ЭКСТРАКТ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО БИЛОБА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2022 года по МПК A61K36/16 A61K31/352 A61P9/00 B01D11/02 

Область техники

[0001] Настоящее изобретение относится к технической области традиционной китайской медицины, в частности, к сложному эфиру кетона гинкго билоба и способу его получения.

Уровень техники

[0002] По мере старения населения Китая осведомленность людей о профилактике и лечении сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний постепенно растет. Листья гинкго билоба - это сухие листья Ginkgo biloba, сладкие, горькие, вяжущие и успокаивающие, они имеют отношение к каналам сердца и легких. Согласно записям «Китайской традиционной медицины», листья гинкго билоба могут «ущемлять ци легких, облегчать кашель и астму, а также останавливать образование белых пятен и помутнение». Сложный кетоновый эфир гинкго билоба в качестве исходного материала представляет собой экстракт листьев гинкго билоба, разработанный в Китае. Это экстракт сушеных листьев Ginkgo biloba L, растения семейства Ginkgo. Сложный кетоновый эфир гинкго билоба представляет собой порошок от коричнево-желтого до желто-коричневого цвета с уникальным ароматом и горьким вкусом. Сложный кетоновый эфир гинкго билоба в основном применяют для лечения сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний, а также неврологических заболеваний со значительными лечебными эффектами. Из-за замечательного лечебного эффекта сложных кетоновых эфиров гинкго билоба фальсификация является серьезной проблемой в процессе производства соответствующих продуктов на рынке. Например, флавоноидные агликоны, такие как кверцетин, добавляют для увеличения определяемого общего содержания флавоноловых гликозидов, а экстракт коры корня гинкго билоба добавляют для повышения содержания лактона. Из-за существующих на рынке поддельных продуктов на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба необходимо провести углубленное исследование сложного кетонового эфира гинкго билоба, чтобы сделать качество продукта более стабильным, а также необходимо установить производственные стандарты для нормализации технологии производства и предотвращения фальсификации продуктов.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] В настоящем описании предлагается сложный кетоновый эфир гинкго билоба и способ его получения для решения проблемы, заключающейся в том, что традиционное лекарственное средство на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба в больших количествах имеет нестабильное качество и плохо соответствует требованиям по качеству .

[0004] Первый аспект настоящего изобретения относится к сложному кетоновому эфиру гинкго билоба, который получают из листьев гинкго билоба путем экстракции спиртом, и который удовлетворяет следующим условиям:

[0005] 1) содержание рутина (C₂₇H₃₀O₁₆, номер CAS 153-18-4) меньше или равно 4,0 %;

[0006] 2) содержание кверцетина (C₁₅H₁₀O₇, номер CAS 117-39-5) меньше или равно 0,4 %;

[0007] 3) содержание билобалида (C₁₅H₁₈O₈, номер CAS 33570-04-6) составляет 2,6-4,8%;

[0008] 4) содержание гинкголида J (C₂₀H₂₄O₁₀, номер CAS 107438-79-9) составляет 0,1-0,5%;

[0009] 5) остаточное содержание этанола меньше или равно 0,5%;

[0010] 6) содержание бифлавоноидов меньше или равно 0,02 %, бифлавоноиды включают аментофлавон (C₃₀H₁₈O₁₀, номер CAS 1617-53-4), билобетин (C₃₁H₂₀O₁₀, номер CAS: 521-32-4) и гинкгетин (C₃₂H₂₂O₁₀, номер CAS 481-46-9);

[0011] 7) содержание генистина (номер CAS 529-59-9) равно 0, а содержание гинкголида M (номер CAS 15291-78-8) равно 0.

[0012] Вышеупомянутая спиртовая экстракция относится к способу экстракции сложных кетоновых эфиров гинкго билоба из листьев гинкго билоба спиртовыми растворителями.

[0013] Предпочтительно, содержание рутина меньше или равно 3,2 %.

[0014] Предпочтительно, содержание кверцетина меньше или равно 0,38%.

[0015] Предпочтительно, остаточное содержание этанола меньше или равно 0,2%.

[0016] Предпочтительно, содержание билобалида составляет 3,6-4,8%.

[0017] Предпочтительно, содержание гинкголида J составляет 0,3-0,5%.

[0018] Предпочтительно, содержание бифлавоноидов меньше или равно 0,01%.

[0019] Предпочтительно, общее содержание флавоноидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 44,0-55,0% при использовании рутина (C₂₇H₃₀O₁₆) в качестве стандартного образца.

[0020] Более предпочтительно, общее содержание флавоноидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 49,0-55,0% при использовании рутина в качестве стандартного образца. Общее содержание флавоноидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба рассчитывается в соответствии с Общими правилами 0401 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0021] Предпочтительно, чтобы содержание терпеновых лактонов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляло 6,0-12,0% в расчете на общее содержание билобалида (C₁₅H₁₈O₈, номер CAS 33570-04-6), гинкголида A (C₂₀H₂₄O₉, номер CAS 15291-75-5), гинкголида B (C₂₀H₂₄O₁₀, номер CAS 15291-77-7) и гинкголида C (C₂₀H₂₄O₁₁, номер CAS 15291-76-6). Содержание терпеновых лактонов рассчитывается в пересчете на сухие продукты.

[0022] Более предпочтительно, содержание терпеновых лактонов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 9,0-12,0% в расчете на общее содержание билобалида, гинкголида A, гинкголида B и гинкголида C.

[0023] Предпочтительно, общее содержание гинкголевой кислоты в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 5 мг/кг.

[0024] Более предпочтительно, общее содержание гинкголевой кислоты в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 1 мг/кг.

[0025] Более предпочтительно, общее содержание гинкголевых кислот в сложном кетоновом эфире гинкго билоба характеризуется общим содержанием гинкголевой кислоты C13:0 (C₂₀H₃₂O₃, номер CAS 20261-38-5), гинкголевой кислоты C15:1 (C₂₂H₃₄O₃, номер CAS 22910-60-7) и гинкголевой кислоты C17:1 (C₂₄H₃₈O₃, номер CAS 111047-30-4). Общее содержание гинкголевых кислот рассчитывается в соответствии с Общими правилами 0512 и 0431 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0026] Предпочтительно, общее содержание флавонолгликозидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 24,0-35,0%. Общее содержание флавонолгликозидов рассчитывают в пересчете на сухие продукты.

[0027] Более предпочтительно, общее содержание флавонолгликозидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 30,0-35,0%.

[0028] Более предпочтительно, флавонолгликозиды представляют собой в основном гликозиды, образованные кверцетином, кемпферидом и изорамнетином в виде агликонов, и содержат свободный кверцетин, кемпферид и изорамнетин.

[0029] Более предпочтительно, общее содержание флавонолгликозидов рассчитывается по формуле (1): общее содержание флавонолгликозидов = (содержание кверцетина + содержание кемпферида + содержание изорамнетина) × 2,51.

[0030] Предпочтительно, отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду (C₁₆H₁₂O₆, номер CAS 491-54-3) в сложном кетоновом эфире гинкго билоба составляет 0,8-1,2, а отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина (C₁₆H₁₂O₇, номер CAS 207-545- 5480-19-3) к кверцетину составляет более 0,15. Три агликона (кверцетин, кемпферид и изорамнетин), полученные после гидролиза флавоноидов гинкго в сложном кетоновом эфире гинкго билоба, имеют определенное пропорциональное соотношение, которое в некоторой степени может отражать и определять, нормализованы ли исходные материалы и производственные процессы, и которое также может использоваться для контроля качества продукта. Отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпферолу и изорамнетина к кверцетину рассчитывают согласно традиционным методам определения общего количества флавонолгликозидов.

[0031]

[0032] Предпочтительно, паттерн спектра сложного кетонового эфира гинкго билоба включает четыре общих характеристических пика, как показано на фиг. 1: характеристический пик 1 - это характеристический пик рутина, пик 6 - это характеристический пик кверцетина, пик 7 - это характеристический пик кемпферида, а пик 8 - это характеристический пик изорамнетина.

[0033] Предпочтительно, сходство между паттерном спектра сложного кетонового эфира гинкго билоба и хроматограммой тестируемого продукта больше или равно 0,90. Сходство между паттернами спектров тестируемых продуктов и сложного кетонового эфира гинкго билоба рассчитывают и сравнивают в соответствии с «Системой оценки сходства для хроматографических паттернов в традиционной китайской медицине» (версия 2.0).

[0034] Предпочтительно, содержание воды в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 5,0%. Содержание воды рассчитывается согласно второму методу Общих правил 0832 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0035] Предпочтительно, содержание зольного остатка в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 0,5%. Зольный остаток рассчитывается в соответствии с Приложением IX J Китайской фармакопеи (издание 2010 г.), том I.

[0036] Более предпочтительно, содержание зольного остатка в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 0,2%.

[0037] Предпочтительно, содержание циклогексана в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 0,002%. Содержание остатка циклогексана рассчитывается согласно второму методу Общих правил 0861 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0038] Более предпочтительно, содержание остатка циклогексана в сложном кетоновом эфире гинкго билоба меньше или равно 0,001%.

[0039] Содержание рутина, кверцетина, билобалида, гинкголида J, общее содержание флавонолгликозида и содержание терпенлактона, а также паттерн спектра кетонового эфира гинкго билоба в указанном выше кетоновом эфире гинкго билоба определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) согласно Общим правилам 0512 в Китайской фармакопее (издание 2015 г.), том IV. Содержание дифлавоноидов, общее содержание гинкголевых кислот, содержание гинкголида М и генистина определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС).

[0040] Предпочтительно, в сложном кетоновом эфире гинкго билоба содержание свинца (Pb) меньше или равно 3,0 мг/кг, содержание кадмия (Cd) меньше или равно 0,2 мг/кг, содержание мышьяка (As) меньше или равно 2,0 мг/кг, содержание ртути (Hg) меньше или равно 0,1 мг/кг, а содержание меди (Cu) меньше или равно 20 мг/кг.

[0041] Содержание свинца, кадмия, мышьяка, ртути и меди в сложном кетоновом эфире гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения свинца, кадмия, мышьяка, ртути и меди, описанным в Общих правилах 2321 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.).

[0042] Предпочтительно, содержание остатков пестицидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба является следующим: в сложном кетоновом эфире гинкго билоба общее содержание BHC (гамма-изомер бензолгексахлорида) (CAS № 58-89-9) меньше или равно 0,2 мг/кг, общее содержание DDT (CAS № 50-29-3) меньше или равно 0,2 мг/кг, содержание пентахлорнитробензола (№ CAS 82-68-8) меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание дихлорфоса (№ CAS 62-73-7) меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание метамидофоса (№ CAS 10265-92-6) меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание ацефата (№ CAS 30560-19-1) меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание этиона (№ CAS 563-12-2) меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание ометоата (CAS № 1113-02-6) меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание диазинона (CAS № 333-41-5) меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание метидатиона (CAS № 950-37-8) меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание монокротофоса (CAS № 6923-22-4) меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание диметоата (CAS № 60-51-5) меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание паратион-метила (CAS № 298-00-0) меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание циперметрина (CAS № 52315-07-8) меньше или равно 1 мг/кг, содержание фенвалерата (CAS № 51630-58-1) меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание дельтаметрина (CAS № 52918-63-5) меньше или равно 0,5 мг/кг.

[0043] Содержание вышеупомянутых остатков пестицидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения остатков пестицидов, описанным в Общих правилах 2341 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0044] Предпочтительно, в каждых 1000 г кетонового эфира гинкго билоба общее содержание афлатоксинов меньше или равно 4 мкг, а содержание афлатоксина B1 меньше или равно 2 мкг. Афлатоксины включают афлатоксин G2, афлатоксин G1, афлатоксин B2 и афлатоксин B1.

[0045] Содержание афлатоксинов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения афлатоксина, описанным в Общих правилах 2351 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0046] Предпочтительно, листья гинкго билоба представляют собой высушенные листья саженцев гинкго билоба. Листья саженцев гинкго билоба - это листья не взрослых деревьев гинкго, которые высаживают с целью сбора листьев гинкго билоба.

[0047] Более предпочтительны следующие условия высушивания: температура высушивания составляет 140-160°C, а время высушивания составляет 6-15 минут.

[0048] Более предпочтительно, листья саженцев гинкго билоба отвечают следующим требованиям:

[0049] а) общее содержание флавонолгликозидов больше или равно 0,85%;

[0050] b) содержание терпеновых лактонов больше или равно 0,40%;

[0051] c) общее содержание зольного вещества меньше или равно 10,0%;

[0052] d) содержание нерастворимой в кислоте золы меньше или равно 2,0%;

[0053] e) содержание экстрагируемого вещества больше или равно 25,0%;

[0054] f) отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду составляет 0,65-1,2, а отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину составляет более 0,15;

[0055] g) содержание примесей меньше или равно 2,0%;

[0056] h) содержание воды меньше или равно 12,0%;

[0057] i) содержание остатка диоксида серы меньше или равно 150 мг/кг.

[0058] Определение общего содержания флавонолгликозидов и терпеновых лактонов в листьях саженцев гинкго билоба такое же, как и для кетонового эфира гинкго билоба, упомянутого выше. Определение отношения площадей хроматографических пиков флавоноидных агликонов в листьях саженцев гинкго билоба (то есть отношения площадей хроматографических пиков кверцетина, кемпферида и изорамнетина) такое же, как у вышеупомянутого кетонового эфира гинкго билоба.

[0059] Общее содержание золы и содержание нерастворимой в кислоте золы в листьях саженцев гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения золы, описанным в Общих правилах 2302 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание экстрагируемого вещества в листьях саженцев гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения экстрагируемого вещества, описанным в Общих правилах 2201 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание примесей в листьях саженцев гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения примесей, описанным в Общих правилах 2301 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание воды в листьях саженцев гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения экстракта, описанным в Общих правилах 0832 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание остатка диоксида серы в листьях саженцев гинкго билоба определяют в соответствии с методом определения остаточного содержания диоксида серы, описанным в Общих правилах 2331 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[0060] Все вышеуказанные проценты являются массовыми процентами.

[0061] Согласно второму аспекту настоящего изобретения предложен способ получения сложного кетонового эфира гинкго билоба, который включает следующие операции:

[0062] 1) добавление водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, нагревание с обратным холодильником для экстракции и затем получение фильтрата фильтрованием;

[0063] 2) концентрирование фильтрата и выполнение водного осаждения, центрифугирование супернатанта для получения центрифужной жидкости;

[0064] 3) загрузка центрифужной жидкости в колонку с макропористой смолой, затем промывка водой и элюирование растворителем для получения первого элюента; первый элюент включает первый элюент с низкой концентрацией растворителя и первый элюент с высокой концентрацией растворителя;

[0065] 4) загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, затем промывка водой и элюирование этанолом для получения второго элюента;

[0066] 5) объединение и концентрирование второго элюента с первым элюентом с высокой концентрацией растворителя, и затем экстракция, высушивание, измельчение, просеивание и перемешивание для получения желаемого кетонового эфира гинкго билоба.

[0067] Предпочтительно, на этапе 1) измельченные листья гинкго билоба получают путем измельчения листьев гинкго билоба.

[0068] Предпочтительно, в операции 1) получение фильтрата включает следующее:

[0069] А) добавление 60% водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, нагревание с обратным холодильником для экстракции и затем получение фильтрата фильтрованием;

[0070] B) добавление воды к остаточному остатку лекарственного средства после фильтрации в операции A), нагревание с обратным холодильником для экстракции и затем получение второго фильтрата путем фильтрации;

[0071] C) объединение и концентрирование в густую пасту второго фильтрата в операции B) и первого фильтрата в операции A), растворение, охлаждение и фильтрование для получения желаемого фильтрата.

[0072] Более предпочтительно, в операции А) условия нагревания с обратным холодильником для экстракции следующие: 2-кратная экстракция; 3 ч на каждую экстракцию.

[0073] Более предпочтительно, в операции B) условия нагревания с обратным холодильником для экстракции следующие: 1-кратная экстракция; 0,5 ч на каждое время экстракции.

[0074] Более предпочтительно, в операции B) вода представляет собой очищенную воду.

[0075] Более предпочтительно, в операции C) объединение и концентрирование выбирают из одного из способа концентрирования после объединения или способа объединения после концентрирования. Способ концентрирования после объединения заключается в объединении второго фильтрата с первым фильтратом и последующего концентрирования. Способ объединения после концентрирования заключается в том, чтобы сначала сконцентрировать первый фильтрат, затем объединить со вторым фильтратом и продолжить концентрирование.

[0076] Более предпочтительно, в операции C) растворение представляет собой растворение с использованием горячей воды. Горячая вода - это очищенная вода, нагретая до 60-100°C.

[0077] Предпочтительно, на этапе 2) фильтрат концентрируют, чтобы он не имел запаха спирта.

[0078] Предпочтительно, в операции 2) относительная плотность концентрированного фильтрата составляет 1,04-1,08.

[0079] Предпочтительно, в операции 2) очищенная вода, добавляемая при осаждении воды, в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба. В частности, то, что добавленная очищенная вода в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, означает, что на каждый 1 г порошка листьев гинкго билоба добавляют 1,5-2,5 мл очищенной воды.

[0080] Предпочтительно, в операции 2) осаждение в воде представляет собой межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°C в течение 12-24 часов.

[0081] Предпочтительно, в операции 2) условия центрифугирования следующие: скорость центрифугирования составляет 13000-15000 об/мин, и время центрифугирования на 3-5 л надосадочной жидкости составляет 0,75-1,25 мин.

[0082] Более предпочтительно, условия центрифугирования следующие: скорость центрифугирования составляет 14000 об/мин, а время центрифугирования на 3-5 л надосадочной жидкости составляет 1,00 мин.

[0083] В операции 2) вышеупомянутые концентрирование, осаждение в воде и центрифугирование могут обеспечить оптимизацию условий, обоспечивающих качество кетонового эфира гинкго билоба, полученного в соответствии с настоящим изобретением, так что качество кетонового эфира гинкго билоба будет лучше.

[0084] Предпочтительно, в операции 3) промывка водой представляет собой сначала прямую промывку очищенной водой в течение 1-2 часов, а затем обратную промывку в течение 0,5-1,5 часов. Промывка водой может обеспечить оптимизацию условий, обеспечивающих качество, таких как гинкголевые кислоты и зольного остатка в сложном кетоновом эфире гинкго билоба, полученном в соответствии с настоящим изобретением, так что качество кетонового эфира гинкго билоба будет лучше.

[0085] Более предпочтительно, промывка водой представляет собой сначала прямую промывку очищенной водой в течение 1,5 часов, а затем обратную промывку в течение 1 часа.

[0086] Предпочтительно, в операции 3) элюирование растворителем представляет собой элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола последовательно для получения 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно.

[0087] Предпочтительно, в операции 3) первый элюент с высокой концентрацией растворителя представляет собой 50% этанольный элюент.

[0088] Предпочтительно, в операции 3) первый элюент с низкой концентрацией растворителя представляет собой объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента.

[0089] Предпочтительно, в операции 4) промывка водой представляет собой прямую промывку с использованием очищенной воды, в 0,5-2 раза превышающей объем полиамидной колонки. Более предпочтительно, промывка водой представляет собой прямую промывку с использованием очищенной воды, по объему совпадающей с объемом полиамидной колонки. Промывка водой позволяет дополнительно удалить примеси, в том числе гинкголевую кислоту, из кетонового эфира гинкго билоба.

[0090] Предпочтительно, в операции 4) первый элюент с низкой концентрацией растворителя концентрируют, чтобы не было запаха спирта, перед загрузкой в полиамидную колонку.

[0091] Предпочтительно, в операции 4) второй элюент представляет собой этанольный элюент.

[0092] Предпочтительно, в операции 5) объединение и концентрирование выбирают из одного из способа концентрирования после объединения или способа объединения после концентрирования. Способ концентрирования после объединения заключается в объединении второго элюента с первым элюентом с высокой концентрацией растворителя, и затем концентрированием. Способ объединения после концентрирования заключается в том, чтобы сначала сконцентрировать первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а затем объединить его со вторым элюентом и продолжить концентрацию.

[0093] Предпочтительно, в операции 5) второй элюент и первый элюент с высокой концентрацией растворителя концентрируют, чтобы не было запаха спирта.

[0094] Предпочтительно, в операции 5) экстракцию проводят с использованием циклогексана в качестве растворителя. После экстракции циклогексановый экстракт отбрасывают.

[0095] Предпочтительно, в операции 5) высушивание выбирают из распылительной сушки или вакуумной сушки.

[0096] Более предпочтительно, перед вакуумной сушкой концентрированный раствор необходимо сконцентрировать до густой пасты.

[0097] Предпочтительно, в операции 5) просеивание осуществляют через сито в 80-100 меш. Более предпочтительно, просеивание осуществляют через сито в 90-100 меш. Наиболее предпочтительно, просеивание осуществляют через сито в 100 меш. Просеивание может гарантировать, что размер частиц нерасфасованного лекарственного средства на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба, полученного в соответствии с настоящим описанием, будет более мелким, так что качество сложного кетонового эфира гинкго билоба будет лучше.

[0098] Предпочтительно, в операции 5) условия смешивания следующие: смесительное оборудование представляет собой полный смеситель; скорость перемешивания 10-12 об/мин; время перемешивания 1,5-2,5 часа. Смешивание может обеспечить лучшую однородность нерасфасованного лекарственного средства на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба, полученного согласно настоящему описанию, так что качество сложного кетонового эфира гинкго билоба будет лучше.

[0099] Более предпочтительно, условия для смешивания следующие: смесительное оборудование представляет собой полный смеситель; скорость перемешивания 11 об/мин; время перемешивания 2 часа.

[00100] Третий аспект настоящего изобретения обеспечивает применение способа получения кетонового эфира гинкго билоба для получения кетонового эфира гинкго билоба.

[00101] Четвертый аспект настоящего изобретения относится к препарату на основе сложного эфира кетона гинкго билоба, который получают из указанного выше лекарственного средства на основе сложного эфира кетона гинкго билоба.

[00102] Предпочтительно, препарат выбран из одного из таблеток, капсул, гранул, пилюль, порошков, пероральных жидкостей, инъекций или фармацевтических препаратов для наружного применения.

[00103] Как упомянуто выше, в настоящем описании предложен кетоновый эфир гинкго билоба и способ его получения. Благодаря оптимизированным операциям и условиям приготовления можно получить высококачественное лекарственное средство на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба. По сравнению с кетоновым эфиром гинкго билоба, полученным традиционными способами, кетоновый эфир гинкго билоба по настоящему изобретению имеет стабильное качество, низкую скорость разложения и хорошую однородность в различных партиях нерасфасованных лекарственных средств. При этом нерасфасованное лекарственное средство на основе сложного эфира кетона гинкго билоба, полученное способом по настоящему раскрытию, применяют для приготовления таких препаратов, как таблетки, капсулы, гранулы, пилюли, порошки, пероральные жидкости, инъекции или фармацевтические препараты для наружного применения и т. д., и имеет превосходную стабильность и однородность.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[00104] На фиг. 1 показан паттерн спектра сложного эфира кетона гинкго билоба согласно настоящему раскрытию; в спектре 1: рутин; 6: кверцетин; 7: кемпферид; 8: изорамнетин.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[00105] Настоящее раскрытие дополнительно описывается ниже со ссылкой на конкретные варианты осуществления. Следует понимать, что варианты осуществления предназначены только для описания настоящего раскрытия, а не для ограничения объема настоящего раскрытия.

[00106] Варианты осуществления настоящего раскрытия будут описаны ниже. Специалисты в данной области техники могут легко понять другие преимущества и эффекты настоящего раскрытия в соответствии с содержанием, раскрытым в описании. Настоящее раскрытие также может быть реализовано или применено с помощью других различных иллюстративных вариантов осуществления. Различные модификации или изменения также могут быть внесены во все детали описания на основе различных точек зрения и приложений, не выходя за рамки сущности настоящего изобретения.

[00107] Следует отметить, что технологическое оборудование или устройства, специально не указанные в следующих вариантах осуществления, представляют собой обычное оборудование или устройства в этой области техники. Все значения и диапазоны давления относятся к относительным давлениям. Все используемые ниже реагенты являются обычными реагентами в данной области техники. Все инструменты, используемые ниже, являются обычными в данной области техники.

[00108] Кроме того, следует понимать, что одна или несколько стадий способа, упомянутых в настоящем описании, не исключают других стадий способа, которые могут осуществляться до или после объединенных стадий, или что другие стадии способа могут быть вставлены между этими явно указанными стадиями, если не указано иное; также следует понимать, что объединенная взаимосвязь между одним или несколькими оборудованием/устройствами, упомянутыми в настоящем описании, не исключает того, что может быть другое оборудование/устройства до или после объединенного оборудования/устройств или что другое оборудование/устройства может быть вставлено между этим явно упомянутым оборудованием/устройствами, если не указано иное. Более того, если не указано иное, нумерация каждой стадии способа является только удобным инструментом для идентификации каждой стадии способа и не предназначена для ограничения порядка каждой стадии способа или ограничения объема настоящего описания. Изменение или корректировку относительной взаимосвязи также следует рассматривать как объем, в котором настоящее изобретение может быть реализовано без существенного изменения технического содержания.

Вариант осуществления 1

[00109] Высушенные листья саженцев гинкго билоба измельчают, чтобы получить измельченные листья гинкго билоба. Добавляют 60% водный раствор этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проводят двукратное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получают первый фильтрат с помощью фильтрации. Затем добавляют воду к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проводят однократное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получают второй фильтрат путем фильтрации. Объединяют и концентрируют второй фильтрат и первый фильтрат в густую пасту. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. Растворяют в очищенной воде, нагретой до 60-100°C, оставляют для охлаждения и фильтруют с получением фильтрата. Концентрируют фильтрат до относительной плотности 1,04-1,08 и отсутствия запаха спирта, добавляют очищенную воду, которая в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, проводят межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°C в течение 12-24 часов, и центрифугируют надосадочную жидкость со скоростью 14000 об/мин для получения центрифужной жидкости. Загружают центрифужную жидкость в колонку с макропористой смолой, осуществляют прямую промывку очищенной водой в течение 1,5 часов, а затем обратную промывку в течение 1 часа. Проводят последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами. В первых элюентах 50% этанольный элюент является первым элюентом с высокой концентрацией растворителя, и объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента является первым элюентом с низкой концентрацией растворителя. Затем первый элюент с низкой концентрацией растворителя концентрируют, чтобы не было запаха спирта. Загружают первый элюент с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, проводят прямую промывку очищенной водой, которая в 1 раз превышает объем полиамидной колонки, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом. Объединяют и концентрируют второй элюент и первый элюент с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. После экстрагирования концентрата циклогексаном циклогексановый экстракт отбрасывают. Затем проводят распылительную сушку концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумную сушку густой пасты. Измельчают высушенные продукты, пропускают через сито в 100 меш и перемешивают в общем смесителе со скоростью 11 об/мин в течение 2 часов с получением требуемого кетонового эфира гинкго билоба, Образец 1#.

Контрольный пример 1

[00110] Обычные листья гинкго билоба измельчают, чтобы получить измельченные листья гинкго билоба. Добавляют 60% водный раствор этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проводят двукратное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получают первый фильтрат с помощью фильтрации. Затем добавляют воду к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проводят однократное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получают второй фильтрат путем фильтрации. Объединяют и концентрируют второй фильтрат и первый фильтрат в густую пасту. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. Растворяют в очищенной воде, нагретой до 60-100°C, оставляют для охлаждения и фильтруют с получением фильтрата. Загружают фильтрат в колонку с макропористой смолой, элюируют 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами. В первых элюентах 50% этанольный элюент является первым элюентом с высокой концентрацией растворителя, и объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента является первым элюентом с низкой концентрацией растворителя. Затем первый элюент с низкой концентрацией растворителя концентрируют, чтобы не было запаха спирта. Загружают первый элюент с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, элюируют этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом. Объединяют и концентрируют второй элюент и первый элюент с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. После экстрагирования концентрата циклогексаном циклогексановый экстракт отбрасывают. Затем проводят распылительную сушку концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумную сушку густой пасты. Измельчение высушенных продуктов для получения желаемого кетонового эфира гинкго билоба, Контрольный образец 1*.

Контрольный пример 2

[00111] Обычные листья гинкго билоба, кору корня гинкго билоба и плоды Sophorae измельчают для получения измельченного гинкго билоба. Добавляют 60% водный раствор этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проводят двукратное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получают первый фильтрат с помощью фильтрации. Затем добавляют воду к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проводят однократное экстрагирование путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получают второй фильтрат путем фильтрации. Объединяют и концентрируют второй фильтрат и первый фильтрат в густую пасту. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. Растворяют в очищенной воде, нагретой до 60-100°C, оставляют для охлаждения и фильтруют с получением фильтрата. Загружают фильтрат в колонку с макропористой смолой, элюируют 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами. В первых элюентах 50% этанольный элюент является первым элюентом с высокой концентрацией растворителя, и объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента является первым элюентом с низкой концентрацией растворителя. Затем первый элюент с низкой концентрацией растворителя концентрируют, чтобы не было запаха спирта. Загружают первый элюент с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, элюируют этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом. Объединяют и концентрируют второй элюент и первый элюент с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта. Комбинирование и концентрирование можно проводить путем концентрирования после комбинирования или комбинирования после концентрирования. После экстрагирования концентрата циклогексаном циклогексановый экстракт отбрасывают. Затем проводят распылительную сушку концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумную сушку густой пасты. Измельчают высушенные продукты для получения желаемого кетонового эфира гинкго билоба, Контрольный образец 2*.

Вариант осуществления 2

[00112] Соответственно, взяли 0,1 г порошка образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольного образца 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точно взвесили порошок, поместили порошок в коническую колбу с пробкой, точно добавили 10 мл смешанного раствора 70% метанола и 70% этанола (1:1) и экстрагировали встряхиванием (500 раз в минуту) в течение 30 минут. Отбирали раствор для центрифугирования для получения супернатанта (или фильтровали раствор для получения последующих фильтратов) для получения растворов тестируемого продукта A1, A2 и A3.

[00113] В то же время, взяли соответствующие количества эталонного вещества рутина и эталонного вещества кверцетина, точно взвесили указанные эталонные вещества. К контрольным веществам добавляли метанол, чтобы приготовить смешанный раствор, содержащий 250 мкг рутина и 25 мкг кверцетина на 1 мл, для получения эталонного раствора.

[00114] Точно дозировали 10 мкл из растворов тестируемого продукта A1, A2, A3 и эталонного раствора, соответственно, которые затем определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) согласно Общим правилам 0512 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями высокоэффективной жидкостной хроматографии являются: химически связанный октадецилсиланом силикагель служит в качестве наполнителя; ацетонитрил служит подвижной фазой A, и 0,4% раствор фосфорной кислоты служит подвижной фазой B. Градиентное элюирование выполняют в соответствии со описанием в таблице 1 ниже; длина волны при детекции - 400 нм. Количество теоретических тарелок, рассчитанное по пику рутина, не менее 8000.

Таблица 1 Время (минуты) Подвижная фаза А (%) Подвижная фаза В (%) 0~35 15 85 35~80 20 80

[00115] Результат определения показывает, что в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба содержание рутина составляет 3,0%, и значение меньше или равно 3,2%; содержание кверцетина составляет 0,36%, и это значение меньше или равно 0,38%. В контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба содержание рутина составляет 3,5%, и это значение меньше или равно 4,0%; содержание кверцетина составляет 0,39%, и это значение меньше или равно 0,4%. В контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба содержание рутина составляет 5,5%, и это значение больше 4,0%; содержание кверцетина составляет 0,59%, и это значение больше 0,4%. Из приведенных выше значений содержания видно, что содержание рутина и кверцетина в образце №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба и в контрольном образце 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба находится в пределах указанного диапазона значений, что указывает на отсутствие посторонних загрязняющих веществ, нормальное протекание производственного процесса и хорошее качество продукции. Из-за таких операций, как промывк в способе получения, содержание рутина и кверцетина в образце №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба ниже, чем в контрольном образце 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба, что указывает на то, что качество продукта Образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба лучше, чем Контрольный образец 1* сложного эфира кетона гинкго билоба. Содержание рутина и кверцетина в Контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба превышает указанный диапазон значений, что указывает на возможное присутствие посторонних загрязняющих веществ и низкое качество продукта.

Вариант осуществления 3

[00116] Соответственно, брали 1 г образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно) и проводили распылительную сушку образцов. Проводили сушку образцов в вакуумной печи при температуре меньше или равной 80°С в течение 2 часов; или концентрирование жидкого экстракта до относительной плотности 1,2 с последующей сушкой при температуре входящего воздуха 160-165°С и температуре выходящего воздуха 95-100°С.

[00117] Результаты определения показывают, что в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба содержание этанольного остатка составляет 0,18%, и это значение меньше или равно 0,2%. В контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба содержание этанольного остатка составляет 0,43%, и это значение меньше или равно 0,5%. В контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба содержание этанольного остатка составляет 0,47%, и это значение меньше или равно 0,5%. Из приведенных выше значений содержания видно, что остатки этанола в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба и в контрольных образцах 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба все соответствуют контрольным требованиям. Однако образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет наименьшее количество остаточного этанола и налучшее качество. Контрольные образцы 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба имеют почти одинаковое количество остаточного этанола, но количество остаточного этанола выше, чем в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба, поэтому имеет худшее качество.

Вариант осуществления 4

[00118] Соответственно, брали 0,1 г порошка из образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точно взвешивали порошок, помещая его в центрифужную 50 мл пробирку с пробкой, добавляли 15 мл 30% этанола, хорошо встряхивали, добавляли 20 мл диэтилового эфира, хорошо встряхивали, оставляли на некоторое время, осторожно открывали крышку, закручивали крышку после выпускания воздуха, встряхивали (3000 раз в минуту) в течение 1 минуты, центрифугировали в течение 10 минут (4000 об/мин) с отделением надосадочной жидкости. Добавляли диэтиловый эфир к остатку, повторяли вышеуказанные операции 3 раза, каждый раз добавляя по 15 мл диэтилового эфира. Объединяли четыре раствора диэтилового эфира, концентрировали при пониженном давлении почти до сухого состояния (не испарение досуха), добавляли надлежащее количество метанола и растворяли с помощью ультразвука, и полностью перемещали в 5 мл мерную колбу. Центрифугировали для получения надосадочной жидкости (или пропускали через фильтрующую мембрану 0,45 мкм для получения последующих фильтратов) для получения растворов тестируемого продукта B1, B2 и B3.

[00119] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества билобалида, эталонного вещества гинкголида A, эталонного вещества гинкголида B, эталонного вещества гинкголида C и эталонного вещества гинкголида J, и точно их взвешивали. К эталонным веществам добавляли метанол для приготовления смешанных растворов, каждый из которых содержит 1,0 мг, 0,3 мг, 0,7 мг и 0,4 мг каждого эталонного вещества на 1 мл, который является эталонным раствором.

[00120] Точно дозировали 5 мкл и 10 мкл эталонного раствора и 10 мкл растворов тестируемого продукта B1, B2 и B3, соответственно, которые затем определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) согласно Общим правилам 0512 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание билобалида, гинкголида A, гинкголида B, гинкголида C и гинкголида J рассчитывали с использованием внешнего стандартного двухточечного логарифмического уравнения. Условиями высокоэффективной жидкостной хроматографии являются: химически связанный октадецилсиланом силикагель служит в качестве наполнителя; метанол служит подвижной фазой A, и вода служит подвижной фазой B. Градиентное элюирование выполняют в соответствии со описанием в таблице 2 ниже; детекцию осуществляли испарительным детектором светорассеяния. Количество теоретических тарелок, рассчитанное по пику билобалида, не менее 10000.

Таблица 2 Время (минуты) Подвижная фаза А (%) Подвижная фаза В (%) 0~15 30 70 15~30 40 60

[00121] Определение показывает, что содержание терпеновых лактонов в образце №1 и в контрольном образце 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба рассчитывают как содержание в пересчете на сухие продукты и рассчитывают исходя из общего содержания билобалида, гинкголида A, гинкголида B и гинкголида C. Содержание терпеновых лактонов в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 11,5% и 8,0%, соответственно, что находится в пределах указанного диапазона 6,0-12,0%. Содержание терпеновых лактонов в контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба рассчитывают как содержание в пересчете на сухие продукты и рассчитывают исходя из общего содержания билобалида, гинкголида А, гинкголида В и гинкголида С. Содержание терпеновых лактонов в контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба составляет 4,3%, что ниже указанного диапазона 6,0-12,0%. Терпеновые лактоны, как уникальные компоненты гинкго билоба, являются основными эффективными компонентами препарата на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба для активации и устранения застоя крови, а также при лечении стенокардии, ишемической болезни сердца и церебрального артериосклероза. Следовательно, терпеновые лактоны должны находиться в пределах указанного диапазона данных. Можно видеть, что контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба имеет слабый лечебный эффект. Образец №1 и контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба обладают хорошими терапевтическими эффектами. Однако содержание терпеновых лактонов в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба выше, что находится в пределах указанного диапазона от 9,0 до 12,0%. По сравнению с контрольным образцом 1* кетонового эфира гинкго билоба, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучший терапевтический эффект.

[00122] В то же время определение показывает, что содержание билобалида в образце №1 и в контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 4,6% и 2,8% соответственно, что находится в пределах указанного диапазона 2,6-4,8%. Содержание билобалида в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 1,8%, что ниже указанного диапазона 2,6-4,8%. Билобалид придает кетоновому эфиру гинкго билоба анти-PAF (фактор активации тромбоцитов) эффект, а также питает нервы. Следовательно, контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба имеет слабый лечебный эффект. Образец №1 и контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба обладают хорошими терапевтическими эффектами. Однако содержание билобалида в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба выше, что находится в пределах указанного диапазона 3,6-4,8%. По сравнению с контрольным образцом 1* кетонового эфира гинкго билоба, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучший терапевтический эффект.

[00123] Кроме того, определение показывает, что содержание гинкголида J в образце №1 и в контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,41% и 0,22% соответственно, что находится в пределах указанного диапазона данных 0,1-0,5%. Содержание гинкголида J в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,05%, что ниже указанного диапазона 0,1-0,5%. Гинкголид J также придает кетоновому эфиру гинкго билоба анти-PAF эффект. Следовательно, контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба имеет слабый лечебный эффект. Образец №1 и контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба обладают хорошими терапевтическими эффектами. Однако содержание гинкголида J в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба выше, что находится в пределах указанного диапазона 0,3-0,5%. По сравнению с контрольным образцом 1* кетонового эфира гинкго билоба, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучший терапевтический эффект.

Вариант осуществления 5

[00124] Соответственно, брали 0,1 г порошка образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точно взвешивали порошок, экстрагировали ультразвуком с 5 мл этанола в течение 10 минут, центрифугируя при 3000 об/мин в течение 10 минут, а затем отбирали супернатант. Повторяли вышеуказанную ультразвуковую экстракцию 3 раза. Объединяли супернатанты и доводили до объема с помощью мерной колбы на 25 мл с получением растворов тестируемого продукта C1, C2 и C3.

[00125] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества аментофлавона, эталонного вещества билобетина и эталонного вещества гинкгетина, и точно их взвесили. К эталонным веществам добавляли этанол для получения смешанного раствора с определенной концентрацией аментофлавона, билобетина и гинкгетина, который является эталонным раствором.

[00126] Точно пипетировали 10 мкл из растворов тестируемого продукта C1, C2, C3 и эталонного раствора, соответственно, затем определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС) согласно Общим правилам 0512 и 0431 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями ВЭЖХ-МС являются: химически связанный с октадецилсиланом силикагель, который служит в качестве наполнителя; раствор метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (90:10) в качестве подвижной фазы, элюировали изократически, полностью очищая раствором метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (99:1), который по меньшей мере в 10 раз превышает объем колонки, когда все определяемые компоненты достигали пика; тройной квадрупольный масс-спектрометр использовали для мониторинга множественных реакций (MRM) в режиме электрораспылительной ионизации (ESI) с отрицательными ионами.

[00127] Определение показывает, что содержание бифлавоноидов в образце №1 и в контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,005% и 0,016%, соответственно, то есть общее содержание аментофлавона, билобетина и гинкгетина в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба - все меньше или равны 0,02%. Содержание бифлавоноидов в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,042%, то есть общее содержание аментофлавона, билобетина и гинкгетина в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба больше 0,02%. Содержание бифлавоноидов необходимо контролировать из-за их аллергенности. Содержание бифлавонов в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба превышает предел, что делает пациентов более предрасположенными к аллергии. Содержание бифлавоноидов в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба находится в установленных пределах. Однако образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет более низкое содержание бифлавоноидов, которое может достигать 0,01% или менее, и с меньшей вероятностью вызывает сенсибилизацию.

Вариант осуществления 6

[00128] Соответственно, брали 0,1 г порошка образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точно взвешивали порошок, экстрагировали ультразвуком с 5 мл 50% метанола в течение 10 минут, центрифугируя при 3000 об/мин в течение 10 минут, а затем отбирали супернатант. Повторяли вышеуказанную ультразвуковую экстракцию 3 раза. Объединяли супернатанты и доводили до объема с помощью мерной колбы на 25 мл с получением растворов тестируемого продукта D1, D2 и D3.

[00129] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества генистина и эталонного вещества гинкголида М, соответственно, и точно взвешивали указанные эталонные вещества. К эталонным веществам добавляли метанол для приготовления смешанного раствора с определенной концентрацией генистина и гинкголида М, который является контрольным раствором.

[00130] Точно пипетировали 10 мкл из растворов тестируемого продукта D1, D2, D3 и эталонного раствора, соответственно, затем определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС) согласно Общим правилам 0512 и 0431 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями ВЭЖХ-МС являются: химически связанный с октадецилсиланом силикагель, который служит в качестве наполнителя; раствор метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (90:10) в качестве подвижной фазы, элюировали изократически, полностью очищая раствором метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (99:1), который по меньшей мере в 10 раз превышает объем колонки, когда все определяемые компоненты достигали пика; тройной квадрупольный масс-спектрометр использовали для мониторинга множественных реакций (MRM) в режиме электрораспылительной ионизации (ESI) с отрицательными ионами.

[00131] Из определения можно узнать, что ни образец №1 кетонового эфира гинкго билоба, ни контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба не содержат генистин или гинкголид М. Однако контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба содержит генистин и гинкголид М. Генистин является компонентом, присутствующим в плодах Sophorae, гинкголид М является компонентом, присутствующим в коре корня гинкго билоба, ни один из вышеперечисленных компонентов не присутствует в листьях гинкго билоба. Следовательно, обнаружение вышеуказанных компонентов в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба означает, что посторонние вещества, такие как плодах Sophorae и кора корня гинкго билоба, присутствовали в контрольном образце 2 кетонового эфира гинкго билоба. В образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба нет нежелательных посторонних веществ, что свидетельствует о хорошем качестве продукта.

Вариант осуществления 7

[00132] Брали 20 мг эталонного вещества рутина, точно взвешивали эталонное вещество рутина, помещая его в мерную колбу на 100 мл, добавляли 70 мл 70% этанола, слегка нагревали на водяной бане для растворения, охлаждения, разбавления до метки 70% этанолом и хорошо встряхивали, чтобы получить эталонный раствор (содержащий 0,2 мг безводного рутина на 1 мл).

[00133] Затем, точно отмеряли 0,2 мл, 0,4 мл, 0,6 мл, 0,8 мл, 1,0 мл и 1,2 мл эталонного раствора, помещали эталонный раствор в мерные колбы на 10 мл, соответственно, добавляли воду до 3 мл, добавляли 2 мл натрий-ацетатного буфера (pH 4,5) и 2 мл 0,1 моль/л раствора хлорида алюминия, хорошо встряхивали, добавляли 70% этанол до метки и хорошо встряхивали. Соответствующий раствор служит пустым раствором. Тесты проводили с помощью спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой области спектра (Общие правила 0401 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV). Оптическую плотность измеряли при длине волны 270 нм, и стандартную кривую строили с оптической плотностью по оси ординат и концентрацией по оси абсцисс.

[00134] Соответственно, брали 25 мг из образца №1 кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точно взвешивали образцы, помещали образцы в мерные колбы на 50 мл, растворяли и разводили до метки 70% этанолом и хорошо встряхивали. Точно отмеряли 0,5 мл в мерную колбу на 10 мл, добавляли воды до 3 мл, добавляли 2 мл натрий-ацетатного буфера (pH 4,5) и 2 мл 0,1 моль/л раствора хлорида алюминия, хорошо встряхивали, добавляли 70% этанола до метки и хорошо встряхивали. Тесты проводили с помощью спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой области спектра (Общие правила 0401 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV). Поглощение измеряли при длине волны 270 нм. Эквивалентную массу рутина в растворе тестируемого продукта считывали по стандартной кривой, которая рассчитывается для определения общего содержания флавоноидов.

[00135] Определение показывает, что общее содержание флавоноидов в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 54,1% и 45,2%, соответственно, при использовании рутина (C₂₇H₃₀O₁₆) в качестве стандартного образца, что находится в пределах указанного диапазона 44,0-55,0%. Общее содержание флавоноидов в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 38,1% при использовании рутина (C₂₇H₃₀O₁₆) в качестве стандартного образца, что ниже указанного диапазона 44,0-55,0%. Общие флавоноиды - это активные вещества, которые помимо общих флавоноидных гликозидов содержат свободные флавоноиды. Определенное общее количество флавоноидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба обеспечивает хороший терапевтический эффект кетонового эфира гинкго билоба. Следовательно, контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба имеет слабый лечебный эффект. Образец №1 и контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба обладают хорошими терапевтическими эффектами. Однако общее содержание флавоноидов в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба выше, что находится в пределах указанного диапазона 49,0-55,0%. По сравнению с контрольным образцом 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба, образец №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба обладает лучшим терапевтическим эффектом.

Вариант осуществления 8

[00136] Соответственно, брали 0,4 г порошка образца №1 (полученного в варианте 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно), точное взвешивали порошок, размещали порошок в конической колбе с пробкой, точное добавляли 10 мл метанола, взвешивали, обрабатывали ультразвуком (мощность: 180 Вт, частота: 42 кГц) в течение 20 минут, охлаждали, повторно взвешивали, использовали метанол для компенсации потери массы. Фильтровали и отбирали последующий фильтрат для получения растворов тестируемого продукта D1, D2 и D3.

[00137] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества гинкголиновой кислоты C13:0, эталонного вещества гинкголиновой кислоты C15:1 и эталонного вещества гинкголевой кислоты C17:1, соответственно, и точно взвешивали эталонные вещества. К эталонным веществам добавляют метанол для приготовления серий смешанных растворов, содержащих соответственно 0 нг/мл, 10 нг/мл, 20 нг/мл, 50 нг/мл, 100 нг/мл и 200 нг/мл каждого эталонного вещества, чтобы получить эталонный раствор.

[00138] Точно пипетировали 1 мкл из растворов тестируемого продукта D1, D2, D3 и эталонного раствора, соответственно, затем определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС) согласно Общим правилам 0512 и 0431 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями ВЭЖХ-МС являются: химически связанный с октадецилсиланом силикагель, который служит в качестве наполнителя; раствор метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (90:10) в качестве подвижной фазы, элюировали изократически, полностью очищая раствором метанола и 1% ледяной уксусной кислоты (99:1), который по меньшей мере в 10 раз превышает объем колонки, когда все определяемые компоненты достигали пика; тройной квадрупольный масс-спектрометр использовали для мониторинга множественных реакций (MRM) в режиме электрораспылительной ионизации (ESI) с отрицательными ионами. Контролируемые ионные пары показаны в Таблице 3 ниже. Если в растворе тестируемого продукта обнаружен хроматографический пик с таким же временем удерживания, что и у эталонного вещества, и выбранное соотношение содержания ионов и соотношение содержания ионов соответствующей концентрации эталонного раствора удовлетворяют требованиям таблицы 4 ниже, компонент может быть определен как присутствующий.

Таблица 3 Наименование Родительский ион Количественная ионная пара Качественная ионная пара Гинкголевая кислота C13:0 319,2 319,2 → 275,2 319,2 → 106,1 Гинкголевая кислота C15:1 345,2 345,2 → 301,2 345,2 → 119,0 Гинкголевая кислота C17:1 373,3 373,3 → 329,3 373,3 → 106,0

Таблица 4 Относительное содержание ионов /% >50 20~50 10~20 <10 Допустимое относительное отклонение /% ± 20 ±25 ±30 ±50

[00139] Определение показывает, что общее содержание гинкголевых кислот в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,8 мг/кг и 4,3 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 5 мг/кг. Общее содержание гинкголевых кислот в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 11,3 мг/кг, что не только больше 5 мг/кг, но даже больше 10 мг/кг. Гинкголевые кислоты обладают сенсибилизирующим действием, и длительный прием препарата гинкго может вызвать накопление гинкголевых кислот и нанести вред человеческому организму. Следовательно, содержание гинкголевых кислот в сложном кетоновом эфире гинкго билоба необходимо контролировать и поддерживать на низком уровне. Общее содержание гинкголевых кислот в контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба превышает указанный предел, что может нанести вред человеческому организму. Общее содержание гинкголевых кислот в образце №1 и в контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба находится в установленных пределах. Однако из-за таких операций, как промывка в способе получения, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет более низкое общее содержание гинкголевой кислоты, которое может достигать 1 мг/кг или меньше, поэтому с меньшей вероятностью вызывает сенсибилизацию.

Вариант осуществления 9

[00140] Соответственно брали 75 мг образца №1 кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного эфира гинкго билоба (приготовленных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно), точно взвешивали, точно добавляли 50 мл смеси метанола и 25% раствора соляной кислоты (4:1), взвешивали, помещали в водяную баню при 85-90°C и нагревали с обратным холодильником в течение 30 минут, вынимали, быстро охлаждали до комнатной температуры, повторно взвешивали с использованием вышеуказанного смешанного раствора, чтобы восполнить потерю массы и хорошо взбалтывали. Фильтровали и отбирали последующий фильтрат для получения растворов тестируемого продукта E1, E2 и E3.

[00141] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества кверцетина, эталонного вещества кемпферида и эталонного вещества изорамнетина, точно взвешивали эталонные вещества. К эталонным веществам добавляют метанол для приготовления смешанных растворов, содержащих соответственно 84 мкг, 120 мкг, 24 мкг каждого эталонного вещества на 1 мл, для получения эталонного раствора.

[00142] Точно дозировали 10 мкл из растворов тестируемого продукта и эталонного раствора, соответственно, которые затем определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) согласно Общим правилам 0512 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями высокоэффективной жидкостной хроматографии являются: химически связанный октадецилсиланом силикагель в качестве наполнителя; метанол с 0,4% раствором фосфорной кислоты (49:51) служит подвижной фазой; элюировали изократически; длина волны при детекции - 368 нм. Количество теоретических тарелок, рассчитанное по пику кверцетина, составляет не менее 4000. Степень разделения между пиком кемпферида и пиком изорамнетина должна быть больше 1,5.

[00143] Общее содержание флавонолгликозидов рассчитывают по формуле (1): общее содержание флавонолгликозидов = (содержание кверцетина + содержание кемпферида + содержание изорамнетина) × 2,51.

[00144] Определение показывает, что общее содержание флавонолгликозидов в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба составляет 33,8% и 26,7% (в пересчете на сухие продукты), соответственно, что находится в пределах указанного диапазона 24,0-35,0%. Общее содержание флавонолгликозидов в контрольном образце 2* кетонового эфира гинкго билоба составляет 20,3% (в пересчете на сухие продукты), что ниже указанного диапазона 24,0-35,0%. Общие флавонолгликозиды - это активные вещества, содержащие свободные флавоноиды. Определенное общее количество флавоноидов в сложном кетоновом эфире гинкго билоба обеспечивает хороший терапевтический эффект кетонового эфира гинкго билоба. Следовательно, контрольный образец 2* кетонового эфира гинкго билоба имеет слабый лечебный эффект. Образец №1 и контрольный образец 1* кетонового эфира гинкго билоба обладают хорошими терапевтическими эффектами. Однако общее содержание флавоноидов в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба выше, что находится в пределах указанного диапазона 30,0-35,0%. По сравнению с контрольным образцом 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба, образец №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба обладает лучшим терапевтическим эффектом.

[00145] Точно пипетировали 10 мкл растворов тестируемого продукта E1, E2, E3 и эталонного раствора, соответственно, с последующим определением с помощью вышеупомянутой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Определение показывает, что в образце №1 и контрольном образце 1* кетонового эфира гинкго билоба отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду составляет 0,91 и 1,02 соответственно, что находится в пределах указанного диапазона 0,8-1,2; отношения площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину составляют 0,21 и 0,22 соответственно, что больше 0,15. В контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду составляет 0,61, что ниже указанного диапазона 0,8-1,2; отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину составляет 0,13, что ниже 0,15. Из приведенного выше пропорционального соотношения видно, что в образце №1 и контрольном образце 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба нет нежелательных посторонних веществ, что указывает на нормальный процесс производства и хорошее качество продукта. Качество контрольного образца 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба низкое из-за добавления кверцетина и нежелательных посторонних веществ.

Вариант осуществления 10

[00146] Соответственно брали 50 мг образца №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (приготовленных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно), точно взвешивали, добавляли 10 мл 75 % метанола, обрабатывали ультразвуком (мощность: 300 Вт, частота: 50 кГц) в течение 10 минут, центрифугировали в течение 5 минут (4000 об/мин), отбирали супернатант для получения растворов тестируемого продукта F1, F2 и F3.

[00147] В то же время, брали соответствующие количества эталонного вещества рутина, эталонного вещества кверцетина, эталонного вещества кемпферида, и эталонного вещества изорамнетина, точно взвешивали эталонные вещества. К контрольным веществам добавляли 75% метанол для приготовления раствора, содержащего 30 мкг каждого эталонного вещества на 1 мл, и получали эталонный раствор.

[00148] Точно дозировали 10 мкл из растворов тестируемого продукта и эталонного раствора, соответственно, которые затем определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) согласно Общим правилам 0512 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Условиями высокоэффективной жидкостной хроматографии являются: химически связанный октадецилсиланом силикагель в качестве наполнителя (длина колонки: 15 см; внутренний диаметр: 4,6 мм; размер частиц: 5 мкм); ацетонитрил служит подвижной фазой A, и 0,1% раствор муравьиной кислоты служит подвижной фазой B. Градиентное элюирование выполняли в соответствии со спецификацией в таблице 5 ниже; длина волны при детекции - 360 нм; температура колонки 30°C; скорость потока 1,0 мл/мин. Количество теоретических тарелок, рассчитанное по пику рутина, не менее 10000.

Таблица 5 Время (минуты) Подвижная фаза А (%) Подвижная фаза В (%) 0-40 15-30 85-70 40-45 30-40 70-60 45-50 40 60 50-60 40-60 60-40 60-70 60 40

[00149] Сходство между паттернами спектров тестируемых продуктов и сложного кетонового эфира гинкго билоба рассчитывали и сравнивали в соответствии с «Системой оценки сходства для хроматографических паттернов в традиционной китайской медицине» (версия 2.0). Паттерн спектра сложного кетонового эфира гинкго билоба включает четыре общих пика, как показано на фиг. 1: пик 1 - это пик рутина, пик 6 - это пик кверцетина, пик 7 - это пик кемпферида, а пик 8 - это пик изорамнетина. Определение показывает, что сходство между паттернами спектров образца №1 и контрольного образца 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба и хроматограммой тестируемого продукта составляет 0,98 и 0,92, соответственно, что оба больше или равны 0,90. Сходство между паттерном спектра контрольного образца 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба и хроматограммой исследуемого продукта составляет 0,3, что ниже 0,90. Из приведенного выше сходства видно, что в образце №1 и контрольном образце 1* сложного кетонового эфира гинкго билоба нет нежелательных посторонних веществ, что указывает на хорошее качество продукта. Качество контрольного образца 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба низкое из-за добавления нежелательных посторонних веществ.

Вариант осуществления 11

[00150] Абсолютная влажность сложного кетонового эфира гинкго билоба в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба (полученном в варианте осуществления 1), контрольных образцах 1* и 2* сложного эфира кетона гинкго билоба (приготовленных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно) рассчитывают в соответствии со вторым методом согласно Общим правилам 0832 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[00151] Высокая абсолютная влажность может вызвать агломерацию и повлиять на качество продуктов. Следовательно, абсолютная влажность сложного кетонового эфира гинкго билоба необходимо контролировать и поддерживать на низком уровне. Определение показывает, что абсолютная влажность образца №1, контрольного образца 1* и контрольного образца 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба меньше или равна 5,0%.

Вариант осуществления 12

[00152] Содержание зольного остатка в сложном кетоновом эфире гинкго билоба в образце №1 кетонового эфира гинкго билоба (полученном в варианте осуществления 1), контрольных образцах 1* и 2* сложного эфира кетона гинкго билоба (приготовленных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно) рассчитывают в соответствии со вторым методом согласно Приложению IX J Китайской Фармакопеи (издание 2010 г.), том I.

[00153] Высокое содержание зольных остатков указывает на высокое содержание примесей, что влияет на качество продукта. Следовательно, содержание зольных остатков в сложном кетоновом эфире гинкго билоба необходимо контролировать и поддерживать на низком уровне. Определение показывает, что содержание зольных остатков в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,12%, 0,44% и 0,45% соответственно, что соответствует менее 0,5%. Однако из-за таких операций, как промывка в способе получения, образец №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба имеет более низкое содержание зольного остатка, которое может достигать значения меньшего или равного 0,2%, поэтому имеет лучшее качество продукта.

Вариант осуществления 13

[00154] Соответственно, брали 0,8 г образца №1 кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте 1), контрольных образцов 1* и 2* сложного эфира гинкго билоба (приготовленных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно), точно взвешивали образцы, размещали образцы во флаконах объемом 20 мл, точно добавляли 5 мл диметилформамида, закрывали отверстие флакона, встряхивали для растворения, хорошо встряхивали и получали растворы тестируемого продукта G1, G2 и G3.

[00155] В то же время, брали соответствующее количество циклогексана, точно взвешивали циклогексан, добавляли диметилформамид с получением раствора, содержащего 1,8 мкг на 1 мл в качестве эталонного раствора. Отмеряли точно 0,5 мл эталонного раствора в бутыль объемом 20 мл, закрывали отверстие бутыли, хорошо встряхивали и получали эталонный раствор.

[00156] Отбирали точно 1 мл газифицированного газа из контрольного раствора G1, G2, G3 и контрольного раствора соответственно. Согласно второму методу Общих правил 0861 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV, газифицированный газ вводят в газовый хроматограф, записывают хроматограмму и рассчитывают площадь пика в соответствии с методом внешнего стандарта.

[00157] Циклогексан является химическим растворителем. Слишком много остаточного циклогексана может нанести вред человеческому организму. Следовательно, содержание циклогексана в сложном кетоновом эфире гинкго билоба необходимо контролировать и поддерживать на низком уровне. Определение показывает, что содержание остатка циклогексана в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,0003%, 0,0018% и 0,0019% соответственно, что меньше или равно 0,002%. Однако из-за таких операций, как промывка в способе получения, образец №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба имеет более низкое содержание остатка циклогексана, которое может достигать значения меньшего или равного 0,001%, имеет лучшее качество продукта и с меньшей вероятностью причинит вред человеческому организму.

Вариант осуществления 14

[00158] Содержание свинца, кадмия, мышьяка, ртути и меди в образце №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцах 1* и 2* сложного эфира кетона гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2, соответственно) определяли в соответствии с методом определения свинца, кадмия, мышьяка, ртути и меди, описанным в Общих правилах 2321 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.).

[00159] Определение показывает, что в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба содержание свинца составляет 0,5 мг/кг, 2,2 мг/кг и 2,3 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 3,0 мг/кг; содержание кадмия составляет 0,08 мг/кг, 0,15 мг/кг и 0,16 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,2 мг/кг; содержание мышьяка составляет 0,6 мг/кг, 1,7 мг/кг и 1,8 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 2,0 мг/кг; содержание ртути составляет 0,02 мг/кг, 0,08 мг/кг и 0,09 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание меди составляет 6 мг/кг, 16 мг/кг и 17 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 20 мг/кг. Тяжелые металлы токсичны. Следовательно, для сложного кетонового эфира гинкго билоба, чем ниже содержание тяжелых металлов, тем лучше качество продукта. Содержание элементов тяжелых металлов в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба находится в установленных пределах. Следовательно, качество продукции соответствует требованиям. Тем не менее, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучшее качество продукта из-за самого низкого содержания элементов тяжелых металлов.

Вариант осуществления 15

[00160] Содержание остатков пестицидов в образце №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольных образцах 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно) определяют в соответствии с методом определения остатком пестицида, описанном в Общих правилах 2341 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[00161] Определение показывает, что в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба содержание общего BHC (гамма-изомер бензолгексахлорида) составляет 0,01 мг/кг, 0,08 мг/кг и 0,16 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,2 мг/кг; общее содержание ДДТ составляет 0,02 мг/кг, 0,09 мг/кг и 0,15 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,2 мг/кг; содержание пентахлорнитробензола составляет 0,008 мг/кг, 0,03 мг/кг и 0,08 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание дихлорфоса составляет 0,08 мг/кг, 0,13 мг/кг и 0,34 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,5 мг/кг; содержание метамидофоса составляет 0,011 мг/кг, 0,023 мг/кг и 0,041 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,05 мг/кг; содержание ацефата составляет 0,01 мг/кг, 0,032 мг/кг и 0,086 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание этиона составляет 0,07 мг/кг, 0,16 мг/кг и 0,32 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,5 мг/кг; содержание ометоата составляет 0,009 мг/кг, 0,014 мг/кг и 0,038 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,05 мг/кг; содержание диазинона составляет 0,04 мг/кг, 0,17 мг/кг и 0,41 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,5 мг/кг; содержание метидатиона составляет 0,007 мг/кг, 0,021 мг/кг и 0,039 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,05 мг/кг; содержание монокротофоса составляет 0,011 мг/кг, 0,041 мг/кг и 0,087 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание диметоата составляет 0,018 мг/кг, 0,053 мг/кг и 0,091 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание паратион-метила составляет 0,008 мг/кг, 0,033 мг/кг и 0,071 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,1 мг/кг; содержание циперметрина составляет 0,06 мг/кг, 0,43 мг/кг и 0,61 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 1 мг/кг; содержание фенвалерата составляет 0,11 мг/кг, 0,23 мг/кг и 0,41 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,5 мг/кг; содержание дельтаметрина составляет 0,09 мг/кг, 0,24 мг/кг и 0,38 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 0,5 мг/кг. Остатки пестицидов токсичны. Следовательно, для кетонового эфира гинкго билоба, чем ниже содержание остатков пестицидов, тем лучше качество продукта. Содержание остатков пестицидов в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба находится в установленных пределах. Следовательно, качество продукции соответствует требованиям. Тем не менее, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучшее качество продукта из-за самого низкого содержания остатков пестицидов.

Вариант осуществления 16

[00162] Содержание афлатоксинов в образце №1 сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученного в варианте осуществления 1), контрольном образце 1* и 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба (полученных в контрольных примерах 1 и 2 соответственно) определяют в соответствии с методом определения афлатоксина, который описан в Общих правилах 2351 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Афлатоксины включают афлатоксин G2, афлатоксин G1, афлатоксин B2 и афлатоксин B1.

[00163] Определение показывает, что общее содержание афлатоксинов в каждых 1000 г образца №1, контрольного образца 1* и контрольного образца 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба составляет 0,8 мкг, 2,1 мкг и 3,8 мкг, соответственно, которые все меньше или равны 4 мкг. В то же время содержание афлатоксина B1 в каждых 1000 г сложного кетонового эфира гинкго билоба образца №1, контрольного образца 1* и контрольного образца 2* сложного эфира кетона гинкго билоба составляет 0,3 мкг, 1,0 мкг и 1,6 мкг, соответственно, которые все меньше или равны 2 мкг. Афлатоксины могут вызывать рак. Следовательно, для сложного кетонового эфира гинкго билоба, чем ниже содержание афлатоксинов, тем лучше качество продукта. Содержание афлатоксинов в образце №1, контрольном образце 1* и контрольном образце 2* сложного кетонового эфира гинкго билоба находится в установленных пределах. Следовательно, качество продукции соответствует требованиям. Тем не менее, образец №1 кетонового эфира гинкго билоба имеет лучшее качество продукта из-за самого низкого содержания афлатоксинов.

Вариант осуществления 17

[00164] Листья саженцев гинкго билоба, которые служат в качестве лекарственного исходного материала в варианте осуществления 1, отбирают и сушат при 140-160°C в течение 6-15 минут, чтобы они служили исходным материалом образца 1; в то же время обычные листья гинкго билоба, которые служат лекарственным исходным материалом в контрольном примере 1, выбирают в качестве исходного материала образца 2.

[00165] Общее содержание флавонолгликозидов и отношения площадей хроматографических пиков флавоноидных агликонов в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии со способом, описанным в варианте осуществления 9. Содержание терпенового лактона в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют методом, описанным в варианте осуществления 4. Общее содержание золы и нерастворимой в кислоте золы в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии с методом определения золы, описанным в Общих правилах 2302 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание экстрагируемого вещества в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии с методом определения экстрагируемого вещества, описанным в Общих правилах 2201 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание примесей в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии с методом определения примесей, описанным в Общих правилах 2301 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.) Том IV. Содержание экстракта в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии с методом определения экстракта, описанным в Общих правилах 0832 Китайской фармакопеи (издание 2015 г.), том IV. Содержание остатка диоксида серы в исходном материале образца 1 и образца 2 определяют в соответствии с методом определения остатка диоксида серы, описанным в Общих правилах 2331 Китайской Фармакопеи (издание 2015 г.), том IV.

[00166] Определение показывает, что общее содержание флавонолгликозидов в исходном материале образца 1 и образца 2 составляет 1,34% и 0,54% соответственно. Общее содержание флавонолгликозидов в исходном материале образца 2, хотя и соответствует требованию Фармакопеи о том, что общее содержание флавонолгликозидов больше или равно 0,40%, не соответствует требованию, установленному в настоящем описании, о том, что общее содержание флавонолгликозидов больше или равно 0,85%. Общее содержание флавонолгликозидов в исходном материале образца 1 и не только больше или равно 0,40%, но также больше или равно 0,85%. Исходный материал образца 1 имеет более высокое общее содержание флавонолгликозидов, поэтому имеет лучшее качество.

[00167] Определение показывает, что содержание терпеновых лактонов в исходном материале образца 1 и образца 2 составляет 0,62% и 0,33% соответственно. Содержание терпеновых лактонов в исходном материале образца 2, хотя и соответствует требованию Фармакопеи о том, что содержание терпеновых лактонов больше или равно 0,25%, не отвечает требованию, установленному в настоящем описании, о том, что содержание терпеновых лактонов больше или равно 0,40%. Содержание терпеновых лактонов в исходном материале образца 1 не только больше или равно 0,25%, но также больше или равно 0,40%. Исходный материал образца 1 имеет более высокое содержание терпеновых лактонов, поэтому имеет лучшее качество сырья.

[00168] Определение показывает, что отношения площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду в исходных материалах образца 1 и образца 2 составляют 0,87 и 0,55 соответственно. Исходный материал образца 1 соответствует диапазону 0,65-1,2, указанному в настоящем описании, в то время как исходный материал образца 2 не соответствует диапазону 0,65-1,2, указанному в настоящем описании. Отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину в исходном материале образца 1 и образца 2 составляет 0,21 и 0,14 соответственно. Исходный материал образца 1 соответствует требованию больше 0,15, указанному в настоящем описании, в то время как исходный материал образца 2 не удовлетворяет требованию больше 0,15, указанному в настоящем раскрытии. Из приведенного выше пропорционального соотношения видно, что в качестве исходного материала качество исходного материала образца 1 лучше, чем качество исходного материала образца 2.

[00169] Определение показывает, что содержание остатков диоксида серы в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 11 мг/кг и 88 мг/кг, соответственно, что меньше или равно 150 мг/кг. Содержание остатков диоксида серы в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 находится в установленных пределах. Таким образом, качество исходного материала образца 1 и исходного материала образца 2 соответствует требованиям. Однако исходный материал образца 1 имеет лучшее качество из-за более низкого содержания остатка диоксида серы.

[00170] В то же время определение показывает, что общее содержание золы в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 3,8% и 6,9%, соответственно, что меньше или равно 10,0%. Содержание нерастворимой в кислоте золы в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 0,68% и 1,54%, соответственно, что меньше или равно 2,0%. Содержание экстрагируемого вещества в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 44,1% и 28,2% соответственно, что больше или равно 25,0%. Содержание примесей в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 0,57% и 1,33%, соответственно, что меньше или равно 2,0%. Содержание воды в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 составляет 5,3% и 10,1%, соответственно, что меньше или равно 12,0%. Можно видеть, что все вышеупомянутые содержания в исходном материале образца 1 и исходном материале образца 2 находятся в пределах указанного диапазона, а качество исходного материала соответствует требованиям. Однако соответствующие показатели содержания в исходном материале образца 1 лучше, чем у исходного материала образца 2. Следовательно, качество исходного материала образца 1 лучше. Применяя исходный материал образца 1 можно приготовить нерасфасованные образцы лекарственного средства на основе сложного кетонового эфира гинкго билоба более высокого качества.

[00171] Как упомянуто выше, в настоящем описании предложен кетоновый эфир гинкго билоба и способ его получения. Благодаря оптимизированным операциям и условиям приготовления можно получить высококачественный кетоновый эфир гинкго билоба. По сравнению с кетоновым эфиром гинкго билоба, полученным традиционными способами, кетоновый эфир гинкго билоба по настоящему изобретению имеет стабильное качество, низкую скорость разложения и хорошую однородность в различных партиях нерасфасованных лекарственных средств. Следовательно, настоящее изобретение эффективно преодолевает различные недостатки существующей технологии и имеет высокую ценность для промышленного использования.

[00172] Вышеупомянутые варианты осуществления лишь иллюстрируют принцип и эффекты настоящего раскрытия, а не ограничивают настоящее раскрытие. Модификации или вариации описанных выше вариантов осуществления могут быть выполнены специалистами в данной области без отклонения от сущности и объема раскрытия. Следовательно, все эквивалентные модификации или изменения, сделанные специалистами в данной области техники без отклонения от сущности и технической концепции, раскрытых в настоящем раскрытии, должны по-прежнему подпадать под действие формулы настоящего изобретения.

Предложенная группа решений относится к экстракту листьев гинкго билоба, обеспечивающий анти-PAF (фактор активации тромбоцитов) эффект и питание нервов. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба, обеспечивающий анти-PAF (фактор активации тромбоцитов) эффект и питание нервов, который получен из листьев гинкго билоба путем спиртовой экстракции и соответствует следующим условиям: 1) содержание рутина меньше или равно 4,0 мас.%; 2) содержание кверцетина меньше или равно 0,4 мас.%; 3) содержание билобалида составляет 2,6-4,8 мас.%; 4) содержание гинкголида J составляет 0,1-0,5 мас.%; 5) содержание остаточного этанола меньше или равно 0,5 мас.%; 6) содержание бифлавоноидов меньше или равно 0,02 мас.%, бифлавоноиды включают аментофлавон, билобетин и гинкгетин; 7) содержание генистина равно 0, и содержание гинкголида М равно 0; где спиртовая экстракция включает следующие стадии: А) измельчение высушенных листьев саженцев гинкго билоба для получения измельченных листьев гинкго билоба; В) добавление 60% водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проведение двукратного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получение первого фильтрата с помощью фильтрации; С) добавление воды к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проведение однократного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получение второго фильтрата путем фильтрации; D) объединение и концентрирование второго фильтрата и первого фильтрата в густую пасту, растворение в очищенной воде, нагретой до 60-100°С, оставление для охлаждения и фильтрование с получением фильтрата; Е) концентрирование фильтрата до относительной плотности 1,04-1,08 и отсутствия запаха спирта, добавление очищенной воды, которая в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°С в течение 12-24 часов, и центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью 13000-15000 об/мин для получения центрифужной жидкости; F) загрузка центрифужной жидкости в колонку с макропористой смолой, затем прямая промывка очищенной водой в течение 1-2 часов, а затем обратная промывка в течение 0,5-1,5 часов, последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами; в первых элюентах 50% этанольный элюент представляет собой первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента представляет собой первый элюент с низкой концентрацией растворителя; G) концентрирование первого элюента с низкой концентрацией растворителя, чтобы не было запаха спирта, загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, прямая промывка очищенной водой, которая в 0,5-2 раза превышает объем полиамидной колонки, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом; H) объединение и концентрирование второго элюента и первого элюента с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта; I) экстрагирование концентрата циклогексаном, отбрасывание циклогексанового экстракта, распылительная сушка концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумная сушка густой пасты; измельчение высушенных продуктов, пропускание через сито в 80-100 меш и перемешивание в общем смесителе со скоростью 10-12 об/мин в течение 1,5-2,5 часов с получением спиртового экстракта листьев гинкго билоба. Способ получения спиртового экстракта листьев гинкго билоба. Применение способа получения для получения спиртового экстракта листьев гинкго билоба. Препарат на основе спиртового экстракта листьев гинкго билоба, обеспечивающий анти-PAF эффект и питание нервов, полученный из спиртового экстракта листьев гинкго билоба. Вышеописанный экстракт характеризуется улучшенным качеством: высоким содержанием активных компонентов и низким содержанием вредных компонентов. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл., 16 пр.

1. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба, обеспечивающий анти-PAF (фактор активации тромбоцитов) эффект и питание нервов, который получен из листьев гинкго билоба путем спиртовой экстракции и соответствует следующим условиям:

1) содержание рутина меньше или равно 4,0 мас.%;

2) содержание кверцетина меньше или равно 0,4 мас.%;

3) содержание билобалида составляет 2,6-4,8 мас.%;

4) содержание гинкголида J составляет 0,1-0,5 мас.%;

5) содержание остаточного этанола меньше или равно 0,5 мас.%;

6) содержание бифлавоноидов меньше или равно 0,02 мас.%, бифлавоноиды включают аментофлавон, билобетин и гинкгетин;

7) содержание генистина равно 0, и содержание гинкголида М равно 0;

где спиртовая экстракция включает следующие стадии:

А) измельчение высушенных листьев саженцев гинкго билоба для получения измельченных листьев гинкго билоба;

В) добавление 60% водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проведение двукратного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получение первого фильтрата с помощью фильтрации;

С) добавление воды к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проведение однократного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получение второго фильтрата путем фильтрации;

D) объединение и концентрирование второго фильтрата и первого фильтрата в густую пасту, растворение в очищенной воде, нагретой до 60-100°С, оставление для охлаждения и фильтрование с получением фильтрата;

Е) концентрирование фильтрата до относительной плотности 1,04-1,08 и отсутствия запаха спирта, добавление очищенной воды, которая в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°С в течение 12-24 часов и центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью 13000-15000 об/мин для получения центрифужной жидкости;

F) загрузка центрифужной жидкости в колонку с макропористой смолой, затем прямая промывка очищенной водой в течение 1-2 часов, а затем обратная промывка в течение 0,5-1,5 часов, последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами; в первых элюентах 50% этанольный элюент представляет собой первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента представляет собой первый элюент с низкой концентрацией растворителя;

G) концентрирование первого элюента с низкой концентрацией растворителя, чтобы не было запаха спирта, загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, прямая промывка очищенной водой, которая в 0,5-2 раза превышает объем полиамидной колонки, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом;

H) объединение и концентрирование второго элюента и первого элюента с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта;

I) экстрагирование концентрата циклогексаном, отбрасывание циклогексанового экстракта, распылительная сушка концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумная сушка густой пасты; измельчение высушенных продуктов, пропускание через сито в 80-100 меш и перемешивание в общем смесителе со скоростью 10-12 об/мин в течение 1,5-2,5 часов с получением спиртового экстракта листьев гинкго билоба.

2. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба по п. 1, в котором общее содержание флавоноидов составляет 44,0-55,0 мас.% в пересчете на рутин; содержание терпеновых лактонов составляет 6,0-12,0 мас.%, рассчитанное исходя из общего содержания билобалида, гинкголида A, гинкголида B и гинкголида C.

3. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба по п. 1, в котором общее содержание гинкголовых кислот меньше или равно 5 мг/кг; общее количество гинкголевых кислот рассчитывают исходя из общего содержания гинкголевой кислоты C13:0, гинкголевой кислоты C15:1 и гинкголевой кислоты C17:1.

4. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба по п. 1, в котором общее содержание флавонолгликозидов составляет 24,0-35,0 мас.%; отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду составляет 0,8-1,2, и отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину составляет более 0,15.

5. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба по п. 1, дополнительно отвечающий одному или нескольким из следующих условий:

А1) содержание воды меньше или равно 5,0 мас.%;

А2) содержание зольного остатка меньше или равно 0,5 мас.%;

A3) содержание остатка циклогексана меньше или равно 0,002 мас.%;

A4) содержание свинца меньше или равно 3,0 мг/кг, содержание кадмия меньше или равно 0,2 мг/кг, содержание мышьяка меньше или равно 2,0 мг/кг, содержание ртути меньше или равно 0,1 мг/кг, и содержание меди меньше или равно 20 мг/кг;

A5) содержание остатков пестицидов следующее: общее содержание BHC (гамма-изомер бензолгексахлорида) меньше или равно 0,2 мг/кг, общее содержание DDT (дихлордифенилтрихлорэтан) меньше или равно 0,2 мг/кг, содержание пентахлорнитробензола меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание дихлорфоса меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание метамидофоса меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание ацефата меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание этиона меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание ометоата меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание диазинона меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание метидатиона меньше или равно 0,05 мг/кг, содержание монокротофоса меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание диметоата меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание паратионметила меньше или равно 0,1 мг/кг, содержание циперметрина меньше или равно 1 мг/кг, содержание фенвалерата меньше или равно 0,5 мг/кг, содержание дельтаметрина меньше или равно 0,5 мг/кг;

A6) на каждые 1000 г спиртового экстракта листьев гинкго билоба общее содержание афлатоксинов меньше или равно 4 мкг, и содержание афлатоксина B1 меньше или равно 2 мкг; афлатоксины включают афлатоксин G2, афлатоксин G1, афлатоксин B2 и афлатоксин B1.

6. Спиртовой экстракт листьев гинкго билоба по п. 1, в котором листья саженцев гинкго билоба соответствуют следующим требованиям:

B1) общее содержание флавонолгликозидов больше или равно 0,85 мас.%;

B2) содержание терпеновых лактонов больше или равно 0,40 мас.%;

B3) общее содержание золы меньше или равно 10,0 мас.%;

В4) содержание нерастворимой в кислоте золы меньше или равно 2,0 мас.%;

В5) содержание экстрагируемого вещества больше или равно 25,0 мас.%;

B6) отношение площадей хроматографических пиков кверцетина к кемпфериду составляет 0,65-1,2, и отношение площадей хроматографических пиков изорамнетина к кверцетину больше 0,15;

В7) содержание примесей меньше или равно 2,0 мас.%;

B8) содержание воды меньше или равно 12,0 мас.%;

B9) содержание остатка диоксида серы меньше или равно 150 мг/кг.

7. Способ получения спиртового экстракта листьев гинкго билоба по любому из пп. 1-6, включающий следующие операции:

А) измельчение высушенных листьев саженцев гинкго билоба для получения измельченных листьев гинкго билоба;

В) добавление 60% водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проведение двукратного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получение первого фильтрата с помощью фильтрации;

С) добавление воды к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проведение однократного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получение второго фильтрата путем фильтрации;

D) объединение и концентрирование второго фильтрата и первого фильтрата в густую пасту, растворение в очищенной воде, нагретой до 60-100°С, оставление для охлаждения и фильтрование с получением фильтрата;

Е) концентрирование фильтрата до относительной плотности 1,04-1,08 и отсутствия запаха спирта, добавление очищенной воды, которая в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°С в течение 12-24 часов и центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью 13000-15000 об/мин для получения центрифужной жидкости;

F) загрузка центрифужной жидкости в колонку с макропористой смолой, затем прямая промывка очищенной водой в течение 1-2 часов, а затем обратная промывка в течение 0,5-1,5 часов, последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами; в первых элюентах 50% этанольный элюент представляет собой первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента представляет собой первый элюент с низкой концентрацией растворителя;

G) концентрирование первого элюента с низкой концентрацией растворителя, чтобы не было запаха спирта, загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, прямая промывка очищенной водой, которая в 0,5-2 раза превышает объем полиамидной колонки, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом;

H) объединение и концентрирование второго элюента и первого элюента с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта;

I) экстрагирование концентрата циклогексаном, отбрасывание циклогексанового экстракта, распылительная сушка концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумная сушка густой пасты; измельчение высушенных продуктов, пропускание через сито в 80-100 меш и перемешивание в общем смесителе со скоростью 10-12 об/мин в течение 1,5-2,5 часов с получением спиртового экстракта листьев гинкго билоба.

8. Способ получения спиртового экстракта листьев гинкго билоба по п. 7, включающий следующие операции:

А) измельчение высушенных листьев саженцев гинкго билоба для получения измельченных листьев гинкго билоба;

В) добавление 60% водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проведение двукратного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником, каждый раз в течение 3 часов, и получение первого фильтрата с помощью фильтрации;

С) добавление воды к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрации, проведение однократного экстрагирования путем нагревания с обратным холодильником со временем экстракции 0,5 часа, и затем получение второго фильтрата путем фильтрации;

D) объединение и концентрирование второго фильтрата и первого фильтрата в густую пасту, растворение в очищенной воде, нагретой до 60-100°С, оставление для охлаждения и фильтрование с получением фильтрата;

Е) концентрирование фильтрата до относительной плотности 1,04-1,08 и отсутствия запаха спирта, добавление очищенной воды, которая в 1,5-2,5 раза превышает количество порошка листьев гинкго билоба, межслойное охлаждение в охлаждающей воде при 5-7°С в течение 12-24 часов, и центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью 14000 об/мин для получения центрифужной жидкости;

F) загрузка центрифужной жидкости в колонку с макропористой смолой, затем прямая промывка очищенной водой в течение 1,5 часов, а затем обратная промывка в течение 1 часа, последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами; в первых элюентах 50% этанольный элюент представляет собой первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента представляет собой первый элюент с низкой концентрацией растворителя;

G) концентрирование первого элюента с низкой концентрацией растворителя, чтобы не было запаха спирта, загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, прямая промывка очищенной водой, которая в 1 раз превышает объем полиамидной колонки, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом;

H) объединение и концентрирование второго элюента и первого элюента с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта;

I) экстрагирование концентрата циклогексаном, отбрасывание циклогексанового экстракта, распылительная сушка концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумная сушка густой пасты; измельчение высушенных продуктов, пропускание через сито в 100 меш и перемешивание в общем смесителе со скоростью 11 об/мин в течение 2 часов с получением спиртового экстракта листьев гинкго билоба.

9. Применение способа получения по любому из пп. 7, 8 для получения спиртового экстракта листьев гинкго билоба.

10. Препарат на основе спиртового экстракта листьев гинкго билоба, обеспечивающий анти-PAF эффект и питание нервов, полученный из спиртового экстракта листьев гинкго билоба по любому из пп. 1-6.

11. Препарат на основе спиртового экстракта листьев гинкго билоба по п. 10, который выбран из таблетки, капсулы, гранулы, пилюли, порошка, жидкости для перорального применения, инъекции или фармацевтического препарата для наружного применения.