КОМПЛЕКС ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА ПОЛОСТИ РТА Российский патент 2021 года по МПК A61K36/575 A61K36/738 A61K36/752 A61K8/9789 A61K8/66 A61K8/99 A61P1/02 A61Q11/00 

Область техники

Изобретение относится к инновационному комплексу активных компонентов для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта на основе CO₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina, профилактическое применение которого позволяет снизить оксидативный стресс полости рта у субъекта, нуждающегося в этом.

Предшествующий уровень техники

По оценкам специалистов здоровье полости рта является одной из основополагающих основ общего здоровья человека. Заболевания ротовой полости в значительной мере влияют на качество жизни людей, социальные аспекты и обусловливают развитие других серьезных заболеваний. Так, заболевания пародонта увеличивают риск развития сердечно-сосудистых заболеваний на 19% (Nazir Muhammad Ashraf. Prevalence of periodontal disease, its association with systemic diseases and prevention. Int J Health Sci (Qassim) 2017; 11(2): 72-80).

Заболевания полости рта являются самыми распространенными заболеваниями, которые встречаются у людей в течение всей жизни, вызывая боль, дискомфорт. Согласно данным ВОЗ, существуют распространенные заболевания ротовой полости, в список которых входят такие как кариес, заболевания десен, травмы при проведении стоматологических процедур и операций. Согласно статистике, пародонтит находится на 6 месте среди самых распространенных заболеваний человечества в развитых и развивающих странах, более 743 млн. человек по всему миру имеют данный диагноз. По оценкам экспертов, в США государство недополучает в бюджет порядка 54 млрд долл. ежегодно, в то время как затраты на лечение болезней пародонта и полости рта в целом составляют около 442 млрд. долл. Заболеваемость за период с 1990 по 2010 годы выросла на 57,3% процента. С продолжающимся ростом урбанизации заболевания полости рта получат еще более широкое распространение по причине несоответствия между необходимым количеством фтора и его количеством, поступаемым в организм; некачественной гигиеной полости рта; растущим потреблением легко усваиваемых сахаров и трансгенных жиров; чрезмерного потребления алкоголя и курения; сахарного диабета (Tonetti MS, Jepsen S, Jin L, Otomo-Corgel J. Impact of the global burden of periodontal diseases on health, nutrition and wellbeing of mankind: a call for global action. J Clin Periodontal. 2017; 44(5): 456-462).

Нарушения в нормальном функционировании естественных процессов полости рта вызваны большим спектром факторов - биологических, социально-экономических и психологических. Несмотря на то, что заболевания полости рта встречаются у людей всех возрастов, наиболее подвержены данным заболеваниям категории граждан с низким социально-экономическим статусом (низкий уровень дохода, образования). ВОЗ предложил оценивать заболеваемость пародонтозом с помощью интегрального показателя - индекса нуждаемости в лечении заболеваний пародонта (CPITN). Данный индекс варьируется от 0 до 4 и показывает степень выраженности воспаления у людей на уровне целой популяции. По сравнению с развитыми странами (Франция, Германия, Турция), в развивающихся странах (Индия, Бразилия, Иран, Саудовская Аравия, Чили) среди подростков возраста 15-19 лет распространенность кровотечений выше на 35%. Аналогичным образом распространен зубной камень: в развивающихся странах среди взрослых людей возраста 35-44 года распространенность выше на 16%, чем в развитых странах. Однако в развитых странах зафиксировано наибольшее число людей с неглубокими пародонтальными карманами размером от 4 до 5 мм. Люди пожилого возраста от 65 до 74 лет чаще имеют более глубокие пародонтальные карманы размером 6 мм по сравнению со взрослыми людьми вне зависимости от экономического развития стран. Таким образом, болезни пародонта присутствуют у 20-50% людей в разных странах по всему миру ((Nazir Muhammad Ashraf. Prevalence of periodontal disease, its association with systemic diseases and prevention. Int J Health Sci (Qassim) 2017; 11(2): 72-80).

Проблема лечения воспалительных заболеваний пародонта является в настоящее время одной из актуальных в стоматологии. Воспаление десен является вторым из самых распространенных заболеваний у людей после кариеса, затрагивая ткани вокруг зубов и в их основании. Согласно статистике Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), около 80% людей рано или поздно сталкиваются с воспалением десен (Oral health. Fact sheets. 24 September 2018. <URL: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/oral-health>). Распространенность заболеваний пародонта у лиц старше 40 лет превышает 95%, причем заболевания часто протекают агрессивно и имеют прогрессирующее течение (Omarov I.A., Bolevich S.B., Savateeva-Lyubimova T.N., Silina E.V., Sivak K.V. Oxidative stress and combined antioxidant energy correction in the treatment of periodontitis. J Stomatology 1, 2011, p. 10-17).

Возникновение воспаления связывают с недостаточно эффективной гигиеной полости рта и несвоевременным обращением к стоматологу для периодических профилактических осмотров и лечения. Воспалительные процессы развиваются при наличии очагов инфекции и патогенных микроорганизмов на слизистой оболочке ротовой полости. Недостаточный уход за зубами и деснами, курение, зубной камень, остатки пищи между зубов являются причинами воспаления мягких тканей, отека и гиперемии десен. Всего в ротовой полости обнаружено свыше 800 видов бактерий, часть из которых является патогенной микрофлорой. При неправильной чистке зубов происходит патологическое увеличение глубины зубодесневой борозды - пародонтальный карман, в который проникают патогенные микроорганизмы полости рта и впоследствии начинают активно размножаться. Бактерии с помощью фермента гликозилтрансферазы формируют биопленки из полисахарида декстрана, защищаясь от факторов иммунитета: лизоцима, лактоферрина, секреторного IgA, пероксидазы. При возникновении в полости рта очагов воспаления местная активность лейкоцитов и Т-лимфоцитов слюны может значительно возрастать, осуществляя таким образом защитное действие, направленное непосредственно против возбудителя. Известно, что фагоциты и система комплемента вовлекаются в защитные механизмы при таких заболеваниях как пульпит, периодонтит. На первой стадии фагоциты мигрируют из сосудистого русла в область воспаления посредством взаимодействия между молекулами адгезии - процесс хемотаксиса. Когда лейкоциты (нейтрофилы и моноциты) уже проникли в очаг инфекции, они распознают компоненты повреждающих бактерий с помощью Toll-подобных рецепторов 4 типа, фагоцитарных, G-связанных, маннозных и скавенджер-рецепторов. Такими компонентами могут выступать липополисахариды клеточной стенки бактерий, бактериальные протеогликаны и липиды, короткие пептиды с N-формилметионилом. Затем фагоциты начинают активно поглощать бактерии (процесс фагоцитоза) и выделять защитные факторы. С помощью ферментов NADPH-оксидазы и индуцибельной NO-синтазы фагоциты образуют активные формы кислорода (АФК): гипохлорит , супероксидный анион-радикал , гидроксидный радикал , пероксид кислорода Н₂О₂, гидропероксидный радикал , пероксинитрит . АФК разрушают клетки бактерий, однако из-за неспецифичности действия также повреждают здоровые клетки: эпидермальные клетки слизистой, фибробласты соединительной ткани, эндотелий сосудов, что приводит к разрушению тканей десны, появлению кровоточивости десен, резкой болью и повышенной чувствительностью на холод. Продукты разрушения бактерий попадают в местный кровоток, активируя систему комплемента. В данный процесс также вовлечены моноциты крови, Т-лимфоциты лимфатической системы, тучные клетки тканей десен, которые в ответ на воспаление выделяют в кровь метаболиты арахидоновой кислоты, фактор активации тромбоцитов, цитокины (TNFα, IL-1β, IL-6), гистамин. Данные вещества вызывают увеличение сосудистой проницаемости и кровоточивости десен, повышение температуры за счет влияния на центр терморегуляции в гипоталамусе, способствуют дальнейшему хемотаксису нейтрофилов в место воспаления. Однако такая защитная реакция организма может переходить в следующую стадию - хроническое воспаление, вызывая прогрессирующее образование пародонтальных каналов большой глубины, разрушение корней зубов и их выпадение (Robbins and Cotran Pathologic Basis of Diseases, 8^th edition, 2009).

Самым распространенным видом воспаления десен являются гингивиты и пародонтиты. Под термином «гингивит» понимается воспаление десен без нарушения целостности зубодесневого соединения. Гингивит наиболее часто возникает из-за скопления микробного налета на зубах, в результате несоблюдения процедур гигиены полости рта.

Одним из факторов возникновения гингивита является чрезмерное отложение зубного налета в результате несоблюдения гигиены полости рта. Зубной налет представляет собой комплекс патогенных микроорганизмов полости рта и продуктов их жизнедеятельности. Возбудителями гингивита являются следующие бактерии: Streptococcus oralis, Bacteroides gingivalis, Porphyromonas gingivalis, Actinomycetes comitans, Prevotella intermedia, Actinomyces israelii, реже грибы и вирусы. Факторами риска гингивита являются курение, зубной камень, иммунодепрессивные состояния, патологии прикуса, сахарный диабет, дефицит аскорбиновой кислоты в пище и другие. Первоначальным способом терапии гингивита является снижение количества патогенных микроорганизмов и удаление налета с поверхности зубов. Хронический гингивит связан с отложением зубного камня, от которого пациенты не в состоянии самостоятельно избавиться. Использование антибактериальных веществ позволяет снизить количество бактериального налета для предотвращения и лечения гингивита у некоторых пациентов. Американская ассоциация стоматологов (The American Dental Association) выработала критерии к эффективным антибактериальным веществам при лечении гингивита: вещество должно снижать количество налета и уменьшать выраженность воспаления на период как минимум 6 месяцев, должно быть безопасным для человека и не вызывать выраженных побочных эффектов. Для лечения гингивита одобрены тимол, ментол, эвкалиптол, метилсалицилат, хлоргексидин биглюконат и триклозан. Однако согласно результатам клинических исследований, данные средства полезны и эффективны только в случае воспаления выше края десны, но не ниже (American Academy of Periodontology - Research, Science, and Therapy Committee. Treatment of plaque-induced gingivitis, chronic periodontitis, and other clinical conditions. J Periodontology 2001; 72(12): 1790-1800). Гингивит является обратимым состоянием, которое можно устранить при установлении адекватного гигиенического режима. При отсутствии лечения гингивит может прогрессировать в деструктивную форму заболеваний пародонта - пародонтит.

Под термином «пародонтит» понимается воспалительное заболевание тканей пародонта, характеризующееся прогрессирующим разрушением нормальной структуры альвеолярного отростка челюсти. При тяжелом течении пародонтита чаще всего обнаруживаются Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Treponema denticola. Другая причина - травматическая, что, помимо анатомических особенностей и наличия ортодонтических конструкций, включает в себя неправильное использование зубной щетки. Патология характеризуется воспалением и умеренной болезненностью десны, отеком мягких тканей, припухлостью, покраснением слизистой оболочки. Боль может иметь различную локализацию и возникать под зубом или вокруг него. Для профилактики пародонтита необходимо соблюдать адекватный гигиенический режим (American Academy of Periodontology - Research, Science, and Therapy Committee. Treatment of plaque-induced gingivitis, chronic periodontitis, and other clinical conditions. J Periodontology 2001; 72(12): 1790-1800).

Соблюдение гигиены полости рта посредством регулярной чистки зубов позволит контролировать развитие заболевания. Поскольку гингивит является воспалительным заболеванием десен, возможно использование противовоспалительных средств, например, флурбипрофена, напроксена и ибупрофена, однако они только уменьшают выраженность воспаления и не устраняют первоначальную причину заболевания - воспаление из-за патогенных бактерий. Наилучшим решением будет использование веществ, которые имеют одновременно антибактериальное и противовоспалительное действие (Sekino S, Ramberg Р, Lindhe J. The effect of systemic administration of ibuprofen in the experimental gingivitis model. J Clin Periodontal. 2005; 32(2): 182-187; Rosin M, Kahler ST, Hessler M, Schwahn Ch, Kuhr A, Kocher T. The effect of a dexibuprofen mouth rinse on experimental gingivitis in humans. J Clin Periodontal. 2005; 32(6): 617-621).

Состояние пародонта в норме и при пародонтите во многом зависит от функционирования клеток врожденного иммунитета - в частности, нейтрофилов. Уничтожение бактерий нейтрофилами в норме происходит без развития активной фазы воспаления. Курение, плохая диета, физическое повреждение приводит к увеличению колонизации микробного сообщества бактерией P. gingivalis, в результате нейтрофилы выходят в соединительную ткань, но не мигрируют в очаг инфекции, что ведет к усилению воспаления. В результате происходит дополнительное привлечение нейтрофилов в ткани и их разрушение (Uriarte SM, Edmisson JS, Jimenez-Florez E. Human neutrophils and oral microbiota: a constant tug-of-war between a harmonious and a discordant coexistence. Immunological Reviews 2016; 273: 282-298; Olsen I, Lambris JD, Hajishengallisc G. Porphyromonas gingivalis disturbs host-commensal homeostasis by changing complement function. J Oral Microbiol. 2017; 9(1): 1340085).

В иммунный ответ при воспалении вовлечены не только нейтрофилы, но и Т-лимфоциты. Иммунитет играет ключевую роль в развитии патогенеза гингивита и периодонтита. Исследования показывают, что регуляторные Т-лимфоциты (T-regulatory) подавляют развитие иммунного ответа путем подавления активности других иммунных клеток и их популяция сильно увеличена при периодонтите и выраженном гингивите. Была выявлена связь между размером популяции регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+, CD25+, FoxP3+) и активностью пути транскрипционного фактора NF-κВ (receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) при периодонтите и гингивите (Arul D, Rao S. Isolation of naturally induced T-regulatory cells in gingival tissues of healthy human subjects and subjects with gingivitis and chronic periodontitis. Cureus 2019; 11(3): e4283).

В ходе исследований, посвященных морфологическому сравнению тканей десен, было обнаружено, что при хроническом гингивите и периодонтите внеклеточный матрикс был серьезно поврежден, а волокна коллагена I типа были реорганизованы. Также в данном процессе участвовало большое количество клеток воспаления (моноциты, макрофаги, лимфоциты) и постоянных клеток (фибробласты, клетки эпителия и эндотелиальные клетки), которые выделяли цитокины и ферменты-протеазы, разрушающие внеклеточный матрикс и нарушающие укладку коллагеновых волокон. Стоит отметить, что и сами патогенные микроорганизмы выделяли матриксные металлопротеазы, участвующие в реорганизации внеклеточного матрикса соединительной ткани десен (Almeida Т, Valverde Т, Martins-Junior Р, Ribeiro Н, Kitten G, Carvalhaes L. Morphological and quantitative study of collagen fibers in healthy and diseased human gingival tissues. Rom J Morphol Embryol 2015; 56(1): 33-40). При периодонтите мононуклеарные клетки CD68+: моноциты, макрофаги - выделяют большое количество матриксной металлопротеазы 12 типа (металлоэластазы макрофагов) из-за влияния фактора CSF-2 и пути СОХ-2. Матриксная металлопротеаза 12 типа разрушает белки внеклеточного матрикса - тропоэластин и фибронектин, составляющих вместе с коллагеном основу соединительной ткани десен ротовой полости. Также данный фермент опосредует воспалительный ответ за счет выделения провоспалительного цитокина TNFα из лимфоцитов, макрофагов, фибробластов (Holsmstrom SB, Clark R, Zwicker S, Bureik D, Kvedaraite E, Bernasconi E, Thu Nguyen Hoang A, Johannsen G, Marsland BJ, Bostrom EA, Svensson M. Gingival tissue inflammation promotes increased matrix metalloproteinase-12 production by CD200R^low monocyte-derived cells in periodontitis. The Journal of Immunology 2017; 199: 1-14).

Вещества, принимающие участие в воспалительных заболеваниях, изучаются, однако есть данные о тех или иных изменениях в жизнедеятельности клеток. Так, были получены данные, свидетельствующие об увеличенном количестве экспрессии белка бета-катенина и секретируемого трансмембранного белка frizzled-1 в зависимости от размера повреждения периодонта. В норме данные белки регулируют пролиферацию клеток и регенерацию тканей через сигнальный путь Wnt, однако при повышенном уровне экспрессии могут провоцировать развитие периодонтита (Chi Y, Xu С, Sun X, Li D, Wang H, Wang M, He X. Expression and significance of secreted frizzled-related protein 1 and β-catenin in gingival tissue of patients with chronic periodontitis. West China Journal of Stomatology 2018; 36(3): 257-261).

При воспалительных заболеваниях полости рта изменяется состояние не только десен и зубов, но и качественный и количественный состав слюны. В ходе исследований было обнаружено, что при гингивите и периодонтите в слюне увеличивается количество сиаловой кислоты в два и три раза соответственно по сравнению с количеством вещества в отсутствие воспалительных заболеваний полости рта. Сиаловая кислота является важным биомаркером, количество которого коррелирует с выраженностью системного воспаления. Данное соединение является частью гликолипидов и гликопротеинов, которые находятся в подвижном состоянии в мембране клеток. Функция сиаловой кислоты выражена в регуляции врожденного иммунитета. Наиболее известной формой сиаловой кислоты является N-ацетилнейраминовая кислота. Сиаловая кислота способствует увеличению синтеза защитных молекул при оксидативном стрессе при периодонтите и гингивите (Hernandez-Cedillo A, Garcia Valdivieso MG, Hernandez-Arteaga AC, Patino Marin N, Hernandez AAV, Jose-Yacaman M, Navarro-Contreras HR. Determination of sialic acid levels by using surface-enhanced Raman spectroscopy in periodontitis and gingivitis. Oral Dis. 2019). Предполагается, что фермент нейраминидаза патогенных микроорганизмов расщепляет силовую кислоту, способствуя формированию налета и дальнейшему прогрессированию периодонтита (Ide, М., McPartlin, D., Coward, P.Y., Crook, M., Lumb, P., & Wilson, R.F. Effect of treatment of chronic periodontitis on levels of serum markers of acute-phase inflammatory and vascular responses. Journal of Clinical Periodontology 2003; 30(4): 334-340; Jawzali, J. I. Association between salivary sialic acid and periodontal health status among smokers. The Saudi Dental Journal 2016; 28(3): 124-135; Jwan I. Jawzaly, H.G.H. & В.M.A. Relationships of salivary sialic acid and its fraction in periodontitis with demographic properties and medical history. International Journal of Dental Research & Development (IJDRD) 2013; 3(2): 17-26; Rathod, S.R., Khan, F., Kolte, A.P., & Gupta, M. Estimation of salivary and serum total sialic acid levels in periodontal health and disease. Journal of Clinical and Diagnostic Research 2014; 8(9): ZC19-ZC21). По результатам исследований ученых из Южной Кореи, при пародонтите в слюне увеличивается количество IL-8 и матриксной металлопротеазы 9 типа, поэтому могут использоваться как биомаркеры выраженного воспаления ротовой полости наравне с сиаловой кислотой. IL-8 является высокоактивным провоспалительным цитокином, который секретируется из макрофагов и эпителиальных клеток, способствуя привлечению нейтрофилов в место воспаления. Матриксная металлопротеаза 9 типа является главным ферментом, разрушающий коллаген при развитии гингивита и пародонтита (Kim HD, Shin MS, Kim HT, Kim MS, Ahn YB. Incipient periodontitis and salivary molecules among Korean adults: association and screening ability. J Clin Periodontal. 2016; 43(12): 1032-1040).

Другим фактором возникновения гингивита является оксидативный стресс (окислительный стресс). В последние десятилетия широко исследуются проблемы свободно-радикальных процессов (СРП), роль которых доказана при самых разных нозологиях, однако число исследований, посвященных состоянию окислительного стресса у больных с заболеваниями пародонта, немногочисленно. СРП являются общебиологическим механизмом защиты и повреждения тканей. В норме они участвуют в энергетических процессах, в транспорте электронов в цепи дыхательных митохондрий, пролиферации и дифференцировке клеток, в регуляции активности ферментов и др. Кроме того, СРП - необходимое звено любого воспаления, связанное с продукцией фагоцитами активных форм кислорода (АФК). Это эволюционно выработанная секреторная функция фагоцитов необходима для уничтожения патогенных бактерий, однако резкое усиление потребления кислорода в процессе фагоцитоза приводит к тому, что вместо восстановления O₂ до H₂O лейкоциты, в основном, генерируют следующие АФК: супероксидный анион-радикал , гидроксидный радикал , пероксид кислорода Н₂О₂, гидропероксидный радикал . Избыток АФК способствует свободно-радикальному перекисному окислению липидов (ПОЛ), что повреждает ткани, прежде всего биологические мембраны клеток. При появлении большого количества свободных радикалов нарушается транспорт электронов в дыхательной цепи митохондрий; разобщение окислительного фосфорилирования под действием ПОЛ ведет к глубокому дефициту энергии; изменяются функции ферментов, углеводов и белков, в том числе белков ДНК и РНК. В результате клеткой утрачиваются регуляторные функции, появляются аномальные белки и стимулируются, помимо прямого повреждающего действия, вторичные деструктивные процессы. Глубокие нарушения мембранного и, в последующем, тотального устройства клетки приводит к ее гибели. Данный процесс носит название оксидативного стресса (Omarov I.A., Bolevich S.B., Savateeva-Lyubimova T.N., Silina E.V., Sivak K.V. Oxidative stress and combined antioxidant energy correction in the treatment of periodontitis. J Stomatology 1, 2011, p. 10-17).

В ходе исследований было выявлено, что при периодонтите в слюне увеличивается количество такого биомаркера как малонового диальдегида, возникающего при ПОЛ и оксидативном стрессе. Показано, что малововый диальдегид способен реагировать с ДНК, образуя ДНК-аддукты, в первую очередь мутагенный M₁G - продукт присоединения малонового альдегида к гуанину (Cherian DA, Peter Т, Narayanan A, Madhavan SS, Achammada S, Vynat GP. Malondialdehyde as a marker of oxidative stress in periodontitis patients. J Pharm Bioallied Sci. 2019; 11(2): S297-300).

Учитывая, что значимая роль в патогенезе гингивита и пародонтита отводится бактериальной флоре, тесно связанной с активностью свободных радикалов и защитными реакциями иммунитета, СРП является одним из звеньев развития и течения гингивита и пародонтита. Дисбаланс СРП при болезнях пародонта в большей степени затрагивает кислородный этап окислительного стресса и продолжается длительное время, в связи с чем возникает необходимость при воспалении десен применения антиоксидантов и энергокорректоров для улучшения течения заболевания (Omarov I.A., Bolevich S.B., Savateeva-Lyubimova T.N., Silina E.V., Sivak K.V. Oxidative stress and combined antioxidant energy correction in the treatment of periodontitis. J Stomatology 1, 2011, p. 10-17).

Для профилактики и лечения воспаления периодонта целесообразно использовать лекарственные растения и их экстракты из-за щадящего действия на ткани десен, высокой эффективности всего комплекса биологически активных веществ (БАВ) и низкой частоты возникновения побочных эффектов после применения по сравнению с лекарственными средствами, такие как экстракт цветков шиповника, эфирное масло цитрусовых, экстракт гибискуса, эфирное масло гвоздики, экстракт коры магнолии и др.

Шиповник давно известен российской медицине и применяется в различных формах: плоды шиповника, настой плодов, витаминные сборы, сухой экстракт, сироп шиповника, препарат «Холосас», обладающий желчегонным действием, и др. Различают низковитаминные и высоковитаминные виды шиповника, которые регламентированы в ГФ XIV издания и сбор которых разрешен для получения лекарственного растительного сырья. Так, к высоковитаминным видам относится шиповник майский (Rosa majalis), шиповник иглистый (Rosa acicularis), шиповник морщинистый (Rosa rugosa), шиповник даурский (Rosa davurica) и другие представители. В них содержание аскорбиновой кислоты как главного БАВ находится в диапазоне от 1 до 18%. Низковитаминные плоды шиповника собачьего (Rosa canina), шиповника мелкоцветкового (Rosa floribunda) содержат менее 1% аскорбиновой кислоты.

Несмотря на тот факт, что в косметической промышленности активно применяют экстракт именно плодов шиповника, авторы настоящего изобретения использовали экстракт цветков/лепестков шиповника. В плодах шиповника основными биологически активными соединениями являются аскорбиновая кислота, обладающая выраженным антиоксидантным эффектом, и флавоноиды. Именно поэтому плоды шиповника стандартизуют по содержанию аскорбиновой кислоты и флавоноидов. Стоит отметить, что содержание и состав флавоноидов в плодах шиповника менее представлено, чем в цветках шиповника, поэтому антиоксидантный эффект экстракта из плодов умеренный. Аскорбиновая кислота является неустойчивым соединением и легко окисляется в ходе экстракции из плодов шиповника, поэтому ее биологическая активность снижается до минимальной. Аскорбиновой кислоты в лепестках цветков шиповника содержится минимальное количество, потому основными БАВ являются эфирное масло, гидролизуемые танины и полисахариды, флавоноиды и антоцианы (Nowak R, Olech М, Pecio L, Oleszek W, Los R, Malmc A, Rzymowskad J. Cytotoxic, antioxidant, antimicrobial properties and chemical composition of rose petals. J Sci Food Agric 2014; 94: 560-567).

В лепестках шиповника представлен наибольший спектр веществ с антиоксидантной и противовоспалительной активностью, поэтому применение экстракта из цветков является наиболее оправданным при воспалительных заболеваниях полости рта, например, гингивите и пародонтите. Флавоноиды и антоцианы нейтрализуют активные формы кислорода в месте воспаления, эфирное масло обеспечивает ранозаживляющее и антибактериальное действие, а гидролизуемые танины образуют защитную пленку на поверхности десен для защиты десен и уменьшения болевой чувствительности. Таким образом, именно экстракт из цветков шиповника обладает многосторонним и эффективным действием при воспалительных заболеваниях ротовой полости в отличие от экстракта плодов шиповника.

Для экстракции БАВ из цветков шиповника можно использовать различные растворители и методы. Традиционные методы используют в качестве экстрагентов спирт этиловый, смесь глицерина и воды. Существует инновационный метод получения экстрактов - криоэкстракция. Криоэкстракция - это метод экстрагирования на холоде с применением растворителей, температура кипения которых низка и которые при обычной температуре находятся в газообразном состоянии. Криоэкстракты содержат больше БАВ, чем обычные водные экстракты. Для обеспечения необходимого терапевтического эффекта необходим весь комплекс БАВ из лекарственных растений. Использование воды в качестве экстрагента не позволяет извлечь все БАВ, поэтому эффективность такого экстракта меньше. Использование органических растворителей (спирт этиловый, глицерин и др.) с амфифильной природой позволяет получить более ценные по составу экстракты с присутствием полифенольных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, поэтому они также могут применяться для лечения воспалительных заболеваний полости рта.

Однако наиболее инновационным является получение экстрактов с помощью сжатого до жидкого состояния углекислого газа CO₂. При этом органические растворители не способны обеспечить извлечения полного комплекса БАВ вследствие различной растворимости определенных групп биологически активных веществ. В CO₂-экстрактах сжиженный углекислый газ, используемый в качестве растворителя (сольвента), извлекает эфирные масла, пигменты, жирорастворимую фракцию полифенольных соединений, терпены. Полученный экстракт обладает всей совокупностью биологически активных веществ, так как экстракцию проводят при более высоких давлениях. Благодаря липофильному характеру CO₂-экстракты во многом родственны некоторым компонентам гидролипидных структур кожи, поэтому БАВ в составе таких экстрактов легче проникают в кожу. Стоит отметить, что CO₂-экстракт обладает большей эффективностью, чем водные экстракты.

СО₂-экстракт цветков шиповника получают из различных видов растений рода Rosa семейства Rosaceae, которые также различаются по биохимическому составу в зависимости от места и условий произрастания. Среди списка БАВ наиболее активными ингредиентами шиповника являются феноловые кислоты (кофеиновая кислота, салициловая, кумариновая кислоты), флавоноиды (рутин, изокверцетин, тилирозид, кверцетин, кемпферол-3-О-рутинозид, апигенин-7-О-глюкозид), эфирные масла и полисахариды, состоящие из остатков моносахаридов: глюкозы, маннозы, рамнозы, галактозы, ксилозы, фруктозы, фукозы и арабинозы. Цветки шиповник содержат также гидролизуемые танины (ругозин D и теллимаграндин II), линолоол, фенилэтиловый спирт, цитронеллол, α-бисоболол (Nowak R, Olech М, Pecio L, Oleszek W, Los R, Malmc A, Rzymowskad J. Cytotoxic, antioxidant, antimicrobial properties and chemical composition of rose petals. J Sci Food Agric 2014; 94: 560-567).

При воспалении повышается активность клеток иммунной системы, которые выделяют большое количество АФК для устранения патогенных микроорганизмов. Гидроксидный радикал является одним из чрезвычайно активных свободных радикалов из-за способности вызывать быстро прогрессирующее перекисное окисление липидов, мутации в ДНК и нарушение структуры белков-ферментов. Супероксидный анион-радикал является предшественником АФК, способствуя образованию других свободных радикалов.

Полисахариды уменьшали выраженность окислительного стресса посредством стабилизации супероксидного анион-радикала и гидроксидного радикала . Антиоксидантная активность полисахаридов шиповника зависит от качественного состава из моносахаридов, молекулярной массы, типа гликозидной связи и содержания уроновой кислоты. Отмечено, что чем больше уроновой кислоты в составе полисахаридов, тем выше антиоксидантная активность (Zhang С, Zhao F, Li R, Wu Y, Liu S, Liang Q. Purification, characterization, antioxidant and moisturepreserving activities of polysaccharides from Rosa rugosa petals. International Journal of Biological Macromolecules, 2018).

Было выявлено, что экстракт цветков шиповника ингибировал тирозиназу, катализирующую процесс окисления фенольных соединений в клетках, и обладал антибактериальным действием (Ren G, Xue Р, Sun X, Zhao G. Determination of the volatile and polyphenol constituents and the antimicrobial, antioxidant, and tyrosinase inhibitory activities of the bioactive compounds from the by-product of Rosa rugosa Thunb. var. plena Regal tea. BMC Complement Altern Med. 2018; 18(1): 307). Антибактериальная активность была отмечена против 8 видов бактерий: S. epidermidis, S. aureus, В. subtilis, М. luteus, Е. coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa, P. Mirabilis (Nowak R, Olech M, Pecio L, Oleszek W, Los R, Malmc A, Rzymowskad J. Cytotoxic, antioxidant, antimicrobial properties and chemical composition of rose petals. J Sci Food Agric 2014; 94: 560-567).

В настоящее время большое внимание уделяют цитрусовым, в том числе клементину. Эфирное масло клементина получают из кожуры плодов клементина Citrus clementina семейства Цитрусовые Citrinae. Эфирное масло клементина содержит в себе большой спектр БАВ - в частности, терпеноидов: лимонен (около 95%), мирцен (около 0,75%), линалол (около 0,5%), альфа-пинен (около 0,5%), сабинен (около 0,5%), альфа-терпинеол, терпинен и др. Однако не только терпеноиды обладают выраженным терапевтическим действием. Высокое содержание флавоноидов в клементине обусловливает антиоксидантные, противовоспалительные, противоаллергические и противораковые свойства. Флавоноиды представлены флавонами (диосмин, лютеолин и синенсетин), флавононами (нарингин, гесперидин, неогеспериди), флавонолами (рутин, кверцетин, кемпферол) и их гликозидами. Известно, что гесперидин обладает Р-витаминной активностью, то есть тормозит активность гиалуронидазы. Так повышается концентрация гиалуроновой кислоты, которая увеличивает эластичность капилляров и снижает их проницаемость, что является полезным при прогрессировании воспаления. Кроме того, совместно с нарингином геспиридин препятствует медь-зависимому окислению липопротеинов низкой плотности, что важно при окислительном стрессе (Alvarez R, Carvalho CP, Sierra J, Lara O, Cardona D, Londono-Londono J. Citrus juice extraction systems: effect on chemical composition and antioxidant activity of clementine juice. J Agric Food Chem 2012; 60(3): 774-781). Однако в ходе исследований было выявлено, что индивидуальное соединение лимонен показало выраженную ингибирующую активность эластазы и коллагеназы, участвующих в разрушении внеклеточного матрикса. В эфирном масле клементина содержится более 95% лимонена, поэтому оно обладает выраженным стабилизирующим и противовоспалительным действием и препятствует окислительному стрессу (Fraternale D, Flamini G, Ascrizzi R. In vitro anticollagenase and antielasttase activities of essential oil of Helichrysum italicum subsp. italicum (Roth) G. Don. J Med Food 2019).

Сухой экстракт гибискуса получают из цветков гибискуса Hibiscus sabdariffa семейства Мальвовые Malvaceae. Экстракт гибискуса содержит в себе большой спектр БАВ: антоцианы (преимущественно 3-О-самбубиозид цианидина, 3-О-самбубиозид дельфинидина, дельфинидин, дельфинидин-3-глюкозид, цианидин-3-глюкозид и др.); госсипетин, протокатехоевая кислота, гибисковая кислота, органические гидроксикислоты (лимонная, яблочная, винная, аскорбиновая кислоты), флавоноиды (кверцетин-3-самбулозид и рутинозид, мирицетин-3-самбулозид, гибисцетин, гибисцентрин), комплекс фенолкарболовых кислот (феруловая, протокатеховая, кумаровые кислоты), альфа-токоферол, хлорогеновая кислота (3-О-кофеилхинная кислота) и 5-О-кофеилхинная кислота. Комплекс из 14 фенольных соединений в эксперименте демонстрирует выраженный антиоксидантный эффект ( I., S., D., P.A., Del R., I., A., J.F. and Segura-Carretero A. Characterization of phenolic compounds anthocyanidin, antioxidant and antimicrobial activity of 25 varieties of Mexican Roselle (Hibiscus sabdariffa). Industrial Crops Products, 2015; 69: 385-394). Механизм действия органических кислот связан со снижением концентрации ионов кальция в клетках путем образования хелатных комплексов, что способствует снижению выраженности воспаления. В оксидативном стрессе главное место занимают ионы кальция, способствующие активации ферментов и клеток воспаления, секреции цитокинов и провоспалительных веществ.

Основные соединения - антоцианы выполняют антиоксидантную функцию, стабилизируя активные формы кислорода и образуя неактивные интермедиаты благодаря своим восстановительным свойствам за счет гидроксильных групп (Deli М, Ndjantou ЕВ, Ngatchic Metsagang JT, Petit J, Yanou NN, Scher J. Successive grinding and sieving as a new tool to fractionate polyphenols as antioxidants of plants powders: Application to Boscia senegalensis seeds, Dichostachys glomerate fruits, and Hibiscus sabdariffa calyx powders. Food Sci Nutr. 2019; 7: 1795-1806; Ramakrishna BV, Jayaprakasha GK, Jena BS, Singh RP. Antioxidant activities of roselle (Hibiscus abdariffa) calyces and fruit extracts. J Food Sci Technol 2008; 45: 223-227). В настоящее время считается, что дельфинидин, как основной антоциан гибискуса, обладает наибольшей антиоксидантной активностью среди всех известных антоцианов. Дельфинидин подавляет активность СОХ-2, индуцибельной NO-синтазы, TNFα и может обрывать свободнорадикальную цепь, вызванную ионами меди и аскорбиновой кислотой (Medina-Carrillo, R.Е., Madrigal-Santillan, Е., Machuca-Sanchez, М.L., Balois-Morales, R., Jimenez-Ruiz, E.I., Valadez-Vega, C., Sumaya-Martinez, M.T. Free radical scavenging properties and their relationship bioactive compounds content of dehydrate calyces of roselle (Hibiscus sabdariffa L.). African Journal of Agricultural Research 2016; 10(11): 1203-1210). Дельфинидин за счет содержания наибольшего количества гидроксильных способен образовывать устойчивые интермедиаты, перехватывая электроны со свободных радикалов и АФК. Было обнаружено, что антоцианы экстракта из цветков гибискуса (дельфинидин, цианидин-3-О-гликозид) препятствуют образованию малонового диальдегида, побочного продукта ПОЛ. Хлорогеновая кислота (транс-3-О-кофеилхинная кислота) обладает выраженной противовоспалительной активностью. Экстракт цветков гибискуса проявлял не только антиоксидантную и противовоспалительную функцию, но и антибактериальное и противогрибковое действие. Так, экстракт замедлял рост Bacillus cereus, Trichoderma viride и Aspergillus ochraceus в минимальных концентрациях, a Micrococcus flavus, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa и Salmonella typhimirium в более высоких (Jabeur I, Pereira E, Barros L, Calhelha RC, M, Oliveira M. Beatrix PP, Isabel Ferreira IC.F.R. Hibiscus sabdariffa L. as a source of nutrients, bioactive compounds and colouring agents. Food Research International 2017).

Один из патогенных микроорганизмов полости рта - Streptococcus mutans вырабатывает гликозилтрансферазу для формирования биопленок декстранов, которые защищают его от действия факторов иммунитета человека и способствуют развитию кариеса. Однако полифенолы, флавоноиды и антоцианы ингибируют активность фермента гликозилтрансферазы, основного фермента патогенных микроорганизмов полости рта (Ren Z, Chen L, Li J, Li Y. Inhibition of Streptococcus mutans polysaccharide synthesis by molecules targeting glycosyltransferase activity. J Oral Microbiol. 2016; 8: 31095). Дельфинидин является нестабильным соединением и может превращаться в галловую кислоту, обладающую антиоксидантным эффектом. Было выявлено, что дельфинидин и его метаболит - галловая кислота - способствует дифференцировке регуляторных Т-лимфоцитов посредством выделения противовоспалительного цитокина TGF-β. Данный ростовой фактор, как полагают, играет важную роль в регуляции работы иммунной системы (Fakeye ТО, Pal A, Bawankule DU, Khanuja SPS. Immunomodulatory effect of extracts of Hibiscus sabdariffa L. (Family Malvaceae) in a mouse model. Phytother Res 2008; 22(5): 664-668). Через белок Foxp3 он влияет на регуляторные Т-лимфоциты и Т-хелперы 17 типа, а также блокирует активацию Т-лимфоцитов и макрофагов. Таким образом, дельфинидин обладает иммуносупрессивными свойствами и снижает выраженность воспаления (Hyun KH, Gil KC, Kim SG, Park SY, Hwang KW. Delphinidin chloride and its hydrolytic metabolite gallic acid promote differentiation of regulatory T cells and have an anti-inflammatory effect on the allograft model. J Food Sci. 2019; 84(4): 920-930).

Сухой экстракт коры магнолии получают из Магнолии лекарственной Magnolia officinalis семейства Магнолиевые Magnoliaceae. Экстракт магнолии рекомендован к применению в косметических продуктах (Liu, Z., Zhang, X., Cui, W., et al. Evaluation of short-term and subchronic toxicity of magnolia bark extracts in rats. Regul. Toxicol. Pharmacol., 2007; 49(3): 160-171). Кора магнолии давно известна в японской и китайской медицине как средство для лечения заболеваний ЖКТ, чувства тревоги и депрессии, заболеваний нервной системы, бронхиальной астмы и аллергических проявлений; умеренно снижает головную боль, боль в мышцах и высокую температуру. Основными действующими веществами в экстракте являются фенольные соединения: магнолол (5,5'-диаллил-2,2'-дигидроксибифенил) и хонокиол (5,3'-диаллил-2,4'-дигидроксибифенил), которым сопутствуют сесквитерпеновые спирты - α и β-эвдесмолы, алкалоиды производные апорфина и бензилтетрагидроизохинолина, минеральные соли: соли кальция, калия, магния, железа.

Магнолол и хонокиол по химической структуре представляют собой лигнаны, гидроксибифенольные соединения. Содержание данных лигнанов может находиться в диапазоне от 40% до 90% в зависимости от вида используемого лекарственного растения. В ходе исследования было обнаружено, что экстракт коры магнолии обладает противораковым, антиоксидантным, противовоспалительным и другими эффектами, что подтверждает высокую ценность данного растительного сырья.

Интерес к экстракту коры магнолии появился после опубликования результатов исследования, согласно которому экстракт коры магнолии уменьшал количество Porphyromonas gingivalis и Fusobacterium nucleaticum, а также ингибировал фермент гликозилтрансферазу, участвующую в формировании бактериального зубного налета и возникновении воспаления десен. Присутствие ключевых патогенов - P. gingivalis и F. nucleaticum - также связано с риском возникновения плоскоклеточной орофарингеальной карциномы, рака поджелудочной железы и рака толстой кишки.

Магнолол и хонокиол подавляют активацию пути NF-kB и экспрессию матриксной металлопротеазы 1 типа, предотвращая воспаление и разрушение белков внеклеточного матрикса. NF-kB стимулирует транскрипцию генов провоспалительных факторов, способствует высвобождению цитокинов и NO из макрофагов. Также доказано, что магнолол и хонокиол подавляют MAPK путь, участвующий в развитии воспаления.

Хонокиол имеет выраженное антиоксидантное действие за счет стабилизации супероксидных и пероксидных радикалов. Магнолол и хонокиол подавляют синтез TNFα и NO, а также снижают синтез эйкозаноидов за счет ингибирования ферментов цикла арахидоновой кислоты: фосфолипазы А₂, СОХ-2, 5-LOX и LTS-4. Экстракт магнолии эффективен в отношении грамположительных бактерий Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Capnocytophaga gingivalis, Prevotella intermedia, Micrococcus luteus и грибов Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes, Cryptococcus neoformans. Предполагается, что лигнаны коры магнолии увеличивают проницаемость клеточных мембран бактерий и взаимодействуют с транспептидазой - ферментом синтеза клеточной стенки грамположительных бактерий (Poivre М, Duez P. Biological activity and toxicity of the Chinese herb Magnolia officinalis Rehder & E. Wilson (Houpo) and its constituents. Journal of Zhejilang University-SCIENCE B. 2017; 18(3): 194-214).

Безопасность магнолола и хонокиола при употреблении внутрь по показателю мутагенность подтверждена в ходе исследований, поэтому чистые субстанции и экстракт коры магнолии возможно применять перорально (Sarrica A, Kirika N, Romeo М, Salmona М, Diomede L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 2018; 84(16): 1151-1164).

Эфирное масло гвоздики давно известно своим действием в парфюмерии и косметике. Так, в I тысячелетии до н.э. в Китае гвоздика была корригентом запаха и антисептическим средством - перед императорской аудиенцией надлежало жевать бутон гвоздики, чтобы избавиться от галитоза. Сегодня гвоздичное масло применяют в медицине, кулинарии, ароматерапии, косметологии, парфюмерии.

Эфирное масло гвоздики получают из несозревших бутонов цветков гвоздичного дерева Syzygium aromaticum семейства Миртовые Myrtaceae. Основным БАВ эфирного масла гвоздики является эвгенол - масло на 60-90% состоит из этого вещества. Это вещество из класса фенолов, получившее название от кустарника семейства Миртовые Eugenia, известное по своему бактерицидному действию. Кроме эвгенола гвоздичное масло содержит эвгенолацетат, кариофиллен и метиловый эфир салициловой кислоты, обусловливающий противовоспалительные свойства. Эвгенол обладает антибактериальным, противовоспалительным, противогрибковым и иммуномодулирующим свойствами (Pinto SML, Rivera Y, Herrera Sandoval LV, Lizarazo JC, JJ, Vargas LY. Semisynthetic eugenol derivatives as antifungal agents against dermatophytes of the genus Trichophyton. J Med Microbiol. 2019).

Было доказано, что эфирное масло гвоздики обладает антиоксидантным действием за счет нейтрализации свободных радикалов при оксидативном стрессе и изменения экспрессии ферментов, подавляющих окислительный стресс в клетках. Повышенная экспрессия генов глутатионпероксидазы 1 (gpx1), каталазы (cat), цинкзависимой супероксиддисмутазы (sod2), глутатионредуктазы (gr) и глутатион S-трансферазы 3 (gst3) позволяют снизить уровень окислительного стресса. Повышенный уровень белков теплового шока 70 (HSP70) свидетельствует о выраженности воспаления и ответной реакции организма в сохранении структуры и свойств внутриклеточных белков (Teles М, Oliveira М, Jerez-Сера I, L, Tvarijonaviciute A, Tort L, Mancera JM. Transport and recovery of gilthead sea bream (Sparus aurata L.) sedated with clove oil and MS222: effects on oxidative stress status. Front Physiol. 2019; 10: 523).

Сущность изобретения

В первом аспекте заявленное изобретение относится к комплексу активных компонентов для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, состоящий из: CO₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina, взятых в соотношении (0,05-0,5):(0,001-0,1):(0,005-0,3) по массе.

Во втором аспекте заявленное изобретение относится к средству для ухода за зубами и/или полостью рта, которое содержит комплекс активных компонентов по изобретению в количестве от 0,1 до 0,3 мас.%.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, где фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, представляет собой бромелаин, папаин или их смесь.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать одно или несколько из: эфирное масло грейпфрута Citrus Paradisi, эфирное масло мяты Mentha Piperita, эфирное масло аниса Illicium Verum, эфирное масло базилика Ocimum Basilicum, эфирное масло гвоздики Eugenia Caryophyllus.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать лизат бактерий.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать лизат бактерий, где лизат бактерий представляет собой лизат Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus или их смесь.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать одно или несколько из: водно-глицериновый экстракт листьев подорожника Plantago Lanceolata, водно-глицериновый экстракт цветов клевера Trifolium Pratense, водно-глицериновый экстракт почек софоры японской Sophora Japonica или их смесь.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать сухой экстракт корня бадана Bergenia Crassifolia.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может дополнительно содержать ферментированный экстракт плодов граната Punica Granatum.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может представлять собой зубную пасту или ополаскиватель для полости рта.

В третьем аспекте заявленное изобретение относится к применению комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для профилактики оксидативного стресса полости рта.

В четвертом аспекте заявленное изобретение относится к применению комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для снижения воспаления пародонта у субъекта, имеющего такое воспаление.

В четвертом аспекте заявленное изобретение относится к применению комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для снижения кровоточивости десен у субъекта, подверженного этому.

Подробное описание изобретения

Аспектом заявленного изобретения является комплекс активных компонентов для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта. Полезное действие такого сочетания компонентов обусловлено содержащимися в них активными веществами. Комплекс активных компонентов по изобретению содержит или состоит из: СО₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina.

СО₂-экстракт цветов шиповника Rosa Canina (INCI: Rosa Canina (Rosehip) Fruit Extract) является коммерчески доступным продуктом, получаемым сверхкритической флюидной экстракцией диоксидом углерода.

Сухой экстракт коры магнолии Magnolia Officinalis (INCI: Magnolia Officinalis Bark Extract) является коммерчески доступным продуктом, получаемым, например, сублимационной сушкой очищенного водно-спиртового извлечения.

Согласно изобретению может быть использовано эфирное масло кожуры клементина Citrus clementina является коммерчески доступным продуктом (например, «Clementine Oil 5 fold MD» от VENTOS URL: https://www.ventos.com). В качестве альтернативы может быть использовано эфирное масло, содержащее от около 40 до около 99 мас.% лимонена, от около 1 до около 10 мас.% мирцена, от около 0,1 до около 1 мас.% альфа-пипена, от около 0,1 до около 1 мас.% линалоола. Предпочтительно, содержание лимонена составляет от около 50 до около 95 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 90 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 85 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 80 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 75 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 70 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 65 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 60 мас.%, предпочтительно от около 50 до около 55 мас.%, предпочтительно от около 40 до около 50 мас.% Предпочтительно, показатель преломления nD20 такого эфирного масла составляет от около 1,4680 до около 1,4800.

Комплекс активных компонентов по изобретению содержит или состоит из: СО₂-экстракта цветков шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina проявляет синергетическое действие, при соотношении (0,05-0,5):(0,001-0,1):(0,005-0,3) по массе. Предпочтительно, соотношение составляет (0,05-0,4):(0,005-0,1):(0,01-0,2) по массе, предпочтительно соотношение составляет (0,1-0,3):(0,01-0,1):(0,02-0,1) по массе, предпочтительно соотношение составляет (0,1-0,2):(0,01-0,05):(0,02-0,05) по массе.

Аспектом заявленного изобретения является средство для ухода за зубами и/или полостью рта, которое содержит комплекс активных компонентов по изобретению. Комплекс активных компонентов по изобретению содержит или состоит из: СО₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina, и проявляет синергетическое действие при содержании в средстве для ухода за зубами и/или полостью рта в количестве от около 0,1 до около 0,3 мас.%, предпочтительно от около 0,15 до около 0,25 мас.%, предпочтительно около 0,2 мас.% В предпочтительном варианте выполнения изобретения, когда средство для ухода за зубами и/или полостью рта представляет собой зубную пасту, комплекс по изобретению содержится в количестве от около 0,1 до около 0,3 мас.%, предпочтительно от около 0,15 до около 0,25 мас.%, предпочтительно от около 0,16 до около 0,17 мас.%, предпочтительно около 0,163 мас.% В предпочтительном варианте выполнения изобретения, когда средство для ухода за зубами и/или полостью рта представляет собой ополаскиватель, комплекс по изобретению содержится в количестве от около 0,1 до около 0,3 мас.%, предпочтительно от около 0,15 до около 0,25 мас.%, предпочтительно от около 0,22 до около 0,24 мас.%, предпочтительно около 0,23 мас.%.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, где фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, представляет собой бромелаин, папаин или их смесь. Такие ферменты являются коммерчески доступными (INCI: Bromelain, Papain) и их применение в составах средство для ухода за зубами и/или полостью рта известно (напр., Зубная паста SENSITIVE ULTRA от SPLAT, Зубная паста ЛИКВУМ-ГЕЛЬ от SPLAT).

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать одно или несколько из: эфирное масло грейпфрута, такое как Citrus Paradisi, эфирное масло мяты, такое как Mentha Piperita, эфирное масло аниса, такое как Illicium Verum, эфирное масло базилика, такое как Ocimum Basilicum, эфирное масло гвоздики, такое как Eugenia Caryophyllus. Указанные эфирные масла являются коммерчески доступными продуктами.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать лизат бактерий. Такие лизаты являются коммерчески доступными и их применение в составах средство для ухода за зубами и/или полостью рта известно (напр., Зубная паста EXTRA FRESH от SPLAT). Лизат бактерий может представлять собой лизат Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus или их смесь.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать одно или несколько из: экстракт подорожника, экстракт клевера, экстракт софоры японской или их смесь; например, экстракт листьев подорожника, экстракт цветов клевера, экстракт почек софоры японской или их смесь; например, экстракт листьев подорожника Plantago Lanceolata, экстракт цветов клевера Trifolium Pratense, экстракт почек софоры японской Sophora Japonica или их смесь; например, водно-глицериновый экстракт листьев подорожника Plantago Lanceolata, водно-глицериновый экстракт цветов клевера Trifolium Pratense, водно-глицериновый экстракт почек софоры японской Sophora Japonica или их смесь. Такие экстракты являются коммерчески доступными продуктами.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать экстракт гибискуса; например, экстракт цветов гибискуса; например, экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa; например, водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa. Такой экстракт является коммерчески доступным продуктом.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать экстракт бадана; например, экстракт корня бадана; например, экстракт корня бадана Bergenia Crassifolia; например, сухой экстракт корня бадана Bergenia Crassifolia.

Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может дополнительно содержать экстракт граната; например, экстракт плодов граната; например, экстракт плодов граната Punica Granatum; например, ферментированный экстракт плодов граната Punica Granatum.

Аспектом заявленного изобретения является зубная паста. Средство для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению может представлять собой зубную пасту, содержащую, мас.%:

CO₂-экстракт цветов шиповника Rosa Canina предпочтительно 0,1 сухой экстракт коры магнолии Magnolia Officinalis предпочтительно 0,01 эфирное масло клементина Citrus clementina предпочтительно 0,05

причем такая зубная паста может дополнительно содержать:

фермент бромелаин (0,001-0,2), предпочтительно 0,04 фермент папаин (0,003-0,03), предпочтительно 0,005 эфирное масло грейпфрута Citrus Paradisi (0,001-0,2), предпочтительно 0,001 эфирное масло мяты Mentha Piperita (0,001-0,6), предпочтительно 0,01 эфирное масло гвоздики Eugenia Caryophyllus (0,001-0,1), предпочтительно 0,04 водно-глицериновый экстракт листьев подорожника Plantago Lanceolata (0,1-1), предпочтительно 0,3 водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa (0,001-0,1), предпочтительно 0,01 смесь лизатов Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus (0,01-1), предпочтительно 0,07

Аспектом заявленного изобретения является ополаскиватель для полости рта. Средство для ухода за зубами и/или полостью рта может представлять собой ополаскиватель для полости рта, содержащий, мас.%:

СО₂-экстракт цветов шиповника Rosa Canina предпочтительно 0,2 сухой экстракт коры магнолии Magnolia Officinalis предпочтительно 0,0, эфирное масло клементина Citrus clementina предпочтительно 0,02 фермент бромелаин (0,005-0,1), предпочтительно 0,02 эфирное масло аниса Illicium Verum (0,001-0,005), предпочтительно 0,003 эфирное масло базилика Ocimum Basilicum (0,001-0,01), предпочтительно 0,002 эфирное масло гвоздики Eugenia Caryophyllus (0,001-0,01), предпочтительно 0,007 водно-глицериновый экстракт цветов клевера Trifolium Pratense (0,01-1), предпочтительно 0,2 водно-глицериновый экстракт почек софоры японской Sophora Japonica (0,01-3), предпочтительно 0,8 водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa (0,001-0,1), предпочтительно 0,01 ферментированный экстракт плодов граната Punica Granatum (0,01-1), предпочтительно 0,1 смесь лизатов Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis (0,01-1), предпочтительно 0,05

Аспектом заявленного изобретения является применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для профилактики оксидативного стресса полости рта.

Аспектом заявленного изобретения является способ профилактики оксидативного стресса полости рта, включающий местное применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению.

Аспектом заявленного изобретения является применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для снижения воспаления пародонта у субъекта, имеющего такое воспаление.

Аспектом заявленного изобретения является применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению для снижения кровоточивости десен у субъекта, подверженного этому.

Аспектом заявленного изобретения является способ снижения воспаления пародонта у субъекта, имеющего такое воспаление, включающий местное применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению.

Аспектом заявленного изобретения является способ снижения кровоточивости десен у субъекта, подверженного этому, включающий местное применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению.

Аспектом заявленного изобретения является способ профилактики воспалительных заболеваний после протезирования зубов при использовании съемных зубных протезов, включающий местное применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению.

Аспектом заявленного изобретения является способ профилактики воспалительных заболеваний после установки зубных коронок, включающий местное применение комплекса активных компонентов по изобретению или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по изобретению.

Установлено, что биологически активные вещества (БАВ), содержащиеся в компонентах заявленной композиции, неожиданно проявляют синергетическое действие с уменьшением выраженности воспаления десен и пародонта в целом, что подтверждается включенными в настоящее описание экспериментальными данными. Совместное применение в одном средстве приводит к мощному усилению противовоспалительного и антиоксидантного действия, а антибактериальный эффект на патогенную микрофлору позволяет обеспечить гомеостаз иммунной системы в полости рта. Отличительной особенностью является то, что компоненты действуют при воспалении и выше, и ниже края десны, поэтому эффективность лечения заболеваний пародонта возрастает.

Вначале БАВ необходимо проникнуть в зубодесневое соединение и остановить рост патогенных микроорганизмов. Для прекращения разрушения десны и уменьшения зоны воспаления необходимо остановить оксидативный стресс. Полисахариды из экстракта цветков шиповника быстро растворяются в слюне и проникают в десневую борозду, где поглощаются патогенными микроорганизмами. Полисахариды ингибируют фермент гликозилтрансферазу бактерий P. gingivalis, P. intermedia, S. oralis, А. actinomycetemcomitans, прерывая синтез биопленок из полисахарида декстрана вокруг области воспаления десен. Активированный фермент иммунной защиты лизоцим разрушает бактериальные колонии, обеспечивая доступ для следующих компонентов. Лигнаны магнолол и хонокиол из экстракта коры магнолии оказывают антибактериальное действие против патогенных бактерий P. gingivalis, F. nucleaticum, А. actinomycetemcomitans, P. intermedia, С. gingivalis, блокируя фермент гликозилтранеферазу. Пролонгировано высвобождаясь, лимонен, линалоол и цитраль из эфирного масла кожуры клементина блокирует активность эластазы и коллагеназы, разрушающих волокна коллагена I типа - основного белка внеклеточного матрикса.

Дополнительно, органические кислоты (лимонная, яблочная, винная) из экстракта гибискуса связывают свободные ионы кальция в десневой жидкости, препятствуя образованию поддесневого зубного камня - главного фактора развития пародонтоза. Антоцианы (дельфинидин, 3-О-самбулозид дельфинидина, дельфинидин-3-глюкозид и др.) из экстракта гибискуса и флавоноиды из экстракта цветков шиповника быстро растворяются в слюне и глубоко проникают в воспаленные участки десен, оказывая антиоксидантный эффект за счет стабилизации АФК: супероксидного анион-радикала и гидроксидного радикала . Уменьшение количества АФК приводит к прекращению перекисного окисления липидов мембран клеток, активации клеток иммунитета и разрушения сосудов местного кровотока, снижая кровоточивость, отечность десен и поступление цитокинов и провоспалительных факторов в общий кровоток. Также дельфинидин активирует дифференцировку регуляторных Т-лимфоцитов посредством выделения фактора TGF-β, который прекращает хемотаксис макрофагов и Т-лимфоцитов в зону повреждения десны. Лигнаны магнолол и хонокиол подавляют синтез провоспалительных цитокинов (TNFα, IL-1β) и метаболитов арахидоновой кислоты (простагландинов, лейкотриенов). Активные вещества эфирного масла гвоздики повышают экспрессию защитных ферментов от окислительного стресса: глутатионпероксидазы, каталазы, супероксиддисмутазы, глутатион S-трансферазы, снижая число оставшихся АФК в клетках. Совместно действуют длительно действующие флавоноиды из экстракта шиповника (гесперидин, нарингин, рутин, кверцетин) посредством торможения гиалуронидазы, поэтому повышается концентрация гиалуроновой кислоты во внеклеточном матриксе. Молекулы гиалуроновой кислоты снижают динамическую нагрузку на волокна коллагена и эластина, поэтому они быстрее восстанавливаются, увеличивая эластичность капилляров сосудов и снижая их проницаемость. Для снижения времени восстановления гидролизуемые танины (ругозин D и теллимаграндин II) из экстракта шиповника образуют плотную пленку из белков слюны, секреторного IgA и раневого экссудата за счет своего дубящего действия на воспаленных слизистых оболочках выше и ниже края десны. Образовавшаяся белковая пленка защищает клетки слизистой оболочки и нервные окончания от действия раздражающих веществ, поэтому снижается болевой порог, повышенная чувствительность зубов, отек и гиперемия слизистой. Метиловый эфир салициловой кислоты из эфирного масла гвоздики и α-бисоболол из экстракта цветков шиповника адсорбируются на поверхности белковой пленки и оказывают пролонгированное антибактериальное действие, предотвращая чрезмерное развитие патогенных микроорганизмов и повторное развитие воспаления десен.

Таким образом, комплекс растительных БАВ подавляет окислительный стресс и воспаление, предотвращает разрушение белков внеклеточного матрикса (коллагена и эластина), уменьшает количество клеток иммунной системы и выделение из них провоспалительных факторов. В ходе исследований было обнаружено и подтверждено, что компоненты обладают антиоксидантным и антибактериальным эффектами, усиливая действие друг друга для уменьшения воспаления пародонта.

Экспериментальные данные

Включенные в настоящее описание примеры не являются ограничивающими заявленное изобретение и приведены лишь с целью иллюстрации и подтверждения достижения ожидаемых технических результатов. Эти примеры являются одними из многих экспериментальных данных, полученных авторами изобретения, которые подтверждают эффективность средств, находящихся в пределах объема изобретения.

Были проведены доклинические исследования по оценке эффективности композиций по изобретению.

Пример 1

Для определения антиоксидантной активности (АОА) CO₂-экстракта цветков шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina использовался потенциометрический метод в связи с простотой осуществления в лаборатории, экспрессностью и информативностью для исследовательских целей. Растительные экстракты представлены широким кругом различных биологически активных соединений, в том числе полифенольной природы, поэтому одним из таких свойств может выступить интегральный показатель АОА, с помощью которого возможно оценить эффект от применения комбинации при оксидативном стрессе. Вещества полифенольной природы представлены простыми фенольными соединениями, оксибензойными кислотами (галловая, протокатеховая, салициловая кислоты), оксикоричные кислоты (оксикоричная, кофейная, феруловая кислоты и ее метаболит куркумин), кумарины, стильбены (ресвератрол), флавоноиды (катехины, лейкоантоцианы, антоцианы, флавононы, флавоны, флавонолы, халконы).

Оксидант/антиоксидантный баланс организма определяет окислительно-восстановительные реакции, поэтому общие принципы определения интегральной антиоксидантной активности основаны на окислительно-восстановительных реакциях и могут быть реализованы разными способами: химическими (окислительно-восстановительное титрование) и физико-химическими (электрохимические методы определения). Наиболее удобным в использовании методом является потенциометрия, так как имеет высокую чувствительность, хорошую воспроизводимость результатов, простоту выполнения (по сравнению с другими методами), учитывает антиоксидантную активность большого спектра БАВ и результат не фиксируется по изменению цвета в системе, что позволяет его использовать для определения антиоксидантной активности мутных растворов. Потенциометрия характеризуется высокой чувствительностью и экспрессностью, предел обнаружения полифенолов и флавоноидов находится на уровне 10^-9-10^-12 г, что является преимуществом при определении маленьких количеств БАВ в растительных экстрактах. Достаточно информативным для оценки антиоксидантной активности является потенциометрический метод с медиаторной системой, который адаптирован к анализу широкого круга объектов. Медиатором служит система K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆].

Определение антиоксидантной активности проводили с помощью потенциометрического метода с использованием о гексацианоферрата(III) калия в качестве модели окислителя. Использование данного комплексного соединения обосновано как с термодинамической точки зрения, так и с точки зрения получения оптимального аналитического сигнала. Потенциал измеряли после прохождения химической реакции между антиоксидантами исследуемого образца и используемым окислителем, и последующей добавки окислителя. Изменение потенциала при этом происходит в результате протекания химической реакции в растворе: nFe(III)+АО=nFe(II)+AO_Ox, где АО - антиоксидант; AO_Ox - продукт окисления антиоксиданта; n - коэффициент, соответствующий числу функциональных групп в молекуле, обеспечивающих антиоксидантные свойства соединения. В случае полифенольных соединений данными функциональными группами являются гидроксильные группы - ОН, сопряженные с ароматическим кольцом.

За счет избытка окислителя в системе после прохождения химической реакции с антиоксидантами равновесие между окисленной формой металла в комплексном соединении и образовавшейся восстановленной формой комплекса металла устанавливается быстро. После введения в раствор образца экстракта, содержащего антиоксиданты, потенциал системы можно выразить уравнением:

где E₁ - потенциал, измеренный после введения первой добавки исследуемого образца, Вольт; C_Ox - концентрация комплексного соединения, содержащего окисленную форму металла, г/л; X - концентрация экстракта в исследуемом образце, г/л.

После второй добавки окислителя и прохождения химической реакции между окисленной формой металла в комплексе и антиоксидантами, при добавлении реагента, потенциал можно выразить уравнением:

где E₂ - потенциал, измеренный после введения добавки реагента, Вольт; С'_Ox - концентрация комплексного соединения, содержащего окисленную форму металла во второй добавке, г/л.

Антиоксидантную активность рассчитывают по следующей формуле:

Так как в состав молекулы антиоксиданта может входить несколько функциональных групп с антиоксидантными свойствами, под АОА понимается эффективная эквивалентная концентрация антиоксидантов, вступивших в реакцию с K₃[Fe(CN)₆].

В качестве исследуемых образцов, были выбраны базы зубной пасты и ополаскивателя, содержащие СО₂-экстракт цветков шиповника Rosa Canina, сухой экстракт коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирное масло клементина Citrus clementina.

Масса навески базы пасты с активным ингредиентом составляли 2 г. Данный выбор массы навески был обусловлен тем, что 2 г является средним количеством пасты, которое наносится человеком на зубную щетку и используется для чистки зубов за одно применение.

Объем анализируемой базы ополаскивателя с активным ингредиентом составляла 10 мл. Данный выбор объема был обусловлен тем, что 10 мл является средним количеством ополаскивателя, которое человек использует для полоскания за одно применение.

В качестве образца сравнения была выбрана аскорбиновая кислота, известная своими антиоксидантными эффектами и широко применяемая в различных продуктах.

Титрование проводилось в электрохимической ячейке, состоящей из индикаторного платинового электрода и хлоридсеребряного электрода сравнения. Завершение реакции титрования сопровождалось резким изменением величины потенциала электрохимической ячейки.

Анализ проводился в растворе фосфатного буфера общим объемом 100 мл при рН=7,4 и при постоянном перемешивании. В буферный раствор, содержащий окислитель K₃[Fe(CN)₆] с концентрацией 5,0 г/л, вносили точную навеску анализируемого образца, после установления равновесия в системе, вводилась последующая добавка окислителя. Потенциал регистрировался при каждой добавке титранта K₃[Fe(CN)₆].

Результаты определения АОА исследуемых образцов базы зубной пасты, полученные потенциометрическими методами с использованием K₃[Fe(CN)₆] в качестве модели окислителя представлены в Таблице №1.

По данным Таблицы 1 можно сделать вывод, что антиоксидантная активность суммы БАВ в составе базы выше теоретически рассчитанной суммарной антиоксидантной активности отдельных активных веществ. Антиоксидантная активность каждого из компонентов превышает активность аскорбиновой кислоты на несколько порядков, учитывая разницу в концентрациях веществ в растворе электрохимической ячейки.

Результаты определения АОА исследуемых образцов базы ополаскивателя, полученные потенциометрическими методами с использованием K₃[Fe(CN)₆] в качестве модели окислителя представлены в Таблице №2.

По данным Таблицы 2 можно сделать вывод, что антиоксидантная активность суммы БАВ в составе базы выше теоретически рассчитанной суммарной антиоксидантной активности отдельных активных веществ. Антиоксидантная активность каждого из компонентов превышает активность аскорбиновой кислоты на несколько порядков, учитывая разницу в концентрациях веществ в растворе электрохимической ячейки.

Следовательно, для определения АОА как интегрального показателя на объектах со сложной матрицей можно использовать потенциометрический метод с окисленной формой металла.

Пример 2

В экспериментальных группах пациенты использовали заявленный комплекс из растительных экстрактов и эфирных масел в составе зубной пасты и ополаскивателя, и оценивалась эффективность комплекса с помощью различных индексов. Общим показателем является индекс гигиены полости рта, поскольку неправильная чистка зубов способствует кариесу и выраженному воспалительному процессу десен.

В качестве базы №1 для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице №3, а в качестве базы №2 - ополаскиватель для полости рта с составом, приведенным в Таблице №4.

Для определения очищающего эффекта зубной пасты, содержащей комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 37 субъектах. Пациенты на 1 визите проводили чистку зубов в течение 2 минут, до чистки и после измерялся индекс гигиены. Далее пациенты применяли композицию в виде зубной пасты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Для определения очищающего эффекта ополаскивателя, содержащего комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 40 субъектах. Для оценки эффекта ополаскивателя группа пациентов использовала ополаскиватель. Пациенты в течение 1 визита использовали ополаскиватель в течение 30 секунд, до и после измерялся индекс гигиены. Далее пациенты применяли продукт 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Параметром для общей оценки эффективности удаления зубного налета композицией выступал индекс гигиены (индекс Грина-Вермиллиона), определяемый врачом-стоматологом при визите пациентов. Общая положительная тенденция - бережное очищение зубов от зубного налета.

Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM). Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в различные моменты времени определяли с использованием теста ANOVA для зависимых выборок. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты.

Через 4 недели после начала исследования наблюдались выраженные изменения оцениваемого показателя. После чистки зубов зубной пасты в течение 1 визита значение индекса гигиены полости рта составило 0,73±0,36 и улучшилось по сравнению с начальным показателем 1,02±0,49 на 27,96%. По окончании исследования значение индекса составило 0,28±0,12. Таким образом, после 4 недель использования зубной пасты у 50% пациентов гигиена полости рта улучшилась на 85%, а у оставшихся 50% пациентов - на 60%, что свидетельствует об выраженных очищающих свойствах исследуемой зубной пасты. Учитывая тот факт, что пациенты на входе демонстрировали хороший уровень гигиены полости рта на входе, наблюдаемый эффект при большей выраженности гингивита будет более заметным, а индекс гигиены полости рта значительно ниже.

У пациентов в случае применения ополаскивателя во 2 визит значение индекса гигиены полости рта составило 0,72±0,32 и улучшилось на 73,62% по сравнению с начальным показателем 2,71±0,47. По окончании исследования значение индекса составило 0,41±0,53. Таким образом, после 4 недель использования гигиена полости рта улучшалась на 85,06%, что свидетельствует о выраженных очищающих свойствах исследуемого ополаскивателя. Таким образом, после 4 недель использования ополаскивателя у 80% пациентов гигиена полости рта улучшилась на 97%, а у оставшихся 20% пациентов - на 80%, что свидетельствует о выраженных очищающих свойствах ополаскивателя (Таблица №5).

Применение пасты и ополаскивателя с заявленным комплексом привело к эффективному очищению зубной эмали, что свидетельствует об удалении большей части зубного налета, являющегося причинным фактором развития воспаления десен и полости рта в целом.

Поскольку композиции имели в составе экстракт цветков шиповника, содержащий водорастворимые полисахариды, и экстракт коры магнолии, содержащий лигнаны магнолол и хонокиол, с синергетическим антибактериальным действием за счет блокирования фермента гликозилтрансферазы, то при длительном применении снижалось количество патогенных микроорганизмов в ротовой полости. База композиции очищала мягкий налет и увеличивала доступ БАВ в труднодоступные зубодесневые соединения, тем самым увеличивая эффективность БАВ против патогенных бактерий P. gingivalis, F. nucleaticum, A. actinomycetemcomitans, P. intermedia, С. gingivalis. Ингибирование фермента гликозилтрансферазы снижало количество образуемого бактериями налета, тем самым повышая очищающий эффект композиции и влияя на противовоспалительный эффект при длительном применении.

Пример 3

В экспериментальных группах пациенты использовали заявленный комплекс из растительных экстрактов и эфирных масел в составе зубной пасты и ополаскивателя, и оценивалась эффективность композиций с помощью индекса РМА. Поскольку гингивит и пародонтит являются воспалительными заболеваниями десен и зубодесневого соединения, то уменьшение воспаления будет способствовать снижению выраженности болевого синдрома и улучшению качества жизни пациента в целом.

В качестве базы №1 для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице №3, а в качестве базы №2 - ополаскиватель для полости рта с составом, приведенным в Таблице №4.

Для определения противовоспалительного эффекта зубной пасты, содержащей комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 37 субъектах. У пациентов в течение 1 визита измерялся индекс РМА. Далее пациенты применяли композицию в виде зубной пасты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Для определения противовоспалительного эффекта ополаскивателя, содержащего комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 40 субъектах. Пациенты использовали ополаскиватель. У пациентов в течение 1 визита измерялся индекс РМА. Далее пациенты применяли продукт 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Параметром для оценки противовоспалительного действия композиции выступал индекс РМА, определяемый врачом-стоматологом при визите пациентов. Общая положительная тенденция - снижение воспаления десен.

Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM). Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в различные моменты времени определяли с использованием теста ANOVA для зависимых выборок. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты.

Через 4 недели после начала исследования наблюдались выраженные изменения оцениваемого показателя. После чистки зубов пастой в течение первых 14 дней значение индекса РМА составило 22,26±9,57, что меньше на 32,27% по сравнению с начальным показателем 33,46±8,91. По окончании исследования значение индекса составило 2,28±4,52. Таким образом, после 4 недель использования воспаление десен снизилось на 94,73%, что свидетельствует о выраженном противовоспалительном эффекте композиции.

В случае применения ополаскивателя в течение 2 визита значение индекса РМА составило 25,37±6,36 и улучшилось на 41,32% по сравнению с начальным показателем 43,23±6,25. По окончании исследования значение индекса составило 13,05±8,20. Таким образом, после 4 недель использования воспаление десен снизилось на 69,81%, что свидетельствует об умеренном противовоспалительном действии исследуемого ополаскивателя (Таблица №6).

Применение пасты и ополаскивателя с заявленным комплексом привело к эффективному снижению выраженности воспаления, что свидетельствует о противовоспалительном действии при таких заболеваниях полости рта, как гингивит и пародонтит.

База композиций очищала мягкий налет и увеличивала доступ БАВ в труднодоступные зубодесневые соединения, тем самым повышала эффективность БАВ. Поскольку композиции имели в составе целый комплекс БАВ: экстракт цветков шиповника, содержащий полифенольные соединения; экстракт коры магнолии, содержащий лигнаны магнолол и хонокиол; эфирное масло клементина, содержщее терпеноиды, флавоноиды, повышают экспрессию защитных ферментов глутатионпероксидазы, каталазы, супероксидисмутазы, глутатион S-трасферазы при окислительном стрессе, способствуя пролонгированному восстановлению окислительно-восстановительного баланса в тканях десен. Снижение выраженности воспаления способствует уменьшению чувствительности зубов, их кровоточивости и улучшения качества жизни пациентов в целом.

Пример 4

В экспериментальных группах пациенты использовали заявленный комплекс из растительных экстрактов и эфирных масел в составе зубной пасты и ополаскивателя, и оценивалась эффективность композиций с помощью индекса кровоточивости SBI по Muhlemann и Son. Поскольку гингивит и пародонтит являются воспалительными заболеваниями десен с видимой кровоточивостью, то снижение кровоточивости десен будет способствовать прекращению воспаления и улучшению качества жизни пациента в целом.

В качестве базы №1 для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице №3, а в качестве базы №2 - ополаскиватель для полости рта с составом, приведенным в Таблице №4.

Для определения эффекта зубной пасты, содержащей комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 37 субъектах. У пациентов на 1 визите измерялся индекс кровоточивости SBI по Muhlemann и Son. Далее пациенты применяли композицию в виде зубной пасты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Для определения эффекта ополаскивателя, содержащего комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 40 субъектах. У пациентов в течение 1 визита измерялся индекс кровоточивости SBI по Muhlemann и Son. Далее пациенты применяли продукт 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Параметром для оценки кровоостанавливающего и в целом противовоспалительного действия композиции выступал индекс кровоточивости десен SBI по Muhlemann и Son, определяемый врачом-стоматологом при визите пациентов. Общая положительная тенденция - снижение кровоточивости десен.

Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM). Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в различные моменты времени определяли с использованием теста ANOVA для зависимых выборок. Различия считали достоверными при уровне значимости p<0,05.

Результаты

Через 4 недели после начала исследования наблюдали выраженные изменения оцениваемого показателя. После чистки зубов пастой в течение первых 14 дней значение индекса SBI составило 0,38±0,49, что меньше на 36,36% по сравнению с начальным показателем 33,46±8,91. По окончании исследования значение индекса составило 0,00±0,00. Таким образом, после 4 недель использования кровоточивость десен полностью исчезла, то есть снизилась на 100,00%, что свидетельствует о существенном кровоостанавливающем действии исследуемой зубной пасты.

В случае применения ополаскивателя во 2 визит значение индекса SBI составило 1,35±0,49 и улучшилось на 56,45% по сравнению с начальным показателем 3,10±0,85. По окончании исследования значение индекса составило 0,24±0,43. Таким образом, после 4 недель использования кровоточивость десен снизилась на 92,26%, что свидетельствует о существенном кровоостанавливающем действии исследуемого ополаскивателя (Таблица №7).

Применение пасты и ополаскивателя с заявленным комплексом привело к эффективному снижению кровоточивости, что свидетельствует о кровоостанавливающем действии при воспалительных заболеваниях полости рта, например, гингивите и пародонтите.

База композиций очищала мягкий налет и увеличивала доступ БАВ в труднодоступные зубодесневые соединения, тем самым повышала эффективность БАВ. Поскольку композиции имеют в составе целый комплекс БАВ с синергетическим противовоспалительным действием за счет стабилизации и нейтрализации АФК (супероксидного анион-радикала и гидроксидного радикала ) при оксидативном стрессе, то при длительном применении снижалась степень воспаления полости рта.

Одним из проявлений воспаления десен является их кровоточивость, поэтому для снижения выраженности воспаления необходимо применять композиции с кровоостанавливающим эффектом. Длительно действующие и высокоактивные флавоноиды экстракта шиповника (гесперидин, нарингин, рутин, кверцетин) снижают активность гиалуронидазы в месте воспаления, способствуя восстановлению молекул гиалуроновой кислоты в тканях десен. Лимонен из эфирного масла кожуры клементина блокирует активность коллагеназы и эластазы, разрушающих волокна коллагена I типа и эластина, связывающего коллаген в матрикс. Молекулы гиалуроновой кислоты снижают динамическую нагрузку на волокна внеклеточного матрикса, способствуя восстановлению коллагена в медии кровеносных сосудов и эластичности капилляров сосудов в десне. Гидролизуемые танины из экстракта шиповника обеспечивают пролонгированный кровоостанавливающий и в целом противовоспалительный эффект посредством образования плотной защитной пленку из белков слюны, секреторного IgA и раневого экссудата выше и ниже края десны. Образовавшаяся пленка препятствует действию патогенных микроорганизмов, создает условия для восстановления сосудов и воспаленной ткани, снижает отек и эрозию эпителия десны.

Пример 5

В экспериментальных группах пациенты использовали заявленный комплекс из растительных экстрактов и эфирных масел в составе зубной пасты и ополаскивателя, и оценивалась эффективность композиции с помощью индекса интенсивности гиперестезии зубов (по Шториной). Поскольку гингивит и пародонтит являются воспалительными заболеваниями десен с повышенной болевой чувствительностью на различные раздражители (температурные, химические, тактильные), то снижение чувствительности десен будет способствовать улучшению течения воспалительных заболеваний полости рта и качества жизни пациента в целом. Общая положительная тенденция - снижение чувствительности воспаленных десен и зубов.

В качестве базы №1 для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице №3, а в качестве базы №2 - ополаскиватель для полости рта с составом, приведенным в Таблице №4.

Для определения эффекта зубной пасты, содержащей комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 37 субъектах. Пациенты на 1 визите проводили чистку зубов в течение 2 минут, до чистки и после измерялся индекс интенсивности гиперестезии зубов. Далее пациенты применяли композицию в виде зубной пасты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Для определения эффекта ополаскивателя, содержащего комплекс экстрактов и эфирных масел, проведено одноцентровое проспективное нерандомизированное исследование на 40 субъектах. Пациенты в течение 1 визита использовали ополаскиватель в течение 30 секунд, до и после измерялся индекс интенсивности гиперестезии зубов. Далее пациенты применяли продукт/продукты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, на протяжении 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования.

Параметром для десенситивного действия композиции выступал индекс интенсивности гиперестезии зубов, определяемый врачом-стоматологом при визите пациентов. Общая положительная тенденция - снижение повышенной чувствительности зубов и десен.

Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM). Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в различные моменты времени определяли с использованием теста ANOVA для зависимых выборок. Различия считали достоверными при уровне значимости p<0,05.

Результаты.

Оценка распространенности гиперчувствительности зубов по индексу Шториной (ИИГЗ) выявила, что исследуемый продукт снижает чувствительность зубов уже после первого использования. После чистки зубов композицией в 1 визит значение индекса гигиены полости рта составило 2,22±1,75 и улучшилось по сравнению с начальным показателем 2,53±1,66. При 2 визите к врачу-стоматологу было выявлено, что общая чувствительность снизилась на 23,55%. По окончании исследования значение индекса составило 0,45±0,23. Таким образом, после 4 недель использования зубной пасты у 70% пациентов чувствительность зубов снизилась на 92%, а у оставшихся 30% пациентов - на 60%, что свидетельствует о выраженном десенситивном действии исследуемого продукта. Снижение чувствительности зубов является долговременным процессом вследствие продолжительной реминерализации эмали и длительного проникновения активных веществ в дентиновые канальцы зуба.

В случае применения ополаскивателя во 2 визит значение индекса Шториной составило 0,05±0,22 и улучшилось на 92,31% по сравнению с начальным показателем 0,65±0,14. Далее в ходе клинического исследования индекс интенсивности гиперестезии зубов оставался постоянным, т.е. чувствительность зубов снизилась до нормального уровня. По окончании исследования значение индекса составило 0,05±0,22. Таким образом, после 4 недель использования ополаскивателя у 95% пациентов чувствительность зубов снизилась на 100%, а у оставшихся 5% пациентов - на 80%, что свидетельствует о выраженном десенситивном действии исследуемого ополаскивателя. Высокое значение показателя для оценки десенситивного действия можно объяснить большей проникающей способностью ополаскивателя в труднодоступные, воспаленные места (Таблица №8).

Применение пасты и ополаскивателя с заявленным комплексом привело к эффективному снижению чувствительности зубов, что свидетельствует о противовоспалительном действии при таких заболеваниях полости рта, как гингивит и пародонтит. Продукты снижали чувствительность зубов до нормальной.

База композиций очищала мягкий налет и увеличивала доступ БАВ в труднодоступные зубодесневые соединения, тем самым повышала эффективность БАВ. Поскольку композиции имеют в составе целый комплекс БАВ с синергетическим противовоспалительным действием за счет стабилизации и нейтрализации АФК (супероксидного анион-радикала и гидроксидного радикала ) при оксидативном стрессе, то при длительном применении снижалась степень воспаления полости рта.

Одним из проявлений воспаления десен является их повышенная чувствительность на различные раздражители, поэтому для снижения выраженности воспаления необходимо применять композиции с десенситивным эффектом. Длительно действующие и высокоактивные флавоноиды и полисахариды экстракта шиповника (гесперидин, нарингин, рутин, кверцетин) обладают антиоксидантным и противовоспалительным действием в тканях десен. Лигнаны магнолол и хонокиол подавляют синтез противовоспалительных цитокинов (TNFα, IL-1β) и эйкозаноидов (простагландины PgE₂, PgF₂, лейкотриены LTC₄, LTB₄), обладающих способностью повышать активность болевых С-волокон и снижать их порог активации на действующие раздражители. Гидролизуемые танины из экстракта шиповника обеспечивают пролонгированный противовоспалительный эффект посредством образования плотной защитной пленку из белков слюны, секреторного IgA и раневого экссудата выше и ниже края десны. Образовавшаяся пленка препятствует действию патогенных микроорганизмов, создает условия для восстановления сосудов и воспаленной ткани, снижает отек и эрозию эпителия десны. Данная белковая пленка также защищает клетки слизистой оболочки и нервные окончания от действия раздражающих веществ, поэтому снижается болевой порог и повышенная чувствительность зубов.

Группа изобретений относится к комплексу активных компонентов для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, состоящему из CO₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina, взятых в соотношении (0,05-0,5):(0,001-0,1):(0,005-0,3) по массе, средству для ухода за зубами и/или полостью рта на его основе и их применению. Предлагаемое средство содержит указанный выше комплекс активных компонентов в количестве 0,1-0,3 мас.%. Средство может дополнительно содержать: фермент (бромелаин, папаин или их смесь); одно или несколько из эфирного масла грейпфрута Citrus Paradisi, эфирного масла мяты Mentha Piperita, эфирного масла аниса Illicium Verum, эфирного масла базилика Ocimum Basilicum, эфирного масла гвоздики Eugenia Caryophyllus; лизат бактерий (лизат Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus или их смесь); одно или несколько из водно-глицеринового экстракта листьев подорожника Plantago Lanceolata, водно-глицеринового экстракта цветов клевера Trifolium Pratense, водно-глицеринового экстракта почек софоры японской Sophora Japonica или их смесь: водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa; сухой экстракт корня бадана Bergenia Crassifolia; ферментированный экстракт плодов граната Punica Granatum. Средство может представлять собой зубную пасту или ополаскиватель для полости рта. Предлагается применение указанного выше комплекса активных компонентов или средства на его основе для профилактики оксидативного стресса полости рта, для снижения воспаления пародонта у субъекта, имеющего такое воспаление, а также для снижения кровоточивости десен у субъекта, подверженного этому. Компоненты комплекса обладают антиоксидантным и антибактериальным эффектами, усиливая действие друг друга для уменьшения воспаления пародонта. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 8 табл., 5 пр.

1. Комплекс активных компонентов для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, состоящий из: CO₂-экстракта цветов шиповника Rosa Canina, сухого экстракта коры магнолии Magnolia Officinalis и эфирного масла кожуры клементина Citrus clementina, взятых в соотношении (0,05-0,5):(0,001-0,1):(0,005-0,3) по массе.

2. Средство для ухода за зубами и/или полостью рта, содержащее комплекс активных компонентов по п. 1 в количестве от 0,1 до 0,3 мас.%.

3. Средство по п. 2, дополнительно содержащее фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта.

4. Средство по п. 3, где фермент, пригодный для применения в средствах для ухода за зубами и/или полостью рта, представляет собой бромелаин, папаин или их смесь.

5. Средство по п. 2, дополнительно содержащее одно или несколько из: эфирное масло грейпфрута Citrus Paradisi, эфирное масло мяты Mentha Piperita, эфирное масло аниса Illicium Verum, эфирное масло базилика Ocimum Basilicum, эфирное масло гвоздики Eugenia Caryophyllus.

6. Средство по п. 2, дополнительно содержащее лизат бактерий.

7. Средство по п. 6, где лизат бактерий представляет собой лизат Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus или их смесь.

8. Средство по п. 2, дополнительно содержащее одно или несколько из: водно-глицериновый экстракт листьев подорожника Plantago Lanceolata, водно-глицериновый экстракт цветов клевера Trifolium Pratense, водно-глицериновый экстракт почек софоры японской Sophora Japonica или их смесь.

9. Средство по п. 2, дополнительно содержащее водный экстракт цветов гибискуса Hibiscus Sabdariffa.

10. Средство по п. 2, дополнительно содержащее сухой экстракт корня бадана Bergenia Crassifolia.

11. Средство по п. 2, дополнительно содержащее ферментированный экстракт плодов граната Punica Granatum.

12. Средство по п. 2, представляющее собой зубную пасту или ополаскиватель для полости рта.

13. Применение комплекса активных компонентов по п. 1 или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по любому из пп. 2-12 для профилактики оксидативного стресса полости рта.

14. Применение комплекса активных компонентов по п. 1 или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по любому из пп. 2-12 для снижения воспаления пародонта у субъекта, имеющего такое воспаление.

15. Применение комплекса активных компонентов по п. 1 или средства для ухода за зубами и/или полостью рта по любому из пп. 2-12 для снижения кровоточивости десен у субъекта, подверженного этому.