Ссылка на родственные заявки

[0001] Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США № 62/537359, поданной 26 июля 2017 г., и предварительной заявке США № 62/686 802, поданной 19 июня 2018 г., раскрытия каждой из которых включено в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

Информация касательно перечня последовательностей

[0002] Перечень последовательностей, связанных с данной заявкой, представлен в текстовом формате вместо бумажной копии и, таким образом, включен в данное описание посредством ссылки. Имя текстового файла, содержащего список последовательностей: ONCR_010_02WO_ST25.txt. Размер текстового файла составляет 500 КБ, он был создан 26 июля 2018 года и подается в электронном виде через EFS-Web.

Область техники

[0003] Настоящее раскрытие относится к рекомбинантным вирусным векторам для лечения и профилактики рака. В частности, раскрытие относится к онколитическим вирусным векторам.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Современные нацеленные противораковые средства эффективны только в узком диапазоне раковых заболеваний из-за неоднородности профилей экспрессии опухолевого белка. Кроме того, многие виды лечения рака, включая существующие вирусные векторы, химиотерапию, облучение и хирургическое вмешательство, не обладают специфичностью для избирательного лечения раковых клеток, сохраняя при этом здоровье и жизнеспособность нормальных незлокачественных клеток, и могут вызывать нежелательные побочные эффекты. Таким образом, в данной области существует потребность в способах лечения рака, которые в целом эффективны при множественных раковых заболеваниях и способны избирательно удалять раковые клетки.

[0005] Онколитические вирусы представляют собой вирусы, которые преимущественно инфицируют раковые клетки, они использовались в многочисленных доклинических и клинических исследованиях лечения рака. Использование онколитических вирусов сопряжено с риском неспецифической вирусной инфекции здоровых клеток, что приводит к гибели незлокачественных клеток и тканей. Однако генетические манипуляции с вирусами для использования путей, белков и генов, которые по-разному экспрессируются в нормальной и раковой ткани, могут повысить специфичность этих вирусов и ограничить нецелевую инфекцию и гибель клеток.

[0006] МикроРНК (микроРНК или миР) представляют собой небольшие некодирующие эндогенные РНК, которые регулируют экспрессию генов путем направления своих нацеленных матричных РНК для деградации или трансляционной репрессии. МикроРНК тесно связаны с нормальными клеточными процессами и, следовательно, нарушение регуляции микроРНК способствует развитию широкого спектра заболеваний, включая рак. Многие гены миР расположены в геномных областях, связанных с раком, или на ломких сайтах, что только подтверждает доказательства того, что миР играют ключевую роль в раковых заболеваниях. Экспрессия миР в раковых тканях отличается от таковой в нормальных тканях, что указывает на их возможность иметь причинную связь с онкогенезом. Используя данную дифференциальную экспрессию миР в различных типах опухолей, описанные в данном документе терапевтические средства для лечения рака обладают широким спектром безопасности и эффективности в случаях, когда репликация онколитических вирусов регулируется на основе экспрессии конкретной миР или группы миР. Кроме того, онколитические вирусы, описанные в данном документе, могут также экспрессировать белки, которые способствуют распространению вируса по опухоли, такие как белки, изменяющие экспрессию генов и белки, которые регулируют внеклеточный матрикс, тем самым повышая терапевтическую эффективность.

[0007] В данной области остается потребность в улучшенных онколитических вирусных векторах. Настоящее раскрытие обеспечивает такие улучшенные онколитические вирусные векторы и многое другое.

Сущность изобретения

[0008] Настоящее раскрытие обеспечивает онколитические вирусные векторы, которые демонстрируют улучшенные технические эффекты по сравнению с предшествующим уровнем техники. Авторы настоящего изобретения разработали различные онколитические вирусные векторы и провели обширные эксперименты, описанные в настоящем документе, для идентификации онколитических вирусных векторов с превосходными свойствами для клинического применения при лечении рака.

[0009] Изобретение относится к рекомбинантным вирусным векторам, которые полезны для лечения и профилактики рака. Описанные в данном документе онколитические вирусные векторы способны ограничивать репликацию вирусного вектора в раковых или опухолевых клетках с помощью последовательностей-мишеней микроРНК (миР), которые вставляются в вирусный геном. В конкретных вариантах осуществления, описанных в настоящем документе, вирусные векторы содержат две, три, четыре или более копий последовательности-мишени миР, включенных в один или несколько основных вирусных генов. В других вариантах осуществления вирусные векторы включают в себя включение одной или нескольких полинуклеотидных последовательностей в вирусный геном, продукты которого нарушают функцию онкогенной миР и/или изменяют внеклеточный матрикс. В дополнительных вариантах осуществления вирусные векторы содержат активируемые протеазой антитела, включенные в вирусную частицу, что позволяет осуществлять высокоселективное нацеливание векторов на раковые/опухолевые клетки. В данном документе дополнительно представлены композиции вирусных векторов и способы применения для уничтожения раковых клеток и лечения рака.

[0010] В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантному онколитическому вирусу простого герпеса (HSV), содержащему по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК (ми-РНК), вставленные в локус одного или нескольких основных вирусных генов, где один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 и UL42. В одном варианте осуществления репликация рекомбинантного HSV снижена в нераковой клетке по сравнению с репликацией рекомбинантного HSV в раковой клетке того же типа клеток. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 и UL42. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из UL8, ICP8 и UL30. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из ICP27 и ICP4. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из ICP4, ICP27, UL8, UL42 и ICP34.5.

[0011] В одном варианте осуществления клетка выбрана из группы, состоящей из нервной клетки, сердечной клетки, мышечной клетки и клетки печени. В одном варианте осуществления нервная клетка представляет собой клетку центральной нервной системы, клетку периферической нервной системы, клетку головного мозга или клетку спинного мозга. В одном варианте осуществления мышечная клетка представляет собой поперечно-полосатую мышечную клетку или гладкомышечную клетку. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка представляют собой клетки мозга, и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-137, миР-219a, миР-124, миР -9, миР-487b и миР-128. В одном варианте осуществления по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-137, миР-219a, миР-124 и миР-128. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка представляют собой сердечные или поперечно-полосатые мышечные клетки, и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-208b, миР-1, миР-208a, миР-133a, миР-4284, миР -499a, миР-126, миР-30e, миР-378i, миР-30b и миР-378. В одном варианте осуществления по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-208b, миР-1 и миР-208a. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка являются клетками спинного мозга и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК являются последовательностями-мишенями для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-219a, миР-9, миР-204, миР-577, миР-99a, миР-100, миР-132 и миР-135. В одном варианте осуществления по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-219a, миР-9 и миР-204. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка представляют собой клетки периферической нервной системы, и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-204, миР-1, миР-206, миР-9, миР-99a, миР-199b, миР-145, миР-100, миР-574. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка представляют собой клетки печени, и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-122 и миР-126. В одном варианте осуществления нераковая клетка и раковая клетка представляют собой клетки гладких мышц, и по меньшей мере две последовательности-мишени микроРНК представляют собой последовательности-мишени для микроРНК, выбранных из группы, состоящей из миР-143 и миР-145.

[0012] В одном варианте осуществления две или более последовательности-мишени миР включены в кассету миР-T, которая вставлена в 5'-нетранслируемую область (UTR) или 3'-UTR одного или нескольких основных вирусных генов. В одном варианте осуществления кассета миР-T имеет длину менее 1000 нуклеотидов. В одном варианте осуществления кассета миР-T имеет длину от примерно 25 до примерно 500 нуклеотидов. В одном варианте осуществления кассета миР-T имеет длину от примерно 100 до примерно 500 нуклеотидов.

[0013] В варианте осуществления настоящее раскрытие обеспечивает рекомбинантный вирус онколитического простого герпеса (HSV), содержащий: (i) первую кассету последовательности-мишени микроРНК (ми-РНК) (кассету миР-TS), вставленную в первый вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1 и миР-143; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную во второй вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-128, миР-219a и миР-122; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в третий вирусный ген и содержащую по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-219a, миР-204 и миР-128. В варианте осуществления рекомбинантный HSV дополнительно содержит четвертую кассету миР-TS, вставленную в четвертый вирусный ген, где четвертая кассета миР-TS содержит: (а) по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208b-3p и миР-126; или (b) по меньшей мере 2 последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-217 и миР-126.

[0014] В одном варианте осуществления каждая из кассет миР-TS содержит 4 последовательности-мишени для каждой из соответственных микроРНК. В одном варианте осуществления первый вирусный ген представляет собой ICP4. В одном варианте осуществления второй вирусный ген представляет собой ICP27. В одном варианте осуществления третий вирусный ген представляет собой ICP34.5. В варианте осуществления четвертый вирусный ген представляет собой UL8. В одном варианте осуществления репликация рекомбинантного HSV снижена в нераковой клетке по сравнению с репликацией рекомбинантного HSV в раковой клетке того же типа клеток, где клетка выбрана из группы, состоящей из нервной клетки сердечной клетки, мышечной клетки и клетки печени.

[0015] В одном варианте осуществления первая кассета миР-TS содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 852. В одном варианте осуществления первая кассета миР-TS содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 852. В одном варианте осуществления вторая кассета миР-TS содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 853. В одном варианте осуществления вторая кассета миР-TS содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 853. В одном варианте осуществления третья кассета миР-TS содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 854. В одном варианте осуществления третья кассета миР-TS содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 854. В одном варианте осуществления четвертая кассета миР-TS содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 855. В одном варианте осуществления четвертая кассета миР-TS содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 855.

[0016] В одном варианте осуществления рекомбинантный HSV дополнительно содержит гетерологичную полинуклеотидную последовательность, кодирующую одну или несколько молекул полезной нагрузки. В одном варианте осуществления гетерологичная полинуклеотидная последовательность кодирует полезную нагрузку, выбранную из группы, состоящей из IL-12, CCL4 и CXCL10. В одном варианте осуществления гетерологичная полинуклеотидная последовательность кодирует две или более полезных нагрузок, выбранных из группы, состоящей из IL-12, CCL4 и CXCL10. В одном варианте осуществления гетерологичная полинуклеотидная последовательность кодирует три полезные нагрузки, включающие IL-12, CCL4 и CXCL10.

[0017] В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантному онколитическому вирусу, содержащему одну или несколько последовательностей-мишеней микроРНК (миР), вставленных в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса, где вирус представляет собой вирус простого герпеса (HSV), и где один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из UL8, ICP34.5, UL42, UL19, ICP4 и ICP27. В одном варианте осуществления одна или несколько последовательностей-мишеней миР включены в 5'-нетранслируемую область (UTR) или 3'-UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном из вариантов осуществления последовательность-мишень миР представляет собой последовательность-мишень для миР, выбранной из группы, состоящей из миР-122, миР-184, миР-34a, let7a, миР-145-5p, миР-199a-5p, миР-451a, миР-125a, миР-125a-5p, миР-126-3p, миР-233-3p, миР-143-3p, миР-1-3p, миР-133a-3p, миР-127a-3p, миР-133b, миР-134-3p, миР-124, миР-101, миР-125b, миР-145, миР-559, миР-213, миР-31-5p и миР-205p.

[0018] В одном варианте осуществления одну или несколько копий одной или нескольких последовательностей-мишеней миР вставляют в локус одного или нескольких вирусных генов. В одном варианте осуществления две, три, четыре или более копий одной или нескольких последовательностей-мишеней миР вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов. В одном варианте осуществления репликация вируса снижается или ослабляется в первой клетке по сравнению с репликацией вируса во второй клетке, где первая клетка имеет повышенную экспрессию миР, способной связываться с одной или несколькими последовательностями-мишенями миР по сравнению с экспрессией миР во второй клетке. В одном варианте осуществления уровень экспрессии миР в первой клетке по меньшей мере на 5% превышает уровень экспрессии миР во второй клетке. В одном варианте осуществления первая клетка представляет собой нераковую клетку. В одном варианте осуществления вторая клетка имеет пониженную экспрессию миР, способной связываться с одной или несколькими последовательностями-мишенями миР, по сравнению с экспрессией миР в первой клетке. В одном варианте осуществления уровень экспрессии миР во второй клетке по меньшей мере на 5% ниже уровня экспрессии миР в первой клетке. В одном варианте осуществления вторая клетка представляет собой раковую клетку.

[0019] В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов представляют собой ICP27. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус одного или нескольких вирусных генов, требуемых для репликации вируса. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов представляют собой UL42. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус ICP27 и одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус UL42. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус ICP27 и одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус UL42. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус ICP27 и три копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус UL42. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус ICP27 и четыре копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус UL42.

[0020] В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к рекомбинантному онколитическому вирусу, содержащему: (a) одну или несколько последовательностей-мишеней для микроРНК (миР), вставленных в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса; и (b) один или несколько полинуклеотидов, кодирующих (i) один или несколько белков или олигонуклеотидов, где белки или олигонуклеотиды уменьшают экспрессию или ингибируют функцию конкретного миР, гена или тканевого ингибитора металлопротеиназ (TIMP); или (ii) активируемое протеазой антитело; где вирус представляет собой HSV, где один или несколько вирусных генов выбраны из группы, состоящей из UL42, UL19, ICP4 и ICP27. В одном варианте осуществления миР представляет собой онкогенную миР или ремоделирующую микросреду миР. В одном варианте осуществления онкогенная миР выбрана из миР, перечисленных в таблице 4. В одном варианте осуществления ген представляет собой онкогенный ген. В одном варианте осуществления онкогенный ген выбран из генов, перечисленных в таблице 7. В одном варианте осуществления изобретения ремоделирующая микросреду миР выбрана из миР, перечисленных в таблице 5. В одном варианте осуществления одна или несколько последовательностей-мишеней миР включены в 5'-нетранслируемую область (UTR) или 3'-UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном из вариантов осуществления последовательность-мишень миР представляет собой последовательность-мишень для миР, выбранной из группы, состоящей из миР-122, миР-184, миР-34a, let7a, миР-145-5p, миР-199a-5p, миР-451a, миР-125a, миР-125a-5p, миР-126-3p, миР-233-3p, миР-143-3p, миР-1-3p, миР-133a-3p, миР-127a-3p, миР-133b, миР-134-3p, миР-124, миР-101, миР-125b, миР-145, миР-559, миР-213, миР-31-5p и миР-205p.

[0021] В одном варианте осуществления одну или несколько копий одной или нескольких последовательностей-мишеней миР вставляют в локус одного или нескольких вирусных генов. В одном варианте осуществления две, три, четыре или более копий одной или нескольких последовательностей-мишеней миР вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов представляют собой ICP27. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. В одном варианте осуществления один или несколько вирусных генов представляют собой UL42. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус ICP27 и одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус UL42. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус ICP27 и одна копия последовательности-мишени миР-125a вставляется в локус UL42. В одном варианте осуществления одна копия последовательности-мишени миР-122 вставляется в локус ICP27 и три копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус UL42. В одном варианте осуществления четыре копии последовательности-мишени миР-122 вставляются в локус ICP27 и четыре копии последовательности-мишени миР-125a вставляются в локус UL42.

[0022] В одном варианте осуществления TIMP выбран из TIMP1, TIMP2, TIMP3 из TIMP4. В одном варианте осуществления олигонуклеотид представляет собой shRNA (кшРНК) или олигонуклеотид-ловушку. В одном варианте осуществления белок представляет собой нуклеазу, активирующее T-клетки биспецифичное антитело (BiTE), антииммуносупрессивный белок или иммуногенный антиген. В одном варианте осуществления нуклеаза выбрана из эндонуклеазы, связанной с кластерными короткими палиндромными повторами, разделенными регулярными промежутками (CRISPR), нуклеазы цинкового пальца (ZFN) или эффекторной нуклеазы, подобной активаторам транскрипции (TALEN). В одном варианте осуществления CRISPR-ассоциированная эндонуклеаза выбрана из SpCas9, SpCas9-HF1, SpCas9-HF2, SpCas9-HF3, SpCas9-HF4, SaCas9, FnCpf, FnCas9, eSpCas9, C2C1, C2C3, Cpf1, Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csyl, Csy2, Csy3, Csel, Cse2, Cscl, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmrl, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csbl, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csxl, Csxl5, Csfl, Csf2, Csf3 и Csf4. В одном варианте осуществления рекомбинантный вирус дополнительно содержит гетерологичный полинуклеотид, кодирующий tracr-РНК (trРНК) и crispr-РНК (crРНК), где crРНК нацелена на последовательность геномной ДНК, кодирующую миР или TIMP, и где trРНК способствует связыванию и активации CRISPR-ассоциированной эндонуклеазы.

[0023] В одном варианте осуществления антииммуносупрессивный белок представляет собой антирегуляторный белок T-клеток (Treg) или белок-антагонист супрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC). В одном варианте осуществления антииммуносупрессивный белок представляет собой блокатор, полученный из VHH, или BiTE, полученный из VHH. В одном варианте осуществления белок индуцирует противоопухолевой иммунный ответ. В одном варианте осуществления белок связывается с антигеном, экспрессируемым на поверхности клетки, где антиген выбран из группы, состоящей из EpCAM, CTLA-4, PD1, FGF2, FGFR/FGFR2b, рецептора эндотелина B и SEMA4D. В одном варианте осуществления белок выбран из фолата, IFNβ, A2A, CCL5, CD137, CD200, CD38, CD44, CSF-1R, CXCL10, CXCL13, IL-12, IL-15, IL-2, IL- 21, IL-35, ISRE7, LFA-1, NG2 (также известного как SPEG4), белка SMAD, STING, TGFβ и VCAM1. В одном варианте осуществления по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело включено в гликопротеиновую вирусную оболочку. В одном варианте осуществления активируемое протеазой антитело активируется протеазой, выбранной из цистеинового катепсина, аспарагинового катепсина, калликреина (hK), сериновой протеазы, каспазы, матричной металлопротеиназы (ММР) и металлопротеиназы дезинтегрина (ADAM). В одном варианте осуществления протеаза выбрана из катепсина K, катепсина B, катепсина L, катепсина E, катепсина D, hK1, PSA (hK3), hK10, hK15, uPA, uPAR, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28 или протеазы, указанной в таблице 6. В одном варианте осуществления активируемое протеазой антитело связывается с белком, показывающим более высокую экспрессию в раковой клетке или в микросреде рака, чем в нераковой клетке или в нераковой микросреде. В одном варианте осуществления активируемое протеазой антитело связывает NKG2D, c-met, HGFR, CD8, сульфат гепарана, VSPG4 (также известный как NG2), EGFR, EGFRvIII, CD133, CXCR4, карциноэмбриональный антиген (CEA), CLC-3, аннексин II, рецептор трансферрина человека или EpCAM.

[0024] В одном варианте осуществления один или несколько полинуклеотидов вставлены в локус гена вирусного генома или вставлены между двумя локусами гена вирусного генома. В одном варианте осуществления локусы вирусного гена выбирают из группы, состоящей из области соединения внутренних повторов (включающей по одной копии каждого из промоторов диплоидных генов ICP0, ICP34.5, LAT, ICP4 и ICP47), ICP0, LAT, UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и US12.

[0025] В одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую описанный в данном документе онколитический вирус. В одном варианте осуществления настоящее раскрытие обеспечивает вирусный штамм, содержащий описанный в данном документе онколитический вирус. В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей онколитический вирус, описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0026] В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к способу уничтожения раковой клетки, включающему в себя воздействие на раковые клетки онколитического вируса, описанного в данном документе, или его композиций в условиях, достаточных для того, чтобы онколитический вирус инфицировал и реплицировался в указанной раковой клетке, и где репликация онколитического вируса в раковых клетках приводит к гибели клеток. В одном варианте осуществления раковая клетка имеет пониженную экспрессию конкретной миР, способной связываться с одной или несколькими последовательностями-мишенями миР, по сравнению с экспрессией миР в нераковой клетке. В одном варианте осуществления уровень экспрессии указанной миР в раковой клетке по меньшей мере на 5% меньше, чем уровень экспрессии указанной миР в нераковой клетке. В одном варианте осуществления репликация онколитического вируса увеличивается или поддерживается в раковых клетках с пониженной экспрессией указанной миР, способной связываться с одной или несколькими последовательностями-мишенями миР. В одном варианте осуществления репликация вируса в раковых клетках по меньшей мере на 5% выше по сравнению с репликацией вируса в нераковых клетках. В одном варианте осуществления клетка представляет собой клетку in vivo. В одном варианте осуществления клетка находится внутри опухоли.

[0027] В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к способу лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение описанного в данном документе онколитического вируса или его композиций субъекту, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления субъект представляет собой мышь, крысу, кролика, кошку, собаку, лошадь, примата, не являющегося человеком, или человека. В одном варианте осуществления онколитический вирус или его композиции вводят внутривенно, подкожно, внутриопухолево, внутримышечно или интраназально. В одном варианте осуществления рак выбран из рака легких, рака молочной железы, рака яичников, рака шейки матки, рака предстательной железы, рака яичка, колоректального рака, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака желудка, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, злокачественной глиомы, глиобластомы, меланомы, В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, диффузной крупной В-клеточной лимфомы (DLBCL) и лимфомы в краевой зоне (MZL). В одном варианте осуществления рак легких представляет собой мелкоклеточный рак легких или немелкоклеточный рак легких. В одном варианте осуществления рак печени представляет собой гепатоцеллюлярную карциному (HCC).

[0028] В одном варианте осуществления рекомбинантный онколитический вирус, описанный в настоящем документе, дополнительно содержит молекулу полезной нагрузки, где белок или молекула полезной нагрузки представляет собой активирующее T-клетки биспецифичное антитело к FAP/CD3. В одном варианте осуществления рекомбинантный онколитический вирус, описанный в данном документе, дополнительно содержит молекулу полезной нагрузки, где белок или молекула полезной нагрузки представляет собой белок против PD1-Fc-41BBL.

Краткое описание графических материалов

[0029] Фиг. 1 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани мозга, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0030] Фиг. 2 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани мочевого пузыря, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0031] Фиг. 3 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани молочной железы, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0032] Фиг. 4 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани ободочной кишки, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0033] Фиг. 5 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в глиобластоме и нераковой ткани мозга, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0034] Фиг. 6 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани головы и шеи, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0035] Фиг. 7 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани легких, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0036] Фиг. 8 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в раковой и нераковой ткани поджелудочной железы, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0037] Фиг. 9 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в невриноме и не-невриномной ткани, соответствующей 25 выбранным микроРНК.

[0038] Фиг. 10A - фиг. 10C иллюстрируют репортерную генную систему экспрессии и ослабления микроРНК, описанную в примере 2. На фиг. 10А показана схема плазмиды tet-репрессора pTetR, которая индуцирует экспрессию плазмиды экспрессии микроРНК. На фиг. 10B показана схема плазмиды экспрессии микроРНК pTF-002, содержащей tet-индуцируемую кассету экспрессии mCherry и микроРНК. На фиг. 10С показана схема репортера ослабления микроРНК pTF-004, обеспечивающего считывание дестабилизированного GFP (dsGFP).

[0039] На фиг. 11 показаны экспрессия и ослабление миР-122 с использованием репортерной системы, показанной на фиг. 10 и описанной в примере 2.

[0040] На фиг. 12 показано ослабление GFP, опосредованное миР-122, миР-184, миР-34a и Let7a, с использованием репортерной системы, показанной на фиг. 10 и описанной в примере 2. Обведенные ячейки указывают на пониженные уровни экспрессии GFP.

[0041] Фиг. 13 иллюстрирует экспрессию миР-122, миР-184, миР-34a и Let7a, на которые указывает экспрессия mCherry, с использованием репортерной системы, показанной на фиг. 10 и описанной в примере 2.

[0042] Фиг. 14 иллюстрирует опосредованное миР-122, миР-124, миР-145, миР-199 и миР-451 ослабление GFP с использованием репортерной системы, показанной на фиг. 10 и описанной в примере 2. Обведенные ячейки указывают на пониженные уровни экспрессии GFP.

[0043] Фиг. 15 иллюстрирует экспрессию миР-122, миР-124, миР-145, миР-199 и миР-451, на которые указывает экспрессия mCherry, с использованием репортерной системы, показанной на фиг. 10 и описанной в примере 2.

[0044] На фиг. 16 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-122 и миР-184.

[0045] На фиг. 17 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-34a и миР-184.

[0046] На фиг. 18 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного Let7a и миР-184.

[0047] На фиг. 19 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-124 и миР-184.

[0048] На фиг. 20 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-145 и миР-184.

[0049] На фиг. 21 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-199 и миР-451.

[0050] На фиг. 22 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-125 и миР-451.

[0051] На фиг. 23 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-126 и миР-451.

[0052] На фиг. 24 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-127 и миР-451.

[0053] На фиг. 25 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-133 и миР-451.

[0054] На фиг. 26 показано количественное определение флуоресценции GFP, ослабленного миР-223 и миР-451.

[0055] Фиг. 27A - фиг. 27D иллюстрируют основанное на флуоресценции количественное определение вызванного миР-125 ослабления HSV в нераковых постмитотических клетках легких и раковых клетках A253. На фиг. 27А показана флуоресцентная количественная оценка ослабления HSV в постмитотических клетках легких. На фиг. 27B показана флуоресцентная количественная оценка ослабления HSV в клетках A253. На фиг. 27C показана количественная оценка ослабления HSV на основе кПЦР в постмитотических клетках легких. На фиг. 27D показана количественная оценка ослабления HSV в клетках A253 на основе кПЦР.

[0056] Фиг. 28A - фиг. 28B иллюстрируют количественное определение вызванного миР-145 ослабления HSV в клетках HCC1395 по сравнению с клетками A253 на основе флуоресценции (фиг. 28A) и кПЦР (фиг. 28B).

[0057] Фиг. 29A - фиг. 29B иллюстрирует количественное определение вызванного миР-199a-5p в сравнении с вызванным миР-143-3p ослаблением HSV на основе флуоресценции (фиг. 29A) и кПЦР (фиг. 29B) в нормальных клетках легких.

[0058] Фиг. 30A - фиг. 30C иллюстрируют экспрессию микроРНК-125a (фиг. 30A) и микроРНК-122 (фиг. 30B) и их влияние на репликацию вируса (фиг. 30C) в клеточных линиях A253, Huh7 и Hep3B.

[0059] На фиг. 31 показан вестерн-блот, иллюстрирующий снижение вирусного распространения и экспрессии белка после заражения HSV, содержащим миР-T122 и/или миР-T125a, в клетках, экспрессирующих миР-122 и миР-125a.

[0060] Фиг. 32A - фиг. 32D иллюстрируют влияние экспрессии микроРНК на миР-ослабленную репликацию HSV. На фиг. 32A - фиг. 32B показана повышенная внутриклеточная экспрессия миР-125a и миР-122 после трансфекции с использованием имитации миР-125a (фиг. 32A) или имитации миР-122 (фиг. 32B). На фиг. 32C показано ослабление репликации онколитических векторов HSV с родственными последовательностями-мишенями миР в различных генетических локусах, показанное посредством флуоресцентных изображений и количественного определения флуоресценции GFP (фиг. 32D).

[0061] Фиг. 33 иллюстрирует схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных расстройств. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3'-UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть помещена в 5 'UTR)

[0062] На фиг. 34 показано схематическое изображение ослабленного ICP27-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных нарушений. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP27:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3'-UTR гена ICP27 (также может быть помещена в 5 'UTR)

[0063] На фиг. 35 показано схематическое изображение ослабленного UL19-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных нарушений. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; UL19:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3'-UTR гена UL19 (также могут быть вставлены в 5 'UTR).

[0064] На фиг. 36 показано схематическое изображение ослабленного UL19-TмикроРНК и ICP27-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных нарушений. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; UL19: TмикроРНК и ICP27: TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3'-UTR генов UL19 и ICP27 (также могут быть вставлены в 5'-UTR)

[0065] На фиг. 37 показано схематическое изображение ослабленного UL19-TмикроРНК и ICP4-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных нарушений. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; UL19: TмикроРНК и ICP4: TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3'-UTR генов UL19 и ICP4 (также могут быть вставлены в 5'-UTR).

[0066] На фиг. 38 показано схематическое изображение ослабленного UL19-TмикроРНК, ICP27-TмикроРНК и ICP4-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака или доброкачественных гиперпролиферативных нарушений. gB: NT: двойная мутация, усиливающая проникновение вируса в ген gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включающей одну копию гена ICP4; UL19:TмикроРНК, ICP27:TмикроРНК и ICP4:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145 и т. д.) в 3' UTR генов UL19, ICP27 и ICP4 (также могут быть вставлены в 5' UTR).

[0067] На фиг. 39 показано схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК редактирующего геном вектора HSV для лечения рака. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145) в 3'-UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть помещена в 5 'UTR); промотор Pol II: конститутивный (CAG, UbC, EF1a, PGK) или специфичный для клетки (например, TRPV1, Nav1.7, hSYN); эндонуклеаза: CRISPR-ассоциированная эндонуклеаза (например, SpCas9, SaCas9, FnCpf1, FnCas9 и т. Д.); поли(А): сигнал полиаденилирования (например, bGH); gRNA: одиночный гибрид crRNA-trRNA (DR-crRNA-DR-trRNA); crRNA, нацеленная на онкогенную микроРНК (например, миР-17, миР-21, миР-155); Промотор Pol III: например, U6, H1, 7SK.

[0068] На фиг. 40 показано схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК редактирующего геном, ремоделирующего микросреду вектора HSV для лечения рака. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4:TмикроРНК: вставка последовательностей-мишеней микроРНК (например, let-7, миР-34a, миР-101, миР-125b, миР-145) в 3'-UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть помещена в 5 'UTR); промотор Pol II: конститутивный (CAG, UbC, EF1a, PGK) или специфичный для клетки (например, TRPV1, Nav1.7, hSYN); эндонуклеаза: CRISPR-ассоциированная эндонуклеаза (например, SpCas9, SaCas9, FnCpf1, FnCas9 и т. Д.); поли (А): сигнал полиаденилирования (например, bGH); gRNA2: crRNA, нацеленная на ремоделующую микросреду микроРНК (например, миР-143, миР-218) или TIMP (например, TIMP1, TIMP2); промотор Pol III: например, U6, H1, 7SK.

[0069] На фиг. 41 показано схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК и ICP27-TмикроРНК вектора HSV для лечения рака поджелудочной, легких и рака ободочной кишки. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4:TмикроРНК: вставка кассеты последовательности-мишени миР-124 в 3 'UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть вставлена в 5' UTR); ICP27:TмикроРНК: вставка кассет последовательностей-мишеней миР-451a, миР-143-3p и миР-559 в 3'-UTR гена ICP-27 (также могут быть вставлены в 5'-UTR).

[0070] На фиг. 42 показано схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК и ICP27-TмикроРНК вектора HSV для лечения различных типов рака. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4: TмикроРНК: вставка кассеты последовательности-мишени миР-124 в 3 'UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть вставлена в 5' UTR); ICP27:TмикроРНК: вставка кассет последовательности-мишени миР-451a, миР-145-5p и миР-559 в 3'-UTR гена ICP-27 (также могут быть вставлены в 5'-UTR).

[0071] На фиг. 43 показано схематическое изображение ослабленного ICP4-TмикроРНК и ICP27-TмикроРНК вектора HSV для лечения невриномы. gB: NT: усиливающая проникновение вируса двойная мутация в гене gB; ВАС: loxP-фланкированные последовательности с резистентностью к хорамфениколу и lacZ; Δjoint: делеция полной внутренней области повтора, включая одну копию гена ICP4; ICP4: TмикроРНК: вставка кассеты последовательности-мишени миР-124 в 3' UTR оставшегося гена ICP4 (также может быть вставлена в 5' UTR); ICP27: TмикроРНК: вставка кассет последовательности-мишени миР-205p, миР-141-5p и миР-31-5p в 3' UTR гена ICP-27 (также могут быть вставлены в 5' UTR).

[0072] На фиг. 44 показана схема ослабленного миР вируса HSV, в котором множество копий сайтов-мишеней миР-122, миР-125a и/или миР-124 вставлены в ICP27, UL42 и/или ICP4.

[0073] На фиг. 45 показана схема ослабленного миР вируса HSV (ONCR-157), в котором кассеты сайтов-мишеней миР вставлены в UL8, ICP12, ICP4 и ICP34.5.

[0074] На фиг. 46 показана схема ослабленного миР вируса HSV (ONCR-159), в котором кассеты сайтов-мишеней миР вставлены в UL8, ICP12, ICP4 и ICP34.5.

[0075] На фиг. 47А показана интенсивность GFP, генерируемая репортерным вирусом, сконструированным для экспрессии GFP в клетках, обработанных объединенными миРНК против различных вирусных генов. На фиг. 47B показаны результаты того же анализа для отдельных миРНК.

[0076] На фиг. 48А и 48В показана интенсивность GFP, генерируемая репортерным вирусом, сконструированным для экспрессии GFP в клетках, обработанных объединенными миРНК против различных вирусных генов с использованием вектора HSV ONCR-003 (слева) или ONCR-010 (справа).

[0077] На фиг. 49 показан вестерн-блоттинг для определения экспрессии вирусных белков в клетках, инфицированных вектором HSV и обработанных миРНК против вирусных генов в соответствии с указанным. Положительным контролем для вестерн-блоттинга является бета-актин.

[0078] На фиг. 50A и 50B показаны данные анализа Nanostring нормальной ткани мозга по сравнению со злокачественной тканью в виде отношения экспрессии микроРНК (фиг. 50A) и нормализованных количеств (фиг. 50B).

[0079] На фиг. 51А и 51В показаны данные анализа Nanostring нормальной ткани сердца по сравнению со злокачественной тканью в виде отношения экспрессии микроРНК (фиг. 51A) и нормализованных количеств (фиг. 51B).

[0080] На фиг. 52A показаны данные анализа Nanostring нормальной ткани спинного мозга по сравнению со злокачественной тканью в виде отношения экспрессии микроРНК. На фиг. 52A и 52B показывают данные анализа Nanostring нормальной нервной или ганглиозной ткани по сравнению со злокачественной тканью в виде отношения экспрессии микроРНК (фиг. 52A) и нормализованных количеств (фиг. 52C).

[0081] На фиг. 53A и 53B показаны тесты анализа активности люциферазы кассет миР-TS для кассеты 1 (фиг. 53A) или кассеты 2 (фиг. 53B).

[0082] На фиг. 54A - фиг. 54G показана цитотоксичность онколитических вирусных векторов HSV ONCR-125, ONCR-131, ONCR-142 и ONCR-157 в линиях раковых клеток SW837 (фиг. 54A), SKMEL28 (фиг. 54B), COLO 205 (фиг. 54C), A375 (фиг. 54D), H446 (фиг. 54E), BXPC3 (фиг. 54F) и BT549 (фиг. 54G).

[0083] На фиг. 55 показан эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в пояснениях к фигуре) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли. Вектор ONCR-133 показал значительное ингибирование роста инъецированных опухолей по сравнению с контрольными группами, получавшими носитель (р <0,0001). Обработка ONCR-133 также значительно ингибировала рост опухолей у неинъецированных опухолей (р <0,005), что указывает на усиление «эффекта свидетеля».

[0084] На фиг. 56 показан эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в пояснениях к фигуре) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли. Мыши, обработанные ONCR-133+ONCR-007 (конструкция HSV, экспрессирующая ULBP3). а также ONCR-133+ONCR-002 (конструкция HSV, не экспрессирующая каких-либо дополнительных молекул полезной нагрузки) продемонстрировали значительное ингибирование роста опухоли по сравнению с контролями, обработанным носителем.

[0085] На фиг. 57 показан эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в пояснениях к фигуре) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли. Дополнительная экспрессия CXCL10 в группе, обработанной ONCR-106+ONCR-113, не усиливала ингибирование роста опухоли ни в инъецированных, ни в неинъецированных опухолях по сравнению с мышами, получавшими ONCR-031+ONCR-113.

[0086] На фиг. 58 показан эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в ) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли. Дополнительная экспрессия CXCL10 в группе, обработанной ONCR-106+ONCR-113, не усиливала ингибирование роста опухоли ни в инъецированных, ни в неинъецированных опухолях по сравнению с мышами, получавшими ONCR-031+ONCR-113.

[0087] На фиг. 59A - фиг. 59B показана репликация инъецированного вируса, происходящая только в инъецированной опухоли, но не в неинъецированной опухоли, что указывает на то, что противоопухолевый эффект, наблюдаемый в неинъецированной опухоли, является иммуноопосредованным. Данные представлены на графике в виде необработанных копий генома на микрограмм ДНК (фиг. 59A) или в виде нормализованной экспрессии (фиг. 59B). HSV был обнаружен в инъецированных опухолях, но не в неинъецированных опухолях, что указывает на то, что ингибирование роста опухоли, наблюдаемое в неинъецированных опухолях, было вызвано не распространением вируса, а, скорее, результатом «эффекта свидетеля» от введения вируса.

[0088] На фиг. 60A - фиг. 60C показана экспрессия полезной нагрузки, достигшая максимума в инъецированных опухолях через 24 часа после обработки и уменьшавшаяся после этого.

[0089] На фиг. 61A- фиг. 61C показаны уровни полезных нагрузок в сыворотке мышей, обработанных ONCR-153, где наблюдалась экспрессия только CXCL10.

[0090] На фиг. 62А показан уровень экспрессии интерферона гамма в инъецированных и неинъецированных опухолях. Обработка мышей ONCR-153 индуцировала внутриопухолевый ответ IFNγ как в инъецированных, так и в неинъецированных опухолях. На фиг. 62B показан уровень экспрессии гамма-интерферона в плазме животного-хозяина.

[0091] На фиг. 63 показано эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в пояснениях к фигуре) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли.

[0092] На фиг. 64 показано эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в пояснениях к фигуре) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли.

[0093] На фиг. 65 показано эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в условных обозначениях) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли.

[0094] На фиг. 66А показано эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в условных обозначениях) в эксперименте с ксенографом на мышах. На фиг. 66B показано уменьшение количества метастазов в легкое. На фиг. 66C показаны изображения ткани легких у животных при обработке контрольным (ФСБ) носителем или вектором.

[0095] На фиг. 67 показано эффект носителя на ингибирование роста опухоли по сравнению с вирусом (как указано в условных обозначениях) на мышиной модели ксенотрансплантата. Увеличение объема инъецированной опухоли сравнивается с увеличением объема неинъецированной опухоли. Обработка ONCR-152 вместе с -139 продемонстрировала усиленный эффект в ингибировании роста опухоли по сравнению с обработкой только ONCR-139.

Подробное описание сущности изобретения

[0096] В некоторых аспектах настоящее изобретение использует дифференциальные профили экспрессии миР для эффективного ограничения репликации вирусного вектора до репликации только в опухолевых клетках путем включения последовательностей-мишеней миР в один или несколько генов, необходимых для репликации вируса. В конкретных вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат две, три, четыре или более копий последовательности-мишени миР, включенной в один или несколько вирусных генов. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы также нарушают экспрессию специфических микроРНК для уменьшения пролиферации опухоли, метастазирования и/или ремоделирования микросреды опухоли для обеспечения усиления распространения вируса. В некоторых вариантах осуществления вирусные векторы, описанные в настоящем документе, охватывают использование поверхностных молекул на вирусных векторах для облегчения нацеливания на опухолевые клетки. Такие аспекты могут применяться по отдельности или в комбинации для разработки вирусных векторов, потенциально способных лечить широкий спектр типов рака одним вирусным вектором. Как таковое, изобретение дополнительно охватывает рекомбинантные онколитические вирусные векторы для использования в лечении и профилактике заболеваний и расстройств (например, рака). В некоторых вариантах осуществления данное изобретение использует экспрессию эндогенной микроРНК (миР) для предоставления безопасного и эффективного рекомбинантного вирусного вектора, подходящего для лечения широкого спектра раковых заболеваний.

[0097] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие заявленный предмет. Все документы или части документов, приведенные в данном документе, в том числе, без ограничения, патенты, заявки на патент, статьи, книги и научные труды включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте для любой цели. В случае если один или несколько из включенных документов или частей документов определяют термин, который противоречит определению этого термина в приложении, определение, приведенное в данной заявке, является превалирующим. Однако упоминание любых ссылок, статей, публикаций, патентов, патентных публикаций и патентных заявок, цитируемых в данном документе не является и не должно восприниматься как признание или любая форма предположения, что они составляют действительный уровень техники или образуют часть общедоступных сведений в любой стране мира.

Определения

[0098] В настоящем описании любой диапазон концентрации, процентный диапазон, диапазон отношения или целочисленный диапазон следует понимать как включающий значение любого целого числа в указанном диапазоне и, при необходимости, части целого числа (например, одна десятая и одна сотая часть целого числа), если не указано иное. Следует понимать, что термины в единственном числе, используемые в данном документе, относятся к «одному или нескольким» из перечисленных компонентов, если не указано иное. Использование альтернативы (например, «или») следует понимать как означающее один из вариантов, оба варианта или любую из комбинаций в качестве альтернативы. Используемые в данном описании термины «включать» и «содержать» используются как синонимы. Используемый в данном документе термин «множество» может относиться к одному или нескольким компонентам (например, к одной или нескольким последовательностям-мишеням микроРНК).

[0099] При использовании в данной заявке термины «примерно» и «приблизительно» используются в качестве эквивалентов. Любые цифры, используемые в данной заявке с или без дополнения «примерно/приблизительно», предназначены для охвата любых нормальных вариаций, оцененных специалистом в соответствующей области техники. В некоторых вариантах осуществления термин «приблизительно» или «около» относится к диапазону значений, которые попадают в пределы 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или менее в любую сторону (больше или меньше) от установленного эталонного значения, если не указано иное или иное не очевидно из контекста (за исключением случаев, когда такое число превышало бы 100% от возможного значения).

[00100] «Уменьшение» или «снижение» относится к уменьшению или снижению определенного значения по меньшей мере на 5%, например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40., 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 или 100% по сравнению с контрольным значением. Уменьшение или снижение конкретного значения также может быть представлено как кратное изменение значения по сравнению с контрольным значением, например, уменьшение по меньшей мере в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000 раз или более по сравнению с контрольным значением.

[00101] «Увеличение» относится к увеличению определенного значения по меньшей мере на 5%, например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 100, 200, 300, 400, 500% или более по сравнению с контрольным значением. Увеличение конкретного значения также может быть представлено как кратное изменение значения по сравнению с контрольным значением, например увеличение по меньшей мере в 1 раз, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000 раз или более, увеличиваются по сравнению с уровнем контрольного значения.

[00102] Термин «идентичность последовательности» относится к проценту оснований или аминокислот между двумя полинуклеотидными или полипептидными последовательностями, которые являются одинаковыми и находятся в одинаковом относительном положении. Как таковая, одна полинуклеотидная или полипептидная последовательность имеет определенный процент идентичности последовательности по сравнению с другой полинуклеотидной или полипептидной последовательностью. Для сравнения последовательностей, как правило, одна последовательность служит эталонной последовательностью, с которой сравнивают исследуемые последовательности. Термин «контрольная последовательность» относится к молекуле, с которой сравнивается тестовая последовательность.

[00103] «Комплементарный» относится к способности к спариванию посредством стэкинг-взаимодействия и специфической водородной связи между двумя последовательностями, содержащими природные или не встречающиеся в природе (например, модифицированные, как описано выше) основания (нуклеозиды) или их аналоги. Например, если основание в одном положении нуклеиновой кислоты способно к водородному связыванию с основанием в соответствующем положении в мишени, то основания считаются комплементарными друг другу в этом положении. Нуклеиновые кислоты могут содержать универсальные основания или инертные спейсеры с удаленными азотными основаниями, которые не обеспечивают положительного или отрицательного вклада в водородные связи. Спаривание оснований может включать в себя как каноническое спаривание оснований по Уотсону - Крику, так и спаривание оснований, отличное от спаривания по Уотсону - Крику (например, спаривание оснований по Вобблу и спаривание оснований по Хугстину). Понятно, что для комплементарных пар оснований основания аденозинового типа (A) являются комплементарными основаниям тимидинового типа (T) или основаниям урацилового типа (U), что основания цитозинового типа (C) являются комплементарными основаниям гуанозинового типа (G), и что универсальные основания, такие как 3-нитропиррол или 5-нитроиндол, могут гибридизоваться и считаться комплементарными любым A, C, U или T. Nichols et al. Nature, 1994; 369:492-493 и Loakes et al., Nucleic Acids Res., 1994; 22:4039-4043. Инозин (I) также считается в данной области техники универсальной основой и считается комплементарным любому A, C, U или T. См. Watkins and SantaLucia, Nucl. Acids Research, 2005; 33 (19): 6258-6267.

[00104] Термин «функционально связанный» относится к взаимному расположению, в котором описываемые таким образом компоненты находятся во взаимосвязи, обеспечивающей их функционирование предполагаемым для них образом. Например, промотор является функционально соединенным с полинуклеотидной последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию полинуклеотидной последовательности.

[00105] Термин «субъект» включает животных, таких как, например, млекопитающие. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой примата. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах субъектами является домашний скот, такой как крупный рогатый скот, овцы, козы, коровы, свиньи и тому подобное; или одомашненные животные, такие как собаки и кошки. В некоторых вариантах осуществления (например, особенно в контексте исследований) субъектами являются грызуны (например, мыши, крысы, хомяки), кролики, приматы или свиньи, такие как инбредные свиньи и тому подобное. Термины «субъект» и «пациент» применяют в данном документе взаимозаменяемо.

[00106] Термин «эффективное количество» относится к минимальному количеству агента или композиции, требуемому для достижения определенного физиологического эффекта (например, количества, необходимого для увеличения, активации и/или усиления конкретного физиологического эффекта). Эффективное количество конкретного агента может быть представлено различными способами в зависимости от природы агента, например, масса/объем, количество клеток/объем, частицы/объем, (масса агента)/(масса субъекта), количество клеток/(масса субъекта) или частицы/(масса субъекта). Эффективное количество конкретного агента также может быть выражено в виде концентрации полумаксимального эффекта (ЕС₅₀), которая относится к концентрации агента, которая приводит к величине конкретного физиологического ответа, который находится на полпути между контрольным уровнем и максимальный уровнем ответа.

[00107] Фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения таких соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые в рамках рационального медицинского решения, являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерно разумному соотношению пользы/риска.

[00108] Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель» включает в себя, без ограничения, любой адъювант, носитель, наполнитель, глидант, подсластитель, разбавитель, консервант, краситель/пигмент, усилитель вкуса, поверхностно-активное вещество, смачивающий агент, диспергирующий агент, суспендирующий агент, стабилизатор, изотонический агент, растворитель, поверхностно-активное вещество и/или эмульгатор, который был одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США как приемлемый для использования у людей и/или домашних животных.

[00109] Используемый в данном документе термин «онколитический вирус» относится к вирусу, который был модифицирован для преимущественного инфицирования раковых клеток или естественным образом преимущественно инфицировал раковые клетки.

[00110] Термины «микроРНК», «микроРНК» и «миР» используются в данном документе взаимозаменяемо и относятся к небольшим некодирующим эндогенным РНК длиной около 21-25 нуклеотидов, которые регулируют экспрессию генов, направляя свои нацеленные матричные РНК (мРНК) для деградации или поступательной репрессии.

[00111] «Основной вирусный ген» в контексте настоящего описания относится к вирусному гену, который необходим для одной или нескольких основных вирусных функций, таких как репликация вируса, упаковка вируса или инфекционная способность вируса.

[00112] Термин «вектор» используется в данном документе для обозначения молекулы нуклеиновой кислоты, способной переносить или транспортировать другую молекулу нуклеиновой кислоты. Перенесенная нуклеиновая кислота обычно связана, например, вставлена в молекулу нуклеиновой кислоты, являющуюся вектором. Вектор может включать последовательности, которые направляют автономную репликацию в клетке, или может включать последовательности, подходящие для интеграции в ДНК клетки-хозяина.

[00113] Общие методы молекулярной и клеточной биохимии можно найти в таких стандартных руководствах как Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed. (Sambrook et al., HaRBor Laboratory Press 2001 ); Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed. (Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons 1999); Protein Methods (Bollag et al., John Wiley & Sons 1996); Nonviral Vectors for Gene Therapy (Wagner et al. eds., Academic Press 1999); Viral Vectors (Kaplift & Loewy eds., Academic Press 1995); Immunology Methods Manual (I. Lefkovits ed., Academic Press 1997); и Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology (Doyle & Griffiths, John Wiley & Sons 1998), раскрытие которых включено в настоящий документ посредством ссылки.

Онколитические вирусы

[00114] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантным онколитическим вирусам, в которых одна или несколько копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК (миРНК) встраиваются в локус одного или нескольких основных вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Примеры онколитических вирусов известны в данной области, включая, но не ограничиваясь этим, вирус простого герпеса (HSV), аденовирус, вирус полиомиелита, вирус коровьей оспы, вирус кори, вирус везикулярного стоматита, ортомиксовирус, парвовирус, вирус марабы или вирус Коксаки. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе онколитические вирусы упоминаются как рекомбинантные вирусные векторы или онколитические векторы.

[00115] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе онколитический вирус представляет собой вирус герпеса (например, вирус простого герпеса (например, HSV-1 или HSV-2)), аденовирус, вирус полиомиелита, вирус коровьей оспы, вирус кори, везикулярный стоматит вирус, ортомиксовирус, парвовирус, вирус марабы или вирус Коксаки. В конкретных вариантах осуществления рекомбинантный вирусный вектор представляет собой HSV, способный к репликации селективного к опухоли вектора, как описано в международной публикации PCT № WO 2015/066042, которая включена в качестве ссылки во всей своей полноте.

[00116] Векторы на основе HSV и способы их конструирования описаны, например, в патенте США №№ 7,078,029, 6,261,552, 5,998,174, 5,879,934, 5,849,572, 5,849,571, 5,837,532, 5,804,413 и 5,658,724, а также в международных заявках на патент WO 91/02788, WO 96/04394, WO 98/15637 и WO 99/06583, которые включены в настоящий документ. по ссылке во всей их полноте. Последовательность HSV опубликована (регистрационный номер NCBI NC_001806; см. также McGoech et al., J. Gen. Virol, 69 (PT 7), 1531-1574 (1988)), что может облегчить конструирование векторов на основе HSV в соответствии с изобретением. В некоторых случаях онколитический вирус по изобретению представляет собой вирус простого герпеса (HSV) и содержит делецию области внутреннего повтора (соединение), включающую по одной копии каждого из диплоидных генов ICP0, ICP34.5, LAT и ICP4 вместе с промотором для гена ICP47.

[00117] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вирусный вектор по изобретению представляет собой HSV, который показывает улучшенное проникновение в клетки посредством прямой инфекции и/или латерального распространения. В одном аспекте векторы HSV по настоящему изобретению могут непосредственно инфицировать клетки посредством взаимодействия с клеточными белками, отличными от типичных медиаторов инфекции HSV (например, кроме нектина-1, HVEM или протеогликанов хондроитинсульфата/ гепарансульфата). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вирусный вектор по изобретению представляет собой HSV и дополнительно содержит мутацию гена gB или gH, которая облегчает проникновение вектора через неканонические рецепторы. В другом аспекте изобретение относится к вектору HSV, дополнительно содержащему мутантные гликопротеины gH, которые демонстрируют латеральное распространение в клетках, обычно устойчивых к латеральному распространению HSV, таких как клетки, в которых отсутствуют рецепторы gD. В некоторых вариантах осуществления вектор HSV по изобретению содержит один или несколько мутантных белков gB или gH, как описано в публикации патента США № 2013/0096186, которая полностью включена в настоящее описание посредством ссылки. В определенных аспектах мутантный белок входа в векторе HSV представляет собой гликопротеин, участвующий в проникновении вируса, такой как gB, gH, и мутантный вектор HSV может содержать мутированные версии обоих. Однако мутантный белок входа может быть любым белком, влияющим на проникновение вектора HSV в клетки. В некоторых вариантах осуществления мутантный белок входа отличается от gD, хотя вектор HSV может дополнительно содержать мутантный gD, такой как содержащий лиганд или другую желаемую мутацию. Неограничивающие мутации гликопротеина gB или gH для применения в векторе HSV по настоящему изобретению встречаются в одном или нескольких следующих остатках: gB: D285, gB: A549, gB: S668, gH: N753 и gH: A778. В некоторых вариантах осуществления вектор HSV по изобретению содержит мутации в gB: D285 и gB: A549, в gH: N753 и gH: A778 и/или в каждом из gB: S668, gH: N753 и gH: A778. В некоторых вариантах осуществления вектор HSV содержит две или более таких мутаций (например, 3 или более, 4 или более), и вектор HSV может содержать мутации во всех пяти из этих остатков. В одном варианте осуществления вектор HSV имеет мутации при gB: 285, gB; 549, gH: 753 и gH: 778. В данном документе названия мутаций указаны относительно нумерации кодонов (аминокислот) генов gD, gB и gH производного штамма HSV-1 KOS K26GFP. Последовательности для gB и gH K26GFP отличаются от последовательностей для gB, которые раскрыты в GenBank (№ AF311740 (включен в данный документ посредством ссылки)), и для gH (GenBank № X03896 (включен в данный документ посредством ссылки)), как отражено в таблице 9 ниже.

Таблица 9

Аминокислотное положение AF311740 K26GFP Положение нуклеотидов AF311740 K26GFP gB 313 T S 938-939 ACG AGC 315 A T 943 GCC ACC 515 H R 1544 CAC CGC X03896 X03896 gH 12 I L 1011 ATT CTT 110 P S 1305 CCG TCG 127 T I 1357 ACC ATC 138 S A 1389 TCG GCG 150 A T 1425 GCC ACC 532 A A 2573 GCT GCG 633 R R 2876 CGT CGC

[00118] Однако K26GFP может содержать дополнительные различия в области гена, соответствующей нуклеотидам 2,079-2,102 GenBank X03896. Таким образом будет понятно, что последовательность производного KOS K26GFP или номера доступа GenBank AF311740 может служить в качестве эталонной последовательности для обсуждаемых в данном документе мутаций gB. Кроме того, последовательность производного KOS K26GFP или номера доступа GenBank X03896 может служить в качестве эталонной последовательности для обсуждаемых в данном документе gH. Однако векторы HSV по изобретению могут включать гомологичные мутации в gB и gH любого штамма HSV.

[00119] В некоторых аспектах мутация белка входа для включения в вектор HSV является замещающей мутацией; однако мутации не ограничиваются мутациями замещения. В некоторых вариантах осуществления мутантные гликопротеины gB или gH для использования в векторе HSV выбраны из группы мутаций замещения, состоящих из gB: D285N, gB: A549T, gB: S668N, gH: N753K, gH: A778V. В некоторых аспектах вектор HSV включает комбинации таких замен (таких как две или более таких замен (например, 3 или более, 4 или более или все)), примерами вариантов осуществления являются: двойной мутант gB: D285N/gB: A549T, двойной мутант gH: N753K/gH: A778V и тройной мутант gB: S668N/gH: N753K/gH: A778V. В одном варианте осуществления вектор HSV содержит gB: D285N/gB: A549T/gH: N753K/gH: A778V.

[00120] В определенных аспектах вектор HSV содержит мутантный гликопротеин gB и/или мутантный гликопротеин gH, где мутации в гликопротеинах представляют собой мутации замещения по меньшей мере в двух остатках, где, когда вектор представляет собой HSV-1 K26GFP, по меньшей мере два остатка выбраны из группы, состоящей из gB: D285, gB: A549, gB: S668, gH: N753 и gH: A778, или где, когда вектор является гомологичным HSV, по меньшей мере два остатка выбраны из аминокислот, которые коррелируют с gB: D285, gB: A549, gB: S668, gH: N753 и gH: A778, где остаток gB: D285 коррелирует с X в VYPYXEFVL (SEQ ID NO: 838), остаток gB: A549 коррелирует с X в KLNPNXIAS (SEQ ID NO: 839), остаток gB: S668 коррелирует с X в ITTVXTFID (SEQ ID NO: 840), остаток gH: N753 коррелирует с X в VDTDXTQQQ (SEQ ID NO: 841), а остаток gH: A778 коррелирует с X в VPSTXLLLF (SEQ ID NO: 842); и где вектор HSV представляет собой вектор HSV-1 или HSV-2.

[00121] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе онколитические вирусы HSV содержат в гене UL37 одну или несколько мутаций, которые снижают HSV-инфекцию нервных клеток, таких как описанные в международной публикации PCT № WO 2016/141320 и Richard et al., Plos Pathogens, 2017, 13 (12), e1006741.

Онколитическтие вирусы, ослабленные микроРНК

[00122] МиР дифференциально экспрессируются при широком спектре болезненных состояний, включая множественные типы рака. Важно отметить, что экспрессия микроРНК в раковых тканях отличается от таковой в нормальных тканях, что позволяет им служить механизмом нацеливания при широком разнообразии раковых заболеваний. МикроРНК, связанные (положительно или отрицательно) с канцерогенезом, злокачественной трансформацией или метастазированием, известны как «oncomiR».

[00123] В некоторых аспектах уровень экспрессии конкретной oncomiR положительно связан с развитием или поддержанием конкретного рака. Такие миР упоминаются в данном документе как «онкогенные миР». В некоторых вариантах осуществления экспрессия онкогенной миР в раковых клетках или тканях увеличена по сравнению с уровнем экспрессии, наблюдаемым в незлокачественных контрольных клетках (т.е., нормальных или здоровых контролях), или увеличена по сравнению с уровнем экспрессии, наблюдаемым в раковых клетках, полученных от другого типа рака. В некоторых вариантах экспрессия онкогенной миР увеличивается по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%, 300%, 400%, 500%, 1000% или более по сравнению с экспрессией онкогенной миР в нераковой контрольной клетке или раковой клетке, полученной из другой тип рака. В некоторых аспектах раковая клетка или ткань может экспрессировать онкогенную миР, которая не экспрессируется в незлокачественных контрольных клетках или тканях. Примеры онкогенных микроРНК, которые часто сверхэкспрессируются в раковых тканях, включают, но не ограничиваются ими, миР-21, миР-155 и миР-17-92. Дополнительные примеры онкогенных микроР приведены в таблице 4.

[00124] В некоторых вариантах осуществления экспрессия конкретной oncomiR отрицательно связана с развитием или поддержанием конкретного рака и/или метастазирования. Такие oncomiR называются в данном документе «онкосупрессорные миР» или «подавляющие опухоль миР», поскольку их экспрессия предотвращает или подавляет развитие рака. В некоторых вариантах осуществления экспрессия онкосупрессорной микроРНК снижается в раковых клетках или тканях по сравнению с уровнем экспрессии, наблюдаемым в незлокачественных контрольных клетках (т.е. нормальных или здоровых контролях), или уменьшается по сравнению с уровнем экспрессии микроРНК-супрессора опухолей, наблюдаемой в раковых клетках, полученных из другого типа рака. Например, экспрессия онкосупрессорной микроРНК в раковой клетке может быть снижена по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%., 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с экспрессией онкосупрессорной микроРНК в нераковой контрольной клетке или раковой клетке, полученной из другого типа рака. В некоторых аспектах нераковая контрольная клетка может экспрессировать онкосупрессорную микроРНК, которая не экспрессируется в раковых клетках. Примеры онкосупрессорных микроРНК включают, но не ограничиваются ими, миР-122, миР-184, миР-34a, let7a, миР-145-5p, миР-199a-5p, миР-451a, миР-125a, миР- 125a-5p, миР-126-3p, миР-233-3p, миР-143-3p, миР-1-3p, миР-133a-3p, миР-127a-3p, миР-133b, миР-134-3p, миР-124, миР-101, миР-125b, миР-145, миР-559, миР-213, миР-31-5p, миР-205p, миР-15a, миР-16-1, миР-34, а также как микроРНК семейства let-7. Дополнительные примеры онкосупрессорных миР перечислены в таблице 3 и таблице 8.

[00125] Патогенез рака - гетерогенный и мультигенный процесс. Как таковая, активация определенных путей и экспрессия определенных генов могут приводить к развитию рака в одном контексте и приводить к отчетливым или противоположным результатам при активации или экспрессии в другом контексте. Следовательно, характеристика конкретного гена или миР как «онкогена» или «онкогенной миР» или как «онкосупрессора» или «подавляющей опухоль миР» не является бинарным отличием и будет варьироваться в зависимости от типа рака. Например, экспрессия одной микроРНК может быть увеличена в конкретном раке и связана с развитием этого рака, в то время как экспрессия той же микроРНК может быть снижена в другом раке и связана с предотвращением развития этого рака. Однако некоторые микроРНК могут функционировать как онкогенные микроРНК независимо от типа рака. Например, некоторые микроРНК нацеливаются на транскрипты мРНК онкосупрессорных генов для деградации, тем самым снижая экспрессию онкосупрессорного белка. Например, миР-152b функционирует как онкогенная миР в подавляющем большинстве гематологических злокачественных новообразований, но функционирует как онкосупрессорная миР во многих солидных опухолях. Кроме того, конкретная миР может экспрессироваться на высоком уровне как в раковых, так и не раковых клетках. Например, миР-155 высоко экспрессируется в нормальных клетках, играя существенную роль в поляризации макрофагов, а также высоко экспрессируется в раковых клетках. Таким образом, разработка описанных в данном документе онколитических вирусов, ослабленных миР, редактирующих геном и ремоделирующих микросреду, основана на различиях экспрессии конкретной миР или группы миР в одной клеточной популяции или ткани по сравнению с другой клеточной популяцией или тканью. Специалист в данной области поймет, что термин «онкосупрессорная миР» обычно относится к миР, которая экспрессируется на более высоком уровне в нераковой клетке или ткани по сравнению с раковой клеткой или тканью, и что термин «онкогенная миР» обычно относится к миР, которая экспрессируется на более высоком уровне в раковых клетках или тканях по сравнению с нераковыми клетками или тканями. Специалист в данной области техники также поймет, что миР, характеризующаяся как онкосупрессорная миР при одном типе рака, может или не может выполнять функции онкосупрессорной миР при другом типе рака, и что миР, которая характеризуется как онкогенная миР при одном типе рака может или не может выполнять функции онкогенной миР при другом типе рака.

[00126] В таблице 1 показана взаимосвязь между 12 выбранными oncomiR (9 онкосупрессоров и 3 онкогенных микроРНК) и многочисленными раковыми заболеваниями. Список 3410 взаимосвязей oncomiR-рак представлен в таблице 2. МикроРНК регулируют многие транскрипты белков, которые участвуют в контроле клеточной пролиферации и апоптоза. Регулируемые белки включают обычные протоонкобелки и супрессоры опухолей, такие как Ras, Myc, Bcl2, PTEN и p53. Следовательно, аберрантная экспрессия микроРНК часто участвует в развитии рака и может быть терапевтически исправлена путем ингибирования онкогенных микроРНК или замены истощенной опухолевой супрессорной микроРНК. Кроме того, различная экспрессия отдельных oncomiR в раковых и нераковых клетках может быть использована в качестве средства для нацеливания противораковой терапии конкретно на раковые клетки. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления онколитические вирусные векторы, описанные в данном документе, могут содержать следующие свойства по отдельности или в комбинации: вставка последовательностей-мишеней микроРНК в вирусный геном, тем самым ограничивая репликацию вирусного вектора до репликации в раковых или опухолевых клетках; один или нескольких включенных в вирусный геном полинуклеотидов, продукт(ы) которых нарушают функцию онкогенной микроРНК, модулируют внеклеточный матрикс раковых клеток и/или усиливают или активируют противораковый иммунный ответ; и/или активируемые протеазой антитела, включенные в вирусную частицу для селективного нацеливания векторов на раковые и/или опухолевые клетки.

[00127] Один аспект изобретения включает рекомбинантный онколитический вирус (или вирусный вектор), содержащий множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус одного или нескольких основных вирусных генов. В определенных вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус может содержать последовательности-мишени микроРНК, вставленные в локус по меньшей мере одного, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти, по меньшей мере шести, по меньшей мере семи, по меньшей мере восьми, по меньшей мере девяти или по меньшей мере десяти основных вирусных генов. МикроРНК, экспрессируемые в нормальных (нераковых) клетках, могут связываться с такими последовательностями-мишенями и подавлять экспрессию вирусного гена, содержащего последовательность-мишень микроРНК, тем самым ограничивая репликацию вируса в здоровых нераковых клетках. Такие рекомбинантные онколитические вирусы упоминаются здесь как «миР-ослабленные» или «с ограниченной репликацией», поскольку они демонстрируют сниженную или ослабленную репликацию вируса в клетках, которые экспрессируют одну или несколько микроРНК, способных связываться со встроенными последовательностями-мишенями миР, по сравнению с клетками, которые не экспрессируют или имеют сниженную экспрессию миР. Путем включения последовательностей-мишеней микроРНК в ключевые гены, необходимые для репликации вируса, репликация вируса может быть условно подавлена в нормальных диплоидных клетках, экспрессирующих микроРНК, и может нормально протекать в клетках, которые не экспрессируют микроРНК. В таких вариантах осуществления здоровые незлокачественные клетки защищены от нормальных клеток от литических эффектов инфекции рекомбинантным вирусным вектором.

[00128] В некоторых вариантах осуществления одна или несколько последовательностей-мишеней микроРНК включены в 5'-нетранслируемую область (UTR) и/или 3'-UTR одного или нескольких основных вирусных генов. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус простого герпеса (HSV), и вирусные гены, необходимые для репликации вируса, включают любой из UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP34.5, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и/или US12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой HSV и содержит одну или несколько последовательностей-мишеней микроРНК, включенных в 5 'или 3' UTR одного или нескольких основных вирусных генов. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой HSV, и одна или несколько последовательностей-мишеней микроРНК включены в одну или несколько из ICP4, ICP27, UL8, UL42, UL19 и ICP34.5. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой HSV, и одна или несколько последовательностей-мишеней микроРНК включены в 5' или 3' UTR одного или нескольких из ICP4, ICP27, UL8, UL42, UL19 и ICP34.5.

Кассеты последовательности-мишени микроРНК

[00129] У животных гены микроРНК транскрибируются в первичную микроРНК (pri-микроРНК), которая затем обрабатывается в ядре ферментом Drosha (рибонуклеаза III класса 2), с образованием «шпильки» предшественника микроРНК (пре-микроРНК). Шпилька пре-микроРНК транспортируется в цитоплазму, где она расщепляется рибонуклеазой III Dicer. Данная эндорибонуклеаза взаимодействует с 5'- и 3'-концами шпильки и обрезает петлю, соединяющую 3 'и 5' плечи, в результате чего получается дуплексная молекула РНК длиной около 22 нуклеотидов. Хотя любая цепь дуплекса может потенциально действовать как функциональная микроРНК, обычно одна цепь микроРНК деградирует, и только одна цепь загружается в белок Argonaute (Ago) для получения эффекторного РНК-индуцированного комплекса сайленсинга (RISC), где происходит взаимодействие микроРНК и соответствующей мРНК-мишени (Wahid et al., 1803:11, 2010, 1231-1243).

[00130] В данном документе ген, кодирующий конкретную микроРНК, обозначается как «MIR», за которым следует номер микроРНК. Промежуточные молекулы шпильки пре-микроРНК обозначаются как «mir-», за которым следует номер микроРНК, в то время как молекула зрелой одноцепочечной микроРНК обозначается как «миР-», за которой следует номер микроРНК. Например, «MIR122» относится к гену, кодирующему молекулу-предшественника микроРНК шпильки mir-122, которая затем превращается в зрелую молекулу миР-122. Из-за структуры пре-микроРНК в виде шпильки возможна ситуация, в которой две зрелые микроРНК могут происходить из противоположных плеч одной и той же пре-микроРНК. В некоторых случаях данные экспрессии четко идентифицируют одну цепь как преимущественно экспрессирующую микроРНК, а другую - как побочный продукт. В таких случаях зрелым последовательностям микроРНК присваиваются имена в форме миР-№№ (преобладающий продукт) и миР-№№* (побочный продукт из противоположного плеча предшественника). Например, основные и второстепенные продукты mir-56 обозначены как миР-56 и миР-56* соответственно. Когда существующих данных недостаточно для определения того, какая последовательность является преобладающей, или когда они обнаружены в примерно одинаковых количествах, два зрелых продукта микроРНК обозначаются как миР-№№-5p (5'-плечо шпильки пре-микроРНК) и миР-№№-3p (3'-плечо шпильки пре-микроРНК). Например, два зрелых продукта микроРНК mir-142 обозначены как миР-142-5p и миР-142-3p. Продукты -3p и -5p конкретной микроРНК происходят с противоположных концов шпильки пре-микроРНК, поэтому они будут содержать разные последовательности РНК и, соответственно, будут распознавать разные последовательности-мишени.

[00131] В данном раскрытии последовательности-мишени микроРНК встраиваются в локус одного или нескольких основных вирусных генов в форме «кассеты последовательности-мишени миР» или «кассеты миР-TS». Кассета миР-TS, которая относится к полинуклеотидной последовательности, содержит одну или несколько последовательностей-мишеней микроРНК и способна встраиваться в специфический локус вирусного гена. При транскрипции мРНК-транскрипты вирусного гена, содержащего кассету миР-TS, будут содержать одну или несколько последовательностей-мишеней микроРНК. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в данном документе, содержат по меньшей мере одну последовательность-мишень микроРНК. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в данном документе, содержат множество последовательностей-мишеней микроРНК. Например, в некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19. 20 или более последовательностей-мишеней микроРНК. В таких вариантах осуществления, где кассеты миР-TS содержат две или более последовательностей-мишеней микроРНК, две или более последовательностей-мишеней расположены так, что общая длина кассеты миР-TS (m) меньше или равна средней длине последовательности-мишени микроРНК (n), умноженной на общее количество последовательностей-мишеней микроРНК в кассете (y) плюс средняя длина последовательности линкера (l), умноженная на общее количество последовательностей-мишеней микроРНК в кассете плюс 1 (y+1). Таким образом, длина кассеты миР-TS (m) может быть представлена формулой: m ≤ (n * y) + (l * (y +1)), где n=средняя длина последовательностей-мишеней микроРНК, l=средняя длина последовательностей линкера и y=общее количество последовательностей-мишеней в кассете миР-TS). В качестве иллюстративного примера, если кассеты миР-TS содержат 4 последовательности-мишени микроРНК (y) со средней длиной 21 нуклеотид (n), а средняя длина последовательностей линкера составляет от 4 до 25 нуклеотидов (l), длина кассеты миР-TS (m) составляет от примерно 104 нуклеотидов до примерно 205 нуклеотидов.

[00132] Используемый в данном документе термин «длина» кассеты миР-TS определяется как общее количество нуклеотидов (пар оснований для двухцепочечных полинуклеотидов) от 5'-нуклеотида первой миР-TS до 3' нуклеотида последней миР-TS в полинуклеотиде, включая любые промежуточные последовательности. Для неперекрывающихся миР-TS минимальная длина кассеты миР-TS будет суммой длин миР-TS. Спейсеры увеличивают длину. Выбор длины спейсера определяет количество дополнительных нуклеотидов в кассете. Более длинные спейсеры увеличивают длину кассеты больше, чем более короткие спейсеры. Признавая, что при чередовании миР-TS могут быть применены более короткие спейсеры (например, длиной 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 нуклеотидов) (минимизируется количество одинаковых соседних миР-TS в микроРНК) - чередующиеся миР-TS служат для увеличения промежутка между другими миР-TS, - авторы настоящего изобретения определили, что существует возможность генерировать более короткие кассеты миР-TS по сравнению с кассетами миР-TS, в которых миР-TS к одной и той же микроРНК располагаются тандемно, например, четыре одного типа, а затем четыре следующего типа. В некоторых вариантах осуществления длина кассеты миР-TS составляет менее 1000 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления длина кассеты миР-TS составляет менее 900 нуклеотидов, менее 800 нуклеотидов, менее 700 нуклеотидов, менее 600 нуклеотидов, менее 500 нуклеотидов, менее 400 нуклеотидов, менее 300 нуклеотидов, менее 200 нуклеотидов, менее 100 нуклеотидов или менее 50 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления длина кассеты миР-TS, измеряемая в количестве нуклеотидов, менее чем в 26, 27, 28, 29 или 30 раз больше количества сайтов миР-TS, менее чем примерно в 30 раз больше количества сайтов миР-TS, менее чем примерно в 35 раз больше количества сайтов миР-TS, или менее чем примерно в 40 раз больше количества сайтов миР-TS.

[00133] В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS содержат множество последовательностей-мишеней микроРНК, где каждая последовательность-мишень микроРНК из множества представляет собой последовательность-мишень для одной и той же микроРНК. Например, кассеты миР-TS могут содержать 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий одной и той же последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS содержат от 2 до 6 копий одной и той же последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS содержат 3 копии одной и той же последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS содержат 4 копии одной и той же последовательности-мишени миР.

[00134] В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в настоящем документе, содержат множество последовательностей-мишеней микроРНК, где множество включает по меньшей мере две разные последовательности-мишени микроРНК. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 различных последовательностей-мишеней микроРНК. Например, в некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS может содержать одну или несколько копий первой последовательности-мишени микроРНК и одну или несколько копий второй последовательности-мишени микроРНК. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий первой последовательности-мишени миР и по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий второй последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит 3 или 4 копии первой последовательности-мишени миР и 3 или 4 копии второй последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК содержит по меньшей мере 3 разные последовательности-мишени микроРНК. Например, в некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит одну или несколько копий первой последовательности-мишени миР, одну или несколько копий второй последовательности-мишени миР и одну или несколько копий третьей последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий первой последовательности-мишени миР, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий второй последовательности-мишени миР и, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий третьей последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит 3 или 4 копии первой последовательности-мишени миР, 3 или 4 копии второй последовательности-мишени миР и 3 или 4 копии третьей последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК содержит по меньшей мере 4 разные последовательности-мишени микроРНК. Например, в некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит одну или несколько копий первой последовательности-мишени миР, одну или несколько копий второй последовательности-мишени миР, одну или несколько копий третьей последовательности-мишени миР и одну или несколько копии четвертой последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий первой последовательности-мишени миР, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий второй последовательности-мишени миР, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий третьей последовательности-мишени миР, и по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий четвертой последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассета миР-TS содержит 3 или 4 копии первой последовательности-мишени миР, 3 или 4 копии второй последовательности-мишени миР, 3 или 4 копии третьей последовательности-мишени миР и 3 или 4 копии четвертой последовательности-мишени миР. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в данном документе, содержат множество последовательностей-мишеней микроРНК, в которых

[00135] В некоторых аспектах, в которых кассеты миР-TS содержат множество последовательностей-мишеней для микроРНК, множество последовательностей-мишеней для микроРНК может располагаться тандемно без каких-либо промежуточных последовательностей нуклеиновых кислот. В некоторых аспектах множество последовательностей-мишеней микроРНК может быть разделено последовательностью линкера. В некоторых случаях линкер содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления последовательность линкера содержит от примерно 4 до примерно 20 нуклеотидов. В других вариантах осуществления последовательность линкера содержит от примерно 4 до примерно 16 нуклеотидов. В качестве иллюстративного варианта осуществления кассета миР-TS может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более из следующих субъединиц: (а) первая последовательность-мишень микроРНК - линкер - вторая последовательность-мишень микроРНК, где соседние субъединицы разделены дополнительной последовательностью линкера. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая последовательности-мишени микроРНК являются мишенями для одной и той же микроРНК. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая последовательности-мишени микроРНК являются мишенями для разных микроРНК.

[00136] В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в настоящем документе, содержат последовательность-мишень микроРНК, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична обратному комплементу последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-803. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS, описанные в данном документе, содержат последовательность-мишень микроРНК, которая содержит или состоит из обратного комплемента последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-803.

[00137] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-122-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-122-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 804. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-122-5p представляет собой SEQ ID NO: 804. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-124-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-124-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 805. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-124-3p представляет собой SEQ ID NO: 805. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-125a-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-125a-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 806. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-125a-5p представляет собой SEQ ID NO: 806.

[00138] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-126-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-126-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 807 или SEQ ID NO: 808. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-126-3p представляет собой SEQ ID NO: 807 или SEQ ID NO: 808. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-127a-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-127a-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 809. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-127a-3p представляет собой SEQ ID NO: 809.

[00139] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-128-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-128-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 810 или SEQ ID NO: 811. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-128-3p представляет собой SEQ ID NO: 810 или SEQ ID NO: 811. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-129-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-129-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 812. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-129-3p представляет собой SEQ ID NO: 812.

[00140] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-129-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-129-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 813. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-129-5p представляет собой SEQ ID NO: 813. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-130b-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-130b-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 814. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-130b-3p представляет собой SEQ ID NO: 814. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-130b-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-130b-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 815. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-130b-5p представляет собой SEQ ID NO: 815.

[00141] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-133a-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-133a-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 816. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-133a-3p представляет собой SEQ ID NO: 816. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-133b-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-133b-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 817. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-133b-3p представляет собой SEQ ID NO: 817. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-134-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-134-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 818. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-134-3p представляет собой SEQ ID NO: 818.

[00142] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-137-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-137-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 819. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-137-3p представляет собой SEQ ID NO: 819. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-1-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-1-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 820. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-1-3p представляет собой SEQ ID NO: 820. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-143-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-143-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 821. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-143-3p представляет собой SEQ ID NO: 821.

[00143] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-145-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-145-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 822. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-145-3p представляет собой SEQ ID NO: 822. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-145-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-145-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 823. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-145-5p представляет собой SEQ ID NO: 823. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-184-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-184-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 824. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-184-3p представляет собой SEQ ID NO: 824.

[00144] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени miR-199a-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-199a-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 825. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-199a-3p представляет собой SEQ ID NO: 825. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-199a-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-199a-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 826. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-199a-5p представляет собой SEQ ID NO: 826. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-204-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-204-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 827. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-204-5p представляет собой SEQ ID NO: 827.

[00145] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-208b-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-208b-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 828. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-208b-3p представляет собой SEQ ID NO: 828. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-214-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-214-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 829. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-214-3p представляет собой SEQ ID NO: 829. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-217-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-217-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 830. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-217-5p представляет собой SEQ ID NO: 830.

[00146] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-219a-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-219a-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 831. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-219a-5p представляет собой SEQ ID NO: 831. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-223-3p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-223-3p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 832. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-223-3p представляет собой SEQ ID NO: 832. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-34a-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-34a-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 833. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-34a-5p представляет собой SEQ ID NO: 833.

[00147] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-451a. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-451a по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 834. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-451a представляет собой SEQ ID NO: 834. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-559-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-559-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 835. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-559-5p представляет собой SEQ ID NO: 835. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-Let-7a-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-Let-7a-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 836. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-Let-7a-5p представляет собой SEQ ID NO: 836. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе кассеты миР-TS содержат по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 последовательности-мишени миР-9-5p. В некоторых вариантах осуществления последовательности-мишени miR-9-5p по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны последовательности SEQ ID NO: 837. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень miR-9-5p представляет собой SEQ ID NO: 837.

[00148] В приведенной ниже таблице 10 представлены последовательности типичных микроРНК, которые могут связываться с последовательностями-мишенями микроРНК в онколитических вирусах, описанных в данном документе. Дополнительные последовательности микроРНК приведены в SEQ ID NO: 33-803.

Таблица 10 Типичные микроРНК и последовательности-мишени

МикроРНК Последовательность микроРНК SEQ ID: миР-TS SEQ ID: 122-5p uggagugugacaaugguguuug 1 caaacaccattgtcacactcca 804 124-3p uaaggcacgcggugaaugcc 2 ggcattcaccgcgtgcctta 805 125a-5p ucccugagacccuuuaaccuguga 3 tcacaggttaaagggtctcaggga 806 126-3p ucguaccgugaguaauaaugcg 4 cgcattattactcacggtacga 807 cacattattactcacggtacga 808 127a-3p ucggauccgucugagcuuggcu 5 agccaagctcagacggatccga 809 128-3p ucacagugaaccggucucuuu 6 aaagagaccggttcactgtga 810 aaagagaccggttcactgtgg 811 129-3p aagcccuuaccccaaaaaguau 7 atactttttggggtaagggctt 812 129-5p cuuuuugcggucugggcuugc 8 gcaagcccagaccgcaaaaag 813 130b-3p cagugcaaugaugaaagggcau 9 atgccctttcatcattgcactg 814 130b-5p acucuuucccuguugcacuac 10 gtagtgcaacagggaaagagt 815 133a-3p uuugguccccuucaaccagcug 11 cagctggttgaaggggaccaaa 816 133b-3p uuugguccccuucaaccagcua 12 tagctggttgaaggggaccaaa 817 134-3p ccugugggccaccuagucaccaa 13 ttggtgactaggtggcccacagg 818 137-3p uuauugcuuaagaauacgcguag 14 ctacgcgtattcttaagcaataa 819 1-3p uggaauguaaagaaguauguau 15 atacatacttctttacattcca 820 143-3p ugagaugaagcacuguagcuc 16 gagctacagtgcttcatctca 821 145-5p ggauuccuggaaauacuguucu 17 agaacagtatttccaggaatcc 822 145-3p guccaguuuucccaggaaucccu 18 agggattcctgggaaaactggac 823 184-3p uggacggagaacugauaagggu 19 acccttatcagttctccgtcca 824 199a3p acaguagucugcacauugguua 20 taaccaatgtgcagactactgt 825 199a-5p cccaguguucagacuaccuguuc 21 gaacaggtagtctgaacactggg 826 204-5p uucccuuugucauccuaugccu 22 aggcataggatgacaaagggaa 827 208b-3p auaagacgaacaaaagguuugu 23 acaaaccttttgttcgtcttat 828 214-3p acagcaggcacagacaggcagu 24 actgcctgtctgtgcctgctgt 829 217-5p uacugcaucaggaacugauugga 25 tccaatcagttcctgatgcagta 830 219a-5p ugauuguccaaacgcaauucu 26 agaattgcgtttggacaatca 831 223-3p ugucaguuugucaaauacccca 27 tggggtatttgacaaactgaca 832 34a-5p uggcagugucuuagcugguugu 28 acaaccagctaagacactgcca 833 451a aaaccguuaccauuacugaguu 29 aactcagtaatggtaacggttt 834 559-5p uaaaguaaauaugcaccaaaa 30 ttttggtgcatatttacttta 835 Let7a-5p ugagguaguagguuguauaguu 31 aactatacaacctactacctca 836 9-5p ucuuugguuaucuagcuguauga 32 tcatacagctagataaccaaaga 837

[00149] В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS содержат одну или несколько дополнительных полинуклеотидных последовательностей, которые позволяют вставлять кассету в локус вирусного гена. Например, кассета миР-TS может дополнительно содержать на 5'- и 3'- концах короткую полинуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности нуклеиновой кислоты в желаемом месте вирусного генома. Такие последовательности упоминаются в данном документе как «гомологические ветви» и облегчают вставку кассеты миР-TS в специфический локус вирусного генома.

[00150] В некоторых вариантах осуществления раскрытые кассеты миР-TS содержат две или более множества миР-TS, каждая из которых соответствует разной микроРНК, и миР-TS выбираются для защиты различных типов клеток или органов от онколитического вируса. В некоторых вариантах осуществления множество миР-TS чередуются, а не расположены тандемно. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS имеют короткие (например, длиной 4-15 нуклеотидов) спейсеры, в результате чего получается более компактная кассета. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS не содержат (или имеют сниженное количество) вторичных структур РНК, которые ингибируют активность миР-TS. В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS не содержат (или имеют сниженное количество) затравочных последовательностей микроРНК, связанных с канцерогенезом, злокачественной трансформацией или метастазированием (т.е. «oncomiR»). В некоторых вариантах осуществления кассеты миР-TS не содержат (или имеют сниженное количество) сайтов полиаденилирования.

Онколитические вирусы, содержащие кассеты миР-TS

[00151] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус может содержать одну кассету миР-TS, включенную в локус одного основного вирусного гена, где кассета миР-TS содержит множество последовательностей-мишеней микроРНК, так что рекомбинантный онколитический вирус содержит множество последовательностей-мишеней микроРНК, включенных в локус одного основного вирусного гена. В некоторых аспектах кассета миР-TS может содержать множество последовательностей-мишеней микроРНК, причем каждая последовательность-мишень микроРНК множества является мишенью для одной и той же микроРНК, так что рекомбинантный онколитический вирус содержит множество (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) копий одной и той же последовательности-мишени РНК, включенной в локус основного вирусного гена. Например, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую 2, 3, 4, 5, 6 или более последовательностей-мишеней, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую 2, 3, 4 или более последовательностей-мишеней, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40, или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую 2, 3, 4, 5, 6 или более последовательностей-мишеней, вставленной в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00152] В некоторых аспектах множество последовательностей-мишеней микроРНК содержит по меньшей мере две разные последовательности-мишени микроРНК, по меньшей мере три разные последовательности-мишени микроРНК или по меньшей мере четыре разные последовательности-мишени микроРНК, так что рекомбинантный онколитический вирус содержит одну или несколько копий по меньшей мере 2, 3 или 4 разных последовательности микроРНК-мишеней, включенных в локус основного вирусного гена. Например, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-34a-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-34a-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-34a-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-184-3p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-184-3p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p, миР-184-3p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00153] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5., UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-122-5p и миР-Let-7a-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-145-5p, миР-199a-5p и миР-599-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-145-5p, миР-199a-5p и миР-599-5p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-145-5p, миР-199a-5p и миР-599-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00154] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-124-3p, миР-1-3p и миР-124-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-124-3p, миР-1-3p и миР-124-3p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-124-3p, миР-1-3p и миР-124-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128-3p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00155] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-217-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-217-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-137-3p, миР-217-3p и миР-126-3p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00156] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219-5p, вставленных в один из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический HSV может содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько последовательностей-мишеней для миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219-5p, вставленных в один из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9.

[00157] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус может содержать одну кассету миР-TS, включенную в 3 'или 5' нетранслируемую область (UTR) вирусного генома. В таких вариантах осуществления кассета миР-TS может содержать одну копию последовательности-мишени микроРНК таким образом, что рекомбинантный онколитический вирус содержит одну копию последовательности-мишени микроРНК, включенную в 3 'или 5' UTR вирусного генома. Например, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вирус полиомиелита, SVV или вирус Коксаки могут содержать кассету миР-TS, содержащую последовательность-мишень микроРНК, показанную в таблице 10, вставленную в 3 'или 5' UTR вирусного генома. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус может содержать одну кассету миР-TS, включенную в 3 'или 5' UTR вирусного генома, где кассета миР-TS содержит множество последовательностей-мишеней микроРНК, показанных в таблице 10, так что рекомбинантный онколитический вирус содержит множество последовательностей-мишеней микроРНК, включенных в 3 'или 5' UTR вирусного генома.

[00158] В некоторых аспектах множество последовательностей-мишеней микроРНК содержит по меньшей мере две разные последовательности-мишени микроРНК, по меньшей мере три разные последовательности-мишени микроРНК или по меньшей мере четыре разные последовательности-мишени микроРНК, так что рекомбинантный онколитический вирус содержит одну или несколько копий по меньшей мере 2, 3 или 4 разных последовательности микроРНК-мишеней, включенных в 3' или 5' UTR вирусного генома. Например, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вирус полиомиелита, SVV или вирус Коксаки могут содержать кассету миР-TS, содержащую одну или несколько копий по меньшей мере 2, 3 или 4 различных последовательностей-мишеней микроРНК, выбранных из таблицы 10, вставленных в 3' или 5' UTR вирусного генома.

[00159] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус может содержать кассету миР-TS, включенную в локус двух или более основных вирусных генов. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, и два или более основных вирусных гена выбраны из группы, состоящей из ICP4, ICP27, ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40. или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, и два или более основных вирусных гена выбраны из группы, состоящей из ICP8, ICP22, ICP34.5, UL5, UL8, UL9, UL30, UL39/40 или UL42. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, и два или более основных вирусных гена выбраны из группы, состоящей из ICP4, ICP27, ICP34.5, UL8 или UL9. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, и два или более основных вирусных гена выбраны из группы, состоящей из ICP27, ICP4, ICP34.5, UL8 и UL42.

[00160] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4, и вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК в локусе ICP27. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-124. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-124; 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-1-3p; и 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-143-3p. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней микроРНК в первых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p);

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p).

[00161] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус ICP27 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-1-3p; 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-145-5p; 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-199-5p; и 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-559. В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус ICP27 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-219a-5p; 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-122-5p; и 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-128.

[00162] В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS содержит 4 копии последовательности-мишени для миР-124, а вторая кассета миР-TS содержит 2, 3 или более копий последовательности-мишени для каждого из 1-3p, 145-5p, 199a-5p и 559. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS содержит 4 копии последовательности-мишени для миР-124, а вторая кассета миР-TS содержит 4 копии последовательности-мишени для каждого из 219a-5p, 122-5p, 128T.

[00163] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4, и (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус UL42. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-124. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p).

[00164] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS, вставленная в локус UL42, содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-122-5p. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(122-5p) - (122-5p) - (122-5p).

[00165] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-124, вставленные в локус ICP4; и (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую 3 копии последовательности-мишени для миР-122-5p, вставленные в локус UL42.

[00166] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4; (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP27; и (iii) третью кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус UL42. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-124. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p).

[00167] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус ICP27 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-122. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены согласно одному из следующих:

(122-5p);

(122-5p) - (122-5p) - (122-5p) - (122-5p);

(122-5p) - (122-5p) - (122-5p).

[00168] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL42 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-125-5p. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьих кассетах миР-TS расположены согласно одному из следующих:

(122-5p);

(122-5p) - (122-5p) - (122-5p) - (122-5p);

(122-5p) - (122-5p) - (122-5p).

[00169] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую 4 копии последовательности-мишени микроРНК-124-3p; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-122-5p; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL42 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-125-5p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую 4 копии последовательности-мишени микроРНК-124; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-122; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL42 и содержащую 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-125-5p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4, и содержащую 4 копии последовательности-мишени микроРНК-124; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-122-3p; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL42 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-125-5p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую 4 копии последовательности-мишени микроРНК-124-3p; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 3 копии последовательности-мишени для миР-122-3p; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL42 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-125-5p.

[00170] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4; (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус UL8. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для миР-124. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p).

[00171] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208b-3p и миР-126. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во вторых кассетах миР-TS расположены следующим образом:

(208b-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p).

[00172] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4, и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-124; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 копии последовательности-мишени миР-137, 4 копии последовательности-мишени миР-208b-3p и 4 копии последовательности-мишени миР-126-3p.

[00173] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4; (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP27; и (iii) третью кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус UL8. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и миР-143-3р. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней микроРНК в первой кассете миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p).

[00174] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус ICP27 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из miR-219a-5p, miR-122-5p и miR-128. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во второй кассете миР-TS расположено следующим образом:

(219a-5p) - (122-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (219a-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (128-3p) - (219a-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (219a-5p).

[00175] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208a и миР-126. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(208b-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p).

[00176] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и включающую 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и миР-143-3p; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-219a-5p, 4 копии последовательности-мишени для миР-122-5p и 4 копии последовательности-мишени для миР-128; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 копии последовательности-мишени для миР-137, 4 копии последовательности-мишени для миР-208a и 4 копии последовательности-мишени для миР-126.

[00177] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP4; (ii) вторую кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP27; (iii) третью кассету миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус UL8; и (iv) четвертую кассет у миР-TS, содержащую множество последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус ICP34.5. В некоторых вариантах осуществления первая кассета миР-TS вставляется в локус ICP4 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и миР-143-3р. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней микроРНК в первой кассете миР-TS расположены следующим образом:

(124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (124-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p) - (1-3p) - (143-3p).

[00178] В некоторых вариантах осуществления вторая кассета миР-TS вставляется в локус ICP27 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из микроРНК 219a-5p, микроРНК 122-5p и микроРНК 128. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК во второй кассете миР-TS расположено следующим образом:

(219a-5p) - (122-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (219a-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (128-3p) - (219a-5p) - (128-3p) - (122-5p) - (219a-5p).

[00179] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208a и миР-126. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(208b-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (208b-3p).

[00180] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР137, миР-217-5p и миР-126. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(137-3p) - (126-3p) - (217-5p) - (126-3p) - (217-5p) - (137-3p) - (217-5p) - (126-3p) - (137-3p) - (126-3p) - (217-5p) - (137-3p).

[00181] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-217-5p и миР-127. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(137-3p) - (127-3p) - (217-5p) - (127-3p) - (217-5p) - (137-3p) - (217-5p) - (127-3p) - (137-3p) - (127-3p) - (217-5p) - (137-3p).

[00182] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-217-5p и миР-128. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(137-3p) - (128-3p) - (217-5p) - (128-3p) - (217-5p) - (137-3p) - (217-5p) - (128-3p) - (137-3p) - (128-3p) - (217-5p) - (137-3p).

[00183] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-217-5p и миР-129. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(137-3p) - (129-3p) - (217-5p) - (129-3p) - (217-5p) - (137-3p) - (217-5p) - (129-3p) - (137-3p) - (129-3p) - (219-5p) - (137-3p).

[00184] В некоторых вариантах осуществления третья кассета миР-TS вставляется в локус UL8 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-217-5p и миР-130. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в третьей кассете миР-TS расположены следующим образом:

(137-3p) - (130-3p) - (217-5p) - (130-3p) - (217-5p) - (130-3p) - (217-5p) - (127-3p) - (137-3p) - (130-3p) - (217-5p) - (137-3p).

[00185] В некоторых вариантах осуществления четвертая кассета миР-TS вставляется в локус ICP34.5 и содержит 1, 2, 3 или 4 копии последовательности-мишени для каждой из микроРНК 128M, микроРНК 204 и микроРНК 219-3p. В некоторых вариантах осуществления множество последовательностей-мишеней для микроРНК в четвертой кассете миР-TS расположены следующим образом:

(128-3p) - (219a-5p) - (204-5p) - (128-3p) - (219a-5p) - (204-5p) - (128-3p) - (219a-5p) - (204-5p) - (128-3p) - (219a-5p) - (204-5p).

[00186] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208b-3p и миР-126; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 4 копии последовательности-мишени для миР-204 и 4 копии последовательности-мишени для миР -219-3p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; и (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137, миР-208a и миР-126.

[00187] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-137-3p, 4 последовательности-мишени для миР-217-5p и 4 последовательности-мишени для миР-126 -3p; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 4 копии последовательности-мишени для миР-204 и 4 копии последовательности-мишени для миР -219-3p.

[00188] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-137-3p, 4 последовательности-мишени для миР-217-5p и 4 последовательности-мишени для миР- 127; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 3 копии последовательности-мишени для миР-204 и 3 копии последовательности-мишени для миР-219-5p.

[00189] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-137-3p, 4 последовательности-мишени для миР-217-5p и 4 последовательности-мишени для миР-128; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 3 копии последовательности-мишени для миР-204 и 3 копии последовательности-мишени для миР-219-5p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и содержащую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3p и микроРНК-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-137-3p, 4 последовательности-мишени для миР-217-5p и 4 последовательности-мишени для миР- 129; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 3 копии последовательности-мишени для миР-204 и 3 копии последовательности-мишени для миР- 219-5p. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий (i) первую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP4 и включающую четыре копии последовательности-мишени для каждой из миР-124, миР-1-3р и миР-14; (ii) вторую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP27 и содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР-128; (iii) третью кассету миР-TS, вставленную в локус UL8 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-137-3p, 4 последовательности-мишени для миР-217-5p и 4 последовательности-мишени для миР- 130; и (iv) четвертую кассету миР-TS, вставленную в локус ICP34.5 и содержащую 4 последовательности-мишени для миР-128, 3 копии последовательности-мишени для миР-204 и 3 копии последовательности-мишени для миР -219-5p.

[00190] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат одну копию последовательности-мишени миР-125a, включенную в один основный вирусный ген. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат одну копию последовательности-мишени миР-125a, включенную в локус UL42. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат одну копию последовательности-мишени миР-122, включенную в один основный вирусный ген. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат одну копию последовательности-мишени миР-122, включенную в локус ICP27 (например, ONCR-036).

[00191] В других вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы содержат 3 копии последовательности-мишени миР-125a, включенной в вирусный ген, необходимый для репликации вируса. В других вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы могут содержать 3 копии последовательности-мишени миР-125a, включенной в локус UL42. В некоторых вариантах осуществления 4 копии последовательности-мишени миР включены в 3 'UTR основного вирусного гена. В дополнительных вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы могут содержать 4 копии последовательности-мишени миР-125a, включенной в основный вирусный ген. В других вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы могут содержать 4 копии последовательности-мишени миР-125a, включенной в локус UL42. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы могут содержать 4 копии последовательности-мишени миР-122, включенной в основной вирусный ген. В других вариантах осуществления описанные в данном документе вирусные векторы могут содержать 4 копии последовательности-мишени миР-122, включенной в локус ICP27 (например, ONCR-063).

[00192] В некоторых вариантах осуществления 1 копия последовательности-мишени миР-122 включена в 3 'UTR первого основного вирусного гена и 1 копия последовательности-мишени миР-125a включена в 3' UTR второго основного вирусного гена, В некоторых вариантах осуществления 1 копия последовательности-мишени миР-122 включена в 3 'UTR локуса ICP27 и 1 копия последовательности-мишени миР-125a включена в 3' UTR локуса UL42 (например, ONCR -094).

[00193] В некоторых вариантах осуществления 1 копия последовательности-мишени миР-122 включена в 3 'UTR первого основного вирусного гена и 3 копии последовательности-мишени миР-125a включены в 3' UTR второго основного вирусного гена, В некоторых вариантах осуществления 1 копия последовательности-мишени миР-122 включена в 3 'UTR локуса ICP27 и 3 копии последовательности-мишени миР-125a включены в 3' UTR локуса UL42 (например, ONCR -095).

[00194] В некоторых вариантах осуществления 4 копии первой последовательности-мишени миР включены в 3 'UTR первого существенного вирусного гена и 1 копия второй последовательности-мишени миР включена в 3' UTR второго основного вирусного гена. В некоторых вариантах осуществления 4 копии последовательности-мишени миР-122 включены в 3 'UTR первого основного вирусного гена и 1 копия последовательности-мишени миР-125a включена в 3' UTR второго основного вирусного гена, В некоторых вариантах осуществления 4 копии последовательности-мишени миР-122 включены в 3 'UTR локуса ICP27 и 1 копия последовательности-мишени миР-125a включена в 3' UTR локуса UL42 (например, ONCR -093).

[00195] В некоторых вариантах осуществления 4 копии первой последовательности-мишени миР включены в 3 'UTR первого существенного вирусного гена и 4 копии второй последовательности-мишени миР включены в 3' UTR второго основного вирусного гена. В некоторых вариантах осуществления 4 копии последовательности-мишени миР-122 включены в 3 'UTR первого основного вирусного гена и 4 копии последовательности-мишени миР-125a включены в 3' UTR второго основного вирусного гена, В некоторых вариантах осуществления 4 копии последовательности-мишени миР-122 включены в 3'-UTR локуса ICP27 и 4 копии последовательности-мишени миР-125a включены в 3 'UTR локуса UL42 (например, ONCR -096).

[00196] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе ослабленные миР онколитические вирусы приводят к снижению вирусную репликации в клетке, которая экспрессирует миР, способную связываться с одной или несколькими встроенными последовательностями-мишенями миР. «Вирусная репликация» относится к общему количеству циклов вирусной репликации, которые происходят в конкретной клетке или популяции клеток в течение заданного периода времени. В некоторых вариантах осуществления вирусная репликация может быть измерена непосредственно путем оценки общего титра вируса, присутствующего в течение заданного периода времени, или путем оценки количества имеющихся копий вирусного генома (например, путем секвенирования). В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор может дополнительно содержать обнаруживаемую метку, такую как флуоресцентный репортер. В таких вариантах осуществления вирусная репликация может быть оценена путем измерения интенсивности флуоресценции репортера или количества клеток, экспрессирующих репортер. В некоторых вариантах осуществления вирусная репликация может быть измерена косвенно путем оценки количества жизнеспособных клеток в течение заданного периода времени. Например, можно ожидать, что уровень репликации вируса обратно коррелирует с количеством жизнеспособных клеток с течением времени.

[00197] «Пониженная вирусная репликация» в контексте настоящего документа относится к уровню репликации вируса, который снижен в первой клетке или первой популяции клеток по сравнению со второй клеткой или второй популяцией клеток. В некоторых вариантах осуществления уровень репликации вируса в первой клетке или первой популяции клеток снижен по меньшей мере на 5% по сравнению с уровнем репликации вируса во второй клетке или популяции клеток. В некоторых вариантах осуществления уровень репликации вируса в первой клетке или первой популяции клеток снижается по меньшей мере на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с уровнем репликации вируса во второй клетке или популяции клеток. В некоторых вариантах осуществления вирусная репликация в первой клетке или первой популяции клеток полностью ингибируется по сравнению с репликацией вируса во второй клетке или популяции клеток.

[00198] В некоторых вариантах осуществления сниженная вирусная репликация в первой клетке или первой популяции клеток коррелирует с экспрессией миР, способной связываться с одной или несколькими последовательностями-мишенями миР, включенными в один или несколько вирусных генов, необходимых для репликации. В некоторых вариантах осуществления экспрессия миР, соответствующая включенной последовательности-мишени миР, соответственно ингибирует или снижает экспрессию гена репликации, тем самым ингибируя или снижая репликацию вируса. В некоторых вариантах осуществления вторая клетка или вторая популяция клеток не экспрессирует или имеет пониженный уровень экспрессии t миР. В некоторых вариантах осуществления отсутствие или пониженная экспрессия миР (например, в раковой клетке), соответствующая включенной последовательности миР-мишени, позволяет репликации вируса продолжаться. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии миР во второй клетке или популяции клеток по меньшей мере на 5% ниже уровня экспрессии миР в первой клетке или популяции. В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии миР во второй клетке или популяции клеток снижается по меньшей мере на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с уровнем экспрессии миР в первой клетке или популяции. В некоторых вариантах осуществления вторая клетка не экспрессирует миР. В конкретных вариантах осуществления первая клетка представляет собой нераковую клетку, а вторая клетка представляет собой раковую клетку.

[00199] В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией (например, миР-ослабленный вирусный вектор) содержит по меньшей мере одну последовательность-мишень let-7 и используется для лечения рака легкого. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-15a и/или по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-16A и используется для лечения В-клеточного хронического лимфолейкоза. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну миР-125b, по меньшей мере одну миР-145, по меньшей мере одну миР-21 и/или по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-155 и используется для лечения рака молочной железы. В других вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-143 и/или по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-145 и используется для лечения колоректального рака. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну миР-181a по меньшей мере одну последовательность миР-181b и/или по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-181c и используется для лечения глиобластомы. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну миР-199a*, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-195, по меньшей мере одну миР-199a, по меньшей мере одну миР-200a и/или по меньшей мере одну миР-125a, и используется для лечения рака печени (например, гепатоцеллюлярной карциномы).

[00200] В конкретных вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией одержит по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-451a, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-143-3p, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-559 и по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-124, и используется для лечения рака поджелудочной железы, легких и/или ободочной кишки. В таких вариантах осуществления последовательности-мишени для миР-451a, миР-143-3p, миР-559 и миР-124 включены в два или более генов, необходимых для репликации вируса (например, ICP4 и ICP27). В дополнительных конкретных вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-451a, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-145-5p, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-559 и по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-124, и используется для лечения любого типа рака, описанного в данном документе. В таких вариантах осуществления последовательности-мишени для миР-451a, миР-145-5p, миР-559 и миР-124 включены в два или более генов, необходимых для репликации вируса (например, ICP4 и ICP27). В дополнительных конкретных вариантах осуществления вирусный вектор с ограниченной репликацией содержит по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-205p, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-141-5p, по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-31-5p и по меньшей мере одну последовательность-мишень миР-124, и используется для лечения невриномы. В таких вариантах осуществления последовательности-мишени для миР-205p, миР-141-5p, миР-31-5p и миР-124 включены в два или более генов, необходимых для репликации вируса (например, ICP4 и ICP27).

[00201] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-136-3p, миР-432-5p, миР-1-3p, миР-127-3p, миР-379-5p., миР-493-5p, миР-223-5p, миР-223-5p, миР-136-5p, миР-451a, миР-487b-3p, миР-370-3p, миР-410-3p, миР-431 -3p, миР-4485-3p, миР-4485-5p, миР-127-5p, миР-409-3p, миР-338-3p, миР-559, миР-411-5p, миР-133a-5p, миР -143-3p, миР-376b-3p, миР-758-3p, миР-1, миР-101, миР-1180, миР-1236, миР-124-3p, миР-125b, миР-126, миР-1280, миР-133a, миР-133b, миР-141, миР-143, миР-144, миР-145, миР-155, миР-16, миР-18a, миР-192, миР-195, миР-200a, миР -200b, миР-200c, миР-203, миР-205, миР-214, миР-218, миР-23b, миР-26a, миР-29c, миР-320c, миР-34a, миР-370, миР-409 -3p, миР-429, миР-451, миР-490-5p, миР-493, миР-576-3p и/или миР-99a, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких требуемых вирусных генов для вирусной репликации. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака мочевого пузыря.

[00202] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-1251-5p, миР-219a-5p, миР-219a-2-3p, миР-124-3p, миР-448, миР-138-2-3p, миР-490-5p, миР-129-1-3p, миР-1264, миР-3943, миР-490-3p, миР-383-5p, миР-133b, миР-129 -2-3p, миР-128-2-5p, миР-133a-3p, миР-129-5p, миР-1-3p, миР-885-3p, миР-124-5p, миР-759, миР-7158 -3p, миР-770-5p, миР-135a-5p, миР-885-5p, let-7g-5p, миР-100, миР-101, миР-106a, миР-124, миР-124a, миР-125a, миР-125a-5p, миР-125b, миР-127-3p, миР-128, миР-129, миР-136, миР-137, миР-139-5p, миР-142-3p, миР-143, миР -145, миР-146b-5p, миР-149, миР-152, миР-153, миР-195, миР-21, миР-212-3p, миР-219-5p, миР-222, миР-29b, миР -31, миР-3189-3p, миР-320, миР-320a, миР-326, миР-330, миР-331-3p, миР-340, миР-342, миР-34a, миР-376a, миР-449a, миР-483-5p, миР-503, миР-577, миР-663, миР-7, миР-7-5p, миР-873, let-7a, let-7f, миР-107, миР-122, миР -124-5p, миР-139, миР-146a, миР-146b, миР-15b, миР-16, миР-181a, миР-181a- 1, миР-181a-2, миР-181b, миР-181b-1, миР-181b-2, миР-181c, миР-181d, миР-184, миР-185, миР-199a-3p, миР-200a, миР-200b, миР-203, миР-204, миР-205, миР-218, миР-23b, миР-26b, миР-27a, миР-29c, миР-328, миР-34c-3p, миР-34c- 5p, миР-375, миР-383, миР-451, миР-452, миР-495, миР-584, миР-622, миР-656, миР-98, миР-124-3p, миР-181b-5p, миР-200b и/или миР-3189-3p, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака головного мозга. В некоторых вариантах осуществления рак мозга представляет собой астроцитому, глиобластому или глиому.

[00203] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-10b-5p, миР-126-3p, миР-145-3p, миР-451a, миР-199b-5p, миР -5683, миР-3195, миР-3182, миР-1271-5p, миР-204-5p, миР-409-5p, миР-136-5p, миР-514a-5p, миР-559, миР-483-3p, миР-1-3p, миР-6080, миР-144-3p, миР-10b-3p, миР-6130, миР-6089, миР-203b-5p, миР-4266, миР-4327, миР-5694, миР -193b, let-7а, let-7а-1, let-7а-2, let-7а-3, let-7б, let-7с, let-7д, let-7е, let-7f-1, let-7f -2, let-7g, let-7i, миР-100, миР-107, миР-10a, миР-10b, миР-122, миР-124, миР-1258, миР-125a-5p, миР-125b, миР -126, миР-127, миР-129, миР-130a, миР-132, миР-133a, миР-143, миР-145, миР-146a, миР-146b, миР-147, миР-148a, миР-149, миР-152, миР-153, миР-15a, миР-16, миР-17-5p, миР-181a, миР-1826, миР-183, миР-185, миР-191, миР-193a-3p, миР -195, миР-199b-5p, миР-19a-3p, миР-200a, миР-200b, миР-200c, миР-205, миР-206, миР-211, миР-216b, миР-218, миР-22, миР-26a, миР-26b, миР-300, миР-30a, миР-31, миР -335, миР-339-5p, миР-33b, миР-34a, миР-34b, миР-34c, миР-374a, миР-379, миР-381, миР-383, миР-425, миР-429, миР -450b-3p, миР-494, миР-495, миР-497, миР-502-5p, миР-517a, миР-574-3p, миР-638, миР-7, миР-720, миР-873, миР -874, миР-92a, миР-98, миР-99a, mmu-миР-290-3p и/или mmu-миР-290-5p, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака молочной железы.

[00204] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней для микроРНК для миР-143, миР-145, миР-17-5p, миР-203, миР-214, миР-218, миР-335, миР-342-3p, миР-372, миР-424, миР-491-5p, миР-497, миР-7, миР-99a, миР-99b, миР-100, миР-101, миР-15a, миР -16, миР-34a, миР-886-5p, миР-106a, миР-124, миР-148a, миР-29a и/или миР-375, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака шейки матки.

[00205] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-133a-5p, миР-490-5p, миР-124-3p, миР-137, миР-655-3p, миР-376c-3p, миР-369-5p, миР-490-3p, миР-432-5p, миР-487b-3p, миР-342-3p, миР-223-3p, миР-136-3p, миР-136-3p, миР-143-5p, миР-1-3p, миР-214-3p, миР-143-3p, миР-199a-3p, миР-199b-3p, миР-451a, миР-127-3p, миР-133a-3p, миР-145-5p, миР-145-3p, миР-199a-5p, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, миР-100, миР-101, миР-126, миР-142-3p, миР-143, миР-145, миР-192, миР-200c, миР-21, миР-214, миР-215, миР-22, миР-25, миР-302a, миР-320, миР-320a, миР-34a, миР-34c, миР-365, миР-373, миР-424, миР-429, миР-455, миР-484, миР-502, миР-503, миР-93, миР-98, миР-186, миР-30a-5p, миР-627, let-7a, миР-1, миР-124, миР-125a, миР-129, миР-1295b-3p, миР-1307, миР-130b, миР-132, миР-133a, миР-133b, миР-137, миР-138, миР-139, миР-139-5p, миР-140-5p, миР-148a, миР-148b, миР-149, миР-150-5p, миР-154, миР-15a, миР-15b, миР-16, миР-18a, миР-191, миР-193a-5p, миР-194, миР-195, миР-196a, миР-198, миР-199a-5p, миР-203, миР-204-5p, миР-206, миР-212, миР-218, миР-224, миР-24-3p, миР-26b, миР-27a, миР-28-3p, миР-28-5p, миР-29b, миР-30a-3p, миР-30b, миР-328, миР-338-3p, миР-342, миР-345, миР-34a-5p, миР-361-5p, миР-375, миР-378, миР-378a-3p, миР-378a-5p, миР-409-3p, миР-422a, миР-4487, миР-483, миР-497, миР-498, миР-518a-3p, миР-551a, миР-574-5p, миР-625, миР-638, миР-7, миР-96-5p, миР-202-3p, миР-30a и/или миР-451, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака ободочной кишки или колоректального рака.

[00206] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-101, миР-130a, миР-130b, миР-134, миР-143, миР-145, миР-152, миР -205, миР-223, миР-301a, миР-301b, миР-30c, миР-34a, миР-34c, миР-424, миР-449a, миР-543 и/или миР-34b, вставленных в 5 ' UTR или 3 'UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака эндометрия.

[00207] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-125b, миР-138, миР-15a, миР-15b, миР-16, миР-16-1, миР-16 -1-3p, миР-16-2, миР-181a, миР-181b, миР-195, миР-223, миР-29b, миР-34b, миР-34c, миР-424, миР-10a, миР-146a, миР-150, миР-151, миР-155, миР-2278, миР-26a, миР-30e, миР-31, миР-326, миР-564, миР-27a, let-7b, миР-124a, миР -142-3p, let-7c, миР-17, миР-20a, миР-29a, миР-30c, миР-720, миР-107, миР-342, миР-34a, миР-202, миР-142-5p, миР-29c, миР-145, миР-193b, миР-199a, миР-214, миР-22, миР-137 и/или миР-197, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака крови. В некоторых вариантах осуществления рак крови представляет собой лейкоз, лимфому или миелому.

[00208] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-1, миР-145, миР-1826, миР-199a, миР-199a-3p, миР-203, миР-205, миР-497, миР-508-3p, миР-509-3p, let-7a, let-7d, миР-106a *, миР-126, миР-1285, миР-129-3p, миР-1291, миР- 133a, миР-135a, миР-138, миР-141, миР-143, миР-182-5p, миР-200a, миР-218, миР-28-5p, миР-30a, миР-30c, миР-30d, миР-34a, миР-378, миР-429, миР-509-5p, миР-646, миР-133b, let-7b, let-7c, миР-200c, миР-204, миР-335, миР-377 и/или миР-506, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака почки.

[00209] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, миР-1, миР-100, миР-101, миР-105, миР-122, миР-122a, миР-1236, миР-124, миР-125b, миР-126, миР-127, миР-1271, миР-128-3p, миР-129-5p, миР-130a, миР-130b, миР-133a, миР-134, миР-137, миР-138, миР-139, миР-139-5p, миР-140-5p, миР-141, миР-142-3p, миР-143, миР-144, миР-145, миР-146a, миР-148a, миР-148b, миР-150-5p, миР-15b, миР-16, миР-181a-5p, миР-185, миР-188-5p, миР-193b, миР-195, миР-195-5p, миР-197, миР-198, миР-199a, миР-199a-5p, миР-199b, миР-199b-5p, миР-200a, миР-200b, миР-200c, миР-202, миР-203, миР-204-3p, миР-205, миР-206, миР-20a, миР-21, миР-21-3p, миР-211, миР-212, миР-214, миР-217, миР-218, миР-219-5p, миР-22, миР-223, миР-26a, миР-26b, миР-29a, миР-29b-1, миР-29b-2, миР-29c, миР-302b, миР-302c, миР-30a, миР-30a-3p, миР-335, миР-338-3p, миР-33a, миР-34a, миР-34b, миР-365, миР-370, миР-372, миР-375, миР-376a, миР-377, миР-422a, миР-424, миР-424-5p, миР-433, миР-4458, миР-448, миР-450a, миР-451, миР-485-5p, миР-486-5p, миР-497, миР-503, миР-506, миР-519d, миР-520a, миР-520b, миР-520c-3p, миР-582-5p, миР-590-5p, миР-610, миР-612, миР-625, миР-637, миР-675, миР-7, миР-877, миР-940, миР-941, миР-98, миР-99a, миР-132 и/или миР-31, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака печени. В некоторых вариантах осуществления рак печени представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.

[00210] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-143-3p, миР-126-3p, миР-126-5p, миР-1266-3p, миР-6130, миР-6080, миР-511-5p, миР-143-5p, миР-223-5p, миР-199b-5p, миР-199a-3p, миР-199b-3p, миР-451a, миР-142-5p, миР -144, миР-150-5p, миР-142-3p, миР-214-3p, миР-214-5p, миР-199a-5p, миР-145-3p, миР-145-5p, миР-1297, миР -141, миР-145, миР-16, миР-200a, миР-200b, миР-200c, миР-29b, миР-381, миР-409-3p, миР-429, миР-451, миР-511, миР -99a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let -7g, let-7i, миР-1, миР-101, миР-133b, миР-138, миР-142-5p, миР-144, миР-1469, миР-146a, миР-153, миР-15a, миР -15b, миР-16-1, миР-16-2, миР-182, миР-192, миР-193a-3p, миР-194, миР-195, миР-198, миР-203, миР-217, миР -218, миР-22, миР-223, миР-26a, миР-26b, миР-29c, миР-33a, миР-34a, миР-34b, миР-34c, миР-365, миР-449a, миР-449b, миР-486-5p, миР-545, миР-610, миР-614, миР-630, миР-660, миР-7515, миР-9500, миР-98, миР-99b, миР-133a, let-7a, миР-100, миР-106a, миР-107, миР-124, миР-125a-3p, миР-125a-5p, миР- 126, миР-126 *, миР-129, миР-137, миР-140, миР-143, миР-146b, миР-148a, миР-148b, миР-149, миР-152, миР-154, миР-155, миР-17-5p, миР-181a-1, миР-181a-2, миР-181b, миР-181b-1, миР-181b-2, миР-181c, миР-181d, миР-184, миР-186, миР-193b, миР-199a, миР-204, миР-212, миР-221, миР-224, миР-27a, миР-27b, миР-29a, миР-30a, миР-30b, миР-30c, миР -30d, миР-30d-5p, миР-30e-5p, миР-32, миР-335, миР-338-3p, миР-340, миР-342-3p, миР-361-3p, миР-373, миР -375, миР-4500, миР-4782-3p, миР-497, миР-503, миР-512-3p, миР-520a-3p, миР-526b, миР-625 * и/или миР-96, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака легких.

[00211] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для let-7b, миР-101, миР-125b, миР-1280, миР-143, миР-146a, миР-146b, миР -155, миР-17, миР-184, миР-185, миР-18b, миР-193b, миР-200c, миР-203, миР-204, миР-205, миР-206, миР-20a, миР-211, миР-218, миР-26a, миР-31, миР-33a, миР-34a, миР-34c, миР-376a, миР-376c, миР-573, миР-7-5p, миР-9 и/или миР-98, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения меланомы.

[00212] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для let-7d, миР-218, миР-34a, миР-375, миР-494, миР-100, миР-124, миР -1250, миР-125b, миР-126, миР-1271, миР-136, миР-138, миР-145, миР-147, миР-148a, миР-181a, миР-206, миР-220a, миР-26a, миР-26b, миР-29a, миР-32, миР-323-5p, миР-329, миР-338, миР-370, миР-410, миР-429, миР-433, миР-499a-5p, миР -503, миР-506, миР-632, миР-646, миР-668, миР-877 и/или миР-9, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака полости рта.

[00213] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для let-7i, миР-100, миР-124, миР-125b, миР-129-5p, миР-130b, миР-133a, миР-137, миР-138, миР-141, миР-145, миР-148a, миР-152, миР-153, миР-155, миР-199a, миР-200a, миР-200b, миР-200c, миР -212, миР-335, миР-34a, миР-34b, миР-34c, миР-409-3p, миР-411, миР-429, миР-432, миР-449a, миР-494, миР-497, миР -498, миР-519d, миР-655, миР-9, миР-98, миР-101, миР-532-5p, миР-124a, миР-192, миР-193a и/или миР-7, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака яичников.

[00214] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-216a-5p, миР-802, миР-217, миР-145-3p, миР-143-3p, миР-451a, миР-375, миР-214-3p, миР-216b-3p, миР-432-5p, миР-216a-3p, миР-199b-5p, миР-199a-5p, миР-136-3p, миР-216b -5p, миР-136-5p, миР-145-5p, миР-127-3p, миР-199a-3p, миР-199b-3p, миР-559, миР-129-2-3p, миР-4507, миР -1-3p, миР-148a-3p, миР-101, миР-1181, миР-124, миР-1247, миР-133a, миР-141, миР-145, миР-146a, миР-148a, миР-148b, миР-150 *, миР-150-5p, миР-152, миР-15a, миР-198, миР-203, миР-214, миР-216a, миР-29c, миР-335, миР-34a, миР- 34b, миР-34c, миР-373, миР-375, миР-410, миР-497, миР-615-5p, миР-630, миР-96, миР-132, let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, миР- 126, миР-135a, миР-143, миР-144, миР-150, миР-16, миР-200a, миР-200b, миР-200c, миР-217, миР-218, миР-337, миР-494, и/или миР-98, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака поджелудочной железы.

[00215] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для let-7a-3p, let-7c, миР-100, миР-101, миР-105, миР-124, миР-128, миР-1296, миР-130b, миР-133a-1, миР-133a-2, миР-133b, миР-135a, миР-143, миР-145, миР-146a, миР-154, миР-15a, миР -187, миР-188-5p, миР-199b, миР-200b, миР-203, миР-205, миР-212, миР-218, миР-221, миР-224, миР-23a, миР-23b, миР -25, миР-26a, миР-26b, миР-29b, миР-302a, миР-30a, миР-30b, миР-30c-1, миР-30c-2, миР-30d, миР-30e, миР-31, миР-330, миР-331-3p, миР-34a, миР-34b, миР-34c, миР-374b, миР-449a, миР-4723-5p, миР-497, миР-628-5p, миР-642a -5p, миР-765 и/или миР-940, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения рака предстательной железы.

[00216] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК для миР-101, миР-183, миР-204, миР-34a, миР-365b-3p, миР-486-3p и/или миР-532-5p, вставленных в 5 'UTR или 3' UTR одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса. Такой онколитический вирус может быть использован в способах и композициях для лечения ретинобластомы.

[00217] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе онколитический вирус представляет собой вирус простого герпеса, и один или несколько вирусных генов, необходимых для репликации вируса, выбирают из группы, состоящей из UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и US12.

Молекулы полезной нагрузки

[00218] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе онколитические вирусы содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу полезной нагрузки. Используемый в данном документе термин «молекула полезной нагрузки» относится к молекуле, способной дополнительно повысить терапевтическую эффективность вируса. Молекулы полезной нагрузки, подходящие для использования в настоящем раскрытии, включают антигенсвязывающие молекулы, такие как антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, цитокины, хемокины, растворимые рецепторы, лиганды рецепторов клеточной поверхности, двудольные пептиды, ферменты и нуклеиновые кислоты (например, shРНК, микроРНК антисмысловые РНК, антагомиры, рибозимы, апатамеры, олигонуклеотиды-ловушки (decoy) или антагомиры). Природа молекулы полезной нагрузки зависит от типа заболевания и желаемого терапевтического результата. В некоторых вариантах осуществления одна или несколько последовательностей-мишеней микроРНК включены в 3'- или 5'-UTR полинуклеотидной последовательности, кодирующей молекулу полезной нагрузки. В таких вариантах осуществления трансляция и последующая экспрессия полезной нагрузки в клетках, в которых экспрессируется соответствующая микроРНК, не происходит или существенно снижается. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько последовательностей-мишеней микроРНК вставляют в 3'- и/или 5'-UTR полинуклеотидной последовательности, кодирующей терапевтический полипептид.

[00219] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные онколитические вирусы, описанные в настоящем документе, содержат по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий молекулу полезной нагрузки, которая снижает экспрессию или ингибирует функцию эндогенной микроРНК, гена или тканевого ингибитора металлопротеиназ (TIMP). Такие рекомбинантные онколитические вирусы называются в данном документе вирусами или векторами «редактирования генома» или «ремоделирования микросреды». Кодируемый белок или олигонуклеотид может снижать экспрессию или ингибировать функцию микроРНК, гена или TIMP различными способами, включая нацеливание на белок (например, TIMP) для деградации (например путем убиквитинирования и протеосомной деградации или нацеливания на лизосомальную деградацию), блокирование взаимодействия с родственными рецепторами (например, блокируя антитела или их антигенсвязывающие фрагменты или пептидные ингибиторы), разрушение транскриптов матричной РНК (например, малую интерферирующую РНК или малую РНК-шпильку), и/или изменение последовательности геномной ДНК, кодирующей специфическую микроРНК, ген или белок (например, с помощью эндонуклеазы).

[00220] В конкретных вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР или гена, участвующего в канцерогенезе или метастазировании (например, онкогенной миР или онкогена). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий молекулу полезной нагрузки, которая снижает экспрессию или функцию микроРНК, которая представляет собой онкогенную микроРНК (например, одна или несколько микроРНК, перечисленных в таблице 4). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более полинуклеотидов, кодирующих белок или олигонуклеотид, который снижает экспрессию или функцию онкогенной микроРНК. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более полинуклеотидов, кодирующих множество белков или олигонуклеотидов, которые снижают экспрессию или функцию множества онкогенных микроРНК. В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-17-92 и используется для лечения рака легких (например, мелкоклеточного рака легких). В других вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-221 и/или миР-21 и используется для лечения глиобластомы. В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-155 и/или миР-17-92 и используется для лечения лимфомы (например, лимфомы Беркитта, диффузной крупной В-клеточной лимфомы, лимфомы краевой зоны или хронического лимфоцитарного лейкоза). В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-221, миР-222 и/или миР-146 и используется для лечения рака щитовидной железы. В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-372 и/или миР-373 и используется для лечения рака яичка (например, опухолей половых клеток яичка). В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию миР-18 и/или миР-224 и используется для лечения рака печени (например, гепатоцеллюлярной карциномы).

[00221] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные вирусные векторы, описанные в данном документе, содержат полинуклеотид, кодирующий молекулу полезной нагрузки, которая разрушает внеклеточный матрикс опухоли (ECM), что в некоторых аспектах приводит к усиленному распространению вируса. Матриксные металлопротеиназы (ММР) представляют собой цинк-зависимые протеазы, которые по своей активности классифицируются на коллагеназы, желатиназы, стромелизины и матрилизины. Такие протеазы, как правило, секретируются как про-ферменты (зимогены) и активируются путем протеолитического удаления пропептидного про-домена. Основная роль, которую играют MMP при раке, заключается в деградации ECM, которая способствует инвазии опухоли и метастазированию. ММР также участвуют в прогрессировании опухоли, эпителиально-мезенхимальном переходе (EMT) и ангиогенезе. MMP регулируются миР, так же как и TIMP, которые включают семейство из четырех ингибиторов протеаз (TIMP1, TIMP2, TIMP3 и TIMP4). Широкий спектр микросред опухоли может быть разрушен путем разрушения микроРНК или TIMP, которые негативно регулируют семейство MMP, рекомбинантными вирусными векторами по изобретению. Примеры взаимодействий миР/MMP приведены в таблице 5. Многие из таких взаимодействий показывают, что множественные MMP регулируются одной микроРНК: например, let-7 регулирует MMP-2, MMP-9 и MMP-14; миР-143 регулирует MMP-2, MMP-9 и MMP-13; миР-218 регулирует MMP-2, MMP-7 и MMP-9. Кроме того, подавляющее большинство MMP может регулироваться одним главным переключателем TIMP: например, известно, что TIMP1 ингибирует большинство всех известных MMP, а также способствует пролиферации клеток в широком диапазоне типов клеток; TIMP2 взаимодействует с MMP-14 и MMP-2.

[00222] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные онколитические вирусы, описанные в данном документе, содержат по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, который снижает экспрессию или функцию микроРНК, способной изменять внеклеточный матрикс или способной модулировать путь, изменяющий внеклеточный матрикс, особенно в микросреде опухоли (например, одной или нескольких микроРНК, перечисленных в таблице 5). Используемый в данном документе термин «ремоделирование микросреды» относится к миР. В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию или функцию одной ремоделирующей микросреду миР. В некоторых вариантах осуществления белок или олигонуклеотид снижает экспрессию или функцию по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более ремоделирующих микросреду миР. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество полинуклеотидов, кодирующих множество белков или олигонуклеотидов, которые снижают экспрессию или функцию множества ремоделирующих микросреду миР. В некоторых вариантах осуществления стратегии, описанные в данном документе, могут использоваться рекомбинантными вирусными векторами по настоящему изобретению для нокдауна или нарушения экспрессии или функции миР или TIMP, которые негативно регулируют MMP. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус уменьшает экспрессию TIMP, выбранного из TIMP1, TIMP2, TIMP3 и TIMP4.

[00223] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные онколитические вирусы, описанные в данном документе, содержат по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, который снижает экспрессию или функцию гена в геноме клетки-хозяина. В некоторых аспектах ген является онкогенным геном (например, геном, выбранным из генов, перечисленных в таблице 7). В некоторых аспектах, ген кодирует онкогенную миР (например, микроРНК из перечисленных в таблице 4), ремоделирующую микросреду миР (например, микроРНК из перечисленных в таблице 5), или негативный регулятор ECM-деградации (например, TIMP). Снижение экспрессии и/или функции гена может быть достигнуто на уровне транскрипции (например, путем мутации, делеции или сайленсинг последовательности геномной ДНК) или на уровне трансляции (например, путем ингибирования выработки генного продукта при деградации мРНК). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные онколитические вирусы, описанные в настоящем документе, содержат один или несколько полинуклеотидов, которые кодируют нуклеазы, снижающие экспрессию или функцию гена путем включения мутации, делеции или репрессии транскрипции последовательности гена. В конкретных вариантах осуществления нуклеаза выбрана из эндонуклеазы, связанной с кластерными короткими палиндромными повторами, разделенными регулярными промежутками (CRISPR), нуклеазы цинкового пальца (ZFN) или эффекторной нуклеазы, подобной активаторам транскрипции (TALEN). В неограничивающих примерах CRISPR-ассоциированная эндонуклеаза выбрана из SpCas9, SpCas9-HF1, SpCas9-HF2, SpCas9-HF3, SpCas9-HF4, SaCas9, FnCpf, FnCas9, eSpCas9, C2C1, C2C3, Cpf1, Casl, CaslB, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (также известный как Csnl и Csx12), Cas10, Csyl, Csy2, Csy3, Csel, Cse2, Cscl, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmrl, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csbl, Csb2, Csb3, Csxl7, Csxl4, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csxl, Csxl5, Csfl, Csf2, Csf3 и Csf4.

[00224] Рекомбинантные вирусные векторы по изобретению могут использовать нуклеазную систему CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Retats) / Cas (CRISPR Associated), которая представляет собой инженерную нуклеазную систему, основанную на бактериальной системе, которая может использоваться для инженерии генома млекопитающих. Обычно система включает в себя Cas-нуклеазу и направляющую РНК (gRNA). РНК состоит из двух частей; crispr-RNA (crRNA), которая специфична для последовательности геномной ДНК-мишени, и tracr RNA (trRNA), которая облегчает связывание Cas. И crRNA, и trRNA могут присутствовать в виде отдельных олигонуклеотидов РНК или могут присутствовать в одном и том же олигонуклеотиде РНК, обозначаемом как одна направляющая РНК (sgRNA). Используемый в данном документе термин «направляющая РНК» или «gRNA» относится либо к комбинации отдельной trRNA и отдельной crRNA, либо к sgRNA. См., например, Jinek et al. (2012) Science 337:816-821; Cong et al. (2013) Science 339:819-823; Mali et al. (2013) Science 339:823-826; Qi et al. (2013) Cell 152:1173-1183; Jinek et al. (2013), eLife 2:e00471; David Segal (2013) eLife 2:e00563; Ran et al. (2013) Nature Protocols 8(11):2281-2308; Zetsche et al. (2015) Cell 163(3):759-771; патентные публикации №№ WO 2007/025097, WO 2008/021207, WO 2010/011961, WO 2010/054108, WO 2010/054154, WO 2012/054726, WO 2012/149470, WO 2012/164565, WO 2013/098244, WO 2013/126794, WO 2013/141680, и WO 2013/142578; патентные публикации США №№ 2010-0093617, 2013-0011828, 2010-0257638, 2010-0076057, 2011-0217739, 2011-0300538, 2013-0288251 и 2012-0277120; и патент США № 8,546,553, каждый из которых включен в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

[00225] Множественные системы CRISPR-Cas класса 1, которые включают системы типа I и типа III, были идентифицированы и подробно охарактеризован ы с раскрытием сложной архитектуры и динамики эффекторных комплексов (Brouns et al., 2008, Marraffini and Sontheimer, 2008, Hale et al., 2009, Sinkunas et al., 2013, Jackson et al., 2014, Mulepati et al., 2014). Кроме того, некоторые системы CRISPR-Cas класса 2 типа II, которые используют гомологичные РНК-направляемые эндонуклеазы семейства cas9 в качестве эффекторов также были определены и экспериментально охарактеризованы (Barrangou et al., 2007, Garneau et al., 2010, Deltcheva et al., 2011, Sapranauskas et al., 2011, Jinek et al., 2012, Gasiunas et al., 2012). Вторая предполагаемая система CRISPR-Cas класса 2 типа V была недавно идентифицирована в нескольких бактериальных геномах. Предполагаемые системы CRISPR-Cas содержат большой блок, состоящий из ~ 1300 аминокислот, названный Cpf1 (CRISPR от Prevotella и Francisella 1).

[00226] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе онколитический вирус дополнительно содержит по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий trRNA и crRNA, нацеленный на микроРНК или TIMP. В некоторых случаях по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий трРНК и кРНК, вставляется в локус вирусного генома. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид представляет собой выделенную последовательность, содержащую синтетический изолятор или нативный вирусный (например, HSV) инсулятор). В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус простого герпеса, и по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий сайт связывания РНК, вставляется в один или между одним и несколькими локусами, включая область соединения внутренних повторов (содержащими одну копию каждого из диплоидных генов промотора ICP47 и ICP0, ICP34.5, LAT, ICP4), ICP0, LAT, UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и US12. В одном варианте осуществления онколитический вирус представляет собой вирус простого герпеса (HSV), и по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий сайт связывания РНК, вставлен в локус между открытыми рамками считывания UL3 и UL4 (например, фиг. 39 и фиг. 40).

[00227] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий молекулу полезной нагрузки, которая активирует или усиливает противоопухолевый иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой цитокин, хемокин, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, активирующее T-клетки биспецифичное антитело (BiTE). Например, в некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой антитело или его антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с рецепторами иммунной контрольной точки и ингибируют их (например, CTLA4, LAG3, PD1, PDL1 и др.). В некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой антитело к PD1 или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент или антитело к CTLA4 или антигенсвязывающий фрагмент.

[00228] В некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой белок, который связывается с рецептором клеточной поверхности и активирует его. Например, в некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки содержит эндогенный лиганд клеточной поверхности, такой как внеклеточный домен 41BBL, внеклеточный домен CD40L, FLT3L. В некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой цитокин (например, IFNγ, IFNα, IFNβ, TNFα, IL-12, IL-2, IL-6, IL-8, IL-15, GM-CSF, IL-21, IL-35, TGFβ и другие) или хемокин (например, CCL4, CXCL10, CCL5, CXCL13 или XCL1).

[00229] В некоторых вариантах осуществления молекула полезной нагрузки представляет собой белок, который связывается и активирует активирующий рецептор (например, FcγRI, FcγIIa, FcγIIIa, костимуляторные рецепторы и другие). В конкретных вариантах осуществления белок выбран из EpCAM, фолата, A2A, анти-FGF2, анти-FGFR/FGFR2b, анти-SEMA4D, CD137, CD200, CD38, CD44, CSF-1R, рецептора эндотелина B, ISRE7, LFA-1, NG2 (также известного как SPEG4), SMAD, STING и VCAM1.

[00230] В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии микроРНК, гена или TIMP, вставляется в локус вирусного генома рекомбинантного онколитического вируса. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид представляет собой выделенную последовательность, содержащую синтетический изолятор или нативный вирусный (например, HSV) инсулятор). В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус простого герпеса, и по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий сайт связывания РНК, вставляется в один или между одним и несколькими локусами, включая область соединения внутренних повторов (содержащими одну копию каждого из диплоидных генов промотора ICP47 и ICP0, ICP34.5, LAT, ICP4), ICP0, LAT, UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и US12. В одном варианте осуществления вирус представляет собой вирус простого герпеса (HSV), и по меньшей мере один полинуклеотид вставлен в локус между открытыми рамками считывания UL3 и UL4 (см., например, фиг. 39 и фиг. 40).

[00231] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. Активируемые протеазой антитела, такие как описаны Metz et al. (Protein Eng Des Sel, 25 (10): 571-80, 2012), активируются и связываются только с целями после расщепления протеазой защитного слоя. В некоторых случаях опухолевые микросреды обладают множеством протеаз, которые сильно отличаются от окружающих здоровых тканей. Например, протеаза катепсин B сверхэкспрессируется при многочисленных раковых заболеваниях, включая рак молочной железы, шейки матки, ободочной кишки, ободочной и прямой кишки, желудка, головы и шеи, печени, легких, меланомы, яичников, поджелудочной железы, предстательной железы и щитовидной железы. Человеческий деградом, состоящий из полного списка протеаз, синтезируемых клетками человека, состоит по меньшей мере из 569 протеаз, которые распределены по пяти широким классам (в порядке от наибольшего до наименьшего числа): металлопротеиназы (ММР), серин, цистеин, треонин и аспарагиновые протеазы (Lopez-Otin et al., Nat Rev Cancer, 7 (10): 800-8, 2007). В частности, протеазные антитела, специфически расщепляемые ММР, могут служить отличным средством нацеливания описанных в данном документе рекомбинантных вирусных векторов на микросреду опухоли, так как ММР обнаруживаются во внеклеточных и перицеллюлярных областях клетки. В таблицу 6 сведены сверхэкспрессирующиеся при раке протеазы, которые можно использовать для обеспечения специфического связывания рекомбинантных вирусных векторов, псевдотипированных с активируемыми протеазой антителами.

[00232] В определенных вариантах осуществления активируемое протеазой антитело включено в вирусную оболочку гликопротеина. Активируемые протеазой антитела могут быть включены в гликопротеиновую оболочку рекомбинантного вирусного вектора по изобретению (например, вектора HSV) для увеличения терапевтического индекса и снижения нецелевого инфицирования. В случае вектора HSV в некоторых вариантах осуществления гликопротеин может представлять собой gC или gD. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные онколитические вирусы, описанные в настоящем документе, содержат по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий активируемое протеазой антитело. В некоторых вариантах осуществления активируемое протеазой антитело активируется протеазой, выбранной из цистеинового катепсина, аспарагинового катепсина, калликреина (hK), сериновой протеазы, каспазы, матричной металлопротеиназы (ММР) и дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM). В некоторых вариантах осуществления протеаза выбрана из катепсина K, катепсина B, катепсина L, катепсина E, катепсина D, hK1, PSA (hK3), hK10, hK15, uPA, uPAR, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28 или протеазы, указанной в таблице 6.

[00233] В некоторых вариантах осуществления активируемое протеазой антитело связывает белок, показывающий повышенную экспрессию в раковой клетке или в микросредах рака, чем в нераковых клетках или в нераковых микросредах. В определенных аспектах активируемое протеазой антитело связывает NKG2D, c-met, HGFR, CD8, сульфат гепарана, VSPG4 (также известный как NG2), EGFR, EGFRvIII, CD133, CXCR4, карциноэмбриональный антиген (CEA), CLC-3, аннексин II, рецептор трансферрина человека или EpCAM. В некоторых случаях активируемые протеазой множественные антитела могут быть включены в одну вирусную векторную частицу для гарантии нацеливания на различные гистотипы опухоли. Например, в вирусную оболочку гликопротеина может быть включено по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10 или более активируемых протеазой антител. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более полинуклеотидов, которые кодируют по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 7, 8, 9, 10 или более активируемых протеазой антител. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит первое активируемое протеазой антитело, которое связывает первый белок, экспрессируемый в раковых клетках или в раковых микросредах на более высоком уровне чем в нераковых клетках или в нераковых микросредах, и второе активируемое протеазой антитело, которое связывает второй белок, экспрессируемый раковыми клетками или в раковых микросредах на более высоком уровне чем нераковыми клетками или в нераковых микросредах. В других вариантах осуществления онколитический вирус содержит множество активируемых протеазой антител, связывающих множество белков, экспрессируемых в раковых клетках или в раковых микросредых на более высоком уровне чем в нераковых клетках или в нераковых микросредах. Онколитический вирус содержит, например, активируемое протеазой антитело, которое представляет собой антител человека, гуманизированное антитело или химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит антитело, которое представляет собой полноразмерный иммуноглобулин, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, диатело, триатело, миниантитело, однодоменное антитело или мультиспецифическое антитело.

[00234] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит одну или несколько из: одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК (миР), встроенных в локус одного или нескольких вирусных генов, необходимых для репликации вируса; один или несколько полинуклеотидов, кодирующих один или несколько белков или олигонуклеотидов, где белки или олигонуклеотиды уменьшают экспрессию или ингибируют функцию миР, гена или TIMP; по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело; и/или полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит: множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус вирусного гена, необходимого для репликации вируса в нераковых клетках; и/или первый полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и/или второй полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит: множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус вирусного гена, необходимого для репликации вируса в нераковых клетках; и/или полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и/или по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В других вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус вирусного гена, необходимого для репликации вируса в нераковых клетках; и/или полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP; и/или по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В одном варианте осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит множество копий одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК, вставленных в локус вирусного гена, необходимого для репликации вируса в нераковых клетках; и/или первый полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и/или второй полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP; и/или по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В некоторых конкретных вариантах осуществления онколитический вирус, описанный в этом параграфе, представляет собой вирус простого герпеса, и вирусный ген, необходимый для репликации вируса в нераковых клетках, представляет собой UL1, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL11, UL12, UL14, UL15, UL17, UL18, UL19, UL20, UL22, UL25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, UL30, UL31, UL32, UL33, UL34, UL35, UL36, UL37, UL38, UL39, UL40, UL42, UL48, UL49, UL52, UL53, UL54, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, гамма-34,5, US3, US4, US5, US6, US7, US8, US9, US10, US11 и US12.

[00235] В определенных аспектах изобретение относится к рекомбинантному онколитическому вирусу, содержащему первый полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, предназначенный для снижения экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и второй полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, предназначенный для снижения экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP. В других вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP; и по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело. В одном варианте осуществления рекомбинантный онколитический вирус содержит первый полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, предназначенный для снижения экспрессии онкогенной микроРНК или онкогенного гена; и/или второй полинуклеотид, кодирующий белок или олигонуклеотид, нацеленный на снижение экспрессии ремоделирующей микросреду микроРНК или TIMP; и/или по меньшей мере одно активируемое протеазой антитело.

[00236] В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий первую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP4, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-124-3p, миР-1-3p и миР-143- 3p; вторую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP27, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР128-3p; и третью кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR UL8, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и XCL1. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и CCL4. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и FLT3L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и 41BBL. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую 41BBL и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к CTLA4 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к PD1 или к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична SEQ ID NO: 843, 844, 847 или 848. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты одной из SEQ ID NO: 843, 844, 847 или 848.

[00237] В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий первую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP4, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-124-3p, миР-1-3p и миР-143- 3p; вторую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP27, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР128-3p; и третью кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR UL8, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и XCL1. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и CCL4. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и FLT3L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и 41BBL. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую 41BBL и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к CTLA4 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к PD1 или к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 845 или 846. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты одной из SEQ ID NO: 845 или 846.

[00238] В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий первую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP4, содержащий 4 последовательности-мишени для каждой из миР-124-3p, миР-1-3p и миР-143- 3p; вторую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP27, содержащий 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР128-3p; третью кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR UL8, содержащий 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137-3p, миР-208b-3p и миР-126-3p; и четвертую кассету миР-TS, вставленную в 3 'UTR ICP34.5, содержащий 4 последовательности-мишени для каждой из миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219a-5p. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и XCL1. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и CCL4. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и FLT3L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и 41BBL. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую 41BBL и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к CTLA4 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к PD1 или к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 850. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 850.

[00239] В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий первую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP4, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-124-3p, миР-1-3p и миР-143- 3p; вторую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP27, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР128-3p; третью кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR UL8, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137-3p, миР-217-5p и миР-126-3p; и четвертую кассету миР-TS, вставленную в 3 'UTR ICP34.5, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219a-5p. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и XCL1. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и CCL4. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и FLT3L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и 41BBL. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую 41BBL и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к CTLA4 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к PD1 или к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 849. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 849.

[00240] В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус представляет собой вирус HSV, содержащий первую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP4, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-124-3p, миР-1-3p и миР-143- 3p; вторую кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR ICP27, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-219a-5p, миР-122-5p и миР128-3p; третью кассету миР-TS, вставленную в 3'-UTR UL8, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-137-3p, миР-217-5p и миР-126-3p; и четвертую кассету миР-TS, вставленную в 3 'UTR ICP34.5, содержащую 4 последовательности-мишени для каждой из миР-128-3p, миР-204-5p и миР-219a-5p. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CXCL10. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую CXCL10 и MMP9. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и XCL1. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и CCL4. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12, CXCL10 и FLT3L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и 41BBL. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую IL-12 и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую 41BBL и CD40L. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к CTLA4 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую антитело к PD1 или к PDL1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 851. В некоторых вариантах осуществления онколитический вирус содержит или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 851.

[00241] Изобретение также охватывает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую описанный в данном документе онколитический вирус.

Композиции и способы применения

[00242] Определенные аспекты изобретения относятся к культурам и композициям, содержащим описанные в данном документе онколитические вирусы. В некоторых аспектах изобретение относится к вирусному штамму, содержащему онколитический вирус, описанный в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вирусный штамм представляет собой однородный штамм. Подготовка и анализ вирусных штаммов хорошо известны в данной области. Например, вирусный штамм может быть изготовлен в роллерных флаконах, содержащих клетки, трансдуцированные вирусным вектором. Затем вирусный штамм можно очищать с помощью непрерывного градиента никоденца, аликвотировать и хранить до необходимости. Вирусные штаммы значительно различаются по титру, в основном в зависимости от вирусного генотипа и протокола и клеточных линий, используемых для их изготовления.

[00243] В конкретных вариантах осуществления титр вирусного штамма (например, вирусного штамма вектора на основе HSV), рассматриваемый в настоящем документе, составляет по меньшей мере примерно 10⁵ бляшкообразующих единиц (БОЕ), например, по меньшей мере примерно 10⁶ БОЕ или даже более предпочтительно по меньшей мере примерно 10⁷ БОЕ. В некоторых вариантах осуществления титр может составлять по меньшей мере примерно 10⁸ БОЕ или по меньшей мере примерно 10⁹ БОЕ, и наиболее предпочтительными являются популяции с высоким титром, по меньшей мере примерно 10¹⁰ БОЕ или по меньшей мере примерно 10¹¹ БОЕ.

[00244] Изобретение, кроме того, предусматривает композицию, содержащую онколитический вирус или молекулу нуклеиновой кислоты, описанные в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Фраза «фармацевтически приемлемый» относится к молекулярным веществам и композициям, которые при введении в организм субъекта (например, человека) не вызывают аллергическую или подобную неблагоприятную реакцию. Используемый в данном документе термин «композиция» относится к составу из одного или нескольких онколитических вирусов или молекул нуклеиновой кислоты, описанных в данном документе, которые могут быть введены или доставлены субъекту и/или клетке. Как правило, составы включают все физиологически приемлемые композиции, включая производные и/или пролекарства, сольваты, стереоизомеры, рацематы или таутомеры с любыми физиологически приемлемыми носителями, разбавителями и/или наполнителями. «Терапевтическая композиция» или «фармацевтическая композиция» (термины, используемые в данном документе взаимозаменяемо) представляет собой композицию из одного или нескольких агентов, которые можно вводить или доставлять пациенту и/или субъекту и/или клетке для лечения конкретного заболевания или расстройства.

[00245] Композиции, раскрытые в данном документе, могут быть составлены в нейтральной или солевой форме. «Фармацевтический приемлемая соль» включает соли присоединения кислоты и соли присоединения основания. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные со свободными аминогруппами белка) и которые образованы с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное. и органические кислоты, такие как, но не ограничиваясь этим, уксусная кислота, 2,2-дихлоруксусная кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, аскорбиновая кислота, аспарагиновая кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, 4-ацетамидобензойная кислота, камфорная кислота, камфора-10-сульфоновая кислота, каприновая кислота, капроновая кислота, каприловая кислота, угольная кислота, коричная кислота, лимонная кислота, цикламиновая кислота, додецилсульфоновая кислота, этан-1,2 -дисульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, галактаровая кислота, гентизиновая кислота, глюкогептоновая кислота, глюконовая кислота, глюкуроновая кислота, глутаминовая кислота, глутаровая кислота, 2-оксоглутаровая кислота, глицерофосфорная кислота, гликолевая кислота, гиппуровая кислота, изомасляная кислота, молочная кислота, лактобионовая кислота, лауриновая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, муциновая кислота, нафталин-1,5-дисульфокислота, нафталин- 2-сульфокислота, 1-гидрокси-2-нафтойная кислота, никотиновая кислота, олеиновая кислота, оротовая кислота, щавелевая кислота, пальмитиновая кислота, памовая кислота, пропионовая кислота, пироглутаминовая кислота, пировиноградная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, себациновая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, винная кислота, тиоциановая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, ундециленовая кислота и тому подобное. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия и тому подобное. Соли, полученные из органических оснований, включают, но не ограничиваются ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аммиак, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диэтаноламин, этаноламин, деанол, 2-диметиламиноэтанол, 2-диэтиламиноэтанол, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, бенетамин, бензатин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, триэтаноламин, трометамин, пурины, пиперазин, пиперидин, N-этилпиперидин, полиаминовые смолы и тому подобное. Особенно предпочтительными органическими основаниями являются изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметиламин, дициклогексиламин, холин и кофеин. После приготовления растворы будут вводить способом, совместимым с дозированной композицией, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы легко вводятся в виде различных лекарственных форм, таких как растворы для инъекций, капсулы для высвобождения лекарственного средства и тому подобное.

[00246] Используемый в данном документе термин «носитель» включает в себя любые и все растворители, дисперсионные среды, носители, покрытия, разбавители, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты, буферы, растворы носителей, суспензии, коллоиды и тому подобное. Использование таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев, когда какой-либо обычный носитель или агент несовместим с активным ингредиентом, предполагается его использование в терапевтических композициях. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в эти композиции.

[00247] Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает без ограничения любой адъювант, носитель, эксципиент, глидант, подсластитель, разбавитель, консервант, краситель/пигмент, усилитель вкуса, поверхностно-активное вещество, смачиватель, диспергирующий агент, суспендирующий агент, стабилизаторизотонический агент, растворитель, поверхностно-активное вещество, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие абсорбцию агенты и тому подобные, которые являются физиологически совместимыми, включая фармацевтически приемлемые среды для культивирования клеток и/или эмульгатор, одобренные Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США как приемлемые для использования у людей и/или домашних животных. Типичные фармацевтически приемлемые носители включают, но не ограничиваются ими, сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; трагакант; солод; желатин; тальк; масло какао, воски, животные и растительные жиры, парафины, силиконы, бентониты, кремниевая кислота, оксид цинка; растительные масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатные буферные растворы; и любые другие совместимые вещества, используемые в фармацевтических составах За исключением случаев, когда какой-либо обычный носитель или агент несовместим с агентами по настоящему изобретению, предполагается его использование в терапевтических композициях. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в эти композиции.

[00248] В композициях также могут присутствовать увлажняющие агенты, эмульгаторы и смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, антиадгезивные агенты, покрытия, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты.

[00249] Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают в себя: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т. п.; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (БГА), бутилированный гидрокситолуол (БГТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т. п.; и (3) металлохелатирующие агенты, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т. п.

[00250] В одном варианте осуществления композиция, содержащая носитель, подходит для парентерального введения, например, внутрисосудистого (внутривенного или внутриартериального), внутрибрюшинного или внутримышечного введения. Фармацевтически приемлемые носители включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для предусмотренного для немедленного приема приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Применение таких сред и средств в отношении фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев, когда какие-либо традиционные среды или агенты являются несовместимыми с вирусным вектором или молекулой нуклеиновой кислоты, предусматривается их применение в фармацевтических композициях согласно изобретению.

[00251] Композиции по изобретению могут содержать один или несколько полипептидов, полинуклеотидов, векторов, содержащих одни и те же инфицированные клетки, и т. д. в соответствии с описанием в настоящем документе, составленные в виде фармацевтически приемлемых или физиологически приемлемых растворов для введения клетке или животному отдельно либо в комбинации с одним или несколькими другими способами терапии. Также следует понимать, что при желании композиции по изобретению можно также вводить в комбинации с другими агентами, такими как, например, цитокины, факторы роста, гормоны, малые молекулы или различные фармацевтически активные агенты. Практически нет ограничений для других компонентов, которые также могут быть включены в композиции, при условии, что дополнительные агенты не оказывают неблагоприятного воздействия на способность композиции доставлять предполагаемую терапию.

[00252] В фармацевтических композициях по изобретению состав фармацевтически приемлемых носителей и растворов носителей хорошо известен специалистам в данной области, так же как и разработка подходящих режимов дозирования и лечения для использования конкретных композиций, описанных в настоящем документе, в различных схемах лечения. После приготовления растворы вводят способом, совместимым с дозированной композицией, и в количестве, которое является терапевтически эффективным для ослабления или устранения симптомов. Составы легко вводятся в виде различных лекарственных форм, таких как глотаемые растворы, капсулы для высвобождения лекарственного средства и тому подобное. В зависимости от состояния субъекта, получающего лечение, дозировка может быть определенным образом изменена. Лицо, ответственное за введение, может в любом случае определить подходящую дозу для каждого субъекта индивидуально. Кроме того, для введения человеку препараты соответствуют стандартам стерильности, общей безопасности и чистоты в соответствии с требованиями Центра оценки биологических исследований и оценок FDA. Способ введения, естественно, будет варьироваться в зависимости от места и характера подвергающегося лечению заболевания, и может включать, например, внутрикожное, трансдермальное, подкожное, парентеральное, назальное, внутривенное, внутримышечное, интраназальное, подкожное, чрескожное, внутритрахеальное, внутрибрюшинное, внутриопухолевое и пероральное введение, а также перфузию, промывание и прямую инъекцию.

[00253] В определенных обстоятельствах будет желательно доставлять композиции, рекомбинантные вирусные векторы и молекулы нуклеиновой кислоты, раскрытые в данном документе, парентерально, внутривенно, внутримышечно или даже внутрибрюшинно, как описано, например, в патенте США № 5,543,158; патенте США № 5,641,515 и патенте США № 5,399,363 (каждый из них конкретно включен в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте). Растворы активных соединений в виде свободного основания или фармакологически приемлемых солей могут быть приготовлены в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также могут быть приготовлены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, и в маслах. В обычных условиях хранения и использования эти препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.

[00254] Фармацевтические формы, подходящие для применения в виде инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий для немедленного приема (патент США № 5 466 468, конкретно включенный в данный документ в полном объеме путем ссылки). Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, что она должна легко выходить из шприца. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т. д.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем применения материалов для покрытия, таких как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсий и путем применения поверхностно-активных веществ. Предотвращению воздействия микроорганизмов может способствовать использование различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т. п. Во многих случаях предпочтительно включать изотонические средства, например сахара или хлорид натрия. Длительное всасывание композиций, вводимых путем инъекции, может быть достигнуто путем использования в композициях агентов, замедляющих всасывание, например моностеарата алюминия и желатина. Приготовление водной композиции, которая содержит белок в качестве активного ингредиента, хорошо известно в данной области. Как правило, такие композиции готовят в виде инъекционных препаратов, либо в виде жидких растворов, либо суспензий; также могут быть получены твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией. Препарат также может быть эмульгирован.

[00255] Например, для парентерального введения в водном растворе, раствор при необходимости должен быть подходящим образом забуферен и жидкий разбавитель сначала должен быть доведен до изотонического состояния добавлением достаточного количества физиологического раствора или глюкозы. Такие конкретные водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В связи с этим специалистам в данной области в свете настоящего раскрытия будет известна стерильная водная среда, которая может быть использована. Например, одна доза может быть растворена в 1 мл изотонического раствора NaCl и либо добавлена к 1000 мл жидкости для гиподермоклиза, либо введена в предлагаемом месте инфузии (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000). В зависимости от состояния субъекта, получающего лечение, дозировка будет определенным образом изменена. Лицо, ответственное за введение, в любом случае будет определять подходящую дозу для каждого субъекта индивидуально. Кроме того, для введения человеку препараты должны соответствовать стандартам стерильности, пирогенности и общим стандартам безопасности и чистоты в соответствии с требованиями департамента FDA по биологическим стандартам.

[00256] Стерильные инъекционные растворы можно готовить путем включения активных соединений в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными перечисленными выше другими ингредиентами в соответствии с требованиями и с последующей стерилизацией с фильтрацией. В общем случает дисперсии готовят путем включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный базовый раствор, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами приготовления являются технологии вакуумной сушки и сублимационной сушки, которые приводят к получению порошка активного ингредиента плюс любой дополнительный активный ингредиент из его ранее стерильно-профильтрованного раствора.

[00257] В определенных вариантах осуществления композиции могут доставляться посредством интраназальных спреев, ингаляций и/или других средств доставки аэрозоля. Способы доставки полинуклеотидов и пептидных композиций непосредственно в легкие через аэрозоли для назального введения описаны, например, в патенте США № 5,756,353 и патенте США № 5 804 212 (каждый из которых конкретно включен в данный документ в полном объеме путем ссылки). Аналогично, доставка лекарств с использованием интраназальных микрочастиц смолы (Takenaga et al., 1998) и лизофосфатидил-глицериновых соединений (пат. США № 5,725,871, конкретно включенный в данный документ в полном объеме путем ссылки) также хорошо известны в области фармацевтики. Аналогично, трансмукозальная доставка лекарственного средства в форме политетрафторэтиленовой матрицы описана в пат. США № 5 780 045 (конкретно включенном в данный документ в полном объеме путем ссылки).

[00258] В некоторых вариантах осуществления доставку можно проводить с помощью применения липосом, нанокапсул, микрочастиц, микросфер, липидных частиц, везикул, необязательно в смеси с полипептидами CPP, и т. п., для введения композиций настоящего изобретения в подходящие клетки-хозяева. В частности композиции настоящего изобретения можно составлять для доставки либо инкапсулированными в липидную частицу, липосому, везикулу, наносферу, наночастицу, либо подобными способами. Приготовление и применение таких носителей для доставки можно выполнять, используя известные и традиционные методики. Составы и композиции по изобретению могут содержать один или несколько полипептидов, полинуклеотидов и малых молекул, как описано в настоящем документе, в виде фармацевтически приемлемых или физиологически приемлемых растворов (например, культуральной среды) для введения в клетку или животное, либо отдельно или в сочетании с одним или несколькими другими методами терапии. Также следует понимать, что при желании композиции по изобретению можно также вводить в комбинации с другими агентами, такими как, например, клетки, другие белки или полипептиды или различные фармацевтически активные агенты.

[00259] В конкретном варианте осуществления состав или композиция в соответствии с настоящим изобретением содержит клетку, контактирующую с комбинацией любого количества полинуклеотидов или вирусных векторов, как предусмотрено в настоящем документе.

[00260] В определенных аспектах настоящее изобретение предлагает составы или композиции, подходящие для доставки вирусных векторных систем.

[00261] Типичные составы для доставки ex vivo могут также включать использование различных трансфекционных агентов, известных в данной области, таких как фосфат кальция, электропорация, тепловой шок и различные липосомные составы (т. е., опосредованная липидами трансфекция). Липосомы представляют собой липидные бислои, захватывающие фракцию водной жидкости. ДНК самопроизвольно связывается с внешней поверхностью катионных липосом (в силу своего заряда), и эти липосомы будут взаимодействовать с клеточной мембраной.

[00262] Конкретные варианты осуществления изобретения могут включать другие составы, например, хорошо известные в области фармацевтики и описанные, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000.

[00263] В определенных аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтически приемлемым композициям, которые включают терапевтически эффективное количество одного или нескольких вирусных векторов или полинуклеотидов, как описано в настоящем документе, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями (добавками) и/или разбавителями (например, фармацевтически приемлемой средой для культивирования клеток). Используемый в данном документе термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству композиции или рекомбинантного вируса, описанному в данном документе, требуемому для достижения желаемого физиологического и/или биологического результата. «Терапевтически эффективное количество» вируса, вирусного штамма или композиции может варьироваться в зависимости от таких факторов как состояние заболевания, возраст, пол и вес индивидуума, а также способность стволовых клеток и клеток-предшественников вызывать желаемый ответ у человека. Терапевтически эффективное количество также представляет собой количество, при котором любые токсические или вредные эффекты вируса или трансдуцированных терапевтических клеток перевешиваются терапевтически полезными эффектами. Термин «терапевтически эффективное количество» включает количество, которое эффективно для «лечения» субъекта (например, пациента). Терапевтически эффективное количество может быть определено количественно по общему количеству бляшкообразующих единиц (БОЕ) (например, по меньшей мере от 1е¹ до по меньшей мере 1е²⁰, в частности от примерно 1е⁴ до примерно 1е¹⁵, более конкретно от примерно 1е⁶ до примерно 1е¹² БОЕ) или количество вирусных геномов (например, от по меньшей мере 1e¹ до по меньшей мере 1e²⁰, в частности от примерно 1e⁴ до примерно 1e¹⁵, более конкретно, от примерно 1e⁶ до примерно 1e¹² вирусных геномов). Специалист в данной области поймет, что терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от типа вводимого вируса, природы состава, пути введения, природы и/или тяжести заболевания, подлежащего лечению, и/или общего состояния здоровья и благополучия субъекта.

[00264] Некоторые аспекты изобретения охватывают способ уничтожения раковой клетки, включающему в себя воздействие на раковые клетки онколитического вируса, описанного в данном документе, или его композиций в условиях, достаточных для того, чтобы онколитический вирус инфицировал и реплицировался в указанной раковой клетке, и где репликация онколитического вируса в раковых клетках приводит к гибели клеток. В некоторых вариантах осуществления раковая клетка имеет пониженную экспрессию миР по сравнению с нераковой клеткой. В некоторых вариантах осуществления раковая клетка, уничтоженная таким способом, представляет собой клетку in vivo. В определенных вариантах осуществления раковая клетка, уничтоженная таким способом, находится в опухоли.

[00265] Изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту профилактически эффективного количества или терапевтически эффективного количества онколитического вируса, вирусного штамма или композиции, как описано в данном документе. Термин «субъект» при использовании в данном документе, включает любое животное, у которого проявляется симптом заболевания, расстройства или состояния, которое можно лечить с помощью рекомбинантных вирусных векторов, композиций и способов, раскрытых в данном документе. Подходящие субъекты (например, пациенты) включают лабораторных животных (таких как мышь, крыса, кролик или морская свинка), сельскохозяйственных животных (таких как лошадь или корова) и домашних животных или домашних животных (таких как кошка или собака). Также включены приматы, не являющиеся человеком, и, предпочтительно, пациенты-люди.

[00266] Термин «введение» относится здесь к введению онколитического вируса, вирусного штамма или их композиции субъекту или к контакту онколитического вируса, вирусного штамма или их композиции с клеткой и/или тканью. Введение может происходить путем инъекции, ирригации, ингаляции, потребления, электроосмоса, гемодиализа, ионтофореза и других способов, известных в данной области. Путь введения будет варьироваться, естественно, в зависимости от места и характера заболевания, которое лечат, и может включать, например, ушную, буккальную, конъюнктивальную, кожную, зубную, эндоцервикальную, эндосинусиальную, эндотрахеальную, энтеральную, эпидуральную, интерстициальную, внутрисуставную, внутриартериальную, внутрибрюшную, внутриаурикулярную, интрабилиарную, интрабронхиальную, интубурсальную, интрацентральную, интрацеребральную, интрацистернальную, интракорнеальную, интракрональную, интракоронарную, интракраниальную, интрадермальную, интрадискальную, интрадуктальную, интрадуоденальную, интрадуоденальную, интрадуральную, интраэпикардиальную, интраэпидермальную, интраэзофагеальную, внутрижелудочную, интрагингивальную, внутрипеченочную, внутрибрюшинную, интралегионную, интралингвальную, интралюминальную, интралимфатическую, интрамаммарную, интрамедуллерную, интрамененингеальную, внутримышечную, интраназальную, интранодальную, интраокулярную, интраоментальную, интраовариальную, внутрибрюшинную, интраперикардиальную, интраплевральную, интрапростатическую, интрапульмональную, интраруминальную, интрасинальную, интраспинальную, интрасиновиальную, интратендиновую, интрастестулярную, внутритрахеальную, интратекальную, интраторакальную, внутритубулярную, внутриопухолевую, внутритипаническую, внутриматочную, внутрибрюшинную, внутрисосудистую, внутрижелудочковую, внутрипузырную, интравестибулярную, внутривенную, интравитреальную, ларанжевую, назальную, назогастральную, оральную, офтальмологическую, ротоглоточную, парентеральную, чрескожную, периартикулярную, перидуральную, периневральную, периодонтальную, респираторную, ретротубулярную, ректальную, спинальную, субарахноидальную, субконъюнктивальную, подкожную, субдермальную, субгингивальную, сублингвальную, подслизистую, субретинальную, местную, трансдермальную, трансэндокардиальную, трансмукозальную, трансплацентарную, трантрахеальную, трансстимпаническую, мочеточниковую, уретральную и/или вагинальную перфузию, лаваж, прямую инъекцию и пероральное введение.

[00267] Термин «лечение» как глагол и существительное в контексте настоящего описания относятся к введению субъекту терапевтически эффективного количества рекомбинантного вируса или его композиции, как описано в настоящем документе, таким образом, что у субъекта наблюдается улучшение в отношении заболевания или состояния или симптома заболевания или состояния. Улучшение - это любое улучшение или снижение выраженности заболевания или состояния или симптома заболевания или состояния. Улучшение является наблюдаемым или измеримым улучшением или может быть улучшением общего ощущения благополучия субъекта. Таким образом, специалист в данной области понимает, что лечение может улучшить состояние заболевания, но может не представлять собой полное излечение от заболевания. «Профилактически эффективное количество» относится к количеству вируса, вирусного штамма или композиции, эффективных для достижения желаемого профилактического результата. Используемый в данном документе термин «профилактика» может означать полное предотвращение симптомов заболевания, задержку появления симптомов заболевания или уменьшение тяжести впоследствии развившихся симптомов заболевания. Как правило, но необязательно, поскольку профилактическая доза используется у субъектов до или на более ранней стадии заболевания, профилактически эффективное количество меньше терапевтически эффективного количества.

[00268] В данном документе термин «рак» относится или описывает физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому (в том числе липосаркому, остеогенную саркому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, лейомиосаркому, хордомуа, лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, рабдомиосаркому, фибросаркому, злокачественную миксому, липосаркому, хондросаркому), нейроэндокринные опухоли, мезотелиому, синовиому, невриному, менингиому, аденокарциному, меланому и лейкоз или лимфоидные злокачественные новообразования. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиально-плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, аденокарциному легкого и плоскоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак ободочной кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, рак эндометрия или матки, рак слюнной железы, рак почки, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, рак печени, рак анальной области, рак полового члена, рак яичек, рак пищевода, опухоли желчевыводящих путей, опухоль Юинга, базальноклеточный рак, аденокарциному, рак потовых желез, рак сальных желез, папиллярный рак, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарциному, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, почечноклеточную карциному, гепатому, рак желчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, опухоль яичка, рак легких, рак мочевого пузыря, эпителиальную карциному, глиому, астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, гемангиобластому, акустическую неврому, олигодендроглиому, менингиому, меланому, нейробластому, ретинобластому, лейкоз, лимфому, множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, миелодиспластические заболевания, заболевания тяжелых цепей, нейроэндокринные опухоли, невриному и другие злокачественные опухоли, а также рак головы и шеи.

[00269] В определенных вариантах осуществления онколитический вирус (например, HSV), вирусный штамм или композиция, как описано в данном документе, используются для лечения рака, выбранного из рака легкого (например, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого), рака молочной железы, рака яичников, рака шейки матки, рака предстательной железы, рака яичек, колоректального рака, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака печени (например, гепатоцеллюлярной карциномы(ГЦК)), рака желудка, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, злокачественной глиома, глиобластома, меланома, В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (DLBCL) и краевой лимфомы (MZL).

[00270] В определенных аспектах изобретение относится к онколитическому вирусному вектору, как показано на любой из фигур или вариантов осуществления, раскрытых в данном документе.

Примеры

[00271] Следующие примеры приведены с целью иллюстрации различных вариантов осуществления изобретения и не предназначены для ограничения настоящего изобретения каким-либо образом. Настоящие примеры вместе со способами, описанными в данном документе, являются примерными и не предназначены для ограничения объема изобретения. Замены, модификации и другие изменения в описанных вариантах осуществления, которые охватываются объемом данного изобретения, как определено объемом формулы изобретения, рассматриваются особо.

Пример 1. Анализ последовательности миР нормальных и злокачественных клеток

[00272] Дифференциальная экспрессия миР является отличительной чертой многих видов рака (Lu et al., Nature, 2005). Проводились эксперименты для определения миР, которые были в основном высокодифференциально экспрессированы в восьми различных линиях раковых клеток. Дифференциальную экспрессию определяли путем сравнения с нераковыми контрольными тканями. Всего было отобрано 108 образцов. Подробные данные об образцах представлены в Таблице 11.

Таблица 11

Тип рака Количество раковых клеточных линий Количество контрольных образцов ткани Мочевой пузырь 8 4 Толстая кишка 8 3 Молочные железы 12 4 Поджелудочная железа 7 3 Легкое 8 5 Голова и шея 6 6 Невринома 7 4* Глиобластома 14 4* Дополнительные контрольные образцы Нормальная печень 3 Нормальный костный мозг 3

*Те же контрольные образцы, которые использовались для анализа невриномы и глиобластомы.

[00273] Для облегчения идентификации соответствующих последовательностей-мишеней микроРНК, подходящих для ослабления HSV в отдельных типах клеток, было выполнено профилирование последовательностей микроРНК для раковых линий и контрольной нераковой ткани. Для раковых и нераковых клеток, включая мочевой пузырь, ободочную кишку, грудь, поджелудочную железу, легкое, голову и шею, невриному, глиобластому, мозг, печень и костный мозг, были созданы библиотеки секвенирования обработанных dicer РНК. Данные библиотеки секвенирования микроРНК были нормализованы к общему количеству РНК и секвенированы с использованием системы секвенирования HiSeq 2500 со сверхвысокой пропускной способностью с химическими реагентами HiSeq V4 для секвенирования до 3e⁸ операций чтения/обработку (Illumina). Файлы FASTQ из обработок секвенирования анализировали с помощью инструмента анализа микроРНК в Basespace (Illumina). Ранжирование проводилось путем расчета среднего значения нормального значения, среднего значения раковых показателей и сортировки соотношения нормальные/раковые от высокого к низкому. Тепловые карты были сгенерированы с использованием натуральных логарифмических значений с нулем, а отрицательные значения преобразованы в ноль (шкала: черный цвет - высокий уровень экспрессии, белый - низкий). Нормализованные данные по образцам выражали в виде нормализованных показателей считывания микроРНК в данном образце. Нормализация относится к общему количеству считываний в данном образце относительно других образцов в сравнении.

[00274] Фиг. 1 иллюстрирует тепловую карту профиля экспрессии микроРНК в нераковой и раковой ткани мозга на основании данных двадцати пяти микроРНК. Дополнительные примеры тепловых карт профиля экспрессии микроРНК показаны для нераковой и раковой ткани мочевого пузыря (фиг. 2), молочной железы (фиг. 3), ободочной кишки (фиг. 4), головного мозга (фиг. 5), головы и шеи (фиг. 6) ткань легких (фиг. 7), поджелудочной железы (фиг. 8) и невриномы (фиг. 9), на основании показателей от двадцати пяти микроРНК в каждом примере. В таблице 12 приведены сведенные данные уровней экспрессии конкретных миР соответственно раковой и нераковой ткани. Как показано, уровни миР-451a снижены во всех типах опухолей по сравнению с нераковой тканью, что представляет потенциальную пан-онкосупрессорную микроРНК. МиР-1-3p подавляется во всех протестированных типах опухолей, присутствует на умеренных уровнях в нераковой ткани и присутствует на высоких уровнях в ткани головы и шеи. МиР-559 подавляется во всех протестированных типах опухолей, присутствует в основном на низких уровнях в нераковой ткани и присутствует на высоких уровнях в нераковой ткани легкого. МиР-145-5p подавляется во всех протестированных типах опухолей и присутствует в целом на высоких уровнях в большинстве протестированных нераковых типов тканей. МиР-143-3p подавляется в опухолях ободочной кишки, легких и поджелудочной железы и присутствует на высоком уровне во всех нормальных типах тканей и некоторых линиях опухоли молочной железы. Анализ данных микроРНК выявил по меньшей мере одиннадцать микроРНК, которые показывают новые и неожиданные профили экспрессии микроРНК, ранее не идентифицированные в литературе.

Таблица 12

МиР-451а миР-1-3p миР-559 миР-145-5p миР-143-3p Ткань Норма Рак Норма Рак Норма Рак Норма Рак Норма Рак Мочевой пузырь 1402,9 21,1 175 0,8 14 0,4 971,5 39,8 489028,8 14904,6 Молочные железы 2262,1 3,9 3 0,3 88,4 0,9 406,1 106,6 125943,9 91543,1 Толстая кишка 3606,9 22 149,3 1,6 40,8 2,1 1177,3 0,5 809955,6 193,9 Глиома 4269,7 16,7 75,2 1 162,7 0,4 2399,2 7,2 514114,8 1248,6 Голова и шея 11919,8 10,3 2846,6 2,6 71,2 2,2 690,9 30,4 331034,2 20706,2 Легкое 31442 10,5 73,3 1,4 548,3 0,1 1547,5 1 436136,8 390,9 Поджелудочная железа 1035,8 13,3 4,1 0,4 13,3 0,5 81,7 0,5 25557 269,8

[00275] Многие из этих идентифицированных микроРНК являются пан- или мультиопухолеспецифичными. Например, экспрессия миР-451a, миР-559, миР-1-3p, миР-145-3p и миР143-3p в целом была подавлена во всех протестированных линиях раковых клеток по сравнению с контрольными тканями. Это было особенно примечательно для миР-451a, которая была высоко экспрессирована во всех нормальных типах тканей и существенно подавлена во всех типах рака, таким образом представляя панспецифическую онкосупрессорную микроРНК. Экспрессия миР-559 была ниже в нормальных типах тканей, за исключением нормальной легочной ткани, а экспрессия миР-1-3p и mir-145-3p в нормальной ткани была переменной. Несмотря на изменчивость величины различий и абсолютных уровней экспрессии, средняя экспрессия каждой миР в линиях раковых клеток была существенно ниже по сравнению с уровнями в соответствующих нормальных тканях. Такие микроРНК являются кандидатами для генерации панопухолевых вирионов HSV, которые способны широко лечить различные типы рака. Хотя средняя экспрессия для миР-451a, миР-559, миР-1-3p, миР-145-3p и миР143-3p была ниже в линиях раковых клеток по сравнению с нормальными контролями, сниженная экспрессия проявлялась не у всех без исключения раковых клеточных линий. Например, 2/3 из протестированных образцов нормального мочевого пузыря показали повышенную экспрессию миР-145-3p, в то время как экспрессия в оставшемся образце была практически аналогична средней, наблюдаемой в линиях раковых клеток. Аналогичные результаты наблюдались в клеточных линиях рака молочной железы. Хотя среднее число считываний для всех образцов рака молочной железы составляло 106, 5/12 образцов имели нормализованное число считываний > 1000 событий, 2 из которых показали > 40 000 событий.

[00276] Эти данные указывают на способность генерировать единый миР-ослабленный онколитический вирус, способный нацеливаться на широкий спектр типов опухолей. Например, конструкция, содержащая последовательности-мишени для миР-124, миР-451a, миР-559, миР-1 и миР-145-3p, может быть использована для лечения всех протестированных типов опухолей (например, мочевого пузыря, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, легких, головы и шеи, невриномы и глиобластомы). Изменчивость уровней экспрессии миР при разных типах рака указывает на потенциальную необходимость стратификации пациентов по экспрессии миР или путем использования дополнительного биомаркера.

[00277] Дополнительное профилирование микроРНК между раковыми и нераковыми тканями проводили с использованием количественного анализа экспрессии от Nanostring. Результаты этих экспериментов показаны для образцов мозга (фиг. 50) и демонстрируют идентификацию дополнительных микроРНК, демонстрирующие различную экспрессию в раковой и нераковой ткани мозга, которые ранее не были идентифицированы в более ранних исследованиях, описанных выше, а именно миР- 9-5p, миР-128-3p, миР-137, миР-129-2-3p и миР-487b-3p. Дополнительные результаты показаны для образцов сердца (фиг. 51), демонстрируя различную экспрессию миР-208b-3p, миР-1-3p, миР-208a-3p, миР133-3p, миР-4284 и миР-499a-5p в раковых и нераковых тканях сердца. Дополнительные результаты показаны для образцов периферической нервной системы (фиг. 52A-B), демонстрируя различную экспрессию миР-204-5p, миР-1-3p, миР-206, миР-9-5p, миР-199b-5p, миР -145-5p, миР-100-5p, миР-574-3p. В частности, миР-219a-2-3p, миР-9-5, миР-219a-5p и миР-204-5p по-разному экспрессируются в спинном мозге.

Пример 2. Идентификация вирусных генов для ослабления миР-T.

[00278] Для проверки ослабления генотипа HSV был выполнен скрининг миRNA. Скрининг миRNA является идеальным способом тестирования фенотипа ослабления RISC немедленно-ранних генов и выбора ранних генов. МиРНК, нацеленные на гены HSV ICP27, ICP4, ICP0, UL5, UL8, UL9, ICP8, ULC39/40, ICP22, UL30, UL42 и VP19, трансфицировали индивидуально и в пулах в клетки A253. Через 24 часа после трансфекции миРНК клетки инфицировали ONCR-003 или ONCR-010 (описано ниже в таблице 13), каждый из которых содержит кассету GFP. Распространение вируса измеряли через 48 часов после заражения путем количественной оценки интенсивности GFP. Гены HSV, идентифицированные как потенциальные попадания, были проверены с помощью вестерн-блотов, измерений вирусного титра и ОТ-ПЦР.

[00279] Результаты проведения скринингов показаны на фиг. 47A и 47B. Отдельные микроРНК, опосредующие > 75% нокдаун соответствующего гена HSV, указаны стрелками на фиг. 47A, а интенсивность GFP для выбранной подгруппы миРНК показана на фиг. 47B. Как показано на фиг. 48, опосредованный миРНК нокдаун ICP4, UL5, UL8, ICP8, ICP22 и UL30 существенно снижал репликацию вируса ONCR-003, о чем свидетельствует снижение интенсивности GFP. Кроме того, миРНК-опосредованный нокдаун ICP27, ICP4, UL5, UL8, UL9, ICP8, ICP22 и ICP30 существенно уменьшал репликацию вируса ONCR-010, на что указывает снижение интенсивности GFP. Клетки, инфицированные ONCR-010, дополнительно анализировали вестерн-блоттингом для определения экспрессии определенных вирусных белков. Как показано на фиг. 49, значительное снижение этих генов HSV также наблюдалось на уровне белка.

Пример 3. Построение и использование репортерной системы для быстрого анализа обусловленного микроРНК ослабления генов

[00280] Репортерная система была разработана для оценки обусловленного микроРНК ослабления генов с использованием практически любой последовательности-мишени микроРНК и родственной микроРНК. В этой системе (показанной на фиг. 10) последовательность-мишень, распознаваемая микроРНК (т.е. hsa-миР-122), была вставлена в 3 'UTR дестабилизированного зеленого флуоресцентного белка (dsGFP). Затем родственную микроРНК экспрессировали через индуцируемый тетрациклином (tet) промотор, используя mCherry в качестве контроля экспрессии микроРНК. Все векторы экспрессии были клонированы в tet-репрессируемый вектор pcDNA5 Frt/To, который также экспрессирует mCherry (pTF002). Все микроРНК для экспрессии генерировались путем синтеза генов из геномной ДНК человека и были клонированы в pTF002. Для генерации репортерных векторов ослабления dsGFP клонировали в кДНК 3.1 +, генерируя вектор pTF004. Векторы ослабления содержат четыре тандемных повтора обратного комплемента исследуемой последовательности микроРНК, разделенных 8-16 нуклеотидами. Плазмиды конструировали вставкой синтетически сгенерированных олигонуклеотидов в 3'-UTR гена dsGFP pTF004 с использованием стандартных способов молекулярной биологии. В первый день клетки HEK293TetR трансфицировали плазмидами репортерной экспрессии и ослабления микроРНК (по 0,15 мкг каждая, всего 0,3 мкг промоторсодержащей плазмиды CMV) с использованием липофектамина 2000 в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen). На второй день клетки обрабатывали тетрациклином в концентрации 5 нг/мл и оставляли инкубироваться до 72 часов. После инкубации флуоресцентные сигналы GFP и mCherry ежедневно определяли с помощью многомодового считывателя микропланшетов SpectraMax® i3x Minimax (Molecular Devices) и анализировали с использованием программного обеспечения для визуализации Softmax Pro или Metamorph (Molecular Devices). Фазовые изображения были получены с выдержкой 5-6 мс. Флуоресцентные изображения были получены с экспозицией GFP (канал 541 нм) 10 мс и mCherry (канал 713 нм) 200-1500 мс.

[00281] Фиг. 11 иллюстрирует опосредованное миР-122 ослабление экспрессии GFP при индукции экспрессии миР-122 посредством tet в течение 24 часов. Контрольные имитирующие микроРНК, миР-184, миР-34a и Let7a, не ослабляют уровни GFP, также ослабление GFP не наблюдается в отсутствие tet. На фиг. 12 показано влияние миР-122, миР-184, миР-34a и Let7a на ослабление GFP-кассет с миР-TS-кассетами, содержащими каждую последовательность-мишень миР по отдельности и в комбинациях кассет миР-122/Let7a, миР-122/Let7a/миР-34a или миР-122/Let7a/миР-184. Снижение GFP наблюдается только при совместном наличии соответствующей миР и родственной последовательности-мишени (обведенные ячейки). Фиг. 13 служит в качестве не ослабленного контроля и показывает экспрессию mCherry как меру экспрессии имитирующих миР-122, миР-184, миР-34a и Let7a. На фиг. 14 показано влияние экспрессии имитирующих миР-122, миР-124, миР-145, миР-199 и миР-451 на GFP-ослабленные кассеты, включающие кассеты миР-TS, содержащие каждую из последовательностей-мишеней миР по отдельности (обведенные ячейки). Неослабленные контроли, показанные на фиг. 15, показывают экспрессию миР-122, миР-124, миР-145, миР-199 и миР-451 и экспрессию mCherry с использованием каждой последовательности-мишени по отдельности.

[00282] Способность дополнительных комбинаций последовательностей-мишеней миР ослаблять экспрессию GFP в присутствии родственных имитаторов миР показана на фиг. 16 - фиг. 26. На каждом рисунке флуоресценция GFP измеряется через 72 часа после трансфекции. В каждом случае вставка указанных последовательностей-мишеней миР приводила к ослабленной экспрессии GFP при параллельной экспрессии родственных миР. Показаны эффекты введения последовательностей-мишеней миР-122 и миР-184 (фиг. 16), последовательностей-мишеней миР-34a и миР-184 (фиг. 17), последовательностей-мишеней Let-7a и миР-184 (фиг. 18), последовательностей-мишеней миР-124 и миР-184 (фиг. 19), последовательностей-мишеней миР-145 и миР-184 (фиг. 20), последовательностей-мишеней миР-199 и миР-451 (фиг. 21), последовательностей-мишеней миР-125 и миР-451 (фиг. 22), последовательностей-мишеней миР-126 и миР-451 (фиг. 23), последовательностей-мишеней миР-127 и миР-451 (фиг. 24), последовательностей-мишеней миР-133 и миР-451 (фиг. 25), и последовательностей-мишеней миР-223 и миР-451 (фиг. 26).

[00283] Таким образом, эти данные указывают на то, что экспрессия миР может приводить к специфическому ослаблению генов, экспрессирующих родственную последовательность-мишень миР.

Пример 4. Генерация микроРНК-ослабленного HSV

[00284] После проверки на основе репортерного гена последовательностей-мишеней микроРНК и родственных пар микроРНК были получены вирусы на основе HSV, содержащие кассеты миР-TS. Была произведена серия модификаций в KOS-37 ВАС, полноразмерном геномном клоне штамма KOS HSV-1 на бактериальной искусственной хромосоме (ВАС) в соответствии с описанием (Mazzacurati et al., Mol Ther., 2015). Продукт, KG ^BAC, был удален из области внутренних повторов (соединения), содержащей по одной копии каждого из диплоидных генов ICP0, ICP34.5, LAT и ICP4 вместе с промотором для гена ICP47. Эта делеция облегчает манипулирование оставшимися копиями 4 удаленных генов, обеспечивает достаточное пространство для потенциального включения трансгенов, усиливающих онколитическую активность вируса, и повышает специфичность опухоли за счет снижения экспрессии фактора нейровирулентности ICP34.5; устранение экспрессии ICP47 способствует иммунному распознаванию инфицированных раковых клеток вирус-специфическими Т-клетками. KG ^BAC также содержит открытую рамку считывания GFP (ORF), конденсированную с ORF гликопротеина С (gC) через пептидную последовательность 2А для обеспечения мониторинга поздней (пост-репликационной) экспрессии вирусного гена. Наконец, KG ^BAC содержит пару мутаций в гене gB, которые, как показано, усиливают проникновение HSV через неканонические рецепторы (см., например, международную публикацию PCT № WO 2011/130749). Кассета миР-TS, содержащая 4 повтора последовательности-мишени для миР-124-3p, была рекомбинирована в 3'-UTR ICP4 для генерации вектора 2A5B (см., например, международную публикацию PCT № WO 2015/066042) и кассета экспрессии для MMP9 была вставлена в межгенную область между генами UL3 и UL4 для генерации вектора 2A5B-MMP9 (ONCR-003). Дополнительные кассеты последовательности-мишени микроРНК были рекомбинированы в 3'-UTR генов ICP4, ICP27, UL8, UL42 и/или ICP34.5 ONCR-003 для создания конструкций, показанных в таблице 13 ниже. Все конструкции BAC были преобразованы в вирусные частицы с одновременным удалением последовательностей BAC, расположенных между сайтами loxP, путем трансфекции клеток Vero-Cre. После клонирования посредством бляшкообразования вирусные популяции подготавливали и титровали в клетках Vero.

Таблица 13 Типичные микроРНК-ослабленные конструкции HSV

Конструкции ICP27 UL8 ICP34.5 ICP4 UL42 ONCR-003 Отсутствует ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-010 122-5p
34a-5p
Let-7a-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-011 125a-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-012 143-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-013 145-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-014 199a-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-015 1-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-016 133a-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-017 223-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-018 451a^# (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-019 126-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-020 127a-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-021 133b-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-022 134-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-030 199a-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-035 214-3p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-036 122-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-039 122-5p (2x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-040 122-5p (3x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-043 137-3p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-047 34a-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-048 184-3p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-053 Let7a-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-054 122-5p
184-3p
Let-7a-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-055 145-3p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-062 559-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-063 122-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-064 122-5p
Let-7a-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-081 ✖ ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (1x) ONCR-082 ✖ ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (2x) ONCR-083 ✖ ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (3x) ONCR-084 ✖ ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (4x) ONCR-092 122-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (4x) ONCR-093 122-5p (4x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (1x) ONCR-094 122-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (1x) ONCR-095 122-5p (1x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (3x) ONCR-096 122-5p (4x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (4x) ONCR-098
ONCR-099 1-3p
145-5p
199a-5p
559-5p ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-100 ✖ ✖ ✖ 124-3p (4x) 122-5p (3x) ONCR-103 122-5p (3x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (1x) ONCR-104 122-5p (3x) ✖ ✖ 124-3p (4x) 125a-5p (4x) ONCR-129
ONCR-144 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) ✖ ✖ 124-3p (4x), 1-3p (4x), 143-3p (4x) ✖ ONCR-130 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) ✖ ✖ 124-3p (4x) ✖ ONCR-131
ONCR-136
ONCR-155 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) ✖ 124-3p (4x), 1-3p (4x), 143-3p (4x) ✖ ONCR-132 ✖ 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) ✖ 124-3p (4x) ✖

^# миР-451a была неканонически обработана Ago2 и не имела плечей -3p и -5p.

Пример 5. Анализ вирусной инфекционности с использованием микроРНК-ослабленного HSV

[00285] Для анализа на вирусную инфекционность и репликацию в нормальных и раковых клетках ослабленные микроРНК частицы HSV тестировали в следующем анализе in vitro. В первый день в каждый инфицированный тип клеток вводили частицы HSV для достижения множественности заражения (moi) 0,01. В дни со второго по пятый вирусную инфекционность анализировали путем обнаружения GFP с использованием многорежимного считывателя микропланшетов SpectraMax® i3x Minimax (Molecular Devices) и анализировали с использованием программного обеспечения для визуализации Softmax Pro или Metamorph (Molecular Devices). Фазовые изображения были получены с выдержкой 5-6 мс. Флуоресцентные изображения получали при экспозиции GFP (канал 541 нм) 10 мс и экспозиции mCherry (канал 713 нм) 200-1500 мс для оценки любого потенциального неспецифического сигнала аутофлуоресценции.

[00286] Репликация ONCR-011 была значительно ослаблена в постмитотической ткани легкого благодаря присутствию кассеты миР-T125 в гене ICP27 и высоким уровням миР-125a (> 3000 событий, таблица 14 ниже) в этих клетках, как показано на 27А (считано GFP-положительным количественным анализом клеток) и фиг. 27С (считано количественной ПЦР). Хотя ONCR-011 и контрольный вирус ONCR-003 содержат последовательности-мишени миР-124 в гене ICP4, миР-124 присутствует на низких уровнях (<100 событий, таблица 14 ниже), которых недостаточно для ослабления репликации вируса (фиг. 27B и фиг. 27D). И ONCR-011, и ONCR-003 свободно реплицировались в клетках рака головы и шеи (A253), поскольку эти клетки содержат низкие уровни миР-125a и миР-124 (<100 событий) (таблица 14).

Таблица 14. События миР-125a и миР-124 в постмитотических клетках легких и клетках A253

Клетки. События микроРНК 125a События микроРНК 124 PM-легкое > 3000 < 100 H&N CA < 100 < 100

[00287] На фиг. 28 показана репликация миР-145-ослабленной конструкции ONCR-013 в клетках HCC1395 и A253. Как показано на фиг. 28A (считано с помощью GFP-положительного количественного определения клеток) и на фиг. 28B (считано с помощью количественной ПЦР), репликация ONCR-013 была значительно ослаблена в клетках HCC1395, но не в клетках A253 из-за высокой экспрессии миР-145 в A253 и отсутствие экспрессии в клетках HCC1395 (таблица 15).

Таблица 15: события миР-145 в клетках A253 и HCC1395

Клетки. События микроРНК 145 A253 0 HCC1395 4487

[00288] На фиг. 29 показано ослабление миР-143-3p-ослабленной конструкции (ONCR-012) и миР-199a-5p-ослабленной конструкции (ONCR-014) в нормальных клетках легких BEAS-2B. Как показано, репликация ONCR-014 была значительно ослаблена в нераковой ткани легкого (фиг. 29A, считывание с помощью GFP-положительного количественного определения клеток и фиг. 29B, считывание с помощью количественной ПЦР), что указывает на то, что последовательности-мишени миР-199a-5p могут ослаблять репликацию вируса в нормальных клетках легких.

Пример 6. Ослабленная репликация oHSV, включающая множество последовательностей-мишеней микроРНК в нескольких локусах генов.

[00289] Инфекционность вируса и репликацию конструкций, содержащих кассеты миР-TS в нескольких генетических локусах, оценивали в клетках A253, Hep3B и Huh7. В настоящем документе представлены результаты для ослабленных миР конструкций HSV ONCR-036, ONCR-063, ONCR-093, ONCR-094, ONCR-095 и ONCR-096. Каждый из этих вирусов содержал одну или несколько последовательностей-мишеней миР-124, одну или несколько последовательностей-мишеней миР-122 и/или одну или несколько последовательностей-мишеней миР-125a, вставленных в локусы ICP4, ICP27 и/или UL42. Экспрессию миР-122 и миР-125a в каждой из клеточных линий оценивали с помощью анализа TaqMan. Вкратце, общую РНК, включая небольшую фракцию РНК, выделяли из растущих клеток с помощью колонок миРNeasy. Затем РНК использовали в качестве субстрата для миР-122 и миР-125-специфичных анализов TaqMan, и проводили параллельный анализ TaqMan для snRNA U6 для нормализации уровней экспрессии по типу клеток в соответствии с методом ΔΔCT. Данные представлены в виде кратного изменения относительно самой низкой рассматриваемой клеточной линии в каждом анализе (клетки A253, фиг. 30A; Hep3B, фиг. 30B). Как показано, клетки A253 не экспрессируют миР-122 или миР-125a. Клетки Hep3B экспрессируют высокие уровни миР-125 и низкие уровни миР-122, а клетки Huh7 экспрессируют миР-125a и высокие уровни миР-122.

[00290] Инфекцию и репликацию вируса оценивали в анализе in vitro. Вкратце, клетки высевали при 45 000 клеток/лунку в 48-луночный планшет и культивировали в течение ночи. В первый день частицы HSV вводили в клетки каждого типа для достижения множественности заражения (moi) 0,01. Через 48 часов после заражения вирусная инфекционность оценивалась с помощью флуоресцентной микроскопии. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 30C, вирусная репликация показана уровнями eGFP. Эти данные демонстрируют усиление ослабления репликации вируса в клетках, которые экспрессируют промежуточные и высокие уровни миР-122 и миР-125a (клетки Huh7) по сравнению с ослаблением, наблюдаемым в клетках, которые экспрессируют только один из родственных миР (Hep3B, экспрессирующих высокие уровни миР-125a) или по сравнению с клетками, которые не экспрессируют ни одной родственной миР (клетка A253, не экспрессирующая ни миР-125a, ни миР-122).

[00291] Также оценивали распространение вируса и экспрессию белка. Вкратце, клеточные лизаты собирали через 72 часа после заражения и подвергали анализу PAGE и вестерн-блоттингу. Антитело к капсиду HSV1 (VP5) использовали для мониторинга распространения вируса/экспрессии белка, а антитело B-actin использовали в качестве контроля нагрузки. В клетках A253, в которых отсутствовала экспрессия миР-125a или миР-122, наблюдался высокий уровень репликации вируса у всех миР-ослабленных вирусов (фиг. 31, полосы 3-6) по сравнению с контрольными не ослабленными вирусами (фиг. 31, ONCR-003 как не ослабленный контроль). Однако вирусная репликация была снижена в клетках Huh7, которые экспрессируют как родственные микроРНК, так и особенно высокие уровни миР-122. Эти данные иллюстрируют ослабление вируса специфическими миР относительно контрольного вируса.

[00292] Для дальнейшего подтверждения того, что сниженная вирусная репликация миР-ослабленных вирусов HSV опосредована экспрессией специфических миР, клетки A253, которые не экспрессируют эндогенные миР-122 или миР-125a, были трансфицированы имитаторами миР-122 и миР-125a. Вкратце, клетки A253 высевали в количестве 35 000 клеток/лунку в 48-луночный планшет и культивировали в течение ночи. Затем клетки трансфицировали с помощью имитатора микроРНК Ambion в количестве 2,5 пМ/лунку с липофектамином RNAiMAX. Общую РНК, включая небольшую фракцию РНК, выделяли из растущих клеток с помощью колонок miRNeasy. Эти образцы РНК были использованы в качестве субстрата для миР-122 и миР-125-специфичных анализов TaqMan, и проводили параллельный анализ TaqMan для snRNA U6 для нормализации уровней экспрессии по типу клеток в соответствии с методом ΔΔCT. Результаты представлены на фиг. 32. Как показано на фиг. 32A и фиг. 32B, миР-122 и миР-125 имитируют специфически повышенные внутриклеточные уровни экспрессии миР-122 и миР-125 в клетках A253 на порядки.

[00293] На следующий день клетки по-отдельности подсчитывали и инфицировали ONCR-036, ONCR-063, ONCR-093, ONCR-094, ONCR-095 или ONCR-096 миР-ослабленными частицами HSV и не ослабленными контролями ONCR-003 при MOI 0,01; каждый из вирусов oHSV добавляли в 50 мкл в течение 1 часа с последующим добавлением полной среды. eGFP, экспрессируемый продуктивной вирусной инфекцией, оценивался с помощью флуоресцентной микроскопии, полученной через 48 часов после заражения. Все изображения представлены с одинаковой экспозицией и обработкой. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 32C и количественно определены путем обнаружения GFP с использованием многорежимного считывателя микропланшетов SpectraMax® i3x Minimax (Molecular Devices) и проанализированы с использованием Softmax Pro на фиг. 32D. Эти данные служат примером ослабленной репликации вируса в присутствии имитирующей миР-122 у всех вирусов, за исключением ONCR-003 (WT). Кроме того, уровень ослабления был пропорционален количеству копий последовательностей-мишеней миР, присутствующих в конструкциях HSV, с наибольшим снижением GFP в ONCR-063, ONCR-093, ONCR-096, каждая из которых содержит 4 повтора последовательности-мишени миР-122 в гене ICP27. Кроме того, эти данные иллюстрируют ослабленную вирусную репликацию в присутствии миР-125a, имитирующих ONCR-093, -094, -095 и -096, относительно ONCR-003 (WT) и ONCR-036/ONCR-063 (каждый из которых содержит только последовательности-мишени миР-122).

[00294] Аналогичные эксперименты проводились для оценки вирусной репликации дополнительных конструкций, включающих несколько кассет миР-TS в двух или более вирусных генах (например, ONCR-129, ONCR-131, ONCR-125, ONCR-126, ONCR-128, ONCR-130). В каждом случае экспрессия одной или нескольких микроРНК способна ослаблять вирусную репликацию конкретной конструкции, содержащей последовательность-мишень, соответствующую экспрессируемой микроРНК (данные не показаны).

Пример 7. Вычислительный метод для генерации кассет миР-TS.

[00295] На основании данных, описанных в предыдущих примерах, были созданы кассеты последовательности-мишени миР (миР-TS) для встраивания в конкретные гены HSV. Последовательности-мишени миР, демонстрирующие различную экспрессию в раковых и нераковых клетках различных типов тканей, были отобраны для создания кассет, которые способны ослаблять репликацию вируса в широком спектре здоровых клеток, в то же время обеспечивая репликацию вируса в раковых клетках, где экспрессия родственных миР снижается.

[00296] Этот пример иллюстрирует способ генерации кассет-кандидатов миР-TS и выбранных из списка предпочтительных кандидатов. Способ, реализованный на компьютерном языке Python, изображен на фиг. 1. Входные данные для способа включают список затравок для исключения - в данном примере были исключены затравочные последовательности для микроРНК, которые экспрессируются при раке - и список миР-TS для включения в кассету. Включенные миР-TS, используемые в этом примере, представлены в таблице 10 вместе с последовательностью родительской микроРНК и длиной каждого в нуклеотидах. МиР-TS допускают несовершенные совпадения между микроРНК и миР-TS, поэтому следует понимать, что кассеты могут быть изготовлены с несовершенными миР-TS. Кассеты миР-TS могут быть изготовлены с другими миР-TS, включая миР-TS, основанные на любой из микроРНК, известных в данной области техники или открытых в будущем.

[00297] Для этого примера мы разработали четыре кассеты миР-TS, по одной для каждого из четырех основных вирусных генов: ICP4, ICP27, ICP34.5 и UL8, как показано в таблице 16. Но в принципе эти кассеты можно использовать с другими вирусными (или невирусными) генами. Поскольку вирусные гены находятся в обратной комплементарной ориентации в предпочитаемых нами векторах, в каждом случае использовалась обратная комплементарная последовательность. Аббревиатура «миР-126m» относится к версии сайта миР-126, мутагенизированной для улучшения сайта путем удаления соответствия исходной последовательности для oncomiR миР-155. Аббревиатура «миР-128m» относится к версии сайта миР-128, мутагенизированной для улучшения сайта путем удаления соответствия исходной последовательности для oncomiR миР-27a-3p.

Таблица 16 Кассеты-кандидаты миР-TS и гены-мишени

Кассета миР-T Ген HSV Защищенная ткань Специфика индикации 1 miR-124-3p
miR-1-3p
miR-143-3p ICP4 ЦНС/мозг/ПНС, гладкая мышца, поперечно-полосатая мышца/сердце Легкое, HnN 2 miR-128-3p
miR-219a-5p
miR-122-5p ICP27 ЦНС/мозг/ПНС/олигодендроциты, печень Легкое, HnN 3 miR-137-3p
miR-208b-3p
miR-126-3p UL8 ЦНС/мозг/ПНС, сердце, сосудистая сеть, гемопоэтические стволовые клетки Легкое, HnN, мочевой пузырь 4 miR-219a-5p
miR-204-5p
miR-128-3p ICP34.5 Позвоночник, ПНС, ЦНС (олигодендроциты, глиальные клетки, нейроны) Все

[00298] Кассета, предназначенная для ICP4, может быть использована для подавления любого оперативно связанного с ним гена в гладких мышцах (из-за сайта-мишени миР-143) и поперечно-полосатой мускулатуре (из-за сайта-мишени миР-1). Кассета, разработанная для ICP27, может использоваться для подавления любого оперативно связанного с ним гена в здоровой ткани посредством сайтов-мишеней миР-128m (экспрессируемой в корковых нейронах), миР-122 (экспрессируемой в печени) и миР-219 (экспрессируемой в головном мозге, позвоночнике и нервах). Кассета, разработанная для ICP27, может использоваться для подавления любого оперативно связанного с ним гена в здоровой ткани посредством сайтов-мишеней миР-128m, миР-204 и миР-219. Кассета, разработанная для UL8, может использоваться для подавления любого оперативно связанного с ним гена в неопухолевой ткани посредством сайтов-мишеней мРНК: миР-217, миР-137 и миР-126m.

[00299] При запуске программа обрабатывала и выводила для каждой комбинации 10 000-100 000 кассет соответствующих критериям, используемым для примерного списка (каждый из которых является необязательным): (1) четыре копии каждого сайта миР-TS (в обратной комплементарной ориентации), расположенные в случайном порядке; (2) за исключением того, что один и тот же миР-TS не может повторяться рядом с самим собой; (3) разделены 4 нуклеотидными спейсерами, имеющими случайную последовательность; (4) отсутствуют исходные последовательности из списка исключенных последовательностей; и (4) отсутствуют последовательности полиаденилирования (AATAAA). Программа также может, необязательно, добавлять последовательности плеча 5’ (CATGGACGAGCTGTACAAGTAAAGC) и 3’ (GCGACCGGCTAGCGTACTAGCTTAG) для клонирования сборки Гибсона (Nat Methods 2009; 6 (5): 343-5).

[00300] Затем программа вычисляла дельта-G фолдинга последовательностей-кандидатов, используя подпрограмму «fold» пакета ViennaRNA (Lorenz et al. Algorithms for Molecular Biology, 6:1 26, 2011; доступно по адресу https://www.tbi.univie.ac.at/RNA/) со скользящим окном 40 нуклеотидов. Значения для данного расчета скользящего окна были сохранены в виде списка для каждой последовательности-кандидата и последовательности-кандидаты были отсортированы по максимальному значению абсолютных значений всех значений дельта-G в списке (т. е., по энергии фолдинга самого сильного элемент вторичной структуры в РНК). Последовательности дополнительно анализировали вручную, чтобы исключить последовательности-кандидаты с несколькими минимумами более низкой энергии. По возможности, выбиралась последовательность кандидатов без локальных минимумов. Таким образом, были идентифицированы последовательности-кандидаты, в которых нет сильной вторичной структуры РНК (низкий максимум абсолютного значения дельта-G), а также нет локальных минимумов или мало локальных минимумов в предсказанной энергии фолдинга вторичной структуры.

[00301] Наконец, для каждой последовательности-кандидата был запущен алгоритм сканирования цели микроРНК (miranda v3.3a) для гарантии наличия желательных миР-TS и того, что программа не вставляла нежелательные миР-TS.

[00302] Примеры последовательностей, сгенерированных данным способом, представлены в таблице 17. Длина кассеты определяется как число нуклеотидов от первой миР-TS до последней миР-TS, включая первую и последнюю миР-TS. Поскольку программа добавляет первый спейсер из 4 нуклеотидов на 5'- конце и последний спейсер на 3'-конце, не включенные в используемое в данном разделе определение длины, длиной кассеты считается длина последовательности, выводимой программой, минус 8 нуклеотидов (= 2*4 нуклеотида, навальный и конечный спейсеры).

Таблица 17

Кассета Последовательность SEQ ID № миР-TS Длина Нуклеотиды/миР-TS miRT-1-143_1736 ccatatacatacttctttacattccatcctgagctacagtgcttcatctcattgcatacatacttctttacattccaacgtgagctacagtgcttcatctcatccgatacatacttctttacattccacggcgagctacagtgcttcatctcaccttatacatacttctttacattccaaaaagagctacagtgcttcatctcaccat 852 8 200 25 miRT-128m-122-219_6793 cacgagaattgcgtttggacaatcagacacaaacaccattgtcacactccatcttaaagagaccggttcactgtggatgtcaaacaccattgtcacactccaacttagaattgcgtttggacaatcaagggaaagagaccggttcactgtggccagcaaacaccattgtcacactccaaaacaaagagaccggttcactgtggtacgagaattgcgtttggacaatcagaaaaaagagaccggttcactgtggaatacaaacaccattgtcacactccaacaaagaattgcgtttggacaatcaggtt 853 12 300 25 miRT-128m-204-219_9304 aagtaaagagaccggttcactgtggaataagaattgcgtttggacaatcaaggtaggcataggatgacaaagggaacagcaaagagaccggttcactgtggggctagaattgcgtttggacaatcacgtaaggcataggatgacaaagggaacgagaaagagaccggttcactgtgggggaagaattgcgtttggacaatcatactaggcataggatgacaaagggaattagaaagagaccggttcactgtggatttagaattgcgtttggacaatcatagaaggcataggatgacaaagggaattgt 854 12 300 25 miRT-217-137-126m_3163 tatgctacgcgtattcttaagcaataagacttccaatcagttcctgatgcagtacgaccacattattactcacggtacgaaagcctacgcgtattcttaagcaataaccgccacattattactcacggtacgataaatccaatcagttcctgatgcagtaattactacgcgtattcttaagcaataactattccaatcagttcctgatgcagtacccccacattattactcacggtacgagaattccaatcagttcctgatgcagtacagtcacattattactcacggtacgatcaactacgcgtattcttaagcaataaccaa 855 12 300 25

[00303] Способность кассет миР-TS, показанных в таблице 17, ослаблять репликацию вируса, показана на фиг. 53A - фиг. 53B.

[00304] Дополнительные конструкции, содержащие кассеты миР-TS, сконструированные таким способом, показаны в таблице 18.

Таблица 18 Конструкции HSV, содержащие кандидатные кассеты миР-TS

Конструкции ICP27 UL8 ICP34.5 ICP4 UL42 ONCR-142
ONCR-154 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)^Ψ
219a-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-156 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-158 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)
219a-5p (4x) 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ONCR-157 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
217-5p (4x)
126-3p (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)
219a-5p (4x) 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-159
ONCR-165
ONCR-166 ONCR-167
ONCR-168
ONCR-169
ONCR-170
ONCR-171
ONCR-172
ONCR-173
ONCR-174
ONCR-175
ONCR-176
ONCR-177 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
217-5p (4x)
126-3p^M(4x) 128-3p^M(4x)
204-5p (4x) 219a-5p (4x) 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-160 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
126-3p (4x) 128-3p^M
204-5p (4x)^Ψ
219a-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-161 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
127 (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)^Ψ
219-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-162 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
128-3p (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)^Ψ
219-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-163 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
129 (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)^Ψ
219-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖ ONCR-164 219a-5p (4x)
122-5p (4x)
128-3p (4x) 137-3p (4x)
208b-3p (4x)
130 (4x) 128-3p^M (4x)
204-5p (4x)^Ψ
219-5p (4x)^Ψ 124-3p (4x) 1-3p (4x)
143-3p (4x) ✖

^Ψ одна из 4 последовательностей-мишеней не функционировала из-за ошибки клонирования.

^M содержала модифицированную последовательность-мишень.

Пример 8. Цитотоксичность миР-ослабленных конструкций HSV

[00305] Эксперименты проводились для оценки цитотоксичности in vitro избранных миР-ослабленных конструкций HSV, ONCR-125, ONCR-131, ONCR-142 и ONCR-157. Различные линии раковых клеток были инфицированы указанными конструкциями с показателями MOI 30, 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0,13, 0,0045 и 0,0015, и жизнеспособность клеток оценивали через 72 часа после заражения. Используемые клеточные линии включают клеточные линии колоректальной аденокарциномы SW837 и COLO205, клеточные линии меланомы SKMEL28 и A375, клеточную линию мелкоклеточного рака легкого H446, клеточную линию аденокарциномы поджелудочной железы BXPC3 и клеточную линию рака молочной железы BT 549. Для каждой конструкции был рассчитан показатель IC50, он приведен ниже в таблице 19. Результаты каждого из этих экспериментов показаны на фиг. 54А - фиг. 54Е.

Таблица 19

ONCR-125 ONCR-131 ONCR-142 ONCR-157 SW837 0,07 0,04 0,05 0,07 COLO205 0,45 0,12 0,223 0,45 SKMEL28 0,12 0,04 0,12 0,25 A375 0,87 0,26 0,89 1,5 H446 0,13 0,05 0,15 0,15 BXPC3 0,08 0,002 0,08 0,07 BT549 0,45 0,17 0,6 1,0

Пример 9. Повышение абсолютной эффективности HSV посредством IL-12

[00306] Эксперименты проводились для оценки влияния IL-12 на «эффект свидетеля» онколитического HSV. Вкратце, конструкцию ONCR-133, содержащую кассету ICP4 миР-TS, содержащую 4 повтора миР-124-3p, и кассету экспрессии, кодирующую мышиный IL-12, вводили мышам в модели опухоли MC38. Как показано на фиг. 55, ONCR-133 значительно ингибировал рост опухоли у инъецированных опухолей по сравнению с контрольными группами, получавшими носитель (р <0,0001). Обработка ONCR-133 также значительно ингибировала рост опухолей у неинъецированных опухолей (р <0,005), что указывает на усиление «эффекта свидетеля».

[00307] Удивительно, но экспрессия дополнительной иммуноактивирующей полезной нагрузки, ULBP3, не усиливала дополнительно эффекты ингибирования роста опухоли у HSV, экспрессирующего IL-12. Как показано на фиг. 56, мыши, обработанные ONCR-133+ONCR-007 (конструкция HSV, экспрессирующая ULBP3) или ONCR-133+ONCR-002 (конструкция HSV, которая не экспрессирует какие-либо дополнительные молекулы полезной нагрузки), продемонстрировали значительное ингибирование роста опухоли по сравнению с обработанными носителем контролями. Однако экспрессия ULBP3 не показала дополнительного преимущества в ингибировании роста инъецированных или неинъецированных опухолей. Фактически, как показано в таблице на фиг. 56, дополнительная экспрессия ULBP3 слегка снижала ингибирование роста опухоли, наблюдаемое только при экспрессии IL-12.

[00308] Аналогичным образом, дополнительная экспрессия CXCL10 не дополнительно усиливала противоопухолевую эффективность HSV, экспрессирующего IL-12. Мыши, обработанные ONCR-113 (конструкция HSV, экспрессирующая IL-12 и MMP9) + ONCR-106 (конструкция HSV, экспрессирующая CXCL10 и MMP9) или ONCR-113+ONCR-031 (конструкция HSV, экспрессирующая MMP9). Как показано на фиг. 57, дополнительная экспрессия CXCL10 в группе, обработанной ONCR-106+ONCR-113, не усиливала ингибирование роста опухоли ни в инъецированных, ни в неинъецированных опухолях по сравнению с мышами, получавшими ONCR-031+ONCR-113. Фактически, как показано в таблице на фиг. 57, дополнительная экспрессия CXCL10 слегка снижала ингибирование роста опухоли как в инъецированных, так и в неинъецированных опухолях.

Пример 10. Экспрессия CCL4 далее демонстрирует эффективность «эффекта свидетеля» HSV.

[00309] Эксперименты проводились для оценки влияния CCL4 на ингибирование роста опухоли на модели MC38, описанной в примере F. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 58 и в таблице 20 ниже. Мышей обрабатывали одной из 4 конструкций, ONCR-133 (экспрессирующей IL-12), ONCR-151 (экспрессирующей IL-12, CXCL10 и XCL1), ONCR-152 (экспрессирующей IL-12, CXCL10 и лиганд FLT3), или ONCR-153 (экспрессирующий IL-12, CXCL10 и CCL4). Как показано на фиг. 58, обработка всеми ONCR-133, -151, -152 и -153 значительно ингибировала рост инъецированных и неинъецированных опухолей по сравнению с контрольными носителями. Однако мыши, обработанные ONCR-153, продемонстрировали увеличение ингибирования роста опухоли в инъецированных опухолях и в неинъецированных опухолях по сравнению с лечением ONCR-133, тогда как ONCR-151 или -152 продемонстрировали незначительное снижение эффективности по сравнению с обработкой ONCR-133. Эти результаты демонстрируют, что экспрессия CCL4 может увеличивать ингибирование роста опухоли и «эффект свидетеля» онколитического HSV на более высоком уровне относительно эффектов, наблюдаемых только при экспрессии IL-12.

Таблица 20

Комбинация Полезная нагрузка Введено Не введено CR % TGI p CR % TGI p ONCR-133 IL-12 3/8 82 <0,0001 0/8 44 0,19 ONCR-151 IL-12, CXCL10, XCL1 3/8 76 <0,0001 0/8 33 0,35 ONCR-152 IL-12, CXCL10, FLT3L 1/8 81 <0,0001 0/8 34 0,3 ONCR-153 IL-12, CXCL10, CCL4 3/8 89 <0,0001 0/8 58 0,001

[00310] Опухоли мышей, обработанных ONCR-153, собирали и оценивали на наличие HSV с использованием анализа ОТ-ПЦР гена gD. Как показано на фиг. 59A и фиг. 59B, HSV был обнаружен в инъецированных опухолях, но не в неинъецированных опухолях, что указывает на то, что ингибирование роста опухоли, наблюдаемое в неинъецированных опухолях, было вызвано не вирусным распространением, а, скорее, «эффектом свидетеля» от введения вируса. Опухоли также оценивали на наличие трех полезных нагрузок, IL-12, CXCL10 и CCL4. Как показано на фиг. 60A-60C, экспрессия полезной нагрузки в инъецированных опухолях достигла пика через 24 часа после обработки и после этого уменьшилась. Уровни полезных нагрузок также оценивали в сыворотке (фиг. 61A-61C) мышей, получавших ONCR-153, у которых наблюдалась только экспрессия CXCL10. Однако, как показано на фиг. 62, обработка мышей ONCR-153 индуцировала внутриопухолевый ответ IFNγ как в инъецированных, так и в неинъецированных опухолях (левая панель). Аналогично, повышенная экспрессия IFNγ наблюдалась в сыворотке мышей, обработанных ONCR-153. Эти данные также указывают на то, что комбинация экспрессии IL-12 и CCL4 HSV индуцирует локализованный иммунный ответ, который может вносить вклад в «эффект свидетеля», наблюдаемый у ONCR-153.

Пример 11. Экспрессия FLT3 далее демонстрирует эффективность «эффекта свидетеля» HSV.

[00311] Эксперименты проводились для оценки влияния FLT3 на ингибирование роста опухоли на модели MC38, описанной в примере F. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 63 и в таблице 21 ниже. Мышей обрабатывали одной из 3 комбинаций конструкций, экспрессирующих различные полезные нагрузки, как показано в таблице 21. Как показано на фиг. 63, обработка комбинацией ONCR-152 и ONCR-140 усиливала ингибирование роста опухоли в неинъецированных опухолях, что указывает на то, что экспрессия FLT3L может усиливать «эффект свидетеля» по сравнению с наблюдаемым с IL-12, CXL10 и CCL4.

Таблица 21

Комбинация Полезная нагрузка Введено Не введено CR % TGI p CR % TGI p 152+140 IL12, CXCL10, CCL4 8/8 97 <0,0001 3/8 69 0,29 153+140 IL12, CXCL10, FLT3 8/8 99 <0,0001 3/8 58 0,22 152+153 IL12, CXCL10,
CCL4, FLT3 8/8 97 <0,0001 3/8 75 0,005

Пример 13. Экспрессия CD40L далее демонстрирует эффективность «эффекта свидетеля» HSV.

[00312] Эксперименты проводились для оценки влияния CD40L на ингибирование роста опухоли на модели MC38, описанной в примере F. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 64 и в таблице 22 ниже. Мышей обрабатывали конструкциями, экспрессирующими различные полезные нагрузки, как показано в таблице 22. Как показано на фиг. 64, обработка комбинацией ONCR-153 и ONCR-147 усиливала ингибирование роста опухоли в неинъецированных опухолях, что указывает на то, что экспрессия CD40L может усиливать «эффект свидетеля» по сравнению с наблюдаемым с IL-12, CXL10 и CCL4.

Таблица 22

Комбинация Полезная нагрузка Введено Не введено CR % TGI p CR % TGI p 153 IL12, CXCL10, CCL4 1/8 65 0,0005 0/8 41 0,02 147 CD40L, 41BBL 0/8 14 0,35 0/8 -- 0,83 153+147 IL12, CXCL10,
CCL4, CD40L, 41BBL 2/8 73 <0,0001 0/8 59 0,0005

Пример 12. Экспрессия анти-CTLA4 далее демонстрирует эффективность «эффекта свидетеля» HSV.

[00313] Эксперименты проводились для оценки влияния CTLA4 на ингибирование роста опухоли на модели MC38, описанной в примере F. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 66A - фиг. 66C и в таблице 23 ниже. Мышей обрабатывали конструкциями, экспрессирующими различные полезные нагрузки, как показано в таблице 23. Как показано на фиг. 66A - фиг. 66C, обработка комбинацией ONCR-149 и ONCR-139 усиливала ингибирование роста опухоли в инъецированных и неинъецированных опухолях по сравнению с обработкой только ONCR-149, что указывает на то, что экспрессия анти-CTLA4. может усиливать противоопухолевые эффекты и «эффект свидетеля» по сравнению с наблюдаемым с IL-12.

Таблица 23

Комбинация Полезная нагрузка Введено Не введено CR % TGI p CR % TGI p 149 IL12 0/8 66 <0,0001 0/8 41 0,0002 149+139 IL12, anti-CTLA4 1/8 75 <0,0001 1/8 57 <0,0001

[00314] Аналогичные эксперименты были выполнены для оценки эффектов анти-CTLA4 на экспрессию IL-12, CXCL10, FLT3L и CCL4 в модели 4T1-luc. Вкратце, 1×10⁶ клеток 4T1-luc в 100 мкл DPBS инъецировали подкожно в правый бок мышей линии Balb/c. Когда объем опухоли достигал в среднем 100 мм³, мышам внутривенно вводили HSV-1 в дозе 3e⁶ БОЕ/инъекцию. введение дозы повторяли дважды через два дня на третий до общего количества 3 доз (Q3Dx3). Рост опухоли и массу тела контролировали два раза в неделю. Эксперимент завершился на 22 день, когда наблюдались первые клинические симптомы метастазирования. Метастазы в легких визуализировали ex vivo с использованием системы IVIS Lumina LT и анализировали с помощью программного обеспечения Living Image. Мышей обрабатывали комбинацией конструкций, как показано в таблице 24. Результаты данного эксперимента представлены на фиг. 67. Как показано, обработка ONCR-152 вместе с -139 продемонстрировала усиленный эффект в ингибировании роста опухоли по сравнению с обработкой только ONCR-139.

Таблица 24

Комбинация Полезная нагрузка 152 IL12, CXCL10, FLT3L 139 анти-CTLA4 152+139 IL12, CXCL10, FLT3L, анти-CTLA4

Пример 13. Обработка экспрессией анти-PD1 дополнительно повышает эффективность HSV

[00315] Эксперименты проводились для оценки влияния обработки анти-PD1 на HSV-опосредованное ингибирование роста опухоли на модели MC38, описанной в примере F. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 68 и в таблице 25 ниже. Мышей обрабатывали конструкциями, экспрессирующими различные полезные нагрузки, как показано в таблице 25. Как показано на фиг. 68, обработка комбинацией ONCR-153 и анти-PD1 усиливала ингибирование роста опухоли в инъецированных опухолях по сравнению с наблюдаемым только с ONCR-152 или анти-PD1.

Таблица 25

Комбинация Полезная нагрузка Введено Не введено CR % TGI p CR % TGI p 153 IL12, CXCL10, CCL4 2/8 79 <0.0001 5/8 84 <0,0001 анти-PD1 5/8 65 0.0005 0/8 41 0,02 153+анти-PD1 IL12, CXCL10,
CCL4, анти-PD1 2/8 95 <0.0001 0/8 83 <0,0001

Пример 14. Лечение пациента, страдающего от рака поджелудочной железы, рака легких или рака ободочной кишки

[00316] Пациента, страдающего от рака поджелудочной железы, рака легкого или рака ободочной кишки, лечат с использованием композиций и способов, раскрытых в данном документе. На основе HSV могут быть созданы вирусные штаммы, ослабляемые путем включения одной или нескольких последовательностей-мишеней микроРНК в UL19, ICP4, ICP27 или UL42 (или другие вирусные гены), как показано на фиг. 39-50. В некоторых случаях возможности редактирования генома для разрушения опухоли и/или ремоделирования микросреды встроены в вирус в дополнение к последовательностям-мишеням микроРНК, как показано на фиг. 45-46. В конкретном примере используется популяция на основе HSV, содержащий кассеты ослабления миР-124, миР-451a, миР-143-3p и миР-559, включенные в ICP4 и ICP27. В другом примере популяция на основе HSV содержит кассеты ослабления с одной или несколькими копиями последовательностей-мишеней миР-122 и миР-125a, включенных в гены ICP27 и/или UL42. Для любой из этих композиций популяцию на основе HSV получают в соответствии со способами, описанными в примере 3. Кассеты последовательности микроРНК-мишени вводят в 3'-UTR генов ICP4, ICP27UL19 и/или UL42. Конструкции BAC были преобразованы в вирусные частицы с одновременным удалением последовательностей BAC, расположенных между сайтами loxP, путем трансфекции клеток Vero-Cre. После клонирования посредством бляшкообразования вирусные популяции дополнительно очищали, заменяли буферный раствор и титровали в клетках Vero. Для введения in vivo пациенту, страдающему от рака поджелудочной железы, рака легкого или рака ободочной кишки, частицы HSV готовят в фосфатно-буферном растворе (ФСБ) вместе с фармацевтически приемлемыми стабилизирующими агентами. В день лечения путем внутриопухолевой инфузии вводят 10⁹ векторных геномов в объеме 1,0 мл фармацевтически приемлемого носителя. Пациента контролируют для оценки регрессии опухоли с использованием стандартных процедур по уходу через соответствующий интервал времени на основе конкретного прогноза для данного пациента.

Пример 15. Лечение пациентов, страдающих от рака головного мозга, рака мочевого пузыря, рака молочной железы или рака головы и шеи

[00317] Пациента, страдающего от рака головного мозга, рака мочевого пузыря, рака молочной железы или рака головы и шеи, лечат с использованием композиций и способов, описанных в данном документе. Создается вирусный штамм на основе HSV, содержащего кассеты ослабления миР-124, миР-451a, миР-145-3p и миР-559 в соответствии со способами, описанными в примере 3. Кассеты последовательности-мишени микроРНК вводят в 3'-UTR генов ICP4 (миР-124) и ICP27 (миР-451a, миР-145-3p, миР-559), как показано на фиг. 48. Конструкции BAC были преобразованы в вирусные частицы с одновременным удалением последовательностей BAC, расположенных между сайтами loxP, путем трансфекции клеток Vero-Cre. После клонирования посредством бляшкообразования вирусные популяции дополнительно очищали, заменяли буферный раствор и титровали в клетках Vero. Для введения in vivo пациенту, страдающему от рака головного мозга, рака мочевого пузыря, рака молочной железы или рака головы и шеи, частицы HSV готовят в фосфатно-буферном растворе (ФСБ) вместе с фармацевтически приемлемыми стабилизирующими агентами. В день лечения путем внутриопухолевой инфузии вводят 10⁹ векторных геномов в объеме 1,0 мл фармацевтически приемлемого носителя. Пациента контролируют с использованием стандартных процедур по уходу через соответствующий интервал времени на основе конкретного прогноза для данного пациента. Потенциальные результаты этих экспериментов включают частичное или полное ингибирование роста опухоли, ингибирование метастазирования опухоли, продленное время ремиссии и/или снижение частоты рецидивов по сравнению со стандартными способами лечения.

Пример 16. Лечение пациента, страдающего невриномой

[00318] Пациента, страдающего невриномой, лечат с использованием композиций и способов, описанных в данном документе. Создается вирусный штамм на основе HSV, содержащего кассеты ослабления миР-124-3p, миР-205-5p, миР-141-5p и миР-31-5p в соответствии со способами, описанными в примере 3. Кассеты последовательности микроРНК-мишени были рекомбинированы в 3'-UTR генов ICP4 (миР-124) и ICP27 (миР-205-5p, миР-141-5p, миР-31-5p), как показано на фиг. 49. Конструкции BAC были преобразованы в вирусные частицы с одновременным удалением последовательностей BAC, расположенных между сайтами loxP, путем трансфекции клеток Vero-Cre. После клонирования посредством бляшкообразования вирусные популяции дополнительно очищали, заменяли буферный раствор и титровали в клетках Vero. Для введения in vivo пациенту, страдающему невриномой, частицы HSV готовят в фосфатно-буферном растворе (PBS) вместе с фармацевтически приемлемыми стабилизирующими агентами. В день лечения путем внутриопухолевой инфузии вводят 10⁹ векторных геномов в объеме 1,0 мл фармацевтически приемлемого носителя. Пациента контролируют с использованием стандартных процедур по уходу через соответствующий интервал времени на основе конкретного прогноза для данного пациента. Потенциальные результаты этих экспериментов включают частичное или полное ингибирование роста опухоли, ингибирование метастазирования опухоли, продленное время ремиссии и/или снижение частоты рецидивов по сравнению со стандартными способами лечения.

[00319] Несмотря на то что в настоящем документе были показаны и описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что данные варианты осуществления приведены исключительно с целью иллюстрации. Специалистами в данной области техники могут быть реализованы многочисленные варианты, изменения и замены без отступления от изобретения. Следует понимать, что различные альтернативные варианты осуществления настоящего изобретения, описанные в настоящем документе, могут применяться при практической реализации настоящего изобретения. Предполагается, что нижеследующая формула изобретения определяет объем изобретения и, что таким образом охватываются способы и структуры в пределах объема данной формулы изобретения и их эквивалентов.

*****

Включение путем ссылки

[00320] Все ссылки, статьи, публикации, патенты, патентные публикации и патентные заявки, цитируемые в данном документе, в полном объеме и во всех целях включены посредством ссылки. Однако упоминание любых ссылок, статей, публикаций, патентов, патентных публикаций и патентных заявок, цитируемых в данном документе не является и не должно восприниматься как признание или любая форма предположения, что они составляют действительный уровень техники или образуют часть общедоступных сведений в любой стране мира.

Таблица 1 Краткое изложение взаимосвязей между 12 выбранными oncomiR (9 онкосупрессоров и 3 онкогенных микроРНК) и различными видами рака

Подавлены Активированы Злокачественное новообразование. let-7 миР-15a миР-16 миР-29a миР-34a миР-98 миР-101 миР-124 миР-202 миР-17 миР-21 миР-155 острый лимфобластный лейкоз X X острый миелоидный лейкоз X X X X острый промиелоцитарный лейкоз X рак коры надпочечников X анапластическая астроцитома X анапластическая крупноклеточная лимфома X астроцитома X В-клеточная лимфома X X рак мочевого пузыря X X X X X X рак молочной железы X X X X X X X X X рак молочной железы X бронхиолоальвеолярный рак X X рак шейки матки X X X рак шейки матки X X X X плоскоклеточный рак шейки матки X X холангиокарцинома X X X хондросаркома X хордома X хориокарцинома X хронический лимфоцитарный лейкоз X X X хронический миелогенный лейкоз X X светлоклеточный почечно-клеточный рак X X рак ободочной кишки X X X X X колоректальный рак X X X X X X X X X X колоректальная карцинома X X кожная Т-клеточная лимфома X диффузная крупная B-клеточная лимфома X рак эндометрия X X X эпителиальный рак яичников X рак пищевода X X X плоскоклеточный рак пищевода X X X X X X внепеченочная холангиокарцинома X фолликулярная лимфома X рак желчного пузыря X рак желудка X X X X X X X X X глиобластома X X X X глиома X X X X X X X рак головы и шеи плоскоклеточная клетка головы и шеи
карцинома X X X X X гепатоцеллюлярная карцинома X X X X X X X X X X X гипофарингиальный плоскоклеточный рак X рак почки X карцинома гортани X X плоскоклеточный рак гортани X X рак печени X X X аденокарцинома легкого X X рак легких X X X X X X X X X злокачественная меланома X X X X X X X солодовая лимфома X мантийноклеточная лимфома X X X X медуллобластома X X мезенхимальный рак X моноцитарный лейкоз X множественная миелома X рак носоглотки X рак носоглотки X X X X X X нейробластома X X X X X X X немелкоклеточный рак легких X X X X X X X X X X рак полости рта X X X плоскоклеточный рак полости рта X X X X остеосаркома X X X X X X X X X рак яичников X X X X X X рак яичников X аденокарцинома поджелудочной железы X X панкреатический рак X X X X X протоковая аденокарцинома поджелудочной железы X X X X X X папиллярный рак щитовидной железы X X X X X X карцинома гипофиза X рак предстательной железы X X X X X X X рак прямой кишки X X X почечноклеточная карцинома X X X X светлоклеточный рак почки X X ретинобластома X X X плоскоклеточный рак X X X X X Т-клеточная лимфобластная лимфома X увеальная меланома X

Таблица 2 Экспрессии микроРНК при раке: итоговые данные

Злокачественное новообразование. МиР: подавление Активированные миР рак молочной железы let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-100, mir-107, mir-10a, mir-10b, mir-122, mir-124, mir-1258, mir-125a-5p, mir-125b, mir-126, mir-127, mir-129, mir-130a, mir-132, mir-133a, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-147, mir-148a, mir-149, mir-152, mir-153, mir-15a, mir-16, mir-17-5p, mir-181a, mir-1826, mir-183, mir-185, mir-191, mir-193a-3p, mir-193b, mir-195, mir-199b-5p, mir-19a-3p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-205, mir-206, mir-211, mir-216b, mir-218, mir-22, mir-26a, mir-26b, mir-300, mir-30a, mir-31, mir-335, mir-339-5p, mir-33b, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-374a, mir-379, mir-381, mir-383, mir-425, mir-429, mir-450b-3p, mir-494, mir-495, mir-497, mir-502-5p, mir-517a, mir-574-3p, mir-638, mir-7, mir-720, mir-7515, mir-92a, mir-98, mir-99a, mmu-mir-290-3p, mmu-mir-290-5p mir-10b, mir-125a, mir-135a, mir-140, mir-141, mir-142, mir-150, mir-155, mir-181a, mir-181b, mir-182, mir-18a, mir-18b, mir-191, mir-196a, mir-197, mir-19a, mir-19b, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-205, mir-20a, mir-20b, mir-21, mir-217, mir-221, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-24-2-5p, mir-24-3p, mir-27a, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-373, mir-378, mir-423, mir-429, mir-495, mir-503, mir-510, mir-520c, mir-526b, mir-96 хондросаркома let-7a, mir-100, mir-136, mir-145, mir-199a, mir-222, mir-30a, mir-335, mir-376a колоректальный рак let-7a, mir-1, mir-100, mir-101, mir-124, mir-125a, mir-126, mir-129, mir-1295b-3p, mir-1307, mir-130b, mir-132, mir-133a, mir-133b, mir-137, mir-138, mir-139, mir-139-5p, mir-140-5p, mir-143, mir-145, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-150-5p, mir-154, mir-15a, mir-15b, mir-16, mir-18a, mir-191, mir-192, mir-193a-5p, mir-194, mir-195, mir-196a, mir-198, mir-199a-5p, mir-200c, mir-203, mir-204-5p, mir-206, mir-212, mir-215, mir-218, mir-22, mir-224, mir-24-3p, mir-26b, mir-27a, mir-28-3p, mir-28-5p, mir-29b, mir-30a-3p, mir-30b, mir-320a, mir-328, mir-338-3p, mir-342, mir-345, mir-34a, mir-34a-5p, mir-361-5p, mir-375, mir-378, mir-378a-3p, mir-378a-5p, mir-409-3p, mir-422a, mir-4487, mir-483, mir-497, mir-498, mir-518a-3p, mir-551a, mir-574-5p, mir-625, mir-638, mir-7, mir-96-5p let-7a, mir-103, mir-106a, mir-10b, mir-1179, mir-1229, mir-1246, mir-125b-2*, mir-1269a, mir-130b, mir-133b, mir-135a, mir-135a-1, mir-135a-2, mir-135b, mir-139-3p, mir-145, mir-150, mir-150*, mir-155, mir-17, mir-181a, mir-182, mir-183, mir-18a, mir-191, mir-196a, mir-196b, mir-19a, mir-19b, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-204-5p, mir-20a, mir-20a-5p, mir-21, mir-210, mir-211, mir-221, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-25, mir-27a, mir-29a, mir-301a, mir-31, mir-32, mir-320b, mir-326, mir-424, mir-429, mir-494, mir-497, mir-499-5p, mir-592, mir-630, mir-7-5p, mir-892a, mir-92, mir-92a, mir-93, mir-95, mir-96 плоскоклеточный рак пищевода let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-100, mir-101, mir-126, mir-1294, mir-133a, mir-133b, mir-138, mir-143, mir-145, mir-150, mir-185, mir-195, mir-200b, mir-203, mir-21, mir-210, mir-214, mir-218, mir-22, mir-27a, mir-29b, mir-29c, mir-302b, mir-34a, mir-375, mir-494, mir-518b, mir-655, mir-98, mir-99a mir-100, mir-1179, mir-1290, mir-130b, mir-145, mir-16, mir-17, mir-183, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-208, mir-20a, mir-21, mir-218, mir-223, mir-25, mir-30a-5p, mir-31, mir-330-3p, mir-373, mir-9, mir-92a, mir-942 рак желудка let-7a, let-7b, let-7g, mir-1, mir-101, mir-103a, mir-10a, mir-10b, mir-1207-5p, mir-122, mir-1228*, mir-124, mir-124-3p, mir-125a-3p, mir-126, mir-1266, mir-1271, mir-129-1-3p, mir-129-2-3p, mir-129-3p, mir-129-5p, mir-133a, mir-133b, mir-137, mir-141, mir-143, mir-144, mir-145, mir-146a, mir-146a-5p, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-152, mir-155, mir-155-5p, mir-181a, mir-181b, mir-182, mir-183, mir-185, mir-194, mir-195, mir-197, mir-199a-3p, mir-200b, mir-200c, mir-202-3p, mir-204, mir-204-5p, mir-205, mir-206, mir-210, mir-212, mir-217, mir-218, mir-22, mir-23b, mir-24, mir-26a, mir-29a, mir-29a-3p, mir-29b, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-30a-5p, mir-30b, mir-31, mir-328, mir-329, mir-331-3p, mir-335-5p, mir-338, mir-338-3p, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-361-5p, mir-367, mir-375, mir-378, mir-409-3p, mir-410, mir-429, mir-433, mir-449, mir-449a, mir-490-3p, mir-494, mir-497, mir-503, mir-506, mir-513b, mir-520d-3p, mir-542-3p, mir-622, mir-625, mir-638, mir-663, mir-7, mir-765, mir-9 mir-100, mir-103, mir-106a, mir-106b, mir-107, mir-10a, mir-10b, mir-1259, mir-125b, mir-126, mir-1274a, mir-1303, mir-130b*, mir-135a-5p, mir-135b, mir-138, mir-143, mir-146a, mir-147, mir-148a, mir-150, mir-17, mir-17-5p, mir-181a, mir-181a-2*, mir-181a-5p, mir-181c, mir-183, mir-185, mir-18a, mir-191, mir-192, mir-196a, mir-196a*, mir-196a-5p, mir-196b, mir-199a, mir-199a-3p, mir-199a-5p, mir-19a, mir-19b, mir-200b, mir-20a, mir-21, mir-214, mir-215, mir-221, mir-221*, mir-222, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-23b, mir-27a, mir-27b, mir-296-5p, mir-301a, mir-302f, mir-337-3p, mir-340*, mir-34a, mir-362-3p, mir-370, mir-374a, mir-377, mir-421, mir-425, mir-500, mir-520c-3p, mir-544, mir-575, mir-601, mir-616*, mir-650, mir-92, mir-98, mir-99a глиома let-7a, let-7f, mir-106a, mir-107, mir-122, mir-124, mir-124-5p, mir-124a, mir-125b, mir-128, mir-136, mir-137, mir-139, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-146b-5p, mir-152, mir-15b, mir-16, mir-181a, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-184, mir-185, mir-195, mir-199a-3p, mir-200a, mir-200b, mir-203, mir-204, mir-205, mir-218, mir-219-5p, mir-23b, mir-26b, mir-27a, mir-29c, mir-320, mir-326, mir-328, mir-34a, mir-34c-3p, mir-34c-5p, mir-375, mir-383, mir-451, mir-452, mir-483-5p, mir-495, mir-584, mir-622, mir-656, mir-7, mir-98 mir-106b, mir-106b-5p, mir-10b, mir-125b, mir-132, mir-155, mir-17, mir-181a, mir-182, mir-183, mir-193b, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-210, mir-214, mir-221, mir-222, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-24-3p, mir-25, mir-26a, mir-27a-3p, mir-27b, mir-30a-5p, mir-30e, mir-30e*, mir-328, mir-335, mir-33a, mir-372, mir-486, mir-494, mir-497, mir-566, mir-603, mir-650, mir-675, mir-9, mir-92b, mir-93, mir-96 рак носоглотки let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-101, mir-124, mir-138, mir-143, mir-145, mir-148a, mir-200b, mir-204, mir-216b, mir-29c, mir-320a, mir-324-3p, mir-34c, mir-375, mir-378, mir-451, mir-506, mir-9, mir-98 mir-10b, mir-144, mir-149, mir-155, mir-18a, mir-21, mir-214, mir-24, mir-421, mir-663, mir-7-5p, mir-93 немелкоклеточный рак легких let-7a, let-7c, mir-1, mir-100, mir-101, mir-106a, mir-107, mir-124, mir-125a-3p, mir-125a-5p, mir-126*, mir-129, mir-133a, mir-137, mir-138, mir-140, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-152, mir-153, mir-154, mir-155, mir-15a, mir-16, mir-17-5p, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-184, mir-186, mir-193b, mir-195, mir-199a, mir-204, mir-212, mir-221, mir-224, mir-26b, mir-27a, mir-27b, mir-29a, mir-29b, mir-29c, mir-30a, mir-30b, mir-30c, mir-30d, mir-30d-5p, mir-30e-5p, mir-32, mir-335, mir-338-3p, mir-340, mir-342-3p, mir-34a, mir-34b, mir-361-3p, mir-365, mir-373, mir-375, mir-429, mir-449a, mir-4500, mir-451, mir-4782-3p, mir-497, mir-503, mir-512-3p, mir-520a-3p, mir-526b, mir-625*, mir-96, mir-99a mir-10b, mir-125a-5p, mir-1280, mir-136, mir-140, mir-141, mir-142-3p, mir-145, mir-146a, mir-150, mir-18a, mir-196a, mir-19a, mir-200a, mir-200c, mir-205, mir-205-5p, mir-21, mir-212, mir-22, mir-221, mir-222, mir-24, mir-25, mir-29c, mir-31, mir-328, mir-330-3p, mir-339, mir-34a, mir-375, mir-494, mir-675-5p, mir-9, mir-92b, mir-93, mir-95 остеосаркома let-7a, mir-1, mir-100, mir-101, mir-122, mir-124, mir-125b, mir-126, mir-127-3p, mir-132, mir-133a, mir-141, mir-142-3p, mir-142-5p, mir-143, mir-144, mir-145, mir-153, mir-16, mir-183, mir-194, mir-195, mir-199a-3p, mir-204, mir-212, mir-217, mir-218, mir-22, mir-23a, mir-24, mir-26a, mir-26b, mir-29b, mir-32, mir-320, mir-335, mir-33b, mir-340, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-375, mir-376c, mir-382, mir-3928, mir-424, mir-429, mir-449a, mir-451, mir-454, mir-503, mir-519d, mir-646 mir-128, mir-151-3p, mir-17, mir-181a, mir-181b, mir-181c, mir-18a, mir-191, mir-195-5p, mir-199a-3p, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-27a, mir-300, mir-320a, mir-374a-5p, mir-720, mir-9, mir-92a протоковая аденокарцинома поджелудочной железы let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-126, mir-135a, mir-143, mir-144, mir-145, mir-148a, mir-150, mir-15a, mir-16, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-217, mir-218, mir-337, mir-375, mir-494, mir-615-5p, mir-98 mir-10b, mir-186, mir-18a, mir-192, mir-194, mir-196a, mir-198, mir-203, mir-21, mir-212, mir-30b-5p, mir-31, mir-34a, mir-369-5p, mir-376a, mir-541 почечноклеточная карцинома let-7a, let-7d, mir-1, mir-106a*, mir-126, mir-1285, mir-129-3p, mir-1291, mir-133a, mir-133b, mir-135a, mir-138, mir-141, mir-143, mir-145, mir-182-5p, mir-199a-3p, mir-200a, mir-205, mir-218, mir-28-5p, mir-30a, mir-30c, mir-30d, mir-34a, mir-378, mir-429, mir-509-3p, mir-509-5p, mir-646 mir-100, mir-1233, mir-1260b, mir-146a, mir-146b, mir-16, mir-193a-3p, mir-203a, mir-21, mir-210, mir-27a, mir-362, mir-572, mir-7 бронхиолоальвеолярный рак let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-98 рак ободочной кишки let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-100, mir-101, mir-126, mir-142-3p, mir-143, mir-145, mir-192, mir-200c, mir-21, mir-214, mir-215, mir-25, mir-302a, mir-320, mir-320a, mir-34a, mir-34c, mir-365, mir-373, mir-424, mir-429, mir-455, mir-484, mir-502, mir-503, mir-93, mir-98 mir-1290, mir-145, mir-155, mir-181a, mir-18a, mir-200c, mir-31, mir-675 гепатоцеллюлярная карцинома let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-100, mir-101, mir-105, mir-122, mir-122a, mir-1236, mir-124, mir-125b, mir-126, mir-127, mir-1271, mir-128-3p, mir-129-5p, mir-130a, mir-130b, mir-133a, mir-134, mir-137, mir-138, mir-139, mir-139-5p, mir-140-5p, mir-141, mir-142-3p, mir-143, mir-144, mir-145, mir-146a, mir-148a, mir-148b, mir-150-5p, mir-15b, mir-16, mir-181a-5p, mir-185, mir-188-5p, mir-193b, mir-195, mir-195-5p, mir-197, mir-198, mir-199a, mir-199a-5p, mir-199b, mir-199b-5p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-202, mir-203, mir-204-3p, mir-205, mir-206, mir-20a, mir-21, mir-21-3p, mir-211, mir-212, mir-214, mir-217, mir-218, mir-219-5p, mir-22, mir-26a, mir-26b, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-302b, mir-302c, mir-30a, mir-30a-3p, mir-335, mir-338-3p, mir-33a, mir-34a, mir-34b, mir-365, mir-370, mir-372, mir-375, mir-376a, mir-377, mir-422a, mir-424, mir-424-5p, mir-433, mir-4458, mir-448, mir-450a, mir-451, mir-485-5p, mir-486-5p, mir-497, mir-503, mir-506, mir-519d, mir-520a, mir-520b, mir-520c-3p, mir-582-5p, mir-590-5p, mir-610, mir-612, mir-625, mir-637, mir-675, mir-7, mir-877, mir-940, mir-941, mir-98, mir-99a mir-106b, mir-10b, mir-122, mir-1228, mir-1269, mir-128a, mir-130a, mir-130b, mir-146a, mir-153, mir-155, mir-17-5p, mir-181a, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-183, mir-184, mir-190b, mir-191, mir-20a, mir-20b, mir-21, mir-210, mir-214, mir-215, mir-216a, mir-217, mir-221, mir-222, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-25, mir-27a, mir-301a, mir-30d, mir-31, mir-3127, mir-32, mir-331-3p, mir-362-3p, mir-371-5p, mir-372, mir-373, mir-423, mir-429, mir-452, mir-483-3p, mir-483-5p, mir-485-3p, mir-490-3p, mir-494, mir-495, mir-500, mir-501-5p, mir-519d, mir-520g, mir-574-3p, mir-590-5p, mir-630, mir-650, mir-657, mir-664, mir-885-5p, mir-9, mir-92a, mir-96 рак легких let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-101, mir-133b, mir-138, mir-142-5p, mir-144, mir-145, mir-1469, mir-146a, mir-153, mir-15a, mir-15b, mir-16-1, mir-16-2, mir-182, mir-192, mir-193a-3p, mir-194, mir-195, mir-198, mir-203, mir-217, mir-218, mir-22, mir-223, mir-26a, mir-26b, mir-29c, mir-33a, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-365, mir-449a, mir-449b, mir-486-5p, mir-545, mir-610, mir-614, mir-630, mir-660, mir-7-5p, mir-9500, mir-98, mir-99b mir-10b, mir-135b, mir-150, mir-155, mir-17, mir-182, mir-183-3p, mir-18a, mir-197, mir-19a, mir-19b, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-24, mir-30d, mir-4423, mir-5100, mir-570, mir-663, mir-7, mir-92a нейробластома let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-124, mir-137, mir-145, mir-181c, mir-184, mir-200a, mir-29a, mir-335, mir-338-3p, mir-34a, mir-449a, mir-885-5p, mir-98 mir-125b, mir-15a, mir-15b, mir-16-1, mir-16-2, mir-18a, mir-195, mir-19a, mir-23a, mir-421, mir-92 рак предстательной железы let-7a-3p, let-7c, mir-100, mir-101, mir-105, mir-124, mir-128, mir-1296, mir-130b, mir-133a-1, mir-133a-2, mir-133b, mir-135a, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-154, mir-15a, mir-187, mir-188-5p, mir-199b, mir-200b, mir-203, mir-205, mir-212, mir-218, mir-221, mir-224, mir-23a, mir-23b, mir-25, mir-26a, mir-26b, mir-29b, mir-302a, mir-30a, mir-30b, mir-30c-1, mir-30c-2, mir-30d, mir-30e, mir-31, mir-330, mir-331-3p, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-374b, mir-449a, mir-4723-5p, mir-497, mir-628-5p, mir-642a-5p, mir-720, mir-940 mir-125b, mir-141, mir-153, mir-155, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-182-5p, mir-183, mir-18a, mir-204, mir-20a, mir-21, mir-221, mir-223-3p, mir-31, mir-429, mir-96 острый лимфобластный лейкоз let-7b, mir-124a, mir-142-3p mir-128 злокачественная меланома let-7b, mir-101, mir-125b, mir-1280, mir-143, mir-146a, mir-146b, mir-155, mir-17, mir-184, mir-185, mir-18b, mir-193b, mir-200c, mir-203, mir-204, mir-205, mir-206, mir-20a, mir-211, mir-218, mir-26a, mir-31, mir-33a, mir-34a, mir-34c, mir-376a, mir-376c, mir-573, mir-7, mir-9, mir-98 mir-126, mir-141, mir-15b, mir-17, mir-17-5p, mir-182, mir-18a, mir-193b, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-222, mir-429, mir-455-5p, mir-532-5p, mir-638, mir-92a светлоклеточный рак почки let-7b, let-7c, mir-138, mir-141, mir-200c, mir-204, mir-218, mir-335, mir-377, mir-506 mir-122, mir-155, mir-630 острый миелоидный лейкоз let-7c, mir-17, mir-181a, mir-20a, mir-223, mir-26a, mir-29a, mir-30c, mir-7 mir-125b, mir-126-5p, mir-128, mir-155, mir-29a, mir-32, mir-331, mir-370, mir-378 острый промиелоцитарный лейкоз let-7c, mir-107, mir-342 mir-181a, mir-181b, mir-92a плоскоклеточный рак головы и шеи let-7d, mir-1, mir-107, mir-128, mir-133a, mir-138, mir-149, mir-200c, mir-205, mir-218, mir-27a*, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-300, mir-34a, mir-363, mir-375, mir-874 mir-106b, mir-134, mir-16, mir-184, mir-196a, mir-21, mir-25, mir-30a-5p, mir-31, mir-372, mir-93 рак полости рта let-7d, mir-218, mir-34a, mir-375, mir-494 mir-10b, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21 папиллярный рак щитовидной железы mir-101, mir-130b, mir-138, mir-146a, mir-16, mir-195, mir-199a-3p, mir-204-5p, mir-219-5p, mir-26a, mir-34b, mir-613 let-7e, mir-146b, mir-146b-5p, mir-151-5p, mir-155, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-183, mir-199b-5p, mir-21, mir-221, mir-222, mir-339-5p, mir-34a глиобластома let-7g-5p, mir-100, mir-101, mir-106a, mir-124, mir-124a, mir-125a, mir-125a-5p, mir-125b, mir-127-3p, mir-128, mir-129, mir-136, mir-137, mir-139-5p, mir-142-3p, mir-143, mir-145, mir-146b-5p, mir-149, mir-152, mir-153, mir-195, mir-21, mir-212-3p, mir-219-5p, mir-222, mir-29b, mir-31, mir-3189-3p, mir-320, mir-320a, mir-326, mir-330, mir-331-3p, mir-340, mir-342, mir-34a, mir-376a, mir-449a, mir-483-5p, mir-503, mir-577, mir-663, mir-7, mir-744 mir-10b, mir-125b, mir-127-3p, mir-148a, mir-18a, mir-196a, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21, mir-210, mir-210-3p, mir-223, mir-340, mir-576-5p, mir-626, mir-92b рак яичников let-7i, mir-100, mir-124, mir-125b, mir-129-5p, mir-130b, mir-133a, mir-137, mir-138, mir-141, mir-145, mir-148a, mir-152, mir-153, mir-155, mir-199a, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-212, mir-335, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-409-3p, mir-411, mir-429, mir-432, mir-449a, mir-494, mir-497, mir-498, mir-519d, mir-655, mir-9, mir-98 mir-106a, mir-141, mir-148b, mir-181b, mir-182, mir-200a, mir-200c, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-224-5p, mir-23b, mir-25, mir-26a, mir-27a, mir-27b, mir-346, mir-378, mir-424, mir-503, mir-572, mir-9, mir-96 рак мочевого пузыря mir-1, mir-101, mir-1180, mir-1236, mir-124-3p, mir-125b, mir-126, mir-1280, mir-133a, mir-133b, mir-141, mir-143, mir-144, mir-145, mir-155, mir-16, mir-18a, mir-192, mir-195, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-205, mir-214, mir-218, mir-23b, mir-26a, mir-29c, mir-320c, mir-34a, mir-370, mir-409-3p, mir-429, mir-451, mir-490-5p, mir-493, mir-576-3p, mir-99a mir-103a-3p, mir-10b, mir-135a, mir-137, mir-141, mir-155, mir-17-5p, mir-182, mir-182-5p, mir-183, mir-185, mir-19a, mir-203, mir-205, mir-210, mir-221, mir-222, mir-223, mir-23a, mir-23b, mir-26b, mir-639, mir-96 хордома mir-1, mir-222, mir-31, mir-34a, mir-608 mir-140-3p, mir-148a рак почки mir-1, mir-145, mir-1826, mir-199a, mir-199a-3p, mir-203, mir-205, mir-497, mir-508-3p, mir-509-3p mir-183, mir-21, mir-210, mir-223 рак шейки матки mir-100, mir-101, mir-15a, mir-16, mir-34a, mir-886-5p, mir-99a, mir-99b mir-133b, mir-21, mir-25, mir-373 мезенхимальный рак mir-100, mir-141, mir-199b-5p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-1-5p, mir-29b-2, mir-29c, mir-335, mir-429, mir-99a mir-125b-1-3p, mir-182 плоскоклеточный рак полости рта mir-100, mir-124, mir-1250, mir-125b, mir-126, mir-1271, mir-136, mir-138, mir-145, mir-147, mir-148a, mir-181a, mir-206, mir-220a, mir-26a, mir-26b, mir-29a, mir-32, mir-323-5p, mir-329, mir-338, mir-370, mir-410, mir-429, mir-433, mir-499a-5p, mir-503, mir-506, mir-632, mir-646, mir-668, mir-877, mir-9 mir-125b, mir-126, mir-146a, mir-146b, mir-155, mir-181b, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21, mir-221, mir-222, mir-24, mir-27b, mir-31, mir-345 рак яичников mir-100, mir-101, mir-34b, mir-34c, mir-532-5p mir-148b, mir-182 холангиокарцинома mir-101, mir-144, mir-200b, mir-200c mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-21, mir-26a, mir-92a рак эндометрия mir-101, mir-130a, mir-130b, mir-134, mir-143, mir-145, mir-152, mir-205, mir-223, mir-301a, mir-301b, mir-30c, mir-34a, mir-34c, mir-424, mir-449a, mir-543 mir-106a, mir-145, mir-155, mir-182, mir-200b, mir-200c, mir-205, mir-21, mir-222-3p, mir-25, mir-93 рак пищевода mir-124, mir-126, mir-140, mir-197, mir-203, mir-218, mir-223, mir-30b, mir-375, mir-454, mir-486, mir-574-3p mir-101, mir-10b, mir-130a, mir-141, mir-143, mir-146b, mir-15a, mir-183, mir-196b, mir-200a, mir-203, mir-205, mir-21, mir-210, mir-221, mir-27a, mir-28-3p, mir-31, mir-452, mir-96, mir-99b рак печени mir-101, mir-122, mir-132, mir-140-5p, mir-145, mir-148b, mir-31, mir-338-3p, mir-433 mir-1301, mir-155, mir-21, mir-221, mir-27a, mir-525-3p панкреатический рак mir-101, mir-1181, mir-124, mir-1247, mir-133a, mir-141, mir-145, mir-146a, mir-148a, mir-148b, mir-150*, mir-150-5p, mir-152, mir-15a, mir-198, mir-203, mir-214, mir-216a, mir-29c, mir-335, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-373, mir-375, mir-410, mir-497, mir-615-5p, mir-630, mir-96 mir-10a, mir-10b, mir-132, mir-15a, mir-17-5p, mir-181a, mir-18a, mir-191, mir-196a, mir-21, mir-212, mir-214, mir-222, mir-27a, mir-301a, mir-301a-3p, mir-367, mir-424-5p, mir-7, mir-92, mir-99a ретинобластома mir-101, mir-183, mir-204, mir-34a, mir-365b-3p, mir-486-3p, mir-532-5p mir-181b, mir-21 плоскоклеточный рак шейки матки mir-106a, mir-124, mir-148a, mir-214, mir-218, mir-29a, mir-375 mir-205 светлоклеточный почечно-клеточный рак mir-106a-5p, mir-135a-5p, mir-206 mir-142-5p, mir-155, mir-21-5p карцинома гортани mir-106b, mir-16, mir-21, mir-27a, mir-423-3p медуллобластома mir-124, mir-128a, mir-199b-5p, mir-206, mir-22, mir-31, mir-383 mir-106b, mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-30b, mir-30d, mir-92 карцинома гипофиза mir-106b, mir-122, mir-20a, mir-493 рак предстательной железы mir-107 рак шейки матки mir-143, mir-145, mir-17-5p, mir-203, mir-214, mir-218, mir-335, mir-342-3p, mir-372, mir-424, mir-491-5p, mir-497, mir-7, mir-99a, mir-99b mir-10a, mir-155, mir-181a, mir-181b, mir-196a, mir-19a, mir-19b, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-215, mir-224, mir-31, mir-494, mir-590-5p, mir-92a, mir-944 хронический миелогенный лейкоз mir-10a, mir-146a, mir-150, mir-151, mir-155, mir-2278, mir-26a, mir-30e, mir-31, mir-326, mir-564 mir-424, mir-96 рак желудочно-кишечного тракта mir-122a, mir-148a, mir-152 анапластическая астроцитома mir-124, mir-137 астроцитома mir-124-3p, mir-181b-5p, mir-200b, mir-3189-3p mir-335 эпителиальный рак яичников mir-124a, mir-192, mir-193a, mir-7 mir-372, mir-373 мантийноклеточная лимфома mir-142-3p, mir-142-5p, mir-150, mir-223, mir-29a, mir-29b, mir-29c mir-124a, mir-155, mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-92a хронический лимфоцитарный лейкоз mir-125b, mir-138, mir-15a, mir-15b, mir-16, mir-16-1, mir-16-1-3p, mir-16-2, mir-181a, mir-181b, mir-195, mir-223, mir-29b, mir-34b, mir-34c, mir-424 mir-150, mir-155 фолликулярный рак НД mir-125b злокачественная мезотелиома mir-126 мелкоклеточный рак легких mir-126, mir-138, mir-27a mir-25 менингиома mir-128, mir-200a mir-224, mir-335 плоскоклеточный рак гортани mir-129-5p, mir-203, mir-205, mir-206, mir-24, mir-370, mir-375 mir-21, mir-9, mir-93 медуллярный рак щитовидной железы mir-129-5p mir-183 аденокарцинома легкого mir-1297, mir-141, mir-145, mir-16, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-29b, mir-381, mir-409-3p, mir-429, mir-451, mir-511, mir-99a mir-150, mir-155, mir-31 рак поджелудочной железы mir-132, mir-375 mir-301b плоскоклеточный рак легких mir-133a, mir-218 множественная миелома mir-137, mir-197, mir-214 mir-21 плоскоклеточный рак mir-15a, mir-16, mir-203, mir-205, mir-375 mir-137, mir-155, mir-184, mir-196a, mir-203, mir-21, mir-221, mir-27a, mir-34a увеальная меланома mir-137, mir-144, mir-145, mir-182, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-9 НД анапластический рак щитовидной железы mir-138 mir-146b, mir-221, mir-222 колоректальная карцинома mir-139, mir-143, mir-145, mir-202-3p, mir-30a, mir-338-3p, mir-429, mir-451, mir-93 mir-17, mir-182, mir-191, mir-21, mir-95 солодовая лимфома mir-142-5p, mir-155 рак щитовидной железы mir-144, mir-886-3p первичные лимфомы ЦНС mir-145, mir-193b, mir-199a, mir-214 фолликулярная карцинома щитовидной железы mir-199b mir-146b, mir-183, mir-197, mir-221, mir-346 рак желчного пузыря mir-146b-5p mir-155, mir-182 Т-клеточный лейкоз взрослых mir-150 анапластическая крупноклеточная лимфома mir-155 Т-клеточная лимфома кожи mir-155 диффузная В-крупноклеточная лимфома mir-155, mir-21 рак прямой кишки mir-155, mir-200c, mir-21-5p, mir-34a рак языка mir-15b, mir-200b В-клеточная лимфома mir-34a mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-92a рак молочной железы mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-24, mir-92a рак носоглотки mir-218, mir-223, mir-29c mir-17, mir-20a аденокарцинома желудка mir-181b, mir-182, mir-200a, mir-302b, mir-449a, mir-9 mir-23a, mir-27a, mir-373 колоректальная аденокарцинома mir-182 карцинома ободочной кишки mir-186, mir-30a-5p mir-221, mir-23a рак коры надпочечников mir-195, mir-1974, mir-335, mir-497 mir-21, mir-210, mir-483-3p, mir-483-5p аденокарцинома пищевода mir-203 mir-196a, mir-199a-3p, mir-199a-5p, mir-199b-3p, mir-200a, mir-223 желудочно-кишечные стромальные опухоли mir-218, mir-221, mir-222 mir-196a лейомиома матки mir-197 хориокарцинома mir-199b, mir-218, mir-34a фолликулярная лимфома mir-202 базально-клеточная карцинома mir-203 рак глотки mir-203 аденокарцинома поджелудочной железы mir-203, mir-301a рабдомиосаркома mir-203 рак головы и шеи НД mir-21 гипофарингиальный плоскоклеточный рак mir-451a, mir-504 mir-21 Т-клеточная лимфома mir-22 карцинома щитовидной железы mir-221, mir-222 лимфома маргинальной зоны селезенки mir-223 рак гортани mir-23a первичная лимфома щитовидной железы mir-26a острый лейкоз mir-27a моноцитарный лейкоз mir-29a, mir-29b рак полости рта mir-375 mir-31 первичная карцинома желчного пузыря mir-335 эндометриальная серозная аденокарцинома mir-34b рак пищевода mir-451 злокачественная опухоль печени mir-492 аденокарцинома ободочной кишки mir-627

Таблица 4 Примеры онкогенных миР

Рак МикроРНК колоректальный рак let-7a, mir-103, mir-106a, mir-10b, mir-1179, mir-1229, mir-1246, mir-125b-2*, mir-1269a, mir-130b, mir-133b, mir-135a, mir-135a-1, mir-135a-2, mir-135b, mir-139-3p, mir-145, mir-150, mir-150*, mir-155, mir-17, mir-181a, mir-182, mir-183, mir-18a, mir-191, mir-196a, mir-196b, mir-19a, mir-19b, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-204-5p, mir-20a, mir-20a-5p, mir-21, mir-210, mir-211, mir-221, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-25, mir-27a, mir-29a, mir-301a, mir-31, mir-32, mir-320b, mir-326, mir-424, mir-429, mir-494, mir-497, mir-499-5p, mir-592, mir-630, mir-720, mir-892a, mir-92, mir-92a, mir-93, mir-95, mir-96 папиллярный рак щитовидной железы let-7e, mir-146b, mir-146b-5p, mir-151-5p, mir-155, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-183, mir-199b-5p, mir-21, mir-221, mir-222, mir-339-5p, mir-34a плоскоклеточный рак пищевода mir-100, mir-1179, mir-1290, mir-130b, mir-145, mir-16, mir-17, mir-183, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-208, mir-20a, mir-21, mir-218, mir-223, mir-25, mir-30a-5p, mir-31, mir-330-3p, mir-373, mir-9, mir-92a, mir-942 рак желудка mir-100, mir-103, mir-106a, mir-106b, mir-107, mir-10a, mir-10b, mir-1259, mir-125b, mir-126, mir-1274a, mir-1303, mir-130b*, mir-135a-5p, mir-135b, mir-138, mir-143, mir-146a, mir-147, mir-148a, mir-150, mir-17, mir-17-5p, mir-181a, mir-181a-2*, mir-181a-5p, mir-181c, mir-183, mir-185, mir-18a, mir-191, mir-192, mir-196a, mir-196a*, mir-196a-5p, mir-196b, mir-199a, mir-199a-3p, mir-199a-5p, mir-19a, mir-19b, mir-200b, mir-20a, mir-21, mir-214, mir-215, mir-221, mir-221*, mir-222, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-23b, mir-25, mir-27a, mir-27b, mir-296-5p, mir-301a, mir-302f, mir-337-3p, mir-340*, mir-34a, mir-362-3p, mir-370, mir-374a, mir-377, mir-421, mir-425, mir-500, mir-520c-3p, mir-544, mir-575, mir-601, mir-616*, mir-650, mir-92, mir-98, mir-99a почечноклеточная карцинома mir-100, mir-1233, mir-1260b, mir-146a, mir-146b, mir-16, mir-193a-3p, mir-203a, mir-21, mir-210, mir-27a, mir-362, mir-572, mir-7 рак пищевода mir-101, mir-10b, mir-130a, mir-141, mir-143, mir-146b, mir-15a, mir-183, mir-196b, mir-200a, mir-203, mir-205, mir-21, mir-210, mir-221, mir-27a, mir-28-3p, mir-31, mir-452, mir-96, mir-99b рак мочевого пузыря mir-103a-3p, mir-10b, mir-135a, mir-137, mir-141, mir-155, mir-17-5p, mir-182, mir-182-5p, mir-183, mir-185, mir-19a, mir-203, mir-205, mir-210, mir-221, mir-222, mir-223, mir-23a, mir-23b, mir-26b, mir-639, mir-96 рак эндометрия mir-106a, mir-145, mir-155, mir-182, mir-200b, mir-200c, mir-205, mir-21, mir-222-3p, mir-25, mir-93 рак яичников mir-106a, mir-141, mir-148b, mir-181b, mir-182, mir-200a, mir-200c, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-224-5p, mir-23b, mir-25, mir-26a, mir-27a, mir-27b, mir-346, mir-378, mir-424, mir-503, mir-572, mir-9, mir-96 глиома mir-106b, mir-106b-5p, mir-10b, mir-125b, mir-132, mir-155, mir-17, mir-181a, mir-182, mir-183, mir-193b, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-210, mir-214, mir-221, mir-222, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-24-3p, mir-25, mir-26a, mir-27a-3p, mir-27b, mir-30a-5p, mir-30e, mir-30e*, mir-328, mir-335, mir-33a, mir-372, mir-486, mir-494, mir-497, mir-566, mir-603, mir-650, mir-675, mir-9, mir-92b, mir-93, mir-96 плоскоклеточный рак головы и шеи mir-106b, mir-134, mir-16, mir-184, mir-196a, mir-21, mir-25, mir-30a-5p, mir-31, mir-372, mir-93 гепатоцеллюлярная карцинома mir-106b, mir-10b, mir-122, mir-1228, mir-1269, mir-128a, mir-130a, mir-130b, mir-146a, mir-153, mir-155, mir-17-5p, mir-181a, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-183, mir-184, mir-190b, mir-191, mir-20a, mir-20b, mir-21, mir-210, mir-214, mir-215, mir-216a, mir-217, mir-221, mir-222, mir-223, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-25, mir-27a, mir-301a, mir-30d, mir-31, mir-3127, mir-32, mir-331-3p, mir-362-3p, mir-362-5p, mir-371-5p, mir-372, mir-373, mir-423, mir-429, mir-452, mir-483-3p, mir-483-5p, mir-485-3p, mir-490-3p, mir-494, mir-495, mir-500, mir-501, mir-501-5p, mir-519d, mir-520g, mir-574-3p, mir-590-5p, mir-630, mir-650, mir-657, mir-664, mir-885-5p, mir-9, mir-92a, mir-96 карцинома гортани mir-106b, mir-16, mir-21, mir-27a, mir-423-3p медуллобластома mir-106b, mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-30b, mir-30d, mir-92 карцинома гипофиза mir-106b, mir-122, mir-17-5p, mir-20a, mir-493 рак шейки матки mir-10a, mir-155, mir-181a, mir-181b, mir-196a, mir-19a, mir-19b, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-215, mir-224, mir-31, mir-494, mir-590-5p, mir-92a, mir-944 панкреатический рак mir-10a, mir-10b, mir-132, mir-15a, mir-17-5p, mir-181a, mir-18a, mir-191, mir-196a, mir-21, mir-212, mir-214, mir-221, mir-222, mir-27a, mir-301a, mir-301a-3p, mir-367, mir-424-5p, mir-7, mir-92, mir-99a рак молочной железы mir-10b, mir-125a, mir-135a, mir-140, mir-141, mir-142, mir-150, mir-155, mir-17, mir-17-5p, mir-181a, mir-181b, mir-182, mir-18a, mir-18b, mir-191, mir-196a, mir-197, mir-19a, mir-19b, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-205, mir-20a, mir-20b, mir-21, mir-217, mir-221, mir-222, mir-224, mir-23a, mir-24, mir-24-2-5p, mir-24-3p, mir-27a, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-373, mir-378, mir-423, mir-429, mir-495, mir-503, mir-510, mir-520c, mir-526b, mir-96 глиобластома mir-10b, mir-125b, mir-127-3p, mir-148a, mir-18a, mir-196a, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21, mir-210, mir-210-3p, mir-223, mir-340, mir-576-5p, mir-626, mir-92b рак легких mir-10b, mir-135b, mir-150, mir-155, mir-17, mir-182, mir-183-3p, mir-18a, mir-197, mir-19a, mir-19b, mir-205, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-24, mir-30d, mir-4423, mir-5100, mir-570, mir-663, mir-7, mir-92a рак носоглотки mir-10b, mir-144, mir-149, mir-155, mir-18a, mir-21, mir-214, mir-24, mir-421, mir-663, mir-744, mir-93 немелкоклеточный рак легких mir-10b, mir-125a-5p, mir-1280, mir-136, mir-140, mir-141, mir-142-3p, mir-145, mir-146a, mir-150, mir-18a, mir-196a, mir-19a, mir-200a, mir-200c, mir-205, mir-205-3p, mir-205-5p, mir-21, mir-212, mir-22, mir-221, mir-222, mir-24, mir-25, mir-29c, mir-31, mir-328, mir-330-3p, mir-339, mir-34a, mir-375, mir-494, mir-675-5p, mir-9, mir-92b, mir-93, mir-95 рак полости рта mir-10b, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21 протоковая аденокарцинома поджелудочной железы mir-10b, mir-186, mir-18a, mir-192, mir-194, mir-196a, mir-198, mir-203, mir-21, mir-212, mir-30b-5p, mir-31, mir-34a, mir-369-5p, mir-376a, mir-541 светлоклеточный рак почки mir-122, mir-155, mir-210, mir-630 мантийноклеточная лимфома mir-124a, mir-155, mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-92a острый миелоидный лейкоз mir-125b, mir-126-5p, mir-128, mir-155, mir-29a, mir-32, mir-331, mir-370, mir-378 фолликулярный рак mir-125b нейробластома mir-125b, mir-15a, mir-15b, mir-16-1, mir-16-2, mir-18a, mir-195, mir-19a, mir-23a, mir-421, mir-92 плоскоклеточный рак полости рта mir-125b, mir-126, mir-146a, mir-146b, mir-155, mir-181b, mir-196a-1, mir-196a-2, mir-196b, mir-21, mir-221, mir-222, mir-24, mir-27b, mir-31, mir-345 рак предстательной железы mir-125b, mir-141, mir-153, mir-155, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-182, mir-182-5p, mir-183, mir-18a, mir-204, mir-20a, mir-21, mir-221, mir-223-3p, mir-31, mir-429, mir-96 мезенхимальный рак mir-125b-1-3p, mir-182 злокачественная меланома mir-126, mir-141, mir-15b, mir-17, mir-17-5p, mir-182, mir-18a, mir-193b, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-222, mir-429, mir-455-5p, mir-532-5p, mir-638, mir-92a острый лимфобластный лейкоз mir-128 остеосаркома mir-128, mir-151-3p, mir-17, mir-181a, mir-181b, mir-181c, mir-18a, mir-191, mir-195-5p, mir-199a-3p, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-21, mir-210, mir-214, mir-221, mir-27a, mir-300, mir-320a, mir-374a-5p, mir-802, mir-9, mir-92a рак ободочной кишки mir-1290, mir-145, mir-155, mir-181a, mir-18a, mir-200c, mir-31, mir-675 рак печени mir-1301, mir-155, mir-21, mir-221, mir-27a, mir-525-3p рак шейки матки mir-133b, mir-21, mir-25, mir-373 плоскоклеточный рак mir-137, mir-155, mir-184, mir-196a, mir-203, mir-21, mir-221, mir-27a, mir-34a хордома mir-140-3p, mir-148a светлоклеточный почечно-клеточный рак mir-142-5p, mir-155, mir-21-5p солодовая лимфома mir-142-5p, mir-155 анапластический рак щитовидной железы mir-146b, mir-221, mir-222 фолликулярная карцинома щитовидной железы mir-146b, mir-183, mir-197, mir-221, mir-346 первичная лимфома щитовидной железы mir-146b рак яичников mir-148b, mir-182 Т-клеточный лейкоз взрослых mir-150 хронический лимфоцитарный лейкоз mir-150, mir-155 аденокарцинома легкого mir-150, mir-155, mir-31 анапластическая крупноклеточная лимфома mir-155 Т-клеточная лимфома кожи mir-155 диффузная В-крупноклеточная лимфома mir-155, mir-21 рак желчного пузыря mir-155, mir-182 рак прямой кишки mir-155, mir-200c, mir-21-5p, mir-34a В-клеточная лимфома mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-92a рак молочной железы mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-24, mir-92a холангиокарцинома mir-17, mir-18a, mir-19a, mir-19b, mir-20a, mir-21, mir-26a, mir-92a колоректальная карцинома mir-17, mir-182, mir-191, mir-21, mir-95 рак носоглотки mir-17, mir-20a острый промиелоцитарный лейкоз mir-181a, mir-181b, mir-92a ретинобластома mir-181b, mir-21 колоректальная аденокарцинома mir-182 рак почки mir-183, mir-21, mir-210, mir-223 медуллярный рак щитовидной железы mir-183 аденокарцинома пищевода mir-196a, mir-199a-3p, mir-199a-5p, mir-199b-3p, mir-200a, mir-223 желудочно-кишечные стромальные опухоли mir-196a рак глотки mir-203 аденокарцинома поджелудочной железы mir-203, mir-301a плоскоклеточный рак шейки матки mir-205 рак коры надпочечников mir-21, mir-210, mir-483-3p, mir-483-5p рак головы и шеи mir-21 гипофарингиальный плоскоклеточный рак mir-21 плоскоклеточный рак гортани mir-21, mir-9, mir-93 множественная миелома mir-21 карцинома ободочной кишки mir-221, mir-23a карцинома щитовидной железы mir-221, mir-222 менингиома mir-224, mir-335 аденокарцинома желудка mir-23a, mir-27a, mir-373 рак гортани mir-23a мелкоклеточный рак легких mir-25 рак поджелудочной железы mir-301b рак полости рта mir-31 астроцитома mir-335 эпителиальный рак яичников mir-372, mir-373 хронический миелогенный лейкоз mir-424, mir-96 злокачественная опухоль печени mir-492

Таблица 3 Примеры онкосупрессорных миР

Рак Подавляющая опухоль супрессорная миР острый лейкоз mir-27a острый лимфобластный лейкоз let-7b, mir-124a, mir-142-3p острый миелоидный лейкоз let-7c, mir-17, mir-181a, mir-20a, mir-223, mir-26a, mir-29a, mir-30c, mir-720 острый промиелоцитарный лейкоз let-7c, mir-107, mir-342 рак коры надпочечников mir-195, mir-1974, mir-335, mir-497 анапластическая астроцитома mir-124, mir-137 анапластический рак щитовидной железы mir-138 астроцитома mir-124-3p, mir-181b-5p, mir-200b, mir-3189-3p базально-клеточная карцинома mir-203 В-клеточная лимфома mir-34a рак мочевого пузыря mir-1, mir-101, mir-1180, mir-1236, mir-124-3p, mir-125b, mir-126, mir-1280, mir-133a, mir-133b, mir-141, mir-143, mir-144, mir-145, mir-155, mir-16, mir-18a, mir-192, mir-195, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-203, mir-205, mir-214, mir-218, mir-23b, mir-26a, mir-29c, mir-320c, mir-34a, mir-370, mir-409-3p, mir-429, mir-451, mir-490-5p, mir-493, mir-576-3p, mir-99a рак молочной железы let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-100, mir-107, mir-10a, mir-10b, mir-122, mir-124, mir-1258, mir-125a-5p, mir-125b, mir-126, mir-127, mir-129, mir-130a, mir-132, mir-133a, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-147, mir-148a, mir-149, mir-152, mir-153, mir-15a, mir-16, mir-17-5p, mir-181a, mir-1826, mir-183, mir-185, mir-191, mir-193a-3p, mir-193b, mir-195, mir-199b-5p, mir-19a-3p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-205, mir-206, mir-211, mir-216b, mir-218, mir-22, mir-26a, mir-26b, mir-300, mir-30a, mir-31, mir-335, mir-339-5p, mir-33b, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-374a, mir-379, mir-381, mir-383, mir-425, mir-429, mir-450b-3p, mir-494, mir-495, mir-497, mir-502-5p, mir-517a, mir-574-3p, mir-638, mir-7, mir-720, mir-873, mir-874, mir-92a, mir-98, mir-99a, mmu-mir-290-3p, mmu-mir-290-5p бронхиолоальвеолярный рак let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-98 рак шейки матки mir-143, mir-145, mir-17-5p, mir-203, mir-214, mir-218, mir-335, mir-342-3p, mir-372, mir-424, mir-491-5p, mir-497, mir-7, mir-99a, mir-99b рак шейки матки mir-100, mir-101, mir-15a, mir-16, mir-34a, mir-886-5p, mir-99a, mir-99b плоскоклеточный рак шейки матки mir-106a, mir-124, mir-148a, mir-214, mir-218, mir-29a, mir-375 холангиокарцинома mir-101, mir-144, mir-200b, mir-200c хондросаркома let-7a, mir-100, mir-136, mir-145, mir-199a, mir-222, mir-30a, mir-335, mir-376a хордома mir-1, mir-222, mir-31, mir-34a, mir-608 хориокарцинома mir-199b, mir-218, mir-34a хронический лимфоцитарный лейкоз mir-125b, mir-138, mir-15a, mir-15b, mir-16, mir-16-1, mir-16-1-3p, mir-16-2, mir-181a, mir-181b, mir-195, mir-223, mir-29b, mir-34b, mir-34c, mir-424 хронический миелогенный лейкоз mir-10a, mir-138, mir-146a, mir-150, mir-151, mir-155, mir-16, mir-2278, mir-26a, mir-30e, mir-31, mir-326, mir-564 светлоклеточный почечно-клеточный рак mir-106a-5p, mir-135a-5p, mir-206 рак ободочной кишки let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-100, mir-101, mir-126, mir-142-3p, mir-143, mir-145, mir-192, mir-200c, mir-21, mir-214, mir-215, mir-22, mir-25, mir-302a, mir-320, mir-320a, mir-34a, mir-34c, mir-365, mir-373, mir-424, mir-429, mir-455, mir-484, mir-502, mir-503, mir-93, mir-98 карцинома ободочной кишки mir-186, mir-30a-5p аденокарцинома ободочной кишки mir-627 колоректальный рак let-7a, mir-1, mir-100, mir-101, mir-124, mir-125a, mir-126, mir-129, mir-1295b-3p, mir-1307, mir-130b, mir-132, mir-133a, mir-133b, mir-137, mir-138, mir-139, mir-139-5p, mir-140-5p, mir-143, mir-145, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-150-5p, mir-154, mir-15a, mir-15b, mir-16, mir-18a, mir-191, mir-192, mir-193a-5p, mir-194, mir-195, mir-196a, mir-198, mir-199a-5p, mir-200c, mir-203, mir-204-5p, mir-206, mir-212, mir-215, mir-218, mir-22, mir-224, mir-24-3p, mir-26b, mir-27a, mir-28-3p, mir-28-5p, mir-29b, mir-30a-3p, mir-30b, mir-320a, mir-328, mir-338-3p, mir-342, mir-345, mir-34a, mir-34a-5p, mir-361-5p, mir-375, mir-378, mir-378a-3p, mir-378a-5p, mir-409-3p, mir-422a, mir-4487, mir-483, mir-497, mir-498, mir-518a-3p, mir-551a, mir-574-5p, mir-625, mir-638, mir-7, mir-96-5p колоректальная карцинома mir-139, mir-143, mir-145, mir-202-3p, mir-30a, mir-338-3p, mir-429, mir-451, mir-93 рак эндометрия mir-101, mir-130a, mir-130b, mir-134, mir-143, mir-145, mir-152, mir-205, mir-223, mir-301a, mir-301b, mir-30c, mir-34a, mir-34c, mir-424, mir-449a, mir-543 эндометриальная серозная аденокарцинома mir-34b эпителиальный рак яичников mir-124a, mir-192, mir-193a, mir-7 аденокарцинома пищевода mir-203 рак пищевода mir-124, mir-126, mir-140, mir-197, mir-203, mir-218, mir-223, mir-30b, mir-375, mir-454, mir-486, mir-574-3p рак пищевода mir-451 плоскоклеточный рак пищевода let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-100, mir-101, mir-126, mir-1294, mir-133a, mir-133b, mir-138, mir-143, mir-145, mir-150, mir-185, mir-195, mir-200b, mir-203, mir-21, mir-210, mir-214, mir-218, mir-22, mir-27a, mir-29b, mir-29c, mir-302b, mir-34a, mir-375, mir-494, mir-518b, mir-655, mir-98, mir-99a фолликулярная лимфома mir-202 фолликулярная карцинома щитовидной железы mir-199b рак желчного пузыря mir-146b-5p аденокарцинома желудка mir-181b, mir-182, mir-200a, mir-302b, mir-449a, mir-9 рак желудка let-7a, let-7b, let-7g, mir-1, mir-101, mir-103a, mir-10a, mir-10b, mir-1207-5p, mir-122, mir-1228*, mir-124, mir-124-3p, mir-125a-3p, mir-126, mir-1266, mir-127, mir-1271, mir-129-1-3p, mir-129-2-3p, mir-129-3p, mir-129-5p, mir-133a, mir-133b, mir-137, mir-141, mir-143, mir-144, mir-145, mir-146a, mir-146a-5p, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-152, mir-155, mir-155-5p, mir-181a, mir-181b, mir-182, mir-183, mir-185, mir-194, mir-195, mir-197, mir-199a-3p, mir-200b, mir-200c, mir-202-3p, mir-204, mir-204-5p, mir-205, mir-206, mir-210, mir-212, mir-217, mir-218, mir-22, mir-23b, mir-24, mir-26a, mir-29a, mir-29a-3p, mir-29b, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-30a-5p, mir-30b, mir-31, mir-328, mir-329, mir-331-3p, mir-335-5p, mir-338, mir-338-3p, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-361-5p, mir-367, mir-375, mir-378, mir-409-3p, mir-410, mir-429, mir-433, mir-449, mir-449a, mir-490-3p, mir-494, mir-497, mir-503, mir-506, mir-513b, mir-520d-3p, mir-542-3p, mir-622, mir-625, mir-638, mir-663, mir-7, mir-874, mir-9 рак желудочно-кишечного тракта mir-122a, mir-148a, mir-152 желудочно-кишечные стромальные опухоли mir-218, mir-221, mir-222 глиобластома let-7g-5p, mir-100, mir-101, mir-106a, mir-124, mir-124a, mir-125a, mir-125a-5p, mir-125b, mir-127-3p, mir-128, mir-129, mir-136, mir-137, mir-139-5p, mir-142-3p, mir-143, mir-145, mir-146b-5p, mir-149, mir-152, mir-153, mir-195, mir-21, mir-212-3p, mir-219-5p, mir-222, mir-29b, mir-31, mir-3189-3p, mir-320, mir-320a, mir-326, mir-330, mir-331-3p, mir-340, mir-342, mir-34a, mir-376a, mir-449a, mir-483-5p, mir-503, mir-577, mir-663, mir-7, mir-7-5p, mir-873 глиома let-7a, let-7f, mir-106a, mir-107, mir-122, mir-124, mir-124-5p, mir-124a, mir-125b, mir-128, mir-136, mir-137, mir-139, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-146b-5p, mir-152, mir-15b, mir-16, mir-181a, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-184, mir-185, mir-195, mir-199a-3p, mir-200a, mir-200b, mir-203, mir-204, mir-205, mir-218, mir-219-5p, mir-23b, mir-26b, mir-27a, mir-29c, mir-320, mir-326, mir-328, mir-34a, mir-34c-3p, mir-34c-5p, mir-375, mir-383, mir-451, mir-452, mir-483-5p, mir-495, mir-584, mir-622, mir-656, mir-7, mir-98 плоскоклеточный рак головы и шеи let-7d, mir-1, mir-107, mir-128, mir-133a, mir-138, mir-149, mir-200c, mir-205, mir-218, mir-27a*, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-300, mir-34a, mir-363, mir-375, mir-874 гепатоцеллюлярная карцинома let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-100, mir-101, mir-105, mir-122, mir-122a, mir-1236, mir-124, mir-125b, mir-126, mir-127, mir-1271, mir-128-3p, mir-129-5p, mir-130a, mir-130b, mir-133a, mir-134, mir-137, mir-138, mir-139, mir-139-5p, mir-140-5p, mir-141, mir-142-3p, mir-143, mir-144, mir-145, mir-146a, mir-148a, mir-148b, mir-150-5p, mir-15b, mir-16, mir-181a-5p, mir-185, mir-188-5p, mir-193b, mir-195, mir-195-5p, mir-197, mir-198, mir-199a, mir-199a-5p, mir-199b, mir-199b-5p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-202, mir-203, mir-204-3p, mir-205, mir-206, mir-20a, mir-21, mir-21-3p, mir-211, mir-212, mir-214, mir-217, mir-218, mir-219-5p, mir-22, mir-223, mir-26a, mir-26b, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-2, mir-29c, mir-302b, mir-302c, mir-30a, mir-30a-3p, mir-335, mir-338-3p, mir-33a, mir-34a, mir-34b, mir-365, mir-370, mir-372, mir-375, mir-376a, mir-377, mir-422a, mir-424, mir-424-5p, mir-433, mir-4458, mir-448, mir-450a, mir-451, mir-485-5p, mir-486-5p, mir-497, mir-503, mir-506, mir-519d, mir-520a, mir-520b, mir-520c-3p, mir-582-5p, mir-590-5p, mir-610, mir-612, mir-625, mir-637, mir-675, mir-7, mir-877, mir-940, mir-941, mir-98, mir-99a гипофарингиальный плоскоклеточный рак mir-451a, mir-504 рак почки mir-1, mir-145, mir-1826, mir-199a, mir-199a-3p, mir-203, mir-205, mir-497, mir-508-3p, mir-509-3p плоскоклеточный рак гортани mir-129-5p, mir-203, mir-205, mir-206, mir-24, mir-370, mir-375 рак печени mir-101, mir-122, mir-132, mir-140-5p, mir-145, mir-148b, mir-31, mir-338-3p, mir-433 аденокарцинома легкого mir-1297, mir-141, mir-145, mir-16, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-29b, mir-381, mir-409-3p, mir-429, mir-451, mir-511, mir-99a рак легких let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-101, mir-133b, mir-138, mir-142-5p, mir-144, mir-145, mir-1469, mir-146a, mir-153, mir-15a, mir-15b, mir-16-1, mir-16-2, mir-182, mir-192, mir-193a-3p, mir-194, mir-195, mir-198, mir-203, mir-217, mir-218, mir-22, mir-223, mir-26a, mir-26b, mir-29c, mir-33a, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-365, mir-449a, mir-449b, mir-486-5p, mir-545, mir-610, mir-614, mir-630, mir-660, mir-7515, mir-9500, mir-98, mir-99b плоскоклеточный рак легких mir-133a, mir-218 злокачественная меланома let-7b, mir-101, mir-125b, mir-1280, mir-143, mir-146a, mir-146b, mir-155, mir-17, mir-184, mir-185, mir-18b, mir-193b, mir-200c, mir-203, mir-204, mir-205, mir-206, mir-20a, mir-211, mir-218, mir-26a, mir-31, mir-33a, mir-34a, mir-34c, mir-376a, mir-376c, mir-573, mir-7-5p, mir-9, mir-98 злокачественная мезотелиома mir-126 мантийноклеточная лимфома mir-142-3p, mir-142-5p, mir-150, mir-223, mir-29a, mir-29b, mir-29c медуллярный рак щитовидной железы mir-129-5p медуллобластома mir-124, mir-128a, mir-199b-5p, mir-206, mir-22, mir-31, mir-383 менингиома mir-128, mir-200a мезенхимальный рак mir-100, mir-141, mir-199b-5p, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-29a, mir-29b-1, mir-29b-1-5p, mir-29b-2, mir-29c, mir-335, mir-429, mir-99a моноцитарный лейкоз mir-29a, mir-29b множественная миелома mir-137, mir-197, mir-214 рак носоглотки mir-218, mir-223, mir-29c рак носоглотки let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-1, mir-101, mir-124, mir-138, mir-143, mir-145, mir-148a, mir-200b, mir-204, mir-216b, mir-223, mir-29c, mir-320a, mir-324-3p, mir-34c, mir-375, mir-378, mir-451, mir-506, mir-9, mir-98 нейробластома let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-124, mir-137, mir-145, mir-181c, mir-184, mir-200a, mir-29a, mir-335, mir-338-3p, mir-34a, mir-449a, mir-885-5p, mir-98 немелкоклеточный рак легких let-7a, let-7c, mir-1, mir-100, mir-101, mir-106a, mir-107, mir-124, mir-125a-3p, mir-125a-5p, mir-126, mir-126*, mir-129, mir-133a, mir-137, mir-138, mir-140, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-146b, mir-148a, mir-148b, mir-149, mir-152, mir-153, mir-154, mir-155, mir-15a, mir-16, mir-17-5p, mir-181a-1, mir-181a-2, mir-181b, mir-181b-1, mir-181b-2, mir-181c, mir-181d, mir-184, mir-186, mir-193b, mir-195, mir-199a, mir-204, mir-212, mir-221, mir-224, mir-26b, mir-27a, mir-27b, mir-29a, mir-29b, mir-29c, mir-30a, mir-30b, mir-30c, mir-30d, mir-30d-5p, mir-30e-5p, mir-32, mir-335, mir-338-3p, mir-340, mir-342-3p, mir-34a, mir-34b, mir-361-3p, mir-365, mir-373, mir-375, mir-429, mir-449a, mir-4500, mir-451, mir-4782-3p, mir-497, mir-503, mir-512-3p, mir-520a-3p, mir-526b, mir-625*, mir-96, mir-99a рак полости рта let-7d, mir-218, mir-34a, mir-375, mir-494 рак полости рта mir-375 плоскоклеточный рак полости рта mir-100, mir-124, mir-1250, mir-125b, mir-126, mir-1271, mir-136, mir-138, mir-145, mir-147, mir-148a, mir-181a, mir-206, mir-220a, mir-26a, mir-26b, mir-29a, mir-32, mir-323-5p, mir-329, mir-338, mir-370, mir-410, mir-429, mir-433, mir-499a-5p, mir-503, mir-506, mir-632, mir-646, mir-668, mir-877, mir-9 остеосаркома let-7a, mir-1, mir-100, mir-101, mir-122, mir-124, mir-125b, mir-126, mir-127-3p, mir-132, mir-133a, mir-141, mir-142-3p, mir-142-5p, mir-143, mir-144, mir-145, mir-153, mir-16, mir-183, mir-194, mir-195, mir-199a-3p, mir-204, mir-212, mir-217, mir-218, mir-22, mir-23a, mir-24, mir-26a, mir-26b, mir-29b, mir-32, mir-320, mir-335, mir-33b, mir-340, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-375, mir-376c, mir-382, mir-3928, mir-424, mir-429, mir-449a, mir-451, mir-454, mir-503, mir-519d, mir-646 рак яичников let-7i, mir-100, mir-124, mir-125b, mir-129-5p, mir-130b, mir-133a, mir-137, mir-138, mir-141, mir-145, mir-148a, mir-152, mir-153, mir-155, mir-199a, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-212, mir-335, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-409-3p, mir-411, mir-429, mir-432, mir-449a, mir-494, mir-497, mir-498, mir-519d, mir-655, mir-9, mir-98 рак яичников mir-100, mir-101, mir-34b, mir-34c, mir-532-5p панкреатический рак mir-101, mir-1181, mir-124, mir-1247, mir-133a, mir-141, mir-145, mir-146a, mir-148a, mir-148b, mir-150*, mir-150-5p, mir-152, mir-15a, mir-198, mir-203, mir-214, mir-216a, mir-29c, mir-335, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-373, mir-375, mir-410, mir-497, mir-615-5p, mir-630, mir-96 рак поджелудочной железы mir-132, mir-375 протоковая аденокарцинома поджелудочной железы let-7a, let-7a-1, let-7a-2, let-7a-3, let-7b, let-7c, let-7d, let-7e, let-7f-1, let-7f-2, let-7g, let-7i, mir-126, mir-135a, mir-143, mir-144, mir-145, mir-148a, mir-150, mir-15a, mir-16, mir-200a, mir-200b, mir-200c, mir-217, mir-218, mir-337, mir-375, mir-494, mir-615-5p, mir-98 папиллярный рак щитовидной железы mir-101, mir-130b, mir-138, mir-146a, mir-16, mir-195, mir-199a-3p, mir-204-5p, mir-219-5p, mir-26a, mir-34b, mir-613 первичные лимфомы ЦНС mir-145, mir-193b, mir-199a, mir-214 первичная карцинома желчного пузыря mir-335 первичная лимфома щитовидной железы mir-26a рак предстательной железы let-7a-3p, let-7c, mir-100, mir-101, mir-105, mir-124, mir-128, mir-1296, mir-130b, mir-133a-1, mir-133a-2, mir-133b, mir-135a, mir-143, mir-145, mir-146a, mir-154, mir-15a, mir-187, mir-188-5p, mir-199b, mir-200b, mir-203, mir-205, mir-212, mir-218, mir-221, mir-224, mir-23a, mir-23b, mir-25, mir-26a, mir-26b, mir-29b, mir-302a, mir-30a, mir-30b, mir-30c-1, mir-30c-2, mir-30d, mir-30e, mir-31, mir-330, mir-331-3p, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-374b, mir-449a, mir-4723-5p, mir-497, mir-628-5p, mir-642a-5p, mir-765, mir-940 рак предстательной железы mir-107 почечноклеточная карцинома let-7a, let-7d, mir-1, mir-106a*, mir-126, mir-1285, mir-129-3p, mir-1291, mir-133a, mir-135a, mir-138, mir-141, mir-143, mir-145, mir-182-5p, mir-199a-3p, mir-200a, mir-205, mir-218, mir-28-5p, mir-30a, mir-30c, mir-30d, mir-34a, mir-378, mir-429, mir-509-3p, mir-509-5p, mir-646 светлоклеточный рак почки let-7b, let-7c, mir-138, mir-141, mir-200c, mir-204, mir-218, mir-335, mir-377, mir-506 ретинобластома mir-101, mir-183, mir-204, mir-34a, mir-365b-3p, mir-486-3p, mir-532-5p рабдомиосаркома mir-203 мелкоклеточный рак легких mir-126, mir-138, mir-27a лимфома маргинальной зоны селезенки mir-223 плоскоклеточный рак mir-15a, mir-16, mir-203, mir-205, mir-375 Т-клеточная лимфома mir-22 рак щитовидной железы mir-144, mir-886-3p рак языка mir-15b, mir-200b лейомиома матки mir-197 увеальная меланома mir-137, mir-144, mir-145, mir-182, mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-9

Таблица 5. Сведенные данные взаимодействия микроРНК/ММР при раке.

микроРНК Тип MMP и молекула-мишень Тип рака Фенотип Путь let-7 MMP-9 Меланома Пролиферация и миграция клеток - MMP-14, активация ERK1/2 Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы НД Активация ERK1/2, передача сигналов TGF-β1 Фокальная адгезионная киназа (ФАК), АКТ, ЕРК, ММР-2 и ММР-9 Глиобластома Миграция и инвазия АКТ и ЕРК миР-9 ММР-2, ММР-9 и VEGFA Увеальная меланома Миграция и инвазия Передача сигналов NF-κB1 MMP-14 Нейробластома Инвазия, метастазирование и ангиогенез - МиР-10b ММР-9, Е-кадгерин и виментин Клетки карциномы носоглотки Распространение, миграция, инвазия - MMP-14 и uPAR Глиома Клеточная инвазивность - MMP-2, EGFR. Мультиформная глиобластома Апоптоз, инвазия и миграция Пути EGFR МиР-15b MMP-3 Глиома Клеточная инвазивность Путь MEK-ERK миР-17 MMP-3 Гепатоцеллюлярная карцинома Миграция и инвазия p-AKT миР-21 RECK, MMP-9 Рак предстательной железы НД - Phospho-c-Jun, MMP-2, MMP-9 Гепатоцеллюлярная карцинома Миграция и инвазия - RECK, MMP-2 Глиома Апоптоз, миграция и инвазивность - MMP-2, EGFR. Мультиформная глиобластома Апоптоз, инвазия и миграция Пути EGFR миР-26a MMP-2 Рак легких Миграция, инвазия и метастазирование AKT-фосфорилирование МиР-29b MMP-2 Рак ободочной кишки Миграция - MMP-2 Гепатоцеллюлярная карцинома Опухолевый ангиогенез, инвазия и метастазирование VEGFR-2-сигнализации MMP-2, Mcl-1, COL1A1 и COL4A1 Рак предстательной железы инвазия и метастазирование - МиР-29c MMP-2 Опухоли нервной оболочки Миграция и инвазия клеток - МиР-30d SOCS1, phospho-STAT3, MMP-2 и MMP-9 Рак предстательной железы Распространение и инвазия STAT3-сигнализация миР-34a Fra-1, p53 MMP-1 и MMP-9 Рак ободочной кишки Миграция и инвазия - миР-92a MMP-2 и -9 Рак легких Миграция и инвазия STAT3-сигнализация миР-101 Гомолог 2 энхансера zeste (EZH2), CDH1 и MMP-2 Рак легких Клеточная инвазивность - МиР-106b MMP-2 Рак молочной железы Миграция и инвазия ERK сигнальный каскад МиР-125b MMP-2 и MMP-9 Глиобластома Инвазия - МиР-133 MMP-14 Рак легких Клеточная пролиферация, миграция и инвазия - миР-138 RhoC, MMP-2 и MMP-9 Холангиокарцинома Распространение, миграция и инвазия Передача сигналов p-ERK миР-139 IGF-IR и MMP-2 Колоректальный рак Миграция, инвазия и метастазирование Сигнализация IGF-IR/MEK/ERK миР-143 MMP-13 Рак предстательной железы Миграция и инвазия - MMP-2 и MMP-9 Панкреатический рак Миграция и инвазия - MMP-13 Остеосаркома Клеточная инвазивность - миР-145 Ets1, MMP-1 и -9 Рак желудка Инвазия, метастазирование и ангиогенез - миР-146a MMP-1, uPA и uPAR Рак мозга Миграция, инвазия и метастазирование - MMP-16 Рак ободочной кишки Инвазия - миР-149 MMP-2 и CyclinD1 Глиома Распространение и инвазия АКТ-сигнализация миР-152 MMP-3 Глиома Клеточная инвазивность Путь MEK-ERK МиР-181b MMP-2 и MMP-9 Гепатоцеллюлярная карцинома Миграция и инвазия TGF-β, Smad-сигнализация миР-182 MMP-9, RECK Рак молочной железы способность к инвазии клеток и образованию колоний - МиР-196b Виментин, MMP-2 и MMP-9 Рак желудка Миграция и инвазия - миР-203 MMP-9 и Robo1 Глиобластома Распространение, миграция и инвазия ERK-фосфорилирование миР-206 MMP-2 и MMP-9 Рак молочной железы Инвазия и миграция - миР-211 MMP-9 Мультиформная глиобластома Миграция и инвазия клеток - миР-218 LEF1, MMP-2, -7 и -9 Мультиформная глиобластома Инвазия - миР-218 MMP-9 Глиомы Клеточная инвазивность Путь IKK-β/NF-κB миР-224 MMP-9 посредством таргетинга HOXD10 Гепатоцеллюлярная карцинома человека Миграция и инвазия - миР-338-3p СМО и MMP-9 Гепатоцеллюлярная карцинома Инвазия и метастазирование - миР-340 MMP-2 и MMP-9 Рак молочной железы Рост, миграция и инвазия опухолевых клеток - миР-430 ERK, MMP-2 и MMP-9 Рак мочевого пузыря Способность к распространению, миграции и формированию колоний - миР-451 Akt1, CyclinD1, MMP-2, MMP-9 и Bcl-2 Глиобластома Пролиферация, инвазия и апоптоз Сигнализация PI3K/AKT миР-491 MMP-9 Гепатоцеллюлярная карцинома Миграция - миР-491-5p MMP-9 Мультиформная глиобластома Инвазия - микроРНК-590-3p PI3K, Akt, MMP-2 и MMP-9 Рак мочевого пузыря Распространение, миграция и колониеобразование Сигнализация Akt, PI3K миР-874 MMP-2 и -9, аквапорин-3 Рак желудка человека Анализ клеточной миграции и инвазии и туморогенность in vivo - миР-874 MMP-2 и uPA Немелкоклеточный рак легких Инвазивность опухолевых клеток и рост опухолей in vivo - миР-885-5p MMP-9 Мультиформная глиобластома Инвазия -

Таблица 6. Целевые протеазы и раковые заболевания, связанные с их избыточной экспрессией.

Семейство Протеаза Место нахождения Рак Цистеин катепсины Общая часть Внутриклеточно, лизосомы Большинство Катепсин К Внеклеточно, кость Молочные железы Катепсин В Внеклеточно и перицеллюлярно при патологических состояниях Грудь, шейка матки, ободочная кишка, ободочная и прямая кишка, желудок, голова и шея, печень, легкое, меланома, яичники, поджелудочная железа, предстательная железа, щитовидная железа Катепсин L Грудь, прямая и ободочная кишка Аспарагиновые Катепсины Катепсин E Эндосомные структуры, ЭР, комплекс Гольджи Шейки матки, желудок, легкие, аденокарциномы поджелудочной железы Катепсин D Лизосомы Грудь, прямая и ободочная кишка, яичники Калликреины (ГК) Общее Внутриклеточно, секретируемо Большинство hK1 PSA (hK 3) Простата, яичники hK10 Толстая кишка, яичник, поджелудочная железа, голова и шея hK15 Яичники, предстательная железа Сериновые протеазы uPA, uPAR Мембрана, перицеллюлярно Шейка матки, прямая и ободочная кишка, желудок, предстательная железа Каспазы Внутриклеточно ММР Общее Внеклеточно Большинство MMP-1, -8, -13 Молочные железы MMP-2, -9 Грудь, прямая и ободочная кишка, легкие, злокачественные глиомы, яичники MMP-14 Мембрана Молочные железы ADAM Внеклеточно

Таблица 7. Список выбранных онкогенов, связанных со злокачественными опухолями человека

Название гена Локус гена Связанные злокачественные новообразования Комментарий ABL1 (ABL) 9q34.1 Хронический миелоидный лейкоз см. тирозинкиназу белка мышиного лейкоза Абельсона ABL2 (ABLL, ARG) 1q24-q25 острый миелоидный лейкоз Член семейства тирозинкиназ. Важно для сборки и ремоделирования синапса AKAP13 (HT31, LBC. BRX) 15q24-q25 рак молочной железы Онкоген бластного криза ARAF1 Xp11.4-p11.2 ангиоиммунобластная лимфаденопатия с диспротеинемией Киназа серин/треонин ARHGEF5 (TIM) 7q33-q35 Рак молочной железы Коды белка, контролирующего организацию цитоскелета посредством регуляции малых GTP-связывающих белков ATF1 12q13 Гибридный ген ATF1/EWSген, связанный со злокачественной меланомой мягких частей (MMSP) ATF1/FUS с гистиоцитомой. Коды цАМФ-зависимого фактора транскрипции-1 AXL 19q13.1-q13.2 Хронический миелогенный лейкоз превращение гена в острый лейкоз BCL2 18q21.3 Лимфома Беркитта, фолликулярная лимфома Медиатор апоптоза. Транслокация является маркером худшего терапевтического ответа BRAF (BRAF1, RAFB1) 7q34 Волосатоклеточный лейкоз, злокачественная меланома, рак щитовидной железы, анапластическая карцинома щитовидной железы, рак кишечника, аденокарцинома легкого, неходжкинская лимфома см. протоонкогены BRCA1 17q21 Синдром наследственного рака молочной железы. Наследственный рак молочной железы, папиллярный серозный рак брюшины (PSCP), рак предстательной железы см. BRCA1. BRCA2 (FANCD1) 13q12.3 Наследственный рак молочной железы, рак простаты, рак поджелудочной железы см BRCA2 BRIP1 17q22.2 Рак яичников, рак молочной железы C-терминальная геликаза 1 BRCA1-взаимодействующего белка, важная для нормального восстановления двухцепочечного разрыва CBL (CBL2) 11q23.3 см. протоонкогены CSF1R (CSF-1, FMS, MCSF) 5q33.2-q33.3 Острый миелобластный лейкоз типа M4 и хронический миеломоноцитарный лейкоз Коды для рецептора колониестимулирующего фактора-1, также известного как макрофагальный колониестимулирующий фактор DAPK1 (DAPK) 9q34.1 Рак мочевого пузыря Коды для ассоциированной со смертью протеинкиназы являются положительными медиаторами апоптоза, индуцированного гамма-интерфероном. DEK (D6S231E) 6p23 Гибридный ген DEK/NUP214 (DEK/CAN), ассоциированный с острым миелоидным лейкозом Коды для связывания ДНК с белком участвуют в регуляции транскрипции и трансдукции сигнала в качестве компонента сплайсингового комплекса, который остается связанным со сплайсированными экзонами. DUSP6 (MKP3,PYST1) 12q22-q23 Немелкоклеточный рак легких, рак поджелудочной железы Коды члена семейства митоген-активируемых протеин(MAP) киназ и играют ключевую роль в клеточной сигнальной трансдукции EGF см. протоонкогены EGFR (ERBB, ERBB1) см. протоонкогены ERBB3 (HER3) 12q13 Немелкоклеточный рак легких повышенные уровни мРНК ERBB3 при раке молочной железы ERG см. протоонкогены ETS1 см. протоонкогены ETS2 Острый миелоидный лейкоз Коды фактора транскрипции EWSR1 (EWS, ES, PNE,) 22q12 EWS/ERG саркомы Юинга, гибридный ген эстезионейробластомы EWS/FEV при саркоме Юинга, EWS/ZNF278 мелкоклеточной саркомы, EWS/FLI1 саркомы Юинга, EWS/ATF1 злокачественной меланомы мягких частей тела (MMSP) EWS/WT1 в десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли Область точечного разрыва 1 саркомы Юинга FES (FPS) 15q26.1 В-клеточная лимфома, острый промиелоцитарный лейкоз, рак мочевого пузыря, рак легких, рак молочной железы, рак ободочной кишки, нейробластома, пред-В-лимфоцитарное новообразование, плазмоцитома, множественная миелома, Т-клеточная лимфома, саркома Коды для тирозин-специфической протеинкиназы с ролью в регуляции иммунного ответа FGF4 (HSTF1, KFGF) 11q13 Рак желудка, саркома Капоши Фактор роста фибробластов Важное значение для развития конечностей. FGFR1 см. протоонкогены FGFR10P (FOP) 6q27 Гибридный ген FGFR1/FGFR1OP2 неходжкинской лимфомы FLCN 17p11.2 Рак почки, рак кишечника см. FFCN FOS (c-fos) 14q24.3 см. протоонкогены FRAP1 см. супрессоры опухоли FUS (TLS) 16p11.2 см. протоонкогены HRAS 11p15.5 см. протоонкогены GLI1 12q13.2-q13.3 Глиома, миксоидная липосаркома, опухоль слюнной железы Коды белка цинкового пальца Круппель (Кр) GLI2 2q14 Глиома Коды белка цинкового пальца Круппель (Кр) GPC3 Xq26 Рак половых клеток, гепатоцеллюлярный рак см. GPC3 HER2 (ERBB2, TKR1, NEU) 17q21.1 Рак молочной железы, рак легких см. HER2. Мишень трастузумаба. HGF (SF) 7q21.1 Рак предстательной железы, рак почки Коды для фактора роста гепатоцитов (гепатопоэтин А, фактор рассеяния), экспрессия которого повышается при многих злокачественных новообразованиях IRF4 (LSIRF, MUM1) 6p25-p23 В-клеточная лимфома, В-клеточный лейкоз, множественная миелома Коды для регуляторного фактора интерферона, необходимого для функции лимфоцитов JUNB 19p13.2 см. протоонкогены KIT(SCFR) 4q12 Желудочно-кишечные стромальные опухоли (GIST), тучные лейкозы, мастоцитоз, семинома и дисгерминома Трансмембранный рецептор тирозинкиназы для фактора стволовых клеток (SCFR) необходим для гемопоэза, меланогенеза и гаметогенеза. Мутации вызывают «пегую кожу» KRAS2 (RASK2) 12p12.1 см. протоонкогены LCK 1p35-p34.3 Немелкоклеточный рак легких, нейробластома, неходжкинская лимфома кодирует специфическую для лимфоцитов протеинтирозинкиназу LCO 2q14-q21 Гепатоцеллюлярная карцинома MAP3K8(TPL2, COT, EST) 10p11.2 Саркома Юинга, аденокарцинома легкого, рак щитовидной железы Коды для серин-треонин-протеинкиназы. MCF2 (DBL) Xq27 Рак молочной железы Коды для фактора обмена GDP-GTP модулирующего активность малых GTPаз семейства Rho MDM2 12q14.3-q15 Множественные MDM2 действует как основной регулятор супрессора опухоли p53, нацеливая его разрушение. Прямая ассоциация р53 с белком MDM2 приводит к убиквитинированию и последующей деградации р53 MET(HGFR, RCCP2) 7q31 см. протоонкогены Гены типа MLH см. протоонкогены MMD 17q Немелкоклеточный рак легких, гепатоцеллюлярная карцинома, рак ободочной кишки Коды для белков, связанных с дифференциацией моноцитов в макрофаги MOS (MSV) 8q11 Лимфома Беркитта, острый миелобластный лейкоз Функция у человека неизвестна. Ассоциации выше косвенный, но аналогичный ген с вирусом мышиной саркомы Молони. MRAS (RRAS3) 3q22.3 Активирован во многих опухолях Коды для RAS GTP-связывающего белка закрепленного на мембране внутриклеточного датчика сигнала Гены типа MSH см. протоонкогены MYB (AMV) 6q22 Изменения обнаружены более чем в трети линий солидных опухолей человека Кодирует белки, важные для пролиферации и развития кроветворных клеток. MYC 8q24.12-q24.13 Лимфома Беркитта. Сверхэкспрессия во многих злокачественных опухолях, возможно, связанная с избытком ангиогенных способствующих инвазивности свойств. Фактор транскрипции, способствующий пролиферации клеток MYCL1 (LMYC) 1p34.3 Мелкоклеточный рак легких, аденокарцинома легкого, нейробластома MYCN 2p24.1 Нейробластомы Накладывается на NMYC и транскрибируется с противоположной цепи ДНК NCOA4 (ELE1, ARA70, PTC3) 10q11.2 Рак предстательной железы Взаимодействует с рецептором андрогена в присутствии дигидротестостерона. Гены типа NF1 см. супрессоры опухоли NMYC 2p24 Нейробластомы, ретинобластомы Накладывается на MYCN и транскрибируется с противоположной цепи ДНК. Вероятно, ДНК-связывающий белок. NRAS 1p13.2 см. протоонкогены NTRK1 (TRK, TRKA) 1q21-q22 см. протоонкогены NUP214 (CAN, D9S46E) 9q34.1 Гибридный ген NUP214/DEK, связанный с острым миелоидным лейкозом, NUP214/ABL1, связанный с острым лимфобластным лейкозом Т-клеток (T-ОЛЛ). Коды нуклеопоринового компонента комплекса ядерных пор позвоночных. OVC 9p24 Аденокарцинома яичника Аномально примерно у 40% аденокарцином яичника TP53 (P53) 17p13.1 см. супрессоры опухоли PALB2 16p12 Рак молочной железы см. PALB2 PAX3 (HUP2) STAT1 2q35 Альвеолярная рабдомиосаркома Транскрипционный фактор, вызывает некоторые формы синдрома Ваарденбурга и регулирует RET. PDGFB (SIS) см. протоонкогены Гены PIM см. протоонкогены PML (MYL) 15q22 см. супрессоры опухоли Гены PMS (PMSL). см. супрессоры опухоли PPM1D (WIP1) 17q22-q23 Рак молочной железы, остеосаркома Коды для серин/треонин-протеинфосфатазы, которая ослабляет апоптоз и облегчает трансформацию первичных клеток в содействии с RAS PTEN (MMAC1) 10q23.31 см. супрессоры опухоли PVT1 8q24 Лимфома Беркитта RAF1 (CRAF) 3p25 Рак желудка, рак почки, глиобластома, рак гортани Регулятор выживания эндотелиальных клеток во время ангиогенеза. Активированный RAF противодействует апоптозу, подавляя активацию стерильной 20-подобной киназы млекопитающих (MST2). RB1 (RB) 13q14.1-q14.2 Ретинобластома, остеогенная саркома, мелкоклеточный рак легких, рак мочевого пузыря см. RB1 RET 10q11.2 Множественная эндокринная неоплазия типа 2а и 2b и медуллярный рак щитовидной железы см. RET RRAS2 (TC21) 11pter-p15.5 Тератокарцинома, рак яичников Одноточечная мутация активирует свой онкогенный потенциал ROS1 (ROS, MCF3) 6q22 Глиобластома и, вероятно, другие Гибридный белок ROS1/FIG представляет собой тирозинкиназу, обнаруженную при астроцитоме Гены типа SMAD см. супрессоры опухоли SMARCB1 (SNF5, INI1) 22q11 см. супрессоры опухоли SMURF1 7q21.1-q31.1 Панкреатический рак Коды для убиквитинлигазы E3 домена HECT, которая регулирует пластичность и подвижность опухолевых клеток за счет деградации RhoA SRC (AVS) 20q12-q13 печеночный метастатический рак кишечника, рак ободочной кишки, лейкоз Белок-регулятор внутриклеточной коммуникации Мутации являются активирующими, трансформирующими, онкогенными и способствующими метастазированию STAT1 2q32.2-q32.3 Немелкоклеточный рак легких см. STAT1 STAT3 17q21 Эпителиальный рак Кодирует сигнальный белок, который индуцирует клеточную трансформацию посредством комбинированного ингибирования апоптоза и активации клеточного цикла STAT5 17q11.2 Пермиссивно для широкого спектра злокачественных новообразований Кодирует сигнальный белок, который индуцирует клеточную трансформацию посредством комбинированного ингибирования апоптоза и активации клеточного цикла TDGF1 (CRGF) 3p23-p21 тератокарцинома Вероятно, коды для сигнального белка для развития мезодермы TGFBR2 3p22 см. протоонкогены THRA (ERBA, EAR7 и т. д.) см. протоонкогены TFG (TRKT3) 3q11-q12 Папиллярный рак щитовидной железы Химерный онкоген с протоонкогеном NTRK1 TIF1 (TRIM24, TIF1A) 7q32-q34 Гибридные гены, связанные с папиллярной карциномой щитовидной железы и миелопролиферативным расстройством. Коды для промежуточного фактора транскрипции 1 TNC (TN, HXB) 9q33 Нейрофиброматоз типа 1, рак поджелудочной железы см. TNC TRK 1q21-q22 см. протоонкогены TUSC3 8p22 см. супрессоры опухоли USP6 (TRE2) 17p13 Множественные раковые заболевания Коды для убиквитин-специфической протеазы, обнаруженной только у приматов WNT1 (INT1) 12q12-q13 см. протоонкогены WT1 11p13 Опухоль Вильмса, чрезмерно экспрессируется при раке молочной железы и легких, миелодиспластическом синдроме и остром миелолейкозе ДНК-связывающий белок цинкового пальца действует как активатор или репрессор транскрипции в зависимости от внутриклеточного контекста VHL 3p26-p25 см. супрессоры опухоли

Таблица 8. МиР-супрессоры опухолей, которые подавляются при определенных типах рака

Рак МикроРНК Мочевой пузырь mir-1; mir-101; mir-1180; mir-1236; mir-124-3p; mir-125b; mir-126; mir-1280; mir-133a; mir-133b; mir-141; mir-143; mir-144; mir-145; mir-155; mir-16; mir-18a; mir-192; mir-195; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-203; mir-205; mir-214; mir-218; mir-23b; mir-26a; mir-29c; mir-320c; mir-34a; mir-370; mir-409-3p; mir-429; mir-451; mir-490-5p; mir-493; mir-576-3p; mir-99a Мозг (астроцитома, глиобластома, глиома) let-7g-5p; mir-100; mir-101; mir-106a; mir-124; mir-124a; mir-125a; mir-125a-5p; mir-125b; mir-127-3p; mir-128; mir-129; mir-136; mir-137; mir-139-5p; mir-142-3p; mir-143; mir-145; mir-146b-5p; mir-149; mir-152; mir-153; mir-195; mir-21; mir-212-3p; mir-219-5p; mir-222; mir-29b; mir-31; mir-3189-3p; mir-320; mir-320a; mir-326; mir-330; mir-331-3p; mir-340; mir-342; mir-34a; mir-376a; mir-449a; mir-483-5p; mir-503; mir-577; mir-663; mir-7; mir-7-5p; mir-873; let-7a; let-7f; mir-107; mir-122; mir-124-5p; mir-139; mir-146a; mir-146b; mir-15b; mir-16; mir-181a; mir-181a-1; mir-181a-2; mir-181b; mir-181b-1; mir-181b-2; mir-181c; mir-181d; mir-184; mir-185; mir-199a-3p; mir-200a; mir-200b; mir-203; mir-204; mir-205; mir-218; mir-23b; mir-26b; mir-27a; mir-29c; mir-328; mir-34c-3p; mir-34c-5p; mir-375; mir-383; mir-451; mir-452; mir-495; mir-584; mir-622; mir-656; mir-98; mir-124-3p; mir-181b-5p; mir-200b; mir-3189-3p Молочные железы mir-193b; let-7a; let-7a-1; let-7a-2; let-7a-3; let-7b; let-7c; let-7d; let-7e; let-7f-1; let-7f-2; let-7g; let-7i; mir-100; mir-107; mir-10a; mir-10b; mir-122; mir-124; mir-1258; mir-125a-5p; mir-125b; mir-126; mir-127; mir-129; mir-130a; mir-132; mir-133a; mir-143; mir-145; mir-146a; mir-146b; mir-147; mir-148a; mir-149; mir-152; mir-153; mir-15a; mir-16; mir-17-5p; mir-181a; mir-1826; mir-183; mir-185; mir-191; mir-193a-3p; mir-195; mir-199b-5p; mir-19a-3p; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-205; mir-206; mir-211; mir-216b; mir-218; mir-22; mir-26a; mir-26b; mir-300; mir-30a; mir-31; mir-335; mir-339-5p; mir-33b; mir-34a; mir-34b; mir-34c; mir-374a; mir-379; mir-381; mir-383; mir-425; mir-429; mir-450b-3p; mir-494; mir-495; mir-497; mir-502-5p; mir-517a; mir-574-3p; mir-638; mir-7; mir-720; mir-873; mir-874; mir-92a; mir-98; mir-99a; mmu-mir-290-3p; mmu-mir-290-5p Шейка матки mir-143; mir-145; mir-17-5p; mir-203; mir-214; mir-218; mir-335; mir-342-3p; mir-372; mir-424; mir-491-5p; mir-497; mir-7; mir-99a; mir-99b; mir-100; mir-101; mir-15a; mir-16; mir-34a; mir-886-5p; mir-106a; mir-124; mir-148a; mir-29a; mir-375 Ободочная кишка/ободочная и прямая кишка let-7a-1; let-7a-2; let-7a-3; let-7b; let-7c; let-7d; let-7e; let-7f-1; let-7f-2; let-7g; let-7i; mir-100; mir-101; mir-126; mir-142-3p; mir-143; mir-145; mir-192; mir-200c; mir-21; mir-214; mir-215; mir-22; mir-25; mir-302a; mir-320; mir-320a; mir-34a; mir-34c; mir-365; mir-373; mir-424; mir-429; mir-455; mir-484; mir-502; mir-503; mir-93; mir-98; mir-186; mir-30a-5p; mir-627; let-7a; mir-1; mir-124; mir-125a; mir-129; mir-1295b-3p; mir-1307; mir-130b; mir-132; mir-133a; mir-133b; mir-137; mir-138; mir-139; mir-139-5p; mir-140-5p; mir-148a; mir-148b; mir-149; mir-150-5p; mir-154; mir-15a; mir-15b; mir-16; mir-18a; mir-191; mir-193a-5p; mir-194; mir-195; mir-196a; mir-198; mir-199a-5p; mir-203; mir-204-5p; mir-206; mir-212; mir-218; mir-224; mir-24-3p; mir-26b; mir-27a; mir-28-3p; mir-28-5p; mir-29b; mir-30a-3p; mir-30b; mir-328; mir-338-3p; mir-342; mir-345; mir-34a-5p; mir-361-5p; mir-375; mir-378; mir-378a-3p; mir-378a-5p; mir-409-3p; mir-422a; mir-4487; mir-483; mir-497; mir-498; mir-518a-3p; mir-551a; mir-574-5p; mir-625; mir-638; mir-7; mir-96-5p; mir-202-3p; mir-30a; mir-451 Эндометриальный mir-101; mir-130a; mir-130b; mir-134; mir-143; mir-145; mir-152; mir-205; mir-223; mir-301a; mir-301b; mir-30c; mir-34a; mir-34c; mir-424; mir-449a; mir-543; mir-34b Гематологический (лейкоз, лимфома, миелома) mir-125b; mir-138; mir-15a; mir-15b; mir-16; mir-16-1; mir-16-1-3p; mir-16-2; mir-181a; mir-181b; mir-195; mir-223; mir-29b; mir-34b; mir-34c; mir-424; mir-10a; mir-146a; mir-150; mir-151; mir-155; mir-2278; mir-26a; mir-30e; mir-31; mir-326; mir-564; mir-27a; let-7b; mir-124a; mir-142-3p; let-7c; mir-17; mir-20a; mir-29a; mir-30c; mir-720; mir-107; mir-342; mir-34a; mir-202; mir-142-5p; mir-29c; mir-145; mir-193b; mir-199a; mir-214; mir-22; mir-137; mir-197 Почка mir-1; mir-145; mir-1826; mir-199a; mir-199a-3p; mir-203; mir-205; mir-497; mir-508-3p; mir-509-3p; let-7a; let-7d; mir-106a*; mir-126; mir-1285; mir-129-3p; mir-1291; mir-133a; mir-135a; mir-138; mir-141; mir-143; mir-182-5p; mir-200a; mir-218; mir-28-5p; mir-30a; mir-30c; mir-30d; mir-34a; mir-378; mir-429; mir-509-5p; mir-646; mir-133b; let-7b; let-7c; mir-200c; mir-204; mir-335; mir-377; mir-506 Печень (Гепатоцеллюлярная карцинома) mir-137; mir-138; mir-139; mir-139-5p; mir-140-5p; mir-141; mir-142-3p; mir-143; mir-144; mir-145; mir-146a; mir-148a; mir-148b; mir-150-5p; mir-15b; mir-16; mir-181a-5p; mir-185; mir-188-5p; mir-193b; mir-195; mir-195-5p; mir-197; mir-198; mir-199a; mir-199a-5p; mir-199b; mir-199b-5p; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-202; mir-203; mir-204-3p; mir-205; mir-206; mir-20a; mir-21; mir-21-3p; mir-211; mir-212; mir-214; mir-217; mir-218; mir-219-5p; mir-22; mir-223; mir-26a; mir-26b; mir-29a; mir-29b-1; mir-29b-2; mir-29c; mir-302b; mir-302c; mir-30a; mir-30a-3p; mir-335; mir-338-3p; mir-33a; mir-34a; mir-34b; mir-365; mir-370; mir-372; mir-375; mir-376a; mir-377; mir-422a; mir-424; mir-424-5p; mir-433; mir-4458; mir-448; mir-450a; mir-451; mir-485-5p; mir-486-5p; mir-497; mir-503; mir-506; mir-519d; mir-520a; mir-520b; mir-520c-3p; mir-582-5p; mir-590-5p; mir-610; mir-612; mir-625; mir-637; mir-675; mir-7; mir-877; mir-940; mir-941; mir-98; mir-99a; mir-132; mir-31 Легкое mir-1297; mir-141; mir-145; mir-16; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-29b; mir-381; mir-409-3p; mir-429; mir-451; mir-511; mir-99a; let-7a-1; let-7a-2; let-7a-3; let-7b; let-7c; let-7d; let-7e; let-7f-1; let-7f-2; let-7g; let-7i; mir-1; mir-101; mir-133b; mir-138; mir-142-5p; mir-144; mir-1469; mir-146a; mir-153; mir-15a; mir-15b; mir-16-1; mir-16-2; mir-182; mir-192; mir-193a-3p; mir-194; mir-195; mir-198; mir-203; mir-217; mir-218; mir-22; mir-223; mir-26a; mir-26b; mir-29c; mir-33a; mir-34a; mir-34b; mir-34c; mir-365; mir-449a; mir-449b; mir-486-5p; mir-545; mir-610; mir-614; mir-630; mir-660; mir-7515; mir-9500; mir-98; mir-99b; mir-133a; let-7a; mir-100; mir-106a; mir-107; mir-124; mir-125a-3p; mir-125a-5p; mir-126; mir-126*; mir-129; mir-137; mir-140; mir-143; mir-146b; mir-148a; mir-148b; mir-149; mir-152; mir-154; mir-155; mir-17-5p; mir-181a-1; mir-181a-2; mir-181b; mir-181b-1; mir-181b-2; mir-181c; mir-181d; mir-184; mir-186; mir-193b; mir-199a; mir-204; mir-212; mir-221; mir-224; mir-27a; mir-27b; mir-29a; mir-30a; mir-30b; mir-30c; mir-30d; mir-30d-5p; mir-30e-5p; mir-32; mir-335; mir-338-3p; mir-340; mir-342-3p; mir-361-3p; mir-373; mir-375; mir-4500; mir-4782-3p; mir-497; mir-503; mir-512-3p; mir-520a-3p; mir-526b; mir-625*; mir-96 Меланома let-7b; mir-101; mir-125b; mir-1280; mir-143; mir-146a; mir-146b; mir-155; mir-17; mir-184; mir-185; mir-18b; mir-193b; mir-200c; mir-203; mir-204; mir-205; mir-206; mir-20a; mir-211; mir-218; mir-26a; mir-31; mir-33a; mir-34a; mir-34c; mir-376a; mir-376c; mir-573; mir-7-5p; mir-9; mir-98 Рак полости рта let-7d; mir-218; mir-34a; mir-375; mir-494; mir-100; mir-124; mir-1250; mir-125b; mir-126; mir-1271; mir-136; mir-138; mir-145; mir-147; mir-148a; mir-181a; mir-206; mir-220a; mir-26a; mir-26b; mir-29a; mir-32; mir-323-5p; mir-329; mir-338; mir-370; mir-410; mir-429; mir-433; mir-499a-5p; mir-503; mir-506; mir-632; mir-646; mir-668; mir-877; mir-9 Яичники let-7i; mir-100; mir-124; mir-125b; mir-129-5p; mir-130b; mir-133a; mir-137; mir-138; mir-141; mir-145; mir-148a; mir-152; mir-153; mir-155; mir-199a; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-212; mir-335; mir-34a; mir-34b; mir-34c; mir-409-3p; mir-411; mir-429; mir-432; mir-449a; mir-494; mir-497; mir-498; mir-519d; mir-655; mir-9; mir-98; mir-101; mir-532-5p; mir-124a; mir-192; mir-193a; mir-7 Поджелудочная железа mir-101; mir-1181; mir-124; mir-1247; mir-133a; mir-141; mir-145; mir-146a; mir-148a; mir-148b; mir-150*; mir-150-5p; mir-152; mir-15a; mir-198; mir-203; mir-214; mir-216a; mir-29c; mir-335; mir-34a; mir-34b; mir-34c; mir-373; mir-375; mir-410; mir-497; mir-615-5p; mir-630; mir-96; mir-132; let-7a; let-7a-1; let-7a-2; let-7a-3; let-7b; let-7c; let-7d; let-7e; let-7f-1; let-7f-2; let-7g; let-7i; mir-126; mir-135a; mir-143; mir-144; mir-150; mir-16; mir-200a; mir-200b; mir-200c; mir-217; mir-218; mir-337; mir-494; mir-98 Предстательная железа let-7a-3p; let-7c; mir-100; mir-101; mir-105; mir-124; mir-128; mir-1296; mir-130b; mir-133a-1; mir-133a-2; mir-133b; mir-135a; mir-143; mir-145; mir-146a; mir-154; mir-15a; mir-187; mir-188-5p; mir-199b; mir-200b; mir-203; mir-205; mir-212; mir-218; mir-221; mir-224; mir-23a; mir-23b; mir-25; mir-26a; mir-26b; mir-29b; mir-302a; mir-30a; mir-30b; mir-30c-1; mir-30c-2; mir-30d; mir-30e; mir-31; mir-330; mir-331-3p; mir-34a; mir-34b; mir-34c; mir-374b; mir-449a; mir-4723-5p; mir-497; mir-628-5p; mir-642a-5p; mir-765; mir-940 Ретинобластома mir-101; mir-183; mir-204; mir-34a; mir-365b-3p; mir-486-3p; mir-532-5p

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Oncorus, Inc.

Finer, Mitchell H

Kennedy, Edward

Lerner, Lorena

Queva, Christophe

< 120> ОНКОЛИТИЧЕСКИЕ ВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

<130> ONCR-010/02WO 324865-2078

<150> 62/537 359

<151> 26.07.2017

<150> 62/686 802

<151> 19.06.2018

<160> 855

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 1

uggaguguga caaugguguu ug 22

<210> 2

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 2

uaaggcacgc ggugaaugcc 20

<210> 3

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 3

ucccugagac ccuuuaaccu guga 24

<210> 4

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 4

ucguaccgug aguaauaaug cg 22

<210> 5

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 5

ucggauccgu cugagcuugg cu 22

<210> 6

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 6

ucacagugaa ccggucucuu u 21

<210> 7

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 7

aagcccuuac cccaaaaagu au 22

<210> 8

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 8

cuuuuugcgg ucugggcuug c 21

<210> 9

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 9

cagugcaaug augaaagggc au 22

<210> 10

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 10

acucuuuccc uguugcacua c 21

<210> 11

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 11

uuuggucccc uucaaccagc ug 22

<210> 12

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 12

uuuggucccc uucaaccagc ua 22

<210> 13

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 13

ccugugggcc accuagucac caa 23

<210> 14

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 14

uuauugcuua agaauacgcg uag 23

<210> 15

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 15

uggaauguaa agaaguaugu au 22

<210> 16

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 16

ugagaugaag cacuguagcu c 21

<210> 17

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 17

ggauuccugg aaauacuguu cu 22

<210> 18

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 18

guccaguuuu cccaggaauc ccu 23

<210> 19

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 19

uggacggaga acugauaagg gu 22

<210> 20

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 20

acaguagucu gcacauuggu ua 22

<210> 21

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 21

cccaguguuc agacuaccug uuc 23

<210> 22

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 22

uucccuuugu cauccuaugc cu 22

<210> 23

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 23

auaagacgaa caaaagguuu gu 22

<210> 24

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 24

acagcaggca cagacaggca gu 22

<210> 25

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 25

uacugcauca ggaacugauu gga 23

<210> 26

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 26

ugauugucca aacgcaauuc u 21

<210> 27

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 27

ugucaguuug ucaaauaccc ca 22

<210> 28

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 28

uggcaguguc uuagcugguu gu 22

<210> 29

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 29

aaaccguuac cauuacugag uu 22

<210> 30

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 30

uaaaguaaau augcaccaaa a 21

<210> 31

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 31

ugagguagua gguuguauag uu 22

<210> 32

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 32

ucuuugguua ucuagcugua uga 23

<210> 33

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 33

ugagguagua gguugugugg uu 22

<210> 34

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 34

ugagguagua gguuguaugg uu 22

<210> 35

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 35

agagguagua gguugcauag uu 22

<210> 36

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 36

ugagguagga gguuguauag uu 22

<210> 37

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 37

ugagguagua gauuguauag uu 22

<210> 38

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 38

ugagguagua guuuguacag uu 22

<210> 39

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 39

ugagguagua guuugugcug uu 22

<210> 40

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 40

aacccguaga uccgaacuug ug 22

<210> 41

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 41

uacaguacug ugauaacuga a 21

<210> 42

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 42

agcagcauug uacagggcua uga 23

<210> 43

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 43

ucaaaugcuc agacuccugu ggu 23

<210> 44

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 44

aaaagugcuu acagugcagg uag 23

<210> 45

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 45

uaaagugcug acagugcaga u 21

<210> 46

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 46

agcagcauug uacagggcua uca 23

<210> 47

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 47

uacccuguag auccgaauuu gug 23

<210> 48

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 48

uacccuguag aaccgaauuu gug 23

<210> 49

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 49

uugcucacug uucuucccua g 21

<210> 50

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 50

uuuccggcuc gcgugggugu gu 22

<210> 51

<211> 27

<212> РНК

<213> Человек

<400> 51

cacuguaggu gauggugaga gugggca 27

<210> 52

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 52

auauacaggg ggagacucuu au 22

<210> 53

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 53

auauacaggg ggagacucuc au 22

<210> 54

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 54

agaggauacc cuuuguaugu u 21

<210> 55

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 55

gggaugguag accggugacg ugc 23

<210> 56

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 56

uaggacacau ggucuacuuc u 21

<210> 57

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 57

cuccugagcc auucugagcc uc 22

<210> 58

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 58

gugccagcug caguggggga g 21

<210> 59

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 59

cccggagcca ggaugcagcu c 21

<210> 60

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 60

ucguggccug gucuccauua u 21

<210> 61

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 61

ucugcagggu uugcuuugag 20

<210> 62

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 62

uguucaugua gauguuuaag c 21

<210> 63

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 63

ccccaccucc ucucuccuca g 21

<210> 64

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 64

gugaggacuc gggaggugg 19

<210> 65

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 65

ucaccagccc uguguucccu ag 22

<210> 66

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 66

ucacaccugc cucgcccccc 20

<210> 67

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 67

ugagcccugu ccucccgcag 20

<210> 68

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 68

ucggccugac cacccacccc ac 22

<210> 69

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 69

ccucuucccc uugucucucc ag 22

<210> 70

<211> 26

<212> РНК

<213> Человек

<400> 70

aaguaguugg uuuguaugag augguu 26

<210> 71

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 71

aagugaucua aaggccuaca u 21

<210> 72

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 72

ucagaugauc uaaaggccua ua 22

<210> 73

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 73

uaggccuuua gaucacuuaa a 21

<210> 74

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 74

aauggauuuu uggagcagg 19

<210> 75

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 75

acccgucccg uucguccccg ga 22

<210> 76

<211> 27

<212> РНК

<213> Человек

<400> 76

accuucuugu auaagcacug ugcuaaa 27

<210> 77

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 77

acgcccuucc cccccuucuu ca 22

<210> 78

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 78

aggagggagg agaugggcca aguu 24

<210> 79

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 79

acggugcugg auguggccuu u 21

<210> 80

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 80

agaaggaaau ugaauucauu ua 22

<210> 81

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 81

agagaagaag aucagccugc a 21

<210> 82

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 82

agccuggaag cuggagccug cagu 24

<210> 83

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 83

aggaugagca aagaaaguag auu 23

<210> 84

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 84

cggaugagca aagaaagugg uu 22

<210> 85

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 85

agugaaugau ggguucugac c 21

<210> 86

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 86

aguuaggauu aggucgugga a 21

<210> 87

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 87

acaggugagg uucuugggag cc 22

<210> 88

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 88

ucccugagac ccuaacuugu ga 22

<210> 89

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 89

aucccaccuc ugccacca 18

<210> 90

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 90

aucccaccac ugccaccau 19

<210> 91

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 91

auggauaagg cuuuggcuu 19

<210> 92

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 92

augggugaau uuguagaagg au 22

<210> 93

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 93

caagucuuau uugagcaccu guu 23

<210> 94

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 94

ccucagggcu guagaacagg gcu 23

<210> 95

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 95

cgggcguggu gguggggg 18

<210> 96

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 96

cgggcguggu ggugggggug 20

<210> 97

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 97

cuggacugag ccgugcuacu gg 22

<210> 98

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 98

cuggacugag ccaugcuacu gg 22

<210> 99

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 99

cuggagauau ggaagagcug ugu 23

<210> 100

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 100

agugccugcu augugccagg ca 22

<210> 101

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 101

cuuggcaccu agcaagcacu ca 22

<210> 102

<211> 26

<212> РНК

<213> Человек

<400> 102

gaugaugaug gcagcaaauu cugaaa 26

<210> 103

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 103

ggcgacaaaa cgagacccug uc 22

<210> 104

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 104

gugggggaga ggcuguc 17

<210> 105

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 105

cugaagcuca gagggcucug au 22

<210> 106

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 106

uaaagagccc uguggagaca 20

<210> 107

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 107

uacguagaua uauauguauu uu 22

<210> 108

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 108

uaguacugug cauaucaucu au 22

<210> 109

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 109

ucauauugcu ucuuucu 17

<210> 110

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 110

ucgccuccuc cucuccc 17

<210> 111

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 111

cggggccgua gcacugucug aga 23

<210> 112

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 112

gggggccgau acacuguacg aga 23

<210> 113

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 113

ucuacaaagg aaagcgcuuu cu 22

<210> 114

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 114

ucugggcaac aaagugagac cu 22

<210> 115

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 115

gaucucacuu uguugcccag g 21

<210> 116

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 116

ugcaggacca agaugagccc u 21

<210> 117

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 117

cucuagccac agaugcagug au 22

<210> 118

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 118

ugcuggauca gugguucgag uc 22

<210> 119

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 119

uggacugccc ugaucuggag a 21

<210> 120

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 120

uggaguccag gaaucugcau uuu 23

<210> 121

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 121

uggauuuuug gaucaggga 19

<210> 122

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 122

uggcccugac ugaagaccag cagu 24

<210> 123

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 123

aagcccuuac cccaaaaagc au 22

<210> 124

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 124

uggguggucu ggagauuugu gc 22

<210> 125

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 125

uuaggccgca gaucugggug a 21

<210> 126

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 126

gaguggggcu ucgacccuaa cc 22

<210> 127

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 127

uuagggcccu ggcuccaucu cc 22

<210> 128

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 128

uucaaguaau ucaggug 17

<210> 129

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 129

uucauucggc uguccagaug ua 22

<210> 130

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 130

uucuggaauu cugugugagg ga 22

<210> 131

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 131

uugcagcugc cugggaguga cuuc 24

<210> 132

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 132

uugggacaua cuuaugcuaa a 21

<210> 133

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 133

uuuagagacg gggucuugcu cu 22

<210> 134

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 134

ucucacugua gccucgaacc cc 22

<210> 135

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 135

uuugaggcua cagugagaug ug 22

<210> 136

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 136

uuuucaacuc uaaugggaga ga 22

<210> 137

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 137

acguuggcuc ugguggug 18

<210> 138

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 138

ccaccucccc ugcaaacguc ca 22

<210> 139

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 139

acucggcgug gcgucggucg ug 22

<210> 140

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 140

ucgaccggac cucgaccggc u 21

<210> 141

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 141

cagugcaaug uuaaaagggc au 22

<210> 142

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 142

cagugcaaug augaaagggc au 22

<210> 143

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 143

gaugaugcug cugaugcug 19

<210> 144

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 144

ucaaaacuga ggggcauuuu cu 22

<210> 145

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 145

uaacagucua cagccauggu cg 22

<210> 146

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 146

agcugguaaa auggaaccaa au 22

<210> 147

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 147

ugugacuggu ugaccagagg gg 22

<210> 148

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 148

uauggcuuuu uauuccuaug uga 23

<210> 149

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 149

uauggcuuuu cauuccuaug uga 23

<210> 150

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 150

acuccauuug uuuugaugau gga 23

<210> 151

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 151

agcugguguu gugaaucagg ccg 23

<210> 152

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 152

uggagacgcg gcccuguugg agu 23

<210> 153

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 153

ucuacagugc acgugucucc agu 23

<210> 154

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 154

uaccacaggg uagaaccacg g 21

<210> 155

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 155

cagugguuuu acccuauggu ag 22

<210> 156

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 156

uaacacuguc ugguaaagau gg 22

<210> 157

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 157

uguaguguuu ccuacuuuau gga 23

<210> 158

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 158

cauaaaguag aaagcacuac u 21

<210> 159

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 159

uacaguauag augauguacu 20

<210> 160

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 160

cucggcgcgg ggcgcgggcu cc 22

<210> 161

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 161

ugagaacuga auuccauggg uu 22

<210> 162

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 162

ugcccugugg acucaguucu gg 22

<210> 163

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 163

ugagaacuga auuccauagg cu 22

<210> 164

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 164

guguguggaa augcuucugc 20

<210> 165

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 165

gugugcggaa augcuucugc ua 22

<210> 166

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 166

ucagugcacu acagaacuuu gu 22

<210> 167

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 167

ucagugcauc acagaacuuu gu 22

<210> 168

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 168

ucuggcuccg ugucuucacu ccc 23

<210> 169

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 169

ucucccaacc cuuguaccag ug 22

<210> 170

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 170

cuagacugaa gcuccuugag g 21

<210> 171

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 171

ucgaggagcu cacagucuag u 21

<210> 172

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 172

ucgaggagcu cacagucu 18

<210> 173

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 173

ucagugcaug acagaacuug g 21

<210> 174

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 174

agguucugug auacacuccg acu 23

<210> 175

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 175

uugcauaguc acaaaaguga uc 22

<210> 176

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 176

aaaaccgucu aguuacaguu gu 22

<210> 177

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 177

uagguuaucc guguugccuu cg 22

<210> 178

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 178

uuaaugcuaa ucgugauagg ggu 23

<210> 179

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 179

uagcagcaca uaaugguuug ug 22

<210> 180

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 180

uagcagcaca ucaugguuua ca 22

<210> 181

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 181

acauacuucu uuauaugccc au 22

<210> 182

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 182

uagcagcacg uaaauauugg cg 22

<210> 183

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 183

accacugacc guugacugua cc 22

<210> 184

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 184

accaucgacc guugauugua cc 22

<210> 185

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 185

aacauucaac gcugucggug agu 23

<210> 186

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 186

cucacugauc aaugaaugca 20

<210> 187

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 187

aacauucauu gcugucggug ggu 23

<210> 188

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 188

aacauucaac cugucgguga gu 22

<210> 189

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 189

ccaccggggg augaauguca c 21

<210> 190

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 190

ugguucuaga cuugccaacu a 21

<210> 191

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 191

uuuggcaaug guagaacuca cacu 24

<210> 192

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 192

ugaggcagua gauugaau 18

<210> 193

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 193

uauggcacug guagaauuca cu 22

<210> 194

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 194

uggagagaaa ggcaguuccu ga 22

<210> 195

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 195

caaagaauuc uccuuuuggg cu 22

<210> 196

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 196

ucgugucuug uguugcagcc gg 22

<210> 197

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 197

cucccacaug caggguuugc a 21

<210> 198

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 198

caucccuugc augguggagg g 21

<210> 199

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 199

uaaggugcau cuagugcaga uag 23

<210> 200

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 200

uaaggugcau cuagugcagu uag 23

<210> 201

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 201

ccggccgccg gcuccgcccc g 21

<210> 202

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 202

cggcggggac ggcgauuggu c 21

<210> 203

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 203

cgcaggggcc gggugcucac cg 22

<210> 204

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 204

cuauauauca aacauauucc u 21

<210> 205

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 205

ugauauguuu gauauauuag gu 22

<210> 206

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 206

ugauauguuu gauauugggu u 21

<210> 207

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 207

gaggcagaag caggaugaca 20

<210> 208

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 208

ccaguccugu gccugccgcc u 21

<210> 209

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 209

ccccagggcg acgcggcggg 20

<210> 210

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 210

caacggaauc ccaaaagcag cug 23

<210> 211

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 211

cugaccuaug aauugacagc c 21

<210> 212

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 212

aacuggccua caaaguccca gu 22

<210> 213

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 213

ugggucuuug cgggcgagau ga 22

<210> 214

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 214

aacuggcccu caaagucccg cu 22

<210> 215

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 215

uguaacagca acuccaugug ga 22

<210> 216

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 216

uagcagcaca gaaauauugg c 21

<210> 217

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 217

cggcaacaag aaacugccug ag 22

<210> 218

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 218

uagguaguuu cauguuguug gg 22

<210> 219

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 219

uagguaguuu ccuguuguug gg 22

<210> 220

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 220

ucaggccagg cacaguggcu ca 22

<210> 221

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 221

accgugcaaa gguagcaua 19

<210> 222

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 222

uucaccaccu ucuccaccca gc 22

<210> 223

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 223

cggguagaga gggcaguggg agg 23

<210> 224

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 224

ccuccugccc uccuugcugu 20

<210> 225

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 225

gguccagagg ggagauaggu uc 22

<210> 226

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 226

cccaguguuu agacuaucug uuc 23

<210> 227

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 227

ugugcaaauc uaugcaaaac uga 23

<210> 228

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 228

ugugcaaauc caugcaaaac uga 23

<210> 229

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 229

uaacacuguc ugguaacgau gu 22

<210> 230

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 230

uaauacugcc ugguaaugau ga 22

<210> 231

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 231

uaauacugcc ggguaaugau gga 23

<210> 232

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 232

agagguauag ggcaugggaa 20

<210> 233

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 233

gugaaauguu uaggaccacu ag 22

<210> 234

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 234

agugguucuu aacaguucaa caguu 25

<210> 235

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 235

guguuaauua aaccucuauu uac 23

<210> 236

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 236

uccuucauuc caccggaguc ug 22

<210> 237

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 237

uggaauguaa ggaagugugu gg 22

<210> 238

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 238

auaagacgag caaaaagcuu gu 22

<210> 239

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 239

aagcuuuuug cucgaauuau gu 22

<210> 240

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 240

uaaagugcuu auagugcagg uag 23

<210> 241

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 241

cugugcgugu gacagcggcu ga 22

<210> 242

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 242

agccccugcc caccgcacac ug 22

<210> 243

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 243

uuggggaaac ggccgcugag ug 22

<210> 244

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 244

auuugugcuu ggcucuguca c 21

<210> 245

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 245

gcagggacag caaaggggug c 21

<210> 246

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 246

uucccuuugu cauccuucgc cu 22

<210> 247

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 247

gguucuuagc auaggagguc u 21

<210> 248

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 248

uguucucuuu gccaaggaca g 21

<210> 249

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 249

uaacagucuc cagucacggc c 21

<210> 250

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 250

augaccuaug aauugacaga c 21

<210> 251

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 251

uagcuuauca gacugauguu ga 22

<210> 252

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 252

uaaucucagc uggcaacugu ga 22

<210> 253

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 253

aaaucucugc aggcaaaugu ga 22

<210> 254

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 254

uugugcuuga ucuaaccaug u 21

<210> 255

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 255

agaguugagu cuggacgucc cg 22

<210> 256

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 256

agaauugugg cuggacaucu gu 22

<210> 257

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 257

agaauugcgu uuggacaauc agu 23

<210> 258

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 258

agcuacauug ucugcugggu uuc 23

<210> 259

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 259

accuggcaua caauguagau uu 22

<210> 260

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 260

agcuacaucu ggcuacuggg u 21

<210> 261

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 261

aagcugccag uugaagaacu gu 22

<210> 262

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 262

caagucacua gugguuccgu u 21

<210> 263

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 263

gagagcagug uguguugccu gg 22

<210> 264

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 264

aucacauugc cagggauuuc c 21

<210> 265

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 265

aucacauugc cagggauuac c 21

<210> 266

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 266

aucacauugc cagugauuac cc 22

<210> 267

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 267

uggcucaguu cagcaggaac ag 22

<210> 268

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 268

cauugcacuu gucucggucu ga 22

<210> 269

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 269

aggcggagac uugggcaauu g 21

<210> 270

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 270

caggcaguga cuguucagac guc 23

<210> 271

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 271

uucaaguaau ccaggauagg cu 22

<210> 272

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 272

uucaaguaau ucaggauagg u 21

<210> 273

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 273

uucacagugg cuaaguuccg c 21

<210> 274

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 274

uucacagugg cuaaguucug c 21

<210> 275

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 275

cacuagauug ugagcuccug ga 22

<210> 276

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 276

aaggagcuca cagucuauug ag 22

<210> 277

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 277

gaggguuggg uggaggcucu cc 22

<210> 278

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 278

agggcccccc cucaauccug u 21

<210> 279

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 279

auguaugugu gcaugugcau g 21

<210> 280

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 280

agcagaagca gggagguucu ccca 24

<210> 281

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 281

uaugugggau gguaaaccgc uu 22

<210> 282

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 282

ugguuuaccg ucccacauac au 22

<210> 283

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 283

uagcaccauc ugaaaucggu ua 22

<210> 284

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 284

uagcaccauu ugaaaucagu guu 23

<210> 285

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 285

uagcaccauu ugaaaucggu ua 22

<210> 286

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 286

uauacaaggg cagacucucu cu 22

<210> 287

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 287

cagugcaaua guauugucaa agc 23

<210> 288

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 288

gcucugacuu uauugcacua cu 22

<210> 289

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 289

cagugcaaug auauugucaa agc 23

<210> 290

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 290

gcucugacga gguugcacua cu 22

<210> 291

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 291

uaagugcuuc cauguuuugg uga 23

<210> 292

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 292

acuuaaacgu ggauguacuu gcu 23

<210> 293

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 293

uaagugcuuc cauguuuuag uag 23

<210> 294

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 294

uaagugcuuc cauguuucag ugg 23

<210> 295

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 295

uaagugcuuc cauguuugag ugu 23

<210> 296

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 296

uaagugcuuc caugcuu 17

<210> 297

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 297

uaauugcuuc cauguuu 17

<210> 298

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 298

ucagcaccag gauauuguug gag 23

<210> 299

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 299

ucaacaaaau cacugaugcu gga 23

<210> 300

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 300

gauaucagcu caguaggcac cg 22

<210> 301

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 301

cuuucagucg gauguuugca gc 22

<210> 302

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 302

uguaaacauc cucgacugga ag 22

<210> 303

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 303

uguaaacauc cuacacucag cu 22

<210> 304

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 304

uguaaacauc cuacacucuc agc 23

<210> 305

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 305

uguaaacauc cccgacugga ag 22

<210> 306

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 306

cuuucagucg gauguuuaca gc 22

<210> 307

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 307

uguaaacauc cuugacugga ag 22

<210> 308

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 308

aucagggcuu guggaauggg aag 23

<210> 309

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 309

gcugcaccgg agacugggua a 21

<210> 310

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 310

ucgaggacug guggaagggc cuu 23

<210> 311

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 311

cugacugaau agguaggguc auu 23

<210> 312

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 312

agcuuuuggg aauucaggua gu 22

<210> 313

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 313

accugaauua ccaaaagcuu u 21

<210> 314

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 314

auauaccugu ucggucucuu ua 22

<210> 315

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 315

aggggaccaa agagauauau ag 22

<210> 316

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 316

gguugggcag ugaggagggu guga 24

<210> 317

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 317

ugaggagauc gucgagguug g 21

<210> 318

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 318

gguggggcaa ugggaucagg u 21

<210> 319

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 319

aagggcuucc ucucugcagg ac 22

<210> 320

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 320

aggcaagaug cuggcauagc u 21

<210> 321

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 321

cugauaagaa cagaggccca gau 23

<210> 322

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 322

ugugacuuua agggaaaugg cg 22

<210> 323

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 323

gaguucuaca gucagac 17

<210> 324

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 324

agaaggggug aaauuuaaac gu 22

<210> 325

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 325

uggggcggag cuuccggag 19

<210> 326

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 326

uggggcggag cuuccggagg cc 22

<210> 327

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 327

cuuccagacg cuccgcccca cgucg 25

<210> 328

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 328

gcuucuguag uguaguc 17

<210> 329

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 329

agaagaaggc ggucggucug cgg 23

<210> 330

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 330

uguggaaggu agacggccag aga 23

<210> 331

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 331

ucugggaggu uguagcagug gaa 23

<210> 332

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 332

cgcgccgggc ccggguu 17

<210> 333

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 333

cggggcggca ggggccuc 18

<210> 334

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 334

uggaagggag aagagcuuua au 22

<210> 335

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 335

aaaagcuggg uugagagggc ga 22

<210> 336

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 336

aaaagcuggg uugagagggc aa 22

<210> 337

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 337

aaaagcuggg uugagagggu 20

<210> 338

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 338

aaaagcuggg uugagagga 19

<210> 339

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 339

aaagcugggu ugagaagg 18

<210> 340

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 340

cacauuacac ggucgaccuc u 21

<210> 341

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 341

aggugguccg uggcgcguuc gc 22

<210> 342

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 342

cccaauacac ggucgaccuc uu 22

<210> 343

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 343

agguuguccg uggugaguuc gca 23

<210> 344

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 344

acugccccag gugcugcugg 20

<210> 345

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 345

cgcauccccu agggcauugg ugu 23

<210> 346

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 346

ccuaguaggu guccaguaag ugu 23

<210> 347

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 347

uauugcacau uacuaaguug ca 22

<210> 348

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 348

ccucugggcc cuuccuccag 20

<210> 349

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 349

cuggcccucu cugcccuucc gu 22

<210> 350

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 350

gggggggcag gaggggcuca ggg 23

<210> 351

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 351

aacacaccug guuaaccucu uu 22

<210> 352

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 352

gagguuuucu ggguuucugu uuc 23

<210> 353

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 353

gcaaagcaca cggccugcag aga 23

<210> 354

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 354

ucucugggcc ugugucuuag gc 22

<210> 355

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 355

gccccugggc cuauccuaga a 21

<210> 356

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 356

cuagguaugg ucccagggau cc 22

<210> 357

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 357

ucaagagcaa uaacgaaaaa ugu 23

<210> 358

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 358

cuccuauaug augccuuucu uc 22

<210> 359

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 359

gaacggcuuc auacaggagu u 21

<210> 360

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 360

aacaauaucc uggugcugag ug 22

<210> 361

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 361

ugagcgccuc gacgacagag ccg 23

<210> 362

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 362

ucccuguccu ccaggagcuc acg 23

<210> 363

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 363

gugcauugua guugcauugc a 21

<210> 364

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 364

gugcauugcu guugcauugc 20

<210> 365

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 365

uuauaaagca augagacuga uu 22

<210> 366

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 366

ucucacacag aaaucgcacc cgu 23

<210> 367

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 367

aggggugcua ucugugauug a 21

<210> 368

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 368

gcccugaacg aggggucugg ag 22

<210> 369

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 369

gcugacuccu aguccagggc uc 22

<210> 370

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 370

ugucugcccg caugccugcc ucu 23

<210> 371

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 371

caaucacuaa cuccacugcc au 22

<210> 372

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 372

aaucacuaac cacacggcca gg 22

<210> 373

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 373

aggcagugua guuagcugau ugc 23

<210> 374

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 374

ccuccguguu accuguccuc uag 23

<210> 375

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 375

ugaggaugga uagcaaggaa gcc 23

<210> 376

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 376

acaaaaaaaa aagcccaacc cuuc 24

<210> 377

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 377

uguuguacuu uuuuuuuugu uc 22

<210> 378

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 378

ucccccaggu gugauucuga uuu 23

<210> 379

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 379

uagccuucag aucuuggugu uuu 23

<210> 380

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 380

ccacuuggau cugaaggcug ccc 23

<210> 381

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 381

ucucucggcu ccucgcggcu c 21

<210> 382

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 382

uuaucagaau cuccaggggu ac 22

<210> 383

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 383

aacacaccua uucaaggauu ca 22

<210> 384

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 384

aauccuugga accuaggugu gagu 24

<210> 385

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 385

aauugcacgg uauccaucug ua 22

<210> 386

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 386

cggguggauc acgaugcaau uu 22

<210> 387

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 387

uaaugccccu aaaaauccuu au 22

<210> 388

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 388

agggacuuuc aggggcagcu gu 22

<210> 389

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 389

aauugcacuu uagcaauggu ga 22

<210> 390

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 390

accuggaccc agcguagaca aag 23

<210> 391

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 391

aauaauacau gguugaucuu u 21

<210> 392

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 392

agaucgaccg uguuauauuc gc 22

<210> 393

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 393

gccugcuggg guggaaccug gu 22

<210> 394

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 394

caggucacgu cucugcaguu ac 22

<210> 395

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 395

acucaaacug ugggggcacu 20

<210> 396

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 396

acucaaaaga uggcggcacu uu 22

<210> 397

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 397

aaagugcugc gacauuugag cgu 23

<210> 398

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 398

gaagugcuuc gauuuugggg ugu 23

<210> 399

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 399

cuuaucagau uguauuguaa uu 22

<210> 400

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 400

uuauaauaca accugauaag ug 22

<210> 401

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 401

auauaauaca accugcuaag ug 22

<210> 402

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 402

auaauacaac cugcuaagug cu 22

<210> 403

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 403

uuuguucguu cggcucgcgu ga 22

<210> 404

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 404

gguagauuuu ccuucuaugg u 21

<210> 405

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 405

aucauagagg aaaauccacg u 21

<210> 406

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 406

aucauagagg aaaauccaug uu 22

<210> 407

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 407

aacauagagg aaauuccacg u 21

<210> 408

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 408

gguggauauu ccuucuaugu u 21

<210> 409

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 409

aucacacaaa ggcaacuuuu gu 22

<210> 410

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 410

acuggacuug gaggcagaa 19

<210> 411

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 411

acuggacuug gagucagaag agugg 25

<210> 412

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 412

acuggacuug gagucagaaa 20

<210> 413

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 413

acuggacuug gagucagga 19

<210> 414

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 414

acuggacuug gagccagaag 20

<210> 415

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 415

acugggcuug gagucagaag 20

<210> 416

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 416

acuggacuug gugucagaug g 21

<210> 417

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 417

acuggacuag gagucagaag g 21

<210> 418

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 418

ugguagacua uggaacguag g 21

<210> 419

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 419

uauguaauau gguccacauc uu 22

<210> 420

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 420

uauacaaggg caagcucucu gu 22

<210> 421

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 421

agcgagguug cccuuuguau au 22

<210> 422

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 422

aaucauucac ggacaacacu u 21

<210> 423

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 423

gaaguuguuc gugguggauu cg 22

<210> 424

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 424

agaucagaag gugauugugg cu 22

<210> 425

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 425

auuccuagaa auuguucaua 20

<210> 426

<211> 26

<212> РНК

<213> Человек

<400> 426

aagaggaaga aauggcuggu ucucag 26

<210> 427

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 427

acagggccgc agauggagac u 21

<210> 428

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 428

ggaggaaccu uggagcuucg gc 22

<210> 429

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 429

ucaggugugg aaacugaggc ag 22

<210> 430

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 430

gaauguugcu cggugaaccc cu 22

<210> 431

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 431

agguuacccg agcaacuuug cau 23

<210> 432

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 432

aauauaacac agauggccug u 21

<210> 433

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 433

uaguagaccg uauagcguac g 21

<210> 434

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 434

acuucaccug guccacuagc cgu 23

<210> 435

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 435

aucaacagac auuaauuggg cgc 23

<210> 436

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 436

acuggacuua gggucagaag gc 22

<210> 437

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 437

agcucggucu gaggccccuc agu 23

<210> 438

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 438

ugaggggcag agagcgagac uuu 23

<210> 439

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 439

cagcagcaau ucauguuuug aa 22

<210> 440

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 440

aaugacacga ucacucccgu uga 23

<210> 441

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 441

gggcucacau caccccau 18

<210> 442

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 442

accccacucc ugguacc 17

<210> 443

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 443

uaauacuguc ugguaaaacc gu 22

<210> 444

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 444

ugucuugcag gccgucaugc a 21

<210> 445

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 445

ucuuggagua ggucauuggg ugg 23

<210> 446

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 446

aucaugaugg gcuccucggu gu 22

<210> 447

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 447

uacggugagc cugucauuau uc 22

<210> 448

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 448

accugucugu ggaaaggagc ua 22

<210> 449

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 449

uguugggauu cagcaggacc au 22

<210> 450

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 450

gcgacucuga aaacuagaag gu 22

<210> 451

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 451

auggccagag cucacacaga gg 22

<210> 452

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 452

uuggaggcgu ggguuuu 17

<210> 453

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 453

ggcuccuugg ucuaggggua 20

<210> 454

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 454

ugguagagcu gaggaca 17

<210> 455

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 455

ggauccgagu cacggcacca 20

<210> 456

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 456

agggugugug uguuuuu 17

<210> 457

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 457

agagguaggu guggaagaa 19

<210> 458

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 458

gauugagacu aguagggcua ggc 23

<210> 459

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 459

uugcauaugu aggauguccc au 22

<210> 460

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 460

uaacggccgc gguacccuaa 20

<210> 461

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 461

agggggcggg cuccggcg 18

<210> 462

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 462

uggcagugua uuguuagcug gu 22

<210> 463

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 463

aggcagugua uuguuagcug gc 22

<210> 464

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 464

uaggcagugu auugcuagcg gcugu 25

<210> 465

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 465

auugggaaca uuuugcaugu au 22

<210> 466

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 466

auuggggaca uuuugcauuc au 22

<210> 467

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 467

uuuugcgaug uguuccuaau au 22

<210> 468

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 468

uugggaucau uuugcaucca ua 22

<210> 469

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 469

uuuugcaaua uguuccugaa ua 22

<210> 470

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 470

gggagaaggg ucggggc 17

<210> 471

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 471

gcuaaggaag uccugugcuc ag 22

<210> 472

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 472

auagcagcau gaaccugucu ca 22

<210> 473

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 473

aacuguuugc agaggaaacu ga 22

<210> 474

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 474

auggagaagg cuucuga 17

<210> 475

<211> 17

<212> РНК

<213> Человек

<400> 475

ccccggggag cccggcg 17

<210> 476

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 476

ucgugcauau aucuaccaca u 21

<210> 477

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 477

ugugguagau auaugcacga u 21

<210> 478

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 478

uagugcaaua uugcuuauag ggu 23

<210> 479

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 479

gcaguccaug ggcauauaca c 21

<210> 480

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 480

uaugugccuu uggacuacau cg 22

<210> 481

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 481

gaagauggug cugugcugag gaa 23

<210> 482

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 482

agcccgcccc agccgagguu cu 22

<210> 483

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 483

gccccggcgc gggcggguuc ugg 23

<210> 484

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 484

cgggcugucc ggaggggucg gcu 23

<210> 485

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 485

uuucccuuca gagccuggcu uu 22

<210> 486

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 486

gaugcgccgc ccacugcccc gcgc 24

<210> 487

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 487

gcgggggugg cggcggcauc cc 22

<210> 488

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 488

cggugagcgc ucgcuggc 18

<210> 489

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 489

ucacuccucu ccucccgucu u 21

<210> 490

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 490

aagacgggag gaaagaaggg ag 22

<210> 491

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 491

ucaggcucag uccccucccg au 22

<210> 492

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 492

gucauacacg gcucuccucu cu 22

<210> 493

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 493

agaggcuggc cgugaugaau uc 22

<210> 494

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 494

cggggcagcu caguacagga u 21

<210> 495

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 495

aaucauacag ggacauccag uu 22

<210> 496

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 496

aaucguacag ggucauccac uu 22

<210> 497

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 497

gugguuaucc cuguccuguu cg 22

<210> 498

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 498

uugaaaggcu auuucuuggu c 21

<210> 499

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 499

gugacaucac auauacggca gc 22

<210> 500

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 500

caaccuggag gacuccaugc ug 22

<210> 501

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 501

ccauggaucu ccaggugggu 20

<210> 502

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 502

cuuaugcaag auucccuucu ac 22

<210> 503

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 503

aguggggaac ccuuccauga gg 22

<210> 504

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 504

aggaccugcg ggacaagauu cuu 23

<210> 505

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 505

ugaaggucua cugugugcca gg 22

<210> 506

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 506

ugaaacauac acgggaaacc uc 22

<210> 507

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 507

agguuguccg uguugucuuc ucu 23

<210> 508

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 508

aaacaaacau ggugcacuuc uu 22

<210> 509

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 509

gaaguugccc auguuauuuu cg 22

<210> 510

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 510

ugaguauuac auggccaauc uc 22

<210> 511

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 511

cagcagcaca cugugguuug u 21

<210> 512

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 512

uuucaagcca gggggcguuu uuc 23

<210> 513

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 513

aacaucacag caagucugug cu 22

<210> 514

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 514

uuaagacuug cagugauguu u 21

<210> 515

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 515

aacaucacug caagucuuaa ca 22

<210> 516

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 516

acagacuugc ugugauguuc a 21

<210> 517

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 517

uucugccucu guccaggucc uu 22

<210> 518

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 518

agggcuggac ucagcggcgg agcu 24

<210> 519

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 519

uaauccuugc uaccugggug aga 23

<210> 520

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 520

uuuugugucu cccauucccc ag 22

<210> 521

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 521

agggggaugg cagagcaaaa uu 22

<210> 522

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 522

aaugcacccg ggcaaggauu cu 22

<210> 523

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 523

aaugcaccug ggcaaggauu ca 22

<210> 524

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 524

auccuugcua ucugggugcu a 21

<210> 525

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 525

gggguauugu uuccgcugcc agg 23

<210> 526

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 526

uagcagcggg aacaguucug cag 23

<210> 527

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 527

gggagugcag ggcaggguuu c 21

<210> 528

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 528

agacccuggu cugcacucua uc 22

<210> 529

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 529

cgucaacacu ugcugguuuc cu 22

<210> 530

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 530

uaaggcaccc uucugaguag a 21

<210> 531

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 531

uauucaggaa gguguuacuu aa 22

<210> 532

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 532

uuuugcaccu uuuggaguga a 21

<210> 533

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 533

ugauuguagc cuuuuggagu aga 23

<210> 534

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 534

uacuccagag ggcgucacuc aug 23

<210> 535

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 535

uacugcagac guggcaauca ug 22

<210> 536

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 536

ugauugguac gucugugggu ag 22

<210> 537

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 537

uacugcagac aguggcaauc a 21

<210> 538

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 538

auugaaaccu cuaagagugg a 21

<210> 539

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 539

uacucaggag aguggcaauc ac 22

<210> 540

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 540

gugucuuuug cucugcaguc a 21

<210> 541

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 541

aagugcuguc auagcugagg uc 22

<210> 542

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 542

cacucagccu ugagggcacu uuc 23

<210> 543

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 543

uaaauuucac cuuucugaga agg 23

<210> 544

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 544

uucacaggga ggugucau 18

<210> 545

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 545

uucacaagga ggugucauuu au 22

<210> 546

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 546

uaaauuucac cuuucugaga aga 23

<210> 547

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 547

uucucaagga ggugucguuu au 22

<210> 548

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 548

auugacacuu cugugaguag a 21

<210> 549

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 549

uacucuggag agugacaauc aug 23

<210> 550

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 550

auugacaccu cugugagugg a 21

<210> 551

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 551

uucucaagag ggaggcaauc au 22

<210> 552

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 552

gagugccuuc uuuuggagcg uu 22

<210> 553

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 553

uucuccaaaa gaaagcacuu ucug 24

<210> 554

<211> 18

<212> РНК

<213> Человек

<400> 554

ugcuuccuuu cagagggu 18

<210> 555

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 555

uucucgagga aagaagcacu uuc 23

<210> 556

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 556

aucuggaggu aagaagcacu uu 22

<210> 557

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 557

aucgugcauc ccuuuagagu gu 22

<210> 558

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 558

aucgugcauc ccuuuagagu gu 22

<210> 559

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 559

aucgugcauc cuuuuagagu gu 22

<210> 560

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 560

caaagcgcuc cccuuuagag gu 22

<210> 561

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 561

caaagcgcuu cucuuuagag ugu 23

<210> 562

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 562

caaagcgcuu cccuuuggag c 21

<210> 563

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 563

aaagcgcuuc ccuucagagu g 21

<210> 564

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 564

gaaagcgcuu cucuuuagag g 21

<210> 565

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 565

ucauccucgu cucccuccca g 21

<210> 566

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 566

agggaagggg acgaggguug gg 22

<210> 567

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 567

aaagugcauc cuuuuagagg uu 22

<210> 568

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 568

cucuagaggg aagcgcuuuc ug 22

<210> 569

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 569

aaagugcauc uuuuuagagg au 22

<210> 570

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 570

caaagugccu cccuuuagag ug 22

<210> 571

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 571

aagugccucc uuuuagagug uu 22

<210> 572

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 572

aaagugcuuc ccuuuggacu gu 22

<210> 573

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 573

cuccagaggg aaguacuuuc u 21

<210> 574

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 574

aaagugcuuc cuuuuagagg g 21

<210> 575

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 575

aaagugcuuc cuuuuagagg gu 22

<210> 576

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 576

aaagugcuuc ucuuuggugg gu 22

<210> 577

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 577

cuacaaaggg aagcccuuuc 20

<210> 578

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 578

aaagugcuuc cuuuuugagg g 21

<210> 579

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 579

aagugcuucc uuuuagaggg uu 22

<210> 580

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 580

acaaagugcu ucccuuuaga gugu 24

<210> 581

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 581

acaaagugcu ucccuuuaga gu 22

<210> 582

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 582

aacgcacuuc ccuuuagagu gu 22

<210> 583

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 583

aaaaugguuc ccuuuagagu gu 22

<210> 584

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 584

gaacgcgcuu cccuauagag ggu 23

<210> 585

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 585

gaaggcgcuu cccuuuggag u 21

<210> 586

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 586

gaaggcgcuu cccuuuagag cg 22

<210> 587

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 587

cuccagaggg augcacuuuc u 21

<210> 588

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 588

cucuagaggg aagcacuuuc ug 22

<210> 589

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 589

cucuugaggg aagcacuuuc ugu 23

<210> 590

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 590

ccucccacac ccaaggcuug ca 22

<210> 591

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 591

caugccuuga guguaggacc gu 22

<210> 592

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 592

aucauacaag gacaauuucu uu 22

<210> 593

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 593

ggagaaauua uccuuggugu gu 22

<210> 594

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 594

uggugggcac agaaucugga cu 22

<210> 595

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 595

ugugacagau ugauaacuga aa 22

<210> 596

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 596

ucggggauca ucaugucacg aga 23

<210> 597

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 597

aaacauucgc ggugcacuuc uu 22

<210> 598

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 598

auucugcauu uuuagcaagu uc 22

<210> 599

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 599

ucagcaaaca uuuauugugu gc 22

<210> 600

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 600

caaaacuggc aauuacuuuu gc 22

<210> 601

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 601

aaaaguaauu gcgaguuuua cc 22

<210> 602

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 602

aaaaaccaca auuacuuuug cacca 25

<210> 603

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 603

gaaaacgaca augacuuuug ca 22

<210> 604

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 604

aaaagugauu gcaguguuug 20

<210> 605

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 605

aaagguaauu gcaguuuuuc cc 22

<210> 606

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 606

aaaaguaacu gcgguuuuug a 21

<210> 607

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 607

aacggcaaug acuuuuguac ca 22

<210> 608

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 608

uaaaacugca guuauuuuug c 21

<210> 609

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 609

aaaaguaauu gcaguuuuug c 21

<210> 610

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 610

caagaaccuc aguugcuuuu gu 22

<210> 611

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 611

aaaaguaauu gcgguuuuug cc 22

<210> 612

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 612

caaaaaccac aguuucuuuu gc 22

<210> 613

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 613

aaaaguaauu gugguuuuug cc 22

<210> 614

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 614

aaaaacugag acuacuuuug ca 22

<210> 615

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 615

caaaagcaau cgcgguuuuu gc 22

<210> 616

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 616

aaaacuguaa uuacuuuugu ac 22

<210> 617

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 617

aaaaguaauc gcgguuuuug uc 22

<210> 618

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 618

aaaaguaauu gcggauuuug cc 22

<210> 619

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 619

caaaaacugc auuacuuuug c 21

<210> 620

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 620

aaaaguaauu gcggucuuug gu 22

<210> 621

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 621

aaaaguacuu gcggauuuug cu 22

<210> 622

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 622

aaaaguauuu gcggguuuug uc 22

<210> 623

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 623

caaagguauu ugugguuuuu g 21

<210> 624

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 624

caaaaguaau uguggauuuu gu 22

<210> 625

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 625

ccaaaacugc aguuacuuuu gc 22

<210> 626

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 626

gcuggugcaa aaguaauggc gg 22

<210> 627

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 627

agcuacaguu acuuuugcac ca 22

<210> 628

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 628

aaaaguaauc acuguuuuug cc 22

<210> 629

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 629

caaaaaccgc aauuacuuuu gca 23

<210> 630

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 630

ugacaacuau ggaugagcuc u 21

<210> 631

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 631

agugccugag ggaguaagag ccc 23

<210> 632

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 632

gcgacccacu cuugguuucc a 21

<210> 633

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 633

gcgacccaua cuugguuuca g 21

<210> 634

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 634

aacaggugac ugguuagaca a 21

<210> 635

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 635

aaaacgguga gauuuuguuu u 21

<210> 636

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 636

gcuaguccug acucagccag u 21

<210> 637

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 637

aggguaagcu gaaccucuga u 21

<210> 638

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 638

auauuaccau uagcucaucu uu 22

<210> 639

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 639

gaugagcuca uuguaauaug ag 22

<210> 640

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 640

caaaguuuaa gauccuugaa gu 22

<210> 641

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 641

aucaaggauc uuaaacuuug cc 22

<210> 642

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 642

aaaguagcug uaccauuugc 20

<210> 643

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 643

agguugacau acguuuccc 19

<210> 644

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 644

aggcacggug ucagcaggc 19

<210> 645

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 645

gggcgccugu gaucccaac 19

<210> 646

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 646

aguauguucu uccaggacag aac 23

<210> 647

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 647

auguauaaau guauacacac 20

<210> 648

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 648

cgaaaacagc aauuaccuuu gc 22

<210> 649

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 649

ugaguuggcc aucugaguga g 21

<210> 650

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 650

guccgcucgg cgguggccca 20

<210> 651

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 651

cugaagugau guguaacuga ucag 24

<210> 652

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 652

cacgcucaug cacacaccca ca 22

<210> 653

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 653

ugagugugug ugugugagug ugu 23

<210> 654

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 654

gagccaguug gacaggagc 19

<210> 655

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 655

aagaugugga aaaauuggaa uc 22

<210> 656

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 656

auucuaauuu cuccacgucu uu 22

<210> 657

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 657

uagauaaaau auugguaccu g 21

<210> 658

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 658

cuucuugugc ucuaggauug u 21

<210> 659

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 659

uucauuuggu auaaaccgcg auu 23

<210> 660

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 660

ucgcgguuug ugccagauga cg 22

<210> 661

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 661

uugagaauga ugaaucauua gg 22

<210> 662

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 662

uaacugguug aacaacugaa cc 22

<210> 663

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 663

uuacaguugu ucaaccaguu acu 23

<210> 664

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 664

ucaguuccag gccaaccagg cu 22

<210> 665

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 665

uuaugguuug ccugggacug ag 22

<210> 666

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 666

ugggcguauc uguaugcua 19

<210> 667

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 667

uuuccauagg ugaugaguca c 21

<210> 668

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 668

ugagaaccac gucugcucug ag 22

<210> 669

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 669

uaauuuuaug uauaagcuag u 21

<210> 670

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 670

gagcuuauuc auaaaagugc ag 22

<210> 671

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 671

agaccauggg uucucauugu 20

<210> 672

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 672

uugugucaau augcgaugau gu 22

<210> 673

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 673

ugucucugcu gggguuucu 19

<210> 674

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 674

gaagugugcc gugguguguc u 21

<210> 675

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 675

aagccugccc ggcuccucgg g 21

<210> 676

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 676

ugugucacuc gaugaccacu gu 22

<210> 677

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 677

uacgucaucg uugucaucgu ca 22

<210> 678

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 678

guugugucag uuuaucaaac 20

<210> 679

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 679

acuuacagac aagagccuug cuc 23

<210> 680

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 680

uggucuagga uuguuggagg ag 22

<210> 681

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 681

cacacacugc aauuacuuuu gc 22

<210> 682

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 682

aggcugcgga auucaggac 19

<210> 683

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 683

uaaaucccau ggugccuucu ccu 23

<210> 684

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 684

aaacuacuga aaaucaaaga u 21

<210> 685

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 685

guucaaaucc agaucuauaa c 21

<210> 686

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 686

agggguggug uugggacagc uccgu 25

<210> 687

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 687

ugagcuaaau gugugcuggg a 21

<210> 688

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 688

gcugggcagg gcuucugagc uccuu 25

<210> 689

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 689

aggaauguuc cuucuuugcc 20

<210> 690

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 690

gaacgccugu ucuugccagg ugg 23

<210> 691

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 691

uccgagccug ggucucccuc uu 22

<210> 692

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 692

gggggucccc ggugcucgga uc 22

<210> 693

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 693

agucauugga ggguuugagc ag 22

<210> 694

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 694

agacuuccca uuugaaggug gc 22

<210> 695

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 695

gaccuggaca uguuugugcc cagu 24

<210> 696

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 696

auggagauag auauagaaau 20

<210> 697

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 697

cacaagguau ugguauuacc u 21

<210> 698

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 698

agggggaaag uucuauaguc c 21

<210> 699

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 699

agcugucuga aaaugucuu 19

<210> 700

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 700

ucuuuucuuu gagacucacu 20

<210> 701

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 701

gugagucucu aagaaaagag ga 22

<210> 702

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 702

ucuaguaaga guggcagucg a 21

<210> 703

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 703

augcugacau auuuacuaga gg 22

<210> 704

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 704

uggguuuacg uugggagaac u 21

<210> 705

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 705

aguauucugu accagggaag gu 22

<210> 706

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 706

agaccuggcc cagaccucag c 21

<210> 707

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 707

acugggggcu uucgggcucu gcgu 24

<210> 708

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 708

agggaucgcg ggcggguggc ggccu 25

<210> 709

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 709

aucgcugcgg uugcgagcgc ugu 23

<210> 710

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 710

augauccagg aaccugccuc u 21

<210> 711

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 711

aaagacauag gauagaguca ccuc 24

<210> 712

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 712

agacacauuu ggagagggaa cc 22

<210> 713

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 713

gucccucucc aaaugugucu ug 22

<210> 714

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 714

acuuguaugc uagcucaggu ag 22

<210> 715

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 715

aguguggcuu ucuuagagc 19

<210> 716

<211> 19

<212> РНК

<213> Человек

<400> 716

aagugugcag ggcacuggu 19

<210> 717

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 717

aaaccugugu uguucaagag uc 22

<210> 718

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 718

aggaggcagc gcucucagga c 21

<210> 719

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 719

gggacuagga ugcagaccuc c 21

<210> 720

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 720

aggucugcau ucaaaucccc aga 23

<210> 721

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 721

ccucaccauc ccuucugccu gc 22

<210> 722

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 722

caggcagaag uggggcugac agg 23

<210> 723

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 723

aaaggaaagu guauccuaaa ag 22

<210> 724

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 724

uuuaggauaa gcuugacuuu ug 22

<210> 725

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 725

aauggcgcca cuaggguugu g 21

<210> 726

<211> 25

<212> РНК

<213> Человек

<400> 726

caacccuagg agagggugcc auuca 25

<210> 727

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 727

uaugucugcu gaccaucacc uu 22

<210> 728

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 728

uggugggccg cagaacaugu gc 22

<210> 729

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 729

auaauacaug guuaaccucu uu 22

<210> 730

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 730

aauauuauac agucaaccuc u 21

<210> 731

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 731

accuccugug ugcauggauu a 21

<210> 732

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 732

uacccauugc auaucggagu ug 22

<210> 733

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 733

ugccuggguc ucuggccugc gcgu 24

<210> 734

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 734

aggcggggcg ccgcgggacc gc 22

<210> 735

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 735

uauucauuua uccccagccu aca 23

<210> 736

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 736

uucauuugcc ucccagccua ca 22

<210> 737

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 737

ugggcuaagg gagaugauug ggua 24

<210> 738

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 738

accaggaggc ugaggccccu 20

<210> 739

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 739

uccgguucuc agggcuccac c 21

<210> 740

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 740

aggaagcccu ggaggggcug gag 23

<210> 741

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 741

cgcgccugca ggaacuggua ga 22

<210> 742

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 742

ugggcagggg cuuauuguag gag 23

<210> 743

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 743

cugggcccgc ggcgggcgug ggg 23

<210> 744

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 744

uggugcggag agggcccaca gug 23

<210> 745

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 745

aaggagcuua caaucuagcu ggg 23

<210> 746

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 746

ugcggggcua gggcuaacag ca 22

<210> 747

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 747

uuugugaccu gguccacuaa cc 22

<210> 748

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 748

gaugguugac cagagagcac ac 22

<210> 749

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 749

uggaagacua gugauuuugu ugu 23

<210> 750

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 750

cggcucuggg ucugugggga 20

<210> 751

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 751

gcagcagggu gaaacugaca ca 22

<210> 752

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 752

gcaggugcuc acuuguccuc cu 22

<210> 753

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 753

uggaggagaa ggaaggugau g 21

<210> 754

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 754

acuccagccc cacagccuca gc 22

<210> 755

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 755

aggaggaauu ggugcugguc uu 22

<210> 756

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 756

ucugcucaua ccccaugguu ucu 23

<210> 757

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 757

ugcaccaugg uugucugagc aug 23

<210> 758

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 758

cugggaucuc cggggucuug guu 23

<210> 759

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 759

ugagaccucu ggguucugag cu 22

<210> 760

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 760

uccaguacca cgugucaggg cca 23

<210> 761

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 761

caguaacaaa gauucauccu ugu 23

<210> 762

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 762

ggagacugau gaguucccgg ga 22

<210> 763

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 763

gcaggaacuu gugagucucc u 21

<210> 764

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 764

cugcccuggc ccgagggacc ga 22

<210> 765

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 765

cggccccacg caccagggua aga 23

<210> 766

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 766

ccuggaaaca cugagguugu g 21

<210> 767

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 767

uggugguuua caaaguaauu ca 22

<210> 768

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 768

uggauuucuu ugugaaucac ca 22

<210> 769

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 769

guagaggaga uggcgcaggg 20

<210> 770

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 770

aggcagcggg guguagugga ua 22

<210> 771

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 771

uccauuacac uacccugccu cu 22

<210> 772

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 772

gugaacgggc gccaucccga gg 22

<210> 773

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 773

cuugggagcc cuguuagacu c 21

<210> 774

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 774

uacucaaaaa gcugucaguc a 21

<210> 775

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 775

uuaauaucgg acaaccauug u 21

<210> 776

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 776

uacuuggaaa ggcaucaguu g 21

<210> 777

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 777

ugcaacgaac cugagccacu ga 22

<210> 778

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 778

ugcaacuuac cugagucauu ga 22

<210> 779

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 779

cacugugucc uuucugcgua g 21

<210> 780

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 780

cacuggcucc uuucugggua ga 22

<210> 781

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 781

gcagcagaga auaggacuac guc 23

<210> 782

<211> 20

<212> РНК

<213> Человек

<400> 782

agagucuugu gaugucuugc 20

<210> 783

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 783

agguugggau cgguugcaau gcu 23

<210> 784

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 784

uauugcacuu gucccggccu gu 22

<210> 785

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 785

uauugcacuc gucccggccu cc 22

<210> 786

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 786

ugugcgcagg gagaccucuc cc 22

<210> 787

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 787

ugucuacuac uggagacacu gg 22

<210> 788

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 788

ccaguuaccg cuuccgcuac cgc 23

<210> 789

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 789

caaagugcug uucgugcagg uag 23

<210> 790

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 790

acaguagagg gaggaaucgc ag 22

<210> 791

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 791

auccgcgcuc ugacucucug cc 22

<210> 792

<211> 24

<212> РНК

<213> Человек

<400> 792

uggggagcug aggcucuggg ggug 24

<210> 793

<211> 21

<212> РНК

<213> Человек

<400> 793

aaggcagggc ccccgcuccc c 21

<210> 794

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 794

cacccggcug ugugcacaug ugc 23

<210> 795

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 795

cacauggccg aaacagagaa gu 22

<210> 796

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 796

ucuucucugu uuuggccaug ug 22

<210> 797

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 797

aaauuauugu acaucggaug ag 22

<210> 798

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 798

uucaacgggu auuuauugag ca 22

<210> 799

<211> 23

<212> РНК

<213> Человек

<400> 799

uuuggcacua gcacauuuuu gcu 23

<210> 800

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 800

cuauacaacu uacuacuuuc cc 22

<210> 801

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 801

ugagguagua aguuguauug uu 22

<210> 802

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 802

aacccguaga uccgaucuug ug 22

<210> 803

<211> 22

<212> РНК

<213> Человек

<400> 803

cacccguaga accgaccuug cg 22

<210> 804

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 804

caaacaccat tgtcacactc ca 22

<210> 805

<211> 20

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 805

ggcattcacc gcgtgcctta 20

<210> 806

<211> 24

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 806

tcacaggtta aagggtctca ggga 24

<210> 807

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 807

cgcattatta ctcacggtac ga 22

<210> 808

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 808

cacattatta ctcacggtac ga 22

<210> 809

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 809

agccaagctc agacggatcc ga 22

<210> 810

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 810

aaagagaccg gttcactgtg a 21

<210> 811

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 811

aaagagaccg gttcactgtg g 21

<210> 812

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 812

atactttttg gggtaagggc tt 22

<210> 813

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 813

gcaagcccag accgcaaaaa g 21

<210> 814

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 814

atgccctttc atcattgcac tg 22

<210> 815

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 815

gtagtgcaac agggaaagag t 21

<210> 816

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 816

cagctggttg aaggggacca aa 22

<210> 817

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 817

tagctggttg aaggggacca aa 22

<210> 818

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 818

ttggtgacta ggtggcccac agg 23

<210> 819

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 819

ctacgcgtat tcttaagcaa taa 23

<210> 820

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 820

atacatactt ctttacattc ca 22

<210> 821

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 821

gagctacagt gcttcatctc a 21

<210> 822

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 822

agaacagtat ttccaggaat cc 22

<210> 823

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 823

agggattcct gggaaaactg gac 23

<210> 824

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 824

acccttatca gttctccgtc ca 22

<210> 825

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 825

taaccaatgt gcagactact gt 22

<210> 826

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 826

gaacaggtag tctgaacact ggg 23

<210> 827

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 827

aggcatagga tgacaaaggg aa 22

<210> 828

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 828

acaaaccttt tgttcgtctt at 22

<210> 829

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 829

actgcctgtc tgtgcctgct gt 22

<210> 830

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 830

tccaatcagt tcctgatgca gta 23

<210> 831

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 831

agaattgcgt ttggacaatc a 21

<210> 832

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 832

tggggtattt gacaaactga ca 22

<210> 833

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 833

acaaccagct aagacactgc ca 22

<210> 834

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 834

aactcagtaa tggtaacggt tt 22

<210> 835

<211> 21

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 835

ttttggtgca tatttacttt a 21

<210> 836

<211> 22

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 836

aactatacaa cctactacct ca 22

<210> 837

<211> 23

<212> ДНК

<213> Человек

<400> 837

tcatacagct agataaccaa aga 23

<210> 838

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<221> прочий_признак

<222> (5)..(5)

<223> Xaa может представлять собой любую аминокислоту природного происхождения

<400> 838

Val Tyr Pro Tyr Xaa Glu Phe Val Leu

1 5

<210> 839

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<221> прочий_признак

<222> (6)..(6)

<223> Xaa может представлять собой любую аминокислоту природного происхождения

<400> 839

Lys Leu Asn Pro Asn Xaa Ile Ala Ser

1 5

<210> 840

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<221> прочий_признак

<222> (5)..(5)

<223> Xaa может представлять собой любую аминокислоту природного происхождения

<400> 840

Ile Thr Thr Val Xaa Thr Phe Ile Asp

1 5

<210> 841

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<221> прочий_признак

<222> (5)..(5)

<223> Xaa может представлять собой любую аминокислоту природного происхождения

<400> 841

Val Asp Thr Asp Xaa Thr Gln Gln Gln

1 5

<210> 842

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная

<220>

<221> прочий_признак

<222> (5)..(5)

<223> Xaa может представлять собой любую аминокислоту природного происхождения

<400> 842

Val Pro Ser Thr Xaa Leu Leu Leu Phe

1 5

<210> 843

<211> 32767

<212> ДНК

<213> Искусственная

<400> 843

aaaaaagctg aacgagaaac gtaaaatgat ataaatatca atatattaaa ttagattttg 60

cataaaaaac agactacata atactgtaaa acacaacata tccagtcact atgaatcaac 120

tacttagatg gtattagtga cctgtagtcg accgacagcc ttccaaatgt tcttcgggtg 180

atgctgccaa cttagtcgac cgacagcctt ccaaatgttc ttctcaaacg gaatcgtcgt 240

atccagccta ctcgctattg tcctcaatgc cgtattaaat cataaaaaga aataagaaaa 300

agaggtgcga gcctcttttt tgtgtgacaa aataaaaaca tctacctatt catatacgct 360

agtgtcatag tcctgaaaat catctgcatc aagaacaatt tcacaactct tatacttttc 420

tcttacaagt cgttcggctt catctggatt ttcagcctct atacttacta aacgtgataa 480

agtttctgta atttctactg tatcgacctg cagactggct gtgtataagg gagcctgaca 540

tttatattcc ccagaacatc aggttaatgg cgtttttgat gtcattttcg cggtggctga 600

gatcagccac ttcttccccg ataacggaga ccggcacact ggccatatcg gtggtcatca 660

tgcgccagct ttcatccccg atatgcacca ccgggtaaag ttcacgggag actttatctg 720

acagcagacg tgcactggcc agggggatca ccatccgtcg cccgggcgtg tcaataatat 780

cactctgtac atccacaaac agacgataac ggctctctct tttataggtg taaaccttaa 840

actgcatttc accagcccct gttctcgtca gcaaaagagc cgttcatttc aataaaccgg 900

gcgacctcag ccatcccttc ctgattttcc gctttccagc gttcggcacg cagacgacgg 960

gcttcattct gcatggttgt gcttaccaga ccggagatat tgacatcata tatgccttga 1020

gcaactgata gctgtcgctg tcaactgtca ctgtaatacg ctgcttcata gcatacctct 1080

ttttgacata cttcgggtat acatatcagt atatattctt ataccgcaaa aatcagcgcg 1140

caaatacgca tactgttatc tggcttttag taagccggat ccacgcggcg tttacgcccc 1200

ccctgccact catcgcagta ctgttgtaat tcattaagca ttctgccgac atggaagcca 1260

tcacaaacgg catgatgaac ctgaatcgcc agcggcatca gcaccttgtc gccttgcgta 1320

taatatttgc ccatggtgaa aacgggggcg aagaagttgt ccatattggc cacgtttaaa 1380

aaggccgtaa tatccagctg aacggtctgg ttataggtac attgagcaac tgactgaaat 1440

gcctcaaaat gttctttacg atgccattgg gatatatcaa cggtggtata tccagtgatt 1500

tttttctcca ttttagcttc cttagctcct gaaaatctcg ataactcaaa aaatacgccc 1560

ggtagtgatc ttatttcatt atggtgaaag ttggaacctc ttacgtgccg atcaacgtct 1620

cattttcgcc aaaagttggc ccagggcttc ccggtatcaa cagggacacc aggatttatt 1680

tattctgcga agtgatcttc cgtcacaggt atttattcgg cgcaaagtgc gtcgggtgat 1740

gctgccaact tagtcgacta caggtcacta ataccatcta agtagttgat tcatagtgac 1800

tggatatgtt gtgttttaca gtattatgta gtctgttttt tatgcaaaat ctaatttaat 1860

atattgatat ttatatcatt ttacgtttct cgttcagctt tcttgtacaa agtggtttta 1920

atggaccgcc cgcaaggggg ggggggcatt tcagtgtcgg gtgacgagcg cgatccggcc 1980

gggatcctag gaccccaaaa gtttgtctgc gtattccagg gcggggctca gttgaatctc 2040

ccgcagcacc tctaccagca ggtccgcggt gggctggaga aactcggccg tcccggggca 2100

ggcggttgtc gggggtggag gcgcggcgcc caccccgtgt gccgcgcctg gcgtctcctc 2160

tgggggcgac ccgtaaatgg ttgcagtgat gtaaatggtg tccgcggtcc agaccacggt 2220

caaaatgccg gccgtggcgc tccgggcgct ttcgccgcgc gaggagctga cccaggagtc 2280

gaacggatac gcgtacatat gggcgtccca cccgcgttcg agcttctggt tgctgtcccg 2340

gcctataaag cggtaggcac aaaattcggc gcgacagtcg ataatcacca acagcccaat 2400

gggggtgtgc tggataacaa cgcctccgcg cggcaggcgg tcctggcgct cccggccccg 2460

taccatgatc gcgcgggtgc cgtactcaaa aacatgcacc acctgcgcgg cgtcgggcag 2520

tgcgctggtc agcgaggccc tggcgtggca taggctatac gcgatggtcg tctgtggatt 2580

ggacatctcg cggtgggtag tgagtccccc gggccgggtt cggtggaact gtaaggggac 2640

ggcgggttaa tagacaatga ccacgttcgg atcgcgcaga gccgatagta tgtgctcact 2700

aatgacgtca tcgcgctcgt ggcgctcccg gagcggattt aagttcatgc gaaggaattc 2760

ggaggaggtg gtgcgggaca tggccacgta cgcgctgttg aggcgcaggt tgccgggcgt 2820

aaagcagatg gcgaccttgt ccaggctaag gccctgggag cgcgtgatgg tcatggcaag 2880

cttggagctg atgccgtagt cggcgtttat ggccatggcc agctccgtag agtcaatgga 2940

ctcgacaaac tcgctgatgt tggtgttgac gacggacatg aagccgtgtt ggtcccgcaa 3000

gaccacgtaa ggcagggggg cctcttccag taactcggcc acgttggccg tcgcgtgccg 3060

cctccgcagc tcgtccgcaa aggcaaacac ccgtgcgtac gtgtatccca tgagcgtata 3120

attgtccgtc tgcagggcga cggacatcag ccccccgcgc ggcgagccgg tcagcatctc 3180

gcagccccgg aagataacgt tgtccacgta cgtgctaaag ggggcgactt caaatgcctc 3240

cccgaagagc tcttggagga ttcggaatct cccgaggaag gcccgcttca gcagcgcaaa 3300

ctgggtgtga acggcggcgg tggtctccgg ttccccgggg gtgtagtggc agtaaaacac 3360

gtcgagctgt tgttcgtcca gccccgcgaa aataacgtcg aggtcgtcgt cgggaaaatc 3420

gtccgggccc ccgtcccgcg gccccagttg cttaaaatca aacgcacgct cgccgggggc 3480

gcctgcgtcg gccattaccg acgcctgcgt cggcaccccc gaagatttgg ggcgcagaga 3540

cagaatctcc gccgttagtt ctcccatgcg ggcgtaggcg agggtcctct gggtcgcatc 3600

caggcccggg cgctgcagaa agttgtaaaa ggagataagc ccgctaaata tgagccgcga 3660

caggaacctg taggcaaact ccaccgaagt ctccccctga gtctttacaa agctgtcgtc 3720

acgcaacact gcctcgaagg cccggaacgt cccactaaac ccaaaaacca gttttcgcag 3780

gcgcgcggtc accgcgatct ggctgttgag gacgtaagtg acgtcgttgc gggccacgac 3840

cagctgctgt ttgctgtgca cctcgcagcg catgtgcccc gcgtcctggt cctggctctg 3900

cgagtagttg gtgatgcggc tggcgttggc cgtgagccac ttttcaatcg tcaggccggg 3960

ctggtgtgtc agccgtcggt attcgtcaaa ctccttgacc gacacgaacg taagcacggg 4020

gagggtgaac acgacgaact ccccctcacg ggtcaccttc aggtaggcgt ggagcttggc 4080

catgtacgcg ctcacctctt tgtgggagga gaacagccgc gtccagccgg ggaggttggc 4140

ggggttggtg atgtagtttt ccgggacgac gaagcgatcc acgaactgca tgtgctcctc 4200

ggtgatgggc aggccgtact ccagcacctt catgaggtta ccgaactcgt gctcgacgca 4260

ccgtttgttg ttaataaaaa tggcccagct atacgagagg cgggcgtact cgcgcagcgt 4320

gcggttgcag atgaggtacg tgagcacgtt ctcgctctgg cggacggaac accgcagttt 4380

ctggtgctcg aaggtcgact ccagggacgc cgtctgcgtc ggcgagccca cacacaccaa 4440

cacgggccgc aggcgggccg cgtactgggg ggtgtggtac agggcgttaa tcatccacca 4500

gcaatacacc acggccgtga ggaggtgacg cccaaggagc ccggcctcgt cgatgacgat 4560

cacgttgctg cgggtaaagg ccggcagcgc cccgtgggtg gccggggcca accgcgtcag 4620

ggcgccctcg gccaacccca gggtccgttc cagggcggcc agggcgcgaa actcgttccg 4680

caactcctcg cccccggagg cggccagggc gcgcttcgtg aggtccaaaa tcacctccca 4740

gtagtacgtc agatctcgtc gctgcaggtc ctccagcgag gcggggttgc tggtcagggt 4800

gtacgggtac tgtcccagtt gggcctggac gtgattcccg cgaaacccaa attcatgaaa 4860

gatggtgttg atgggtcggc tgagaaaggc gcccgagagt ttggcgtaca tgttttgggc 4920

cgcaatgcgc gtggcgcccg tcaccacaca gtccaagacc tcgttgattg tctgcacgca 4980

cgtgctcttt ccggagccag cgttgccggt gataagatac accgcgaacg gaaactccct 5040

gaggggcagg cctgcggggg actctaaggc cgccacgtcc cggaaccact gcagatgggg 5100

cacttgcgct ccgtcgagct gttgttgcga gagctctcgg atgcgcttaa ggattggctg 5160

caccccgtgc atagacgtaa aatttaaaaa ggcctcggcc ctccctggaa cggctggtcg 5220

gtccccgggt tgctgaaggt gcggcgggcc gggtttctgt ccgtctagct ggcgctcccc 5280

gccggccgcc gccatgaccg caccacgctc gcgggccccc actacgcgtg cgcgggggga 5340

cacggaagcg ctgtgctccc ccgaggacgg ctgggtaaag gttcacccca gccccggtac 5400

gatgctgttc cgcgagattc tccacgggca gctggggtat accgagggcc agggggtgta 5460

caacgtcgtc cggtccagcg aggcgaccac ccggcagctg caggcggcga tctttcacgc 5520

gctcctcaac gccaccactt accgggacct cgaggcggac tggctcggcc acgtggcggc 5580

ccgcggtctg cagccccaac ggctggttcg ccggtacagg aacgcccggg aggcggatat 5640

cgccggggtg gccgagcggg tgttcgacac gtggcggaac acgcttagga cgacgctgct 5700

ggactttgcc cacgggttgg tcgcctgctt tgcgccgggc ggcccgagcg gcccgtcaag 5760

cttccccaaa tatatcgact ggctgacgtg cctggggctg gtccccatat tacgcaagcg 5820

acaagaaggg ggtgtgacgc agggtctgag ggcgtttctc aagcagcacc cgctgacccg 5880

ccagctggcc acggtcgcgg aggccgcgga gcgcgccggc cccgggtttt ttgagctggc 5940

gctggccttc gactccacgc gcgtggcgga ctacgaccgc gtgtatatct actacaacca 6000

ccgccggggc gactggctcg tgcgagaccc catcagcggg cagcgcggag aatgtctggt 6060

gctgtggccc cccttgtgga ccggggaccg tctggtcttc gattcgcccg tccagcggct 6120

gtttcccgag atcgtcgcgt gtcactccct ccgggaacac gcgcacgtct gccggctgcg 6180

caataccgcg tccgtcaagg tgctgctggg gcgcaagagc gacagcgagc gcggggtggc 6240

cggtgccgcg cgggtcgtta acaaggtgtt gggggaggac gacgagacca aggccgggtc 6300

ggccgcctcg cgcctcgtgc ggcttatcat caacatgaag ggcatgcgcc acgtaggcga 6360

cattaacgac accgtgcgtt cctacctcga cgaggccggg gggcacctga tagacgcccc 6420

ggccgtcgac ggtaccctcc ctggattcgg caagggcgga aacagccgcg ggtctgcggg 6480

ccaggaccag ggggggcggg cgccgcagct tcgccaggcc ttccgcacgg ccgtggttaa 6540

caacatcaac ggcgtgttgg agggctatat aaataacctg tttggaacca tcgagcgcct 6600

gcgcgagacc aacgcgggcc tggcgaccca attgcaggag cgcgaccgcg agctccggcg 6660

cgcaacagcg ggggccctgg agcgccagca gcgcgcggcc gacctggcgg ccgagtccgt 6720

gaccggtgga tgcggcagcc gccctgcggg ggcggacctg ctccgggccg actatgacat 6780

tatcgacgtc agcaagtcca tggacgacga cacgtacgtc gccaacagct ttcagcaccc 6840

gtacatccct tcgtacgccc aggacctgga gcgcctgtcg cgcctctggg agcacgagct 6900

ggtgcgctgt tttaaaattc tgtgtcaccg caacaaccag ggccaagaga cgtcgatctc 6960

gtactccagc ggggcgatcg ccgcattcgt cgccccctac tttgagtcag tgcttcgggc 7020

cccccgggta ggcgcgccca tcacgggctc cgatgtcatc ctgggggagg aggagttatg 7080

ggatgcggtg tttaagaaaa cccgcctgca aacgtacctg acagacatcg cggccctgtt 7140

cgtcgcggac gtccagcacg cagcgctgcc cccgcccccc tccccggtcg gcgccgattt 7200

ccggcccggc gcgtccccgc ggggccggtc cagatcgcgg tcgcccggaa gaactgcgcg 7260

aggcgcgccg gaccagggcg ggggcatcgg gcaccgggat ggccgccgcg acggccgacg 7320

atgaggggtc ggccgccacc atcctcaagc aggccatcgc cggggaccgc agcctggtcg 7380

aggcggccga ggcgattagc cagcagacgc tgctccgcct ggcctgcgag gtgcgccagg 7440

tcggcgaccg ccagccgcgg tttaccgcca ccagcatcgc gcgcgtcgac gtcgcgcctg 7500

ggtgccggtt gcggttcgtt ctggacggga gtcccgagga cgcctatgtg acgtcggagg 7560

attactttaa gcgctgctgc ggccagtcca gttatcgcgg cttcgcggtg gcggtcctga 7620

cggccaacga ggaccacgtg cacagcctgg ccgtgccccc cctcgttctg ctgcaccggt 7680

tctccctgtt caaccccagg gacctcctgg actttgagct tgcctgtctg ctgatgtacc 7740

tggagaactg cccccgaagc cacgccaccc cgtcgacctt tgccaaggtt ctggcgtggc 7800

tcggggtcgc gggtcgccgc acgtccccat tcgaacgcgt tcgctgcctt ttcctccgca 7860

gttgccactg ggtcctaaac acactcatgt tcatggtgta cgtaaaaccg ttcgacgacg 7920

agttcgtcct gccccactgg tacatggccc ggtacctgct ggccaacaac ccgccccccg 7980

ttctctcggc cctgttctgt gccaccccga cgagctcctc attccggctg ccggggccgc 8040

ccccccgctc cgactgcgtg gcctataacc ccgccgggat catggggagc tgctgggcgt 8100

cggaggaggt gcgcgcgcct ctggtctatt ggtggctttc ggagacccca aaacgacaga 8160

cgtcgtcgct gttttatcag ttttgttgaa ttttaggaaa taaacccggt tttgtttctg 8220

tggcctcccg acggatgcgc gtgtccttac tccgtcttgg tgggtgggtg gctgtgtatg 8280

gcgtcccatc tgtgcgggga ggggggcaag tcggcacgta ttcggacaga ctcaagcaca 8340

taagacgaac aaaaggtttg taacttcgta ccgtgagtaa taatgtggac tttattgctt 8400

aagaatacgc gtagagaaat aagacgaaca aaaggtttgt gattttattg cttaagaata 8460

cgcgtagatg gtcgtaccgt gagtaataat gtggttcata agacgaacaa aaggtttgtg 8520

acattattgc ttaagaatac gcgtaggtgg tcgtaccgtg agtaataatg tgtactttat 8580

tgcttaagaa tacgcgtagg ctatcgtacc gtgagtaata atgtgcctta taagacgaac 8640

aaaaggtttg tacacggggg agcgctcttg tctcagggca atgtttttat tggtcaaact 8700

caggcaaaca gaaacgacat cttgtcgtca aagggataca caaacttccc cccctcgccc 8760

catactcccg ccagcacccc ggtaaacacc aactcaatct cgcgcaggat ttcgcgcagg 8820

tgatgagcgc agtccacggg ggggagcaca aggggccgcg ggtatagatc gacggggacg 8880

ccgaccgact ccccgcctcc gggacagaca cgcacgacgc gccgccagta gtgctctgcg 8940

tccagcaagg cgccgccgcg gaaggcagtg gggggcaagg ggtcgctggc ctcaaagggg 9000

gacacccgaa cgctccagta ctccgcgtcc aaccgtttat taaacgcgtc caagataagg 9060

cggtcgcagg cgtcctccat aaggccccgg gccgtgagtg cgtcctcctc cggcacgcat 9120

gccgttgtca ggcccaggac ccgtcgcagc gtgtcgcgta cgacccctgc cgccgtggtg 9180

tacgcgggcc cgcggagagg aaatccccca agatggtcag tgttgtcgcg ggagttccag 9240

aaccacactc ccgcctggct ccaggcgact gcgtgggtgt agacgccctc gagggccagg 9300

cacagtgggt gccgcagccg gacggcgttg gccctaagca cggctcccac ggccgtctcg 9360

atggcccgcc gggcgtcctc gatcaccccg gaagccgcat ccgcgtcttg ggggtccacg 9420

ttaaagacac cccagaacgc acccccatcg cccccgcaga ccgcgaactt caccgagctg 9480

gccgtctcct cgatctgcag gcagacggcg gccattaccc cacccaggag ctgccgcagc 9540

gcagggcagg cgttgcacgt gtccgggacc aggcgctcca agacggcccc ggcccagggc 9600

tctgagggag cggccaccac cagcgcgtcc agtcttgcta ggcccgtccg gccgtggggg 9660

tccgccagcc cgctcccccc gaggtcggcc agggccgcca ggagctgggc gcgaagtccg 9720

gggaagcaaa accgcgccgt ccagacgggc ccgacggccg cgggcgggtc taacagttgg 9780

atgattttag tggcgggatg ccaccgcgcc accgcctccc gcaccgcggg caggaggcat 9840

ccggctgccg ccgaggccac gccgggccag gctcgcgggg ggaggacgac cctggccccc 9900

accgcgggcc aggcccccag gagcgcggcg taagcggccg cggccccgcg caccaggtcc 9960

cgtgccgact cggccgtggc cggcacggtg aacgtgggcc aacccggaaa ccccaggacg 10020

gcaaagtacg ggacgggtcc cccccggacc tcaaactcgg gccccagaaa ggcaaagacg 10080

ggggccaggg ccccgggggc ggcgtggacc gtggtatgcc actgccggaa aagggcgacg 10140

agcgccggcg cggagaactt ctcgccggcg cttacaaagt agtcgtaatc gcggggcagc 10200

agcacccgtg ccgtgactcg ttgcgggtgc ccgcgtggcc gcaggcccac ctcgcacacc 10260

tcgaccaggt ccccgaacgc gccctccttc ttgatcggcg gaaacgcaag agtctggtat 10320

tcgcgcgcaa atagcgcggt tccggtggtg atgttaacgg tcagcgaagc ggcggacgcg 10380

cactgggggg tgtcgcgaat ggccgccagg cgcgcccacg ccagccgcgc gtcgggatgc 10440

tcggcaacgc gcgccgccag ggccataggg tcgatgtcaa tgttggcctc cgcgaccagg 10500

agagcggcgc gaggggcggc gggcgggccc cacgacgctc tctcaacttt caccaccagt 10560

cccgtgcgtg ggtccgagcc gatacgcagc ggggcgaaca gggccaccgg cccggtctgg 10620

cgctccaggg ccgccaggac gcacgcgtac agcgcccgcc acagagtcgg gttctccagg 10680

ggctccagcg gggaggcggc cggcgtcgtc gcggcgcggg cggccgccac gacggcctgg 10740

acggagacgt ccgcggagcc gtagaaatcc cgcagctccg tcgcggtgac ggagacctcc 10800

gcaaagcgcg cgcgaccctc ccctgcggcg ttgcgacata caaaatacac cagggcgtgg 10860

aagtactcgc gagcgcgggg gggcagccat accgcgtaaa gggtaatggc gctgacgctc 10920

tcctccaccc acacgatatc tgcggtgtcc atcgcacggc ccctaaggat cacgggcggt 10980

ctgtgggtcc catgctgccg tgcctggccg ggcccggtgg gtcgcggaaa ccggtgacgg 11040

ggggggggcg gtttttgggg ttggggtggg ggtgggaaac ggcccgggtc cgggggccaa 11100

cttggcccct cggtgcgttc cggcaacagc gccgccggtc cgcggacgac cacgtaccga 11160

acgagtgcgg tcccgagact tatagggtgc taaagttcac cgccccctgc atcatgggcc 11220

aggcctcggt ggggagctcc gacagcgccg cctccaggat gatgtcagcg ttggggttgg 11280

cgctggatga gtgcgtgcgc aaacagcgcc cccacgcggg cacgcgtagc ttgaagcgcg 11340

cgcccgcaaa ctcccgcttg tgggccataa gcagggcgta cagctgcctg tgggtccggc 11400

aggcgctgtg gtcgatgtgg tgggcgtcca acaaccccac gattgtctgt ttggtgaggt 11460

ttttaacgcg ccccgccccg ggaaacgtct gcgtgctttt ggccatctgc acgccaaaca 11520

gttcgcccca gattatcttg aacagcgcca ccgcgtggtc cgtctcgcta acggacccgc 11580

gcgggggaca gccgcttagg gcgtcggcga cgcgcttgac ggcttcctcc gagagcagaa 11640

gtccgtcggt tacgttacag tggcccagtt cgaacaccag ctgcatgtag cggtcgtagt 11700

ggggggtcag taggtccagc acgtcatcgg ggccgaaggt cctcccagat cccccggccg 11760

ccgagtccca atgcaggcgc gcggccatgg tgctgcacag gcacaacagc tcccagacgg 11820

gggttacgtt cagggtgggg ggcagggcca cgagctccag ctctccggtg acgttgatcg 11880

tggggatgac gcccgtggcg tagtggtcat agatccgccg aaatatggcg ctgctgcggg 11940

tggccatggg aacgcggaga caggcctcca gcaacgccag gtaaataaac cgcgtgcgtc 12000

ccatcaggct gttgaggttg cgcatgagcg cgacaatttc cgccggcgcg acatcggacc 12060

ggaggtattt ttcgacgaaa agacccacct cctccgtctc ggcggcctgg gccggcagcg 12120

acgcctcggg atcccggcac cgcagctccc gtagatcgcg ctgggccctg agggcgtcga 12180

aatgtacgcc ccgcaaaaac agacagaagt cctttggggt cagggtatcg tcgtgtcccc 12240

agaagcgcac gcgtatgcag tttagggtca gcagcatgtg aaggatgtta aggctgtccg 12300

agagacacgc cagcgtgcat ctctcaaagt agtgtttgta acggaatttg ttgtagatgc 12360

gcgacccccg ccccagcgac gtgtcgcatg ccgacgcgtc acagcgcccc ttgaaccggc 12420

gacacagcag gtttgtgacc tgggagaact gcgcgggcca ctggccgcag gaactgacca 12480

cgtgattaag gagcatgggc gtaaagacgg gctccgagcg cgccccggag ccgtccatgt 12540

aaatcagtag ctcccccttg cggagggtgc gcacccgtcc cagggactgg tacacggaca 12600

ccatgtccgg tccgtagttc atgggtttca cgtaggcgaa catgccatca aagtgcaggg 12660

gatcgaagct gaggcccacg gttacgaccg tcgtgtatat aaccacgcgg tattggcccc 12720

acgtggtcac gtccccgagg ggggtgagcg agtgaagcaa cagcacgcgg tccgtaaact 12780

gacggcagaa ccgggccacg atctccgcga aggagaccgt cgacgaaaaa atgcagatgt 12840

tatcgccccc gccaaggcgc gcttccagct ccccaaagaa cgtggccccc cgggcctccg 12900

gagaggcgtc cggagacggg ccgctcggcg gcccgggcgg gcgcagggca gcctgcagga 12960

gctcggtccc cagacgcggg agaaacaggc accggcgcgc cgaaaacccg ggcatggcgt 13020

actcgccgac caccacatgc acgttttttt cgccccggag accgcacagg aagtccacca 13080

actgcgcgtt ggcggttgcg tccatggcga tgatccgagg acagatgcgc agcaggcgta 13140

gcattaacgc atccacgcgg cccagttgct gcatcgttgg cgaatagagc tggcccagcg 13200

tcgacataac ctcgtccaga acgaggacgt cgtagttgtt cagaaggttg gggcccacgc 13260

gatgaaggct ttccacctgg acgataagtc ggtggaaggg gcggtcgttc ataatgtaat 13320

tggtggatga gaagtaggtg acaaagtcga ccaggcctga ctcagcgaac cgcgtcgcta 13380

gggtctgggt aaaactccga cgacaggaga cgacgagcac actcgtgtcc ggagagtgga 13440

tcgcttcccg cagccagcgg atcagcgcgg tagtttttcc cgaccccatt ggcgcgcgga 13500

ccacagtcac gcacctggcc gtcggggcgc tcgcgttggg gaaggtgacg ggtccgtgct 13560

gctgccgctc gatcgttgtt ttcgggtgaa cccggggcac ccattcggcc aaatcccccc 13620

cgtacaacat ccgcgctagc gatacgctcg acgtgtactg ttcgcactcg tcgtccccaa 13680

tgggacgccc ggcccccaga ggatctcccg actccgcgcc ccccacgaaa ggcatgaccg 13740

gggcgcggac ggcgtggtgg gtctggtgtg tgcaggtggc gacgtttgtg gtctctgcgg 13800

tctgcgtcac ggggctcctc gtcctggcct ctgtgttccg ggcacggttt ccctgctttt 13860

acgccacggc gagctcttat gccggggtga actccacggc cgaggtgcgc gggggtgtag 13920

ccgtgcccct caggttggac acgcagagcc ttgtgggcac ttatgtaatc acggccgtgt 13980

tgttgttggc cgtggccgtg tatgccgtgg tcggcgccgt gacctcccgc tacgaccgcg 14040

ccctggacgc gggccgccgt ctggctgcgg cccgcatggc catgccgcac gccacgctga 14100

tcgccggaaa cgtctgctct tggttgctgc agatcaccgt cctgttgctg gcccatcgca 14160

tcagccagct ggcccacctg gtttacgtcc tgcactttgc gtgtctggtg tattttgcgg 14220

cccatttttg caccaggggg gtcctgagcg ggacgtatct gcgtcaggtg cacggcctga 14280

tggagctggc cccgacccat catcgcgtcg tcggcccggc tcgcgccgtg ctgacaaacg 14340

ccttgctgtt gggcgtcttc ctgtgcacgg ccgacgccgc ggtatccctg aataccatcg 14400

ccgcgttcaa ctttaatttt tcggccccgg gcatgctcat ctgcctgacc gtgctgttcg 14460

ccattctcgt cgtatcgctg ttgttggtgg tcgagggggt gttgtgtcac tacgtgcgcg 14520

tgttggtggg cccccacctg ggggccgtgg ccgccacggg catcgtcggc ctggcctgcg 14580

agcactatta caccaacggc tactacgttg tggagacgca gtggccgggg gctcagacgg 14640

gagtccgcgt cgccctcgcc ctggtcgccg cctttgccct cggcatggcc gtgctccgct 14700

gcacccgcgc ctatctgtat cacaggcggc accacaccaa attttttatg cgcatgcgcg 14760

acacgcgaca ccgcgcacat tccgccctca agcgcgtacg cagttccatg cgcggatcgc 14820

gagacggccg ccacaggccc gcacccggca gcccgcccgg gattcccgaa tatgcggaag 14880

acccctacgc gatctcatac ggcggccagc tcgaccggta cggagattcc gacggggagc 14940

cgatttacga cgaggtggcg gacgaccaaa ccgacgtatt gtacgccaag atacaacacc 15000

cgcggcacct gcccgacgac gatcccatct atgacaccgt tggggggtac gaccccgagc 15060

ccgccgagga ccccgtgtac agcaccgtcc gccgttggta gctgtttggt tccgttttaa 15120

taaaccgttt gtgtttaacc cgaccgtggt gtatgtctgg tgtgtggcgt ccgatcccgt 15180

tactatcacc gtcccccccc ccccctcaac cccggcgatt gtgggttttt taaaaacgac 15240

acgcgtgcga ccgtatacag aacattgttt tggtttttat tcgctatcgg acatgggggg 15300

tggaaactgg gtggcggggc aggcgcctcc gggggtccgc cggtgagtgt ggcgcgaggg 15360

ggggtccgat gaacgcaggc gctgtctccc cggggcccgc gtaaccccgc gcatatccgg 15420

gggcacgtag aaattacctt cctcttcgga ctcgatatcc acgacgtcaa agtcgtgggc 15480

ggtcagcgag acgacctccc cgtcgtcggt gatgaggacg ttgtttcggc agcagcaggg 15540

ccgggccccg gagaacgaga ggcccatagc tcggcgagcg tgtcgtcgaa tgccaggcgg 15600

ctgcttcgct ggatggcctt atagatctcc ggatcgatgc ggacgggggt aatgatcagg 15660

gcgatcggaa cggcctggtt cgggagaatg gacgccttgc tgggtcctgc ggccccgaga 15720

gccccggcgc cgtcctccag gcggaacgtt acgccctcct ccgcgctggt gcggtgcctg 15780

ccgataaacg tcaccagatg cgggtggggg gggcagtcgg ggaagtggct gtcgagcacg 15840

tagccctgca ccaagatctg cttaaagttc gggtgacggg ggttcgcgaa gacgggctcg 15900

cggcggacca gatccccgga gctccaggac acgggggaga tggtgtggcg tccgaggtcg 15960

ggggcgccaa acagaagcac ctccgagaca acgccgctat ttaactccac caaggcccga 16020

tccgcggcgg agcaccgcct tttttcgccc gaggcgtggg cctctgacca ggcctggtct 16080

tgcgtgacga gagcctcctc cgggccgggg acgcgcccgg gcgcgaagta tcgcacgctg 16140

ggcttcggga tcgaccggat aaatgcccgg aacgcctccg gggaccggtg tgccatcaag 16200

tcctcgtacg cggaggccgt ggggtcgctg gggtccatgg ggtcgaaagc gtacttggcc 16260

cggcatttga cctcgtaaaa ggccaggggg gtcttgggga ctggggccag gtagccgtga 16320

atgtcccgag gacagacgag aatatccagg gacgccccga ccatccccgt gtgaccgtcc 16380

atgaggaccc cacacgtatg cacgttctct tcggcgaggt cgctgggttc gtggaagata 16440

aagcgccgcg tgtcggcgcc ggcctcgccg ccgtcgtccg cgcggcccac gcagtagcga 16500

aacagcaggc ttcgggccgt cggctcgttc acccgcccga acatcaccgc cgaagactgt 16560

acatccggcc gcaggctggc gttgtgcttc agccactggg gcgagaaaca cggaccctgg 16620

gggccccagc ggagggtgga tgcggtcgtg aggccccgcc ggagcagggc ccatagctgg 16680

cagtcggcct ggttttgcgt ggccgcctcg taaaacccca tgaggggccg gggcgccacg 16740

gcgtccgcgg cggccggggg cccgcggcgc gtcaggcgcc ataggtgccg accgagtccg 16800

cggtccacca tacccgcctc ctcgaggacc acggccaggg aacacagata atccaggcgg 16860

gcccagaggg gaccgatggc cagaggggcg cggacgccgc gcagcaaccc gcgcaggtgg 16920

cgctcgaacg tctcggctag tatatgggag ggcagcgcgt tggggatcac cgacgccgac 16980

cacatagagt caaggtccgg ggagtcggga tcggcgtccg ggtcgcgggc gtgggtgccc 17040

ccaggagata gcggaatgtc tggggtcgga ggccctgagg cgtcagaaag tgccggcgac 17100

gcggcccggg gcttttcgtc tgcggtgtcg gtggcgtgct gatcacgtgg ggggttaacg 17160

ggcgaatggg agctcgggtc cacagctgat gtcgtctggg gtgggggggg caggggacgg 17220

aaggtggttg tcagcggaag actgttaggg cgggggcgct tgggggggct gtcggggcca 17280

cgaggggtgt cctcggccag ggcccaggga cgcttagtca cggtgcgtcc cggcggacat 17340

gctgggccta ccgtggactc catttccgag acgacgtggg gggagcggtg gttgagcgcg 17400

ccgccgggtg aacgctgatt ctcacgacag cgcgtgccgc gcgcacgggt tggtgtgaca 17460

caggcgggac accagcacca ggagaggctt aagctcggga ggcagcgcca ccgacgacag 17520

tatcgccttg tgtgtgtgct ggtaatttat acaccgatcc gtaaacgcgc gccgaatctt 17580

gggattgcgg aggtggcgcc ggatgccctc tgggacgtca tacgccaggc cgtgggtgtt 17640

ggtctcggcc gagttgacaa acagggctgg gtgcagcacg cagcgatagg cgagcagggc 17700

cagggcgaag tccggcgaca gctggttgtt aaaatactgg taaccgggaa accgggtcac 17760

gggtacgccc aggctcgggg cgacgtacac gctaaccacc aactccagca gcgtctggcc 17820

cagggcgtac aggtcaaccg ctaacccgac gtcgtgcttc aggcggtggt tggtaaattc 17880

ggcccgttcg ttgttaaggt atttcaccaa cagctccggg ggctggttat acccgtgacc 17940

caccagggtg tgaaagttgg ctgtggttag ggcggtgggc atgccaaaca tccgggggga 18000

cttgaggtcc ggctcctgga ggcaaaactg cccccgggcg atcgtggagt tggagttgag 18060

ggtgacgagg ctaaagtcgg cgaggacggc ccgccggagc gagacggcgt ccgaccgcag 18120

catgacgagg atgttggcgc acttgatatc caggtggctg atcccgcagg tggtgtttaa 18180

aaacacaacg gcgcgggcca gctccgtgaa gcactggtgg agggccgtcg agaccgaggg 18240

gtttgttgtg cgcagggacg ccagttggcc gatatactta ccgaggtcca tgtcgtacgc 18300

ggggaacact atctgtcgtt gttgcagcga gaacccgagg ggcgcgatga agccgcggat 18360

gttgtgggtg cggccggcgc gtagaacgca ctccccgacc aacagggtcg cgatgagctc 18420

aacggcaaac cactcctttt cctttatggt cttaacggca agcttatgtt cgcgaatcag 18480

ttggacgtca ccgtatcccc cagacccccc gaagcttcgg gccccgggga tctcgagggt 18540

cgtgtagtgt agggcggggt tgatggcgaa cacggggctg catagcttgc ggatgcgcgt 18600

gagggtgagg atgtgcgagg gggacgaggg gggtgcggtt aacgccgcct gggatctgcg 18660

caggggcggg cggttcagtt tggccgccgt accgggcgtc tcgggggacg cgcggcgatg 18720

agacgagcgg ctcattcgcc atcgggatag tcccgcgcga agccgctcgc ggaggccgga 18780

tcggtggcgg gacccgtggg aggagcggga gacggcggcg tcctggagag aggggccgct 18840

ggggcgcccg gaggccccgt gggggttgga gtgtacgtag gatgcgagcc aatccttgaa 18900

ggaccgttgg cgtgcacctt gggggctgag gttagctgcc acatgaccag caggtcgctg 18960

tctgcgggac tcatccatcc ttcggccagg tcgccgtctc cccacagaga agcgttggtc 19020

gctgcttcct cgagttgctc ctcctggtcc gcaagacgat cgtccacggc gtccaggcgc 19080

tcaccaagcg ccggatcgag gtaccgtcgg tgtgcggtta gaaagtcacg acgcgccgct 19140

tgctcctcca cgcgaatttt aacacaggtc gcgcgctgtc gcatcatctc taagcgcgcg 19200

cgggacttta gccgcgcctc caattccaag tgggccgcct ttgcagccat aaaggcgcca 19260

acaaaccgag gatcttgggt gctgacgccc tcccggtgca gctgcagggt ctggtccttg 19320

taaatctcgg ctcggaggtg cgtctcggcc aggcgtcggc gcagggccgc gtgggcggca 19380

tctcggtcca ttccgccacc ctgcgggcga cccggggggt gctctgatag tctcgcgtgc 19440

ccaaggcccg tgatcggggt acttcgccgc cgcgacccgc cacccggtgt gcgcgatgtt 19500

tggtcagcag ctggcgtccg acgtccagca gtacctggag cgcctcgaga aacagaggca 19560

acttaaggtg ggcgcggacg aggcgtcggc gggcctcacc atgggcggcg atgccctacg 19620

agtgcccttt ttagatttcg cgaccgcgac ccccaagcgc caccagaccg tggtccctgg 19680

cgtcgggacg ctccacgact gctgcgagca ctcgccgctc ttctcggccg tggcgcggcg 19740

gctgctgttt aatagcctgg tgccggcgca actaaagggg cgtgatttcg ggggcgacca 19800

cacggccaag ctggaattcc tggcccccga gttggtacgg gcggtggcgc gactgcggtt 19860

taaggagtgc gcgccggcgg acgtggtgcc tcagcgtaac gcctactata gcgttctgaa 19920

tacgtttcag gccctccacc gctccgaagc ctttcgccag ctggtgcact ttgtgcggga 19980

ctttgcccag ctgctcaaaa cctccttccg ggcctccagc ctcacggaga ccacgggccc 20040

ccccaaaaaa cgggccaagg tggacgtggc cacccacggc cggacgtacg gcacgctgga 20100

gctgttccaa aaaatgatcc ttatgcacgc cacctacttt ctggccgccg tgctcctcgg 20160

ggaccacgcg gagcaggtca acacgttcct gcgtctcgtg tttgagatcc ccctgtttag 20220

cgacgcggcc gtgcgccact tccgccagcg cgccaccgtg tttctcgtcc cccggcgcca 20280

cggcaagacc tggtttctgg tgcccctcat cgcgctgtcg ctggcctcct ttcgggggat 20340

caagatcggc tacacggcgc acatccgcaa ggcgaccgag ccggtgtttg aggagatcga 20400

cgcctgcctg cggggctggt tcggttcggc ccgagtggac cacgttaaag gggaaaccat 20460

ctccttctcg tttccggacg ggtcgcgcag taccatcgtg tttgcctcca gccacaacac 20520

aaacgtaagt cctcttttct ttcgcatggc tctcccaagg ggccccgggt cgacccgacc 20580

cacacccacc cacccacata cacacacaac cagacgcggg aggaaagtct gccccgtggg 20640

cactgatttt tattcgggat cgcttgagga ggcccgggca acggcccggg caacggtggg 20700

gcaactcgta gcaaataggc gactgatgta cgaagagaag acacacaggc gccacccggc 20760

gctggtcggg gggatgttgt ccgcgccgca ccgtcccccg acgacctctt gcagacggtc 20820

cgtgatgcaa ggacggcggg gggcctgcag cagggtgacc gtatccacgg gatggccaaa 20880

gagaagcgga cacaggctag catccccctg gaccgccagg gtacactggg ccatcttggc 20940

ccacagacac ggggcgacgc agggacagga ctccgttacg acggaggaga gccacagtgc 21000

gttggcggaa tcgatgtggg gcggcggggc gcaggactcg cagccccccg ggtggttggt 21060

gatcctggcc aggagccatc ccagatggcg ggccctgctt cccggtggac agagcgaccc 21120

caggtcgctg tccatggccc agcagtagat ctggccgctg gggaggtgcc accaggcccc 21180

cgggcccaag gcgcagcacg cgcccggctc cgggggggtc ttcgcgggga ccagatacgc 21240

gccatccagc tcgccgacca ctggctcctc cgcgagctgt tcggtggttg ggtcgggggt 21300

ttcctccggg ggggtggccg cccgtatgcg tgcgaacgtg agggtgcaca ggagcggggt 21360

cagggggtgc gtcacgctcc ggaggtggac gatcgcgcag tagcggcgct cgcggttaaa 21420

gaaaaagagg gcaaagaagg tgttcggggg caaccgcagc gccttggggc gcgtcagata 21480

cagaaaaatc tcgcagaaga gggcgcgccc ggggtctggg ttaggaaggg ccacctgaca 21540

cagaggctcg gtgaggaccg ttagacaccg aaagatcttg agccgctcgt ccgcccgaac 21600

gacgcgccac acaaagacgg agttgacaat gcgcgcgata gagtcgacgt ccgtccccag 21660

gtcgtcgact ctatcgcgcg tgccgcgagc tccggcccgg gaatccggcc ggggcaaggt 21720

ccccggggga ccaggcggcg ccaggggccg ccggggtccc agctgcgcca tgccgggggc 21780

ggggggaggg caaaccccag aggcgggggc caacggcgcg gggaggagtg ggtgggcgag 21840

gtggccgggg gaaggcgccc gctagcgaga ccggccgttc ccggacgaca ccttgcgaca 21900

aaacctaagg acagcggccc gcgcgacggg gtccgagagg ctaaggtagg ccgcgatgtt 21960

aatggtgaac gcaaagccgc cgggaaagac aactatgcca cagaggcggc gattaaaccc 22020

caggcagagg taggcgtagc tttccccggg caggtattgc tcgcagaccc tgcgtggggc 22080

tgtggagggg acggcctcca tgaagcgaca tttactctgc tcgcgtttac tgacgtcacc 22140

atccatcgcc acggcgattg gacgattgtt aagccgcagc gtgtctccgc ttgtgctgta 22200

gtagtcaaaa acgtaatggc cgtcggagtc ggcaaagcgg gccgggaggt cgtcgccgag 22260

cgggacgacc cgccgccccc gaccgccccg tccccccagg tgtgccagga cggccagggc 22320

atacgcggtg tgaaaaaagg cgtcgggggc ggtcccctcg acggcgcgca tcaggttctc 22380

gaggagaatg gggaagcgcc tggtcacctc ccccaaccac gcgcgttggt cggggccaaa 22440

gtcatagcgc aggcgctgtg agattcgcgg gccgccctga agcgcggccc ggatggcctg 22500

gcccagggcc cggaggcacg ccagatgtat gcgcgcggta aaggcgacct cggcggcgat 22560

gtcaaagggc ggcaggacgg ggcgcgggtg gcgcaggggc acctcgagcg cgggaaagcg 22620

tagcagcagc tccgcctgcc cagcgggaga cagctggtgg gggcgcacga cgcgttctgc 22680

ggcgcaggcc tcggtcaggg ccgtggccag cgccgaggac agcagcggag ggcgggcgcg 22740

tcgcccgccc cacgccacgg agttctcgta ggagacgacg acgaagcgct gcttggttcc 22800

gtagtggtgg cgcaggacca cggagataga acgacggctc cacagccagt ccggccggtc 22860

gccgccggcc agggcttccc atccgcgatc caaccactcg accagcgacc gcggctttgc 22920

ggtaccaggg gtaagggtta gaacgtcgtt caggatgtcc tcgcccccgg gcccgtgggg 22980

cgctggggcc acaaagcggc ccccgccggg gggctccaga cccgccagca ccgcatctgc 23040

gtcagccgcc cccatggcgc ccccgctgac ggcctggtga accagggcgc cctggcgtag 23100

ccccgatgca acgccacagg ccgcacgccc ggtccgcgct cggaccgggt ggcggcgggt 23160

gacgtcctgc actgcccgct gaaccaacgc gaggatctcc tcgttctcct gtgcgatgga 23220

cacgtcctgg gccgcggtcg tgtcgccgcc gggggccgtc agctgctcct ccggggagat 23280

gggggggtcg gacgccccga cgatgggcgg gtctgcgggc gcccccgcgt ggggccgggc 23340

caagggctgc ggacgcgggg acgcgctttc ccccagaccc atggacaggt gggccgcagc 23400

ctccttcgcg gccggcgggg cggcggcgcc aagcagagcg acgtagcggc acaaatgccg 23460

acagacgcgc atgatgcgcg tgctgtcggc cgcgtagcgc gtgttggggg ggacgagctc 23520

gtcgtaacta aacagaatca cgcgggcaca gctcgccccc gagccccacg caaggcgcag 23580

cgccgccacg gcgtacgggt catagacgcc ctgcgcgtca cacaccacgg gcagggagac 23640

gaacaacccc ccggcgctgg acgcacgcgg aaggaggcca gggtgtgccg gcacgacggg 23700

ggccagaagc tcccccaccg catccgcggg cacgtaggcg gcaaacgccg tgcaccacgg 23760

ggtacagtcg ccggtggcat gagcccgagt ctggatttcg acctggaagt ttgcggccgt 23820

cccgagtccg gggcggccgc gcatcagggc ggccagaggg attcccgcgg ccgccaggca 23880

ctcgctggat atgatgacgt gaaccaaaga ccgagggccg acccgggccg tggccgagat 23940

cgtctggacc tcgttggcca agtgcgcgtt catggttcgg gggtgggtgt gggtgtgtag 24000

gcgatgcggg tcccccgagt ccgcgggaag ggcgtgggtt tggcgcgcgt atgcgtattc 24060

gccaacggag gcgtgcgtgc ttatgcgcgg cgcgtttctt ctgtctctag ggaatccgag 24120

gccaggactt taacctgctc tttgtcgacg aggccaactt tattcgcccg gatgcggtcc 24180

agacgattat gggctttctc aaccaggcca actgcaagat tatcttcgtg tcgtccacca 24240

acaccgggaa ggccagtacg agctttttgt acaacctccg cggggccgca gacgagcttc 24300

tcaacgtggt gacctatata tgcgatgatc acatgccgag ggtggtgacg cacacaaacg 24360

ccacggcctg ttcttgttat atcctcaaca agcccgtttt catcacgatg gacggggcgg 24420

ttcgccggac cgccgatttg tttctggccg attccttcat gcaggagatc atcgggggcc 24480

aggccaggga gaccggcgac gaccggcccg ttctgaccaa gtctgcgggg gagcggtttc 24540

tgttgtaccg cccctcgacc accaccaaca gcggcctcat ggcccccgat ttgtacgtgt 24600

acgtggatcc cgcgttcacg gccaacaccc gagcctccgg gaccggcgtc gctgtcgtcg 24660

ggcggtaccg cgacgattat atcatcttcg ccctggagca cttttttctc cgcgcgctca 24720

cgggctcggc ccccgccgac atcgcccgct gcgtcgtcca cagtctgacg caggtcctgg 24780

ccctgcatcc cggggcgttt cgcggcgtcc gggtggcggt cgagggaaat agcagccagg 24840

actcggccgt cgccatcgcc acgcacgtgc acacagagat gcaccgccta ctggcctcgg 24900

agggggccga cgcgggctcg ggccccgagc ttctcttcta ccactgcgag cctcccggga 24960

gcgcggtgct gtaccccttt ttcctgctca acaaacagaa gacgcccgcc tttgaacact 25020

ttattaaaaa gtttaactcc gggggcgtca tggcctccca ggagatcgtt tccgcgacgg 25080

tgcgcctgca gaccgacccg gtcgagtatc tgctcgagca gctaaataac ctcaccgaaa 25140

ccgtctcccc caacactgac gtccgtacgt attccggaaa acggaacggc gcctcggatg 25200

accttatggt cgccgtcatt atggccatct acctcgcggc ccaggccgga cctccgcaca 25260

cattcgctcc tatcacacgc gtctcgtgag cgcccaataa acacacccag gtatgctacg 25320

cacgaccacg gtgtcgtctg ttaagggggg ggggggaagg gggtgttggc gggaagcgtg 25380

ggaacacggg ggattctctc acgaccggca ccagtaccac ccccctgtga acacagaaac 25440

cccaacccaa atcccataaa catacgacac acaggcatat tttggaattt cttaggtttt 25500

tatttattta ggtatgctgg ggtttctccc tggatgccca cccccacccc cccgtgggtc 25560

tagccgggcc ttagggatag cgtataacgg gggccatgtc tccggaccgc acaacggccg 25620

cgccgtcaaa ggtgcacacc cgaaccacgg gagccagggc caaggtgtct cctagttggc 25680

ccgcgtgggt cagccaggcg acgagcgcct cgtaaagcgg cagccttcgc tctccatcct 25740

gcatcagggc cggggcttcg gggtgaatga gctgggcggc ctcccgcgtg acactctgca 25800

tctgcagtag agcgttcacg tacccgtcct gggcacttag cgcaaagagc cgggggatta 25860

gcgtaaggat gatggtggtt ccctccgtga tcgagtaaac catgttaagg accagcgatc 25920

gcagctcggc gtttacggga ccgagttgtt ggacgtccgc cagcagcgag aggcgactcc 25980

cgttgtagta cagcacgttg aggtctggca gccctccggg gtttctgggg ctggggttca 26040

ggtcccggat gcccctggcc acgagccgcg ccacgatttc gcgcgccagg ggcgatggaa 26100

gcggaacggg aaaccgcaac gtgaggtcca gcgaatccag gcgcacgtcc gtcgcttggc 26160

cctcgaacac gggcgggacg aggctgatgg ggtccccgtt acagagatct acgggggagg 26220

tgttgcgaag gttaacggtg ccggcgtggg tgaggcccac gtccaggggg caggcgacga 26280

ttcgcgtggg aagcacccgg gtgatgaccg cggggaagcg ccttcggtac gccagcaaca 26340

accccaacgt gtcgggactg acgcctccgg agacgaagga ttcgtgcgcc acgtcggcca 26400

gcgtcagttg ccggcggatg gtcggcagga ataccacccg cccttcgcag cgctgcagcg 26460

ccgccgcatc ggggcgcgag atgcccgagg gtatcgcgat gtcagtttca aagccgtccg 26520

ccagcatggc gccgatccac gcggcaggga gtgcagtggt ggttcgggtg gcgggaggag 26580

cgcggtgggg gtcagcggcg tagcagagac gggcgaccaa cctcgcatag gacggggggt 26640

gggtcttagg gggttgggag gcgacaggga ccccagagca tgcgcgggga ggtctgtcgg 26700

gcccagacgc accgagagcg aatccgtccg cggagtcccg gcttgggttt tatggggccc 26760

ggccctcgga atcgcggctt gtcggcgggg acaaaggggg cggggctagg ggcttgcgga 26820

aacagaagac gcgtgggata aaagaatcgc actaccccaa ggaagggcgg ggcggtttat 26880

tacagagcca gtcccttgag cggggatgcg tcatagacga gatactgcgc gaagtgggtc 26940

tcccgcgcgt gggcttcccc gttgcgggca ctgcggagga gggcggggtc gctggcgcag 27000

gtgagcgggt aggcctcctg aaacaggcca cacgggtcct ccacgagttc gcggcacccc 27060

ggggggcgct taaactgtac gtcgctggcg gcggtggccg tggacaccgc cgaacccgtc 27120

tccacgatca ggcgctccag gcagcgatgt ttggcggcga tgtcggccga cgtaaagaac 27180

ttaaagcagg ggctgagcac cggcgaggcc ccgttgaggt ggtaggcccc gttatagagc 27240

aggtccccgt acgaaaatcg ctgcgacgcc cacgggttgg ccgtggccgc gaaggcccgg 27300

gacgggtcgc tctggccgtg gtcgtacatg agggcggtga catccccctc cttgtccccc 27360

gcgtaaacgc ccccggcggc gcgtccccgg gggttgcagg gccggcggaa gtagttgacg 27420

tcggtcgaca cgggggtggc gataaactca cacacggcgt cctggccgtg gtccatccct 27480

gcgcgccgcg gcacctgggc gcacccgaac acggggacgg gctgggccgg ccccaggcgg 27540

tttcccgcca cgaccgcgtt ccgcaggtac acggctgccg cgttgtccag gagaggggga 27600

gccccgcggc ccaggtaaaa gttttgggga aggttgccca tgtcggtgac ggggttgcgg 27660

acggttgccg tggccacgac ggcggtgtag cccacgccca ggtccacgtt cgcgcgcggc 27720

tgggtgagcg tgaagtttac ccccccgcca gtttcgtgcc gggccacctg gagctggccc 27780

aggaagtacg cctccgacgc gcgctccgag aacagcacgt tctcagtcac aaagcggtcc 27840

tgtcggacga cggtgaaccc aaacccggga tggaggcccg tcttgagctg atgatgcaag 27900

gccacgggac tgatcttgaa gtaccccgcc atgagcgcgt aggtcagcgc gttctccccg 27960

gccgcgctct cgcggacgtg ctgcacgacg ggctgtcgga tcgacgaaaa gtagttggcc 28020

cccagagccg gggggaccag ggggacctgc cgcgacaggt cgcgcagggc cggggggaaa 28080

ttgggcgcgt tcgccacgtg gtcggccccg gcgaacagcg cgtggacggg gagggggtaa 28140

aaatagtcgc cattttggat ggtatggtcc agatgctggg gggccatcag caggattccg 28200

gcgtgcaacg ccccgtcgaa tatgcgcatg ttggtggtgg acgcggtgtt ggcgcccgcg 28260

tcgggcgccg ccgagcagag cagcgccgtt gtgcgttcgg ccatgttgtg ggccagcacc 28320

tgcagcgtga gcatggcggg cccgtccact accacgcgcc cgttgtgaaa catggcgttg 28380

accgtgttgg ccaccagatt ggccgggtgc agggggtgcg cggggtccgt cacggggtcg 28440

ctggggcact cctcgccggg ggcgatctcc gggaccacca tgttctgcag ggtggcgtat 28500

acgcggtcga agcgaacccc cgcggtgcag cagcggcccc gcgagaaggc gggcaccatc 28560

acgtagtagt aaatcttgtg gtgcacggtc cagtccgccc cccggtgcgg ccggtcatcc 28620

gcggcgtccg cggctcgggc ctgggtgttg tgcagcagct ggccgtcgtt gcggttgaag 28680

tccgcggtcg ccacgttaca tgccgccgcg tacacggggt cgtggccccc cgcgctaacc 28740

cggcagtcgc gatggcggtc cagggccgcg cgccgcatca gggcgtcaca gtcccacacg 28800

aggggtggca gcagcgccgg gtctcgcatt aggtgattca gctcggcttg cgcctgcccg 28860

cccagctccg ggccggtcag ggtaaagtca tcaaccagct gggccagggc ctcgacgtgc 28920

gccaccaggt cccggtacac ggccatgcac tcctcgggaa ggtctccccc gaggtaggtc 28980

acgacgtacg agaccagcga gtagtcgttc acgaacgccg cgcaccgcgt gttgttccag 29040

tagctggtga tgcactggac cacgagccgg gccagggcgc agaagacgtg ctcgctgccg 29100

tgtatggcgg cctgcagcag gtaaaacacc gccgggtagt tgcggtcgtc gaacgccccg 29160

cgaacggcgg cgatggtggc gggggccatg gcgtggcgtc ccacccccag ctccaggccc 29220

cgggcgtccc ggaacgccgc cggacatagc gccaggggca agttgccgtt caccacgcgc 29280

caggtggcct ggatctcccc cgggccggcc gggggaacgt ccccccccgg cagctccacg 29340

tcggccaccc ccacaaagaa gtcgaacgcg gggtgcagct caagagccag gttggcgttg 29400

tcgggctgca taaactgctc cggggtcatc tggccttccg cgacccatcg gacccgcccg 29460

tgggccaggc gctgccccca ggcgttcaaa aacagctgct gcatgtctgc ggcggggccg 29520

gccggggccg ccacgtacgc cccgtacgga ttggcggctt cgacggggtc gcggttaagg 29580

cccccgaccg ccgcgtcaac gttcatcagc gaagggtggc acacggtccc gatcgcgtgt 29640

tccagagaca ggcgcagcac ctggcggtcc ttcccccaaa aaaacagctg gcggggcggg 29700

aaggcgcggg gatccgggtg gccgggggcg gggactaggt ccccggcgtg cgcggcaaac 29760

cgttccatga ccggattgaa caggcccagg ggcaggacga acgtcaggtc catggcgccc 29820

accagggggt agggaacgtt ggtggcggcg tagatgcgct tctccagggc ctccagaaag 29880

accagcttct cgccgatgga caccagatcc gcgcgcacgc gcgtcgtctg gggggcgctc 29940

tcgagctcgt ccagcgtctg ccggttcagg tcgagctgct cctcctgcat ctccagcagg 30000

tggcggccca cgtcgtccag acttcgcacg gccttgccca tcacgagcgc cgtgaccagg 30060

ttggccccgt tcaggaccat ctcgccgtac gtcaccggca cgtcggcttc ggtgtcctcc 30120

actttcagga aggactgcag gaggcgctgt ttgatcgggg cggtggtgac gagcaccccg 30180

tcgaccggcc gcccgcgcgt gtcggcatgc gtcagacggg gcacggccac ggagggctgc 30240

gtggccgtgg tgaggtccac gagccaggcc tcgacggcct cccggcggtg gcccgccttg 30300

cccaggaaaa agctcgtctc gcagaagctt cgctttagct cggcgaccag ggtcgcccgg 30360

gccaccctgg tggccaggcg gccgttgtcc aggtatcgtt gcatcggcaa caacaaagcc 30420

aggggcggcg ccttttccag cagcacgtgc agcatctggt cggccgtgcc gcgctcaaac 30480

gccccgagga cggcctggac gttgcgagcg agctgttgga tggcgcgcaa ctggcgatgc 30540

gcgccgatac ccgtcccgtc cagggcctcc cccgtgagca gggcgatggc ctcggtggcc 30600

aggctgaagg cggcgttcag ggcccggcgg tcgataatct tggtcatgta attgtgtgtg 30660

ggttgctcga tggggtgcgg gccgtcgcgg gcaatcagcg gctggtggac ctcgaactgt 30720

acgcgcccct cgttcatgta ggccagctcc ggaaacttgg tacacacgca cgccaccgac 30780

aacccgagct ccagaaagcg cacgagcgac agggtgttgc aatacgaccc cagcagggcg 30840

tcgaactcga cgtcgtacag gctgtttgca tcggagcgca cgcgggaaaa aaaatcaaac 30900

aggcgtcgat gcgacgccac ctcgatcgtg ctaaggaggg acccggtcgg caccatggcc 30960

gcggcatacc ggtatcccgg agggtcgcgg ttgggagcgg ccatggggtc gcgtggagat 31020

cggctgtctc tagcgatatt ggcccgggga ggctaagatc caccccaacg cccggccacc 31080

cgtgtacgtg cccgacggcc caaggtccac cgaaagacac gacgggcccg gacccaaaaa 31140

ggcgggggat gctgtgtgag aggccgggtg ccggtcgggg gggaaaggca ccgggagaag 31200

gctgcggcct cgttccagga gaacccagtg tccccaacag acccggggac gtgggatccc 31260

aggccttata tacccccccc cccgccccac ccccgttaga acgcgacggg tgcattcaag 31320

atggccctgg tccaaaagcg tgccaggaag aaattggcag aggcggcaaa gctgtccgcc 31380

gccgccaccc acatcgaggc cccggccgcg caggctatcc ccagggcccg tgtgcgcagg 31440

ggatcggtgg gcggcagcat ttggttggtg gcgataaagt ggaaaagccc gtccggactg 31500

aaggtctcgt gggcggcggc gaacaaggca cacagggccg tgcctcccaa aaacacggac 31560

atcccccaaa acacgggcgc cgacaacggc agacgatccc tcttgatgtt aacgtacagg 31620

aggagcgccc gcaccgccca cgtaacgtag tagccgacga tggcggccag gatacaggcc 31680

ggcgccacca cccttccggt cagcccgtaa tacatgcccg ctgccaccat ctccaacggc 31740

ttcaggacca aaaacgacca aaggaacaga atcacgcgct ttgaaaagac cggctgggta 31800

tggggcggaa gacgcgagta tgccgaactg acaaaaaaat cagaggtgcc gtacgaggac 31860

aatgaaaact gttcctccag cggcagttct ccctcctccc ccccgaaggc ggcctcgtcg 31920

accagatctc gatccaccag aggaaggtca tcccgcatgg tcatggggtg tgcggtggag 31980

gtggggagac cgaaaccgca aagggtcgct tacgtcagca ggatcccgag atcaaagaca 32040

cccgggttct tgcacaaaca ccacccgggt tgcatccgcg gaggcgagtg ttttgataag 32100

gccgttccgc gccttgatat aacctttgat gttgaccaca aaacccggaa tttacgccta 32160

cgccccaatg cccacgcaag atgaggtagg taaccccccc gtgggtgtga cgttgcgttt 32220

agttcattgg aggccaaggg gaaaaatggg gtggggagga aacggaaaac ccagtaggcc 32280

gtgtcgggaa cacgcccggg gttgtcctca aaaggcaggg tccatactac ggaagccgtc 32340

gttgtattcg agacctgcct gtgcaacgca cgtcggggtt gcctgtgtcc ggttcggccc 32400

ccaccgcgtg cggcacgcac gaggacgagt ccgcgtgctt tattggcgtt ccaagcgttg 32460

ccctccagtt tctgttgtcg gtgttccccc atacccacgc ccacatccac cgtagggggc 32520

ctctgggccg tgttacgtcg ccgcccgcga tggagcttag ctacgccacc accatgcact 32580

accgggacgt tgtgttttac gtcacaacgg accgaaaccg ggcctacttt gtgtgcgggg 32640

ggtgtgttta ttccgtgggg cggccgtgtg cctcgcagcc cggggagatt gccaagtttg 32700

gtctggtcgt tcgagggaca ggcccagacg accgcgtggt cgccaactat gtacgaagcg 32760

agctccg 32767

<210> 844

<211> 32767

<212> ДНК

<213> Искусственная

<400> 844