ВАКЦИНА ПРОТИВ ГЕМОФИЛЕЗА ПТИЦ ИНАКТИВИРОВАННАЯ В ФОРМЕ СУСПЕНЗИИ "ГЕМОВАК" Российский патент 2021 года по МПК A61K39/102 A61P31/04 

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано ветеринарными специалистами для профилактики гемофилеза птиц в неблагополучных и условно благополучных хозяйствах.

Гемофилез (инфекционный ринит, заразный насморк, «совиная голова», инфекционная кориза) - инфекционное заболевание птиц, характеризующееся катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости и подглазничных синусов, конъюнктивитом и отеками в подкожной клетчатке лицевой части головы.

Возбудителем инфекционного ринита кур является Avibacterium paragallinarum, относящаяся к роду Avibacterium, семейству Pasteurellaceae.

Гемофилез регистрируется у кур всех возрастов, наиболее восприимчивые к заражению являются птицы старше 4-недельного возраста. Как правило, гемофилезом болеют куры при промышленном выращивании. Возникновению болезни способствует совместное содержание разновозрастных птиц, повышенная концентрация аммиака в воздухе, дефицит витамина А в рационе птиц, наличие микс-инфекций и другие нарушения зоогигиенических условий содержания и кормления. Вспышки болезни чаще наблюдают в осенне-зимний период, то есть в условиях низкой температуры и высокой влажности воздуха.

Заражение происходит аэрогенно, алиментарно и контактно. Источником инфекции служат больные и переболевшие птицы, являющиеся бактерионосителями в течение 6-12 мес. после переболевания. Возбудитель выделяется в окружающую среду с истечениями из носовых отверстий, глаз, выдыхаемым воздухом. Факторами передачи служат воздушная среда, инфицированный корм, предметы ухода, инвентарь, персонал. Вопрос о возможности вертикальной передачи возбудителя инфекции остается открытым и требует дополнительных исследований. Гемофилез птиц / Т.Н. Рождественская, Е.В., Кононенко, С.А. Емельянова, С.С.Яковлев, М.Г. Теймуразов, Э.А. Светоч, О.И., Тазина, М.Е., Платонова, К.В., Детушев, Ю.И. Хатюшин // Птица и птицепродукты. - 2016 - №4. - С. 50-53.].

Инкубационный период при гемофилезе птиц варьирует в пределах 1-12 сут. Болезнь характеризуется быстрым распространением и высокой заболеваемостью. У молодых птиц в начале болезни могут регистрироваться только неспецифические клинические признаки, такие как угнетение, отставание в росте, сонливость. У взрослой птицы отмечают серозно-слизистые истечения из глаз и носовых отверстий, легкое припухание подглазничных синусов, снижение яйценоскости, достигающее 40%. При несильном нажатии на ноздри сипящее, хлюпающее дыхание. У некоторых птиц возникает диарея. При прогрессировании заболевания в носовых пазухах происходит скопление серозно-фибринозных масс, птица чихает, зевает, хрипит, вытягивает шею при дыхании, трет клювом о крыло, часто трясет головой. У некоторых птиц развивается односторонний или двухсторонний геморрагический или фибринозно-гнойный конъюнктивит с полным закрытием глазной щели, кератит, панофтальмит, в редких случаях пневмония, аэросаккулит и артрит. В результате отека подкожной клетчатки лицевой части головы, подчелюстного пространства, сережек и припухания подглазничных синусов голова кур принимает форму «совиной». У птиц с синдромом опухшей (совиной) головы (SHS), возникает слепота и нарушается ориентация в пространстве.

При моноинфекции болезнь длится не более 3 недель. Смертность не превышает 5%. Гибель птицы происходит вследствие истощения и поражения органов респираторного тракта. Ассоциированное течении заболевания приводит к повышенной смертности и увеличению продолжительность болезни, что ведет к снижению экономических показателей птицехозяйств.

Уровень техники

Противоэпизоотические мероприятия, направленные на профилактику гемофилеза птиц должны быть комплексными и включать в себя соблюдение зоогигиенических и ветеринарно-санитарных правил содержания птиц, применение средств неспецифической и специфической профилактики.

Для лечения гемофилеза птиц используют сульфаниламидные, нитрофурановые препараты и антибиотики с обязательным определением чувствительности к A. paragallinarum, с одновременным применением витаминов в антистрессовых дозах.

Используемы с целью специфической профилактики практически все современные биопрепараты против гемофилеза птиц A. paragallinarum содержат три серотипа по классификации Page и различаются по количественному составу подтипов.

Поскольку до 2018 года на рынке ветеринарных препаратов отсутствовали отечественные средства специфической профилактики в условиях промышленного птицеводства в Российской Федерации в основном использовались зарубежные инактивированные эмульсионные вакцины, производимые в Израиле, Франции, Германии и Испании.

В связи с этим и возникла крайняя необходимость в создании отечественной вакцины, так как согласно литературным и научным источникам, наиболее эффективна вакцина тогда, когда для ее производства используют эпизоотически опасные высоковирулентные штаммы, изолированные от птиц, выделенных на территории России.

Известны следующие аналоги:

Вольвак АС+ - в одной иммунизирующей дозе вакцины (0,5 мл.) содержится не менее чем 10^8,0 ЭИД₅₀ инактивированных бактерий из каждого серотипа (А,В,С) штаммов Avibacterium paragallinarum. Германия.

Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГБУ «ВГНКИ». Номер регистрационного удостоверения: 276-1-35.13-1783 №ПВИ-1-35.13/04169.

[https://www.boehringer-ingelheim.ru/sites/ru/files/volvac_ac_plus.pdf]

Кориправак - в одной иммунизирующей дозе (0,5 мл.) содержится не менее 5*10⁹ инактивированных микробных клеток каждого штамма Avibacterium paragallinarum: серотип А (штамм 1753), серотип В (штамм 1755), серотип С (штамм 1756). Испания, регистрация до 20 года.

[https://www.vidal.ru/veterinar/koripravak-29911]

Вирсин 336 - в одной иммунизирующей дозе вакцины (0,5 мл.) содержится не менее чем 108.0 КОЕ инактивированных бактерий из каждого серотипа (А,В,С-2 и С-3) штаммов Avibacterium paragallinarum BIOVAC LTD - Израиль. Номер регистрационного удостоверения - РК-ВП-1-2575-14.

[http://www.biovac.co.il/BioVac//userdata/SendFile.asp?DBID=1LNGID=3 &GID=504]

IC Квадро - вакцина изготовлена из водной фракции инактивированной культуры бактерий Avibacterium paragallinarum штамм «221» серотипа «А» - 10^8,4 КОЕ, штамм «Spross» серотипа «В» - 10^8,5 КОЕ, штамм «Modesto» серотипа «С-2» - 10^8,5 КОЕ, штамм «АККО» серотипа «С-3» - 10^8,6 КОЕ. Израиль.

Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГБУ «ВГНКИ»

[Номер регистрационного удостоверения 376-1-12.13-2593 №ПВИ-1-12.13/03990] [http://www.abiksepta.ru/vaktsiny/dlya-kogo/proizvoditeli/ic-kvadro/] Данный аналог мы берем за прототип.

Актуальностью создания отечественной вакцины является необходимость выполнения программы импортозамещения, создания ареактогенной и иммуногенной активности вакцины и расширения арсенала вакцин, предназначенных для профилактики гемофилеза птиц.

Раскрытие сущности изобретения

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала вакцин и создание отечественной высокоиммуногенной, ареактогенной вакцины против гемофилеза птиц.

Указанный технический результат достигается, в том числе, и благодаря тому что:

1. Штаммы A. paragallinarum- в нашей «разработке» используются шт. A. paragallinarum серотипов (А, В и С), выделенные на территории РФ. Близкое антигенное «родство» вакцинных шт. A. paragallinarum с возбудителями гемофилеза птиц циркулирующими в РФ позволяет сделать вакцину более эффективной по иммуногенной активности.

2. Вид антигена - в нашей «разработке» в качестве антигенной фракции будут использоваться антигенны A. paragallinarum серотипов (А, В и С) высокой степени очистки, что позволит сделать вакцину ареактогенной и повысить ее иммуногенную активность по сравнению с аналогами.

3. Вид адъюванта - в «разработке» в качестве адъюванта будет использован гидроокись алюминий адъювант, что позволит получить ареактогенную вакцину.

Торговое наименование вакцины: «ГЕМОВАК»

Вакцина изготовлена на основе инактивированного формальдегидом производственного штамма возбудителя Avibacterium paragallinarum штаммов: В-7770 - серотипа «А», В-8407 1130917/АтяшевоВ - серотип «В» и В-8408 150215/ТулаС2 - серотип «С» с добавлением гидроокисьалюминиевого адъюванта.

Штаммы депонированы в государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск) ФБУН «ГНЦ ПМБ».

По внешнему виду вакцина представляет собой светло-серую суспензию с беловатым осадком, образующимся на дне флакона при хранении и легко разбивающимся при взбалтывании в гомогенную взвесь.

Изготовление инактивированной вакцины против гемофилеза птиц в форме суспензии осуществляется в цехе бактериальных вакцин. Помещения и оборудование отвечают Правилам надлежащей производственной практики, утвержденным приказом Минпромторга России от 14 июня 2013 г. Приказ №916 (по правилам GMP).

Схема производства вакцины против гемофилеза птиц инактивированной в форме суспензии «ГЕМОВАК»

1. Изготовление полуфабрикатов

Изготовление полуфабриката антигена гемофилеза птиц включает в себя следующие этапы:

1.1. Получение матричной расплодки производственных штаммов Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С»;

1.2. Культивирование производственных штаммов Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С»;

1.3. Инактивирование бактериальной массы. Используется формальдегид в конечной концентрации 0,1% с последующим выдерживанием при температуре 22±°С в течение 24 часов;

1.4. Концентрирование бактериальной массы методом центрифугирования.

2. Контроль полуфабрикатов (антигенов Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С»):

2.1. Контроль стерильности;

2.2. Контроль полноты инактивации Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С»;

2.3. Контроль морфологии;

2.4. Контроль концентрации млрд мк/см.

3. Подготовка адъюванта

3.1. Стерилизация 3% ГОА адъюванта;

3.2. Контроль стерильности.

4. Смешивание компонентов, изготовление вакцины

Для изготовления серии инактивированной вакцины используют концентраты антигенов Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С» которые прошли контроль на биологическую активность и стерильность после чего его разводят в ФБР из расчета по 6,0 млрд мк/мл каждого серотипа и соединяют с 3% ГОА в соотношении 1:1.

В реактор закачивают 3% ГОА, затем при постоянном перемешивании (300 об/мин) антигены. После завершения подачи антигенов осуществляли перемешивание в течение 10 мин при вращении винта 300 об/мин и температуре 15-18°С. После чего полученную взвесь выдерживали 48 ч при температуре 15-18°С, перемешивая каждые 8 ч по 10 мин при вращении винта 300 об/мин.

5. Розлив вакцины во флаконы. Укупорка флаконов

По завершению процесса адсорбции, готовую вакцину фасуют по 20 см³ (20 доз), 100 см³ (100 доз) и 500 см³ (1000 доз) в стеклянные или пластиковые флаконы, соответствующего объема. Погрешность фасовки ±3%. Розлив вакцины осуществляется на линии автоматического розлива. После розлива флаконы укупоривают резиновыми пробками, которые обжимают алюминиевыми колпачками.

6. Подготовка этикеток. Маркировка флаконов

На флаконы с вакциной наклеивают этикетку. Этикетированная продукция укладывается в транспортные контейнеры.

Вакцину хранят и транспортируют при температуре от 2°С до 8°С. Замораживание вакцины не допускается.

Научные исследования проводились на базе существующей при институте ФГБНУ Федерального научного центра - Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко лаборатории болезней птиц, промышленных птицеводческих хозяйств Российской Федерации. Результаты исследований обработаны статистически с использованием методов статистического и корреляционного анализа. Изучение культурально-морфологических, вирулентных свойств и антигенной активности выделенных изолятов А. paragallinarum проводили согласно методических указаний по лабораторной диагностике гемофилеза кур (Утв. ГУВ МСХ и П РБ 10.04.2008 (№10-1-5/524).

Лекарственная форма - суспензия для инъекций. Вакцина изготовлена на основе антигена инактивированного формальдегидом. Антиген получали с использованием производственных штаммов возбудителя Avibacterium paragallinarum: В-7770 - серотипа «А», 1130917/АтяшевоВ - серотип «В» и 150215/ТулаС2 - серотип «С». В качестве адъюванта использовали гидроокись алюминия.

Вакцина предназначена для профилактики гемофилеза птиц в неблагополучных и условно благополучных по гемофилезу птицехозяйствах. Вакцина вызывает формирование иммунного ответа у птиц через 14-28 сут. после двукратного применения, продолжительностью не менее 6 месяцев.

Осуществление изобретения

Приведенные ниже примеры являются иллюстративными и тем самым не ограничивают рамки настоящего изобретения.

Разработанный препарат после иммунизации цыплят в суточном, 50-сут. и 60-сут. возрасте стимулирует выработку антител к Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С» в титрах 4,0 ± log₂ (в РА).

В эксперименте были использованы цыплят суточного возраста кросса «РОСС 308» и «Иза коричневый» 50-сут. и 60-сут. возраста, с разбивкой на несколько опытных и контрольных групп (по 10 гол в каждой). Цыплят иммунизировали вакциной «ГЕМОВАК» подкожно в область средней трети шеи или внутримышечно в крыло между лучевой и локтевой костями разными иммунизирующими дозами результаты представлены в таблице 2.

Динамика образования специфических антител у цыплят иммунизированных против гемофилеза птиц инактивированной вакциной в форме суспензия «ГЕМОВАК» представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, цыплята опытных и контрольных групп до вакцинации не имели специфических антител к возбудителю Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С».

Через 28 сут., у птиц всех групп, которые были иммунизированы вакциной против гемофилеза птиц инактивированной в виде суспензии «ГЕМОВАК» был зафиксирован прирост уровня антител к возбудителю Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С» в положительных диагностических показателях, со средне групповыми значениями в РА - 4,0 ± log₂.

В сыворотках крови птиц контрольной группы специфических антител к Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С» обнаружено не было на протяжении всего периода эксперимента, что подтверждает достоверность полученных результатов.

В результате чего установлено, что иммунизирующая дозой для вакцины против гемофилеза птиц инактивированной в виде суспензии «ГЕМОВАК» является объем вакцины равный 0,2 см³ для цыплят суточного возраста, 0,5 см³ для молодняка кур 50 суточного возраста и 1,0 см³ для молодняка кур старше 60 суточного возраста. Данный прививной объем обеспечивает формирование у вакцинированных цыплят достаточного уровеня протективных антител к возбудителю Avibacterium paragallinarum серотипов «А», «В» и «С», что показано в исследованиях по изучению антигенных свойств вакцины против гемофилеза птиц инактивированной в виде суспензии «ГЕМОВАК».

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтики, а именно к вакцине против гемофилеза птиц инактивированной в форме суспензии, включающей инактивированные антигены, полученные на основе штаммов бактерий Avibacterium paragallinarum, и фармацевтически приемлемые целевые добавки, отличающейся тем, что антигены приготовлены на основе бактерий Avibacterium paragallinarum, депонированных в ГКПМ-Оболенск: штамма В-7770, серотипа «А» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объеме 0,1699 см³, штамма В-8407, 1130917/АтяшевоВ, серотипа «В» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объеме 0,165 см³, штамма В-8408, 150215/ТулаС2, серотипа «С» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объеме 0,165 см³, причем концентрация микробных клеток в каждом используемом объеме раствора антигенов составляет 6,0 млрд микробных клеток на 1 мл, и все компоненты приведены из расчета на одну коммерческую дозу 1,0 см³. Технический результат заключается в высокой иммуногенности, ареактогенности вакцины против гемофилеза птиц. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.

1. Вакцина против гемофилеза птиц, инактивированная в форме суспензии, включающая инактивированные антигены, полученные на основе штаммов бактерий Avibacterium paragallinarum, и фармацевтически приемлемые целевые добавки, отличающаяся тем, что антигены приготовлены на основе бактерий Avibacterium paragallinarum, депонированных в ГКПМ-Оболенск: штамма В-7770, серотипа «А» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объёме 0,1699 см³, штамма В-8407, 1130917/АтяшевоВ, серотипа «В» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объёме 0,165 см³, штамма В-8408, 150215/ТулаС2, серотипа «С» с включением раствора антигенов в состав вакцины в объёме 0,165 см³, причем концентрация микробных клеток в каждом используемом объёме раствора антигенов составляет 6,0 млрд микробных клеток на 1 мл, и все компоненты приведены из расчета на одну коммерческую дозу 1,0 см³.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве фармацевтически приемлемых целевых добавок используют формальдегид, нейтрализованный гистидином, в объёме 0,0001 см³.

3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве фармацевтически приемлемых целевых добавок используют адъювант 3% раствор гидроокиси алюминия в объёме 0,5 см³.