитоксинами кормов для сельскохозяйственных животных, в частности кур-несушек, а также для лечения и профилактики интоксикаций полипептидными фунгитоксинами.

Таблица 6
Параметры производительности Группа положительного контроля Группа отрицательного контроля Экспериментальная группа 1 Экспериментальная группа 2 Яйценоскость
[%] 99 93 96 98 Средняя масса яиц [г] 56 54 55 56 Коэффициент усвоения корма [г/г] 1,83 1,97 1,89 1,84

Пример 5: Анализ кормления племенных поросят

Для оценки эффекта препаратов солодки против полипептидных фунгитоксинов у свиней осуществляли анализ кормления племенных поросят с использованием антидота на основе солодки в качестве кормовой добавки. Антидот на основе солодки включал 100% водный сухой экстракт солодки из корней растения Glycyrrhiza glabra с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% (масс/масс). Водный сухой экстракт солодки получали, как описано в Примере 1.

Для этого 120 племенных поросят были распределены на четыре группы для испытания, с разделением каждой на 10 секций по 3 поросенка в каждой. Корм обеспечивали неограниченно. Испытание начинали, когда поросята достигали возраста 4 недели и массы тела 7,7 кг.

Группа положительного контроля получала обычный корм для поросят (фаза 1, дни 1-14: кукуруза 32,00%, ячмень 34,90%, белковый премикс 23%, подсолнечное масло 1,00%, декстроза 4,00%, лактоза 3,00%, премикс для поросят 2,1%. Фаза 2, дни 15-56: кукуруза 41,00%, ячмень 35,00%, соя HP 20,00%, подсолнечное масло 0,50%, премикс для поросят 3,5%).

Группа отрицательного контроля получала корм для поросят того же состава, что и группа положительного контроля, но загрязненный полипептидными фунгитоксинами. Общее загрязнение полипептидными фунгитоксинами составило 7183,6 ч/млрд, при этом конечный корм для поросят включал боверицин в количестве 717 ч/млрд, энниатины в количестве 4733,6 ч/млрд (энниатин A 86 ч/млрд, энниатин A1 40 ч/млрд, энниатин B 1492 ч/млрд, энниатин B1 3111 ч/млрд, энниатин B2 4 ч/млрд, энниатин B3 (0,6 ч/млрд) и апицидин в количестве 1733 ч/млрд. Естественное загрязнение афлатоксином и дезоксиниваленолом составляло < 1 ч/млрд каждого и, следовательно, было несущественным.

Две экспериментальные группы получали тот же корм, загрязненный полипептидными фунгитоксинами, что и группа отрицательного контроля, и, кроме того, антидот на основе солодки в соотношении 5 г (экспериментальная группа 1) и 30 г (экспериментальная группа 2) на тонну корма. Период испытаний составил 56 дней.

Параметры производительности, живую массу и коэффициент усвоения корма определяли в конце периода испытаний, и они представлены в Таблице 7. Животные из групп отрицательного контроля страдали от интоксикации полипептидными фунгитоксинами, которые вызывали отсутствие аппетита, диарею и, в частности, значительное ухудшение параметров производительности (живая масса: ухудшение на 17,1%; коэффициент усвоения корма: ухудшение на 6,4%). Введение антидота на основе солодки в двух экспериментальных группах приводило к снижению токсического эффекта полипептидных фунгитоксинов и, следовательно, к гораздо менее выраженной или больше не присутствующей интоксикации полипептидными фунгитоксинами, таким образом, заметно улучшая, при обоих соотношениях в смеси, параметры производительности по сравнению с группой отрицательного контроля.

Таким образом, антидот на основе солодки или препарат солодки в соответствии с изобретением можно использовать как для снижения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина в аграрных продуктах, так и для улучшения параметров производительности, живой массы и коэффициента усвоения корма, для загрязненного полипептидными фунгитоксинами корма для сельскохозяйственных животных, в частности свиней, а также для лечения и профилактики интоксикаций полипептидными фунгитоксинами.

Таблица 7
Параметры производительности Группа положительного контроля [кг] Группа отрицательного контроля
[кг] Экспериментальная группа 1 [кг] Экспериментальная группа 2 [кг] Средняя живая масса
день 56 35 29 32 33 Коэффициент усвоения корма [кг/кг] 1,59 1,70 1,65 1,62

Группа изобретений относится к применению средств для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3, боверицина и апицидина, в аграрных продуктах. Применение по меньшей мере одного препарата солодки, выбранного из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней солодки, причем препарат солодки содержит 4-10% масс./масс. глицирризиновой кислоты, необязательно вместе с по меньшей мере одним эксципиентом для перорального применения, для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы, включающей энниатины, выбранные из группы энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3, боверицин и апицидин, в аграрных продуктах. Применение антидота, включающего по меньшей мере один препарат солодки, выбранный из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней, причем препарат солодки содержит 4-10% масс./масс. глицирризиновой кислоты, для получения препарата для перорального применения для профилактики и/или лечения интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, где интоксикации полипептидными фунгитоксинами вызываются полипептидными фунгитоксинами, выбранными из группы, включающей энниатин A, энниатин A1, энниатин B, энниатин B1, энниатин B2 или энниатин B3, боверицин или апицидин. Применение вышеописанных препаратов солодки и антидота эффективно для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3, боверицина и апицидина, в аграрных продуктах. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 табл., 5 пр.

1. Применение по меньшей мере одного препарата солодки, выбранного из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней солодки, причем препарат солодки содержит 4-10% масс./масс. глицирризиновой кислоты, необязательно вместе с по меньшей мере одним эксципиентом для перорального применения, для уменьшения токсического эффекта по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы, включающей энниатины, выбранные из группы энниатина A, энниатина A1, энниатина B, энниатина B1, энниатина B2 или энниатина B3, боверицин и апицидин, в аграрных продуктах.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что растение солодки выбрано из группы, состоящей из Glycyrrhiza glabra и Glycyrrhiza uralensis.

3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что водный сухой экстракт используют с концентрацией глицирризиновой кислоты 7% масс./масс.

4. Применение по пп. 1-3, отличающееся тем, что водный сухой экстракт используют в количестве по меньшей мере 1 г, 1-100 г, предпочтительно 7-50 г, предпочтительно 5-40 г, предпочтительно 5-30 г на тонну аграрного продукта или используют эквивалентное количество одного из других препаратов солодки по п. 1, 2 или 3 на тонну аграрного продукта.

5. Применение по любому из пп. 1-4, отличающееся тем, что токсический эффект по меньшей мере одного полипептидного фунгитоксина, выбранного из группы, включающей энниатины, в частности энниатин A, энниатин A1, энниатин B, энниатин B1, энниатин B2 или энниатин B3; боверицин или апицидин, в частности, полностью устраняется.

6. Применение по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что аграрный продукт выбран из пищевых продуктов или кормовых продуктов, состоящих из, или содержащих, по меньшей мере одного продукта, выбранного из группы, включающей зерновые злаки, кукурузу, рис, сою и другие бобовые, рапс, злаковые травы, душистые травы.

7. Применение по любому из пп. 1-6, отличающееся тем, что эксципиент выбран из группы, состоящей из инертных носителей, витаминов, минералов, фитогенных веществ, ферментов и других компонентов для детоксикации микотоксинов, таких как микотоксин-разлагающие ферменты, в частности афлатоксиноксидазы, эрготамингидролазы, эрготаминамидазы, зеараленонэстеразы, зеараленонлактоназы, зеараленонгидролазы, охратоксинамидазы, фумонизинаминотрансферазы, фумонизинкарбоксилтрансферазы, аминополиоламиноксидазы, дезоксиниваленолэпоксидгидролазы, дезоксиниваленолдегидрогеназы, дезоксиниваленолоксидазы, трихотецендегидрогеназы, трихотеценоксидазы; и микотоксин-трансформирующие микроорганизмы, такие как DSM 11798; и микотоксин-связывающие вещества, например клеточные стенки микробных клеток или неорганические материалы, такие как бентонит.

8. Применение антидота, включающего по меньшей мере один препарат солодки, выбранный из группы, включающей муку, водный экстракт, водный/этанольный экстракт, водный сухой экстракт и водный/этанольный сухой экстракт из целого растения солодки или из корней, причем препарат солодки содержит 4-10% масс./масс. глицирризиновой кислоты, для получения препарата для перорального применения для профилактики и/или лечения интоксикаций полипептидными фунгитоксинами, где интоксикации полипептидными фунгитоксинами вызываются полипептидными фунгитоксинами, выбранными из группы, включающей энниатин A, энниатин A1, энниатин B, энниатин B1, энниатин B2 или энниатин B3; боверицин или апицидин.

9. Применение по п. 8, отличающееся тем, что 1-100 мг, предпочтительно 7-50 мг, предпочтительно 5-40 мг, предпочтительно 5-30 мг антидота используют в качестве эффективных количеств указанного антидота на основе солодки на килограмм корма или пищи.