Способ профилактики эксайтотоксического повреждения сетчатки производным диметиламиноэтанола в эксперименте Российский патент 2022 года по МПК G09B23/28 A61K31/137 A61P27/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Из научных источников известно, что в условиях повышенного глазного давления, возрастает концентрация глутама, что приводит к эксайтотоксичности. Одним из путей коррекции такого патогенетического пути является увеличение нейротрофических факторов.

Известно новое соединение – магния бис-(2-аминоэтансульфокислоты)-бутандиоат, обладающий антигипоксической, нейропротекторной и гипокоагуляционной активностью (RU 2671982, публ. 08.11.2018) и может также препятствовать эксайтотоксическому повреждению.

Основным недостатком решения является выявление нейропротекторных свойств только центральной нервной системы, а также отсутствие экспериментальных данных о влиянии соединения на процессы эксайтотоксичности в сетчатке.

Известен способ фармакологической коррекции ишемической нейропатии зрительного нерва производным диметиламиноэтанола 7-16 в эксперименте (RU 2663643, публ. 07.08.2018), который заключается в том, что моделирование патологии осуществляют путем ежедневного внутрибрюшинного введения лабораторным крысам-самцам линии Wistar неселективного ингибитора NO-синтаз N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 12,5 мг/кг массы крысы в течение 28 суток. На 26 сутки эксперимента дополнительно проводят однократное повышение внутриглазного давления до 110 мм рт.ст. в течение 5 мин путем применения механического давления на переднюю камеру глаза. Коррекцию индуцированной таким образом патологии зрительного нерва проводят раствором 2-диметиламиноэтанола L-2-аминопентандиовоата с 29 дня эксперимента в течение 28 дней путем его ежедневного внутрижелудочного введения в дозе 25 мг/кг/сутки. Способ обеспечивает выраженную коррекцию ишемической нейропатии зрительного нерва, в т.ч. за счет улучшения ретинальной микроциркуляции и восстановления электрофизиологической активности сетчатки.

Основным недостатком способа является то, что данный способ фармакологической коррекции ишемии имеет свои ограничения, так как предложен только для коррекции нейропатии зрительного нерва.

Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки с использованием нового производного диметиламиноэтанола – бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата, под лабораторным шифром DMAE 10-19 в эксперименте, подтверждаемого результатами гистологического исследования.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки с использованием нового производного диметиламиноэтанола – бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата, под лабораторным шифром DMAE 10-19 в эксперименте, подтвержденный результатами гистологического исследования.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки производным диметиламиноэтанола под лабораторным шифром DMAE 10-19 в эксперименте, включающий моделирование патологии путём однократного интровитриального введения крысам линии Wistar раствора NMDA (N-метил-D-аспартат) объемом 2 мкл в дозе 160 нмоль, а бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата (DMAE 10-19), вводят внутрижелудочно в дозе 13,8 мг/кг за 40 минут перед введением NMDA, подтверждаемый результатами морфологического исследования.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО DMAE 10-19

Синтез нового соединения осуществляли путем взаимодействия 2-х молей 2-гидроксиэтил-N-диметиламина с 1-м молем 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтановой кислоты.

В трехгорлую колбу загружают 50 мл сухого ацетона, 1,78 г (0,022 м) 2-гидроксиэтил-N-диметиламина, массу тщательно перемешивают и постепенно добавляют 2,96 г (0,01 м) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтановой кислоты. Полученный раствор нагревают до 40°С и перемешивают в течение 1,0 часа. Полученный раствор фильтруют, отгоняют ацетон. Осадок перекристаллизовывают, сушат. Получают 3,46 г (73,1%) белых с желтоватым оттенком кристаллов с Т плав. = 101-103°С.

Найдено,%: С 55,62; Н 7,08; Cl 14,91; N 8,79

C22H34Cl2N3O4 м.м. 474,35

Вычислено,%:С 55,67; Н 7,02; Cl 14,97; N 8,85; О 13,49

ИК, ν, см^-1: 3430 (OH), 3320, 3310 (NH). 2380 (N+), 1620 (С=С), 1560 (COО-)

УФ: 0,002% раствор в спирте этиловом максимум поглощения при 263±2 нм.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Фармакологические свойства заявленного соединения

Эксперименты проведены на самцах крыс линии Wistar массой 200-250 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим. Моделирование патологии осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг). Раствор NMDA вводили интровитриально однократно в дозе 160 нмоль в 2 мкл (Lambuk L, Jafri AJA, Iezhitsa I, et al. Dose-dependent effects of NMDA on retinal and optic nerve morphology in rats. Int J Ophthalmol. 2019;12(5):746-753. Published 2019 May 18. doi:10.18240/ijo.2019.05.08). За 40 минут до моделирования патологии внутрижелудочно вводили DMAE 10-19 однократно в дозе 13,8 мг/кг.

Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с моделью эксайтотоксического повреждения сетчатки (контроль), третья группа – с коррекцией патологии производным DMAE 10-19; четвертая группа – с коррекцией патологии диметиламиноэтанолом («DMAE», Maxler, США) (препарат сравнения).

Оценку эффективности коррекции осуществляли, по морфологической оценке, слоя ганглионарных клеток сетчатки (ГКС) используя для этого «коэффициент измененности».

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Через 7 дней после моделирования патологии животных выводили из эксперимента, путем эвтаназии в СО₂-камере. После чего проводили забор глазных яблок с прилегающими тканями с последующей фиксацией в 10% растворе формалина. После фиксации глаза разрезали на две части в меридианном направлении, после чего образцы заливали в парафин по стандартной методике. Срезы изготавливали толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Этапы гистологической обработки выполнены с использованием оборудования фирмы «Leica» (Германия). Для микроскопического исследования, морфометрии и архивирования готовые микропрепараты сканировали с помощью компьютерной системы архивирования и анализа изображений «Mirax Desk». Анализ изображений и морфометрия выполнены с помощью программы «Pannoramic Viewer» 1.15.4. Количественные данные регистрировали в электронных таблицах MS Excel.

С целью объективизации оценки выявляемых качественных изменений сетчатки степень изменений регистрировали условными баллами: 0 баллов – без изменений, 1 балл – минимальные изменения, 2 балла – умеренно выраженные, 3 балла – выраженные изменения нейрональных структур. «коэффициент измененности», который рассчитывали по формуле 1:

КИ = (1 х n + 2 x n + 3 x n) / N,

где КИ – «коэффициент измененности»; n – количество участков с соответствующей (0; 1; 2; 3) степенью изменений; N – общее количество исследованных участков.

По результатам исследования установлено, что КИ ганглионарных клеток сетчатки в группе интактных составил 0,1±0,1. В группе с моделью эксайтотоксического повреждения сетчатки 2,9±0,1. В группе с коррекцией DMAE 10-19 в дозе 13,8 мг/кг, КИ составил 1,8±0,2 (р<0,05 в сравнении с моделью патологии).

Таким образом, применение бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата (лабораторный шифр DMAE 10-19) в дозе 13,8 мг/кг внутрижелудочно за 40 минут до моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки, предотвращает развитие структурных повреждений ГКС. Эффективность способа подтверждается предотвращением развития морфологических нарушений в сравнении с группой с моделью патологии.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки. Способ коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки включает внутрижелудочное введение бис-(-2-гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата - DMAE 10-19 однократно в дозе 13,8 мг/кг белым крысам линии Wistar за 40 минут до моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки. Изобретение обеспечивает эффективный способ коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции эксайтотоксического повреждения сетчатки производным диметиламиноэтанола в эксперименте, включающий внутрижелудочное введение бис-(-2-гидроксиэтил-N-диметиламиния) 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата - DMAE 10-19 однократно в дозе 13,8 мг/кг белым крысам линии Wistar за 40 минут до моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки.