Способ коррекции нейрональных повреждений сетчатки производным диметиламиноэтанола в эксперименте Российский патент 2022 года по МПК A61K31/197 A61P27/02 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Ретинальная ишемия приводит к необратимым нарушениям зрения и слепоте. Около 100 миллионов человек в мире имеют ишемические изменения в сетчатке. Рост заболеваемости гипертонической болезнью, атеросклерозом неуклонно растёт, что провоцирует увеличение случаев ишемических повреждений сетчатки. У пациентов с атеросклеротическими изменениями ССС ишемия сетчатки развивается в 35% случаев, у пациентов с гипертонической болезнью в 25%.

Известен способ профилактики ишемии сетчатки в эксперименте (RU №2539630, опубл. 20.01.2015), включающий фармакологическое прекондиционирование никорандилом в дозе 0,86 мг/кг, который вводят лабораторному животному однократно за 30 минут до моделирования ишемии сетчатки. Моделирование патологии осуществляют путем оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут.

Основным недостатком способа является то, что фармакологический агент используется только как профилактическое средство, как средство коррекции его активность не определена.

Наиболее близким к заявленному решению является способ фармакологической коррекции ишемической нейропатии зрительного нерва производным диметиламиноэтанола - 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в эксперименте (RU 2663643, опубл. 07.08.2018), который заключается в том, что моделирование патологии осуществляют путем ежедневного внутрибрюшинного введения лабораторным крысам-самцам линии Wistar неселективного ингибитора NO-синтаз N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 12,5 мг/кг массы крысы в течение 28 суток. На 26 сутки эксперимента дополнительно проводят однократное повышение внутриглазного давления до 110 мм рт.ст. в течение 5 мин путем применения механического давления на переднюю камеру глаза. Коррекцию индуцированной таким образом патологии зрительного нерва проводят раствором 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата с 29 дня эксперимента в течение 28 дней путем его ежедневного внутрижелудочного введения в дозе 25 мг/кг/сутки. Способ обеспечивает выраженную коррекцию ишемической нейропатии зрительного нерва, в том числе за счет улучшения ретинальной микроциркуляции и восстановления электрофизиологической активности сетчатки.

Основным недостатком способа является то, что данный способ фармакологической коррекции ишемии имеет свои ограничения, так как предложен только для коррекции нейропатии зрительного нерва. Отсутствие морфологической оценки не позволяет судить о состоянии структурных компонентов сетчатки, что также следует отнести к недостаткам.

Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа коррекции нейрональных повреждений сетчатки с использованием производного диметиламиноэтанола – 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в эксперименте, подтверждаемого результатами гистологического исследования.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ коррекции нейрональных повреждений сетчатки с использованием производного диметиламиноэтанола – 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в эксперименте, способствующий сохранности клеток, что сопровождалось увеличением количества ядер во внутреннем ядерном слое подтвержденный результатами гистологического исследования.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ коррекции нейрональных повреждений сетчатки производным диметиламиноэтанола в эксперименте, включающий моделирование патологии путём однократного оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут, а 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата вводят внутрижелудочно в дозе 25 мг/кг через 1 час после модели патологии и далее ежедневно однократно в течение 3 дней, подтверждаемый результатами морфологического исследования.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Эксперименты проведены на самцах крыс линии Wistar массой 200-250 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим. Моделирование патологии осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) оказывая механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 мин (Шабельникова А.С. Коррекция ишемических повреждений сетчатки с использованием дистантного и фармакологического прекондиционирования рекомбинантным эритропоэтином [Текст]: дис. … канд. биол. наук: 14.03.06 / А.С. Шабельникова. – Белгород, 2016. – 141 с.). Через 60 минут после моделирования патологии внутрижелудочно вводили 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в дозе 25 мг/кг, и далее проводят ежедневное введение на протяжении трёх дней один раз в день.

Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с моделью ишемического повреждения сетчатки (контроль), третья группа – с коррекцией патологии производным 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата; четвертая группа – с коррекцией патологии диметиламиноэтанолом «DMAE», Maxler, США, (https://maxler.ru/catalog/essentials/dmae-250/) препарат сравнения).

Оценку эффективности коррекции осуществляли, по морфологической оценке, внутреннего ядерного слоя сетчатки, используя для этого подсчет количества ядер.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Через 3 дня после моделирования патологии животных выводили из эксперимента, путем эвтаназии в СО₂-камере. После чего проводили забор глазных яблок с прилегающими тканями с последующей фиксацией в 10% растворе формалина. После фиксации глаза разрезали на две части в меридианном направлении, после чего образцы заливали в парафин по стандартной методике. Срезы изготавливали толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Этапы гистологической обработки выполнены с использованием оборудования фирмы «Leica» (Германия). Для микроскопического исследования, морфометрии и архивирования готовые микропрепараты сканировали с помощью компьютерной системы архивирования и анализа изображений «Mirax Desk». Анализ изображений и морфометрия выполнены с помощью программы «Pannoramic Viewer» 1.15.4. Количественные данные регистрировали в электронных таблицах MS Excel.

С целью объективизации оценки выявляемых качественных изменений сетчатки производили подсчет удельного количества ядер нейронов во внутреннем ядерном слое при коррекции ишемии сетчатки. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Примечание: * – p<0,05 в сравнении с интактными; y – p<0,05 в сравнении с моделью.

По результатам исследования установлено, что в группе интактных животных число ядер во внутреннем ядерном слое сетчатки составляет 11,7±0,5. В группе с моделью ишемии сетчатки 5,8±0,4, что достоверно отличается от группы интактных животных (р<0,05). В группе с коррекцией 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в дозе 25 мг/кг, количество ядер составило 8,2±0,3 (р<0,05 в сравнении с интакными и с моделью патологии). В группе препарата сравнения 6,7±0,5 (р<0,05 в сравнении с группой интактных животных).

Таким образом, эффективность способа подтверждается увеличением числа ядер внутреннего ядерного слоя сетчатки в сравнении с группой с моделью патологии. Применение 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в дозе 25 мг/кг через 1 час после введения модели ишемии сетчатки и далее ежедневно один раз в день на протяжении трёх дней, способствует сохранности клеток, что сопровождалось увеличением количества ядер во внутреннем ядерном слое. Эффективность способа подтверждается предотвращением гибели клеток в сравнении с группой с моделью патологии.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для коррекции нейрональных повреждений сетчатки. Способ включает моделирование ишемии сетчатки, которое осуществляют под наркозом хлоралгидратом 300 мг/кг, оказывая механическое давление 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут. Коррекция включает внутрижелудочное введение 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата в дозе 25 мг/кг белым крысам-самцам линии Wistar через 1 час после моделирования ишемического повреждения сетчатки, и далее ежедневно один раз в день на протяжении трёх дней. Изобретение обеспечивает эффективную коррекцию нейрональных повреждений сетчатки. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции нейрональных повреждений сетчатки в эксперименте, включающий моделирование ишемии сетчатки и ее коррекцию внутрижелудочным введением производного диметиламиноэтанола в дозе 25 мг/кг белым крысам-самцам линии Wistar, отличающийся тем, что моделирование ишемии сетчатки осуществляют под наркозом хлоралгидратом 300 мг/кг, оказывая механическое давление 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут, а коррекцию проводят раствором 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата через 1 час после моделирования ишемии сетчатки и далее ежедневно однократно в течение 3 дней.