НОВЫЕ ВАРИАНТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ПИПЕРИДИНИЛИНДОЛА Российский патент 2023 года по МПК A61K31/454 A61P13/12 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к применению определенных производных пиперидилиндола в лечении пациентов, страдающих состояниями и заболеваниями, связанными с альтернативным путем активации комплемента, такими как заболевания почек, и, в частности, в лечении пациентов, страдающих C3G (С3-гломерулопатией) и IgAN (иммуноглобулин A-нефропатией).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Система комплемента является важным компонентом врожденной иммунной системы и содержит каскад протеаз, которые обычно находятся в неактивном состоянии. Такие протеазы организованы в три пути активации: классический, лектиновый и альтернативный пути, которые все сходятся на расщеплении C3 и C5 и общем терминальном пути (V. M. Holers, в Clinical Immunology: Principles and Practice, ed. R.R. Rich, Mosby Press; 1996, 363-391). Молекулы микроорганизмов, антител или клеточных компонентов могут активировать такие пути, что приводит в результате к образованию комплексов протеаз, известных как C3-конвертазы и C5-конвертазы. Классический путь представляет собой кальций/магний-зависимый каскад, который обычно активируется образованием комплексов антиген-антитело. Он также может быть активирован независимым от антитела образом, путем связывания C-реактивного белка, образующего комплекс с лигандом, а также посредством множества патогенов, включая грам-отрицательные бактерии. Лектиновый путь также является кальций- и магний-зависимым и обычно стимулируется лектинами. Альтернативный путь представляет собой магний-зависимый каскад, который активируется отложением и активацией C3 на определенных восприимчивых поверхностях (например, на полисахаридах клеточной стенки дрожжей и бактерий и некоторых биополимерных материалах). В дополнение к специфической в отношении альтернативного пути стимуляции, альтернативный путь также служит в качестве петли амплификации для других путей комплемента.

Фактор B является ключевой протеазой альтернативного пути и может быть подходящей мишенью для ингибирования альтернативного пути, а также амплификации других путей комплемента. Его концентрация в плазме крови людей, как правило, составляет приблизительно 300 мкг/мл (или приблизительно 3 мкМ), и было показано, что он является критическим ферментом для активации альтернативного пути комплемента (P.H. Lesavre and H.J. Mьller-Eberhard. J. Exp. Med., 1978; 148: 1498-1510; J.E. Volanakis et al., New Eng. J. Med., 1985; 312:395-401).

В WO2017/109208 раскрывают определенные полипептиды для подавления активации комплемента и их применение при нарушениях, таких как атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS), C3G- и IgA-нефропатия. В нем описана слитая конструкция, в которой множество активных доменов, от встречающихся в природе регуляторов комплемента (фактор комплемента H (FH) и белок 1 комплемента, родственный FH (FHR1)) объединяли в одну молекулу. FH-часть молекулы расщепляет C3-конвертазу AP и в то же время выполняет функцию кофактора фактора комплемента I, который расщепляет C3b на меньшие, неактивные фрагменты. Кроме того, слитая конструкция также связывается с C5 и ингибирует C5-конвертазу (AP). Наконец, FHR1-часть конструкции ингибирует классический путь комплемента (CP), как показано в анализе Wieslab для измерения активности классического пути. Следовательно, это должно привести к двойному ингибированию классического пути и альтернативного пути/петли амплификации.

В WO2015/009616 описывают синтез и некоторые способы применения производных пиперидилиндола. Указанные соединения являются мощными ингибиторами фактора В и подавляют амплификацию системы комплемента, обусловленную активацией C3 независимо от исходного механизма активации (включая, например, активацию по классическому, лектиновому или альтернативному путям). В WO2015/009616 раскрывают широкий спектр показаний, включая такие заболевания почек, как атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS) и гломерулонефрит, включая мембранозный пролиферативный гломерулонефрит. В нем не упоминается применение производных пиперидилиндола при других заболеваниях почек, которые представляют собой отдельные состояния с причинами, явно отличающимися от вышеупомянутых, в частности, в нем не описывается применение при классическом HUS (гемолитико-уремическом синдроме, индуцированном E. coli) и мембранозной нефропатии. В отличие от полипептидной конструкции в соответствии с WO2017/109208, низкомолекулярные соединения, раскрытые в WO2015/009616, специфически ингибируют фактор комплемента B, представляющий собой протеазу, который отвечает за расщепление C3 и C5 AP. Вследствие этого исключается прямое образование C3a, C5a и C5b-9 посредством классического пути. В статье 2017 г., Konar and Dranoff (Konar M and Granoff DM 2017. Eculizumab treatment and impaired opsonophagocytic killing of meningococci by whole blood from immunized adults. Blood. 130(7):891-899) изящно показали, что селективное ингибирование фактора D, протеазы, которая активирует FB, не вызывало ухудшения защитного иммунного ответа в отношении N. meningitidis у привитых индивидуумов, в то время как ингибирование на уровне C5 вызывало.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Неожиданно в настоящий момент настоящее изобретение предусматривает способ лечения или предупреждения опосредованных фактором B заболеваний, который включает введение соединения формулы (I) пациенту, страдающему заболеванием или нарушением почек, выбранными из опосредованного системой комплемента заболевания почек C3G (C3-гломерулопатия) и IgAN (иммуноглобулин A-нефропатия), а также других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках, таких как MN (мембранозная нефропатия) и HUS (гемолитико-уремический синдром, индуцированный E. coli).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении опосредованных системой комплемента заболеваний почек C3G (C3-гломерулопатия), IgAN (иммуноглобулин A-нефропатия) и других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках, таких как MN (мембранозная нефропатия) и HUS (гемолитико-уремический синдром, индуцированный E. coli). Соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли представлены следующей структурой:

где

R представляет собой водород, C₁-C₄алкил или C₁-C₆алкокси;

R¹ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R² представляет собой C₁-C₆алкил;

R³ представляет собой C₁-C₆алкокси; C₁-C₆алкил или гидроксил;

R⁴ представляет собой фенил, необязательно замещенный -C(O)R⁸, и

R⁸ представляет собой гидрокси, C₁-C₄алкокси или амино.

Во втором варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединения или их фармацевтически приемлемые соли для применения в соответствии с первым вариантом осуществления, где

R представляет собой водород или C₁-C₂алкил;

R¹ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R² представляет собой C₁-C₆алкил;

R³ представляет собой C₁-C₆алкокси или C₁-C₆алкил; и

R⁴ представляет собой фенил, необязательно замещенный -C(O)R⁸, и R⁸ представляет собой гидроксил или C₁-C₄алкокси.

В третьем варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединения или их фармацевтически приемлемые соли для применения в соответствии с первым вариантом осуществления, где

R представляет собой водород;

R¹ представляет собой C₁-C₂алкокси;

R² представляет собой C₁-C₂алкил;

R³ представляет собой C₁-C₂алкокси; и

R⁴ представляет собой фенил, необязательно замещенный -C(O)R⁸, и R⁸ представляет собой гидрокси.

В четвертом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединения для применения в соответствии с первым вариантом осуществления, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль выбраны из группы, состоящей из

4-(1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)-4-метилпиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(4-метокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(5-метокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(5-гидрокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-этил-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил-бензойной кислоты;

4-(этил-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

этил-4-((2S,4R)-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)-4-метилпиперидин-2-ил)бензоата и

этил-4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензоата.

В пятом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение для применения в соответствии с первым вариантом осуществления, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой 4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойную кислоту.

В шестом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или предупреждения C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (иммуноглобулин А-нефропатии) или других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках, таких как MN (мембранозная нефропатия) и HUS (гемолитико-уремический синдром, индуцированный E. coli) у пациента, страдающего ими, который включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из определений из вариантов осуществления 1, 2, 3, 4 или 5 пациенту, страдающего ими.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение для применения в соответствии с пунктами 1-5, где применение предусмотрено в лечении C3G (C3-гломерулопатии).

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение для применения в соответствии с пунктами 1-5, где применение предусмотрено в лечении IgAN (иммуноглобулин A-нефропатии).

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение для применения по любому в соответствии с пунктами 1-5, где применение предусмотрено в лечении MN (мембранозной нефропатии).

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает соединение для применения в соответствии с пунктами 1-5, где применение предусмотрено в лечении HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli).

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с определением из варианта осуществления 1 и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, для применения в лечении заболевания или нарушения, выбранного из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (иммуноглобулин A-нефропатии) и других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках, таких как MN (мембранозная нефропатия) и HUS (гемолитико-уремический синдром, индуцированный E. coli).

Для целей толкования настоящего описания будут применяться следующие определения, и при необходимости термины, используемые в единственном числе, будут также включать множественное число, и наоборот.

Используемый в данном документе термин "алкил" относится к полностью насыщенному разветвленному или неразветвленному углеводородному фрагменту, содержащему до 20 атомов углерода. Если не предусмотрено иное, алкил относится к углеводородному фрагменту, содержащему от 1 до 16 атомов углерода, от 1 до 10 атомов углерода, от 1 до 7 атомов углерода или от 1 до 4 атомов углерода. Иллюстративные примеры алкила включают без ограничения метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, 3-метилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,3-диметилпентил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил и т. п.

Используемый в данном документе термин "алкокси" относится к алкил-O-, где алкил определен в данном документе выше. Иллюстративные примеры алкокси включают без ограничения метокси, этокси, пропокси, 2-пропокси, бутокси, трет-бутокси, пентилокси, гексилокси, циклопропилокси-, циклогексилокси- и т. п. Как правило, алкоксигруппы содержат приблизительно 1-7, более предпочтительно приблизительно 1-4 атома углерода.

Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты могут быть образованы с помощью неорганических кислот и органических кислот.

Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания могут быть образованы с помощью неорганических и органических оснований.

Иллюстративные примеры фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I) уже были описаны в WO2015/009616 и также являются подходящими для настоящего изобретения.

Используемый в данном документе термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает все возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные средства, противогрибковые средства), средства для обеспечения изотоничности, замедляющие абсорбцию средства, соли, консерванты, лекарственные средства, стабилизаторы лекарственных средств, связующие средства, вспомогательные вещества, разрыхляющие средства, смазывающие вещества, подслащивающие средства, ароматизирующие средства, красители и т. п. и их комбинации, которые будут известны специалистам в данной области техники (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). За исключением случаев, когда какой-либо традиционный носитель является несовместимым с активным ингредиентом, в терапевтических или фармацевтических композициях предполагается его применение.

Термин "терапевтически эффективное количество" соединения по настоящему изобретению относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ у субъекта, например, снижение или подавление активности фермента или белка, или уменьшать тяжесть симптомов, облегчать состояние, замедлять или сдерживать прогрессирование заболевания, или предупреждать заболевание и т. д. В одном неограничивающем варианте осуществления термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении субъекту является эффективным в отношении (1) по меньшей мере частичного облегчения, подавления, предотвращения и/или улучшения состояния, или нарушения, или заболевания, или биологического процесса (например, регенерации и восстановления ткани), (i) опосредованного фактором B, или (ii) ассоциированного с активностью фактора B, или (iii) характеризующегося активностью (нормальной или аномальной) альтернативного пути комплемента; или (2) снижения или подавления активности фактора B; или (3) снижения или ингибирования экспрессии фактора B; или (4) снижения или подавления активации системы комплемента и в частности снижения или подавления образования C3a, iC3b, C5a или мембраноатакующего комплекса, образуемого путем активации альтернативного пути комплемента. В другом неограничивающем варианте осуществления термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении в клетку, или ткань, или неклеточный биологический материал, или среду является эффективным в отношении по меньшей мере частичного снижения или подавления активности фактора B и/или альтернативного пути комплемента; или по меньшей мере частичного снижения или ингибирования экспрессии фактора B и/или альтернативного пути комплемента. Значение термина "терапевтически эффективное количество", как проиллюстрировано в приведенном выше варианте осуществления для фактора B и/или альтернативного пути комплемента.

Используемый в данном документе термин "субъект" означает животное. Как правило, животное является млекопитающим. Субъект также относится, например, к приматам (например, людям), коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мышам, рыбам, птицам и т. п. В определенных вариантах осуществления субъектом является примат. В других вариантах осуществления субъектом является человек.

Используемые в данном документе термины "подавлять", "подавление" или "подавляющий" означают снижение или ослабление данного состояния, симптома, или нарушения, или заболевания или значительное снижение исходной активности в отношении биологической активности или процесса.

Используемые в данном документе термины "лечить", "осуществление лечения" или "лечение" любого заболевания или нарушения в одном варианте осуществления относятся к уменьшению тяжести заболевания или нарушения (т. е. замедлению, или остановке, или снижению степени развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления "лечить", "осуществление лечения" или "лечение" относятся к облегчению или уменьшению тяжести по меньшей мере одного физического параметра, включая параметры, которые могут быть незаметны для пациента. В еще одном другом варианте осуществления "лечить", "осуществление лечения" или "лечение" означают модулирование заболевания или нарушения либо физически (например, стабилизацию явного симптома), физиологически (например, стабилизацию физического параметра), либо с помощью как того, так и другого. В еще одном другом варианте осуществления "лечить", "осуществление лечения" или "лечение" относятся к предупреждению или задержке возникновения, или развития, или прогрессирования заболевания или нарушения.

Как используется в данном документе, субъект является "нуждающимся в" лечении, если в результате такого лечения такой субъект получит пользу с биологической, медицинской точки зрения, или улучшится качество его жизни.

Используемые в данном документе термины в форме единственного числа и подобные термины, используемые в контексте настоящего изобретения (в частности, в контексте формулы изобретения), следует истолковывать с охватом как формы единственного числа, так и формы множественного числа, если в данном документе не указано иное или нет явного противоречия по контексту.

Все способы, описанные в данном документе, можно осуществлять в любом подходящем порядке, если в данном документе не указано иное или нет иного явного противоречия по контексту. Представленное в данном документе применение всех возможных примеров или вводных слов перед примером (например, "такой как") предназначено исключительно для лучшего освещения настоящего изобретения и не предполагает ограничения объема настоящего изобретения, заявленного в той или иной форме.

Любой асимметричный атом (например, углерод или т. п.) соединения(соединений) по настоящему изобретению может находиться в рацемической или энантиомерно обогащенной форме, например, в (R)-, (S)- или (R, S)-конфигурации. В определенных вариантах осуществления каждый асимметрический атом характеризуется по меньшей мере 50% энантиомерным избытком, по меньшей мере 60% энантиомерным избытком, по меньшей мере 70% энантиомерным избытком, по меньшей мере 80% энантиомерным избытком, по меньшей мере 90% энантиомерным избытком, по меньшей мере 95% энантиомерным избытком или по меньшей мере 99% энантиомерным избытком в (R)- или (S)-конфигурации. Заместители при атомах с ненасыщенными связями могут, если это возможно, находиться в цис- (Z)- или транс- (E)-форме.

Соответственно, как используется в данном документе, соединение по настоящему изобретению может находиться в форме одного из возможных изомеров, таких как ротамеры, атропоизомеры, таутомеры или их смеси, например, в виде по сути чистых геометрических (цис- или транс-) изомеров, диастереомеров, оптических изомеров (антиподов), рацематов или их смесей. Для ясности, позиционный изомер не охвачен вышеуказанным.

Любые полученные в результате смеси изомеров могут быть разделены на основании физико-химических отличий составляющих компонентов на чистые или практически чистые геометрические или оптические изомеры, диастереомеры, рацематы, например, посредством хроматографии и/или фракционной кристаллизации.

Любые полученные в результате рацематы конечных продуктов или промежуточных соединений могут быть разделены на оптические антиподы посредством известных способов, например, посредством разделения их диастереомерных солей, полученных с помощью оптически активных кислоты или основания, и выделения оптически активных кислотного или основного соединений. В частности, основный фрагмент таким образом может быть использован для разделения соединений по настоящему изобретению на их оптические антиподы, например, путем фракционной кристаллизации соли, образованной с помощью оптически активной кислоты, например, винной кислоты, дибензоилвинной кислоты, диацетилвинной кислоты, ди-O, O'-п-толуолвинной кислоты, миндальной кислоты, яблочной кислоты или камфор-10-сульфоновой кислоты. Рацемические продукты также могут быть разделены посредством хиральной хроматографии, например, высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) или сверхкритической жидкостной хроматографии (SFC) с применением хирального адсорбента.

Профилактические и терапевтические варианты применения

В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает способы лечения заболевания или нарушения почек, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с определением по любому из вариантов осуществлений 1-5, где указанное заболевание или нарушение выбраны из C3G, IgAN и других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках.

Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли можно вводить в однократной дозе, составляющей приблизительно 0,1-1000 мг активного ингредиента(ингредиентов) субъекту с весом тела приблизительно 50-70 кг, или приблизительно 0,1-500 мг, или приблизительно 0,1-250 мг, или приблизительно 0,1-150 мг, или приблизительно 0,5-100 мг, или приблизительно 0,5-50 мг активных ингредиентов. Их терапевтически эффективная доза может зависеть от вида субъекта, веса тела, возраста и индивидуального состояния, нарушения или заболевания, лечение которых осуществляют, или их тяжести. Квалифицированный лечащий врач, клиницист или ветеринар может легко определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимое для предупреждения, лечения или подавления прогрессирования нарушения или заболевания.

Эффективность соединения в соответствии с вариантом осуществления 1 может быть оценена посредством следующих способов.

1. Клинические испытания при заболевании почек, опосредованном комплементом; в частности IgAN

Пациентов набирают в соответствии со следующими критериями:

• взрослые пациенты с IgAN, диагностированной в течение 2 лет;

• удовлетворение диагностическим критериям высокого риска быстрого прогрессирования, таким как высокое кровяное давление и/или гипотензивные средства и протеинурия, составляющая >1 г/сутки;

• биопсия почки=IgAN, включающая IgAN с васкулитом;

• eGFR (скорость клубочковой фильтрации) составляет > 40 и <100 мл/мин./1,73 м²;

• симптоматическая терапия (включая диуретик, ингибиторы ACE (ангиотензинпревращающий фермент), ARB (блокатор ренин-ангиотензиновой системы), статины) должна поддерживаться в ходе испытания;

• рандомизация после подготовительного периода.

Для испытания пациентов вакцинируют, чтобы устранить риск инфекций, вызванных инкапсулированными организмами, включая Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis и Haemophilus influenzae. Вакцинация может быть проведена, например, с помощью 23-валентной полисахаридной (PS) вакцины или гептавалентной вакцины, представляющей собой конъюгат белок-полисахарид (PCV-7).

Вслед за вакцинацией, пациентов лечат посредством ежесуточной дозы соединения формулы (I) в объеме 25, 50, 100 и 200 мг дважды в сутки (BID). Артериальное давление контролируется в соответствии со стандартной практикой, и протеинурию определяют путем стандартного определения низкомолекулярных белков в моче, таких как альбумины и глобулины.

Продолжительность лечения с использованием соединения формулы (I) составляет по меньшей мере 3 месяца, и первичные конечные точки эффективного лечения достигаются с уменьшением соотношения белка креатинина в моче (UPCR) до 25% или больше.

В качестве вторичных конечных точек у выбранных пациентов проводят гистологию почек, где целью гистологических оценок является установление снижения активации комплемента, уменьшения воспаления, уменьшения экспансии мезангиального матрикса.

2. Клинические испытания при заболевании почек, опосредованном комплементом, в частности C3G.

Пациентов набирают в соответствии со следующими критериями:

• взрослые пациенты, у которых установлен диагноз C3G;

• биопсия почки, подтверждающая C3G (подтвержденные результаты в течение 3 месяцев);

• пациенты с низким уровнем C3 (конвертазы) или FB (фактора B) в сыворотке крови и любой уровень GFR (скорости клубочковой фильтрации);

• GFR > 40 мл/мин./1,73 м²;

• симптоматическая терапия (включая диуретик, ингибиторы ACE, ARB, статины) должна поддерживаться в ходе испытания;

• рандомизация после подготовительного периода.

Для испытания пациентов вакцинируют, чтобы устранить риск инфекций, вызванных инкапсулированными организмами, включая Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis и Haemophilus influenzae. Вакцинация может быть проведена, например, с помощью 23-валентной полисахаридной (PS) вакцины или гептавалентной вакцины, представляющей собой конъюгат белок-полисахарид (PCV-7).

Вслед за вакцинацией, пациентов лечат посредством ежесуточной дозы соединения формулы (I) в объеме 25, 50, 100 и 200 мг дважды в сутки (BID).

Продолжительность лечения с использованием соединения формулы (I) составляет по меньшей мере 2 месяца.

Первичная конечная точка эффективного лечения достигается с уменьшением протеинурии на более чем 25%.

Вторичная конечная точка эффективного лечения представляет собой улучшенный показатель eGFR, а также улучшение гистологических показателей при биопсии почки, целевые эффекты в ткани после 3 месяцев лечения (если возможно, после 6 месяцев терапии).

Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, как раскрыто в вариантах осуществления 1-5, являются эффективными ингибиторами фактора B и проверены в клинических испытаниях (1) и (2), описанных выше.

Экспериментальная часть

1. Подавление нарушений регуляции комплемента измеряли посредством электрофореза с иммунофиксацией (описан в Zhang et al., Clin J Am Soc Nephrology 7, pp265-274 (2012)).

Данный анализ основан на определении стабилизации С3-конвертазы в сыворотке крови пациента. Сыворотку крови пациента смешивали в соотношении 1:1 с нормальной сывороткой и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Нормальная сыворотка крови служит источником C3, в то время как уровни C3 в сыворотке крови пациента могут быть очень низкими. Результатом является соотношение расщепленного С3 и нерасщепленного С3. Максимальное расщепление определяли путем инкубирования сыворотки крови в Mg²⁺ EGTA-PBS, при этом фоновое расщепление определяли путем инкубирования сыворотки крови в EDTA-PBS. Ингибирование тестируемым соединением рассчитывали по следующей формуле:

(расщепление в присутствии тестируемого соединения - фоновое расщепление) / (максимальное расщепление - фоновое расщепление).

Анализ проводили в образцах от 9 пациентов с C3G со следующими причинами нарушения регуляции альтернативного пути (AP):

• C3Nef (аутоантитела, стабилизирующие C3-конвертазу) у 3 пациентов;

• аутоантитела к FH (фактору H) у 2 пациентов;

• неизвестные причины у 2 пациентов;

• аутоантитела к FB (фактору B) у 2 пациентов. Были включены образцы пациентов как с C3G (C3 гломерулонефритом), так и с DDD (болезнью плотного осадка).

В данном анализе авторы настоящего изобретения тестироваали соединения согласно варианту осуществления 4. Например, соединение согласно варианту осуществления 5 при концентрации 3,3 мкМ подавляло расщепление C3 на >97%, и при концентрации 1,1 мкМ на 63%.

2. Ингибирование предварительно образованной C3-конвертазы, которая стабилизируется под действием C3Nefs или аутоантител к FB

Ингибирование предварительно образованной и стабилизированной C3-конвертазы измеряли посредством анализа стабилизации C3-конвертазы (C3CSA) (описан в Zhang et al., Clin J Am Soc Nephrology 7, pp265-274 (2012)). В данном анализе C3-конвертаза является искусственно сконструированной на поверхности эритроцитов овцы. В то время как C3-конвертаза обычно имеет время полужизни 90 секунд при 37°C, разложение может быть замедлено добавлением очищенного IgG, взятого у пациентов. Соединения добавляли одновременно с IgG, полученным от пациента, чтобы ингибировать стабилизацию конвертазы/активность конвертазы и обеспечить ее разложение. После введения IgG (и соединения) обеспечивали разложение конвертазы в течение 15 минут при 30°C. Затем добавляли сыворотку крыс в EDTA в течение 30 минут при 37°C, чтобы позволить стабилизированным C3-конвертазам активировать терминальный путь комплемента и осуществить лизис эритроцитов. Лизис эритроцитов был связан с высвобождением гемоглобина и, таким образом, количественно определялся по поглощению в надосадочной жидкости при 415 нм. Максимальный гемолиз определяли по лизису в момент времени 0, и в качестве фона измеряли гемолиз в буфере EDTA (полное ингибирование всех путей комплемента).

Ингибирование стабилизированной C3-конвертазы измеряли с использованием IgG, взятого от 15 пациентов с C3G, где у 7 пациентов была установлена DDD и у 8 пациентов - C3GN. У четырех пациентов были выявлены антитела к FB, и у 11 пациентов были выявлены C3-нефритогенные факторы, т. е. антитела к C3-конвертазам. Соединение согласно варианту осуществления 5 ингибировало гемолиз эритроцитов, нагруженных C3-конвертазой, на >99% по сравнению с уровнем, наблюдаемым в присутствии EDTA (не наблюдалось активности комплемента), при концентрациях соединений, составляющих 0,15 мкМ.

3. Ингибирование отложения C3 на эндотелиальных клетках микрососудов человека, стимулированных с использованием сыворотки крови, полученной от пациентов с гемолитико-уремическим синдромом, ассоциированным с шига-токсин-продуцирующей E. coli (STEC-HUS или классическим HUS)

Как описано в Morigi et al., 2011 (Morigi M, Galbusera M, Gastoldi S, Locatelli, M, Buelli, S, Pezzotta A, Pagani C, Noris M, Gobbi M, Stravalaci M, Rottoli D, Tedesco F, Remuzzi G and Joja C: 2011. Alternative pathway activation of complement by Shiga toxin promotes exuberant C3a formation that triggers microvascular thrombosis. J Immunol. 187(1):172-80), линию эндотелиальных клеток микрососудов человека дермального происхождения (HMEC-1, ATCC CRL-3243) высеивали на предметные стекла и использовали по достижении ими конфлюентности. Клетки активировали с использованием 10 мкМ АДФ в течение 10 минут и затем инкубировали в течение 4 часов с сывороткой крови (взятой от 3 пациентов с STEC-HUS во время острой фазы заболевания или от здоровых контролей), разбавленной в соотношении 1:2 с тестируемой средой (HBSS с 0,5% BSA), в присутствии или в отсутствие ингибитора CFB согласно варианту осуществления 5 при 2 различных концентрациях (1 и 10 мкМ). В конце стадии инкубации HMEC-1 обрабатывали антителами к C3c человека, конъюгированными с флуорохромом. В каждом эксперименте пул сыворотки крови от здоровых контролей тестировали параллельно с сывороткой крови пациента. Использовали конфокальный инвертированный лазерный микроскоп для оценки флуоресцентного окрашивания на поверхности эндотелиальных клеток.

Были получены пятнадцать полей на образец и площадь, занимаемая флуоресцентным окрашиванием, была оценена с помощью автоматического определения краев с использованием встроенных специфических функций программного обеспечения Image J и была выражена как pixel2 для каждого анализируемого поля. Самые высокие и самые низкие значения были отброшены и рассчитывали среднее значение ±SE для оставшихся 13 полей.

Результаты: сыворотка крови от пациентов с острым STEC-HUS, индуцированным массивным отложением C3 на активированных АДФ эндотелиальных клетках по сравнению с сывороткой крови от здоровых контролей (P<0,0001). Присутствие ингибитора CFB согласно варианту осуществления 5 в сыворотке крови пациентов с STEC-HUS индуцировало дозозависимое снижение отложения C3 на HMEC-1, активированных АДФ (наблюдалось снижение на 73% при концентрации 1 мкМ и снижение на 89% при концентрации 10 мкМ, p<0,0001 в обоих случаях). В частности, количество отложений С3 на эндотелиальных клетках, которые подвергали воздействию сыворотки крови STEC-HUS с добавлением ингибитора CFB согласно варианту осуществления 5 в концентрации, составляющей 10 мкМ, не отличалось в значительной степени от количества отложений C3, наблюдаемых на клетках, которые подвергали воздействию контрольной сыворотки крови.

4. Ингибитор FB предотвращает развитие и прогрессирование пассивного нефрита Хейманна у крыс

Пассивный нефрит Хейманна у крысы является наиболее распространенной животной моделью мембранозной нефропатии (см. Jefferson JA, Pippin JW and Shankland SJ 2010. Experimental Models of membranous nephropathy. Drug Discov Today Dis Models. 7(1-2):27-33). Его индуцируют путем переноса поликлональной сыворотки крови, полученной от кроликов, иммунизированных мегалином крысы, и его манифестацией являются воспалительные изменения в почке, которые очень напоминают заболевание человека. Значительная протеинурия наблюдается через 4 дня после переноса антитела и повышается до 2 недель после переноса.

Профилактическое лечение с использованием ингибитора фактора B согласно варианту осуществления 5 (зонд для перорального применения дважды в день, 20 или 60 мг/кг/сутки) в значительной степени снижало протеинурию через 14 дней после переноса на 82% или 75% (p<0,0001) и в значительной степени уменьшало гистопатологические изменения (комбинированные баллы составляют 2,2, 0,3 и 0,4 для среды-носителя и ингибитора FB согласно варианту осуществления 5 при 20 и 60 мг/кг, соответственно, p<0,005). Более того, в отдельном эксперименте терапевтическое лечение посредством 60 мг/кг ингибитора FB согласно варианту осуществления 5 (зонд для перорального применения дважды в день) начиная с момента манифестации протеинурии (6 дней после переноса сыворотки крови) блокировало дальнейшее прогрессирование заболевания. Протеинурия повышалась с 0,79 в день 6 до 1,93 в день 14 в контрольной группе, но оставалась устойчивой в группе, лечение которой осуществляли ингибитором FB согласно варианту осуществления 5 (0,74 и 0,81 в дни 6 и 14, соответственно. Комбинированные гистопатологические баллы снижались с 2,7 в группе, лечение которой осуществляли средой-носителем, до 1,1 в группе, лечение которой осуществляли ингибитором FB, p<0,005).

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в лечении опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (IgA-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) и HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli),

где R представляет собой водород, C₁-C₄алкил или C₁-C₆алкокси; R¹ представляет собой C₁-C₆алкокси; R² представляет собой C₁-C₆алкил; R³ представляет собой C₁-C₆алкокси; C₁-C₆алкил или гидроксил; R⁴ представляет собой фенил, замещенный -Н или -C(O)R⁸, и R⁸ представляет собой гидрокси, C₁-C₄алкокси или амино, также относится к способу лечения или предупреждения опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (иммуноглобулин A-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) или HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli) у пациента, страдающего ими, включающему введение указанному пациенту суточная дозы, выбранной из 25, 50, 100 и 200 мг два раза в день соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и также относится к применению фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, в лечении опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из заболеваний или нарушений, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (IgA-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) и HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli). Группа изобретений обеспечивает разработку способа лечения или предупреждения опосредованных фактором B заболеваний, таких как опосредованного системой комплемента заболевания почек C3G (C3-гломерулопатия) и IgAN (иммуноглобулин A-нефропатия), а также других нефропатий с признаком отложения С3 в клубочках, таких как MN (мембранозная нефропатия) и HUS (гемолитико-уремический синдром, индуцированный E. coli). 3 н. и 10 з.п. ф-лы.

1. Применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в лечении опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (IgA-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) и HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli),

где R представляет собой водород, C₁-C₄алкил или C₁-C₆алкокси;

R₁ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R₂ представляет собой C₁-C₆алкил;

R₃ представляет собой C₁-C₆алкокси; C₁-C₆алкил или гидроксил;

R₄ представляет собой фенил, замещенный –Н или -C(O)R⁸, и

R₈ представляет собой гидрокси, C₁-C₄алкокси или амино.

2. Применение по п. 1,

где R представляет собой водород или C₁-C₂алкил;

R₁ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R₂ представляет собой C₁-C₆алкил;

R₃ представляет собой C₁-C₆алкокси или C₁-C₆алкил; и

R₄ представляет собой фенил, замещенный -Н или -C(O)R₈, и

R₈ представляет собой гидроксил или C₁-C₄алкокси.

3. Применение по п. 1,

где R представляет собой водород;

R₁ представляет собой C₁-C₂алкокси;

R₂ представляет собой C₁-C₂алкил;

R₃ представляет собой C₁-C₂алкокси; и

R₄ представляет собой фенил, замещенный -Н или -C(O)R₈, и

R₈ представляет собой гидрокси.

4. Применение по п. 1, где соединение выбрано из группы, состоящей из

4-(1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)-4-метилпиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(4-метокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(5-метокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

4-(5-гидрокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойной кислоты;

этил-4-((2S,4R)-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)-4-метилпиперидин-2-ил)бензоата и

этил-4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензоата.

5. Применение по п. 1, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой 4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойную кислоту.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где применение предусмотрено в лечении C3G (C3-гломерулопатии).

7. Применение по любому из пп. 1-5, где применение предусмотрено в лечении IgAN (IgA-нефропатии).

8. Применение по любому из пп. 1-5, где применение предусмотрено в лечении MN (мембранозной нефропатии).

9. Применение по любому из пп. 1-5, где применение предусмотрено в лечении HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli).

10. Способ лечения или предупреждения опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (иммуноглобулин A-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) или HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli) у пациента, страдающего ими, включающий введение указанному пациенту суточная дозы, выбранной из 25, 50, 100 и 200 мг два раза в день соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где соединение формулы (I) представляет собой

R представляет собой водород, C₁-C₄алкил или C₁-C₆алкокси;

R₁ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R₂ представляет собой C₁-C₆алкил;

R₃ представляет собой C₁-C₆алкокси; C₁-C₆алкил или гидроксил;

R₄ представляет собой фенил, замещенный -Н или -C(O)R⁸, и

R₈ представляет собой гидрокси, C₁-C₄алкокси или амино.

11. Способ по п. 10, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой 4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойную кислоту.

12. Применение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, в лечении опосредованных фактором B заболеваний, выбранных из заболеваний или нарушений, выбранных из C3G (C3-гломерулопатии), IgAN (IgA-нефропатии), MN (мембранозной нефропатии) и HUS (гемолитико-уремического синдрома, индуцированного E. coli), где соединение формулы (I) представляет собой

R представляет собой водород, C₁-C₄алкил или C₁-C₆алкокси;

R₁ представляет собой C₁-C₆алкокси;

R₂ представляет собой C₁-C₆алкил;

R₃ представляет собой C₁-C₆алкокси; C₁-C₆алкил или гидроксил;

R₄ представляет собой фенил, замещенный –Н или -C(O)R⁸, и

R₈ представляет собой гидрокси, C₁-C₄алкокси или амино.

13. Применение по п. 12, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой 4-((2S,4S)-4-этокси-1-((5-метокси-7-метил-1H-индол-4-ил)метил)пиперидин-2-ил)бензойную кислоту.