Способ определения степени тяжести ненаследственной дисплазии соединительной ткани у детей Российский патент 2022 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к практической медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано с целью клинико-лабораторной диагностики и оценки тяжести ненаследственной дисплазии соединительной ткани (НДСТ) у детей.

Известно, что дисплазия соединительной ткани (ДСТ) - это гетерогенная группа заболеваний мультифакторной природы с полигенным наследо-ванием и/или результатом воздействия неблагоприятных факторов. Основу структуры соединительной ткани составляют экстрацеллюлярный матрикс и клеточные элементы. Внеклеточный матрикс состоит из фибриллярных белков, включающих коллагены различных типов, эластин, целый ряда адгезивных белков - витронектин, фибронектина, ламинина, тромбос-пондина, протогликанов (декорина, бигликана, фибромодулина) и др.

Дисплазия соединительной ткани считается ненаследственной формой тогда, когда набор клинических признаков её не укладывается ни в одну из наследственных форм заболевания (Проект Российских рекомендаций «Наследственные и многофакторные нарушения соединительной ткани у детей», 2015).

Актуальность изучения проблемы диагностики дисплазии соедини-тельной ткани ненаследственного происхождения обусловлена высокой частотой встречаемости ее, неоднозначной интерпретацией проявлений внешних фенотипических и внутренних (висцеральных) признаков дисплазии.

Для оценки степени выраженности НДСТ используются критерии, предложенные российскими экспертами (2009, 2015) и международные рекомендации по диагностике ДСТ. В тоже время, оценка степени тяжести, проводимая на основе анализа состояния фенотипических признаков и висцеральных показателей, в каждом конкретном случае часто вызывает сомнения.

Это обусловлено тем, что фенотипические признаки могут иметь различную степень выраженности, а субъективность их оценки часто приводит к неточностям в диагностике. Инструментальная оценка висцеральных нарушений НДСТ выявляет различные степени их выраженности. При выставлении диагноза возникают определенные сложности в установлении степени тяжести НДСТ т.к. признаки имеют разные степени выраженности. Это не позволяет по их совокупности однозначно поставить степень тяжести НДСТ. В связи с этим, в последнее время возникла необходимость использования дополнительных критериев, среди которых важное место занимают высокочувствительные биохимические показатели.

Известны различные способы оценки тяжести НДСТ. Наибольшее расп-ространение получили определения фенотипических признаков, с последу-ющим подсчетом суммарных баллов у конкретного индивидуума: патент на изобретение №2543166, патент на изобретение №2493768, патент на изоб-ретение №2558987, патент на изобретение №2532534. Во всех указанных случаях баллы для каждого признака присваиваются эмпирически с по-мощью определенной процедуры распознавания. Можно вычислить диаг-ностический балл для каждой градации.

В другом направлении используются определения клинико-биохи-мических и/или патоморфологических изменений соединительной ткани. В патенте на изобретение № 2487357 диагностика ДСТ проводится при оценке эндогенного розеткообразования в периферической крови. Определение фиб-ринолитической активности в биоптате эндометрия для диагностики дисп-лазии соединительной ткани используется в изобретении №2535071. В способах приведенных изобретений присутствует субъективизм при рассмотрении частных случаев дисплазии и отсутствует специфичность.

Данные способы являются недостаточно точными ввиду отсутствия стандартизации оценки выявляемых признаков. Так, один и тот же больной может быть одновременно отнесен не только в группу с ненаследственной дисплазией соединительной ткани, но и в группу без нее.

Основным недостатком данных способов диагностики НДСТ является:

• неточность диагностики,

• отсутствие стандартизации в объективизации выявляемых фенотипических признаков,

• большое количество необходимых исследований

• отдельно взятые признаки не являются строго специфичными для НДСТ и нуждаются в клинической оценке и проведении уточ-няющего дифференциально-диагностического поиска.

В качестве прототипа принято описание способа диагностики дис-плазии соединительной ткани, изложенное в «Способ оценки риска развития недифференцированной дисплазии соединительной ткани» (патент №2578961) на основании оценки результатов специальных методов: определения гормонального статуса пациенток, биохимических маркеров распада коллагена, в том числе уровней С-концевых телопептидов, оксипролина в крови и моче, гликозаминогликанов, фибронектина, определение уровня фактора роста фибробластов, иммунологических пока-зателей.

Использование в данном изобретении большого количества биохимических показателей затрудняет применение его в практике. Используемые биохимические маркеры распада коллагена и иммунологические показатели не могут объективно отражать развитие диспластических процессов, происходящих при ДСТ в висцеральных органах (сердце и почках и др.). Исследование иммунологических показателей может определять некоторые иммунные дисфункции и не позволяет оценить степень тяжести ДСТ.

Данный способ является недостаточно точным, т.к. нет убедительных сведений о корреляции степени тяжести синдрома НДСТ, определенной указанным способом, с содержанием в сыворотке крови и (или) мочи паци-ентов биохимических маркеров (например, гидроксипролина), свидетель-ствующих о нарушении метаболизма соединительной ткани, лежащем в ос-нове патогенеза синдрома НДСТ. Кроме того, не ясно, какую степень тя-жести синдрома НДСТ следует диагностировать в случае выявления 3-х и более главных признаков при отсутствии у пациента второстепенных.

Техническим результатом - является создание точного способа оценки степени тяжести дисплазии соединительной ткани, не требующего выполнения большого количества длительных и дорогостоящих диагностических исследований.

Технический результат достигается тем, что проводится исследование сыворотки крови у детей с ненаследственными формами ДСТ путем одновременного определения уровней ламинина и эластина в сыворотке крови, при уровнях эластина от 7,2 нг/мл до 11,2 нг/мл и ламинина от 43,4 пг/ мл до 52,0 пг/ мл определяют легкую степень дисплазии соединительной ткани ненаследственного характера; при уровнях эластина от 11,3 нг/мл до 17,7 нг/ мл; ламинина от 52,1 пг/мл до 60,0 пг/мл определяют среднетяжелую степень, а при уровнях эластина выше 17,8 нг/мл и ламинина выше 61,0 пг/мл диагностируют тяжелую степень дисплазии.

Уровни эластина меньше 7,2 нг/мл и ламинина меньше 43,4 пг/мл встречаются в единичных случаях и не могут использоваться для оценки тяжести, в тоже время, значения равные им и превышающие дают возможность оценивать степень тяжести НДСТ. В тоже время, уровни изучаемых белков равные и выше этих значений: эластина 17,8 нг/мл и ламинина 61,0 пг/мл характерны только для тяжелой степени.

Известно, что в патогенезе ДСТ признаются нарушения синтеза и/или распад белков внеклеточного матрикса. Определенный интерес при этом представляют неколлагеновые белки (эластин, ламинин и др.).

Эластин - основной компонент эластических волокон. Он составляет приблизительно 50% сухого веса артерий. В отличие от коллагенов эластин представлен только одним геном - ELN на хромосоме 7. Мутации данного гена приводят к стенозу аорты и других артерий.

Ламинин наиболее распространенный неколлагеновый гликопротеин базальных мембран, состоящий из 3-х полипептидных цепей А, В₁ и В₂.Он может взаимодействовать со всеми структурными компонентами базальных мембран, включая коллаген IV типа, фиброэластин и др. Главная функция ламинина - способность его связывать клетки и модулировать их. Он может влиять на ритм, дифференцировку и подвижность клеток.

Ламинин и эластин сравнительно малоисследованные белки, которые регулируют взаимоотношение между эластиновой сердцевиной и микрофибриллами, а также позволяют осуществлять тонкую подстройку эластичности волокон. Определения дисбаланса метаболизма уровней ламинина и эластина может значительно улучшить оценку степени тяжести НДСТ у детей.

Таким образом, преимуществом данного способа, основанного на определении уровней ламинина и эластина сыворотки крови, является высокая чувствительность и специфичность, а также широкий дифференциально - диагностический диапазон при НДСТ у детей.

Положительный эффект предлагаемого способа достигается исполь-зованием одновременного определения двух неколлагеновых белков: ламинина и эластина, активно участвующих в метаболизме диспластических процессов соединительной ткани. Исследование этих белков проводится с применением высокочувствительного метода. Точность предлагаемого способа составляет 95%.

Предложенный способ успешно апробирован у 47 больных с ненаследственными соединительнотканными дисплазиями. Ниже приводятся результаты апробации в отделении уронефрологии Областной детской клинической больнице им. Н.Н. Силищевой г.Астрахани.

Клинический пример №1.

Пациентка К. рождена от 2-ой беременности, первая закончилась выкидышем. Настоящая беременность у матери протекала на фоне анемии, хронического пиелонефрита, угрозы прерывания. Роды срочные, быстрые. На первом году росла и развивалась по возрасту, были исключены все 7 наследственных синдромов. Прививки по календарю. В дальнейшем в возрасте 3-4 лет выявлены патологические изменения со стороны различных органов и систем.

У ребенка в пять лет обнаружено четыре признака стигматизации. При инструментальном обследовании выявлен пролапс митрального клапана с регургитацией 1-й степени, нефроптоз 1-й степени, невыраженные проявления симптома гипермобильности суставов.

Для оценки степени выраженности НДСТ использовались критерии, предложенные российскими экспертами (2009, 2015) и на основании международных рекомендаций по диагностике ДСТ. Обращалось внимание на состояние различных органов и систем: костно-суставную, мышечную, состояние кожи, гипермобильности суставов, дыхательной, сердечно-сосудистую, мочевыделительную системы желудочно - кишечного тракта и др. По совокупности имеющихся данных фенотипических и висцеральных признаков дисплазии ребенку был выставлен диагноз: ненаследственная дисплазия соединительной ткани легкой степени тяжести.

Таким образом, наличие выявленных фенотипических и висцеральных признаков, а также степень их выраженности позволяли поставить диагноз НДСТ и объективно определить степень ее тяжести.

Для реализации технического результата нами проведено определение уровней эластина и ламинина в сыворотке крови сэндвич-методом ИФА с использованием высокочувствительных наборов для определения количественного уровня эластина (серия HBE337Hu №4DF58C0861) и ламинина (серия HBE082Hu №7B578DDCCD) компании «Cloud-Clone Corp».

Их уровни оказались умеренно повышенными (7,2 нг/мл; 43,4 пг/мл соответственно). Эти значения уровней дают возможность оценивать степень тяжести НДСТ. Тщательный анализ фенотипических и висцеральных признаки подтверждает возможность использования определения уровней эластина и ламинина как дополнительных критериев тяжести НДСТ.

Клинический пример №2

У ребенка С. в возрасте 4,5 лет обнаружено 5 признаков стигматизации, умеренно выраженные проявления симптома гипермобильности суставов. При этом, в раннем возрасте у мальчика были исключены все 7 основных генетических синдромов, как в первом примере.

При инструментальном обследовании выявлен пролапс митрального клапана с регургитацией 1-ой степени, дополнительная хорда левого желудочка, нефроптоз 1-2 степени. Наличие этих фенотипических и висцеральных признаков позволяло с уверенностью оценить степень тяжести НДСТ. С учетом указанных признаков ребенку выставлен диагноз: ненаследственная дисплазия соединительной ткани легкой степени тяжести.

Далее было проведено определение уровней эластина и ламинина в сыворотке крови, как указано в примере №1.

Их уровни оказались повышенными (11,2 нг/мл; 52,0 пг/мл соответственно). Полученные значения характеризуют легкую степень тяжести и имеют наибольшие величины. Таким образом, в ходе проведенных исследований нами установлен диапазон колебаний уровней изученных белков, объективно характеризующих легкую степень тяжести НДСТ (эластин 7,2-11,2 нг/мл; ламинин 43,4-52,0 пг/мл).

Клинический пример №3

У ребенка Л. в возрасте 3,5 лет обнаружено 7 признаков стигматизации на лице, кистях рук и на ногах, умеренно выраженные проявления симптома гипермобильности суставов.

При инструментальном обследовании выставлены: пролапс митрального клапана с регургитацией 1-2 степени, дополнительная хорда левого желудочка, нефроптоз 1-2 степени, пиелоэктазия 1 степени. По совокупности имеющихся данных фенотипических и висцеральных признаков дисплазии ребенку был выставлен диагноз: ненаследственная дисплазия соединительной ткани средней степени тяжести.

Таким образом, наличие выявленных фенотипических и висцеральных признаков, а также степень их выраженности позволяли поставить диагноз НДСТ и объективно определить степень ее тяжести.

Далее проведено определение уровней эластина и ламинина в сыворотке крови методом, описанном в примере №1. Их уровни оказались повышенными (11,3 нг/ мл; 52,1 пг/мл соответственно). Значения уровней этих белков позволяют уверенно выставлять среднюю тяжесть НДСТ.

Клинический пример №4

У ребенка Ж. в возрасте 5 лет обнаружено 8-мь признаков стигматизации, деформация мизинца на правой руке. При этом, в раннем возрасте у девочки были исключены все 7 основных генетических синдромов.

При инструментальном обследовании выявлен пролапс митрального клапана с регургитацией 1-ой степени, дополнительная хорда левого желудочка, нефроптоз 2 степени Наличие этих фенотипических и висцеральных признаков позволяло с уверенностью судить о степени тяжести НДСТ. Девочке был выставлен диагноз: ненаследственная дисплазия соединительной ткани средней степени тяжести.

Далее проведено определение уровней эластина и ламинина в сыворотке крови методом, указанном в примере №1. Их уровни оказались повышенными (17,7 нг /мл; 60,0 пг/мл соответственно). Полученные значения характеризуют среднюю степень тяжести и имеют наибольшие величины. Таким образом, в ходе проведенных исследований нами установлен диапазон колебаний уровней изученных белков, объективно характеризующих среднюю степень тяжести НДСТ (эластин 11,3-17,7 нг/мл; ламинин 52,1-60,0 пг/мл). Следовательно, определение уровней эластина и ламинина можно использовать как дополнительные критерии тяжести НДСТ.

Клинический пример №5

У ребенка П. в возрасте 4 лет обнаружено девять признаков стигматизации на лице, кистях рук, на ногах, мочке уха, умеренные проявления симптома гипермобильности суставов.

При инструментальном обследовании выявлен пролапс митрального клапана с регургитацией 2-ой степени, дополнительные хорды левого желудочка, нефроптоз 1-2 степени, пиелоэктазия 2 степени. Наличие этих фенотипических и висцеральных признаков позволяло выставить ребенку следующий диагноз: ненаследственная дисплазия соединительной ткани тяжелой степени.

Было проведено определение уровней эластина и ламинина в сыворотке крови описанным в примере №1 способом. Они оказались повышенными (19,4 нг/мл; 64,5 пг/мл соответственно). Эти значения уровней белков являются пограничными для установления тяжелой степени НДСТ. Это подтверждалось в дальнейшем клиническими наблюдениями и исследованиями висцеральных органов в динамике через 2 года. Эти значения уровней эластина и ламинина превышают данные указанные в формуле изобретения (уровни эластина выше 17,8 нг/мл и ламинина выше 61,0 пг/мл).

Таким образом, заявленный способ определения оценки степени тяжести ДСТ является более точным, чем способ, использованный в качестве прототипа. Предлагаемый способ может быть использован в клинической практике, что обеспечит более точную оценку степени тяжести ненаследственной ДСТ у детей и даст возможность своевременно назначить терапию, соответствующую степени тяжести заболевания.

Применение этого способа поможет грамотно подходить к оценке тяжести проявления дисплазии соединительной ткани, предотвращать развитие тяжелых форм и негативного влияния их на организм ребенка. Это позволит получить значительный экономический эффект (снижение заболеваемости на 30-35 % и повышения качества жизни 20-30%)

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для определения степени тяжести ненаследственной дисплазии соединительной ткани у детей. Способ включает исследование полученных образцов сыворотки крови методом иммуноферментного анализа, определение количественных значений уровней эластина и ламинина в сыворотке крови. При уровнях эластина от 7,2 нг/мл до 11,2 нг/мл и ламинина от 43,4 пг/ мл до 52,0 пг/ мл определяют легкую степень дисплазии соединительной ткани ненаследственного характера. При уровнях эластина от 11,3 нг /мл до 17,7 нг/мл; ламинина от 52,1 пг/мл до 60,0 пг/ мл определяют среднетяжелую степень ненаследственной дисплазии соединительной ткани. При уровнях эластина выше 17,8 нг/мл и ламинина выше 61,0 пг/мл определяют тяжелую степень ненаследственной дисплазии соединительной ткани. Использование изобретения обеспечивает более точную оценку степени тяжести ненаследственной ДСТ у детей и дает возможность своевременно назначить терапию, соответствующую степени тяжести заболевания. 5 пр.

Способ определения степени тяжести ненаследственной дисплазии соединительной ткани у детей путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что исследуют полученные образцы сыворотки крови методом иммуноферментного анализа, определяют количественные значения уровней эластина и ламинина в сыворотке крови и при уровнях эластина от 7,2 нг/мл до 11,2 нг/мл и ламинина от 43,4 пг/ мл до 52,0 пг/ мл определяют легкую степень дисплазии соединительной ткани ненаследственного характера, при уровнях эластина от 11,3 нг /мл до 17,7 нг/мл, ламинина от 52,1 пг/мл до 60,0 пг/ мл определяют среднетяжелую степень ненаследственной дисплазии соединительной ткани, а при уровнях эластина выше 17,8 нг/мл и ламинина выше 61,0 пг/мл определяют тяжелую степень ненаследственной дисплазии соединительной ткани.