Способ диагностики нейропатии малых волокон у больных саркоидозом Российский патент 2021 года по МПК G01N33/53 A61B5/00 

Описание патента на изобретение RU2751700C2

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, пульмонологии, и может быть использовано для выявления нейропатии малых волокон у больных саркоидозом.

У пациентов с саркоидозом органов дыхания наблюдается развитие системных полиорганных нарушений, значительно снижающих качество жизни и ухудшающих прогнозы заболевания. Одним из наиболее важных из них является поражение нервной системы с вовлечением нервных волокон наименьшего диаметра, что носит название нейропатии малых волокон (НМВ) [1-4]. Данное осложнение может проявляться в виде нейропатических болей и парестезий, а также в виде нарушения вегетативной регуляции внутренних органов, что имеет разнообразные клинические проявления и может затруднять постановку диагноза [5, 6].

В настоящий момент в медицинском сообществе отсутствуют общепринятые критерии диагностики НМВ. Представление о наличии у больного поражения малых нервных волокон формируется преимущественно на основании клинических критериев, таких как данные неврологического осмотра и опроса пациента по валидизированным шкалам (например, Small fiber neuropathy screening list) [7, 8]. Дополнительно может быть проведена электронейромиография для исключения поражения крупных нервных стволов, при этом диагностика непосредственно НМВ при проведении рутинного электрофизиологического исследования не представляется возможной. «Золотым стандартом» постановки диагноза является проведение иммунофлюоресцентного или иммуногистохимического анализа биоптата кожи с подсчетом плотности интраэпидермальных нервных волокон, однако данная методика требует специального обучения персонала, оборудования, существенных экономических и временных затрат [9, 10]. У больных с саркоидозом легких гистологические исследования плотности малых нервных волокон носят противоречивый характер, зачастую не проводится корреляция морфологических результатов с клинической составляющей, а также оценка наличия и выраженности аутоиммунного компонента заболевания.

Известна работа - Способ диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией (патент РФ 2575835), характеризующийся проведением биопсии кожи, иммуногистохимического анализа и подсчета интраэпидермальной плотности нервных волокон. Однако иммуногистохимический метод является дорогостоящим и трудоемким методом. Кроме того, в данной работе авторы проводят диагностический комплекс без оценки неврологической симптоматики, что предполагает проведение данного исследования всем больным.

Задачей предлагаемого изобретения является диагностика нейропатии малых волокон у больных саркоидозом.

Задача решается за счет того, что проводят оценку выраженности неврологических симптомов у пациентов по количеству баллов, при их значении равном 2 и более баллов осуществляют биопсию кожи латеральной поверхности голени с дальнейшим выполнением иммунофлюоресцентного исследования биоптата и при плотности нервных волокон ниже 4,4 IENF/mm диагностируют нейропатию малых волокон.

Предлагаемый способ иллюстрирован примером реализации способа, где фиг. - пример окрашивания антителом PGP 9.5 нервных окончаний у пациента с саркоидозом, иммунофлюоресцентный анализ биоптата кожи.

Способ осуществляется следующим образом.

Этап I. Оценка очаговой неврологической симптоматики.

У пациентов проводится оценка двигательной и чувствительной сферы с анализом тонуса и силы основных групп мышц, оценка поверхностных и глубоких рефлексов; оценка болевой, температурной, тактильной, вибрационной чувствительности, суставно-мышечного чувства, чувства давления и веса, кинестезии кожи.

Для изолированной НМВ у пациента должны отсутствовать признаки поражения крупных нервных волокон (например, двигательные нарушения, тремор, изменение глубокой чувствительности).

Каждому из симптомов присваивается от 0 до 4 баллов, оценивающих как частоту развития симптомов, так и их интенсивность. Наличие неврологической симптоматики с выраженностью более 2 баллов является показанием на проведения биопсии кожи.

Этап II. Осуществление биопсии кожи.

Пункционная биопсия кожи (диаметром 3 мм) выполняется на коже голени (10 см проксимальнее латеральной лодыжки). Манипуляция проводится с той стороны тела, где проявляются более выраженные клинические симптомы.

Техника проведения биопсии кожи:

1) обезболивание кожи с применением 1% лидокаина;

2) обработка кожи спиртовым раствором хлоргексидина 0.5%;

3) взятие 3-4 мм пунктата кожи при помощи иглы для биопсии;

4) отсекание биоптата при помощи скальпеля;

5) помещение пунктата в 0.5 мл раствора Замбони в эппендорфе (4% параформальдегид и пикриновая кислота) 6) закрытие раны, наложение повязки.

Этап III. Проведение гистологического исследования с применением иммунофлюоресцентного анализа.

Окрашивание малых волокон производится с помощью антител к продукту белка гена 9.5 (protein gene product 9.5, PGP 9.5), являющегося нейрональной формой убиквитиновой карбоксил-терминальной гидроксилазы, транспортируемой медленным компонентом аксонального транспорта. Специфичность и чувствительность метода варьируются от 88 до 92%.

После фиксации биоптата в растворе Замбони на 10 минут производится его трехкратная отмывка раствором TBS (tris-buffered saline) с последующим погружением в 15% раствор сахарозы. Замораживание биоптата производится в жидком азоте с последующим проведением криотомии с толщиной среза 40-50 мкм. Далее - внесение срезов в лунки 24-луночного планшета для клеточных культур с вставленными в них колодцами для клеточных культур, заполненные антифризом. Осуществляется Трехкратная отмывка раствором TBS с интервалом 10 минут. Срезы инкубируются в блокирующем растворе 4 часа при комнатной температуре. Затем производится инкубация в растворе первичных антител (анти-PGP 9.5 в разведении 1:300) в течение 12 часов в холодильнике. После трехкратной отмывки раствора TBS с интервалом в 10 минут - инкубация в растворе вторичных антител (AlexaFluor Goat-anti Rb в разведении 1:200) в течение 4 часов в темноте. Затем вновь осуществляется трехкратная отмывка раствором TBS с интервалом в 10 минут, после чего срезы помещаются на стекло с последующим нанесением покровного стекла. Хранение препаратов осуществляется при температуре +4 градуса.

Этап IV. Оценка результатов биопсии и постановка диагноза

Наличие плотности волокон ниже 4,4 IENF/mm (intraepidermal nerve fibers/mm, количество внутриэпидермальных нервных волокон в миллиметре) свидетельствует о повреждении волокон, что требует назначения соответствующего лечения или коррекции терапии.

Предлагаемый способ отвечает критерию изобретения «новизна» и «изобретательский уровень», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников научно-технической и патентной литературы, которые бы порочили новизну предлагаемого изобретения, равно как и технических решений с существенными признаками предлагаемого способа.

Техническим результатом предлагаемого способа является то, что он позволяет с высокой точностью осуществлять диагностику нейропатии тонких волокон у больных с гранулематозными заболеваниями легких. Предлагаемым способом на базе ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии» Минздрава РФ и СПб ГБУЗ «Городская многопрофильная больница №2». В исследование было включено 98 больных, страдающих саркоидозом легких и здоровых добровольцев. Среди них было 42 мужчин и 56 женщин, средний возраст которых составил 38,4±7,2 года. Первую группу составили больные с саркоидозом легких (n=25, средний возраст 33,4±8,5 лет), во вторую группу вошли здоровые добровольцы (n=73, средний возраст 55,8±13,9 лет). Статистически значимых различий по полу и возрасту среди пациентов не отмечалось.

Все пациенты прошли комплекс обследования, включавший клиническую оценку заболевания, мультиспиральную компьютерную томографию (МСКТ) органов грудной клетки, лабораторные исследования крови, стандартный комплекс обследования на туберкулез, гистологическую верификацию изменений в легких и внутригрудных лимфатических узлах по показаниям (с применением чрезбронхиальной и видеоторакоскопической биопсии).

Пациентам был проведен сбор анамнеза для исключения иных причин НМВ, неврологическое обследование с оценкой поверхностной и глубокой чувствительности, мышечной силы и мышечно-тонических рефлексов. Для оценки выраженности клинической симптоматики был применен опросник с оценкой частоты и интенсивности симп томов от 0 до 4 баллов.

Гистологическое исследование проводилось при наличии неврологических симптомов и с забором биопсии кожи голени (диаметром 3 мм) 10 см проксимальнее латеральной лодыжки) с последующим проведением иммунофлюоресцентого исследования. Манипуляция проводится с той стороны тела, где проявлялись более выраженные клинические симптомы.

С целью подготовки материала для иммунофлюоресцентного исследования, проводилось окрашивание малых волокон с помощью антител к продукту белка гена 9.5 (protein gene product 9.5, PGP 9.5), являющегося нейрональной формой убиквитиновой карбоксил-терминальной гидроксилазы, транспортируемой медленным компонентом аксонального транспорта. Специфичность и чувствительность метода варьируются от 88 до 92%.

Плотность нервных волокон, а также общее морфологическое строение кожного среза, плотность субэпидермальных сплетений и иннервация потовых желез проводилась с учетом возраста пациентов. Наличие в диагностическом материале плотности нервных волокон у пациентов ниже 4,4 IENF/mm свидетельствовало о повреждении волокон малого диаметра.

При тестировании больных средний балл у пациентов с саркоидозом составил 2.0 (0.0;7.0), у здоровых добровольцев - 0 (0;0) баллов (Табл. 1).

При сравнении показателей с помощью U-критерия Манна-Уитни, были выявлены различия в результатах пациентом с саркоидозом и здоровых добровольцев (р<0.0001).

Основным клиническим симптомам НМВ, были: боль и изменение температуры тела и конечностей, нарушение моторики желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы, ощущение перебоев и остановок в работе сердца. Балльная оценка выраженности симптомов представлена в таблице 2.

17 больным с клинической неврологической симптоматикой проведена биопсия кожи. В результате их исследования снижение плотности малых нервных волокон было выявлено у 6 (35.3%) пациентов, у которых обнаружена положительная корреляция между плотностью малых нервных волокон ниже 4,4 IENF/mm и выраженностью неврологической симптоматики от 2 и более баллов (коэффициент корреляции Спирмена, р=0,04, r=0,375, CI от -0,1365 до 0,8234).

Примеры конкретного использования предлагаемого способа.

Клинический пример 1.

Пациентка Б., 28 лет. Саркоидоз легких впервые диагностирован по результатам комплексного обследования: проба Манту с 2 ТЕ - р 3 мм; проба с диаскинтестом - отрицательная; рентгенологически определялись увеличенные внутригрудные лимфатические узлы до 13 см обычной структуры и плотности, а также множественные очаги в правом и левом легком.

По данным гистологического исследования легочной ткани имели место гранулемы без признаков казеозного некроза. Гормональную терапию пациентка не получала. По данным неврологического осмотра у пациентки определялось резкое покраснение лица (4 балла), размытость зрения (2 балла), жжение в нижних отделах голени (3 балла). При оценке гистологического материала биопсии кожи плотность волокон составляла 4,2 IENF/mm, что ниже диагностического значения. Был поставлен диагноз «нейропатии малых волокон», что потребовано назначения симптоматической терапии и дальнейшего наблюдения невролога.

Клинический пример 2.

Пациент Б., 35 лет. Саркоидоз легких диагностирован впервые по данным комплексного обследования: проба Манту с 2 ТЕ - р 4 мм; проба с Диаскинтестом - отрицательная; рентгенологически определялись увеличение внутригрудных лимфоузлов и очаговые изменения правого легкого. По данным гистологического исследования легочной ткани имели место гранулемы без признаков казеозного некроза. По данным неврологического осмотра у пациента определялось покалывание (1 балл) преимущественно в дистальных отделах верхних конечностей с лучевой стороны и по задней поверхности нижних конечностей, преимущественно справа, изменение цвета кожных покровов рук (1 балл).

При оценке гистологического материала биопсии кожи плотность волокон составляла 11,5 IENF/mm, что выше диагностического значения и не свидетельствовало о наличии нейропатии малых волокон.

Клиническая симптоматики явилась проявлением остеохондроза, осложненного грыжеобразованием, что нашло подтверждение при проведении магнитно-резонансной томографии позвоночника.

Источники информации.

1. Abdelrazek М.А.. Chwalisz В., Oaklander A.L., Venna N. Evidence of small-fiber neuropathy (SFN) in two patients with unexplained genital sensory loss and sensory urinary cystopathy. J Neurol Sci. 2017; (380): 82-84.

2. Birnbaum J., Bingham C.O. Non-length-dependent and length-dependent small-fiber neuropathies associated with tumor necrosis factor (TNF) inhibitor therapy in patients with rheumatoid arthritis: Expanding the spectrum of neurological disease associated with TNF-inhibitors. Semin Arthritis Rheum. 2014; 43(5): 638-647.

3. Blackmore D., Siddiqi Z.A. Diagnostic Criteria for Small Fiber Neuropathy. J Clin Neuromuscul Dis. 2017; 18(3): 125-131.

4. Brouwer B.A., Bakkers M., Hoeijmakers J.G.J., Faber C.J., Merkies I.S.J. Improving assessment in small fiber neuropathy. Journal of the Peripheral Nervous System. 2015; (20): 333-340.

5. Gibbons C.H. Small Fiber Neuropathies. Continuum (Minneap Minn). 2014; 20(5): 1398-1412.

6. Hoitsma E., de Vries J., Drent M. The small fiber neuropathy screening list: construction and cross-validation in sarcoidosis. Respiratory medicine. 2010; (105): 95-100.

7. Lauria G., Bakkers M., Schmitz C., Lombardi R., Penza P., Devigili G., Smith A.G., Hsieh S-T, Mellgren S.I., Umapathi Т., Ziegler D., Faber C.G., Merkies I.S.J. Intraepidermal nerve fiber density at the distal leg: a worldwide normative reference study. Journal of the Perif Nerv Syst. 2010; (15): 202-207.

8. Lauria G. Lombardi R, Camozzi F, Devigili G. Skin biopsy for the diagnosis of peripheral neuropathy. Histopathology. 2009; (54): 273-285.

9. Oaklander A.L. Immunotherapy Prospects for Painful Small-fiber Sensory Neuropathies and Ganglionopathies. Neurotherapeutics. 2016; (13):108-111.

10. Sene D. Small fiber neuropathy: diagnosis, causes and treatment. Joint Bone Spine. 2018; 85(5): 553-559.

Похожие патенты RU2751700C2

название год авторы номер документа
Способ диагностики ранних неврологических нарушений у пациентов с сахарным диабетом 1 типа 2021
  • Гаврилова Наталия Юрьевна
  • Бреговская Анна Вадимовна
  • Сопрун Лидия Александровна
  • Лукашенко Мария Владиславовна
  • Чурилов Леонид Павлович
  • Федоткина Тамара Викторовна
  • Пчелин Иван Юрьевич
RU2808480C2
Способ раннего выявления неврологических нарушений у пациентов, перенесших COVID-19 2021
  • Гаврилова Наталия Юрьевна
  • Бреговская Анна Вадимовна
  • Сопрун Лидия Александровна
  • Лукашенко Мария Владиславовна
  • Чурилов Леонид Павлович
  • Федоткина Тамара Викторовна
  • Пчелин Иван Юрьевич
RU2779562C1
Способ диагностики диабетической периферической нейропатии 2021
  • Грибанова Евгения Константиновна
  • Хасанова Юлия Валерьевна
  • Петров Иван Михайлович
  • Пономарева Мария Николаевна
RU2751973C1
Способ диагностики диабетической дистальной нейропатии 2018
  • Полторацкая Елена Сергеевна
  • Руяткина Людмила Александровна
  • Чешева Елена Владимировна
  • Пахомов Игорь Анатольевич
RU2687019C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ ЛЕБЕРА 2016
  • Шеремет Наталия Леонидовна
  • Невиницына Татьяна Алексеевна
  • Лямзаев Константин Геннадьевич
  • Пантелеева Алиса Анатольевна
  • Токарчук Артем Валерьевич
  • Иткис Юлия Сергеевна
  • Крылова Татьяна Дмитриевна
  • Цыганкова Полина Георгиевна
RU2617803C1
Способ диагностики субклинической стадии диабетической нейропатии 2018
  • Каракулова Юлия Владимировна
  • Филимонова Тамара Андреевна
  • Каракулов Олег Геннадьевич
  • Васильев Юрий Владимирович
RU2671630C1
СПОСОБ ФИЗИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ДИАБЕТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИЕЙ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ 2013
  • Каширина Елена Жоржевна
  • Евдокимова Оксана Олеговна
  • Брызгалина Светлана Михайловна
RU2526475C1
Способ прогнозирования тяжелого течения диабетической полинейропатии и развития синдрома диабетической стопы 2018
  • Каракулова Юлия Владимировна
  • Филимонова Тамара Андреевна
  • Каракулов Артем Олегович
RU2687978C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 2014
  • Аветисов Сергей Эдуардович
  • Шеремет Наталия Леонидовна
  • Ханакова Наталья Алексеевна
  • Минин Александр Александрович
  • Венкова Лариса Сергеевна
  • Свистунова Дарья Михайловна
  • Черноиваненко Иван Сергеевич
RU2566271C9
Способ реабилитации при периферической полинейропатии, индуцированной цитостатиками 2022
  • Кульчицкая Детелина Борисовна
  • Куликова Наталья Геннадьевна
  • Кончугова Татьяна Венедиктовна
  • Гущина Надежда Витальевна
  • Астахова Ксения Александровна
  • Фесюн Анатолий Дмитриевич
RU2775121C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 751 700 C2

Реферат патента 2021 года Способ диагностики нейропатии малых волокон у больных саркоидозом

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и пульмонологии. Раскрыт способ диагностики нейропатии малых волокон у больных саркоидозом, характеризующийся тем, что проводят оценку выраженности неврологических симптомов у пациентов по количеству баллов в тесте по шкале SFN-SL, при их значении, равном 2 и более баллов, осуществляют биопсию кожи латеральной поверхности голени с дальнейшим выполнением иммунофлуоресцентного исследования биоптата и при плотности нервных волокон ниже 4,4 IENF/mm диагностируют нейропатию малых волокон. Изобретение обеспечивает высокую точность диагностики нейропатии тонких волокон у больных с гранулематозными заболеваниями легких. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Формула изобретения RU 2 751 700 C2

Способ диагностики нейропатии малых волокон у больных саркоидозом, отличающийся тем, что проводят оценку выраженности неврологических симптомов у пациентов по количеству баллов в тесте по шкале SFN-SL, при их значении, равном 2 и более баллов, осуществляют биопсию кожи латеральной поверхности голени с дальнейшим выполнением иммунофлуоресцентного исследования биоптата и при плотности нервных волокон ниже 4,4 IENF/mm диагностируют нейропатию малых волокон.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2021 года RU2751700C2

БАСАНЦОВА Н.Ю
и др
ОСОБЕННОСТИ ДИАГНОСТИКИ НЕЙРОПАТИЙ МАЛЫХ ВОЛОКОН ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) // Педиатр, 2018, Т.9, стр.101-110
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОЛИНЕВРОПАТИИ ТОНКИХ ВОЛОКОН У ПАЦИЕНТОВ С ЦЕЛИАКИЕЙ 2014
  • Копишинская Светлана Васильевна
  • Антонова Виктория Антоновна
  • Густов Александр Васильевич
  • Светозарский Николай Львович
  • Светозарский Сергей Николаевич
RU2575835C2
BAKKERS M
et al
Intraepidermal nerve fiber density and its application in sarcoidosis // Neurology, 2009, V.73, pp
ГИДРАВЛИЧЕСКАЯ ПЕРЕДАЧА 1924
  • Г. Тома
SU1142A1
LAURIA G
et al
Intraepidermal nerve

RU 2 751 700 C2

Авторы

Старшинова Анна Андреевна

Басанцова Наталья Юрьевна

Зинченко Юлия Сергеевна

Беляева Екатерина Николаевна

Павлова Мария Васильевна

Чурилов Леонид Павлович

Яблонский Петр Казимирович

Даты

2021-07-15Публикация

2019-12-27Подача