Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринге масличной листьях (Moringa oleifera).
Действующая система контроля качества лекарственных препаратов требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их физико-химических, спектральных и фармакологических свойствах, позволяющих объективно и селективно определять содержание целевых веществ (1).
Моринги масличной листья обладают широким спектром действия, поэтому могут применятся для профилактики и лечения таких заболеваний, как сердечно-сосудистые, гиперлипидемии и сахарный диабет (2). Проблема стандартизации растительного сырья на основе моринги масличной является достаточно актуальной. Моринга масличная содержит фенилпропаноиды - биологически активные соединения, обладающие противовоспалительными, антиоксидантными, и тонизирующими свойствами (3). В настоящее время для идентификации и количественного определения фенилпропаноидов в лекарственных растениях используют спектрофотометрические методы (4). Они быстры, удобны и не требуют сложного оборудования.
Известен способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в траве эхинацеи пурпурной методом прямой спектрофотометрии. Для проведения исследования по данному методу необходимы щавелевая кислота, магнитная мешалка, центрифуги, механический встряхиватель и пластины для тонкослойной хроматографии (5).
Наиболее близким к заявленному способу является способ количественного определения фенолкарбоновых кислот экстракционно-спектрофотометрическим методом (6), взятый за прототип. Данная методика включает в себя трехкратную экстракцию измельченного сырья, упаривание и использование буферного раствора (pH 2,0±0,1), получение этилацетатного извлечения с фильтрованием через безводный натрий сульфат.
Недостатками известного способа является длительность и трудоемкость методики. Как видно из описания, этот способ многостадиен, трудоемок, включает использование токсичного растворителя (этилацетат). В связи с этим целью изобретения является разработка способа определения суммы фенилпропаноидов моринги масличной листьев.
Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринге масличной листьях в пересчете на хлорогеновую кислоту. Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 70% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:200. Количественное определение суммы фенилпропаноидов в пересчете на хлорогеновую кислоту, моринги масличной листьев проводят при длине волны 330±2 нм.
В случае отсутствия стандартного образца хлорогеновой кислоты содержание суммы фенилпропаноидов (X в процентах) для расчета целесообразно использовать теоретическое значение его удельного показателя поглощения = 497:
где, D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
W - потеря в массе при высушивании сырья (влажность), %;
497 - удельный показатель поглощения (оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 г/100 мл в кювете с толщиной слоя 1 см) стандартного образца хлорогеновой кислоты при 330±2 нм.
При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно хлорогеновая кислота определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из моринги масличной листьев (фиг., где кривая 1 исходный раствор извлечения из моринги, кривая 2 исходный раствор хлорогеновой кислоты).
Изучение УФ-спектров спиртовых извлечений из моринги масличной листьев показало, что максимумы собственного поглощения фенилпропаноидов спиртовых экстрактов из моринги масличной листьев - 290±2 нм (плечо) и 330±2 нм (максимум). Раствор СО хлорогеновой кислоты имеет максимум поглощения при 330±2 нм и «плечо» при 290±2 нм. Ввиду близкого расположения максимумов поглощения исследуемого извлечения из сырья моринги масличной и вещества-стандарта хлорогеновой кислоты, целесообразным является пересчет содержания суммы фенилпропаноидов на хлорогеновую кислоту с использованием метода прямой спектрофотометрии. Положение максимумов не меняется при использовании в качестве экстрагента этанола 40%, 70% и 95%. Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы фенилпропаноидов в моринги масличной листьях при аналитической длине волны 330±2 нм.
При разработке методики было изучено влияние на выход фенилпропаноидов следующих факторов: степень измельченности сырья, экстрагента, соотношение сырье: экстрагент, длительность и температура экстракции (табл. 1, 2, 3, 4).
Зависимость выхода биологически активных соединений моринги от степени измельченности сырья представлена в таблице 1. Следует отметить, что, по нашим данным, степень измельчения от 0,5 до 2 мм сильного влияния на экстракцию не оказывает. Однако в качестве оптимальной нами выбрана степень измельчения 1 мм.
Таблица 1. Зависимость выхода БАС моринги листьев от степени измельченности сырья
Проводилось исследование зависимости различных параметров экстракции на выход действующих веществ из сырья. Изучалось влияние экстрагента на процесс экстракции (табл.2). При этом спирт этиловый 70%-ной концентрации был выбран в качестве оптимального экстрагента.
Результаты определения количественного содержания суммы фенилпропаноидов в высушенных моринги листьях представлены в таблице 2.
Таблица 2. Содержание суммы фенилпропаноидов в высушенных моринги листьях, %
Результаты исследований по выбору оптимального соотношения «сырье-экстрагент» приведены в таблице 3. Оптимальными параметрами экстракции являются: извлечение 70% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 60 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:200.
Таблица 3. Зависимость выхода БАС листьев моринги от соотношения «сырье-экстрагент»
п/п
Нами также изучен вопрос относительно продолжительности экстракции на кипящей водяной бане (табл.4).
Таблица 4. Зависимость выхода БАС листьев моринги от времени настаивания на кипящей водяной бане
п/п
Полученные результаты позволяют поставить моринги масличной листья по содержанию фенилпропаноидов в один ряд с известными лекарственными растениями - источниками фенилпропаноидов.
Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения.
Таким образом, было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 70% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 60 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:200.
Принимая по внимание тот факт, что основным действующим веществом в моринги масличной листьях является хлорогеновая кислота, а максимумы поглощения раствора хлорогеновой кислоты и водно-спиртового извлечения моринги масличной листьев находятся в области - 290±2 нм (плечо) и 330±2 нм (максимум), целесообразным является определение содержания суммы фенилпропаноидов в пересчете на хлорогеновую кислоту при длине волны 330±2 нм.
Способ реализуется следующим образом.
Аналитическую пробу сырья моринги масличной измельчают до размера частиц 1 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, приливали 100 мл экстрагента спирта этилового 70%, присоединяли к обратному холодильнику, нагревали на кипящей водяной бане в течение 60 минут с момента закипания экстрагента в колбе. После охлаждения полученные извлечения фильтровали через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбирая первые 10 мл фильтрата (раствор А). Затем в мерную колбу вместимостью 50 мл помещали 1,0 мл полученного фильтрата и доводили объём экстрагентом до метки (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряли на спектрофотометре при длине волны 330±2 нм. В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый концентрации 70%. Измерение оптической плотности проводят сразу после приготовления раствора.
Содержание суммы фенилпропаноидов в пересчете на хлорогеновую кислоту и воздушно-сухое сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле
,
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
W - потеря в массе при высушивании сырья (влажность), %;
497 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при 330±2 нм.
Предлагаемый способ поясняется следующим примером.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц 1,0 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, приливали 100 мл экстрагента спирта этилового 70%, присоединяли к обратному холодильнику, нагревали на кипящей водяной бане в течение 60 минут с момента закипания экстрагента в колбе. После охлаждения полученные извлечения фильтровали через бумажный фильтр (красная полоса), смоченный тем же спиртом, отбирая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
Испытуемый раствор для анализа суммы фенилпропаноидов готовят следующим образом: 1,0 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 70% (испытуемый раствор). В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый концентрации 70%.
После измерения оптической плотности извлечения из моринги масличной листьев при длине волны 330±2 нм, содержание суммы фенилпропаноидов (X в процентах) в пересчете на хлорогеновую кислоту и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле, используя теоретическое значение удельного показателя поглощения хлорогеновой кислоты = 497:
,
где 0,1394 - оптическая плотность испытуемого раствора;
0,490 - масса сырья, г;
11 - потеря в массе при высушивании сырья (влажность), %;
497 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при 330±2 нм.
Содержание суммы фенилпропаноидов в пересчете на хлорогеновую кислоту = 3,16%.
Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±3,07%.
Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в пересчете на хлорогеновую кислоту в моринге листьях с использованием прямой спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:
1. Разработанный метод является более специфичным и селективным, а также позволяет проводить экстракцию сырья однократно 70% этиловым спиртом, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (фенилпропаноиды).
2. Пересчет суммы фенилпропаноидов идет на специфическое для моринги листьев вещество - хлорогеновую кислоту.
3. Ошибка единичного определения предлагаемого способа составляет ±3,07%, что свидетельствует об объективности разработанного способа и высокой точности.
Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа моринги масличной листьев (Moringa oleifera Lam.).
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Куркин В.А. Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). - 3-е изд., перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт»; ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2016. - 1279 с.
2. Fahey, J.W. Moringa oleifera: A review of the medical evidence for its nutritional, therapeutic, and prophylactic properties. Part 1. Trees for Life Journal. - 2005. - №1. - 5 р.
3. Куркин В.А. Фенилпропаноиды лекарственных растений. Распространение, классификация, структурный анализ, биологическая активность // Химия природ. соединений. 2003. № 2. С. 87-110.
4. Куркин В.А., Авдеева Е.В. Проблемы стандартизации растительного сырья и препаратов, содержащих фенилпропаноиды // Фармация. 2009. Т. 57 (1). С. 51-54.
5. Государственная фармакопея 14 издание. Электронное издание. - 2018. URL:http://femb.ru/femb/pharmacopea.php [Gosudarstvennaya farmakopeya 14 izdanie. State Pharmacopoeia 14th edition. Elektronnoe izdanie. - 2018. URL:http://femb.ru/femb/pharmacopea.php.
6. Ларькина М.С., Кадырова Т.В., Ермилова Е.В. Изучение динамики накопления фенолкарбоновых кислот в надземной части василька шероховатого // Химия растительного сырья. 2008. №3. С. 71-74.
7. Курдюков Е.Е., Водопьянова О.А., Митишев А.В., Моисеев Я.П., Семенова Е.Ф. Методика количественного определения суммы фенилпропаноидов в сырье стевии // Химия растительного сырья. 2020. №3. С. 115-121. DOI: 10.14258/jcprm.2020037141.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ В ЦВЕТКАХ СИРЕНИ ОБЫКНОВЕННОЙ | 2020 |
|
RU2747483C1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ В ПОБЕГАХ БОЯРЫШНИКА КРУПНОКОЛЮЧКОВОГО | 2023 |
|
RU2812737C1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ СИРЕНИ ОБЫКНОВЕННОЙ | 2020 |
|
RU2752316C1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ТОПОЛЯ ЧЕРНОГО | 2018 |
|
RU2701726C1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ В КОРНЕВИЩАХ И КОРНЯХ ЭЛЕУТЕРОКОККА КОЛЮЧЕГО | 2022 |
|
RU2797411C1 |
СПОСОБ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ В ЛИСТЬЯХ КРАПИВЫ ДВУДОМНОЙ ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ ХЛОРОФИЛЛА, КАРОТИНОИДОВ И ГИДРОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ | 2013 |
|
RU2531940C1 |
НАСТОЙКА ЭХИНАЦЕИ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАСТОЙКИ ЭХИНАЦЕИ | 2015 |
|
RU2567035C2 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ВАХТЫ ТРЕХЛИСТНОЙ | 2022 |
|
RU2798673C1 |
Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской | 2023 |
|
RU2807831C1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ОРЕХА ГРЕЦКОГО | 2020 |
|
RU2747482C1 |
Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в фармацевтической промышленности. Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринге листьях методом прямой спектрофотометрии включает предварительное получение водно-спиртового извлечения из листьев моринги путем экстракции 0,5 г точной навески измельченной до частиц 1 мм листьев моринги этиловым спиртом, в пересчете на вещество фенольной природы, при этом экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 70% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:200, количественное определение суммы фенилпропаноидов в моринге листьях проводят при длине волны 330±2 нм в пересчете на хлорогеновую кислоту и содержание суммы фенилпропаноидов (X в %) в пересчете на хлорогеновую кислоту с использованием значения удельного показателя поглощения, равное 497. Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринге масличной листьях в пересчете на хлорогеновую кислоту. 1 ил., 4 табл.
Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринге листьях, с предварительным получением водно-спиртового извлечения из моринги листьев путем экстракции 0,5 г точной навески измельченной до частиц 1 мм моринги листьев этиловым спиртом, в пересчете на вещество фенольной природы, методом прямой спектрофотометрии, отличающийся тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 70% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:200, количественное определение суммы фенилпропаноидов в моринге листьях проводят при длине волны 330±2 нм в пересчете на хлорогеновую кислоту и содержание суммы фенилпропаноидов (X в %) в пересчете на хлорогеновую кислоту с использованием значения удельного показателя поглощения, равное 497, и содержание суммы фенилпропаноидов (X в %) рассчитывают по формуле
,
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
W - потеря в массе при высушивании сырья (влажность), %;
497 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при 330±2 нм.
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ В ЦВЕТКАХ СИРЕНИ ОБЫКНОВЕННОЙ | 2020 |
|
RU2747483C1 |
ЛАРЬКИНА М.С., КАДЫРОВА Т.В., ЕРМИЛОВА Е.В | |||
"ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ НАКОПЛЕНИЯ ФЕНОЛКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ВАСИЛЬКА ШЕРОХОВАТОГО", ХИМИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ | |||
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. | 1921 |
|
SU3A1 |
С | |||
Контрольный стрелочный замок | 1920 |
|
SU71A1 |
КУРДЮКОВ Е.Е., ВОДОПЬЯНОВА О.А., МИТИШЕВ А.В., МОИСЕЕВ Я.П., СЕМЕНОВА Е.Ф | |||
"МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ |
Авторы
Даты
2021-12-28—Публикация
2021-04-21—Подача